專利名稱：一類取代吡啶并[2’,1’:2,3]咪唑并[4,5-c]異喹啉酮類化合物及其合成方法和用途,以 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如下通式(I)所示的一類取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物及其合成方法和用途，該類化合物可用于治療白血病、胃癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌和肺癌。本發(fā)明還涉及含有這些化合物中一種或多種作為活性成分的藥物組合物。


背景技術(shù)：
根據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization)統(tǒng)計，2007年共有7,900,000人死于惡性腫瘤，約占總死亡人數(shù)的13％，同時，美國癌癥協(xié)會(TheAmerican Cancer Society)報告預(yù)計，2007年將有12,332,300人被診斷患上惡性腫瘤(Garcia M，Jemal A，Ward EM，Center MM，Hao Y，Siegal RL，Thun MJ.Global Cancer Facts&Figures 2007.Atlanta，GAAmerican Cancer Society，2007)。目前，惡性腫瘤已經(jīng)成為全世界第二大死因，嚴重威脅全人類的生命健康，并對社會經(jīng)濟造成巨大壓力。
腫瘤細胞最重要的特征在于其具有無限增殖能力，而細胞增殖又以有絲分裂為基礎(chǔ)(Sherr CJ.Science.1996；2741672-7)。通過有絲分裂，母代細胞將遺傳物質(zhì)和各種相關(guān)組分平均分配到子代細胞中，從而實現(xiàn)細胞群體的擴增。有絲分裂過程包括前期(prophase)、前中期(prometaphase)、中期(metaphase)、后期(anaphase)、末期(telophase)和胞質(zhì)分裂(cytokinesis)六個時期。在前期和前中期，細胞核染色質(zhì)濃縮成為染色體結(jié)構(gòu)，核膜破裂，核仁消失，同時，紡錘體完成裝配；進入中期，染色體開始在紡錘體微管作用下排列在赤道板上；進行到后期，中期染色體的姊妹染色單體在紡錘體微管作用下相互分離，并且分別向紡錘體兩極運動；染色單體到達兩極后就進入了末期，之后，染色單體開始去濃縮，核膜、核仁開始重新組裝，細胞轉(zhuǎn)錄能力開始恢復(fù)；最后，赤道板周圍細胞表面發(fā)生下陷，形成分裂溝和收縮環(huán)，并最終導(dǎo)致兩個子細胞的形成，即胞質(zhì)分裂過程。正常細胞有絲分裂代數(shù)有限，但是腫瘤細胞有絲分裂代數(shù)無限，因此，靶向有絲分裂是抗腫瘤藥物研發(fā)的重要策略。
目前，已有多種有絲分裂抑制劑應(yīng)用于臨床腫瘤化療。靶向微管蛋白的小分子化合物是有絲分裂抑制劑的主要代表，如紫杉醇和長春新堿等。它們最初均由天然植物分離得到，通過干擾微管蛋白的解聚-聚合平衡，破壞紡錘體功能，進而阻斷有絲分裂，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，發(fā)揮強效抗腫瘤作用(Jordan MA，Wilson L.Nat Rev Cancer.2004；4253-265)。然而，微管蛋白作為藥物靶標具有天然的缺陷，集中表現(xiàn)在臨床患者的神經(jīng)毒性反應(yīng)，如外周神經(jīng)病變。這是因為微管除了參與有絲分裂過程外，還行使包括神經(jīng)軸突物質(zhì)運輸在內(nèi)的多種生理功能(Wood KW，Cornwell WD，Jackson JR.CurrOpin Pharmacol.2001；1370-377)。因此，科學(xué)界越來越多的注意力開始轉(zhuǎn)向非微管類新型有絲分裂靶點的發(fā)現(xiàn)及相關(guān)抑制劑的研究。Aurora激酶、Eg5、Plk1等是近年來研究較深入的新型有絲分裂靶點，它們不同于微管蛋白，在腫瘤細胞中表達異常，同時較特異的分別參與調(diào)節(jié)有絲分裂的不同環(huán)節(jié)，對它們的抑制能夠誘導(dǎo)有絲分裂阻滯，同時在很大程度上避免微管類化合物所伴隨的神經(jīng)毒副作用，圍繞這些靶點開發(fā)的多種特異性抑制劑已經(jīng)進入各期臨床研究(Jackson JR，Patrick DR，Dar MM，Huang PS.Nat Rev Cancer.2007；7107-117)。
雖然研究正在進行，仍然需要適于用作人類藥物的更有效和安全的低分子量的新型有絲分裂抑制劑應(yīng)用于腫瘤治療。此外，該類藥物容易產(chǎn)生抗藥性，因此臨床上客觀需要不同結(jié)構(gòu)相同作用的藥物交替使用，以降低毒副作用與提高藥效。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一個目的是提供一類取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物。
本發(fā)明又一目的是提供一種上述取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的合成方法。
本發(fā)明的另一目的是提供上述取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的用途。
本發(fā)明的還一目的是提供包含治療有效量的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物中的一種或多種作為活性成分的藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明的目的提供具有如下結(jié)構(gòu)通式(I)表示的一類取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物。

其中 S和T各自獨立地為氫原子或C1-4烷基氧基； U和V各自獨立地為氫原子、C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰氨基、C1-3烷基磺?；被酋；?、苯基、苯氧基、羥基、C1-3烷基硫基、硝基、咪唑基、氰基或鹵素，所述烷基非必需地被鹵素、吡啶基、咪唑基、嗎啉基或羥基取代； R為乙酸甲酯基、丙酸甲酯基、乙酰氧基乙基、呋喃基取代的C1-3烷基或者苯基取代的C1-3烷基，所述苯基非必需地被C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰氨基、C1-3烷基氧基羰基、C1-3烷基磺?；?、氨基磺?；⒈交?、苯氧基、羥基、羥基C1-3烷基、C1-3烷基硫基、硝基、咪唑基、氰基、亞甲二氧基或鹵素取代，其中所述烷基非必需地被鹵素取代。
優(yōu)選地，通式(I)中所述的S和T各自獨立地為氫原子或甲氧基。
更優(yōu)選地，通式(I)中所述的S和T同時為氫原子或者同時為甲氧基，且在3位和4位取代。
進一步優(yōu)選地，通式(I)中 U和V各自獨立地為氫原子、C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的甲基、一個或兩個C1-3烷基取代的氨基、一個或兩個C1-3烷基取代的酰氨基、C1-3烷基磺?；?、苯基、苯氧基、羥基、羥甲基、甲硫基、羥乙基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、三氟甲磺酰基、甲基磺酰基、氨基磺?；?、2-吡啶甲基氨基、3-吡啶甲基氨基、4-吡啶甲基氨基、1-咪唑基、3-(1-咪唑基)丙基氨基、2-乙醇氨基、3-丙醇氨基、2-嗎啉乙氨基、氰基、鹵素或硝基； R是乙酸甲酯基、丙酸甲酯基、乙酰氧基乙基、呋喃甲基、苯甲基或者苯乙基，所述苯基非必需地被C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的甲基、一個或兩個C1-3烷基取代的氨基、一個或兩個C1-3烷基取代的酰氨基、C1-3烷基磺?；?、C1-3烷氧基羰基、苯基、苯氧基、羥基、羥甲基、甲硫基、羥乙基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、三氟甲磺酰基、甲基磺?；被酋；?、氰基、3，4-亞甲二氧基、鹵素或硝基取代。
