專利名稱：：3,4-二氫喹唑啉衍生物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及具有良好的T型鈣離子通道阻斷效應和抗癌活性的3,4-二氫全唑啉衍生物，本發(fā)明還涉及3，4-二氫會唑啉衍生物的制備方法，以及包含3,4-二氫喹唑啉衍生物的藥物組合物。
背景技術：
：4丐作為一種細胞內信號起了關鍵作用，控制多種不同的細胞進程，鈣在這些細胞進程中對細胞生長起了重要作用[Berridge，M.J.，etal"Nat,Rev,Mol.CellBiol.2003,4,517-529]。例如，據證明，在有絲分裂細胞周期G1/S期中需要鈣信號。也有證明細胞內鈣離子的損耗使細胞周期在G0/G1期和S間期受到阻滯[Clapham,D.E,Cell1995,80,259-268]。細胞內鈣離子的調控是通過T-型鈣離子通道進行的。最近報道T-型鈣離子通道阻斷劑(CCBs)抑制細胞增殖[McCalmont,W.F.,etal.,MedC/ze附.2004，"，3691-3695;McCalmont，W.R，etal.,MedC/zew.2005,",3821-3839].然而，與T-型4丐離子通道阻斷劑(CCBs)不同的是，一些作為抗高血壓劑的L-型鈣離子通道阻斷劑可能與老年人癌癥的發(fā)病危險率相關，他們通過抑制細胞凋亡來促進人體內先存的癌細胞的生長[LaVecchia，C.etal.,Eur.J.Cancer2003,39,7-8]，這種觀點還在討論當中。因此，選擇性的T-型鉤離子通道阻斷劑(CCBs)可能能成為治療細胞周期變得異常的癌癥的另一種方法。另一方面，有報道表明T-型鈣離子通道的過量表達會導致癲癇癥(Tsakiridou，E.etal.，J.Ne麗ci.1995,15,3110-3117)、高血壓(Self,D.A.etal.,JVacs.Res.1994,31,359-366)、心室肥大(Nuss,H.B.etal.,CircRes.1995,73,777-7825)、疼痛(Shin,H.S.etal.，Science2003,302,117-119)和心絞痛(VanderVring,J.A.etal.，Am.J.Ther.1999,6，229-233)。因此，選擇性的T-型鉀離子通道阻斷劑可能能用于預防或治療癲癇癥、高血壓、心室肥大、疼痛和心絞痛
發(fā)明內容技術問題本發(fā)明的發(fā)明人深入研究、發(fā)明了一種通過阻斷T-型鈣離子通道來治療生長過度的疾病，例如癌癥的新化合物。他們發(fā)現具有式(I)結構的3，4-二氫喹唑啉^"生物具有良好的T-型鈣離子通道阻斷效應和抗癌活性。其中R,,R2和R3定義如下本發(fā)明的目的在于提供一種具有以上式(I)或其藥學上可接受的鹽的化合物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種包含上述式(I)或其藥學上可接受的鹽的化合物，以及其藥學上可接受的載體的藥物組合物。技術方案含有下述式(I)或其藥學上可接受的鹽的化合物，其中，Ri為NR4(CH2)nNR5R6,R4為H或d-C5烷基，n為4，5或6，R5和Rg分別為H或d-Cs烷基或含有氮原子的4-6元的雜環(huán)；112為4-聯苯基；113為節(jié)氨基、4-氨基千氨基；或4-氟苯砜氨基節(jié)氨基。式(I)中，R4優(yōu)選為C,-Cs烷基，更優(yōu)選地，R4為曱基或乙基，n最優(yōu)選為5。優(yōu)選地，Rs和Re為同為H或d-Cs烷基，更優(yōu)選地，Rs和R6為曱基或乙基，或連接有氮原子的吡咯烷或哌啶，更優(yōu)選為吡咯烷。本發(fā)明術語"C,-C5烷基"意指具有l(wèi)-5個碳原子的直鏈烴或支鏈烴，包括曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基等，但沒有限定進去。本發(fā)明最優(yōu)選的化合物選自以下化合物4-(芐基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AK5-吡咯烷-l-戊基)-,甲胺]-3,4-二氫喹唑啉；4-(芐基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AK5-AT,iV'-二曱氨基戊基)-iV-曱胺]-3，4-二氫喹唑啉；和4-(千基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AK5-氨基戊基HV-曱胺]-3,4-二氫唾唑啉。本發(fā)明化合物的制備方法通過以下1-5步反應式來描述。然而，下述反應式僅闡述了本發(fā)明的典型的反應步驟。操作順序、反應物、反應條件等可以不受限制地改變。反應式1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>如反應式l所示，1,5-二溴戊烷與鄰苯二曱酰亞胺鉀在適當的溶劑中反應，生成^-(5-溴戊基)鄰苯二甲酰亞胺(2)。化合物(2)與吡咯烷在碳酸鉀和碘化鈉存在下反應，生成iV-(5-吡咯烷-1-戊基)鄰苯二甲酰亞胺(3)?；衔?3)與肼反應生成5-(1-吡咯烷)戊胺(4)。化合物(4)與2-叔丁基碳酸氫鈉反應生成叔丁基(5-吡咯烷-1-戊基)氨基曱酸鹽(5)。然后，化合物(5)與氫化鋰鋁在適當的溶劑下反應生成iV-曱基-A45-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>如反應式2所示，化合物(14)可以通過反應式(1)得到的iV-曱基-7V-[5-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)制備而得。2-硝基苯肉桂酸(7)與甲醇在酸催化劑作用下反應得到曱基-2-硝基肉桂酸(8),曱基-2-竭基肉桂酸(8)優(yōu)選通過SnClr2H20減少硝基，生成曱基-2-氨基肉桂酸(9)?；衔?9)與三苯基磷優(yōu)選在有六氯乙烷和三乙胺的存在下反應，生成曱基3-[2-(三苯基磷亞氨基)苯基]丙烯酸酯(IO)?；衔?10)與4-聯苯基異氰酸酯在適當溶劑條件下反應產生甲基-3-[2-(4-聯苯基亞曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)。