專利名稱：新型硝基還原酶底物的制作方法
新型硝基還原酶底物 本發(fā)明涉及用于檢測(cè)硝基還原酶活性的新型酶底物。這些底物可用于包括產(chǎn)生物 理化學(xué)信號(hào)的酶水解步驟的應(yīng)用，尤其用于微生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、組織 學(xué)等中。當(dāng)前存在非常多的檢測(cè)微生物的介質(zhì)。該檢測(cè)可以尤其基于使用特別的底物，所 述底物對(duì)需要檢測(cè)的微生物酶具有特異性。通常而言，合成的酶底物由對(duì)待發(fā)現(xiàn)的酶活性 具有特異性的第一部分和用作標(biāo)簽(通常為發(fā)色或熒光標(biāo)記)的第二部分。因此，在細(xì)菌 的情況下，取決于是否有反應(yīng)來(lái)選擇底物，可以表征微生物的性質(zhì)。硝基還原酶活性可以尤 其用于發(fā)現(xiàn)一組、一種或一類細(xì)菌。還可以用于監(jiān)控微生物的還原新陳代謝，例如與其生長(zhǎng) 或抑制該生長(zhǎng)相關(guān)的還原新陳代謝。某些細(xì)菌還原硝基芳族化合物的能力為人所知已經(jīng)許多年。ASniS(1957)報(bào)導(dǎo)了 由大腸桿菌萃取物中分離能夠還原對(duì)硝基苯甲酸的黃素蛋白。自從該報(bào)導(dǎo)之后，在多種生 物體中已經(jīng)鑒別出硝基芳基還原酶活性。這包括嚴(yán)格的需氧微生物，例如假單胞菌(Won 等，1974)和諾卡氏菌(Villanueva，1964)，嚴(yán)格的厭氧微生物，例如梭菌(Ancermaier和 Simon, 1983)和韋榮氏球菌(McCormick 等，1976)，或者真菌類(Masuda 和 Ozaki，1993)以 及真核寄生蟲(chóng)(Douch，1975)。存在著據(jù)認(rèn)為能夠通過(guò)細(xì)菌硝基芳基還原酶而被還原的大范 圍的底物。它們尤其為硝基芳族化合物，例如對(duì)硝基苯甲酸、對(duì)硝基苯酚、對(duì)硝基苯胺及2， 4，6-三硝基甲苯(McCormick 等，1976)。通常而言，硝基還原酶的酶活性的檢測(cè)是通過(guò)間接的方法，例如通過(guò)監(jiān)控底物或 輔助因子的消失而進(jìn)行。例如，Kitamura等(1983)研究了對(duì)硝基苯甲酸甲酯及一系列其 他的硝基芳族化合物與大腸桿菌萃取物的還原。然而，該方法并不非常靈敏且不適合用于 在多相介質(zhì)中進(jìn)行檢測(cè)。還可以提及申請(qǐng)WO 00Λ8073，其描述了基于硝基香豆素的熒光底 物用于直接檢測(cè)硝基芳基還原酶的活性。該類硝基芳族化合物能夠在還原后形成高度熒光 的化合物，因而易于被檢測(cè)。然而，該底物并不適合用于在多相介質(zhì)中的檢測(cè)。因而，本發(fā)明建議改進(jìn)用于檢測(cè)微生物的硝基還原酶底物。與現(xiàn)有的底物相比，這 些新型的底物易于合成且由于其形成一種不在反應(yīng)介質(zhì)中擴(kuò)散的顏色而可以尤其用于在 膠體介質(zhì)中以檢測(cè)微生物。在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述之前，給出如下定義以便于本發(fā)明的公開(kāi)。術(shù)語(yǔ)“酶底物”用于指可以通過(guò)酶講行水解以形成產(chǎn)物，從而允許微牛物細(xì)胞或細(xì) 胞器的直接或間接檢測(cè)的底物。在硝基還原酶底物的情況下，該底物尤其包含硝酸鹽官能 團(tuán)，其通過(guò)待發(fā)現(xiàn)的酶活性而被部分或全部還原，該硝基官能團(tuán)的還原改變使分子的某些 物理化學(xué)性質(zhì)，使該還原反應(yīng)得以跟蹤。本發(fā)明的底物尤其適用于流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry)，這是因?yàn)檫€原產(chǎn)物主要 保留在表達(dá)酶活性的細(xì)胞中，所以可以具體數(shù)出表達(dá)該活性的細(xì)胞或甚至將其與其他樣品 分開(kāi)。本發(fā)明的底物還適用于組織酶學(xué)，這是因?yàn)檫€原產(chǎn)物主要保留在還原點(diǎn)上，所以 可以具體識(shí)別出在組織中表達(dá)該活性的細(xì)胞或細(xì)胞器。
