專利名稱：：一種貫葉連翹提取物中金絲桃素的精制的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明所涉及的是一種以目前市場所售的普通貫葉連翹提取物為原料，從中提取得到高含量的金絲桃素hypericin和黃酮類成分，并且活性可測成分^50%的方法。(二)
背景技術(shù)：
：貫葉連翹提取物是目前繼銀杏葉提取物之后的國外廠商所青睞的產(chǎn)品之一。在國外用做抗抑郁藥已有百余年歷史，而金絲桃素(hypericin)和黃酮類化合物是貫葉連翹提取物中抗抑郁和抗焦慮的的主要活性成分。近年來隨著對貫葉連翹在抗病毒、抗癌、抗抑郁機(jī)制等方面的研究深入，使其成為當(dāng)前匯集研究開發(fā)熱點(diǎn)課題之一。為此，貫葉連翹提取物的活性成分的提取和純化工藝也普遍受到大家的關(guān)注。目前國內(nèi)主要有醇提法、堿水提。以乙醇為溶劑提取金絲桃素(hypericin)是比較常規(guī)的方法，但提取物中金絲桃素(hypericin)含量受提取條件影響很大，且提取物易吸濕粘結(jié)成塊，通過加除雜劑、調(diào)ra值等解決了產(chǎn)品的吸濕性，但是產(chǎn)品中金絲桃素(hypericin)的含量只有0.7%，金絲桃素基本上被破壞。如果使用大孔樹脂或溶劑等手段進(jìn)行精制分離，雖然能得到含量較高的有效成分提取物，但成本太高，耗時相當(dāng)長，作為普通的提取物干粉其生產(chǎn)成本難以被市場接受。也有報(bào)道，在實(shí)驗(yàn)室理，金絲桃素含量提高到28%，名但無法工藝化。所以針對國內(nèi)現(xiàn)有提取物提取工藝狀況，必要對現(xiàn)有的制備工藝進(jìn)行改進(jìn)，本發(fā)明是通過有效的方法富集金絲桃素和黃酮類成分，使金絲桃素含量(hypericin)>30%，可測黃酮類成分^20%。(三)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是以市場上銷售的普通的貫葉連翹提取物為提取工藝原料，目的在于提供一種利用生物改性的吸附柱精制金絲桃素的方法。本發(fā)明精制金絲桃素的方法包括以下步驟(1)稱取一定量的貫葉連翹提取物，(1020)倍量的(1%5%)二乙醇胺水溶液使溶解，溶液通過濾布(100400目)過濾，以此避光。(2)濾液以一定的流速通過吸附柱(cht30)，然后依次以(1020)倍量水、0.1%0.5%純堿溶液沖洗吸附柱(cht30)，直至純堿洗脫下來的溶液在350nm處的吸收度《0.3，純堿溶液沖洗完畢后，又依次再加(1020)倍量(0.5%1.5%)檸檬酸溶液、(1020)倍量水、(1530)倍量的(70%80%)乙醇溶液沖洗柱子，棄去洗脫液。(3)以(1530)倍量0.5%二乙醇胺乙醇(80%乙醇)溶液洗脫金絲桃素，收集金絲桃素洗脫液。(4)金絲桃素洗脫液低溫(<45°C)真空濃縮，濃縮至無乙醇味，所得濃縮液趁熱過濾(先過濾紙，再過0.45iim膜)，得沉淀A.(5)濾液用18X鹽酸ph值調(diào)至(12)，析出沉淀，常溫靜置。待沉淀完全后離心，廢棄離心上清，得沉淀B。3(6)用蒸餾水清洗離心沉淀B，直至中性。(7)清洗好的沉淀B和沉淀A放入真空干燥箱內(nèi)，4(TC真空干燥即得到金絲桃素成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>采用本發(fā)明的工藝制備的貫葉連翹提取物，其金絲桃素含量經(jīng)過HPLC檢測達(dá)到50X以上，黃酮類成分槲皮素和蘆丁經(jīng)過HPLC檢測也分別達(dá)到20X以上。并且工藝中所使用到的試劑都為國家規(guī)定的常規(guī)試劑，適合工業(yè)化生產(chǎn)。使用本發(fā)明制備的貫葉連翹提取物和使用其他方法提取的提取物的質(zhì)量比較如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>(四)采用了比較直觀的工藝流程簡圖來表示本發(fā)明工藝過程。(五)具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1:稱取貫葉連翹提取物500g，加10L5%二乙醇胺水溶液使溶解，溶液通過400目濾布過濾，濾液通過4kgcht30柱，然后依次以IOL水流速約為40kg/h、0.5%碳酸鈉溶液150kg流速約為23kg/h沖洗cht30柱，純堿溶液沖洗完畢后，又依次再加10kg1.5%擰檬酸溶液、10L水、14kg的80X乙醇溶液沖洗柱子，棄去洗脫液。以20kg0.5%二乙醇胺80%乙醇溶液洗脫cht30柱，收集洗脫液。洗脫液低溫(<45°C)真空濃縮，濃縮至無乙醇味，所得濃縮液趁熱過濾(先過濾紙，再過0.45ym膜)，得沉淀.濾液用18X鹽酸ph值調(diào)至l，析出沉淀，常溫靜置。