專利名稱：：具有抗真菌活性的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗真菌肽和/或抗細(xì)菌肽，特別是從昆蟲(chóng)中獲得的抗真菌肽，所述昆蟲(chóng)特別是鱗翅昆蟲(chóng)(l印idopterans)。本發(fā)明也提供了應(yīng)用這些抗真菌肽治療或預(yù)防真菌生長(zhǎng)的方法，所述方法被用于各種目的，例如預(yù)防植物的真菌感染、治療動(dòng)物(特別是人類)的真菌感染、以及預(yù)防食物腐敗變質(zhì)。
背景技術(shù)：
：真菌是真核細(xì)胞生物，它們可以有性或無(wú)性地繁殖，并且可以是雙相形式的，其在自然環(huán)境是一種形式，而在感染宿主體內(nèi)是另一種不同的形式。植物和動(dòng)物的真菌感染都是農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)和食品生產(chǎn)/儲(chǔ)存領(lǐng)域的重大問(wèn)題。因?yàn)槎喾N原因，真菌感染正成為主要的關(guān)注點(diǎn)，所述原因包括有限數(shù)目的可用的抗真菌劑、耐較老抗真菌劑的物種的發(fā)生率的增加、以及對(duì)機(jī)會(huì)性真菌感染高危的免疫缺陷患者人群的增長(zhǎng)。人類的真菌病被稱作霉菌病。一些霉菌病是地方性的，其中只在作為真菌的天然棲息地的地理區(qū)域內(nèi)才會(huì)獲得感染。這些地方性霉菌病通常是自限的，并且很少有癥狀。一些霉菌病主要是機(jī)會(huì)性的，出現(xiàn)于免疫缺陷患者體內(nèi)，例如器官移植患者、進(jìn)行化療的腫瘤患者、燒傷患者、AIDS患者、或糖尿病酮癥患者。真菌引起了多種植物疾病，例如但不限于霉變、腐爛、銹病、黑穗病、和枯萎病等。例如，土壤中所帶有的真菌性植物病原體在農(nóng)業(yè)和園藝業(yè)上都造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。具體地，立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)是表現(xiàn)出強(qiáng)致病性的主要的真菌性植物病原體之一，它與多種植物物種及品種的幼苗性疾病及葉疾病例如種子腐爛、根部腐爛、猝倒病、葉和莖的腐爛有關(guān)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。另一個(gè)實(shí)例是辣椒疫霉菌(Phytophthorac即sici)，它是廣泛分布的以及高度損害性的土壤傳播真菌性植物病原體，它造成了辣椒(Capsicuma皿皿mL.)的根部腐爛和根莖腐爛以及葉、果實(shí)和莖的氣生性枯萎病。植物的真菌感染是潮濕氣候中的特殊問(wèn)題，它可以成為谷物儲(chǔ)存中的主要問(wèn)題。植物可以發(fā)育出某些程度的對(duì)致病性真菌的天然抗性，但是現(xiàn)代的生長(zhǎng)方法、收獲和儲(chǔ)存系統(tǒng)時(shí)常給植物病原體提供良好的環(huán)境?？拐婢鷦┌ǘ嘞┭苌?，例如兩性霉素B和結(jié)構(gòu)相關(guān)的化合物如制霉菌素和匹馬菌素。此外，已經(jīng)從多種天然存在的來(lái)源中分離出了抗真菌肽(DeLuccaandWalsh，1999)。但是，仍需要鑒定出更多的具有能在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和工業(yè)相關(guān)應(yīng)用中所使用的抗真菌活性的化合物，以便控制和/或預(yù)防真菌生長(zhǎng)。
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明人以前鑒定了moricin肽家族成員具有抗真菌活性(W02005/080423)。這些以前的研究包括了對(duì)大蠟螟(Galleriamellonella)肽組(p印tidome)的詳細(xì)分析以鑒定蠟螟moricin肽。然而，發(fā)明人還令人吃驚地鑒定了大蠟螟moricin肽，其在結(jié)構(gòu)上與以前描述的moricin相關(guān)肽不同。因此，在本發(fā)明的第一個(gè)部分，提供了基本上純化的肽，其包括選自以下一組的序列i)SEQIDNO:1和SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；ii)與SEQIDNO:1和/或SEQIDNO:3具有至少85%相同性的氨基酸序列；iii)SEQIDNO:5所示的氨基酸序列;iv)與SEQIDNO:5具有至少98%相同性的氨基酸序列；v)SEQIDNO:7或SEQIDNO:9所示的氨基酸序列;vi)與SEQIDNO:7和/或SEQIDNO:9具有至少64%相同性的氨基酸序列;vii)i)-vi)中任一項(xiàng)的生物活性片段；viii)包含i)到viii)中任一項(xiàng)的氨基酸序列的前體，其中所述肽或其片段具有抗真菌的和/或抗細(xì)菌的活性。在第一個(gè)部分的優(yōu)選實(shí)施方式中，有關(guān)的肽與SEQIDNO:1，SEQIDN0:3、SEQIDN0:5、SEQIDN0:7和/或SEQIDNO:9所示的序列具有至少65%、更優(yōu)選地至少70%、更優(yōu)選地至少75%、更優(yōu)選地至少80%、更優(yōu)選地至少85%、更優(yōu)選地至少90%、更優(yōu)選地至少92%、更優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少97%、以及甚至更優(yōu)選地至少99%相同性。優(yōu)選地，SEQIDNO:1的前體是SEQIDNO:2，SEQIDNO:3的前體是SEQIDNO:4，SEQIDNO:5的前體是SEQIDNO:6，SEQIDNO:7的前體是SEQIDNO:8，SEQIDNO:9的前體是SEQIDNO:10。優(yōu)選地，可以從昆蟲(chóng)中純化出所述肽。更優(yōu)選地，可以從鱗翅昆蟲(chóng)中純化出所述肽。更優(yōu)選地，可以從螟蛾科(Pyralidae)的鱗翅昆蟲(chóng)中純化出所述肽。更優(yōu)選地，可以從蠟螟(Galleriasp.)中純化出所述肽。甚至更優(yōu)選地，可以從大蠟螟(Galleriamellone11a)中純化出所述肽。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，可以從已經(jīng)被暴露于真菌或細(xì)菌感染的昆蟲(chóng)中純化出所述肽。對(duì)于鱗翅昆蟲(chóng)而言，優(yōu)選地可以從已經(jīng)暴露于細(xì)菌(例如但不限于大腸桿菌(Escherichiacoli)和/或藤黃微球菌(Micrococcusluteus))的末齡幼蟲(chóng)中純化出所述肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選地，肽具有約4.5kDa到約3.3kDa之間的分子量。更優(yōu)選地，肽具有約3.9kDa或約3.8kDa的分子量。仍在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，肽包括N末端的包括螺旋結(jié)構(gòu)的兩親性區(qū)域(至少相對(duì)于C末端)、C末端的也包括螺旋結(jié)構(gòu)和酸性殘基的疏水性區(qū)域(至少相對(duì)于N末端)、和帶電荷的C末端的尾部。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，與SEQIDN0:1和SEQIDNO:3具有至少85%相同性的肽包括氨基酸序列Xaa工LysXaa2Xaa3Xaa4Xaa5AlalieLysLysGlyGlyXaa6Xaa7lieXaa8Xaa9Xaa工oXaa工iXaa工2Xaa工3Xaa工4Xaa工sXaa工6AlaXaa"Thi*AlaHisXaaigXaa^Xaa^oXaa^iXa&22Xa&23Xa&24Xaa^sXaa犯Xaa^7Xaa^sXaa^gXaa30Xaa31(SEQIDNO:21)。優(yōu)選地，Xaai是Gly、Pro、Ala或缺失，更優(yōu)選地是Gly或缺失；優(yōu)選地，Xaa2是Ile、Val、Ala、Leu、Met或Phe，更優(yōu)選地是lie或Val;Asn;Ser;優(yōu)選地，Xaa3是Pro,Gly，Asn，Gin或His,更優(yōu)選地是Pro或Asn;優(yōu)選地，Xaa4是11e、Val、Ala、Leu、Met或Phe，更優(yōu)選地是lie或Val;優(yōu)選地，Xaa5是Lys、Arg、Gly、Pro、Ala、Asn、Gin或His,更優(yōu)選地是Lys、Gly或優(yōu)選地，Xaa6是Gln、Asn、His、Lys或Arg，優(yōu)選地是Gin或Lys;優(yōu)選地，Xaa7是Ile、Val、Ala、Leu或Gly、更優(yōu)選地是lie或Ala;優(yōu)選地，Xaa8是Gly、Pro、Ala、Lys或Arg，更優(yōu)選地是Gly或Lys;優(yōu)選地，Xaa9是Thr或Ser，更優(yōu)選地是Thr;優(yōu)選地，Xaa1Q是Val、Leu、Ile、Gly、Pro或Ala，更優(yōu)選地是Ala或Gly優(yōu)選地，Xaan是11e、Val、Met、Ala、Phe或Leu，更優(yōu)選地是Leu或Phe優(yōu)選地，Xaa12是Arg、Lys、Gly、Pro或Ala，更優(yōu)選地是Arg、Gly或Lys優(yōu)選地，Xaau是Gly、Pro、Ala、Val、Ile、Leu、Met、或Phe，更優(yōu)選地是Gly或Val;優(yōu)選地，Xaa^是11e、Leu、Val、Ala、Met或Phe，更優(yōu)選地是Val、Ile或Leu;優(yōu)選地，Xaa^是Asn、Gln、His、Gly、Pro、Ala、Ser或Thr，更優(yōu)選地是Asn、Gly或優(yōu)選地，Xaa16是Ile、Val、Ala、Leu或Gly，更優(yōu)選地是Ile或Ala;優(yōu)選地，Xaa17是Ser、Thr、Gly、Pro或Ala，更優(yōu)選地是Ser或Gly;優(yōu)選地，Xaa18是Asp或Glu;優(yōu)選地，Xaa!9是11e、Leu、Val、Ala、Met或Phe，更優(yōu)選lie或Val;優(yōu)選地，Xaa20是Ile，Leu，Val，Ala，Tyr、Trp或Phe，更優(yōu)選地是lie或Tyr;優(yōu)選地，Xaa^是Ser、Thr、Asn、Gln、His、Glu或Asp，更優(yōu)選地是Ser、Asn或Glu;優(yōu)選地，Xaa22是Gln、Asn或His，更優(yōu)選地是Gln或His;優(yōu)選地，Xaa23是Phe、Leu、Val、Ala、lie或Met，更優(yōu)選地是Phe、Val或lie;優(yōu)選地，Xaa24是Lys或Arg;優(yōu)選地，Xaa25是Pro、Gly、Asn、Gln或His，更優(yōu)選地是Pro或Asn;優(yōu)選地，Xaa26是Lys或Arg;優(yōu)選地，Xaa27是Lys、Arg、His、Asn或Gln，更優(yōu)選地是Lys、His、Gln或Arg;優(yōu)選地，Xaa28是Lys、Arg、His、Asn、Gln或缺失，更優(yōu)選地是Lys、His或缺失；優(yōu)選地，Xaa29是Lys、Arg或缺失，更優(yōu)選地是Lys或缺失；優(yōu)選地，Xaa3。是Asn、Gln、His或缺失，更優(yōu)選地是Asn或缺失；優(yōu)選地，Xaa31是His、Asn、Gln或缺失，更優(yōu)選地是His或缺失。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，與SEQIDN0:7和/或SEQIDNO:9具有至少64%相同性的肽包括氨基酸序列LysGlyX叫GlyXaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6GlyGlyLysXaa7IleLysXaa8GlyLeuXaa9Xaa1QXaauGlyXaa12Xaa13Xaa14Xaa15GlyXaa16Xaa17Xaa18TyrXaa19Xaa2。Xaa21Xaa22AsnXaa23Xaa24(SEQIDNO:22)。優(yōu)選地，Xaa丄是Ile，Val，Ala，Leu或Gly，更優(yōu)選Ile。優(yōu)選地，Xaa2是Ser，Lys，Thr或Arg，更優(yōu)選Ser。優(yōu)選地，Xaa3是Ala，Ile，Leu，Val或Gly，更優(yōu)選Ala。6優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，優(yōu)選地，XaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaaXaa4是Ile，Val，Ala，Leu，Met或Phe，更優(yōu)選Leu。Xaa5是Lys或Arg，更優(yōu)選Lys。Xaa6是Lys或Arg。Xaa7是Ile，Val，Leu，Ala，Met或Phe，更優(yōu)選Ile。Xaa8是Gly，His，Ala，Pro，Asn或Gln，更優(yōu)選Gly。Xaa9是Gly，Thr，Ala，Pro或Ser，更優(yōu)選Gly。Xaa10是Ala，Val，Leu，Ile，Gly，Met或Phe，更優(yōu)選Ala。Val，Met，Ala，Phe或Leu，更優(yōu)選Leu。Val，Ile，Leu，Val，Gly，Met或Phe，更優(yōu)選Ala。Gly，Pro，Ala，Val或Leu，更優(yōu)選Ile。Ala，Pro，Val，Leu或Ile，更優(yōu)選Gly。Ala，Ser，Val，Leu，lie或Gly，更優(yōu)選Thr。His或Asn，更優(yōu)選Gln。Glu，Asp，Asn或His，更優(yōu)選Gln。Val，Leu，Ile，Gly，Met或Phe，更優(yōu)選Val。Gln，Arg，Asp，Asn，His或Lys，更優(yōu)選Glu。Asp，Glu，Gln或Asn，更優(yōu)選His。Ser，Ala，Thr，Ile，Leu，Met，Phe或Gly，更優(yōu)選Val。Lys，Asn，His或Arg，更優(yōu)選Gln。Ser，Gln，Lys，Thr，Asn或His，更優(yōu)選Arg。Gly，Asn，His,Ala或Pro，更優(yōu)選Gln。,所述肽(或其片段)具有抗真菌活性。更優(yōu)選地，所述肽具有針對(duì)真菌科的抗真菌活性，所述真菌科選自但不限于赤殼科、格孢腔菌科、球腔菌科、黑痣菌科、小球腔菌科、胡刷菌科。更優(yōu)選地，所述肽具有針對(duì)真菌屬的抗真菌活性，所述真菌屬選自但不限于鐮孢屬(在本領(lǐng)域也稱作赤霉屬)、鏈格孢屬、殼二孢屬、剌盤(pán)孢屬、剌盤(pán)孢屬和曲霉屬。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述肽具有針對(duì)真菌屬的抗真菌活性，所述的感染植物真菌屬選自但不限于鏈格孢屬、殼二孢屬、灰霉菌屬、尾孢屬、剌盤(pán)孢屬、色二孢屬、白粉菌屬、鐮孢屬、頂囊殼屬、長(zhǎng)蠕孢屬、小球腔菌屬、殼球孢菌屬、叢赤殼屬、斜尖狀孢子菌屬、皰霉屬、瘤梗孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、足球菌屬、柄銹菌屬、Puthium、核球殼素、梨孢屬、腐霉屬、絲核菌屬、Scerotium、核盤(pán)菌屬、殼針孢屬、根串株霉、鉤絲殼屬、黑星菌屬、和輪枝孢屬。