由于其具有低毒性，本發(fā)明的底物適于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)硝基還原酶活性。本發(fā)明的底物還非常適合用于檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)中，這是因?yàn)樗麄冃纬稍诜磻?yīng) 介質(zhì)中不擴(kuò)散的顏色或熒光。在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“顏色”包括可見(jiàn)光譜中的顏色，其吸收可 見(jiàn)光譜中的光或熒光，其在一個(gè)波長(zhǎng)(λ )吸收且在較高的波長(zhǎng)(λΜ)發(fā)光。本發(fā)明的底物可以成鹽，即呈諸如為氯化物、溴化物、鉀鹽或三氟乙酸鹽的鹽的形 式。術(shù)語(yǔ)“硝基還原酶”用于指可以完全或部分還原NO2基團(tuán)的酶。術(shù)語(yǔ)“縫”用于指基于飽和烴基團(tuán)的鏈，尤其例如C「C6烷基，即含有1-6個(gè)碳原 子的直鏈或支鏈烷基。例如可以提及甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、戊基、異戊基 及己基。術(shù)語(yǔ)“M”用于指由芳環(huán)衍生的官能團(tuán)(或取代基)，例如C6-Cltl芳環(huán)，尤其為苯 基、芐基、1-萘基或2-萘基。術(shù)語(yǔ)“〗■”用于尤其指由經(jīng)由一個(gè)雙鍵而與第一個(gè)氧原子連接且經(jīng)由一個(gè)單鍵 而與第二個(gè)氧原子相連的碳原子組成的官能團(tuán)，其中所述第二個(gè)氧原子為電負(fù)性或者與氫 原子相連接。取決于分子的PKa以及介質(zhì)的pH，所述羧基可以呈離子化的形式，即第二個(gè)氧 原子未連接H，則其為電負(fù)性。術(shù)語(yǔ)“mitM”用于指包含表達(dá)細(xì)胞或細(xì)胞器的新陳代謝和/或微生物生長(zhǎng)所 需所有成分的介質(zhì)。該反應(yīng)介質(zhì)可以用于流式細(xì)胞術(shù)、組織酶學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)等，或者用作微 生物檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)。所述反應(yīng)介質(zhì)可以為固體、半固體或液體。術(shù)語(yǔ)“固體介質(zhì)”用于例如指凝膠化的 介質(zhì)。瓊脂在微生物學(xué)中為用于培養(yǎng)微生物的常規(guī)凝膠劑，但是可以使用明膠或瓊脂糖。有 些制品是可商購(gòu)獲得的，例如哥倫比亞瓊脂、胰酪蛋白胨大豆瓊脂、麥康基瓊脂、沙鮑洛瓊 脂，或者更通常而言描述于Microbiological Media (CRC Press)手冊(cè)中的那些。反應(yīng)介質(zhì)可以包含一種成分或多種組合成分，例如氨基酸類、蛋白胨、烴、核苷酸、 礦物質(zhì)、維生素、抗體、表面活性劑、緩沖溶液、磷酸鹽、銨鹽、鈉鹽或金屬鹽類。所述介質(zhì)還可以包含著色劑。例如作為著色劑可以提及伊文思藍(lán)、中性紅、羊血、 馬血、遮光劑例如氧化鈦、硝基苯胺、孔雀綠、亮綠等。所述反應(yīng)介質(zhì)可以為“檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)”，即顯影介質(zhì)或培養(yǎng)及顯影介質(zhì)。在 第一種情況下，在接種之前培養(yǎng)微生物，并且在第二種情況下，檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)還構(gòu)成 培養(yǎng)介質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“牛物樣品”用于指由牛物流體試樣衍牛的臨床樣品，或者由仵何類型食品衍 生的食品樣品。該樣品因此可以為液體或者固體，而且可以沒(méi)有限制性地提及血液、血漿、 尿液或糞便的臨床樣品，或者來(lái)自鼻子、喉嚨、皮膚、傷口或腦脊髓液的試樣，來(lái)自水或諸如 奶或果汁的飲料、酸奶、肉類、蛋類、蔬菜、蛋黃醬、奶酪、魚(yú)類等的食品樣品，或者由動(dòng)物飼 料例如尤其由動(dòng)物飲食而衍生的食品樣品。所述樣品還可以為來(lái)自臨床環(huán)境的試樣、家畜 試樣、來(lái)自食品、化妝品或醫(yī)藥產(chǎn)品的試樣。術(shù)語(yǔ)“環(huán)境試樣”用于尤其指由表面、液體、原 料或由產(chǎn)物提取的試樣。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“微牛物”涵蓋細(xì)菌、尤其為革蘭氏陽(yáng)件菌和革蘭氏陰件菌、酵 母、寄生蟲(chóng)、真菌，并且更通常而言為通常為單細(xì)胞、人眼看不見(jiàn)且可以在實(shí)驗(yàn)室復(fù)制且操
5O2N·其中· X 為 S、NX1、0 或 NXl-CO ；· Rl不存在或者為選自Cl、CH3、Br、F、I、烷基、芳基和羧基的取代基； R2 不存在或者為選自(1、0-012-0、0-013、？、二亞乙基二胺-013、殿31 4、81~、1、
燒基、芳基、羧基、NJ和——/ ^一⑵一的取代基；· R3和R4獨(dú)立地為H或者含有1_4個(gè)碳原子的烷基；· Xl 選自 H、CH3> C2H4PK 0H、烷基和芳基。在雜環(huán)上的1位氮與2位碳之間的鍵可以為單鍵(1，2_ 二氫)或雙鍵，優(yōu)選雙鍵。
