專利名稱：：用于治療胰腺腫瘤的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及來(lái)自胰腺結(jié)構(gòu)的糖肽、抗體以及其在診斷和治療中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：外分泌胰腺的癌癥(其占超過(guò)20%的消化道癌)是癌癥的最具侵襲性形式之一。在法國(guó)，例如，每年診斷4，000個(gè)新病例。另外，它的頻率在世界的許多地區(qū)正顯著上升。存活率不超過(guò)20%(1年)和3%(5年)，并且在診斷以后平均生存期為3至4個(gè)月。這種低存活率源自許多原因，包括以下事實(shí)腫瘤的深層解剖位置、缺少敏感和特異性早期生物標(biāo)志物、以及其無(wú)癥狀性導(dǎo)致幾乎總是較晚得到診斷。此外，胰腺癌進(jìn)展非?？焖?，主要通過(guò)腹腔和肝臟轉(zhuǎn)移瘤的形成。目前，并沒有充分的治療選擇來(lái)治療胰腺癌。已探索了兩種不同的方式來(lái)治療胰腺癌化學(xué)放療和免疫療法?；瘜W(xué)放療臨床試驗(yàn)包括將吉西他濱(gemcitabine)加入到標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)放療方案中；這已顯示可以稍微改善患者的總生存。將埃羅替尼(erlotinib)加入到吉西他濱中僅提供適度的改善。通常，化學(xué)放療，雖然顯示某些積極結(jié)果，但仍然呈現(xiàn)較差的治療選擇。免疫療法臨床試驗(yàn)已包括直接接種疫苗，其中使用整體胰腺癌細(xì)胞、可溶性VEGF或EGFR、來(lái)自MUC1的肽、胃泌素、以及間皮素。也已嘗試間接免疫療法方式，例如通過(guò)締合抗體于VEGF(阿瓦斯汀(Bevacizumab))或EGFR(西妥昔單抗(Cetuximab))，其中借助于藥物如吉西他濱、酪氨酸激酶抑制劑(埃羅替尼)、微管去穩(wěn)定劑(泰索帝(Taxotere))、或環(huán)磷酰胺(環(huán)磷酰胺制劑(Cytoxan))。這樣的試驗(yàn)正在進(jìn)行中。雖然在鑒定有用的診斷和治療標(biāo)志物的努力中相對(duì)于惡性胰腺上皮細(xì)胞已產(chǎn)生了許多單克隆抗體(例如，Span-l、Du-Pan-2、CA19-9、CAR-3、CA242、以及C0-TL1)，但幾乎沒有對(duì)胰腺腫瘤細(xì)胞真正具有特異性，并且它們的反應(yīng)性經(jīng)常取決于患者的基因型(參見，例如，Kawaetal.(1994)Pancreas;9:692-7)。因此，這種類型的大多數(shù)標(biāo)志物不能為外分泌胰腺癌的有效診斷或治療提供顯著的益處。在先前的研究中，已經(jīng)表明，人胰腺腫瘤細(xì)胞過(guò)度表達(dá)胚胰腺泡蛋白(FAPP)，膽鹽依賴性脂肪酶(BSDL)的一種癌胚形式，其伴隨糖基化改變，而糖基化改變導(dǎo)致許多糖表位(glycotope，一種包括碳水化合物的表位。表位又是抗原決定簇，通常是通過(guò)免疫系統(tǒng)，特別地通過(guò)抗體、B細(xì)胞或T細(xì)胞識(shí)別的高分子)的特異性表達(dá)，如16D10和J28糖表位。研究還表明，在胰腺腫瘤S0J-6細(xì)胞的表膜上存在32kDa肽，其伴隨由單克隆抗體mAbl6D10識(shí)別的糖表位。因此本領(lǐng)域非常需要新的方式和工具，用于治療外分泌胰腺和其它形式的癌癥。本發(fā)明解決了這些和其它需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明尤其來(lái)自以下驚人的發(fā)現(xiàn)結(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和/或減慢表達(dá)BSDL或FAPP多肽的腫瘤細(xì)胞的增殖(應(yīng)當(dāng)明了，如在本文中使用的，短語(yǔ)"BSDL或FAPP"不是排他性的，S卩，它還可以指"BSDL和/或FAPP"或"BSDL和FAPP")，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡或停止它們的生長(zhǎng)和增殖。