在更優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述肽具有針對(duì)真菌的抗真菌活性，所述真菌選自禾谷鐮孢(Fusariumgraminearum)、尖抱嫌抱(Fusariumoxysporum)、狂犬殼二抱(Ascochytarabiei)禾口十字花禾斗小球腔菌(L印tosphaeriamaculans)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了與至少一種其它多肽/肽序列融合的本發(fā)明的肽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，至少一種其它多肽/肽選自增強(qiáng)本發(fā)明的肽的穩(wěn)定性的多肽/肽、輔助純化融合蛋白的多肽/肽、輔助細(xì)胞(特別是植物細(xì)胞)分泌本發(fā)明的肽的多肽/肽、使得融合蛋白對(duì)真菌或細(xì)胞無(wú)毒性，但經(jīng)例如蛋白裂解性降解的加工處理后生成本發(fā)明的抗真菌肽的多肽/肽。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，多核苷酸包括選自以下一組的序是Ile，是Ala，是Ile，是Gly，是Thr，是Gln，是Gln，是Ala，是Glu，Xaa^oHis，Xaa21是Val，Xaa22是Gln，Xaa23是Arg，Xaa24是Gln，7列i)SEQIDNO:11-20之一所示的核苷酸序列；ii)編碼本發(fā)明的肽的序列；iii)與至少SEQIDNO:11-14之一具有至少85%相同性的核苷酸序列；iv)與SEQIDNO:15禾P/或SEQIDNO:16具有至少98%相同性的核苷酸序列；v)與至少SEQIDNO:17-20之一具有至少64%相同性的序列；禾口vi)在高嚴(yán)格條件下與(i)到(v)中任一項(xiàng)雜交的序列。優(yōu)選地，多核苷酸編碼具有抗真菌和/或抗細(xì)菌活性的肽。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，相關(guān)的多核苷酸與至少SEQIDNO:11_20之一具有至少65%、更優(yōu)選地至少70%、更優(yōu)選地至少75%、更優(yōu)選地至少80%、更優(yōu)選地至少85%、更優(yōu)選地至少90%、更優(yōu)選地至少92%、更優(yōu)選地至少95%、更優(yōu)選地至少97%、以及更優(yōu)選地至少99%相同性。優(yōu)選地，可以從昆蟲(chóng)中分離出多核苷酸。更優(yōu)選地，可以從鱗翅昆蟲(chóng)中分離出多核苷酸。更優(yōu)選地，可以從螟蛾科的鱗翅昆蟲(chóng)中分離出多核苷酸。更優(yōu)選地，可以從蠟螟中分離出多核苷酸。甚至更優(yōu)選地，可以從大蠟螟中分離出多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方式中，多核苷酸包括SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17或SEQIDN0:19所示的序列。此外，本發(fā)明提供了用于復(fù)制和/或表達(dá)本發(fā)明的多核苷酸的合適載體。因此，也提供了包括本發(fā)明的多核苷酸的載體。載體例如可以是例如質(zhì)粒、病毒、轉(zhuǎn)座子或噬菌體載體，所述載體具有復(fù)制起點(diǎn)、和優(yōu)選地用于表達(dá)多核苷酸的啟動(dòng)子以及任選的啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)子。所述載體可以含有一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記物，例如對(duì)于細(xì)菌質(zhì)粒而言，標(biāo)記物是氨芐西林耐藥基因；或者對(duì)于哺乳動(dòng)物表達(dá)載體是新霉素耐藥基因。載體可以被用于例如體外生成RNA或者被用于轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括本發(fā)明的載體或多核苷酸的宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是動(dòng)物的、酵母菌的、細(xì)菌的或植物的細(xì)胞。更優(yōu)選地，宿主細(xì)胞是植物細(xì)胞。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了用于制備第一方面中的肽的方法，所述方法包括在使得編碼所述肽的多核苷酸表達(dá)的條件下培育本發(fā)明的宿主細(xì)胞，并回收所表達(dá)的肽。本發(fā)明也提供了用本發(fā)明的方法所產(chǎn)生的肽。也提供了與第一方面中的肽特異性結(jié)合的抗體。這些抗體可以被用作在轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)例如轉(zhuǎn)基因植物中的肽生產(chǎn)的標(biāo)記物。另外，這些抗體可以被用于從昆蟲(chóng)裂解物和/或重組表達(dá)系統(tǒng)中純化出本發(fā)明的肽的方法。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了包括本發(fā)明的肽、多核苷酸、載體、抗體或宿主細(xì)胞、以及一種或數(shù)種可接受的載體的組合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，載體是藥用可接受的、獸醫(yī)用可接受的或農(nóng)業(yè)用可接受的載體。在仍另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于殺死真菌、或抑制真菌的生長(zhǎng)和/或繁殖的方法，方法包括將真菌暴露于本發(fā)明的肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員要知道，可以用本領(lǐng)域已知的任一方法將真菌暴露于肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，將真菌暴露于包括肽的組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，將真菌暴露于產(chǎn)肽的宿主細(xì)胞。通過(guò)將本發(fā)明的多核苷酸引入到植物或動(dòng)物體內(nèi)，使得在轉(zhuǎn)基因生物體中生成所述肽，可以生成抗真菌感染的植物和非人的動(dòng)物。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了轉(zhuǎn)基因植物，植物已經(jīng)用本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)化，其中植物產(chǎn)生本發(fā)明的肽。轉(zhuǎn)基因植物可以是任一種植物，但是，植物優(yōu)選地是農(nóng)作物。這些農(nóng)作物實(shí)例包括但不限于小麥、大麥、水稻、鷹嘴豆、豌豆等。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物可以已經(jīng)用所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化，或者是經(jīng)直接轉(zhuǎn)化的植物的子代。更具體地，經(jīng)轉(zhuǎn)化的用于指所述多核苷酸對(duì)于所述植物而言是外來(lái)的。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了控制農(nóng)作物中的真菌感染的方法，該方法包括培育本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物的農(nóng)作物。另外，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了轉(zhuǎn)基因的非人的動(dòng)物，動(dòng)物已經(jīng)用本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)化，其中動(dòng)物產(chǎn)生本發(fā)明的肽。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的方法，方法包括給患者施用本發(fā)明的肽。另外，本發(fā)明提供了本發(fā)明的肽在生產(chǎn)治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的藥物中的用途。本發(fā)明者預(yù)見(jiàn)到本發(fā)明的肽也具有抗細(xì)菌的活性。因此，本發(fā)明也提供了用于殺死細(xì)菌、或抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或繁殖的方法，方法包括將細(xì)菌暴露于本發(fā)明的肽。細(xì)菌可以是革蘭陽(yáng)性或革蘭陰性的細(xì)菌。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知道的，可以用本領(lǐng)域已知的任一方法將細(xì)菌暴露于肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，將細(xì)菌暴露于包括肽的組合物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，將細(xì)菌暴露于產(chǎn)生肽的宿主細(xì)胞。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了控制農(nóng)作物中的細(xì)菌感染的方法，方法包括培育本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物的農(nóng)作物。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防患者體內(nèi)的細(xì)菌感染的方法，方法包括給患者施用本發(fā)明的肽。另外，本發(fā)明提供了本發(fā)明的肽在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防患者體內(nèi)的細(xì)菌感染的藥物中的用途。還提供了包含本發(fā)明的肽，本發(fā)明的多核苷酸，本發(fā)明的載體，本發(fā)明的宿主細(xì)胞，本發(fā)明的抗體和/或本發(fā)明的組合物的試劑盒。本發(fā)明人首先鑒定了與大蠟螟moricinD相關(guān)的肽具有抗真菌活性，諸如來(lái)自家蠶蛾的moricinB1-B8(SEQIDNO44-48)。因此，在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了用于殺死真菌或抑制真菌的生長(zhǎng)或繁殖的方法，方法包括將真菌暴露于一種肽，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列、ii)包含SEQIDNO:49的26到殘基63的氨基酸序列、iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列、iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列、v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了控制農(nóng)作物的真菌感染的方法，方法包括培育轉(zhuǎn)基因植物的農(nóng)作物，其產(chǎn)生包括選自以下一組的序列的肽i)包括SEQIDNO:44-48之一的26到65位殘基的氨基酸序列、ii)包括SEQIDNO:49的26到63位殘基的氨基酸序列、iii)包括SEQIDNO:50-52之一的26到66位殘基的氨基酸序列、iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列、禾口v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。在另一方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的方法，方法包括給患者施用一種肽，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列、ii)包括SEQIDNO:49的26到殘基63的氨基酸序列、iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列、iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列、v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。還提供了肽在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的藥物中的用途，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列、ii)包括SEQIDNO:49的26到殘基63的氨基酸序列、iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列、iv)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。顯而易見(jiàn)的是，本發(fā)明的一個(gè)方面的優(yōu)選的特點(diǎn)和特征都可應(yīng)用于本發(fā)明的多個(gè)其它的方面。在本說(shuō)明書(shū)全文中，用語(yǔ)"包括"或"包含"被理解為表示包括給定的元件、整數(shù)或步驟、或元件、整數(shù)或步驟的組，但不排除其它任何的元件、整數(shù)或步驟、或元件、整數(shù)或步驟的組。此外將用下面的不受限的實(shí)施例的方式并參照附圖描述本發(fā)明。圖1:通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的大蠟螟的Gm-moricinC3基因的核苷酸序列和推定的前前蛋白序列(分別是SEQIDN0:25和6)。所推定的蛋白序列開(kāi)始于骨架內(nèi)的第一個(gè)甲硫氨酸殘基。斜體顯示了預(yù)測(cè)的分泌信號(hào)肽，以及用黑體突出顯示了成熟的Gm-moricinC3肽。用下劃線顯示出通過(guò)對(duì)純化的Gm-moricinC3肽的Edman測(cè)序所得到的肽序列(SEQIDNO:23)。用肽序列下方的單箭頭表明所預(yù)測(cè)的信號(hào)肽的解離(SignalP)位點(diǎn)，以及用雙箭頭表明了預(yù)測(cè)的生成肽的成熟形式的解離位點(diǎn)。圖2.通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的兩個(gè)GmmoricinD基因(Gm-moricinD-SEQIDNO:26;Gm-moricinDl-SEQIDNO:27)的核苷酸序列的序列比對(duì)。黑體顯示了起始和終止密碼子。下劃線顯示了非保守氨基酸，以及用雙下劃線表示造成Gm-moricinDl中氨基酸取代的突變。圖3.通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的兩個(gè)GmmoricinD基因(SEQIDNO:8和SEQIDNO:10)的推定的蛋白序列的序列比對(duì)。下劃線顯示了變體Gm-moricinDl中的非保守氨基酸。用粗體表示Edman降解確定的成熟肽的起始氨基酸。圖4:通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的大蠟螟的Gm-moricinD基因的核苷酸序列和推定的前前蛋白序列(分別是SEQIDN0:26和8)。所推定的蛋白序列開(kāi)始于骨架內(nèi)的第一個(gè)甲硫氨酸殘基。