作的生物體。作為革蘭氏陰性菌，可以提及如下屬的細(xì)菌假單胞菌屬(I^seudomonas)、埃 希氏菌屬(Escherichia)、沙門(mén)氏菌屬(Salmonella)、志賀氏菌屬(Shigella)、腸桿菌 屬(Enterobacter)、克雷白氏桿菌(Klebsiella)、沙雷氏菌屬(Serratia)、變形桿菌屬 (Proteus)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)、摩根(氏)菌屬 (Morganella)、弧菌(Vibrio)、耳口爾森氏菌屬(Yersinia)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、 布蘭漢氏球菌屬(Branhamella)、奈瑟氏菌屬(Neisseria)、伯克氏菌屬(Burkholderia)、 梓檬酸細(xì)菌屬(CitrcAacter)、哈夫尼菌屬(Hafnia)、愛(ài)德華氏菌屬(Edwardsiella)、氣單 胞菌屬(Aeromonas)、摩拉克氏菌屬(Moraxella)、巴斯德氏菌屬(Pasteurella)、普羅威登 斯菌(Providencia)、放線桿菌屬(Actinobacillus)、產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)、博德特氏 菌(Bordetella)、西地西菌屬(Cedecea)、歐文氏菌(Erwinia)、泛生菌屬(Pantoea)、勞爾 氏菌屬(Ralstonia)、狹長(zhǎng)平胞菌(Stenotrophomonas)、黃單胞菌屬(Xanthomonas)和軍團(tuán) 菌屬(Legionella)。作為革蘭氏陽(yáng)性菌，可以提及如下屬的細(xì)菌氣球菌屬(Aerococcus)、腸 球菌(Enterococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、 芽孢桿菌(Bacillus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、利斯塔氏菌屬(Listeria)、梭 菌屬(Clostridium)、加德納菌屬(Gardnerella)、考克斯菌屬(Kocuria)、乳球菌 (Lactococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、微球菌(Micrococcus)、Falkamia、兼性雙球 菌屬(Gemella)、小球菌屬(Pediococcus)、分支桿菌屬(Mycobacterium)禾口棒狀桿菌屬 (Corynebacterium)。作為酵母，可以提及如下屬的酵母假絲酵母(Candida)、隱球酵母 (Cryptococcus)、糖酵母(Saccharomyces)禾口毛抱子菌屬(Trichosporon)。對(duì)此，本發(fā)明涉及下式(I)的用于檢測(cè)硝基還原酶活性的酶底物
R2
Rl
6
當(dāng)然，本發(fā)明的底物可以包含幾個(gè)取代基，即在環(huán)的多個(gè)位置上具有幾個(gè)基團(tuán)R1、 R2。當(dāng)R2為O-CH2-O時(shí)，R2為與硝基苯酚稠合的環(huán)，其中兩個(gè)環(huán)原子是共用的。當(dāng)Rl和/ 或R2為烷基或芳基時(shí)，還可以用一個(gè)或多個(gè)諸如0H、羧基、Br、Cl、F或I的取代基將其取 代。當(dāng)X為NXl-CO時(shí)，包含X的環(huán)優(yōu)選為6元環(huán)，其在所述6元環(huán)的3位上包含NXl， 并且一個(gè)C經(jīng)由雙鍵與所述6元環(huán)4位上的0連接。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，X為S。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，X為NX1。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，X為0。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，X為NX1-C0。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，Rl在5位上。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，R2在4’位上。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，R2在5’位上。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，R2在4’位和5’位上。