所述“藥理學(xué)上可接受的鹽”，當(dāng)這種鹽可能時，包括可藥用酸加成鹽，通過用無機酸或有機酸處理通式(I)化合物的游離堿，可以得到藥理學(xué)上可接受的鹽，所述的無機酸例如鹽酸，氫溴酸，磷酸和硫酸，所述的有機酸例如抗壞血酸，煙酸，檸檬酸，酒石酸，乳酸，馬來酸，丙二酸，富馬酸，乙醇酸，琥珀酸，丙酸，乙酸，甲磺酸等。
本發(fā)明的化合物可以以未溶劑化的和與藥學(xué)上可接受的溶劑(例如水，乙醇等)溶劑化的形式存在。通常，對于本發(fā)明的目的，認為溶劑化的形式等同于未溶劑化的形式。
以下定義適用于整個說明書和附加的權(quán)利要求書。除非另作說明或指出，術(shù)語“烷基”表示直鏈或支鏈烷基。所述烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。優(yōu)選的烷基為甲基、乙基、丙基、異丙基和叔丁基。
除非另作說明或指出，術(shù)語“烷基氧基”表示基團O-烷基，其中烷基如上定義。
除非另作說明或指出，術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
本發(fā)明的具體化合物為 1)6-(4-甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例1中化合物) 2)2-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}乙酸甲酯(實施例2中化合物) 3)3-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}丙酸甲酯(實施例3中化合物) 4)2-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}乙基乙酸酯(實施例4中化合物) 5)6-(4-甲氧基芐基)-8-甲基-9-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例5中化合物) 6)6-(4-甲氧基芐基)-8-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例6中化合物) 7)6-(4-甲氧基芐基)-9-碘吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例7中化合物) 8)6-(4-甲氧基芐基)-11-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例8中化合物) 9)6-(4-甲氧基芐基)-8-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例9中化合物) 10)6-(4-甲氧基芐基)-11-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例10中化合物) 11)6-(4-甲氧基芐基)-9-溴-10-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例11中化合物) 12)6-芐基-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例12中化合物) 13)6-(4-甲氧基芐基)-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例13中化合物) 14)6-(4-氯芐基)-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例14中化合物) 15)6-(2-呋喃甲基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例15中化合物) 16)6-(4-三氟甲基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例16中化合物) 17)6-(3，4-二甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例17中化合物) 18)6-(2，4-二甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例18中化合物) 19)6-(3，4-亞甲二氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例19中化合物) 20)6-(4-N-甲基甲磺酰氨基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例20中化合物) 21)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例21中化合物) 22)6-[3-(4-甲氧基苯丙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例22中化合物) 23)6-[2-(4-羥基苯乙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例23中化合物) 24)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(1H-咪唑基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例24中化合物) 25)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[3-(1H-咪唑丙氨基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例25中化合物) 26)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(2-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例26中化合物) 27)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(3-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例27中化合物) 28)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(4-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例28中化合物) 29)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[2-(二乙基氨基乙基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例29中化合物) 30)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(2-嗎啉-4-乙基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例30中化合物) 31)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[(2-羥基乙基氨基]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例31中化合物) 32)6-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[(3-羥基丙基氨基]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮(實施例32中化合物)， 以及上述化合物在適用情況下的光學(xué)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體和外消旋物及其可藥用鹽、溶劑化物和晶形。
