專利名稱：一種提取麥芽中醇溶蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從啤酒工業(yè)用麥芽中提取醇溶蛋白的方法。
背景技術(shù)：
在啤酒發(fā)酵生產(chǎn)中，醇溶蛋白作為大麥芽和小麥芽中的一種蛋白亞組分，是引起啤酒非 生物穩(wěn)定性和鑒定大麥品種的特征蛋白。在相同的糖化和發(fā)酵工藝條件下，不同品種的大麥 芽和小麥芽中的醇溶蛋白含量和質(zhì)量的差異，直接導(dǎo)致啤酒有不同的非生物穩(wěn)定性。因此， 有效地分離提純大麥芽和小麥芽中的醇溶蛋白，對(duì)在啤酒釀造前預(yù)測(cè)啤酒非生物穩(wěn)定性和鑒 定大麥品種具有非常重要的意義。
關(guān)于蛋白質(zhì)分離提純的國(guó)內(nèi)外專利文獻(xiàn)較多，如CN200410051472.6公開的"一種蛋白質(zhì) 的分離純化方法"、CN200510050063.9公開的"一種從黃酒糟中提取蛋白質(zhì)的方法"、 CN02151555.7公開的"小麥醇溶蛋白的制備方法及其在黏合劑中的應(yīng)用"和CN03113843.8 公開的"一種提取玉米醇溶蛋白的生產(chǎn)方法"等，但專門報(bào)道從大麥芽和小麥芽中提取醇溶 蛋白的方法專利文獻(xiàn)未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從麥芽中快速提取醇溶蛋白的方法，經(jīng)提取的醇溶蛋白可通過(guò) 凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatograph， GPC)來(lái)初步鑒別大麥芽和小麥芽的品種。 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案 一種提取麥芽中醇溶蛋白的方法，依照如下步驟進(jìn)行
A、 將含水量為1~8%的麥芽粉碎成麥芽粉；
B、 用一步鹽法去除麥芽粉中所含的清蛋白和球蛋白，得沉淀物；
C、 用醇溶液提取沉淀物中的醇溶蛋白，得醇溶蛋白提取液；
D、 將醇溶蛋白提取液真空濃縮至原體積的1/8~1/10;
E、 冷凍干燥真空濃縮后的醇溶蛋白提取液，得醇溶蛋白粉。
上述的麥芽為大麥芽或小麥芽。
作為優(yōu)選，上述A步驟中，采用帶有2-10mm篩子的麥芽粉碎機(jī)，如瑞士布勒(BUHLER) 公司的型號(hào)為DFZ的粉碎機(jī)，來(lái)粉碎麥芽。上述B步驟的一步鹽法中所使用的鹽選自鈉鹽、鈣鹽、鎂鹽和鉀鹽，如NaCl、 CaCl、 MgCl、 KC1等。
進(jìn)一步，上述B步驟中的一步鹽法為將麥芽粉置于離心管中，按照1:10~50的重量比 例加入5 15。/。w/w的NaCl溶液，搖勻，置0 10。C提取l~2h，其間每10min漩渦振蕩一次， 然后以5000~15000r/min的速度離心30 60min，棄去上清液；沉淀物按照上述方法再重復(fù)提 取二次，棄去上清液，即得到去除清蛋白和球蛋白的沉淀物。所述麥芽粉的重量為扣除水分 后的絕干重量。
進(jìn)一步，上述C步驟具體為將沉淀物置于離心管中，按照1:10~50的重量比例加入 40~80% v/v的乙醇溶液，搖勻，置0 10'C提取l~2h，其間每10min漩渦振蕩一次，然后以 5000 15000r/min的速度離心30 60min，收集上清液；沉淀物按照上述方法再重復(fù)提取二次， 合并三次的上清液得醇溶蛋白提取液。
作為優(yōu)選，上述40~80% v/v的乙醇溶液中含有0.01 l。/。v/v的巰基乙醇。加入巰基乙醇 的目的是還原蛋白質(zhì)分子內(nèi)的二硫鍵，使醇溶蛋白充分溶出，進(jìn)一步提高醇溶蛋白的提取率， 且不使蛋白質(zhì)的主鏈斷裂。
作為另一種選擇，在上述B步驟和C步驟的分離提純過(guò)程中要連續(xù)漩渦振蕩，振蕩時(shí)間 是0.5~2h。
上述D步驟中，真空濃縮的優(yōu)選溫度為30~65"。 上述E步驟中，冷凍干燥的時(shí)間優(yōu)選為12~48h。
本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、快速，提取率高，且提取的醇溶蛋白純度高，能用來(lái)初步鑒別麥芽的 品種，易于在啤酒工業(yè)推廣使用。


