專利名稱：從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種齊墩果酸，尤其是涉及一種從紅樹植物秋茄葉片中提取純化齊墩果酸的 方法。
背景技術(shù)：
秋茄(《amfe//aca"&/)是一種生長(zhǎng)在熱帶、亞熱帶海岸的紅樹植物，屬紅樹科秋茄屬。 秋茄為灌木或小喬木，高2 3m;具支柱根；葉革質(zhì)、互對(duì)生；花為腋生；樹皮平滑呈紅褐 色；枝粗壯，有膨大的節(jié)。秋茄主要分布于印度、泰國(guó)、越南、馬來(lái)西亞、日本琉球群島南 部；在中國(guó)，主要分布于廣東、廣西、福建、臺(tái)灣地區(qū)。民間將秋茄作為藥物使用，其皮具 有收斂、止血和抗菌作用，而且其根的乙醇提取液可以治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。研究資料表明， 秋茄中含有多糖、鞣質(zhì)、脂肪酸、甾醇、三萜和黃酮類等活性化合物，其中就包括了曾從秋 茄莖皮中分離到的齊墩果酸這種五環(huán)三萜類化合物。
齊墩果酸的分子式為C3QH4803，為白色針狀結(jié)晶，無(wú)味、無(wú)臭，存在于多種植物中。研 究表明，齊墩果酸作為一種天然產(chǎn)物化學(xué)成分，具多種生物活性，包括護(hù)肝、解肝毒、降糖、 降脂、消炎、抗病毒、抗過氧化、抗突變及抗癌等，且毒副作用小，安全性高，已在臨床上 用于治療急性黃疸型和慢性病毒型肝炎，被認(rèn)為是保肝良藥和抗癌輔助藥物。因齊墩果酸結(jié) 構(gòu)復(fù)雜，難以人工合成獲得，目前依賴于從植物中提取純化得到。生產(chǎn)齊墩果酸的植物原料 主要有女貞子、雪膽、青葉膽、遼東木和云南木等，其中大部分為野生資源，采集不便，產(chǎn) 量不穩(wěn)定，且采集根皮、莖皮等部位會(huì)破壞資源。另外，雖然目前一般采用的提純方法可以 提取出齊Jt果酸，但存在工藝復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、提取率低、分離效率低，產(chǎn)品純度低等缺點(diǎn)。
有關(guān)從植物中提取齊墩果酸的方法已有報(bào)道。
公開號(hào)為CN1045585的發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)峁┮环N從植物中提取齊墩果酸的方法，是從含有 齊墩果酸的三萜皂甙的植物中提取齊墩果酸，它由水提、水解，酸性醇液重結(jié)晶等三個(gè)步驟 完成，采用該發(fā)明提取齊墩果酸，可節(jié)省醇，而且提高了提取率，方法簡(jiǎn)單，適合工業(yè)生產(chǎn)。
公開號(hào)為CN1449372的發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)峁┮环N制備齊墩果酸和/或山楂酸及其生理上可 接受的鹽的方法，包括用水和/或有機(jī)溶劑提取橄欖植物和/或在橄欖油制備過程中所形成的產(chǎn) 品，然后進(jìn)行濃縮和/或精餾及純化。公告號(hào)為CN1303850的發(fā)明專利提供一種生產(chǎn)齊墩果酸的新方法，以五加科Z.木屬 Aralia植物太白.'.木Araliataibaiensisz.z.wangetH.C.zheng為原料，經(jīng)70%乙醇熱提取、酸沉 淀分離總皂甙、單獨(dú)酸水解總皂甙、精制純化等步聚得到齊墩果酸。采用本方法生產(chǎn)齊墩果 酸，其得率為目前用女貞子生產(chǎn)齊墩果酸得率的10倍左右。該發(fā)明降低生產(chǎn)難度，縮短生產(chǎn) 周期，大大提高產(chǎn)率，而且成品純度高，解決目前生產(chǎn)中濃縮時(shí)起泡問題及酸水、廢氣污染 等問題。
公開號(hào)CN1558942的發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)峁┮环N含有齊墩果酸和/或山楂酸的油脂組合物的 制造方法，包括使用有機(jī)溶劑或含水有機(jī)溶劑對(duì)橄欖植物和/或橄欖油制造過程中得到的副產(chǎn) 物進(jìn)行提取處理，是在工業(yè)上高效率地制造含有齊墩果酸、山楂酸，這些的生理上容許的鹽 以及這些的衍生物的油脂組合物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種步驟簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、分離效率高、純度高的從秋茄葉片中 提取齊墩果酸的方法。
本發(fā)明包括如下步驟
1) 將秋茄葉片清洗后陰干，加入二氯甲垸進(jìn)行提取，過濾，得提取液，干燥，回收二氯 甲烷，得浸膏；
2) 將浸膏加入層析用硅膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進(jìn)行梯度
洗脫，按質(zhì)量比，以石油醚丙酮分別為30:i， 10:i和4:i，沖i 5個(gè)柱體積，最后以
甲醇沖洗，共得18個(gè)組分，其中的第12 17組分為齊墩果酸粗品，再經(jīng)硅膠柱層析，以氯 仿/甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分，其中的第3組分即為齊墩果酸 純品。
按質(zhì)量比，秋茄葉片二氯甲垸最好為1 : (3 8)，提取液干燥的溫度最好為40 50°C。
按質(zhì)量比，以氯仿/甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫的氯仿甲醇最好為(45 60) :i。
本發(fā)明基于秋茄葉片中含有較多多酚類成分，提取液中該類成分的存在對(duì)后續(xù)分離純化 工藝造成一定的干擾從而造成純化工藝的復(fù)雜，提出利用多酚類物質(zhì)不溶于二氯甲垸而齊墩 果酸溶于二氯甲烷的性質(zhì)，以二氯甲垸作提取溶劑，通過浸提和抽濾，在第一步就將齊墩果 酸與多酚類物質(zhì)有效分離開來(lái)，提高提取效率，降低了后續(xù)分離純化工作的難度，利于純化， 而且二氯甲垸作為有機(jī)溶劑，有消泡作用，利于濃縮且縮短濃縮時(shí)間。另外，二氯甲烷提取 液不易發(fā)霉變質(zhì)，二氯甲烷還可回收利用。同時(shí)，采用硅膠柱層析分離純化技術(shù)，可避免活 性成分的分解破壞，又可大大減少雜質(zhì)干擾，顯著提高齊墩果酸的分離度和富集率，提高分離純化效率。