斜體顯示了預(yù)測(cè)的分泌信號(hào)肽，以及用黑體突出顯示了成熟的Gm-moricinD肽。用下劃線顯示出通過(guò)對(duì)純化的Gm-moricinD肽的Edman測(cè)序所得到的肽序列(SEQIDNO:24)。用肽序列下方的單箭頭表明所預(yù)測(cè)的信號(hào)肽的解離(SignalP)位點(diǎn)，以及用雙箭頭表明了預(yù)測(cè)的生成肽的成熟形式的解離位點(diǎn)。圖5:通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的兩個(gè)GmmoricinC4(SEQIDN0:28)和GmmoricinC5(SEQIDNO:29)的核苷酸序列的序列比對(duì)。黑體顯示了起始和終止密碼子。下劃線顯示了Gm-moricinC5的開(kāi)放閱讀框中的不同于Gm-moricinC4的核苷酸，以及用雙下劃線表示造成氨基酸取代的突變。圖6:通過(guò)對(duì)cDNA文庫(kù)的PCR獲得的兩個(gè)GmmoricinC4(SEQIDN0:2)和GmmoricinC5(SEQIDNO:4)基因的推定的蛋白序列的序列比對(duì)。下劃線顯示非保守殘基。預(yù)測(cè)的成熟肽的起始氨基酸用黑體顯示。圖7:來(lái)自大蠟螟的抗真菌肽與來(lái)自其他鱗翅類家蠶蛾的moricin的ClustalW比對(duì)。大蠟螟(對(duì)于Gm-A，B，C1禾口C2，見(jiàn)W02005/080423:本發(fā)明公開(kāi)的Gm_C3，C4，C5和D)，家蠶蛾(Bmmor，P82818)(SEQIDNO:16-A1_NP_001036829，Bm-A2_CH391671，Bm_A3_AADK01025872，Bm_A4_AV402493，Bm—Bl禾卩Bm_B2_CH380045，Bm—B3，B6禾卩B8-CH380569)，斜紋夜蛾(Spodopteralitura)(Slmor，BAC79440)(SEQIDNO:14)，甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)(Semor，AAT38873)(SEQIDN0:57)，煙草天蛾(Manducasexta)(Msmor，AA074637)(SEQIDNO:15)，煙芽夜蛾(Heliothisvirescens)(Hvvir，P83416)(SEQIDNO:17)，全須夜蛾(Hyblae即uera)(Hpmor，AAW21268)(SEQIDNO:58)，Caligoillioneus(CiP1646，CiP1647，CiP1648)，Lonomiaobliqua(CX816233的翻譯)，柞蠶(Antheraeapernyi)(Ap，ABF69030)。序列表說(shuō)明SEQIDNO:1_大蠟螟的Gm-moricinC4。SEQIDNO:2_大蠟螟的前Gm-moricinC4。SEQIDNO:3_大蠟螟的Gm-moricinC5。SEQIDNO:4_大蠟螟的前Gm-moricinC5。SEQIDNO:5_大蠟螟的Gm-moricinC3。SEQIDNO:6_大蠟螟的前Gm-moricinC3。SEQIDNO:7_大蠟螟的Gm-moricinD。SEQIDNO:8_大蠟螟的前Gm-moricinD。SEQIDNO:9_大蠟螟的Gm-moricinD的變體(Dl)。SEQIDNO:10-大蠟螟的前Gm-moricinD的變體(Dl)0167]SEQIDNOll-編碼大蠟螟的Gm-moricinC4的cDNA。0168]SEQIDNO12-編碼大蠟螟的前Gm-moricinC4的cDNA。0169]SEQIDNO13-編碼大蠟螟的Gm-moricinC5的cDNA。0170]SEQIDNO14-編碼大蠟螟的前Gm-moricinC5的cDNA。0171]SEQIDNOis-編碼大蠟螟的Gm-moricinC3的cDNA。0172]SEQIDNOle-編碼大蠟螟的前Gm-moricinC3的cDNA。0173]SEQIDNO17-編碼大蠟螟的Gm-moricinD的cDNA。0174]SEQIDNO18-編碼大蠟螟的前Gm-moricinD的cDNA。0175]SEQIDNO19-編碼大蠟螟的Gm-moricinD的變體(Dl)的cDNA。0176]SEQIDNO20-編碼大蠟螟的前Gm-moricinD的變體(Dl)的cDNA。:0177]SEQIDNO:21-與Gm-moricinC4和Gm-moricinC5相關(guān)的抗真菌肽的共有序列。:0178]SEQIDNO:22-與Gm-moricinD相關(guān)的抗真菌肽的共有序列。:0179]SEQIDNO:23-純化自大蠟螟的Gm-moricinC3的部分序列。:0180]SEQIDNO:24-純化自大蠟螟的Gm-moricinD的部分序列。:0181]SEQIDNO:25-編碼大蠟螟的Gm-moricinC3的全長(zhǎng)cDNA。:0182]SEQIDNO:26-編碼大蠟螟的Gm-moricinD的全長(zhǎng)cDNA。:0183]SEQIDNO:27-編碼大蠟螟的Gm-moricinD變體(Dl)的全長(zhǎng)cDNA。:0184]SEQIDNO:28-編碼大蠟螟的Gm-moricinC4的全長(zhǎng)cDNA。:0185]SEQIDNO:29-編碼大蠟螟的Gm-moricinC5的全長(zhǎng)cDNA。:0186]SEQIDNO:30-分離的Gm-moricinCl的N末端序列。:0187]SEQIDNO:31-家蠶蛾前-moricinAl。:0188]SEQIDNO:32-柞蠶moricin。SEQIDNO:33-煙芽夜蛾moricin。SEQIDNO:34-斜紋夜蛾前-moricin。SEQIDNO:35-甜菜夜蛾前-moricin。SEQIDNO:36-煙草天蛾前-moricin。SEQIDNO:37-CaligoillioneusmoricinCi-P1647。SEQIDNO:38-CaligoillioneusmoricinCi_P1648。SEQIDNO:39-CaligoillioneusmoricinCi_P1646。SEQIDNO:40-大蠟螟前-moricinB。SEQIDNO:41-大蠟螟前-moricinCl。SEQIDNO:42-大蠟螟前ioricinC2。SEQIDNO:43-大蠟螟前-moricinA。SEQIDNO:44-家蠶蛾前-moricinB3。SEQIDNO:45-家蠶蛾前-moricin朋。SEQIDNO:46-家蠶蛾前-moricinB2。SEQIDNO:47-家蠶蛾前-moricinB8。SEQIDNO:48-家蠶蛾前-moricinBl。SEQIDNO:49一Lonomiaobliqim前—moricin。SEQIDNO:50-家蠶蛾前-moricinA4。SEQIDNO:51-家蠶蛾前-moricinA3。SEQIDNO:52-家蠶蛾前-moricinAl。SEQIDNO's53_74_寡核苷酸引物。具體實(shí)施例方式常用技術(shù)和定義除非有具體說(shuō)明，在此所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為具有和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的意義(例如，細(xì)胞培養(yǎng)、微生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)、免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)、真菌學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域)。除非另有說(shuō)明，在本發(fā)明中所用的重組蛋白、細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)和微生物學(xué)技術(shù)都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的標(biāo)準(zhǔn)方法。在文獻(xiàn)中都描述并解釋了這些技術(shù)，文獻(xiàn)來(lái)源例如是J.Perbal，APracticalGuidetoMolecularCloning,JohnWileyandSons(1984);J.S咖brooketal.，MolecularCloning:ALaboratoryMaruml，ColdSpringHarbourLaboratoryPress(1989);T.A.Brown(editor)，EssentialMolecularBiology:APracticalApproach,Volumes1and2，IRLPress(1991);D.M.GloverandB.D.Hames(editors)，DNACloning:APracticalApproach,Volumes1-4，IRLPress(1995andl996);禾口F.M.Ausubeletal.(editors)，CurrentProtocolsinMolecularBiology，GreenePub.AssociatesandWiley-Interscience(1988，包括至lj目前為止的所有改版)，在此通過(guò)引用將其所有內(nèi)容并入本申請(qǐng)。術(shù)語(yǔ)"抗真菌"肽在此指的是具有抗真菌性能的肽，例如抑制真菌細(xì)胞的生長(zhǎng)，或殺死真菌細(xì)胞，或中斷或延遲真菌生命周期中的某個(gè)階段例如孢子發(fā)生、孢子生成和交配。術(shù)語(yǔ)"抗細(xì)菌"肽在此指的是具有抗細(xì)菌性能的肽，例如抑制細(xì)菌細(xì)胞的生長(zhǎng)，或殺死細(xì)菌細(xì)胞，或中斷或延遲細(xì)菌生命周期的階段例如孢子形成、和細(xì)胞分裂。多月太/月太我們用"基本上純化的肽"或"純化的肽"表示通常已經(jīng)與脂類、核酸、其它肽、以及與其天然狀態(tài)相關(guān)的其它污染分子分離開(kāi)了的肽。優(yōu)選地，基本上純化的肽或純化的肽的至少60%、更優(yōu)選地是至少75%、以及更優(yōu)選地是至少90%與其它與之天然相關(guān)的組分是游離的。術(shù)語(yǔ)"多肽"和"肽"通?？梢曰Q使用。但是，術(shù)語(yǔ)"肽"一般用于表示不大的氨基酸鏈，例如長(zhǎng)度為100個(gè)或更短的氨基酸殘基。用GAP(NeedlemanandWunsch，1970)分析(GCG程序)確定出肽的％相同性，其中缺口生成補(bǔ)償=8，以及缺口延伸補(bǔ)償=3。查詢序列的長(zhǎng)度至少為15個(gè)氨基酸，GAP分析在至少15個(gè)氨基酸的區(qū)域上比對(duì)兩個(gè)序列。更優(yōu)選地，查詢序列的長(zhǎng)度至少為50個(gè)氨基酸，GAP分析在至少50個(gè)氨基酸的區(qū)域上比對(duì)兩個(gè)序列。優(yōu)選地，GAP分析比對(duì)兩個(gè)序列的全長(zhǎng)。"生物學(xué)活性"片段在此表示本發(fā)明的肽的一部分，其保留了全長(zhǎng)肽所定義確定的活性。在絕大多數(shù)實(shí)施方式中，該活性是抗真菌活性，但是，在一些實(shí)施方式中，該活性是抗細(xì)菌活性。生物學(xué)活性片段可以是任一長(zhǎng)度，只要它們保留了所定義的活性，但是，在優(yōu)選13的實(shí)施方式中，它們的長(zhǎng)度是至少IO個(gè)氨基酸，更優(yōu)選地是至少15個(gè)氨基酸。通過(guò)往本發(fā)明的核酸中引入合適的核苷酸變化，或者通過(guò)體外合成所需的肽都可以制備出本發(fā)明的肽的氨基酸序列突變體。這些突變體包括例如氨基酸序列中的殘基缺失、插入或取代?？梢赃M(jìn)行缺失、插入和取代的組合以便得到最終的構(gòu)建體，只要終末的肽產(chǎn)物具有所需的特征。利用本領(lǐng)域已知的任一技術(shù)可以制備突變的(改變的)肽。例如，本發(fā)明的多核苷酸可以進(jìn)行體外誘變。這些體外誘變技術(shù)包括將多核苷酸亞克隆到合適載體內(nèi)，將載體轉(zhuǎn)化到"誘變"株例如大腸桿菌XL-1紅(Stratagene)內(nèi)，以及繁殖所轉(zhuǎn)化的細(xì)菌到合適數(shù)目的世代。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的多核苷酸進(jìn)行如Harayama(1998)所廣泛描述的DNA改組技術(shù)。這些DNA改組技術(shù)可以包括與本發(fā)明的那些基因相關(guān)的基因，例如編碼家蠶蛾的moricin的基因(HaraandYamakawa，1995)。利用在此所述的技術(shù)可以容易地篩選源自突變的/改變的DNA的肽產(chǎn)物，以確定出它們是否具有抗真菌和/抗細(xì)菌的活性。在設(shè)計(jì)氨基酸序列突變體中，突變位點(diǎn)的位置和突變的性質(zhì)將依賴于所要修飾的特征。可以單個(gè)地或系列地修飾突變的位置，例如通過(guò)(1)首先用保守氨基酸選擇物進(jìn)行取代，然后根據(jù)所得到的結(jié)果進(jìn)行更重要的選擇；(2)缺失靶殘基；或(3)在定位的位點(diǎn)附近插入其它殘基。氨基酸序列缺失的范圍通常是約1到15個(gè)殘基，更優(yōu)選地是約1到10個(gè)殘基以及一般是約1到5個(gè)連續(xù)殘基。取代突變體是在肽分子中去除至少一個(gè)氨基酸殘基并在該位置所插入的不同的殘基。與取代誘變最為相關(guān)的位點(diǎn)包括被鑒定為活性位點(diǎn)的位點(diǎn)。其它有關(guān)的位點(diǎn)是這樣一些位點(diǎn)，在所述位點(diǎn)上從各種菌株或物種中所得到的特定殘基都相同。這些位置對(duì)于生物學(xué)活性可能是重要的。對(duì)于這些位點(diǎn)，特別是處于具有至少三個(gè)其它的相同保守位點(diǎn)的序列內(nèi)的位點(diǎn)，優(yōu)選地以相對(duì)保守的方式取代。在題為"取代示例"的表1中顯示了這些保守取代。表1:取代示例<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>原殘基取代示例Glu(E)aspGly(G)pro，H是(H)asn^glnIle(I)leu^val^alaLeu(L)ile;val;met;ala;pheLys(K)Met(M)leu^phePhe(F)leu^val^alaPro(P)glySer(S)thrThr(T)Trp(W)tyrTyr(Y)trp^pheVal(V)ile;leu;met;phe，ala具體地，先前已經(jīng)顯示moricin具有兩個(gè)a螺旋結(jié)構(gòu)(Hemmietal，2002)?？紤]到本發(fā)明的肽與moricin樣肽的親緣關(guān)系(見(jiàn)圖7)，可能的是，相似的結(jié)構(gòu)對(duì)于保持本發(fā)明的肽的抗真菌活性也是重要的。因此，當(dāng)設(shè)計(jì)例如SEQIDN0:4的突變體時(shí)，本領(lǐng)域人員利用特殊氨基酸的化學(xué)知識(shí)以及聯(lián)合已知的推定肽四級(jí)結(jié)構(gòu)的方法，可以容易地產(chǎn)生具有一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸變異的肽(與SEQIDNO:1相比較)，其具有抗真菌活性。此外，如果需要，可以將非天然的氨基酸或化學(xué)的氨基酸類似物作為取代物或添加物引入到本發(fā)明的肽中。這些氨基酸包括，但不限于，常用氨基酸的D異構(gòu)體、2，4-二氨基丁酸、a-氨基異丁酸、4_氨基丁酸、2_氨基丁酸、6_氨基己酸、2_氨基異丁酸、3_氨基丙酸、鳥(niǎo)氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、羥基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、P-丙氨酸、氟氨基酸、設(shè)計(jì)者氨基酸(designeraminoacids)例如P_甲基氨基酸、Ca-甲基氨基酸、Na-甲基氨基酸、和常15用的氨基酸類似物。