然后，化合物(ll)與反應式1得到的iV-甲基-,[5-(1-吡咯烷)戊基]胺(6)(6)在適當的溶劑條件下反應得到化合物3-(4-聯苯基)-2-[iV-曱基-吡咯烷-1-戊基)胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(12)。化合物(12)優(yōu)選利用LiOH/H20水解得到化合物(13),化合物(13)與節(jié)胺，優(yōu)選在有1羥基苯并三唑(HOBT)和l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亞胺鹽酸(EDC)存在的條件下反應得到4-(7V-節(jié)基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AK5-吡咯烷-l-戊基)-N-甲胺]-3,4-二氬壹唑啉(14)。反應式3H2NNH2('BOC)20OBnBrO義一Bn15LiAIH4H3C.18如反應式3所示，化合物(18)能通過以下步驟制備1,5-二氨基戊烷(15)與2-叔丁基碳酸氫鈉在適當的溶劑中反應產生叔丁基(5-氨基戊基)氨基曱酸鹽(16),化合物(16)與之前產生的節(jié)基溴反應，得到叔丁基(5-聯節(jié)基氨基戊基)氨基曱酸鹽(17)。得到的化合物(17)與氫化鋰鋁在適當的溶劑中反應生成iV,-聯節(jié)基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)。反應式4如反應式4所示，化合物(20)和化合物(23)可以利用反應式3得到的WiV-聯千基-TV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)和反應式2得到的曱基-3-[2-(4-聯苯基亞曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)來制備?；衔?11)與化合物(18)在適當的溶劑中反應生成3-(4-聯苯基)-2-[iV-(5-聯千基氨基戊基)-7V-曱胺]-4-甲氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(19)。然后，化合物(19)在Pd(C)和福爾馬林溶液存在條件下氫化生成2-[AK5W,iV'-二曱基氨基戊基)-W-曱胺]-3-(4-聯苯基)-4-曱氧基羰基曱基-3，4-二氫喹唑啉(20)。另一方面，化合物(19)優(yōu)選利用LiOH/H20水解產生化合物(21),化合物(21)與芐胺反應，優(yōu)選在l羥基苯并三唑(HOBT)和l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亞胺鹽酸(EDC)存在下反應，生成^-千基-3-(4-聯苯基)-2-[^-(5-W',iV'-聯卡基氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氫喹唑啉-4-乙酰胺基(22)。然后，化合物(22)在Pd(C)和福爾馬林溶液存在條件下氫化生成4-(iV-芐基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AH5-iV',iV'-二甲基氨基戊基)-iV-甲胺]-3,4-二氫喹唑啉(23)。反應式5CH3BnCH32225如反應式5所示，化合物(24)與化合物(25)能利用反應式3得到的7V,iV-聯芐基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)和反應式2得到的甲基-3-[2-(4-聯苯基亞甲氨基)苯基]丙烯酸酯(ll)來制備。具體步驟與反應式4相同，除了催化劑是用Pd(C)代替Pd(C)和福爾馬林溶液。本發(fā)明的另一方面是關于一種由上式(I)所示的化合物或其藥學上可以接受的鹽和其藥學上可以接受的載體組成的藥物組合物。特別地，本發(fā)明的藥物組合物能被用于治療癌癥，尤其是結腸癌，或用于預防或治療癲癇癥、高血壓、心室月巴大、疼痛或心絞痛。本發(fā)明的藥物組合物可以口服服用，如攝食或霧化吸入，或非口服服用，如注射、沉積、植入或栓劑。例如，注射劑可以為靜脈注射、皮層注射、皮下注射、肌肉注射、或腹腔注射。根據服用方式，本發(fā)明藥物組合物可以制成藥劑形式如片劑、膠嚢劑、顆粒劑、細粒劑、粉末劑、舌下片劑、栓劑、軟膏、注射液、乳劑、混懸劑、糖漿劑、噴霧劑等等。本發(fā)明藥物組合物的各種藥劑形式可以通過本領域熟知的藥學上可以接受的用于不同藥劑形式的栽體制備而得到。藥學上可接受的載體包括賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、防腐劑、抗氧化劑、等滲劑、緩沖劑、包衣劑、甜味劑、溶劑、堿、分散劑、潤濕劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、著色劑等等。本發(fā)明藥物組合物包括0.01-100wt。/。上述式(I)所示的3,4-二氫喹唑啉書f生物或其藥學上可接受的鹽，藥學上可接受的鹽取決于不同的形式。本發(fā)明藥物組合物的具體劑量根據哺乳動物包括人類的種類、體重、性別、疾病的嚴重度、醫(yī)生的診斷等的不同而不同。優(yōu)選地，每千克體重每天口服月良用0.01-50mg活性成分，非口服服用O.Ol-lOmg活性成分。根據疾病的嚴重度、醫(yī)生的診斷等，服用劑量可以每日一次或每日多次服用。有益效果本發(fā)明3,4-二氬全唑啉衍生物具有良好的T-型鈣離子通道阻斷效應和抗癌活性。因此，本發(fā)明化合物能被用作一種通過阻斷T-型鈣離子通道來治療過度增長的疾病(例如癌癥)的新的化學療法。本發(fā)明化合物也能被用作預防或治療癲癇癥、高血壓、心室肥大、疼痛或心絞痛。具體實施例方式下面結合具體的實施例進一步闡明本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而不能限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1:制備iV-(5-溴戊基)鄰苯二甲酰亞胺(2)于室溫下，往溶于100mlDMF中的1,5-二溴戊烷(9.00ml，65.22mmol)溶液中加入鄰苯二曱酰亞胺鉀(12.08g,65.22mmo1),反應混合物攪拌24h。反應完成后，加入蒸餾水，再將反應液攪拌10min,用乙酸乙酯萃取三次。