待沉淀完全后離心，廢棄離心上清液，又得沉淀。合并沉淀，用蒸餾水清洗離心沉淀，直至中性。清洗好的沉淀放入真空干燥箱內(nèi)，4(TC真空干燥即得到金絲桃素提取物315.4g，HPLC檢測金絲桃素含量為51.6%，蘆丁含量為26%，槲皮素含量為3%，經(jīng)紫外分光光度法檢測總黃酮為31%。實(shí)施例2:稱取貫葉連翹提取物500g，加10L5%二乙醇胺水溶液使溶解，溶液通過400目濾布過濾，濾液通過5kgcht30柱，然后依次以8L水流速約為36kg/h、0.3%碳酸鈉溶液180kg流速約為25kg/h沖洗cht30柱，純堿溶液沖洗完畢后，又依次再加12kg1.5%檸檬酸溶液、10L水、15kg的80%乙醇溶液沖洗柱子，棄去洗脫液。以18kg0.5%二乙胺80%乙醇溶液洗脫cht30柱，收集洗脫液。洗脫液低溫(<45°C)真空濃縮，濃縮至無乙醇味，所得濃縮液趁熱過濾(先過濾紙，再過0.45iim膜)，得沉淀.濾液用18%鹽酸ph值調(diào)至1，析出沉淀，常溫靜置。待沉淀完全后離心，廢棄離心上清液，又得沉淀。合并沉淀，用蒸餾水清洗離心沉淀，直至中性。清洗好的沉淀放入真空干燥箱內(nèi)，4(TC真空干燥即得到金絲桃素提取物357.3g，HPLC檢測金絲桃素含量為49.4%，蘆丁含量為28%，槲皮素含量為3.5%，經(jīng)紫外分光光度法檢測總黃酮為32.5%。權(quán)利要求一種貫葉連翹提取物的制備方法，是以市場上銷售的普通貫葉連翹提取物為原料通過以下方法制得金絲桃素提取物成品，金絲桃素含量≥30％，黃酮可測成分槲皮素和蘆丁≥20％，其制備方法貫葉連翹提取物，一定量的二乙醇胺水溶液使溶解，溶液通過濾布過濾，濾液以一定的流速通過吸附柱(cht30)，依次以水、純堿溶液沖洗吸附柱(cht30)，純堿溶液沖洗完畢后，又依次再加檸檬酸溶液、水、乙醇溶液沖洗柱子，棄去洗脫液，0.5％二乙醇胺乙醇(80％乙醇)溶液洗脫金絲桃素，收集金絲桃素洗脫液；金絲桃素洗脫液低溫(＜45℃)真空濃縮，濃縮至無乙醇味，所得濃縮液趁熱過濾(先過濾紙，再過0.45μm膜)，得沉淀；濾液用18％鹽酸PH值調(diào)至1，析出沉淀，常溫靜置。待沉淀完全后離心，廢棄離心上清，得沉淀，用蒸餾水清洗離心沉淀，直至中性，合并兩次沉淀放入真空干燥箱內(nèi)，40℃真空干燥即得到金絲桃素成品。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述其特征是所使用的捕獲劑型號是(cht30)，且用量是貫葉連翹提取物(cht30)=i:ii:io。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述，其制備工藝特征是貫葉連翹提取物以(1020)倍量的(1%5%)二乙醇胺水溶液使溶解，并且溶液通過黃色濾布(100400目)過濾。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述，其特征是濾液以一定的流速通過吸附柱(cht30)，依次以(1020)倍量水、0.1%0.5%純堿溶液沖洗吸附柱(cht30)，純堿溶液沖洗完畢后，又依次再加(1020)倍量(0.5%1.5%)檸檬酸溶液、(1020)倍量水、(1530)倍量的(70%80%)乙醇溶液沖洗柱子，棄去洗脫液。5.根據(jù)權(quán)利要求l所述，其特征是以(1530)倍量0.5%二乙醇胺乙醇(80%乙醇)溶液洗脫金絲桃素，收集金絲桃素洗脫液。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征是濾液用18X鹽酸ra值調(diào)至(12)，所使用的鹽酸溶液是質(zhì)量比。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征是金絲桃素洗脫液濃縮回收乙醇至無乙醇味為判斷標(biāo)準(zhǔn)，溫度始終30°C45。C。全文摘要本發(fā)明是以市場上銷售的普通的貫葉連翹提取物為提取工藝原料，目的在于提供一種利用生物改性的吸附柱精制金絲桃素的方法。采用本發(fā)明的工藝制備的貫葉連翹提取物，其金絲桃素(hypericin)含量經(jīng)過HPLC檢測達(dá)到50％以上，黃酮類成分槲皮素和蘆丁經(jīng)過HPLC檢測也達(dá)到20％以上。并且本發(fā)明的制備方法操作簡便快捷，產(chǎn)品質(zhì)量均一穩(wěn)定，生產(chǎn)容易實(shí)現(xiàn)，符合工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號C07C50/36GK101744890SQ20081020417公開日2010年6月23日申請日期2008年12月8日優(yōu)先權(quán)日2008年12月8日發(fā)明者馬世界,黃亮,黃肖輝申請人:上海四埃美微科技有限公司