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0， R1和R2不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl為Cl，優(yōu)選在5位上； R2 不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl為CH3,優(yōu)選在5位上； R2 不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl 不存在；· R2為Cl，優(yōu)選在5，位上。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl 不存在；· R2為O-CH2-O,優(yōu)選與4’和5’位上的硝基苯酚稠合。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl 不存在；· R2 為 O-CH3，優(yōu)選在 4，禾Π 5，位。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；
· Rl 不存在；· R2為F，優(yōu)選在5，位。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 0 ；· Rl 不存在；· R2為二亞乙基二胺-CH3,優(yōu)選5，位。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl ；· Xl為CH3,優(yōu)選在3位；· Rl 不存在； R2 不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl ；· Xl 為 CH3 ；· Rl 不存在；· R2為Cl，優(yōu)選在5，位。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl ；· Xl 為 CH3 ；· Rl 不存在；· R2為O-CH2-O,優(yōu)選與4’位和5’位上的硝基苯酚稠合。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl ；· Xl 為 C2H4Ph ；· Rl 不存在； R2 不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl ；· Xl 為 C2H4Ph ；· Rl 不存在；· R2為Cl，優(yōu)選在5，位上。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中· X 為 NXl;· Xl ^ C2H4Ph ；· Rl 不存在；· R2為O-CH2-O,優(yōu)選與4’位和5’位上的硝基苯酚稠合。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中·Χ為 S;· Rl 不存在；0110] R2為F，優(yōu)選在5，位上。
0111]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0112]參 X 為 NXl-CO ；
0113]·Χ1 為H;
0114] R1和R2不存在。
0115]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0116]參 X 為 NXl-CO ；
0117]· Xl 為 CH3;
0118] R1和R2不存在。
0119]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0120]參 X 為 NXl-CO ；
0121]· Xl 為 CH3;
0122]· Rl不存在；
0123] R2為Cl，優(yōu)選在5，位上。
0124]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0125]· X 為 NXl;
0126]·Χ1 為H;
0127] R1和R2不存在。
0128]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0129]參 X 為 NXl-CO ；
0130]·Χ1 為H;
0131]· Rl不存在；
0132]· R2為在5，位上的Cl。
0133]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0134]·Χ為 S;
0135]· Rl不存在；
0136]· R2為二亞乙基二胺-CH3,優(yōu)選在5，位上。
0137]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0138]·Χ為 S;
0139]· Rl不存在；
0141]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0142]眷父為0;
0143]· Rl不存在；
0144]· R2為而2，優(yōu)選在4，位上。
0145]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中
0146]·Χ為 S;
0140] · R2 為
,C一CO2H優(yōu)選在5'位上。
9