本發(fā)明另外提供了通式(I)表示的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的制備方法。
本發(fā)明的具有結(jié)構(gòu)通式(I)的化合物可通過下列合成方法合成，該方法包括類似于化學(xué)領(lǐng)域中所熟知者，特別是根據(jù)此述說明部分的方法。起始物質(zhì)一般可自商業(yè)來源諸如Aldrich化學(xué)公司(美國威斯康辛州密爾瓦基)取得，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法即可制備(如通過下列書籍中所概述的方法制備Louis F.Fieser與Mary Fieser之“用于有機合成作用之試劑”第1-19冊(美國紐約Wiley公司1967-1999版本)；或“Beilsteins Handbuch der organischenChemie”Auf 1.版第4冊及包括附刊(德國柏林Springer-Verlag公司出版及亦可經(jīng)由Beilstein線上資料庫取得))。
除非另有說明，在下述反應(yīng)路線中，所述的化合物的各符號與通式(I)具有相同的含義。在反應(yīng)路線中的化合物包括其鹽，例如，那些如具有結(jié)構(gòu)通式(I)的化合物定義的鹽類等。
為了說明之用，下列所示的反應(yīng)流程圖提供用于合成本發(fā)明的化合物以及關(guān)鍵中間產(chǎn)物的可能途徑。有關(guān)個別反應(yīng)步驟的更詳細的說明，請見后述的實施例部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員將了解可使用其他合成途徑合成本發(fā)明的化合物。雖然在流程圖中顯示及于后述部分論及特定的起始物質(zhì)與試劑，可輕易地以其他起始物質(zhì)與試劑替代，而提供多種的衍生物及/或反應(yīng)條件。此外，鑒于本申請的內(nèi)容，可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)化學(xué)方法，而進一步修飾通過此述方法所制備的眾多化合物。
具有結(jié)構(gòu)通式(I)的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物可利用下述方法進行制備。

在極性質(zhì)子性或非質(zhì)子性溶劑中，醛酸(R’為H)或醛酸酯(R’為CH3或CH2CH3)A與取代2-氨基吡啶B和異腈C在催化劑或無催化劑條件下進行反應(yīng)得到。所述的溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜。所述的催化劑是質(zhì)子性酸，如乙酸、丙酸、丁酸、高氯酸、鹽酸、硫酸、硝酸；路易斯酸，如Sc(OTf)3。
具體地，通過下述的反應(yīng)路線1和2制備 反應(yīng)路線1其中S、T、U、V以及R的定義如上所述，當(dāng)R’為CH3或CH2CH3時，將醛酸酯(A)與取代2-氨基吡啶(B)和異腈(C)溶解于一定量甲醇中后，加入三氟甲磺酸鈧(Sc(OTf)3)為催化劑后，于55℃反應(yīng)5～12小時，反應(yīng)產(chǎn)物沉淀析出，直接過濾，用少量甲醇洗滌，干燥后得到目標化合物I。

反應(yīng)路線2其中S、T、U、V以及R的定義如上所述，當(dāng)R’為H時，將醛酸(A)與取代2-氨基吡啶(B)和異腈(C)溶解于一定量甲醇中后，于55℃反應(yīng)5～12小時，反應(yīng)產(chǎn)物沉淀析出，直接過濾，用少量甲醇洗滌，干燥后得到目標化合物I。

進一步，上述制備方法還可以包括反應(yīng)路線3。
反應(yīng)路線3其中S、T、U以及R的定義如上所述，當(dāng)反應(yīng)原料(I)中的V為溴或碘，與取代的胺(C1-3烷基胺、C1-3烷基酰胺)或咪唑反應(yīng)，在該反應(yīng)路線中反應(yīng)催化劑為碘化亞銅(CuI)、脯氨酸(proline)、碳酸鉀(K2CO3)，反應(yīng)溶劑為二甲基亞砜(DMSO)，反應(yīng)在Biotage微波反應(yīng)器中于140～200℃反應(yīng)20～60分鐘，后將溶劑除去，產(chǎn)物用二氯甲烷溶解，分別用水和飽和鹽水各洗一次后，無水硫酸鈉干燥后除去二氯甲烷，后經(jīng)硅膠柱層析純化得目標化合物I-a。

本發(fā)明還提供了上述取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物在制備細胞有絲分裂抑制劑的藥物中的用途，在制備治療癌癥的藥物中的用途。所述癌癥包括白血病、胃癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌和肺癌。經(jīng)過活性測定表明該類化合物中的部分化合物對于不同組織來源的腫瘤細胞具有顯著的廣譜增殖生長抑制作用，并且顯示出特異、高效的有絲分裂期阻滯作用，進而誘導(dǎo)細胞凋亡，有可能被用于治療癌癥。
本發(fā)明還提供一種用于治療癌癥的藥物組合物，其包含治療有效量的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物中的一種或多種作為活性成分以及藥學(xué)上可接受的輔料。

具體實施例方式 提供以下實施例以進一步闡明本發(fā)明并且不構(gòu)成對其范圍的限制。
制備實施例 實驗樣品分析所用儀器及試劑 核磁共振譜(1H NMR，13C NMR)由Varian公司的Mercury-300或Mercury-400型核磁共振儀測定(溶劑為CDCl3，內(nèi)標為TMS)。LC-MS由Thermo Finnigan LCQDECA×P型質(zhì)譜儀測定。熔點由上海精密科學(xué)儀器有限公司的SGW X-4型熔點儀測定(溫度計讀數(shù)未經(jīng)校正)。柱層析分離所用硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品(200～300目)。TLC硅膠板為煙臺化工生產(chǎn)的HSF-254薄層層析預(yù)制板，采用紫外燈，碘缸顯色。紫外燈為上海顧村電光儀器廠ZF-1型三用紫外分析儀。合成中所用原料均為市售產(chǎn)品。
實施例16-(4-甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
按照反應(yīng)路線1進行 100mg(0.66mmol)2-甲?；郊姿峒柞ヅc63mg(0.66mmol)的2-氨基吡啶溶解于1毫升甲醇后，加入98mg(0.66mmol)的對甲氧基芐基異腈，反應(yīng)55℃攪拌過夜，有大量沉淀析出，過濾，固體用1毫升甲醇淋洗2遍后即得產(chǎn)物為黃色固體119mg，收率50.4％，熔點239-241℃。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.52(d，J＝8.1Hz，1H)，8.47(d，J＝8.1Hz，1H)，8.21(d，J＝6.2Hz，1H)，7.86(t，J＝7.5Hz，1H)，7.66(d，J＝9.2Hz，1H)，7.60(t，J＝7.7Hz，1H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，7.10(dd，J＝9.2，6.6Hz，1H)，6.88(d，J＝8.1Hz，2H)，6.63(t，J＝7.0Hz，1H)，5.86(s，2H)，3.76(s，3H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δC161.71，159.19，143.04，133.21，131.93，129.54，127.79，127.18，126.72×2，125.15，124.74，124.03，123.64，123.28，121.91，118.70，114.80×2，112.48，55.26，46.35；HRMS(EI)m/z計算值C22H17N3O2，355.1321；實測值355.1309. 實施例22-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}乙酸甲酯