圖1是國(guó)產(chǎn)大麥芽醇溶蛋白的GPC圖2是南澳Baudin大麥芽醇溶蛋白的GPC圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l
用瑞士布勒(BUHLER)公司的型號(hào)為DFZ的粉碎機(jī)粉碎國(guó)產(chǎn)大麥芽(含水量為1 8%)， 并過(guò)2 10mm篩子，得麥芽粉。
準(zhǔn)確稱取上述麥芽粉10.00g放入離心管中，再加入200g、 5。/。(w/w)的NaCl溶液，充分 搖勻后，置4'C提取lh，其間每10min漩渦振蕩一次，然后以10000r/min的速度離心30min， 棄去上清液。沉淀物按照上述方法再重復(fù)二次，棄去上清液，即得到去除清蛋白和球蛋白的 沉淀物。將沉淀物再置于離心管中，按照1:10 (w/w)的比例加入70% v/v (內(nèi)含0.07。/。v/v巰基 乙醇)的乙醇溶液中，搖勻，置4'C提取lh，其間每10min漩渦振蕩一次，然后以10000 r/min 的速度離心30min，收集上清液。沉淀物按照此方法再重復(fù)提取二次，合并三次的上清液為 醇溶蛋白提取液。
將得到的醇溶蛋白提取液，在5(TC下真空濃縮至原體積的1/8，得到部分去除乙醇后的 醇溶蛋白溶液A。
再將醇溶蛋白A溶液，進(jìn)行12~48h冷凍干燥即得到醇溶蛋白粉。
用凱氏定氮法測(cè)定上述醇溶蛋白粉的蛋白質(zhì)含量，得到0.20g醇溶蛋白，這和測(cè)定的國(guó) 產(chǎn)大麥芽中醇溶蛋白含量占總蛋白含量的18.3%接近，提取率達(dá)91%。 實(shí)施例2
用瑞士布勒(BUHLER)公司的型號(hào)為DFZ的粉碎機(jī)粉碎南澳Baudin大麥芽(含水量 為1~8%)，并過(guò)2 10mm篩子，得麥芽粉。
準(zhǔn)確稱取上述麥芽粉10.00g放入離心管中，再加入200g、 5。/。(w/w)的NaCl溶液，充分 搖勻后，置4'C提取lh，其間每10min漩渦振蕩一次，然后以10000r/min的速度離心30min， 棄去上清液。沉淀物按照上述方法再重復(fù)二次，棄去上清液，即得到去除清蛋白和球蛋白的 沉淀物。
將沉淀物再置于離心管中，按照I:IO (w/w)的比例加入70% v/v (內(nèi)含0.07。/。v/v巰基 乙醇)的乙醇溶液中，搖勻，置4。C提取lh，其間每10min漩渦振蕩一次，然后以10000 r/min 的速度離心30min，收集上清液。沉淀物按照此方法再重復(fù)提取二次，合并三次的上清液為 醇溶蛋白提取液。
將得到的醇溶蛋白提取液，在5(TC下真空濃縮至原體積的1/8，得到部分去除乙醇后的 醇溶蛋白溶液A。
再將醇溶蛋白A溶液，進(jìn)行12 48h冷凍干燥即得到醇溶蛋白粉。
用凱氏定氮法測(cè)定上述醇溶蛋白粉的蛋白質(zhì)含量，得到0.16g醇溶蛋白，這和測(cè)定的南 澳Baudin大麥芽中醇溶蛋白含量占總蛋白含量的14.18%接近，提取率達(dá)89%。
通過(guò)凝膠滲透色譜方法(Gel Permeation Chromatograph， GPC)對(duì)提取的麥芽醇溶蛋白 進(jìn)行測(cè)定，所得圖譜用來(lái)初步鑒定不同麥芽的品種區(qū)別。
從兩種麥芽醇溶蛋白的GPC圖譜清楚的看出有以下區(qū)別 (1)從圖1和圖2看出兩個(gè)品種麥芽醇溶蛋白的洗脫峰形狀不同國(guó)產(chǎn)大麥芽醇溶蛋 白的GPC圖譜的洗脫峰形狀非常勻稱，每個(gè)峰的形狀比較好，峰與峰之間分離的也比較清楚，中間的峰很高，兩邊的峰比較低；而南澳Baudin大麥芽醇溶蛋白的GPC圖譜的洗脫峰形狀 不勻稱，峰與峰之間的分離也不好，圖譜中有兩個(gè)并肩峰，也就是說(shuō)峰型和峰高接近。
(2) 從圖1和圖2看出兩個(gè)品種麥芽醇溶蛋白在GPC圖譜中出峰的數(shù)量不同。國(guó)產(chǎn) 大麥芽醇溶蛋白的GPC圖中有四個(gè)洗脫峰；而南澳Baudin大麥芽醇溶蛋白的GPC圖中只能 看到三個(gè)明顯的洗脫峰。
(3) 從圖1和圖2看出兩個(gè)品種麥芽醇溶蛋白洗脫峰的出峰時(shí)間不同，國(guó)產(chǎn)大麥芽醇 溶蛋白的GPC圖譜中的開始出峰時(shí)間是在洗脫時(shí)間為21min的時(shí)候，四個(gè)明顯峰的出峰位置 分別在22.5min、 23.8min、 25min和26min;而南澳Baudin大麥芽醇溶蛋白的GPC圖譜中的 開始出峰的時(shí)間是在洗脫時(shí)間為18min的時(shí)候，三個(gè)明顯的峰的出峰位置分別為19.5min、 22min和24min。