本發(fā)明的范圍也包括本發(fā)明的肽在合成的過(guò)程中或之后被生物素化、芐基化、糖基化、乙酰基化、磷酸化、酰胺化、已知保護(hù)/封閉基團(tuán)的衍生化、蛋白裂解性解離、與抗體分子或其它細(xì)胞配體相連接等所不同地修飾。這些修飾可以作用為增加本發(fā)明的肽的穩(wěn)定性和/或生物學(xué)活性。用各種方法都可以生成本發(fā)明的肽，包括生產(chǎn)和回收天然肽、生產(chǎn)和回收重組肽、以及化學(xué)合成肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)培養(yǎng)能在足以生成肽的條件下表達(dá)肽的細(xì)胞，并回收肽可以生成本發(fā)明的分離的肽。用于培養(yǎng)的優(yōu)選細(xì)胞是本發(fā)明的重組細(xì)胞。有效的培養(yǎng)條件包括，但不限于，有效的培養(yǎng)基、生物反應(yīng)器、溫度、pH值和使得肽生產(chǎn)的氧氣條件。有效的培養(yǎng)基指的是其中細(xì)胞被培養(yǎng)產(chǎn)生本發(fā)明的肽的任一培養(yǎng)基。這些培養(yǎng)基通常包括具有可同化的碳、氮和磷源、和合適的鹽、礦物質(zhì)、金屬和其它養(yǎng)分例如維生素的水性培養(yǎng)基。本發(fā)明的細(xì)胞可以被培養(yǎng)在傳統(tǒng)的發(fā)酵生物反應(yīng)器、搖瓶、試管、微量滴定皿、和Petri培養(yǎng)板中?？梢栽谶m合于重組細(xì)胞的溫度、PH值和氧飽和度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。這些培養(yǎng)條件都是在本領(lǐng)域一般技術(shù)人員的專業(yè)知識(shí)之內(nèi)。多核苷酸我們用"分離的多核苷酸"表示通常已經(jīng)從在自然狀態(tài)下與其相關(guān)的或相連的多核苷酸序列中分離出來(lái)的多核苷酸。優(yōu)選地，分離多核苷酸的至少60%、更優(yōu)選地是至少75%、以及更優(yōu)選地是至少90%與其它與之天然相關(guān)的組分是游離的。此外，術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"在此可以與術(shù)語(yǔ)"核酸分子"互換使用。用GAP(NeedlemanandWunsch，1970)分析(GCG程序)確定出多核苷酸的％相同性，其中缺口生成補(bǔ)償=8，以及缺口延伸補(bǔ)償=3。查詢序列的長(zhǎng)度至少為45個(gè)核苷酸，GAP分析在至少45個(gè)核苷酸的區(qū)域上比對(duì)兩個(gè)序列。更優(yōu)選地，查詢序列的長(zhǎng)度至少為150個(gè)核苷酸，GAP分析在至少150個(gè)核苷酸的區(qū)域上比對(duì)兩個(gè)序列。優(yōu)選地，GAP分析比對(duì)兩個(gè)序列的全長(zhǎng)。在高度嚴(yán)格的條件下，本發(fā)明的多核苷酸可以與編碼本發(fā)明的肽的多核苷酸選擇性地雜交。此外，本發(fā)明的寡核苷酸具有在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明的多核苷酸選擇性雜交的序列。高嚴(yán)格條件在此是下面的條件(l)采用低離子強(qiáng)度和高溫進(jìn)行洗滌，例如0.015MNaC1/0.0015擰檬酸鈉/0.1%Na2S04，50°C;(2)在雜交期間采用去污齊U，例如甲酰胺例如50%(體積/體積)甲酰胺和O.1%牛血清白蛋白、0.1%Fico11、0.1%聚乙烯吡咯酮、50mM磷酸鈉緩沖液(pH6.5)、和750mMNaCl、75mM檸檬酸鈉、42"C;或者(3)采用50%甲酰胺、5xSCC(O.75MNaC1、0.075M擰檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、5xDenhardt溶液、經(jīng)超聲處理過(guò)的鮭精DNA(50g/m1)、0.1%SDS和10%硫酸葡聚糖、42"(0.2xSCC和0.1XSDS)。當(dāng)與天然存在的分子比較時(shí)，本發(fā)明的多核苷酸可以具有一種或多種突變，所述突變可以是核苷酸殘基的缺失、插入或取代。突變體可以是天然存在的(即從天然來(lái)源中分離到的)或合成的(例如如上述的通過(guò)對(duì)核酸進(jìn)行定向誘變或DNA改造)。因此，顯而易見(jiàn)的是本發(fā)明的多核苷酸可以是天然存在的或重組的。本發(fā)明的寡核苷酸可以是RNA、DNA或它們的衍生物。這些寡核苷酸的最小的大小是在寡核苷酸和本發(fā)明的核酸分子上的互補(bǔ)序列之間形成穩(wěn)定的雜交體所需的大小。本發(fā)明包括可以被用作例如鑒定核酸分子的探針的寡核苷酸，或用作擴(kuò)增本發(fā)明的核酸分子的引物的寡核苷酸。重組載體本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式包括重組載體，其包括至少一個(gè)本發(fā)明的分離的多核苷酸分子，所述多核苷酸分子被插入到任一能將多核苷酸分子轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞內(nèi)的載體內(nèi)。這樣一種載體含有異源的多核苷酸序列，即沒(méi)有天然地發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明的多核苷酸分子相鄰的多核苷酸序列，或優(yōu)選地源自不同于本發(fā)明的多核苷酸所來(lái)源的物種。載體可以是RNA或DNA，或者是原核的或真核的，以及通常是轉(zhuǎn)座子(例如在US5，792，294中所述的轉(zhuǎn)座子)、病毒或質(zhì)粒。—種類型的重組載體包括與表達(dá)載體可操縱地連接的多核苷酸分子。詞語(yǔ)"可操縱地連接"指的是多核苷酸分子以使得分子在被轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞內(nèi)后能被表達(dá)的方式插入到表達(dá)載體內(nèi)。表達(dá)載體在此是能轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞以及能影響特異多核苷酸分子的表達(dá)的DNA或RNA載體。優(yōu)選地，表達(dá)載體也能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。表達(dá)載體可以是原核的或真核的，以及通常是病毒或質(zhì)粒。本發(fā)明的表達(dá)載體包括任一在本發(fā)明的重組細(xì)胞內(nèi)具有功能(即指導(dǎo)基因表達(dá))的載體，所述重組細(xì)胞包括細(xì)菌、真菌、體內(nèi)寄生蟲(chóng)、節(jié)肢動(dòng)物、動(dòng)物、和植物細(xì)胞。本發(fā)明的特別優(yōu)選的表達(dá)載體可以指導(dǎo)植物細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)。本發(fā)明的載體也可以被用于在無(wú)細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn)肽，這些系統(tǒng)在本領(lǐng)域是公知的。具體而言，本發(fā)明的表達(dá)載體含有調(diào)節(jié)序列例如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列、翻譯調(diào)節(jié)序列、復(fù)制起點(diǎn)、和其它的與重組細(xì)胞相兼容的并能調(diào)節(jié)本發(fā)明的多核苷酸分子的表達(dá)的調(diào)控序列。具體而言，本發(fā)明的重組分子包括轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列。轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列是控制轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)、延伸和終止的序列。特別重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列是控制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)的序列，例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、操縱子和抑制子序列。合適的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列包括任一能在至少一種本發(fā)明的重組細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列。各種這樣的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是熟知的。優(yōu)選的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列包括那些在細(xì)菌、酵母菌、節(jié)肢動(dòng)物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的序列，其包括但不限于tac、lac、trp、trc、oxy~pro、omp/lpp、rrnB、入卩筮菌體、卩筮菌體T7、T71ac、噬菌體T3、噬菌體SP6、噬菌體SP01、金屬硫蛋白、a-配對(duì)因子、畢赤酵母醇氧化酶、甲病毒亞基因組啟動(dòng)子(例如辛德比斯病毒亞基因組啟動(dòng)子)、抗生素耐藥基因、桿狀病毒、玉米夜蛾昆蟲(chóng)病毒、痘苗病毒、皰疹病毒、熊痘病毒、其它痘病毒、腺病毒、巨細(xì)胞病毒(例如中間早期啟動(dòng)子)、猿猴病毒40、逆轉(zhuǎn)錄病毒、肌動(dòng)蛋白、逆轉(zhuǎn)錄病毒的長(zhǎng)末端重復(fù)、Rous肉瘤病毒、熱休克蛋白、磷酸和硝酸轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列以及其它能控制原核或真核細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)的序列。特別優(yōu)選的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列是能積極指導(dǎo)植物內(nèi)的轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子，或者是組成型的或階段和/或組織特異的，這依賴于植物或其部分的用途。這些植物啟動(dòng)子包括，但不限于，表現(xiàn)為組成型表達(dá)的啟動(dòng)子例如花椰菜花葉病毒(CaMV)的35S啟動(dòng)子；用于葉特異性表達(dá)的啟動(dòng)子例如二磷酸核酮糖羧化酶小亞基基因的啟動(dòng)子；用于根特異性表達(dá)的啟動(dòng)子例如來(lái)自谷氨酰胺合酶基因的啟動(dòng)子；用于種子特異性表達(dá)的啟動(dòng)子例如歐洲油菜(Brassican即us)的cruciferinA啟動(dòng)子；用于脈管特異性表達(dá)的啟動(dòng)子例如馬鈴薯的I型patatin啟動(dòng)子以及用于果實(shí)特異性表達(dá)的啟動(dòng)子例如番茄的聚半乳糖醛酸酶(PG)啟動(dòng)子。本發(fā)明的重組分子也可以(a)含有分泌信號(hào)(即信號(hào)片段的核酸序列)，以便使得17細(xì)胞能分泌所表達(dá)的本發(fā)明的肽，這就產(chǎn)生肽和/或(b)含有導(dǎo)致本發(fā)明的核酸分子表達(dá)為融合蛋白的融合序列。合適的信號(hào)片段的實(shí)例包括任一能指導(dǎo)本發(fā)明的肽的分泌的信號(hào)片段。優(yōu)選的信號(hào)片段包括，但不限于，組織纖溶酶原激活劑(t-PA)、干擾素、白介素、生長(zhǎng)因子、病毒的被膜糖蛋白信號(hào)片段、煙草的nectarin信號(hào)肽(US5，939，288)、煙草的延伸蛋白信號(hào)、大豆的油質(zhì)蛋白油狀體結(jié)合蛋白信號(hào)、擬南芥的空泡樣堿性甲殼酶信號(hào)肽、以及本發(fā)明的天然的信號(hào)序列。另外，本發(fā)明的核酸分子可以與融合信號(hào)相連接，所述融合信號(hào)能指導(dǎo)所表達(dá)的肽進(jìn)入到蛋白體內(nèi)，例如泛素融合片段。重組分子也可以含有位于本發(fā)明的核酸分子的核酸序列的周圍和/或之內(nèi)的插入的和/或未翻譯的序列。宿主細(xì)胞本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式包括重組細(xì)胞，其包括經(jīng)本發(fā)明的一種或多種重組分子所轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。用任一可以將多核苷酸插入到細(xì)胞內(nèi)的方法可以完成多核苷酸向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化技術(shù)包括，但不限于，轉(zhuǎn)染、電穿孔、微注射、脂染、吸附、原生質(zhì)體融合。重組細(xì)胞可以保持為單個(gè)細(xì)胞的生物體或者可以生長(zhǎng)成組織、器官或多細(xì)胞的生物體。本發(fā)明的被轉(zhuǎn)化的多核苷酸分子可以仍然保留在染色體外或者可以以保留所述多核苷酸分子被表達(dá)的能力的方式被整合到所轉(zhuǎn)化的(即重組的)細(xì)胞的染色體內(nèi)。盡管在此所討論的肽具有抗真菌的或抗細(xì)菌的活性，可以從細(xì)菌的或真菌的宿主細(xì)胞中獲得合適量的本發(fā)明的重組肽。更具體而言，肽可以被生成為融合蛋白，可以在從重組宿主細(xì)胞中回收到融合蛋白后將其加工處理。Hara和Yamakawa(1996)描述了這樣一種系統(tǒng)的實(shí)例，其中從大腸桿菌中產(chǎn)生作為融合蛋白的B.morimoricin。從重組宿主細(xì)胞中收集融合蛋白，并用氰或0-鄰氧碘苯甲酸將其裂解以便釋放出生物學(xué)活性moricin肽?？梢匀菀椎卦O(shè)計(jì)出相似的系統(tǒng)，以便在細(xì)菌或真菌的宿主細(xì)胞內(nèi)生成本發(fā)明的肽。進(jìn)行轉(zhuǎn)化的合適的宿主細(xì)胞包括任一可以用本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。本發(fā)明的宿主細(xì)胞可以是那些能夠內(nèi)源性地(即天然地)產(chǎn)生本發(fā)明的肽或者可以在被本發(fā)明的至少一種多核苷酸轉(zhuǎn)化之后產(chǎn)生這樣的肽的細(xì)胞。本發(fā)明的宿主細(xì)胞可以是任一能生成至少一種本發(fā)明蛋白的細(xì)胞，并包括細(xì)菌的、真菌的(包括酵母菌)、寄生蟲(chóng)的、節(jié)肢動(dòng)物的、動(dòng)物的和植物的細(xì)胞。宿主細(xì)胞的實(shí)例包括沙門(mén)氏菌、埃希氏菌、桿菌、李斯特菌、酵母菌、夜蛾、分支桿菌、蛾、BHK(幼侖倉(cāng)鼠腎)細(xì)胞、MDCK細(xì)胞、CRFK細(xì)胞、CV-1細(xì)胞、C0S(例如C0S-7)細(xì)胞、和Vero細(xì)胞。