按照反應(yīng)路線2進行 100mg(0.66mmol)2-甲?；郊姿峒柞ヅc63mg(0.66mmol)的2-氨基吡啶溶解于1毫升甲醇后，加入66mg(0.66mmol)的甲基-2-異腈基乙酸酯，反應(yīng)55℃攪拌過夜，有大量沉淀析出，過濾，固體用1毫升甲醇淋洗2遍后即得產(chǎn)物為黃色固體137mg，收率67％，熔點212-214℃。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.51(d，J＝8.1Hz，1H)，8.46(d，J＝7.3Hz，1H)，8.19(d，J＝8.1Hz，1H)，7.85(t，J＝7.7Hz，1H)，7.45(d，J＝9.2Hz，1H)，7.59(t，J＝7.5Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.3，6.8Hz，1H)，6.86(t，J＝7.0Hz，1H)，5.50(s，2H)，3.84(s，3H)；ESIm/z 308.2(M+1)100％。
實施例33-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}丙酸甲酯
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體129mg，收率60.4％。熔點205-207℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.57(t，J＝7.9Hz，1H)，8.48(t，J＝7.0Hz，1H)，8.42(t，J＝7.7Hz，1H)，7.82(m，1H)，7.73(t，J＝9.2Hz，1H)，7.57(m，1H)，7.20(m，1H)，6.89(m，1H)，4.94(m，1H)，3.76(s，3H)，3.03(m，2H)；ESIm/z 322.1(M+1)100％. 實施例42-{吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮基}乙基乙酸酯
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體118mg，收率55.4％。熔點247-250℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.80(d，J＝7.3Hz，1H)，8.49(d，J＝8.4Hz，1H)，8.42(d，J＝8.1Hz，1H)，7.82(t，J＝7.7Hz，1H)，7.71(d，J＝9.5Hz，1H)，7.57(t，J＝7.7Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.2，6.6Hz，1H)，6.90(t，J＝7.0Hz，1H)，4.87(t，J＝6.6Hz，2H)，4.58(t，J＝6.6Hz，2H)，1.97(s，3H)；ESIm/z322.1(M+1)100％. 實施例56-(4-甲氧基芐基)-8-甲基-9-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體221mg，收率49.5％。熔點205-207℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.12(d，J＝8.1Hz，1H)，7.50(t，J＝7.7Hz，1H)，7.43(d，J＝8.8Hz，1H)，7.12-7.22(m，4H)，7.07(d，J＝7.7Hz，1H)，6.82-6.85(m，2H)，4.47(d，J＝6.2Hz，2H)，3.79(s，3H)，2.53(s，3H)；ESIm/z(相對強度)448.1(M+1，100％)。
實施例66-(4-甲氧基芐基)-8-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體218mg，收率50.2％。熔點183-186℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.55(d，J＝8.8Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.50-7.65(m，2H)，7.07-7.29(m，4H)，6.79-6.85(m，2H)，5.89(s，2H)，3.78(s，3H)；ESIm/z(相對強度)434.0(M+1，100％)。
實施例76-(4-甲氧基芐基)-9-碘吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體271mg，收率56.5％。熔點234-237℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.56-8.59(m，2H)，8.45(d，J＝8.1Hz，1H)，7.87(t，J＝7.7Hz，1H)，7.63(t，J＝7.7Hz，1H)，7.45(d，J＝9.5Hz，1H)，7.18-7.22(m，3H)，6.90-6.93(m，2H)，5.84(s，2H)，3.79(s，3H)；ESIm/z(相對強度)482.0(M+1，100％)。
實施例86-(4-甲氧基芐基)-11-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體209mg，收率56.8％。熔點234-237℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.58(d，J＝5.1Hz，1H)，8.55(d，J＝5.1Hz，1H)，8.10(d，J＝7.3Hz，1H)，7.85(t，J＝7.9Hz，1H)，7.59(t，J＝7.7Hz，1H)，7.16-7.18(m，2H)，6.92(d，J＝7.0Hz，1H)，6.86-6.89(m，2H)，6.56(t，J＝7.0Hz，1H)，5.85(s，2H)，3.76(s，3H)，2.69(s，3H)；ESIm/z(相對強度)370.0(M+1，100％)。
實施例96-(4-甲氧基芐基)-8-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體266mg，收率72.2％。熔點146-148℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.37(d，J＝5.1Hz，1H)，8.35(d，J＝5.1Hz，1H)，7.78(m，1H)，7.55(d，J＝9.2Hz，1H)，7.49(t，J＝7.1Hz，1H)，7.13(dd，J＝9.2，7.0Hz，1H)，6.81-6.84(m，2H)，6.61-6.65(m，3H)，5.47(s，3H)，3.66(s，3H)，2.93(s，3H)；ESIm/z(相對強度)370.0(M+1，100％)。
實施例106-(4-甲氧基芐基)-11-溴吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體304mg，收率70.2％。熔點166-169℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.60(d，J＝8.1Hz，1H)，8.56(d，J＝8.1Hz，1H)，8.21(d，J＝7.0Hz，1H)，7.74-7.77(m，2H)，7.61-7.64(m，2H)，7.15-7.17(m，2H)，6.86-6.89(m，2H)，5.85(s，2H)，3.77(s，3H)；ESIm/z(相對強度)434.0(M+1，100％)。
實施例116-(4-甲氧基芐基)-9-溴-10-甲基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體225mg，收率50.3％。熔點197-200℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.56(d，J＝8.1Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.41(d，J＝7.3Hz，1H)，7.85(m，1H)，7.60(t，J＝7.5Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.17-7.20(m，2H)，6.88-6.91(m，2H)，5.83(s，2H)，3.77(s，3H)，2.38(s，3H)；ESIm/z(相對強度)448.1(M+1，100％)。