(4) 因此，從以上兩個(gè)品種麥芽醇溶蛋白GPC圖譜的區(qū)別能很容易的區(qū)別兩個(gè)麥芽的 品種，如果有摻假現(xiàn)象，GPC圖譜中麥芽醇溶蛋白的形狀和出峰時(shí)間以及峰的數(shù)目都會(huì)發(fā)生 相應(yīng)的變化。
權(quán)利要求
1、一種提取麥芽中醇溶蛋白的方法，其特征在于，依照如下步驟進(jìn)行A、將含水量為1～8％的麥芽粉碎成麥芽粉；B、用一步鹽法去除麥芽粉中所含的清蛋白和球蛋白，得沉淀物；C、用醇溶液提取沉淀物中的醇溶蛋白，得醇溶蛋白提取液；D、將醇溶蛋白提取液真空濃縮至原體積的1/8～1/10；E、冷凍干燥真空濃縮后的醇溶蛋白提取液，得醇溶蛋白粉。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述麥芽為大麥芽或小麥芽。
3.
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，B步驟的一步鹽法中所使用的鹽選自鈉鹽、 鈣鹽、鎂鹽和鉀鹽。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述B步驟中的一步鹽法為將麥芽粉置于 離心管中，按照1:10~50的重量比例加入5~15%w/w的NaCl溶液，搖勻，置0 10'C提取l~2h， 其間每10min漩渦振蕩一次，然后以5000-15000r/min的速度離心30 60min，棄去上清液； 沉淀物按照上述方法再重復(fù)提取二次，棄去上清液，即得到去除清蛋白和球蛋白的沉淀物。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述麥芽粉的重量為扣除水分后的絕干重量。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，C步驟中，將沉淀物置于離心管中，按照 l:10 50的重量比例加入40 80。/。v/v的乙醇溶液，搖勻，置0 10。C提取l~2h，其間每10min 漩渦振蕩一次，然后以5000-15000 r/min的速度離心30 60min，收集上清液；沉淀物按照上 述方法再重復(fù)提取二次，合并三次的上清液得醇溶蛋白提取液。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，40~80% v/v的乙醇溶液中含有0.01~l%v/v 的巰基乙醇。
9、 根據(jù)權(quán)利要求5或7所述的方法，其特征在于，在分離提純過(guò)程中要連續(xù)漩渦振蕩，振 蕩時(shí)間是0.5~2h。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，D步驟中，真空濃縮的溫度為30 65'C。
11、 根據(jù)權(quán)利要球1所述的方法，其特征在于，E步驟中，冷凍千燥的時(shí)間為12~48h。
全文摘要
本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種提取麥芽中醇溶蛋白的方法。所述方法依照如下步驟進(jìn)行A.將含水量為1～8％的麥芽粉碎成麥芽粉；B.用一步鹽法去除麥芽粉中所含的清蛋白和球蛋白，得沉淀物；C.用醇溶液提取沉淀物中的醇溶蛋白，得醇溶蛋白提取液；D.將醇溶蛋白提取液真空濃縮至原體積的1/8～1/10；E.冷凍干燥真空濃縮后的醇溶蛋白提取液，得醇溶蛋白粉。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、快速，提取率高，且提取的醇溶蛋白純度高，能用來(lái)初步鑒別麥芽的品種，易于在啤酒工業(yè)推廣使用。
文檔編號(hào)C07K14/415GK101434643SQ200810219868
公開日2009年5月20日 申請(qǐng)日期2008年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月11日
發(fā)明者劉國(guó)琴, 廖加寧, 朱玉魁, 冰 李, 李惠萍, 楊劍萍, 邱學(xué)青, 蓓 金 申請(qǐng)人:廣州珠江啤酒股份有限公司