然后，有機相用鹽溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥后減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷=1:3)，得到目標化合物(10.6g,55%)。^-NMR(400MHz，CDCl3)57.85-7.70(m，4H,aromatic),3.71-3.67(t,2H，-CHrCH2-CH2-CH2-CH2-Br),3.4-3.38(t,2H,-CHrCH2-CH2-CH2-CiirBr)'1.94-1.87(m,2H,-Qi2-CHrCH2-CH2-CH2-Br),1.73-1.67(m,2H，-CJ^-CHrCHrCHrCHrBr),1.53-1.47(m,2H，-C^-CHrCHa-CHrCHrBr).實施例2:制備,(5-p比咯烷-l-戊基)鄰苯二曱酰亞胺(3)于室溫下，在乙醇/丙酮(1:1)中加入碳酸鉀(13.57g，98.20mmol),吡咯烷(4.47ml,54.01mmol)和橫化鈉(7.359g,49.098mmol),然后攪拌lh。往反應液中緩慢加入7V-(5-溴戊基)鄰苯二曱酰亞胺(2)(10.60g,49.10mmo1),然后將反應液于5CTC回流24h。反應完成后，將得到的白色固體過濾，將溶劑減壓濃縮。然后，得到的殘留物用1N飽和NaOH溶液和二氯曱烷萃取三次。然后，有機相用無7jc硫酸鎂干燥后減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷甲醇氨水=100:9:1),得到目標化合物(3.27g,45%)。!H-NMR(400MHz,CDCl3)57.81-7.66(m,4H,aromatic),3.66-3.63(t,2H,-CH2-(CH2)4-NC4H8):2.51-2.49(t,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，2.45-2.41(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Ii4),1.77-1.74(m,2H,-(CH^-Q^-NCtHs),1.68-1.55(m，4H,-CHrCHrCHs-CHrCHrNQHs),1.36-1.32(m,2H,-CH2-CH2-CHrCH2隱CH2-NC4H8).實施例3:制備5-(1-吡咯烷)戊胺(4)于室溫下，往溶于乙醇(100ml)中的iV-(5-吡咯烷-l-戊基)鄰苯二曱酰亞胺(3)(3.27g,11.42mmol)中加入NH2NH2vH20(聯氨一水化物)(5.54ml，114.19匪ol)'反應液回流24h。反應完成后，反應液減壓過濾得到目標化合物(l.50g,84%)。'H陽NMR(400MHz，CDC13)S4.28(brs,2H,,陽)，2.69-2.66(t,2H,-CH^CH^-NQHs),2.51(s,4H,-(CH2)5-NC迅C2H4),2.46-2.42(t,2H,-(CH^-CHrNQHs),1.73(s,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Hi),1.52-1.43(m,4H,-CHrQ^-CHrCHrCHrNCaHs),1.33-1.25(m,2H,-CH2-CH2-CHrCH2-CH2-NC4H8).13C-NMR(CDC13)S56.18，54.06,41.30,31.92,28.22,24.68,23.31.實施例4:制備叔丁基(5-吡咯烷-l-戊基)氨基曱酸鹽(5)將5-(1-吡咯烷)戊胺(4)(1.50g，9.60mmol)加入50ml長頸瓶中，然后將長頸瓶抽真空，安裝氮氣球。然后，于0。C，加入二氯曱烷(30ml)溶解化合物(4),緩慢加入二-叔丁基碳酸氫鈉(2.64ml,11.52mmol)。然后，再加入二氯曱烷(20ml),攪拌24h。反應完成后，反應液用1N飽和NaOH溶液堿化，調至pH10-11,用二氯曱烷萃取三次。然后有機相用無水硫酸鎂干燥后減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=40:7:1),得到目標化合物(1.5g,650/。)。工H-NMR(400MHz，CDC13)54.63(brs,1H,-NH-),3.07-3.06(t,2H,-CH2-(CH2)4-NC4H8),2.51(s,4H,-NC2Ii4C2H4),2.45-2.41(m,2H,-(CH^-Q^-NC^t^C^ILt),1.76(s,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.54-1.28(m,15H，-CHrCHs-CHa-CHrCHrNCsI^QH^-C(CH2)2_).實施例5:制備7V-曱基-iV-[5-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)往溶于二氫呋喃(100ml)中的叔丁基(5-吡咯烷-l-戊基)氨基甲酸鹽(5)(1.59g,6.20mmoI)中加入LiAlH4(氫化鋰鋁)(2.35g，62.00mmo1),反應液攪拌24h。然后，在反應液中加入酒石酸鉀鈉(17.5g，62.0mmol)淬滅，混合物經珪藻土過濾。溶劑減壓濃縮得到目標化合物(0.7g,66%)。丄H-NMR(400MHz,CDC13)S2.63-2.47(m,8H,-Q^-CCH^-CHrNC^QILt),2.45(s,3H，-NH-CH2),1.80-1.79(m，4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.56-1,53(m,4H,畫CH2-CHrCH2-CHrCH2-NC4H8),1.41-1.33(m,2H,-(CH2)2-Q^-(CH2)2-NC4H8).13C-NMR(CDC13)556.43，54.05,51.79,36.14,29.48,28.70,25.27,23.19.實施例6:制備甲基-2-硝基肉桂酸(8)于室溫下，將溶于曱醇(200ml)的2-硝基苯乙烯酸(7)(10.38g,53.76mmol)滴加到小量濃硫酸中，反應液70。C攪拌12h。反應完成后，反應液用飽和碳酸氫鈉溶液調節(jié)至弱堿性，二氯曱烷萃取三次。