實施例126-芐基-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為棕黃色固體37mg，收率20.1％。熔點270-273℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.30(d，J＝8.8Hz，1H)，8.13(d，J＝6.6Hz，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.31-7.39(m，3H)，7.27-7.28(m，2H)，7.13(m，1H)，6.64(t，J＝7.1Hz，1H)，5.87(s，2H)，4.02(s，3H)，4.01(s，3H)；ESI-MS386.1(M+1)100％。
實施例136-(4-甲氧基芐基)-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為棕黃色固體38mg，收率19.3％。熔點245-247℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.30(d，J＝8.4Hz，1H)，8.18(d，J＝7.3Hz，1H)，7.71(d，J＝10.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.18(m，2H)，7.13(m，1H)，6.88(m，2H)，6.66(t，J＝6.2Hz，1H)，5.79(s，2H)，4.02(s，3H)，4.00(s，3H)，3.77(s，3H)；ESI-MS416.1(M+1)100％。
實施例146-(4-氯芐基)-3，4-二甲氧基吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為棕黃色固體37mg，收率18.6％。熔點242-245℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.29(d，J＝8.8Hz，1H)，8.07(d，J＝7.3Hz，1H)，7.72(d，J＝9.2Hz，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.34(m，2H)，7.22(m，2H)，7.15(dd，J＝9.0Hz，6.8Hz，1H)，6.68(t，J＝7.0Hz，1H)，5.82(s，2H)，4.01(s，3H)，4.00(s，3H)；ESI-MS420.1(M+1)100％。
實施例156-(2-呋喃甲基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點206-210℃。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.55(d，J＝7.4Hz，1H)，8.51(d，J＝8.5Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.82(t，J＝7.6Hz，1H)，7.68(d，J＝9.1Hz，1H)，7.56(t，J＝7.7Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.16(dd，J＝8.9，6.7Hz，1H)，6.79(t，J＝6.9Hz，1H)，6.34-6.40(m，2H)，5.83(s，2H).HRMS(EI)m/z計算值C19H13N3O2，315.1008；實測值315.1010。
實施例166-(4-三氟甲基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點220-223℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.53(d，J＝8.3Hz，1H)，8.45(d，J＝8.0Hz，1H)，8.08(d，J＝7.2Hz，1H)，7.85(m，1H)，7.66(d，J＝9.4Hz，1H)，7.59(m，1H)，7.20-7.32(m，4H)，7.09(m，1H)，6.63(m，1H)，5.89(s，2H).HRMS(EI)m/z計算值C22H14F3N3O2，409.1038；實測值409.1034。
實施例176-(3，4-二甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點385-387℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.55(d，J＝7.9Hz，1H)，8.45(d，J＝7.6Hz，1H)，8.18(d，J＝7.3Hz，1H)，7.85(t，J＝7.6Hz，1H)，7.65(d，J＝9.2Hz，1H)，7.59(t，J＝7.8Hz，1H)，7.09(m，1H)，6.70-6.83(m，3H)，6.61(t，J＝6.6Hz，1H)，5.84(s，2H)，3.83(s，3H)，3.82(s，3H).HRMS(EI)m/z計算值C23H19N3O3，385.1426；實測值385.1422。
實施例186-(2，4-二甲氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點188-190℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.56(d，J＝7.4Hz，1H)，8.45(d，J＝8.0Hz，1H)，8.12(d，J＝7.4Hz，1H)，7.83(m，1H)，7.55-7.63(m，2H)，7.06(ddd，J＝9.2，6.6，1.0Hz，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H)，8.55-6.59(m，2H)，6.30(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)，5.77(s，2H)，3.95(s，3H)，3.73(s，3H).HRMS(EI)m/z計算值C23H19N3O3，385.1426；實測值385.1426。
實施例196-(3，4-亞甲二氧基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點216-220℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.52(d，J＝8.3Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.17(d，J＝7.2Hz，1H)，7.83(m，1H)，7.62(d，J＝9.1Hz，1H)，7.57(m，1H)，7.07(ddd，J＝9.2，6.7，1.1Hz，1H)，6.68-6.76(m，3H)，6.61(m，1H)，5.92(s，2H)，5.79(s，2H).HRMS(EI)m/z計算值C22H15N3O3，369.1113；實測值369.1116. 實施例206-(4-N-甲基甲磺酰氨基芐基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點233-235℃，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.33-8.41(m，3H)，7.91(t，J＝7.5Hz，1H)，7.60-7.67(m，2H)，7.29-7.40(m，4H)，7.20(dd，J＝9.1，6.7Hz，1H)，6.82(t，J＝6.9Hz，1H)，5.98(s，2H)，3.19(s，3H)，2.91(s，3H).HRMS(EI)m/z計算值C23H20N4O3S，432.1256；實測值432.1261. 