宿主細(xì)胞的其它實(shí)例是大腸桿菌包括大腸桿菌K-12衍生物、傷寒沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌包括減毒株、草地夜蛾、粉紋夜蛾、BHK細(xì)胞、MDCK細(xì)胞、CRFK細(xì)胞、CV-1細(xì)胞、COS細(xì)胞、Vero細(xì)胞、以及非致癌性的成肌細(xì)胞G8細(xì)胞(例如ATCCCRL1246)。其它的合適的哺乳動(dòng)物細(xì)胞宿主包括其它的腎細(xì)胞株、其它成纖維母細(xì)胞細(xì)胞株(例如人、小鼠或雞胚胎的成纖維母細(xì)胞細(xì)胞株)、骨髓瘤細(xì)胞株、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、小鼠NIH/3T3細(xì)胞、LMTK細(xì)胞和/或HeLa細(xì)胞。特別優(yōu)選的宿主細(xì)胞是植物細(xì)胞例如那些從DeutscheSamml皿gvonMikroorganismen皿dZellkulturenGmbH(GermanCollectionofMicroorganismsandCellCultures)得至U的植物細(xì)胞。通過(guò)處理例如宿主細(xì)胞內(nèi)的多核苷酸分子的拷貝數(shù)目、這些多核苷酸分子轉(zhuǎn)錄的效率、所形成的轉(zhuǎn)錄物的翻譯的效率、和翻譯后修飾的效率，可以用重組DNA技術(shù)提高所轉(zhuǎn)化的多核苷酸分子的表達(dá)。用于增加本發(fā)明的多核苷酸分子的表達(dá)的重組技術(shù)包括，但不限于，多核苷酸分子與高拷貝數(shù)目的質(zhì)粒的可操縱地連接、多核苷酸分子向一個(gè)或多個(gè)宿主細(xì)胞染色體內(nèi)的整合、向質(zhì)粒添加載體穩(wěn)定性序列、對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)信號(hào)(例如啟動(dòng)子、操縱子、增強(qiáng)子)的取代或修飾、對(duì)翻譯調(diào)節(jié)信號(hào)(例如核糖體結(jié)合位點(diǎn)、Shine-Dalgarno序列)的取代或修飾、對(duì)對(duì)應(yīng)于宿主的密碼子選擇的本發(fā)明的多核苷酸分子的修飾、以及轉(zhuǎn)錄去穩(wěn)定序列的缺失。轉(zhuǎn)基因植物術(shù)語(yǔ)"植物"指的是整個(gè)植物、植物器官(例如葉、莖、根等)、種子、和植物細(xì)胞等。被預(yù)期用于本發(fā)明實(shí)踐的植物包括單子葉植物和雙子葉植物。優(yōu)選地，轉(zhuǎn)基因植物是商業(yè)上有用的農(nóng)作物植物。靶農(nóng)作物包括但不限于下面的種類谷類(小麥、大麥、黑麥、燕麥、水稻、高梁和相關(guān)農(nóng)作物)；甜菜(甜菜和飼料甜菜)；梨果、核果和軟果(蘋(píng)果、梨、梅、桃、杏仁、櫻桃、草莓、覆盆子和黑莓)；豆科植物(豆、扁豆、豌豆、大豆)；油類植物(油菜、芥末、罌粟、橄欖、向日葵、椰子、蓖麻油植物、可可豆、落花生)；黃瓜類植物(葫蘆、黃瓜、甜瓜)；纖維植物(棉花、亞麻、大麻、黃麻)；柑橘類水果(橙子、檸檬、葡萄柚、蜜桔)；蔬菜(菠菜、萵苣、蘆筍、甘藍(lán)、胡蘿卜、洋蔥、番茄、馬鈴薯、辣椒)；樟科(酪梨、肉桂、樟腦)；或植物例如玉米、煙草、堅(jiān)果、咖啡、甘蔗、茶、藤本植物、蛇麻花、覆草皮、香蕉、和天然橡膠植物，以及觀賞植物(花卉、灌木、闊葉樹(shù)和常綠植物例如針葉樹(shù))。特別優(yōu)選的農(nóng)作物包括豌豆、鷹嘴豆、小麥和大麥。在本發(fā)明的上下文中所定義的轉(zhuǎn)基因植物包括植物(以及所述植物的一部分和細(xì)胞)和它們的子代，所述植物已經(jīng)被重組技術(shù)所遺傳修飾，造成了在所需植物或植物器官內(nèi)產(chǎn)生至少一種本發(fā)明的肽。利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)可以生成轉(zhuǎn)基因植物，例如在A.Slateretal.，PlantBiotechnology_TheGeneticManipulationofPlants,OxfordUniversityPress(2003)，禾口P.ChristouandH.Klee，HandbookofPlantBiotechnology,JohnWileyandSons(2004)中所述的技術(shù)?？梢栽谵D(zhuǎn)基因植物的所有發(fā)育階段中組成型地表達(dá)本發(fā)明的多核苷酸。根據(jù)植物或植物器官的用途，可以以階段特異性的方式表達(dá)肽。此外，根據(jù)植物可以易感于真菌感染的特殊用途，可以組織特異地表達(dá)多核苷酸。在本發(fā)明中可以使用已知或已經(jīng)發(fā)現(xiàn)能引起在植物中表達(dá)編碼相關(guān)肽的基因的調(diào)節(jié)序列。對(duì)所用的調(diào)節(jié)序列的選擇依賴于相關(guān)的靶植物和/或靶器官。這些調(diào)節(jié)序列可以從植物或植物病毒中獲得，或者可以被化學(xué)合成。這些調(diào)節(jié)序列對(duì)于本領(lǐng)域人員是公知的。其它的調(diào)節(jié)序列(例如終止序列和多腺苷酸信號(hào))包括任一在植物中發(fā)揮這些作用的序列，對(duì)這些序列的選擇對(duì)于本領(lǐng)域人員是顯而易見(jiàn)的。這些序列的一個(gè)實(shí)例是根瘤土壤桿菌的opaline合酶基因?？梢缘玫揭恍┯糜趯⒑芯幋a相關(guān)肽的核酸序列的表達(dá)構(gòu)建體引入到靶植物內(nèi)的技術(shù)。這些技術(shù)包括但不限于用鈣/聚乙烯乙二醇法轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體、電穿孔和微注射或(包被的)顆粒粒子轟擊。除了這些所謂的直接DNA轉(zhuǎn)化方法外，包括載體的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)也被廣泛應(yīng)用，例如病毒的和細(xì)菌的載體(例如來(lái)自土壤桿菌屬的載體)。在選擇和/或篩選之后，利用本領(lǐng)域已知的方法可以將已經(jīng)被轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體、細(xì)胞或植物的一部分再生成整個(gè)植物。對(duì)于轉(zhuǎn)化和/或再生技術(shù)的選擇在本發(fā)明中并不重要。在Banzet等(2002)和EP798381中描述了表達(dá)抗真菌肽的轉(zhuǎn)基因植物的實(shí)例。在每種情況中，重組抗真菌肽的表達(dá)造成了轉(zhuǎn)基因植物可耐受真菌的感染。在這些文檔中所羅列出的相似的方法可以被用于生產(chǎn)本發(fā)明的肽，所述肽賦予了轉(zhuǎn)基因植物對(duì)真菌感染的抗性。轉(zhuǎn)基因的非人動(dòng)物用于生成轉(zhuǎn)基因植物的技術(shù)在本領(lǐng)域是公知的。關(guān)于這個(gè)方面的有用的普通教科書(shū)是Houdebine，Transgenicanimals-GenerationandUse(HarwoodAcademic,1997)。例如可以將異源的DNA引入到受精的哺乳動(dòng)物卵內(nèi)。例如，用微注射、磷酸鈣介導(dǎo)的沉淀、脂質(zhì)體融合、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染或其它方法可以轉(zhuǎn)化全能或多能干細(xì)胞，然后將所轉(zhuǎn)化的細(xì)胞引入到胚胎內(nèi)，然后胚胎發(fā)育成了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。在高度優(yōu)選的方法中，用含有所需DNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染發(fā)育中的胚胎，從受感染的胚胎中生成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。但是，在最為優(yōu)選的方法中，合適的DNA優(yōu)選地在單細(xì)胞階段被共注射到胚胎的生殖核或細(xì)胞漿內(nèi)，以及使得胚胎發(fā)育成成熟的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。另一種用于生成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法包括用標(biāo)準(zhǔn)方法將核酸微注射到前核階段的卵內(nèi)。然后在將其轉(zhuǎn)移到假妊娠受體的輸卵管之前培育受注射的卵。也可以用核轉(zhuǎn)移技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。利用這個(gè)方法，用整合了受調(diào)節(jié)序列控制下的相關(guān)的結(jié)合區(qū)或結(jié)合伴侶的編碼序列的質(zhì)粒穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染來(lái)自供體動(dòng)物的纖維母細(xì)胞。然后，將穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子與去核的卵母細(xì)胞融合，將其培育并轉(zhuǎn)移到雌性的受體內(nèi)。組合物本發(fā)明的組合物包括"可接受的載體"?？山邮艿妮d體優(yōu)選地是所處理的動(dòng)物、植物、植物或動(dòng)物材料、環(huán)境(包括油狀和水樣本)所能耐受的任何物質(zhì)。這些可接受的載體的實(shí)例包括水、鹽水、林格液、葡萄糖溶液、Hank溶液、和其它水樣的生理平衡的鹽溶液。也可以使用非水性的載體例如不揮發(fā)性油、芝麻油、油酸乙酯、或甘油三酯。藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的抗真菌肽。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法可以容易地確定出抗真菌肽的治療有效量。藥物組合物可以被制劑成含有治療有效量的抗真菌肽以及適用于本領(lǐng)域已知的施用途徑(局部、牙齦、靜脈內(nèi)、霧化吸入、局部注射)的藥用可接受載體。對(duì)于農(nóng)業(yè)應(yīng)用，組合物包括治療有效量的本發(fā)明的肽以及適用于所治療的生物體(例如植物)的農(nóng)業(yè)可接受的載體。短語(yǔ)"藥用可接受載體"指的是當(dāng)施用給動(dòng)物(特別是哺乳動(dòng)物，更特別是人類)時(shí)不會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏的、有毒的或其它的不良反應(yīng)的分子單體和組合物。藥用可接受載體或稀釋劑的有用實(shí)例包括但不限于不影響本發(fā)明的肽的活性的溶劑、分散介質(zhì)、包被劑、穩(wěn)定劑、保護(hù)性膠體、黏附劑、濃縮劑、觸變劑、滲透劑、螯合劑、和等張劑和延遲吸收劑。通過(guò)使用包被例如卵磷脂，通過(guò)保持所需的顆粒大小(對(duì)于分散而言)以及通過(guò)應(yīng)用表面活性劑可以保持正確的流動(dòng)性。更為普遍的是，本發(fā)明的肽可以與對(duì)應(yīng)于有用的制劑技術(shù)的任一無(wú)毒的固體或液體添加劑組合。本發(fā)明的液體組合物包括水溶性的濃縮劑、乳化的濃縮劑、乳劑、濃縮的懸浮液、噴霧劑、可濕性粉末(或用于噴霧的粉末)、糊劑和凝膠?？梢允褂米鳛橛糜谌龇?dusting)的粉末和顆粒的形式的本發(fā)明的肽，具體的是通過(guò)對(duì)顆粒載體的擠壓、壓縮、浸滲或通過(guò)對(duì)粉末、和泡騰片或錠劑的顆粒化所得到的粉末和顆粒。20表面活性劑也可以構(gòu)成各種組合物中的一種組分。表面活性劑可以是等張或非等張類型的乳化劑、分散劑或濕化劑或這些表面活性劑的混合物。實(shí)例包括，但不限于，聚丙烯酸鹽、木素磺酸酸鹽、苯酚磺酸或萘磺酸酸鹽、氧化乙烷與脂肪醇或脂肪酸或脂肪胺的縮聚物、取代酚(具體的是烷基酚或芳香酚)、硫化琥珀酸酯的鹽、牛磺酸衍生物(具體的是烷基?；撬?、醇或酚的聚氧乙烯的磷酯、多元醇的脂肪酸酯、含有上述化合物的硫酸、磺酸和磷酸功能集團(tuán)的衍生物。根據(jù)所處理的特殊病變和所選擇的導(dǎo)向方法，可以制劑并全身或局部施用這些試劑。合適的途徑可以包括例如口服、直腸、經(jīng)皮、陰道、經(jīng)粘膜、或腸道施用；腸外給藥包括肌肉內(nèi)、皮下、或髓內(nèi)注射、以及鞘內(nèi)、靜脈內(nèi)、或腹腔內(nèi)注射。對(duì)于農(nóng)業(yè)組合物，可以使用天然的或合成的、有機(jī)的或無(wú)機(jī)的物質(zhì)，化合物可以與這些物質(zhì)組合，以便有助于其應(yīng)用于植物、種子或土壤。因此，該載體一般是惰性的，并且它應(yīng)當(dāng)是農(nóng)業(yè)可用的，特別是可用于所處理的植物。該載體可以是固體(粘土、天然的或合成的硅酸鹽、二氧化硅、樹(shù)脂、蠟、固體肥料等)或者是液體(水、醇，特別是丁醇等)。通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)的農(nóng)業(yè)技術(shù)例如噴霧法將抗真菌肽應(yīng)用于植物部分或土壤或其它圍繞在植物的根部周圍的生長(zhǎng)介質(zhì)或者應(yīng)用于植物的種子(在其被播種之前)可以實(shí)現(xiàn)植物病原體對(duì)抗真菌肽的暴露。所述肽可以以組合物的形式被應(yīng)用于植物或植物生長(zhǎng)介質(zhì)，所述組合物包括與固體或液體稀釋劑以及任選的各種佐劑例如表面活性劑混合在一起的肽。固體組合物可以是分散性粉末、顆粒、或谷粒的形式。本發(fā)明的組合物也可以被用于多種產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括但不限于手消毒皂、低敏的護(hù)手霜、洗發(fā)劑、洗面奶、洗衣用品、洗碗用品(包括barglassdip)、浴室洗滌用品、牙齒用品(例如漱口水、牙科粘膠、唾液注射濾器、水過(guò)濾器)以及去臭產(chǎn)品。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是能將本發(fā)明的肽緩慢地釋放到動(dòng)物、植物、動(dòng)物或植物材料、或環(huán)境(包括土壤和水樣品)中的可控釋劑型。控釋劑型在此包括控釋載體中的本發(fā)明的肽。合適的控釋載體包括，但不限于，生物兼容的聚合物、其它聚合的基質(zhì)、膠囊、微膠囊、微粒、彈丸制劑、滲透泵、彌散裝置、脂質(zhì)體、脂質(zhì)球、和經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。優(yōu)選的控釋劑型是生物可降解的(即生物可蝕解的)。優(yōu)選地在范圍為約1到約12個(gè)月的時(shí)間段內(nèi)釋放出制劑。本發(fā)明的優(yōu)選的控釋制劑優(yōu)選地能影響治療至少約1個(gè)月，更優(yōu)選地至少約3個(gè)月，甚至更優(yōu)選地至少約6個(gè)月，甚至更優(yōu)選地至少約9個(gè)月，以及甚至更優(yōu)選地至少約12個(gè)月。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知道的，經(jīng)驗(yàn)上可以容易地確定出組合物中的肽、載體、或宿主細(xì)胞的有效濃度。US6，331，522提供了包括抗真菌肽的組合物的實(shí)例。技術(shù)人員可以容易地生成包括本發(fā)明的肽的相似的組合物?？贵w本發(fā)明也提供了本發(fā)明的肽或其片段的單克隆的或多克隆的抗體。