然后，有機相利用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷=1:5)，得到目標化合物(11.03g,99%)。丄H-NMR(400MHz,CDC13)S8.16-8.12(d，1H,-C-CH=CH-)，8.09-7.58(m,4H,aromatic),6.43-6.37(d,1H,-C-CH=CH_),3.86(s,3H,-OCH3).實施例7:制備曱基-2-氨基肉桂酸(9)于室溫下，往溶于乙酸乙酯(200ml)的曱基-2-硝基肉桂酸(8)(11.03g,53.24mmol)中加ASnCl2.2H20(60.06g，266.19mmol)，反應液7CTC攪拌60min。反應完成后，將反應液冷卻到室溫，用飽和碳酸氫鈉溶液調節(jié)至弱堿性，經硅藻土過濾。水相用乙酸乙酯萃取三次，合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷=1:5)，得到目標化合物(8.50g,90%)。^-NMR(400MHz,CDC13)S7.92-7.86(d,1H,-C-CH=CH-),7.44-6.76(m,4H,aromatic),6.42-6.36(d,1H,-C-CH=CH-)，3.83(s,3H,-OCH3).實施例8:制備甲基-3-[2-(三苯基磷亞氨基)苯基]丙烯酸酯(10)往溶于曱苯(200ml)的曱基-2-氨基肉桂酸(9)(8.93g,50.40mmol)中滴加三苯基磷(19.83g,75.59mmol)和六氯乙烷(17.90g,75.59mmol)。然后，于室溫下，將反應液慢慢滴加到三乙胺(3.24ml，23.3mmol)中，然后將混合物回流3h。反應完成后，反應液冷卻到室溫，經硅藻土過濾。反應液用二氯曱烷萃取三次，合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過,圭膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷-l:3:1),得到目標化合物(22.05g,定量地得到)。'H-NMR(400MHz,CDC13)S8.78-8.81(d,1H，-C-CH=CH-)，7.84-6.69(m,19H,aromatic),6.42-6.53(d，1H,-C-CH=CH_),3.84(s,3H,-OCH3).實施例9:制備曱基-3-[2-(4-聯苯基亞曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)往溶于甲苯(300ml)的甲基-3-[2-(三苯基磷亞氨基)苯基]丙烯酸酯(10)(22.05g,50.40mmol)中加入4-聯苯異氰酸酯(9.84g，50.40mmol)。反應液在室溫下攪拌12h,減壓蒸餾，用曱醇重結晶，生成白色固體的目標產物(6.95g,64%)。'H-NMR(400MHz,CDC13)58.17-8.13(d，1H,-C-Qi=CH-),7.61-7.25(m,13H,aromatic),6.54-6.50(d,1H，-C-CH=QJ-)，3.81(s,3H,-OCH3).實施例10:制備3-(4-聯苯基)-2-[^曱基-^-(5-吡咯烷-1-戊基)胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(12).于0'C條件下，往溶于甲苯(50ml)的3-[2-(4-聯苯亞氨基亞曱基胺)苯基]丙烯酸酯(11)(0.83g,2.35mmol)中慢慢加入實施例5制備的iV-甲基-A45-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)(0.80g,4.70mmol)中，反應液在室溫下攪拌lh。反應完成后，反應液經1N飽和NaOH溶液和二氯曱烷萃取三次，然后，合并的有機相用無7jc硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到目標化合物(0.63g,52%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)S7.51-6.89(m,13H,aromatic),5丄(dd，《/=4.5and10Hz，1H，-NH-Qi-)，3.76(s,3H,-OCH3),2.85-2.48(m，11H,-N-CH3，-0^-(012)3隱0^->^211^2仏)，1.88(s，4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.66(s,2H,-CH2-CH2-(CH2)3-NC2H4C2H4),1.53(s,2H,.(CH2)3-CH2-CH2-NC2H4C2H4)，1.26-1.22(m,2H,-CHrCHrCHrCHrCHrNCsI^C^fLO.13C-NMR(CDC13)S171.88,153.38，145.38,144.15,140.30,136.77,128.76,128.36，127.85,127.08,126.73,124.75,122.86，122.59,122.12,61.21，56.30,54.06,53.45,51.89,39.54，35.40，30.90，28.21，27.16,24.91，23.37.實施例11:制備4-(JV-千基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-IW-(5-吡咯烷-l-戊基)-N-曱胺]-3,4-二氫喹唑啉(14)(KYS05080)往溶于二氫呋喃(20ml)和水(20ml)的3-(4-聯苯基)-2-[7V-曱基-AK5-吡咯烷-l-戊基)胺]4-曱氧基羰基甲基-3,4-二氫查唑啉(12)中加入LiOH/H20(0.21g,5,05mmol)中，反應液在70°C攪拌2h。反應完成后，反應液冷卻到室溫，溶劑減壓濃縮。然后，反應混合物用3NHC1酸化至pH3-4后，用二氯曱烷萃取三次。合并的有機相用無水錄u酸鎂干燥，減壓蒸餾得到白色固體化合物(13)。于0。C條件下，往溶于二氯曱烷/四氬呋喃(l:l，40ml)的化合物(13)和1羥基苯并三唑(HOBT)(0.881g,6.52mmol)中滴加千胺(0.71ml,6.52mmol),反應液0。C攪拌lh。然后，加入l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亞胺鹽酸(EDC)(LOg,i.20mmo1),室溫下攪拌12h。