由此可見，本發(fā)明僅需以二氯甲烷對(duì)秋茄葉片進(jìn)行提取，提取物經(jīng)兩次硅膠柱層析即可 得到齊墩果酸，純度在90%以上。與傳統(tǒng)的齊墩果酸提純方法相比較，本發(fā)明方法具有步驟 簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、分離效率高及純度高等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰干。取400g，置于干凈的 玻璃缸中，加入二氯甲垸進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲垸為1 : 8。提取24h后，將提取液以 定量濾紙過濾，在45'C下減壓干燥，得到浸膏23.8g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱 層析的過程時(shí)，將經(jīng)薄層層析檢驗(yàn)相同的洗脫液餾分合并為一個(gè)組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮分別為30 : i， io : i和4 : i，每個(gè)比例沖3個(gè)柱
體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第15個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng)硅膠
柱層析，以55 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè)組分
即為齊墩果酸純品。 -
實(shí)施例2:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰千。取400g，置于干凈的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 3。提取24h后，將提取液以
定量濾紙過濾，在40'C下減壓干燥，得到浸膏19.4g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱
層析的過程時(shí)，將經(jīng)薄層層析檢驗(yàn)相同的洗脫液餾分合并為一個(gè)組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i， io : i和4 : i，每個(gè)比例沖3
個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第14個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng)
硅膠柱層析，以45 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè)
組分即為齊墩果酸純品。
實(shí)施例3:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰干。取400g，置于干凈的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 4。提取24h后，將提取液以
定量濾紙過濾，在42'C下減壓干燥，得到浸膏20.3g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱
層析的過程時(shí)，將經(jīng)薄層層析檢驗(yàn)相同的洗脫液餾分合并為一個(gè)組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : l， io.: l和4 : l，每個(gè)比例沖3
個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第17個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng)
硅膠柱層析，以47 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè)
組分即為齊墩果酸純品。
實(shí)施例4:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰干。取400g，置于干凈的
5玻璃缸中，加入二氯甲烷進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲烷為i : 5。提取24h后，將提取液以
定量濾紙過濾，在44'C下減壓干燥，得到浸膏21.5g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : l, io : i和4 : l，每個(gè)比例沖3 個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第13個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng) 硅膠柱層析，以50:i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè) 組分即為齊墩果酸純品。
實(shí)施例5:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰干。取400g,置于干凈的
玻璃缸中，加入二氯甲烷進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲烷為l : 6。提取24h后，將提取液以