本發(fā)明還提供了用于生產(chǎn)本發(fā)明的肽的抗體的方法。本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"抗體"包括完整分子以及其片段，諸如Fab，F(xiàn)(ab')2，和Fv，其能結(jié)合表位決定簇。這些抗體片段保持選擇性結(jié)合本發(fā)明的肽的一些能力，其實(shí)例包括但不限于以下片段(l)Fab，所述片段保持抗體分子的單價(jià)抗原結(jié)合片段，能通過(guò)用木瓜蛋白酶消化完整抗體來(lái)產(chǎn)生完整輕鏈和一個(gè)重鏈的一部分；(2)Fab'，這種抗體分子的片段可通過(guò)利用木瓜蛋白酶處理完整抗體，然后進(jìn)行還原以產(chǎn)生完整輕鏈和部分重鏈來(lái)獲得；每個(gè)抗體分子可獲得兩個(gè)Fab'片段；(3)(Fab')2，這種抗體片段可通過(guò)利用木瓜蛋白酶處理完整抗體而無(wú)需隨后的還原來(lái)獲得；F(ab)2是兩個(gè)二硫鍵連接在一起的兩個(gè)Fab'片段的二聚體；(4)Fv，定義為包含表達(dá)為兩條鏈的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的遺傳改造的片段；(5)單鏈抗體(〃SCA〃)，定義為包含通過(guò)適宜多肽接頭連接為遺傳融合的單鏈分子的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的遺傳改造的分子；所述單鏈抗體可為多聚體諸如二價(jià)抗體，三價(jià)抗體和四價(jià)抗體等的形式，其可以是或不是多特異性的(見(jiàn)，例如，W094/07921和WO98/44001)，以及(6)單結(jié)構(gòu)域抗體，通常是缺乏輕鏈的可變重鏈結(jié)構(gòu)域。此外，所述抗體及其片段可為人源化的抗體，例如EP-A-239400中所述的那些。術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合"指的是抗體與本發(fā)明的至少一種蛋白/肽結(jié)合但不與其它已知的moricin樣肽例如W02005/080423所述的肽結(jié)合的能力。術(shù)語(yǔ)"表位"在此指的是抗體所結(jié)合的本發(fā)明的肽的一個(gè)區(qū)域。可以給動(dòng)物施用表位以生成抗表位的抗體。但是，本發(fā)明的抗體優(yōu)選地與整個(gè)肽背景中的表位區(qū)域特異性^口口。如果需要多克隆抗體，用免疫原性的肽免疫接種所選的哺乳動(dòng)物(例如小鼠、兔、山羊、馬等)。根據(jù)已知的方法，收集并處理被免疫動(dòng)物的血清。如果含有多克隆抗體的血清含有針對(duì)其它抗原的抗體，通過(guò)免疫親和色譜法可以純化多克隆抗體。用于生產(chǎn)和加工多克隆抗血清的技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的。為了生成這些抗體，本發(fā)明也提供了被半抗原于用作動(dòng)物中的免疫原的另一種肽的本發(fā)明的肽或其片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地生成針對(duì)本發(fā)明的肽的單克隆抗體。用雜交瘤制備單克隆抗體的常用方法學(xué)是公知的。通過(guò)細(xì)胞融合，以及通過(guò)其它技術(shù)例如致癌性DNA對(duì)B淋巴細(xì)胞的定向轉(zhuǎn)化、或EpsteinBarr病毒的轉(zhuǎn)染也可以生成永生的產(chǎn)抗體的細(xì)胞株?？梢院Y選單克隆抗體譜的各種性能例如同種型和表位親和力。另一種技術(shù)包括篩選噬菌體展示文庫(kù)，其中例如噬菌體在其被包被的表面上表達(dá)具有大量互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的scFv片段。該技術(shù)在本領(lǐng)域是公知的。本發(fā)明的抗體可以與固體支持物結(jié)合，和/或可以與合適的試劑、對(duì)照、說(shuō)明書(shū)等等一起包裝成合適容器中的試劑盒。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體是被可檢測(cè)標(biāo)記的。容許直接檢測(cè)抗體結(jié)合的示例的可檢測(cè)標(biāo)記包括放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)、染料、磁珠、化學(xué)發(fā)光劑、膠狀顆粒等。容許間接檢測(cè)結(jié)合的標(biāo)記的實(shí)例包括酶，其中底物可以提供顯色的或熒光的產(chǎn)物。其它的示例的可檢測(cè)標(biāo)記包括共價(jià)結(jié)合的酶，其能在加入合適的底物后提供可檢測(cè)的產(chǎn)物信號(hào)。用于綴合的適合的酶的實(shí)例包括辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、蘋(píng)果酸脫氫酶等。如果不能商品化獲得，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)可以容易地生成這些抗體_酶綴合物。更多的示例的可檢測(cè)標(biāo)記包括生物素(其以高親和力與抗生物素蛋白或抗生物素蛋白鏈菌素結(jié)合)、熒光染料(例如22藻膽蛋白、藻紅蛋白和別藻藍(lán)蛋白、螢光素和Texas紅)，它們可以與熒光激活細(xì)胞分選器、半抗原等一起使用。優(yōu)選地，可檢測(cè)標(biāo)記(例如生物素)容許用于平板發(fā)光計(jì)中的直接檢測(cè)。在本領(lǐng)域已知的檢測(cè)本發(fā)明的肽的技術(shù)中可以使用這些標(biāo)記抗體。用途本發(fā)明的肽在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)、食品防腐、家居和工業(yè)領(lǐng)域有著多種用途，其中它可用于減輕和/或預(yù)防真菌或細(xì)菌的感染。例如，本發(fā)明的肽可以被用于治療真菌感染、和細(xì)菌感染(例如S.mutans、P.aeruginosa或P.gingivalis感染)的藥物組合物。能適合于肽治療的陰道、尿道、粘膜、呼吸道、皮膚、耳、口、或眼部的真菌或細(xì)菌感染包括，但不限于白色假絲酵母、伴放線放線菌、粘性放線菌、福氏擬桿菌、脆弱擬桿菌、纖細(xì)擬桿菌、解脲擬桿菌、簡(jiǎn)要彎曲桿菌、直腸彎曲桿菌、昭和彎曲桿菌、生痰彎曲桿菌、牙齦二氧化碳嗜纖維菌、黃褐二氧化碳嗜纖維菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌、溶組織梭狀芽孢桿菌、嚙蝕艾肯氏菌、糾纏真桿菌、具核梭桿菌、牙槽梭桿菌、微小消化鏈球菌、牙髓卟啉單胞菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普雷沃菌、變黑普里沃菌、短小棒狀桿菌、銅綠假單胞菌、有害月形單胞菌、金黃色葡萄球菌、星座鏈球菌、格氏鏈球菌、中間鏈球菌、口腔鏈球菌、肺炎鏈球菌、血鏈球菌、齒垢密螺旋體、食果膠密螺旋體、索氏密螺旋體、小韋榮(氏)球菌、禾口Wolinellasuccinogenes。對(duì)于農(nóng)業(yè)應(yīng)用而言，可以用抗真菌肽提高農(nóng)作物在植物生命期內(nèi)或在收獲后農(nóng)作物保存中的抗病性或耐病性。抑制了暴露于肽的病原體的生長(zhǎng)?？拐婢目梢韵呀?jīng)生長(zhǎng)于植物上的病原體或者可以保護(hù)植物避免未來(lái)的病原體攻擊。病原體可以是任一生長(zhǎng)在植物內(nèi)或生長(zhǎng)在植物周圍的真菌。提高抗性被定義為與野生型植物相比較，植物或收獲后的農(nóng)作物增強(qiáng)了對(duì)真菌性病原體的耐受性?？剐钥梢允菑寞熜У妮p微減低到完全消除，使得植物不受病原體存在的影響。因此，本發(fā)明的肽也可以被用于治療和/或預(yù)防植物的真菌感染。這些植物真菌包括，但不限于，那些選自以下屬的屬鏈格孢屬、殼二孢屬、葡萄孢屬、尾孢屬、剌盤(pán)孢屬、色二孢屬、白粉菌屬、鐮孢屬、小球腔菌屬、頂囊殼屬、長(zhǎng)蠕孢屬、殼球孢菌屬、叢赤殼屬、斜尖狀孢子菌屬、皰霉屬、瘤梗孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、足球菌屬、柄銹菌屬、Puthium、核球殼素、梨孢屬、腐霉屬、絲核菌屬、Scerotium、核盤(pán)菌屬、殼針孢屬、根串株霉、鉤絲殼屬、黑星菌屬、和輪枝孢屬。可以被本發(fā)明的肽所治療的植物真菌感染的特殊實(shí)例包括谷類植物的小麥白粉病、葫蘆的菊科白粉病和瓜類白粉病、蘋(píng)果的蘋(píng)果白粉病、葡萄藤的葡萄白粉病、棉花、蘋(píng)果、水稻和草皮的絲核菌屬感染、谷類植物和甘蔗的黑粉菌屬感染、蘋(píng)果的蘋(píng)果黑星菌、谷類植物的長(zhǎng)蠕孢菌屬感染、小麥的穎枯病菌、大麥的Rhynchosporiumsecalis感染、草莓、番茄和葡萄的灰霉病菌感染(灰霉)、落花生的花生褐斑病菌感染、或各種農(nóng)作物的其它斜尖狀孢子菌屬感染、小麥和大麥的Pseudocercosporellaherpotrichoides感染、水稻的稻瘟霉感染、馬鈴薯和番茄的晚疫病菌感染、各種植物中的鐮孢(霉)屬(例如尖孢鐮孢)和輪枝孢屬感染、葡萄的霜霉病、水果和蔬菜的鏈格孢屬感染、黃瓜的霜霉病、香蕉的黑條葉斑病菌感染、蕓苔的小球腔菌屬感染、以及各種農(nóng)作物的Colleotrichum感染。本發(fā)明的抗真菌肽也可以用作防腐劑，以便保持食物制品例如奶酪、面包、蛋糕、肉、魚(yú)、餞、動(dòng)物食品等的新鮮度和儲(chǔ)存期?？拐婢囊部梢员挥糜诳刮⑸锏氖称钒b例如涂覆于塑料或聚合物或結(jié)合于可食用的涂層或膜。例如，肽包被或膜可以含有足夠量的用于這些產(chǎn)品例如奶酪、糖、毛織物等的抗真菌肽。實(shí)施例實(shí)施例1:肽純化材料和方法昆蟲(chóng)用人工食譜喂養(yǎng)大蠟螟(蠟螟)。給末齡期幼蟲(chóng)注射10i！1各含有近106個(gè)細(xì)胞的大腸桿菌和藤黃微球菌的水。作為對(duì)照，給一些幼蟲(chóng)注射10yl磷酸緩沖液。在通過(guò)去除腹足提取血淋巴之前，將幼蟲(chóng)在室溫下放置48個(gè)小時(shí)。在冰上將血淋巴收集于含有一些苯硫脲結(jié)晶的試管內(nèi)，離心5分鐘以便去除細(xì)胞碎片，并將其冷凍在-80°C。抗真菌和抗細(xì)菌活性檢測(cè)利用抑制帶板檢測(cè)法測(cè)試樣品的活性。對(duì)于細(xì)菌(大腸桿菌和藤黃微球菌)，用營(yíng)養(yǎng)瓊脂(0xoid)以及近5Xl(f個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞密度制備培養(yǎng)板。對(duì)于真菌，用含有0.8%瓊脂糖的YPD肉湯(10g/L酵母提取液、10g/L蛋白胨、40g/LD-葡萄糖)以及近l(f個(gè)孢子/ml的孢子密度制備培養(yǎng)板。為了測(cè)試活性，將2iU相關(guān)樣品點(diǎn)斑到板的表面上，生物體在合適的條件(對(duì)于細(xì)菌是37t:下過(guò)夜，對(duì)于真菌是室溫下l-3天)下生長(zhǎng)，直到可以檢測(cè)出是否存在清除帶。被測(cè)試的真菌是禾谷鐮孢、尖孢鐮孢、鏈格孢、狂犬殼二孢、膠孢炭疽菌、十字花科小球腔菌以及黑曲霉。肽純化用C18固相提取分別處理兩種來(lái)自不同的大蠟螟免疫接種的粗制血淋巴。用等體積的O.1%三氟乙酸(TFA)稀釋融化的血淋巴(1.8ml或4.8ml)，并在冰上搖晃30-45分鐘。將樣品裝到C18固相萃取柱(Maxi-Clean，300或900mgcartridges,Alltech)上。用20%乙腈/0.05%TFA洗滌，并用60%乙腈/0.05%TFA洗脫。在Speedvac(Savant)中干燥洗脫的樣品，并重懸于100iU水中。利用上述的板檢測(cè)法測(cè)試樣品抗大腸桿菌、藤黃微球菌和各種真菌的活性。重懸的血淋巴樣品裝入到在檢測(cè)225或215nm的吸光度的SystemGoldHPLC(Beckman)上運(yùn)行的JupiterC18、5um、300A、250X10mmsemi-pr印柱(Phe謹(jǐn)e證)中。所述的柱經(jīng)溶劑A(2X乙腈、0.065%TFA)平衡的并用梯度為0_70%溶劑B(95%乙腈、0.05%TFA)在70分鐘內(nèi)以5ml/min的速度進(jìn)行洗脫。所有層析步驟的的活性部分通過(guò)如下方法選擇在Speedvac中干燥每5ml部分中的30-500ii1，重懸于10ii1水，并測(cè)試抗禾谷鐮孢的活性。來(lái)自semi-pr印柱的活性部分通過(guò)反相層析的數(shù)個(gè)步驟進(jìn)一步純化。對(duì)于Gm-moricinD而言，用等體積的0.05%TFA稀釋活性部分，并裝入到HPLC中的經(jīng)10X溶劑B平衡的ProsphereC18、5iim、300A、250X4.6mm分析柱(Alltech)中。在60分鐘內(nèi)，用以lml/min速度流動(dòng)的梯度為15-55%B洗脫柱。活性部分隨后用等體積的0.05%TFA稀釋相關(guān)部分，并裝入到iiRPCC2/C18、3iim、100X2.lmm分析柱(AmershamBiosciences)中。該柱用在SMART系統(tǒng)(AmershamBiosciences)中運(yùn)行的溶劑A平衡，并用以200ii1/min流動(dòng)的梯度為0-100%溶劑B洗滌柱子，同時(shí)在215、254和280nm處進(jìn)行Gm-moricinC3以與Gm-moricinD相似的方式純化，但來(lái)自C2/C18柱的部分直接針對(duì)禾谷鐮孢檢測(cè)。肽鑒定利用0.5ill樣品加上0.5ill基質(zhì)，用VoyagerEliteMALDI-T0F質(zhì)譜法(Pers印tiveBiosystems)分析相關(guān)部分。對(duì)于線性模式譜，基質(zhì)是芥子酸以及標(biāo)準(zhǔn)物是cecropinA和肌紅蛋白的混合物，對(duì)于反射模式譜，基質(zhì)是a-氰基_4_羥基苯丙烯酸以及標(biāo)準(zhǔn)物是牛血清白蛋白的胰蛋白酶消化物。對(duì)于N末端的氨基酸測(cè)序，在纖維玻璃盤(pán)上干燥純化的肽，格局產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，利用ProciseModel492蛋白測(cè)序儀(AppliedBiosystems)進(jìn)行Edman降解。結(jié)果和討論用C18固相提取和C18半制備色譜法處理兩批不同的粗制血淋巴。經(jīng)C18固相提取部分純化后所得到的樣品顯示出抗大腸桿菌、藤黃微球菌、禾谷鐮孢、鏈格孢菌、狂犬殼二孢、膠孢炭疽菌、十字花科小球腔菌以及黑曲霉的活性。對(duì)樣品在C18半制備柱上的純化產(chǎn)生在近25-40%乙腈之間所洗脫出的部分，該部分顯示出了抗測(cè)試生物體禾谷鐮孢的活性。在C18分析柱中進(jìn)一步地純化在不同的梯度位置上所得到的兩個(gè)部分。對(duì)于Gm-moricinC3，C18分析柱上的純化產(chǎn)生兩個(gè)表現(xiàn)出抗禾谷鐮孢活性的部分。匯集這些部分并在C2/C18柱上進(jìn)行進(jìn)一步的純化，產(chǎn)生三個(gè)具有抗禾谷鐮孢活性的部分。其中一個(gè)具有經(jīng)質(zhì)譜法確定出的足夠高純化的部分被用于經(jīng)Edman降解的測(cè)序。對(duì)于Gm-moricinD，C18分析柱上的純化產(chǎn)生兩個(gè)表現(xiàn)出抗禾谷鐮孢活性的部分。