實施例216-[2-(4-甲氧基苯乙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點155-158℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.48(d，J＝8.3Hz，1H)，8.39(d，J＝7.7Hz，1H)，8.35(d，J＝7.2Hz，1H)，7.79(m，1H)，7.68(d，J＝9.4Hz，1H)，7.55(m，1H)，7.21-7.27(m，2H)，7.15(ddd，J＝9.3，6.7，1.1Hz，1H)，6.85-6.88(m，2H)，6.81(m，1H)，4.80(t，J＝8.0Hz，2H)，3.78(s，3H)，3.15(t，J＝8.0Hz，2H).HRMS(EI)m/z計算值C23H19N3O2，369.1477；實測值369.1479. 實施例226-[3-(4-甲氧基苯丙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點170-173℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.43(d，J＝8.0Hz，1H)，8.31(d，J＝7.4Hz，1H)，7.73(t，J＝8.3Hz，1H)，7.47-7.60(m，3H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，7.01(m，1H)，6.89(d，J＝8.4Hz，2H)，6.41(m，1H)，4.40(t，J＝8.1Hz，2H)，3.82(s，3H)，2.81(t，J＝8.1Hz，2H)，2.17(m，2H).HRMS(EI)m/z計算值C24H21N3O2，383.1634；實測值383.1626. 實施例236-[2-(4-羥基苯乙基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例2中所述，得產(chǎn)物為黃色固體。熔點280-283℃，1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ9.16(s，1H)，8.51(d，J＝7.0Hz，1H)，8.21(d，J＝7.9Hz，1H)，8.17(d，J＝7.9Hz，1H)，7.74(t，J＝7.3Hz，1H)，7.57(d，J＝9.2Hz，1H)，7.47(t，J＝7.5Hz，1H)，7.18(m，1H)，6.87-6.96(m，2H)，6.56(d，J＝8.2Hz，2H)，4.70(t，J＝7.3Hz，2H)，2.86(t，J＝7.3Hz，2H). 實施例246-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(1H-咪唑基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線按照反應(yīng)路線3中所述進行，得產(chǎn)物為棕色固體。熔點240-242℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.53(d，J＝8.3Hz，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.29(s，1H)，7.85(m，1H)，7.75-7.79(d，J＝9.6Hz，2H)，7.62(m，1H)，7.31(br s，1H)，7.21(dd，J＝9.6，1.9Hz，2H)，7.07(d，J＝8.5Hz，2H)，6.71(d，J＝8.5Hz，2H)，4.80(t，J＝7.5Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.22(t，J＝7.5Hz，2H).HRMS(EI)m/z計算值C26H21N5O2，435.1695；實測值435.1697. 實施例256-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[3-(1H-咪唑丙氨基)]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。熔點180-185℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.49(d，J＝7.6Hz，1H)，8.36(d，J＝7.9Hz，1H)，7.78(t，J＝7.5Hz，1H)，7.48-7.56(m，3H)，7.39(s，1H)，7.21(d，J＝9.0Hz，2H)，7.09(s，1H)，6.84-6.88(m，3H)，6.7(dd，J＝9.8，1.5Hz，1H)，4.86(m，2H)，4.01(t，J＝6.9Hz，2H)，3.79(s，3H)，3.22(m，2H)，2.82(t，J＝6.6Hz，2H)，1.26(m，2H).HRMS(EI)m/z計算值C29H28N6O2，492.2274；實測值492.2275. 實施例266-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(2-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。熔點190-193℃，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.57(d，J＝4.9Hz，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，8.35(d，J＝7.9Hz，1H)，7.75(m，1H)，7.67(td，J＝7.8，1.8Hz，1H)，7.47-7.55(m，3H)，7.27-7.30(m，2H)，7.22(dd，J＝7.0，5.5Hz，1H)，7.13(d，J＝7.9Hz，1H)，6.86-6.89(m，3H)，4.86(m，2H)，4.14(s，2H)，3.78(s，3H)，3.20(m，2H).HRMS(EI)m/z計算值C29H25N5O2，475.2008；實測值475.2026. 實施例276-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(3-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。熔點188-190℃；1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.44-8.45(m，3H)，8.34(d，J＝8.0Hz，1H)，7.76(t，J＝7.4Hz，1H)，7.48-7.56(m，3H)，7.40(s，1H)，7.26(m，1H)，7.16-7.19(d，J＝8.5Hz，2H)，6.78-6.83(m，3H)，4.76(t，J＝8.0Hz，2H)，3.71(s，3H)，3.12(t，J＝8.0Hz，2H).HRMS(EI)m/z計算值C29H25N5O2，475.2008；實測值475.2010. 實施例286-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(4-吡啶甲基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.17-8.24(m，3H)，7.75-7.80(m，2H)，7.46-7.53(m，3H)，7.34(s，1H)，6.99-7.06(m，3H)，6.75-6.78(d，J＝8.2Hz，2H)，6.42(t，J＝6.5Hz，1H)，4.67(t，J＝7.3Hz，2H)，4.23(s，2H)，3.66(s，3H)，2.81(t，J＝7.3Hz，2H).HRMS(EI)m/z計算值C29H25N5O2，475.2008；實測值475.2010. 實施例296-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[2-(二乙基氨基乙基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.31(d，J＝8.2Hz，1H)，8.23(d，J＝7.9Hz，1H)，7.83(m，1H)，7.47-7.64(m，3H)，7.21-7.26(m，2H)，7.01(d，J＝9.8Hz，1H)，6.84-6.89(m，2H)，4.84(m，2H)，4.49(m，2H)，3.72(s，3H)，2.89-3.09(m，4H)，2.73(m，2H)，2.60(m，2H)，1.07(m，6H).HRMS(EI)m/z計算值C29H33N5O2，483.2634；實測值483.2632. 