反應完成后，反應液減壓蒸餾，溶解于二氯甲烷。然后，反應液用0.5M鹽酸溶液萃取兩次，飽和碳酸氬鈉萃取兩次，水萃取一次，用鹽溶液洗滌。有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黃色液體的目標化合物(0.33g，64%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)S7.55-6.97(m，18H,aromatic),5.33-5.29(dd,5.3and9.4Hz,1H,-NH-CH-),4.52-4.50(m,2H,(36115-0^-),3.41-3.16(d,2H,-CHrCH-),2.70-2.62(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4),2.46-2.37(m,7H，-Q^-CHrCHrCHrCg-NQHs,-NCHa),1.96-1.95(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Hi),1.74-1.25(m,6H,-CHHCH^-CH^NC4H8).13C-NMR(CDC13)5170.26,154.01,145.47,143.89,140.41,138.53，136.75,128.77,128.58，128.05,127.78,127.40,127.07,126.77,126.35,125.08,122.97,122.33,122.21,61.17,56.55,55.44,54.23,49.81,43.72,41.63,35.46，28.66,27.06，25.02，23.38.實施例12:制備叔丁基(5-氨基戊基)氨基甲酸鹽(16)于0。C條件下，往溶于二氯曱烷(100ml)的1,5-二氨基戊烷(15)(1.14ml,9.79mmol)中加入二-叔丁基碳酸氬鈉(1.12ml,4.90mmol),反應液室溫攪拌12h。反應完成后，加入H20去除固體得到的殘留物。反應混合物用IN飽和NaOH溶液堿化至pH10-11,用二氯曱烷萃取三次。然后，合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黃色液體的目標化合物(l.OOg,51%)。^-NMR(400MHz，CDC13)S4.57(br,1H,-NH-),3.11-3.09((!，/=6.2Hz,2H,-NH-CHr),2.71-2.67(t,/=6.9Hz,-)2)，1.78(br,2H,-NH2),1.51-1.44(m,4H,-NH-CHrQir,-Q^-CH2-N-(Bn)2),1.42(s，9H,-0(CH3)3),1.37-1.31(m，2H,-CH2-CH^-CH2-).實施例13:制備叔丁基(5-聯節(jié)基氨基戊基)氨基曱酸鹽(17)于室溫下，往溶于二氯曱烷(100ml)的叔丁基(5-氨基戊基)氨基曱酸鹽(16)(1.00g,4.94mmol)中緩慢加入節(jié)基溴(1.99ml,16.81mmol)和碳酸鈉(2.24g，26,69mmol)。反應液40。C攪拌12h,用二氯甲烷萃取三次，然后，合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷=1:10:1),得到黃色液體的目標化合物(0.92g，49%)。丄HNMR(400MHz,CDC13)57.40-7.23(m,10H,aromatic),3.57(s,4H,-(Bn)2),3.09-3.07(m,2H,HN-CH2-)，2.44(t,/=7.05Hz,2H,-CH^-N-),1.58-1.51(m，2H,HN-CH2-CH2-)，1.48(s,9H,(CHa)3C-0)，1.41-1.27(m,4H,HN-CH2-CH2-CHrCHb-CH2-).實施例14:制備W-聯節(jié)基W-曱基戊烷-l,5-二胺(18)于室溫下，往溶于二氫呋喃(100ml)的叔丁基(5-聯節(jié)基氨基戊基)氨基曱酸鹽(17)(0.92g,2.41mmol)中加入氳化鋰鋁(0.91g,24.1mmol),反應液70。C攪拌12h。反應完成后，反應液冷卻到室溫，加入羅謝爾鹽(酒石酸鉀晶體)(6.79g,24.1mmol)。然后，反應液攪拌8h,經硅藻土過濾。濾液經二氯曱烷萃取三次，用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾得到黃色液體的目標化合物(0.42g,60%)。^NMR(400MHz,CDC13)57.42-7.22(m,10H,aromatic),3.58(s,4H,-(Bn)2),2.52-2.44(m,5H,HN-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-),2.38(s，3H,-NH隱CHa),1.57-1.53(m,2H,HN-CH2-CHrCH2-)，1.42-1.31(m,4H，HN-CH2-CH2-CH2-CHrCH2-).13CNMR(400MHz,CDC13)S139.9,128.8,128.1，126.7,58.4，53.2,51.7,35.9,29.1,26.9,24.8.實施例15:制備3-(4-聯苯基)-2-[AK5-聯千基氨基戊基)-」V-曱胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(19)往溶于曱苯(100ml)的曱基-3-[2-(4-聯苯基亞曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)(1.12g，3.15mmol)中加入W7V-聯節(jié)基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)(1.87g，6.30mmol)。然后，反應液攪拌2h,二氯曱烷萃取三次。合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷=1:2:1)，得到黃色液體的目標化合物(2.56g，定量地得到)。