一個(gè)部分在C2/C18柱上進(jìn)行進(jìn)一步的純化，產(chǎn)生兩個(gè)具有抗禾谷鐮孢活性的部分。其中一個(gè)具有經(jīng)質(zhì)譜法確定出的足夠高純化的部分被用于經(jīng)Edman降解的測(cè)序。MALDI質(zhì)譜法和Edman測(cè)序被用于鑒定純化的肽。Gm-moricinC3具有的表觀分子量為3923.0Da以及部分氨基酸序列是KVPIGAIKKGGKIIKKGLGVIGAAGTAHEVYS(SEQIDNO:23)。注意與Gm-moricinC3共純化的Gm-moricinCl(SEQIDNO:41的殘基26-63;分子量3932.3Da)。Gm-moricinD的表觀分子量為3832.8Da，以及部分氨基酸序列是KGIGSALKKGGKIIKGGLGALGAIGTGQQVYE(SEQIDNO:24)。利用BLASTP對(duì)非冗余數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行短配對(duì)的搜索發(fā)現(xiàn)這兩種肽與來(lái)自家蠶和其他鱗翅昆蟲(chóng)的已知肽moricin具有一些相似性。實(shí)施例2:對(duì)編碼大蠟螟moricin樣肽的cDNA的鑒定總RNA和多聚(A)+RNA的制備在注射大腸桿菌和藤黃微球菌細(xì)胞懸浮液之后24小時(shí)，從大蠟螟中切割下脂肪體組織。將已經(jīng)在冰上冷卻至少30分鐘的幼蟲(chóng)釘在Sylgard皿中的冰冷PBS下，并沿背中線下的縱向切口打開(kāi)。用精細(xì)的制表鑷去除腸道并收集脂肪體。將切割下的脂肪體簡(jiǎn)單地點(diǎn)吸于吸附組織上，并且在放置于液氮中的微量離心管中進(jìn)行速凍。將凍存的組織儲(chǔ)存在-80°C。用Trizol試劑(Astralscientific)分離出總RNA。簡(jiǎn)單地，將近500mg冷凍的脂肪體組織重懸于lmLTrizol試劑中，并在Polytron組織勻漿器中進(jìn)行勻漿。利用mRNA純化試劑盒(AmershamBiosciences)，通過(guò)兩輪寡(dT)-纖維素旋轉(zhuǎn)柱層析的選擇分離出多腺苷酸化的RNA。根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，將近lmg總RNA結(jié)合于寡(dT)-纖維素旋轉(zhuǎn)柱，洗滌，并在lmL低鹽緩沖液中進(jìn)行洗脫。如上所述，將所洗脫的RNA結(jié)合于第二個(gè)旋轉(zhuǎn)柱上，洗滌并洗脫，終體積為lmL。通過(guò)加入終濃度為0.1M的乙酸鈉以及200ill乙醇沉淀出mRNA。通過(guò)離心回收mRNA，并將其重懸于5y1DEPC處理過(guò)的水中。cDNA文庫(kù)的制備利用LambdaUniZ即cDNA合成和克隆系統(tǒng)(Stratagene)，從近5ygmRNA中制備出cDNA文庫(kù)。將純化的cDNA(近20ng)與1yg載體DNA連接，并用Gigapack⑧HIGold包裝提取物(Amershamscientific)進(jìn)行包裝，以便生成滴度為每mL5乂105個(gè)菌斑形成單位的cDNA文庫(kù)。在cDNA文庫(kù)中通過(guò)PCR鑒定Gm_moricinC4，Gm_moricinC5和Gm-moricinDGm-moricinC3-C5和Gm-moricinD的寡核苷酸序列通過(guò)PCR利用兼并引物然后是利用特異性引物的PCR從cDNA文庫(kù)擴(kuò)增序列來(lái)確定。引物序列顯示于表2。表2.用于分離大蠟螟moricin基因的引物序列<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>引物名稱引物序列GmDutr35'-TATTTGAGACAACTGGCTG-3'(SEQIDN0:68)GmDint55'-CTCAAGAAAGGCGGCAAAAT-3'(SEQIDN0:69)GmDR55'-ACCGATGGCTCCTAATGCT-3'(SEQIDN0:70)GmCint55'-GGTCAAGCCGACCCTAAGGTGCC-3'(SEQIDN0:71)GmCint35'-GGCTATATACTTCAGTGCGCTGT-3'(SEQIDN0:72)GmDint3ex5'-ATAGTCGAGAAATGGCAAAAT-3'(SEQIDN0:73)GmDint5ex5'-CTGCGCTATCGGCATACACTA-3'(SEQIDN0:74)對(duì)于Gm-moricinD，從所述肽的部分氨基酸序列設(shè)計(jì)的兼并引物(GmD-l，GmD-R)首先用于通過(guò)PCR從cDNA擴(kuò)增產(chǎn)物。從該序列(GmDF3，GmDR5)設(shè)計(jì)的引物與載體引物一起用于巢式PCR中以確定所述基因的5'和3'區(qū)。隨后設(shè)計(jì)第三組特異于5'和3'未翻譯區(qū)(GmDutr5，GmDutr3)的引物并用于確定完整開(kāi)放讀框。Gm-moricinC3是利用巢式PCR在cDNA文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)的，其中利用搜索內(nèi)含子(見(jiàn)下文)時(shí)獲得的序列設(shè)計(jì)的特異性引物對(duì)(GmC3R5，GmC3R5r;GmC3F3，GmC3F3r)以及載體引物來(lái)確定所述基因的5'和3'區(qū)。隨后利用特異于5'和3'非翻譯區(qū)(GmC3utr5，GmC3utr3)的引物通過(guò)PCR獲得全長(zhǎng)序列。Gm-moricinC4和C5通過(guò)巢式PCR利用從以前鑒定的PCR產(chǎn)物的非翻譯區(qū)(GmC3ulf，GmC3u2r;GmC3ulf，GmC3u4r;GmC3ul3f)設(shè)計(jì)的引物以及載體引物發(fā)現(xiàn)。為了檢測(cè)Gm-moricin基因中的內(nèi)含子，基因組DNA利用QuantumPr印AquapureGenomicDNA試劑盒(Bio-Rad)分離自大蠟螟。設(shè)計(jì)為與基因的5'和3'區(qū)域退火的引物對(duì)(GmCint5，GmCint3;GmDint5，GmDR5)用于對(duì)基因組DNA或cDNA文庫(kù)池的兩步PCR反應(yīng)中。反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)純化，連接入pGEM-TEasy(Promega)。對(duì)于Gm-moricinD，額外的內(nèi)部引物(GmDint5ex，GmDint3ex)用于獲得完整的內(nèi)含子序列。結(jié)果和討論對(duì)于Gm-moricinC3和Gm-moricinD，Edman降解確定的部分氨基酸序列與分離自大蠟螟fatbodycDNA文庫(kù)的翻譯的核苷酸序列的部分相同(圖1-4)。這允許從相應(yīng)的核苷酸序列提取這些肽的預(yù)測(cè)的開(kāi)放讀框。對(duì)于Gm-moricinC4和Gm-moricinC5，核苷酸序列通過(guò)PCR從大蠟螟fatbodycDNA文庫(kù)獲得(圖5)。氨基酸序列從這些核苷酸序列的預(yù)測(cè)的開(kāi)放讀框翻譯。內(nèi)含子數(shù)據(jù)的分析對(duì)于區(qū)分各種moricin的獨(dú)立基因和等位基因變體是重要的。單個(gè)內(nèi)含子通過(guò)PCR對(duì)于Gm-moricinC4(347bp)，Gm-moricinC5(336bp)，和Gm-moricinD(1072bp)鑒別，但不能對(duì)于Gm-moricinC3鑒別。所述內(nèi)含子都在成熟氨基酸序列的相同位置出現(xiàn)，即殘基14之后。Gm-moricinC4和Gm-moricinC5的內(nèi)含子有17個(gè)核27苷酸不同。核苷酸、氨基酸以及內(nèi)含子序列與質(zhì)譜數(shù)據(jù)的相關(guān)性允許鑒定Gm-moricinC3(圖1)，Gm-moricinC4，Gm-moricinC5(圖5和6)以及Gm-moricinD(圖2-4)的完整序列。全長(zhǎng)肽的長(zhǎng)度為63個(gè)殘基，并且大蠟螟中的成熟肽于裂解后在殘基26開(kāi)始(在序列ADP或AEP之后)。該過(guò)程與SignalP的預(yù)測(cè)以及其他昆蟲(chóng)抗微生物肽的知識(shí)(Boman，etal.，1989)一致。所有目前已知的moricin的ClustalW比對(duì)顯示于圖7?；诔墒祀男蛄械谋葘?duì)的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建(圖7)表明Gm-moricinCl-C5肽都緊密相關(guān)。Gm-moricinD與L.obliquamoricin轉(zhuǎn)錄物以及家蠶蛾moricinBl-B8肽簇聚(cluster)。對(duì)于Gm-moricinC3，沒(méi)有鑒定等位基因變體。最接近的已知Gm-moricinC3相關(guān)物是Gm—moricinCI禾口Gm—mo:ricinC2。成熟Gm—mo:ricinC3與Gm—moricinCI禾口Gm—mo:ricinC2分別具有97%和92%相同性。對(duì)于Gm-moricinC4和Gm-moricinC5，核苷酸序列相差4個(gè)堿基(2%)(圖5)，成熟氨基酸序列相同(圖6)。然而，Gm-moricinC4和Gm-moricinC5由于其內(nèi)含子相差17個(gè)核苷酸而被分類為不同的基因。盡管沒(méi)有作為肽而分離，通過(guò)對(duì)大蠟螟血淋巴中的蛋白酶片段的LC/MS檢測(cè)顯示成熟Gm-moricinC4和Gm-moricinC5序列得以表達(dá)。成熟Gm-moricinC4和Gm-moricinC5與Gm-moricinCl84%相同，與Gm-moricinC281%相同，并且由于在成熟序列中的位置16具有蘇氨酸殘基而在moricin家族中是獨(dú)特的(圖7)。對(duì)于Gm-moricinD，PCR實(shí)驗(yàn)鑒定了兩個(gè)不同的序列，其可能是等位基因變體(圖2和3)。這些序列之一符合實(shí)驗(yàn)確定的氨基酸序列(Gm-moricinD)，另一個(gè)序列(Gm-moricinDl)由于僅僅5個(gè)核苷酸取代而不同(2.6%)。這些差異中的兩個(gè)在肽開(kāi)放讀框中并導(dǎo)致兩個(gè)改變的氨基酸(V14L，K34R)(圖3)。成熟Gm-moricinD與Gm-moricinCl和Gm-moricinC2分別具有57和63%相同性。除了大蠟螟，Gm-moricinD與未標(biāo)注的L.obliqua轉(zhuǎn)錄物的翻譯序列具有57%相同性，并與來(lái)自B.mori的moricinBl-B8肽具有44-47%相同性(Cheng，etal.，2006)。L.obliquamoricin僅僅被鑒定為EST并且沒(méi)有作為肽而研究。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)家蠶蛾moricinBl-B8肽表達(dá)的證據(jù)，無(wú)論是通過(guò)RT-PCR(Cheng，etal.，2006)或是EST文庫(kù)中轉(zhuǎn)錄物的存在。在包含L.obliqua轉(zhuǎn)錄物和家蠶蛾moricinBl-B8肽的moricin亞組中，Gm-moricinD是第一個(gè)被分離并顯示具有任何活性，具體是抗真菌活性的肽。實(shí)施例3:合成的大蠟螟Gm-moricinD的抗各種真菌的活性利用標(biāo)準(zhǔn)的肽合成技術(shù)，用Ausp印(Melbourne,Australia)合成moricinD(SEQIDNO:7)。測(cè)試了該肽抗細(xì)菌大腸桿菌和藤黃微球菌，以及抗如在實(shí)施例1中所述的真菌禾谷鐮孢、鏈格孢、狂犬殼二孢和十字花科小球腔菌的孢子的活性。所測(cè)試的濃度是O.1、1、10和100iiM以及1iig/ill。Gm-moricinD顯示在1yg/對(duì)大腸桿菌和藤黃微球菌沒(méi)有活性，但對(duì)禾谷鐮孢的孢子在10M水平，以及對(duì)十字花科小球腔菌、鏈格孢和狂犬殼二孢的孢子在在100iiM水平顯示活性。對(duì)Gm-moricinD的抗真菌活性的顯示是以下亞組中的moricin肽的任何功能作用的第一證據(jù)Gm-moricinD，家蠶蛾moricinBl_B8和L.obliquamoricin。實(shí)施例4:合成大蠟螟Gm-moricinC3和Gm-moricinC4/C5的抗各種真菌的活性Gm-moricinC3(SEQIDNO:5)和Gm—moricinC4/C5(SEQIDNO:l禾PSEQIDNO:3)通過(guò)Ausp印(Melbourne,Australia)利用標(biāo)準(zhǔn)肽合成技術(shù)來(lái)合成。檢測(cè)所述肽抗大腸桿菌和藤黃微球菌的活性以及抗實(shí)施例1中所述的真菌禾谷鐮孢、鏈格孢和十字花科小球腔菌的孢子的活性。所測(cè)試的濃度是0.I，I，IOand100iiM，和liig/iil。Gm-moricinC3顯示在100M對(duì)大腸桿菌和藤黃微球菌以及鏈格孢和十字花科小球腔菌的孢子具有活性，以及在10iiM水平對(duì)禾谷鐮孢的孢子具有活性。Gm-moricinC4/C5肽在100yM顯示抗革蘭氏陰性菌大腸桿菌的活性，但在達(dá)1Pg/yl的受試濃度對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌藤黃微球菌沒(méi)有活性。Gm-moricinC4/C5肽對(duì)與真菌鏈格孢和十字花科小球腔菌的孢子在100yM具有活性，但是對(duì)于真菌禾谷鐮孢的孢子沒(méi)有活性。實(shí)施例5:抗真菌肽在擬南芥中的表達(dá)用大蠟螟Gm-moricinD基因?qū)M南芥進(jìn)行土壤桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化將編碼Gm-moricinD的DNA克隆到土壤桿菌轉(zhuǎn)移載體p277(來(lái)自CSIROPlantIndustry,Canberra,Australia)內(nèi)。通過(guò)將pART7的Notl片段插入到pART27內(nèi)構(gòu)建出了該載體(Gleave，1992)。P277載體含有用于植物表達(dá)的CaMV35S啟動(dòng)子和OCS終止子，用于抗生素選擇的標(biāo)記物、以及植物轉(zhuǎn)化所需的序列。選出Gm-moricinDDNA構(gòu)建體，將其轉(zhuǎn)化到擬南芥內(nèi)無(wú)信號(hào)肽的成熟Gm-moricinD、包括其天然信號(hào)肽的全長(zhǎng)Gm-moricinD、以及由擬南芥空泡堿性殼質(zhì)酶信號(hào)肽以及成熟Gm-moricinD序列構(gòu)成的融合物。通過(guò)PCR合成這些構(gòu)建體，并將其直接克隆到P277轉(zhuǎn)移質(zhì)粒內(nèi)。利用三親本雜交法實(shí)現(xiàn)了土壤桿菌GV3101的轉(zhuǎn)化。這包括在非選擇性的LB板上共同劃線培養(yǎng)根瘤農(nóng)桿菌GV3101、帶有輔助質(zhì)粒RK2013的大腸桿菌、和帶有所需重組p277質(zhì)粒的大腸桿菌。2『C下的過(guò)夜孵育產(chǎn)生混合培養(yǎng)物，收集并將其稀釋，劃線鋪板到LB板上，這就選擇出了帶有p277重組質(zhì)粒的根瘤農(nóng)桿菌GV3101。用標(biāo)準(zhǔn)的方法在23t:、每天日照18個(gè)小時(shí)的條件下培養(yǎng)擬南芥植物。通過(guò)花浸漬進(jìn)行對(duì)擬南芥植物的轉(zhuǎn)化。植物生長(zhǎng)到3-5周大，其中多個(gè)花莖上將出現(xiàn)處于不同發(fā)育階段的花。