· Rl 不存在； R2 不存在。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案，所述酶底物相應(yīng)于上式(I)，其中·Χ為 S;· Rl 不存在； R2為F，優(yōu)選在5，位上； 在雜環(huán)上的1位上的氮與2位上的碳之間的鍵為單鍵(1，2_二氫)。優(yōu)選，本發(fā)明的底物選自表1中所述的底物。表1-本發(fā)明底物的實(shí)例
10
權(quán)利要求
1. 一種具有下式(I)的用于檢測(cè)硝基還原酶活性的酶底物
2.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl 為 Cl ； R2不存在。
3.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl 為( ； R2不存在。
4.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl不存在； R2 為 Cl。
5.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl不存在； R2 為 O-CH3。
6.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl不存在； R2 為 F。
7.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為0; Rl不存在；R2為二亞乙基二胺-CH3。芳基、羧基、而2和——(0一的取代基；
8.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X 為 NXl ； Xl 為 CH3 ； Rl不存在； R2不存在。
9.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X 為 NXl ； Xl 為 CH3。 Rl不存在； R2 為 Cl。
10.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X 為 NXl ； Xl 為 CH3 ； Rl不存在； R2 為 O-CH2-O。
11.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X 為 NXl ； Xl 為 C2H4Ph ； Rl不存在； R2不存在。
12.權(quán)利要求1所述的酶底物，其中 X為 S ； Rl不存在； R2 為 F。
13.一種包含至少一種權(quán)利要求1-12中任一所述的酶底物的反應(yīng)介質(zhì)。
14.一種包含至少一種權(quán)利要求1-12中任一所述的酶底物的微生物檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)。
15.權(quán)利要求14所述的檢測(cè)介質(zhì)，其還包含至少一種對(duì)與通過(guò)權(quán)利要求1-12任一所述 的底物所檢測(cè)到的酶活性不同的酶活性具有特異性的其他酶底物。
16.權(quán)利要求14所述的檢測(cè)介質(zhì)，其還包含至少一種對(duì)通過(guò)權(quán)利要求1-12任一所述的 底物所檢測(cè)到的酶活性具有特異性的其他酶底物。
17.權(quán)利要求1-12中任一所述的酶底物或權(quán)利要求14-16任一所述的檢測(cè)和/或識(shí)別 介質(zhì)用于檢測(cè)微生物中的至少一種硝基還原酶活性的用途。
18.一種用于在微生物中檢測(cè)至少一種硝基還原酶活性的方法，其特種在于其包含如 下步驟a)提供一種權(quán)利要求14-16中任一所述的檢測(cè)和/或識(shí)別介質(zhì)，b)以待測(cè)試的生物樣品接種所述介質(zhì)，c)對(duì)其進(jìn)行溫育，并且d)發(fā)現(xiàn)至少一種硝基還原酶活性的存在。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種下式(I)的用于檢測(cè)硝基還原酶活性的酶底物其中●X為S、NX1、O或NX1-CO；●R1不存在或者為選自Cl、CH3、Br、F、I、烷基、芳基和羧基的取代基；●R2不存在或者為選自Cl、O-CH2-O、O-CH3、F、二亞乙基二胺-CH3、NR3R4、Br、I、烷基、芳基、羧基、NO2-CO2H的取代基；●R3和R4獨(dú)立地為H或者含有1-4個(gè)碳原子的烷基；●X1選自H、CH3、C2H4Ph、OH、烷基和芳基。
文檔編號(hào)C07D263/56GK102124123SQ200880018139
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2008年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月31日
發(fā)明者A·詹姆斯, O·法布雷加, S·斯坦福斯, S·歐倫加, V·L·薩爾瓦圖拉 申請(qǐng)人:生物梅里埃公司