iH-NMR(400MHz,CDC13)S7.51-7.01(m,23H,aromatic),5.14-5.10(dd,4.7and10.3Hz,1H,-CH2-CH-N-)，3.75-3.71(m,5H,-OQ^,"HCN-Qir),3.57-3.58(m,4H,-(Bn)2),3.27-2.52(m,7H,-CO-Qir,-NCHa,-CHrN(Bn)2)，2.41(m,2H,-CH2-CH2-(CH2)3-N(Bn)2),1.51-1.45(m,4H,-(CH2)3-CH2-Q^-N(Bn)2).實施例16:制備2-[iV-(5-,，,-二曱基氨基戊基)-iV-甲胺]-3-(4-聯苯基)-4-曱氧基羰基甲基-3，4-二氫喹唑啉(20)(KYS05089)往溶于曱醇(20ml)的3-(4-聯苯基)-2-[AK5-聯芐基氨基戊基HV-曱胺]-4-曱氧基羰基曱基陽3，4-二氫喹唑啉(19)(430mg,0.33mmol)和福爾馬林溶液(37。/。，0.3ml)中加入10%Pd(C)(110mg),反應液在氫氣氛圍中攪拌24h。反應完成后，反應液經硅藻土過濾，二氯曱烷萃取三次，用鹽溶液洗滌。合并的有機相用無7K碌u酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷甲醇氨水=100:9:1)，得到黃色液體的目標化合物(274mg，60%)。^-NMR(400MHz,CDC13)57.52-6.88(13H,m,Ph),5.11(1H,dd,/=10.4and4.5Hz,COCH2CH),3.75(3H,s,OCH3),3.50(1H,m,CH3N-Qi),3.15(1H,m,CH3N-CH)，2.88-2.82(4H,m,CH;-NandCOCH),2.51(1H，dd,J=15.5and4.6Hz,COCH),2.25-2.23(2H,m,-NCHa),2.20(6H,s，2xN-Qi;),1.52-1.45(4H,m,2xC^),1.24-1.23(2H,m,CH2).13CNMR(400MHz，CDC13)S171.9，153.4,145.4,144.2，140.3,136.8,128.8，128.4,127.9,127.1,126.8,125.4,124.8,122.9,122.6,122.1,61.2,59.7,49.5,45.2,43.8,41.8,35.3,27.1,27.0,24.7.HRMS(FAB+)calcdforC31H39N402:[M+H]+=499.3073,found=499.3060.實施例17:制備7^千基-3-(4-聯苯基)-2-[^-(5-^',^'-聯千基氨基戊基)-^曱胺]-3,4-二氫喹唑啉-4-乙酰胺基(22)往溶于二氫呋喃(50ml)和水(50ml)的3-(4-聯苯基)-2-[,(5-聯千基氨基戊基)-,曱胺]-4-甲氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(19)(2.56g,3.93mmol)中加入LiOH/H20(0.825g,19.7mmol),反應液70°C攪拌2h。反應完成后，反應液冷卻到室溫，溶劑減壓濃縮。然后，反應液用3NHC1酸化至pH3-4后用二氯曱烷萃取三次。合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾，得到白色固體的化合物(21)。于0'C下，往溶于二氯曱烷/四氫呋喃(l:l，40ml)的化合物(21)和1羥基苯并三唑(HOBT)(l.OOg,7.41mmol)中滴加千胺(0.804ml，7.41mmol),反應液0。C攪拌lh。然后，加入l-[3-(二曱胺)丙基]-3-碳化二亞胺鹽酸(EDC)(1.21g,6.30mmo1),室溫攪拌12h。反應完成后，反應液減壓蒸餾，溶于二氯曱烷。然后，反應液用0.5M鹽酸溶液萃取兩次，飽和碳酸氫鈉溶液萃取兩次，水萃取一次，用鹽溶液洗滌。有機相用無水碌u酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷甲醇=15:1),得到黃色液體的目標化合物(2.13g,79%)。iH-NMR(400MHz,CDC13)S7.63-7.05(m,28H,aromatic),5.42-5.38(dd,5.6and9.0Hz,1H,-CH2-CH-N-)，4.68-4,64(m，2H,加-麗-),3.62(s,4H,-N-fBn)，),2.95(br,1H,-CH^-CH-N-),2.74-2.69(m,4H,-3HCN-Ci^-，.C逸-N(Bn)2),2,46-2.41(m，3H,-NQij),1.57-U9(m，7H,-CHrCH-N-,-CH7-fCH2)rCH").實施例18:制備4-(N-千基乙酰胺基)-3-(4-聯苯)-2-[N-(5-N，,N，-二曱基氨基戊基)-N-曱胺]-3,4-二氫會唑啉(23)(KYS05090)將溶于曱醇(IOml)的N-芐基-3-(4-聯苯)-2-[N-(5-N，，N，-聯苯基氨基戊基)-N-曱胺]-3,4-二氫喹唑啉-4-乙酰胺基(22)(530mg,0.73mmol)和福爾馬林溶液(37%,0.27ml),加入至10%Pd(C)(120mg),反應液在氫氣氛圍中攪拌24h。反應完成后，反應液經石圭藻土過濾，二氯曱烷萃取三次，用鹽溶液清洗。合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物通過硅膠柱層析(洗脫液二氯甲烷甲醇氨水=100:9:1)，得到黃色液體的目標化合物(260mg,62%)。iH-NMR(400MHz，CDC13)S7.72-6.98(18H,m,Ph),5.32(1H,dd，J"=9.1and4.6Hz,COCH2CH),4.50(2H,<!，/=5.8Hz,PhQ^-),3.50-3.20(2H,m,CH3N-CH2),2.71-2.33(4H,Qi5-NandCOCH),2.44(1H,dd,/=14.5and5.2Hz,COCg),2.30-2.29(2H,m,-NCHi),2.21(6H,s,2xN-CHj)，1.65-1.35(4H，m,2xCH2),1.25-1.10(2H,m,Qi).13CNMR(400MHz,CDC13)S170.1,153.9,145.3,143.8，140.4,138.4,136.7,128.8,128.6,128.1,128.0,127.8,127.4，127.1,127.0,126.2,125.1,122.8,122.4,122.2,61.2,59.7,49.5,45,2:43.8,41.8,35.3,27.1,27.0,24.7.MS(FAB+),m/z(relativeintensity,%)596.7([M+Na]+,100),574.7([M+H]+,30);MS(FAB-)，m/z(relativeintensity,%)572.7([M-H]+,100);H脂S(FAB+)calcdforC37H44N50:[M+H]+=574.3546，found=574.3516.