將轉(zhuǎn)化根瘤農(nóng)桿菌GV3101的過(guò)夜培養(yǎng)物碎片化并將其重懸在含有濕化劑Silwet-77的5X蔗糖中。將花浸漬到細(xì)菌懸浮液中，并用擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)將其充分浸濕。將植物包裝在塑料膜內(nèi)，并將其在試驗(yàn)臺(tái)面上室溫下放置過(guò)夜，在開(kāi)包之前將其放回到恒溫在2rC的植物生長(zhǎng)箱內(nèi)。在l-2周后重復(fù)浸漬，以便增加轉(zhuǎn)化種子的數(shù)目。在浸漬后3-4周收集種子，對(duì)于每種生態(tài)型，將其種子被膜干燥一段適宜長(zhǎng)的時(shí)間，然后將種子滅菌并在含有選擇性抗生素和抗真菌劑的Noble瓊脂板上發(fā)芽。將陽(yáng)性的轉(zhuǎn)化體移到Arasystem罐(Betatech)內(nèi)，在Araconsystemsleeves中生長(zhǎng)到成熟，并仔細(xì)地收集種子。用PCR篩選轉(zhuǎn)化的擬南芥植物(Tl代)，以便確認(rèn)重組基因的存在。利用Extract-N-Amp植物PCR和Extract-N-AmpReagent試劑盒(Sigma)從經(jīng)全長(zhǎng)Gm-moricinD構(gòu)建體所轉(zhuǎn)化的植物的葉子中提取出基因組DNA。利用特異于Gm-moricinD基因的引物。將Tl幼苗移植并經(jīng)兩代培育成種子，以便最終分離出純合的T3種子。然后可以篩選T3植物是否增加了對(duì)真菌性疾病的抗性(見(jiàn)下文)。T3植物也可通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)篩選來(lái)證實(shí)重組基因的表達(dá)。利用全長(zhǎng)Gm-moricinD構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的植物被隨機(jī)選出用于分析。來(lái)自這些植物的葉子被快速冷凍并在液氮中利用研缽和研棒磨碎。利用RNeasyPlant試劑盒(Qiagen)分離RNA。從RNA利用iScriptcDNA合成試劑盒(Bio-Rad)制備cDNA。利用以下物質(zhì)進(jìn)行PCR:1illcDNA，重組Taq聚合酶(Invitrogen)，退火溫度54°C，Gm-moricinD特異性引物。3y1每種25y1PCR反應(yīng)顯示于1.2%瓊脂糖凝膠上。利用尖孢鐮孢的接種方案從J.Manners(CSIROPlantIndustry,Queensland,Australia)得至lj了已知X寸于擬南芥為致病性的尖孢鐮孢株。將真菌分離株可保持在1/2強(qiáng)度的PotatoDextroseAgar(PDA)上。從保持儲(chǔ)存液中取出核心，并將其用于接種500mlPotatoDextroseBroth(PDB)。在搖晃器中28t:下孵育培育瓶7天。在用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行定量之前，經(jīng)Miracloth排空接種物。用無(wú)菌的蒸餾水稀釋孢子，將其用于接種擬南芥株。培育一些生態(tài)型的擬南芥進(jìn)行測(cè)試，所述擬南芥包括ColumbiaO(Col_0)、Landsbergerecta(X-er)合Sg-l(來(lái)自CSIROPlantIndustry,Canberra,Australia)。將用于接種的擬南芥植物一個(gè)一個(gè)地在"jiffy"盆中生長(zhǎng)近2-3周。在感染前近4天，停止給植物澆水。通過(guò)將5ml重懸浮的孢子直接地加入到鄰近植物莖部的土壤中從而產(chǎn)生4X105-2X106孢子的總劑量，接種擬南芥植物。將植物孵育在25t:下，并在孵育后14天中對(duì)枯萎癥狀和/或死亡進(jìn)行積分。為了進(jìn)一步地表征特異的基因型所引起的疾病水平，用一組寡核苷酸引物(見(jiàn)W02005/080423的實(shí)施例4)擴(kuò)增尖孢鐮孢的18SrRNA的區(qū)域。引物顯示與擬南芥RNA從很少同源性到?jīng)]有同源性，并且作用為顯示出與植物RNA比較時(shí)的真菌RNA水平的差異。本領(lǐng)域人員知道，在不脫離所廣泛描述的發(fā)明的精神或范圍的情況下，可以對(duì)在具體實(shí)施方式中所示的
發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行很多變異和/或修飾。因此，這些實(shí)施方式不論在哪個(gè)方面都僅僅被認(rèn)為是作為舉例說(shuō)明的，而不是限制的。將上面所討論的所有文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容都并入本申請(qǐng)。本申請(qǐng)要求AU2007901600的優(yōu)先權(quán)，其全文包含在此作為參考。對(duì)本說(shuō)明書(shū)中已經(jīng)包含的文檔、技術(shù)、材料、設(shè)備、文章等的任何討論都只針對(duì)于給本發(fā)明提供背景知識(shí)的目的。這并非承認(rèn)因其存在于本申請(qǐng)的各個(gè)權(quán)利要求的優(yōu)先權(quán)日之前，這些內(nèi)容中任一內(nèi)容或全部?jī)?nèi)容便構(gòu)成了現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)的一部分或者是本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的公知常識(shí)。參考文獻(xiàn)Banzet，N.etal.(2002)PlantSci.，162;995—1006.Boman，H.G.etal.(1989)J.Biol.Chem.，264;5852—5860.Cheng，T.etal.(2006)Genomics,87;356-365.DeLucca，A.J.，andWalsh，T.J.(1999)Antimicrob.AgentsChemother.，43;1-11.Gleave，A.P.(1992)PlantMol.Biol.，20;1203-1207.Hara，S.andYamakawa，M.(1995)J.Biol.Chem.，270;29923-29927.Hara，S.andYamakawa，M.(1996)Biochem.Biophys.Res.Co匪n.，220;664-669.Harayama，S.(1998)TrendsBiotech.，16;76—82.Hemmi，H.，Ishibashi，J.，Hara，S.andYamakawa,M.(2002)FEBSLetters,518;33-38.30Needleman，S.B.andWunsch，C.D.(1970)J.Mol.Biol.，48;443-453.權(quán)利要求一種基本上純化的肽，其包括選自以下一組的序列i)SEQIDNO1和SEQIDNO3所示的氨基酸序列；ii)與SEQIDNO1和/或SEQIDNO3具有至少85％相同性的氨基酸序列；iii)SEQIDNO5所示的氨基酸序列；iv)與SEQIDNO5具有至少98％相同性的氨基酸序列；v)SEQIDNO7或SEQIDNO9所示的氨基酸序列；vi)與SEQIDNO7和/或SEQIDNO9具有至少64％相同性的氨基酸序列；vii)i)到vi)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段；和viii)包括i)到Vii)中任一項(xiàng)的氨基酸序列的前體，其中所述肽或其片段具有抗真菌的和/或抗細(xì)菌的活性。2.權(quán)利要求l的肽，其可純化自昆蟲(chóng)。3.權(quán)利要求1或2的肽，其可純化自螟蛾科的鱗翅昆蟲(chóng)。4.權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)的肽，其中所述肽具有針對(duì)真菌的抗真菌活性，所述真菌選自禾谷嫌抱(Fusariumgraminearum)、尖抱嫌抱(Fusariumoxysporum)、狂犬殼二抱(Ascochytarabiei)禾口十字花禾斗小球腔菌(Leptosphaeriamaculans)。5.權(quán)利要求1到4中任一項(xiàng)的肽，其與至少一種其它的多肽/肽序列融合。6.—種分離的多核苷酸，所述多核苷酸包括選自以下一組的序列i)SEQIDNO:11-20之一所示的核苷酸序列;ii)編碼權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽的序列；iii)與SEQIDNO:11-14中至少一個(gè)具有至少85%相同性的核苷酸序列；iv)與SEQIDNO:15禾P/或SEQIDNO:16具有至少98%相同性的核苷酸序列；v)與SEQIDNO:17-20中至少一個(gè)具有至少64%相同性的核苷酸序列；禾口vi)在嚴(yán)格條件下與i)到v)中任一項(xiàng)雜交的序列。7.權(quán)利要求6的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼具有抗真菌和/或抗細(xì)菌活性的肽。8.—種載體，其包括權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的多核苷酸。9.一種宿主細(xì)胞，其包括權(quán)利要求6或權(quán)利要求7的多核苷酸、或權(quán)利要求8的載體。10.權(quán)利要求9的宿主細(xì)胞，其是植物細(xì)胞。11.制備權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽的方法，所述方法包括在使得編碼所述肽的多核苷酸表達(dá)的條件下培育權(quán)利要求9或10的宿主細(xì)胞，以及回收所表達(dá)的肽。12.特異性結(jié)合權(quán)利要求1到5任一項(xiàng)的肽的抗體。13.—種組合物，其包括權(quán)利要求l到5中任一項(xiàng)的肽，權(quán)利要求6或7的多核苷酸，權(quán)利要求8的載體，權(quán)利要求9或10的宿主細(xì)胞和/或權(quán)利要求12的抗體，以及一種或多種可接受的載體。14.一種用于殺死真菌和/或細(xì)菌、或抑制真菌和/或細(xì)菌生長(zhǎng)和/或繁殖的方法，所述方法包括將所述真菌和/或細(xì)胞暴露于權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽。15.—種轉(zhuǎn)基因植物，所述植物已經(jīng)用權(quán)利要求6或7的多核苷酸轉(zhuǎn)化，其中所述植物產(chǎn)生權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽。16.—種控制農(nóng)作物的真菌和/或細(xì)菌感染的方法，所述方法包括培育權(quán)利要求15的轉(zhuǎn)基因植物的農(nóng)作物。17.—種轉(zhuǎn)基因的非人動(dòng)物，所述動(dòng)物已經(jīng)用權(quán)利要求6或7的多核苷酸轉(zhuǎn)化，其中所述動(dòng)物產(chǎn)生權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽。18.—種治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌和/或細(xì)菌感染的方法，所述方法包括給患者施用權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽。19.權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌和/或細(xì)菌感染的藥物中的用途。20.—種試劑盒，包含權(quán)利要求1到5中任一項(xiàng)的肽，權(quán)利要求6或7的多核苷酸，權(quán)利要求8的載體，權(quán)利要求9或10的宿主細(xì)胞，權(quán)利要求12的抗體和/或權(quán)利要求13的組合物。21.—種用于殺死真菌、或抑制真菌的生長(zhǎng)和/或繁殖的方法，所述方法包括將真菌暴露于一種肽，所述肽包括選自以下一組的序列；i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列；ii)包括SEQIDNO:49的殘基26到63的氨基酸序列；iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列；iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列；禾口v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。22.—種控制農(nóng)作物的真菌感染的方法，所述方法包括培育轉(zhuǎn)基因植物的農(nóng)作物，所述轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生一種肽，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列；ii)包括SEQIDNO:49的殘基26到63的氨基酸序列；iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列；iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列；禾口v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。23.—種治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的方法，所述方法包括給患者施用一種肽，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列；ii)包含SEQIDNO:49的殘基26到63的氨基酸序列；iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列；iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列；禾口v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。24.—種肽在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防患者體內(nèi)的真菌感染的藥物中的用途，所述肽包括選自以下一組的序列i)包括SEQIDNO:44-48之一的殘基28到65的氨基酸序列；ii)包括SEQIDNO:49的殘基26到63的氨基酸序列；iii)包括SEQIDNO:50-52之一的殘基26到66的氨基酸序列；iv)與i)到iii)中任一項(xiàng)具有至少50%相同性的氨基酸序列；禾口v)i)到iv)中任一項(xiàng)的生物學(xué)活性片段。全文摘要本發(fā)明涉及抗真菌的和/或抗細(xì)菌的肽，特別是從昆蟲(chóng)(特別是鱗翅昆蟲(chóng))中獲得的抗真菌活性的肽。本發(fā)明也提供了使用這些抗真菌肽治療或預(yù)防真菌生長(zhǎng)的方法，所述方法可以被用于各種目的，例如預(yù)防植物的真菌感染，治療動(dòng)物(特別是人)的真菌感染，和預(yù)防食物腐敗變質(zhì)。文檔編號(hào)C07K16/12GK101743251SQ200880017422公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2007年3月26日發(fā)明者P·D·伊斯特,S·E·布朗申請(qǐng)人:聯(lián)邦科學(xué)技術(shù)研究組織;糧食研究發(fā)展公司