實施例306-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-(2-嗎啉-4-乙基氨基)吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.32(d，J＝7.6Hz，1H)，8.24(d，J＝7.0Hz，1H)，7.84(m，1H)，7.49-7.57(m，3H)，7.25(d，J＝8.6Hz，2H)，7.02(m，1H)，6.87-6.90(m，2H)，4.88(m，2H)，3.74(s，3H)，3.59(m，3H)，3.00-3.14(m，6H)，2.41(m，3H).HRMS(EI)m/z計算值C29H31N5O3，497.2427；實測值497.2418. 實施例316-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[(2-羥基乙基氨基]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.24(d，J＝7.9Hz，1H)，8.16(d，J＝7.9Hz，1H)，7.74(t，J＝7.5Hz，1H)，7.39-7.48(m，3H)，7.18(d，J＝8.5Hz，2H)，6.98(d，J＝9.7Hz，1H)，6.84(d，J＝8.5Hz，2H)，5.61(br s，1H)，4.85(br s，1H)，4.72(t，J＝7.8Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.62(t，J＝4.8Hz，2H)，2.95-3.04(m，4H).HRMS(EI)m/z計算值C25H24N4O3，428.1848；實測值428.1844. 實施例326-[2-(4-甲氧基苯乙基)]-9-[(3-羥基丙基氨基]吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉-5(6H)-酮
合成技術(shù)路線參照實施例24中所述，得產(chǎn)物為棕色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.48(d，J＝7.9Hz，1H)，8.37(d，J＝8.2Hz，1H)，7.76(m，1H)，7.46-7.54(m，3H)，7.23-7.29(m，2H)，6.87(d，J＝8.5Hz，2H)，6.70(m，1H)，4.82(m，2H)，3.77-3.84(m，4H)，3.20(m，2H)，3.04(m，2H)，1.88(m，2H).HRMS(EI)m/z計算值C26H26N4O3，442.2005；實測值442.2001. 藥理試驗實施例 如下描述本發(fā)明以上化合物的藥理實驗實施例。
藥理試驗實施例1磺酰羅丹明B蛋白質(zhì)染色法(Sulforhodamine B Assay) 磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)能夠與細胞蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸特異性結(jié)合，其在520nm附近波長范圍的吸光度與細胞數(shù)目呈良好的線形正相關(guān)，因此選擇該指標用于細胞數(shù)目定量。
根據(jù)細胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞分別以100μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加入待測化合物10μl/孔。每個濃度設(shè)三個重復(fù)對照。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調(diào)零對照。腫瘤細胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)72小時，然后棄去培養(yǎng)液，用10％冰冷的三氯乙酸(Trichloroacetic acid，TCA)固定細胞，4℃放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的磺酰羅丹明B 4mg/mL溶液100μl/孔，室溫中染色15分鐘，去上清液，用1％醋酸洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定吸光度。
藥理試驗實施例2流式細胞術(shù)定量檢測有絲分裂期細胞(Quantitation ofMitotic Arrest by Flow Cytometry) MPM-2能夠特異性識別有絲分裂期細胞的若干磷酸化抗原表位，因此可以作為有絲分裂期細胞的標志之一；碘化丙啶(Propidium iodide，PI)能夠嵌入雙鏈DNA，其熒光強度與DNA含量呈正相關(guān)，因此也是不同周期時相的標志之一。對藥物處理過的細胞進行MPM-2和PI雙染色后，采用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry)可以定量分析MPM-2染色陽性，同時PI染色DNA含量呈四倍體狀態(tài)的細胞比例，即有絲分裂期細胞占全部細胞總數(shù)的比例。
將HeLa細胞接種于12孔培養(yǎng)板中，貼壁生長過夜后，加入待測化合物500nM，于37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)12小時，然后，胰酶消化收集細胞，經(jīng)磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Solution，PBS)洗滌后，加入400μlMPM-2抗體溶液(滴度1∶200)，于37℃水浴1小時。從水浴中取出后，離心，棄上清，PBS洗滌一次。加入400μl Alexa

488 goat anti-mouse IgG(H+L)抗體溶液(滴度1∶200)，于37℃水浴30分鐘。從水浴中取出后，離心，棄上清。加入PI溶液500μl，于37℃水浴10分鐘。設(shè)定通道FL1-H和FL2-A，進行流式細胞儀檢測。
藥理試驗實施例3藥理學(xué)數(shù)據(jù) 下表1為制備實施例2得到的本發(fā)明化合物在藥理試驗實施例1中得到的藥理學(xué)試驗結(jié)果 表1
下表2為制備實施例中的本發(fā)明部分化合物在藥理試驗實施例1和實施例2中得到的藥理學(xué)試驗結(jié)果，采用的細胞株為HeLa細胞 表2
表1與表2所列化合物均具有較強的體外抗腫瘤活性。表1列出化合物2對于包括白血病、胃癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌和肺癌在內(nèi)的12種人類腫瘤細胞增殖的影響，其半數(shù)抑制濃度(IC50)均小于10μM，表明化合物2具有廣譜腫瘤細胞增殖抑制作用。表2列出本發(fā)明部分化合物對于人類宮頸癌細胞株HeLa細胞增殖的影響，其半數(shù)抑制濃度(IC50)均小于5μM，表明該類化合物均具有較強的腫瘤細胞增殖抑制作用。同時，表2還列出本發(fā)明部分化合物對于人類宮頸癌細胞株HeLa細胞有絲分裂的影響，化合物引起的有絲分裂期細胞比例變化與其細胞增殖抑制活性呈良好的平行關(guān)系，提示該類化合物通過抑制腫瘤細胞有絲分裂進而發(fā)揮其抗腫瘤活性?？傮w看來，本發(fā)明化合物具有較強的有絲分裂阻滯作用和體外抗腫瘤活性，此外，本發(fā)明化合物與現(xiàn)有經(jīng)典有絲分裂抑制劑均不同，具有廣闊的開發(fā)前景。
上述例子僅作說明目的，本發(fā)明范圍并不受此限制。對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說進行修改是顯而易見的，本發(fā)明僅受所附權(quán)利要求范圍的限制。
權(quán)利要求
1.通式(I)表示的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物