實施例19:制備2-[AK5-氨基戊基)W-曱胺]-3-(4-聯苯基)-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氫喹唑啉(24)(KYS05096)往溶于甲苯(20ml)的3-(4-聯苯基)-2-[^-(5-聯千基氨基戊基>^-甲胺]-4-曱氧基羰基甲基-3，4-二氫喹唑啉(19)(362mg,0.556mmol)中加入10%Pd(C)(883mg),反應液在氫氣氛圍中攪拌24h。反應完成后，反應液經硅藻土過濾，二氯甲烷萃耳又三次，用鹽溶液洗滌。合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物通過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黃色液體的目標化合物(110mg，42%)。^-NMR(400MHz,CDC13)S7.52-6.88(m，13H，aromatic),5.13-5.09(dd,/=4.5and10.4Hz,IH,-CH2-Qi-N-),3.75(s,3H,-OC配，3,15(br,1H,-CHrCH-N-),2.88-2.82(m,4H,-3HCN-CH2-,-CH2-NH2),2.54-2.49(dd,/=3,1and15.5Hz，IH,-CHrCH-N陽)，2,25-2.23(m,3H，-NCH2),1.52-1.46(m，4H,-CH2-CHrCH2-Q^-CH2-NH2),1.26-1,23(m，2H,-(CH^-CHrCz-,).13C畫R(400MHz,CDC13)S171.9,153.4，145.4,144.2,140.4,136.8,128.8,128.4,127.9,127.1,126.8，125.4,124.8，122.9，122.6,122.1，61.2,59.6,51.9,49.9,45.3，39.6,35.5，27.3,24.8.實施例20:制備4-(iV-千基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[iV-(5-氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氫喹唑啉(25)(KYS05097)往溶于曱苯(20ml)的iV-芐基-3-(4-聯苯基)-2-[AH5-iV',jV'-聯芐基氨基戊基)-,曱胺]-3,4-二氫喹唑啉-4-乙酰胺基(22)(1.01mmol)中加入10%Pd(C)(183mg),反應液在氫氣氛圍中攪拌24h。反應完成后，反應液經硅藻土過濾，二氯曱烷萃取三次，用鹽溶液洗滌。合并的有機相用無水硫酸鎂干燥，減壓蒸餾。得到的殘留物過硅膠柱層析(洗脫液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黃色液體的目標化合物(304mg,55%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)57.72-6.98(m,18H,aromatic),5.34-5.30(dd，J=4.6and9.1Hz,1H，-CH2-CH-N-)，4.51-4.49(d,/=5.8Hz,2H，ln-NH陽)，2.72-2.66(m，4H，-3HCN-CHr,-CH2-NH2),2.47-2.42((!(!,/=5.1and14.5Hz,IH,-Q^-CH-N-),2.30-2.28(m,3H，-NCHj),1.47-1.24(m,7H,-Q^-CH-N-,-CH7-(CH2VCH").13CNMR(400MHz,CDC13)S170.1，153.9,145.3，143.8，140.4,138.4,136.7，128.8,128.6,128.1,128.0,127.8,127.4,127.1，127.0,126.2，125.1,122.8,122.4,122.2，61.2,60.0,49.5,45.2，43.8,41.8,35.3,27.1,24.7.上述實施例制備的本發(fā)明代表化合物的化學結構和生化特性總結見表1。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>生物活性測試本發(fā)明化合物的T-型鈣離子通道阻斷效應是通過電生理學全細胞膜片鉗方法來測定的，該方法利用哺乳動物HEK293細胞系，該細胞系選擇性表達T-型鉤離子通道編碼基因中的a1G,其中a1G主要在神經元(來源于人類腎臟癌細胞)中表達，這在韓國專利No.0610731和Monteil,A"etal.,JOze附.2000,275,6090-6100中都有說明。本發(fā)明化合物的細胞毒性通過MTT[3-(4,5-二曱基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]試驗法進行測定。本發(fā)明化合物對癌細胞系的生長抑制效應通過SRB試驗法(磺酰羅丹明B)進行測定，這種方法在Skehan,P.etal.,丄扁C羅er/"W.1990,82,1107-1112中有說明。試驗例l:培養(yǎng)HEK293細胞，利用電生理學方法測定T-型鈣離子通道活性的方法將HEK293細胞置于添加了10。/。胎牛血清(FBS)和1。/。青霉素/鏈霉素(v/v)的DMEM培養(yǎng)基中，36.5°〇濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)(95%空氣-5%<:02)。每3-4天更換一次新鮮培養(yǎng)液，培養(yǎng)的細胞每周進行一次次代培養(yǎng)。此時，培養(yǎng)液用G-418(0.5mg/mL)溶液處理，這樣只有表達aujT-型鈣離子通道的HEK293細胞能夠生長。每次次代培養(yǎng)時，用于T-型鈣離子通道活性測試的細胞在聚L-賴氨酸(0.5mg/mL)涂抹的覆蓋薄片上培養(yǎng)，培養(yǎng)2-7天后記錄鈣離子通道活性。