定量濾紙過濾，在46'C下減壓干燥，得到浸膏21.9g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱 層析的過程時(shí)，將經(jīng)薄層層析檢驗(yàn)相同的洗脫液餾分合并為一個(gè)組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i, io : i和4 : i，每個(gè)比例沖3
個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第12個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng)
硅膠柱層析，以53 : i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè)
組分即為齊墩果酸純品。
實(shí)施例6:將新鮮的秋茄葉片用自來(lái)水沖洗，在陰涼通風(fēng)處陰干。取400g，置于干凈的
玻璃缸中，加入二氯甲垸進(jìn)行提取，秋茄葉片二氯甲垸為i : 7。提取24h后，將提取液以
定量濾紙過濾，在48。C下減壓干燥，得到浸膏22.6g。將此浸膏進(jìn)行硅膠柱層析。在硅膠柱 層析的過程時(shí)，將經(jīng)薄層層析檢驗(yàn)相同的洗脫液餾分合并為一個(gè)組分。首先以石油醚丙酮
為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，石油醚丙酮的比例分別為30 : i， io : l和4 : l，每個(gè)比例沖3
個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分。其中第16個(gè)組分為齊墩果酸粗品，將其再經(jīng)
硅膠柱層析，以60:i的氯仿甲醇為洗脫劑，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分.其中第3個(gè)
組分即為齊墩果酸純品。
實(shí)驗(yàn)表明，秋茄葉片中齊墩果酸的含量較高，達(dá)0.3%左右，與目前常用來(lái)生產(chǎn)齊墩果酸
的青葉膽等植物中齊墩果酸含量相當(dāng)，可見秋茄葉片是值得開發(fā)利用的植物資源。而秋茄在 我國(guó)南方海岸資源豐富，既有天然林，也有人工林，尤其是人工秋茄林區(qū)近年來(lái)發(fā)展迅速， 這是因?yàn)槟壳拔覈?guó)正積極開展紅樹林恢復(fù)性造林工程，而秋茄正是一種主要恢復(fù)種類，并且， 秋茄葉片的采集簡(jiǎn)便易行，不會(huì)破壞資源。這些都為利用秋茄葉片生產(chǎn)齊墩果酸提供了穩(wěn)定 的原料來(lái)源。另一方面，本發(fā)明使秋茄葉片變廢為寶，生產(chǎn)高價(jià)值的藥物產(chǎn)品，使秋茄葉片 的藥用價(jià)值被充分利用，提升了紅樹植物秋茄的綜合經(jīng)濟(jì)價(jià)值，將促進(jìn)紅樹林的恢復(fù)工作。
權(quán)利要求
1. 從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特征在于包括如下步驟1)將秋茄葉片清洗后陰干，加入二氯甲烷進(jìn)行提取，過濾，得提取液，干燥，回收二氯甲烷，得浸膏；2)將浸膏加入層析用硅膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，按質(zhì)量比，以石油醚丙酮分別為30∶1，10∶1和4∶1，沖1～5個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分，其中的第12～17組分為齊墩果酸粗品，再經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿/甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分，其中的第3組分即為齊墩果酸純品。
2. 如權(quán)利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特征在于按質(zhì)量比，秋茄葉片二氯甲烷為i : 3 8。
3. 如權(quán)利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特征在于提取液干燥的溫 度為40 50°C。
4. 如權(quán)利要求l所述的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，其特征在于按質(zhì)量比，以氯仿/甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫的氯仿甲醇為45 60 : i。
全文摘要
從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法，涉及一種齊墩果酸，尤其是涉及一種從紅樹植物秋茄葉片中提取純化齊墩果酸的方法。提供一種步驟簡(jiǎn)單、生產(chǎn)周期短、分離效率高、純度高的從秋茄葉片中提取齊墩果酸的方法。將秋茄葉片清洗后陰干，加入二氯甲烷提取，過濾得提取液，干燥，得浸膏；將浸膏加入層析用硅膠吸附，研碎成粉，裝柱，以石油醚/丙酮為洗脫劑，進(jìn)行梯度洗脫，按質(zhì)量比，以石油醚∶丙酮分別為30∶1，10∶1和4∶1，沖1～5個(gè)柱體積，最后以甲醇沖洗，共得18個(gè)組分，其中的第12～17組分為齊墩果酸粗品，再經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿/甲醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，最后以甲醇沖洗，共得4個(gè)組分，其中的第3組分即為齊墩果酸純品。
文檔編號(hào)C07J63/00GK101450962SQ200810189179
公開日2009年6月10日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者馮丹青, 盧昌義, 成 向, 柯才煥 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)