其中
S和T各自獨立地為氫原子或C1-4烷基氧基；
U和V各自獨立地為氫原子、C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰氨基、C1-3烷基磺?；被酋；⒈交?、苯氧基、羥基、C1-3烷基硫基、硝基、咪唑基、氰基或鹵素，所述烷基非必需地被鹵素、吡啶基、咪唑基、嗎啉基或羥基取代；
R為乙酸甲酯基、丙酸甲酯基、乙酰氧基乙基、呋喃基取代的C1-3烷基或者苯基取代的C1-3烷基，所述苯基非必需地被C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基取代的C1-3烷基、C1-3烷基氨基、C1-3烷基酰氨基、C1-3烷基氧基羰基、C1-3烷基磺?；被酋；⒈交?、苯氧基、羥基、羥基C1-3烷基、C1-3烷基硫基、硝基、咪唑基、氰基、亞甲二氧基或鹵素取代，其中所述烷基非必需地被鹵素取代。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物，其特征在于，其中，所述的S和T各自獨立地為氫原子或甲氧基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物，其特征在于，其中，所述的S和T同時為氫原子或者同時為甲氧基，且在3位和4位取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任意一項所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物，其特征在于，其中，
U和V各自獨立地為氫原子、C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的甲基、一個或兩個C1-3烷基取代的氨基、一個或兩個C1-3烷基取代的酰氨基、C1-3烷基磺酰基、苯基、苯氧基、羥基、羥甲基、甲硫基、羥乙基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、三氟甲磺酰基、甲基磺?；?、氨基磺?；?、2-吡啶甲基氨基、3-吡啶甲基氨基、4-吡啶甲基氨基、1-咪唑基、3-(1-咪唑基)丙基氨基、2-乙醇氨基、3-丙醇氨基、2-嗎啉乙氨基、氰基、鹵素或硝基；
R為乙酸甲酯基、丙酸甲酯基、乙酰氧基乙基、呋喃甲基、苯甲基或者苯乙基，所述苯基非必需地被C1-8烷基、C1-8烷基氧基、C1-3烷基氧基取代的甲基、一個或兩個C1-3烷基取代的氨基、一個或兩個C1-3烷基取代的酰氨基、C1-3烷基磺酰基、C1-3烷氧基羰基、苯基、苯氧基、羥基、羥甲基、甲硫基、羥乙基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、三氟甲硫基、三氟甲磺?；⒓谆酋；?、氨基磺?；⑶杌?，4-亞甲二氧基、鹵素或硝基取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物，其特征在于，所述化合物選自如下化合物之一
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物，其特征在于，所述的藥理學(xué)上可接受的鹽為通式(I)表示的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物與鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、抗壞血酸、煙酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸或甲磺酸形成的鹽。
7.權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的制備方法，其特征在于，該制備方法為
在極性質(zhì)子性或非質(zhì)子性溶劑中，R’為H的醛酸或者R’為CH3或CH2CH3的醛酸酯A與取代2-氨基吡啶B和異腈C在催化劑或無催化劑條件下進行反應(yīng)得到；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亞砜；所述催化劑為包括乙酸、丙酸、丁酸、高氯酸、鹽酸、硫酸和硝酸的質(zhì)子酸或者包括Sc(OTf)3的路易斯酸；S、T、U、V和R的定義同權(quán)利要求1。
8.權(quán)利要求7所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的制備方法，其特征在于，反應(yīng)路線可為下述的任何一種；其中，S、T、U、V和R的定義同權(quán)利要求1；
反應(yīng)路線1當(dāng)R’為CH3或CH2CH3時，將醛酸酯A與取代2-氨基吡啶B和異腈C溶解于甲醇中后，加入Sc(OTf)3后，于55℃反應(yīng)5～12小時，反應(yīng)產(chǎn)物沉淀析出，直接過濾，用甲醇洗滌，干燥后得到目標化合物I；
反應(yīng)路線2當(dāng)R’為H時，將醛酸A與取代2-氨基吡啶B和異腈C溶解于甲醇中后，于55℃反應(yīng)5～12小時，反應(yīng)產(chǎn)物沉淀析出，直接過濾，用甲醇洗滌，干燥后得到目標化合物I；
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物的制備方法，其特征在于，進一步包括反應(yīng)路線3
反應(yīng)路線3當(dāng)化合物I中的V為溴或碘時，與包括C1-3烷基胺和C1-3烷基酰胺的取代的胺或咪唑反應(yīng)，在該反應(yīng)路線中反應(yīng)催化劑為碘化亞銅CuI、脯氨酸、碳酸鉀K2CO3，反應(yīng)溶劑為二甲基亞砜DMSO，反應(yīng)在微波反應(yīng)器中于140～200℃反應(yīng)20～60分鐘，將溶劑除去，產(chǎn)物用二氯甲烷溶解，分別用水和飽和鹽水各洗一次后，無水硫酸鈉干燥后除去二氯甲烷，后經(jīng)硅膠柱層析純化得目標化合物I-a；
10.權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物在制備細胞有絲分裂抑制劑的藥物中的用途。
11.權(quán)利要求1所述的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物在制備治療癌癥的藥物中的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征是用于，所述癌癥包括白血病、胃癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌和肺癌。
13.一種用于治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，該組合物包含治療有效量的取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物中的一種或多種作為活性成分以及藥學(xué)上可接受的輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類取代吡啶并[2’，1’2，3]咪唑并[4，5-c]異喹啉酮類化合物及其合成方法和用途，以及包含該類化合物的藥物組合物。具體涉及具有下述通式(I)的化合物或其立體異構(gòu)體、藥理學(xué)上可接受的鹽、前藥或溶劑化物及其合成方法，該類化合物可作為細胞有絲分裂抑制劑，其顯示出特異、高效的有絲分裂期阻滯作用，進而誘導(dǎo)細胞凋亡，且作用機制不同于已知的經(jīng)典有絲分裂抑制劑，可用于治療白血病、胃癌、宮頸癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌和肺癌。
文檔編號C07D471/00GK101717397SQ20081020095
公開日2010年6月2日 申請日期2008年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月9日
發(fā)明者沈競康, 孟韜, 張志翔, 繆澤鴻, 丁健, 馬蘭萍, 胡定宇, 張永良, 金羽, 王昕 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所