單個細胞水平的T-型鈣離子通道的電流根據電生理學全細胞膜片鉗方法來進行測定，該方法利用EPC-9放大器(HEKA,Germany)。此時，加入胞外溶液[NaCl140mM,CaCl22mM,HEPES(4-幾乙基哌嗪乙磺酸)10mM(pH7.4)]和胞內溶液[KCl130mM,HEPESlOmM,EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸)11mM，andMgATP5mM(pH7.4)〗。由T-型鉤離子通道激活(通過刺入具有3-4MQ電阻，并充滿著進入單一細胞的胞內溶液，且固定膜電位為-100mV,每10s在-30mV(為期50ms)去極化的玻璃微電極，以使細胞轉化為全細胞記錄模式，而引起T型鈣離子通道激活)而引起的內部電流根據在低電流激活的T-型鈣離子通道協(xié)議進行測定。試驗例2:利用MTT試驗分析T-型鈣離子通道阻斷劑的細胞毒性為了分析本發(fā)明化合物在HEK293細胞內的細胞毒性，依據以下步驟進行MTT[3-(4，5-二曱基遙唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽]試驗。分別用濃度為10-100pM的各種化合物處理培養(yǎng)的HEK293細胞后，用0.1。/。DMSO溶液作為負調控，用誘導細胞毒性的H202(125^M)作為正調控來處理HEK293細胞。藥物處理6h后，用溶解于PBS(磷酸鹽緩沖液)的50|xLMTT(lmg/mL)處理細胞4h。然后，離心除去懸浮液，得到的有色甲晶體溶解于100(xLDMSO中。采用自動分光光度酶標儀在560nrn條件下測定溶液的吸光率。結果表明，本發(fā)明化合物在100nM濃度下沒有任何的毒性。試驗例3:利用SRB試驗法分析對癌細胞系的生長抑制利用SRB(磺酰羅丹明B)試驗法對本發(fā)明化合物對五種癌細胞系的生長抑制做了評估，包括人類肺癌細胞(A-549)、人類前列腺癌(DU145)、人類結腸癌(HT-29)、人類惡性黑素瘤(SK-MEL-2)和人類卵巢癌(SK-OV-3)。所有的細胞系置于添加有10。/。(v/v)熱失活胎牛血清(FBS)的RPMI1640(GibcoBRL)培養(yǎng)基中，于37°C,5%C02濕度培養(yǎng)。將細胞接種于96孔平板上。將不同濃度的化合物加入各孔至三分之一孔處，然后在37°C,5。/。C02培養(yǎng)72h,以使加入藥物的時候細胞處于指數生長期。培養(yǎng)結束后，往各孔中溫和加入100pL福爾馬林溶液。將微板置于室溫30min,用自來水清洗5次。往各孔中加入100pL0.4%SRB溶液，室溫下放置30min。去除SRB,在^反風干前用1%醋酸清洗5次。去除的SRB用100pL10mM的不含緩沖液的Tris-base溶液(Sigma)溶解，將板置于平板震蕩器上至少振蕩10min。利用酶標儀(Versamax,MolecularDevices)在520nm波長處檢測光密度，生長抑制濃度用Gl50來表示。通過以上試驗例分析了T-型4丐離子通道阻斷效應和對癌細胞系的生長抑制效應，總結結果見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>權利要求1.具有式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于式(I)為其中R1為NR4(CH2)nNR5R6，其中R4為H或C1-C5烷基，n為4，5或6，R5和R6分別選自H或C1-C5烷基，或含有氮原子的4-6元雜環(huán)；R2為4-聯苯基；R3為芐氨基，4-氨基芐氨基或4-氟苯砜氨基芐氨基。2.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于FU為C廣C5烷基；n為5;R5、同為H或d-Cs烷基，或含有氮原子的吡略烷或喊咬。3.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于R4為C廣Cs烷基；n為5;R5、同為C廣C5烷基。4.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于R4為CrCs烷基；n為5;R5、&為含有氮原子的吡咯烷。5.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于所述化合物為4-(A/"-千基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[^-(5-吡咯烷-1-戊基)-TV-甲胺]-3，4-二氫喹唑啉。6.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于所述化合物為4-(7^千基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[^-(5-AT，A^-二甲氨基戊基)_,曱胺]_3,4-二氬p奎唑啉。7.根據權利要求1所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于所述化合物為4-(iV-節(jié)基乙酰胺)-3-(4-聯苯基)-2-[AK5-氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氬p奎唑啉。8.—種藥物組合物，由權利要求1-7任一項所述的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體組成。9.用于治療癌癥的如權利要求8所述的藥物組合物。10.用于治療結腸癌的如4又利要求8所述的藥物組合物。11.用于預防或治療癲癇癥、高血壓、心室肥大、疼痛或心絞痛的如權利要求8所述的藥物組合物。全文摘要本發(fā)明公開了3，4-二氫喹唑啉衍生物，制備3，4-二氫喹唑啉衍生物的方法以及包括3，4-二氫喹唑啉衍生物的藥物組合物。本發(fā)明的3，4-二氫喹唑啉衍生物具有良好的T-型鈣離子通道阻斷效應和抗癌活性。文檔編號C07D239/00GK101679312SQ200880015169公開日2010年3月24日申請日期2008年5月6日優(yōu)先權日2007年5月8日發(fā)明者吳泉林,朱東駿,李在烈,金永德申請人:同祐Syntech株式會社