當(dāng)通過(guò)結(jié)合至BSDL或FAPP的抗體來(lái)觸發(fā)細(xì)胞凋亡時(shí)，所形成的程序性細(xì)胞死亡由至少半胱天冬酶(胱冬裂酶，半胱天冬蛋白酶，caspase)-3、半胱天冬酶_9、半胱天冬酶_8活化和/或多聚ADP核糖聚合酶(PARP)切割加以介導(dǎo)。另外，抗凋亡蛋白Bcl-2的減少伴隨Bax蛋白的增加，這表明半胱天冬酶活化受Bcl-2蛋白家族的控制。因此，本發(fā)明的化合物特別可用于誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡，或用于治療患有癌癥的患者(包括癌細(xì)胞)，其表達(dá)BSDL或FAPP并且其易感于細(xì)胞凋亡(例如，它們表達(dá)半胱天冬酶_3、半胱天冬酶_9、半胱天冬酶-8、PARP等)。當(dāng)本發(fā)明的化合物抑制細(xì)胞增殖時(shí)，它至少通過(guò)封閉在Gl/S處的細(xì)胞來(lái)進(jìn)行，例如通過(guò)增加p53活性和降低細(xì)胞周期蛋白Dl水平，例如通過(guò)激活GSK-3P。因此，本發(fā)明的化合物特別可用于停止癌細(xì)胞的增殖，或用于治療患有癌癥的患者(包括癌細(xì)胞)，其表達(dá)BSDL或FAPP并且其易感于p53或GSK-3P介導(dǎo)的G1/S細(xì)胞周期阻滯。重要的是，本發(fā)明的化合物能夠直接靶向腫瘤細(xì)胞，尤其是表達(dá)BSDL或FAPP的胰腺腫瘤細(xì)胞，并引起它們的死亡(經(jīng)由細(xì)胞凋亡)和/或停止它們的增殖。顯著地，由于這些效應(yīng)僅取決于化合物與BSDL或FAPP多肽的相互作用，所以它們甚至可以用"裸"化合物(尤其是抗體)進(jìn)行，即沒有被有毒化合物修飾或衍生化的化合物。另外，當(dāng)化合物是抗體時(shí)，它們可以有效地靶向腫瘤細(xì)胞，甚至不依靠腫瘤細(xì)胞的免疫細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)(但應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，ADCC還可以在許多情況下發(fā)生，進(jìn)一步增強(qiáng)治療效力)。因此，本發(fā)明的化合物特別可用于具有受損免疫系統(tǒng)的患者，例如患有AIDS的患者、接受化療的患者、或接受免疫抑制藥物療法的患者。雖然本發(fā)明的化合物可以是任何類型的分子實(shí)體(例如，多肽、小分子)，其可以特異性地結(jié)合至表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞并從而誘導(dǎo)它們的凋亡或抑制它們的生長(zhǎng)和增殖，但本發(fā)明的優(yōu)選化合物是抗體。特別優(yōu)選的抗體是二價(jià)IgG抗體，因?yàn)樗鼈兺ǔ？梢圆粌H直接減少靶細(xì)胞數(shù)目(通過(guò)細(xì)胞凋亡或通過(guò)抑制細(xì)胞增殖)，而且包含F(xiàn)c尾部并具有足夠的結(jié)合親和力以誘導(dǎo)通過(guò)ADCC來(lái)殺傷細(xì)胞。另外，已發(fā)現(xiàn)，某些抗BSDL或抗FAPP抗體，尤其是多聚抗體如IgM抗體，傾向于被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞快速內(nèi)化，因而不能有效地誘導(dǎo)ADCC。因此，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)目贵w(二價(jià)IgG抗體，其耙向BSDL或FAPP，最優(yōu)選由抗體16D10識(shí)別的FAPP表位)，可以通過(guò)兩種獨(dú)立的機(jī)制(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)/細(xì)胞周期抑制和ADCC)來(lái)耙向表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞。因此這些發(fā)現(xiàn)一起提供了意想不到的方式來(lái)產(chǎn)生特別有效的抗原結(jié)合化合物，最優(yōu)選抗體，其尤其具有所期望的促凋亡或抗細(xì)胞增殖特性以及通常地ADCC誘導(dǎo)效應(yīng)。描述了制備和使用這樣的抗原結(jié)合化合物的方法，以及示例性的抗原結(jié)合化合物。本發(fā)明提供了使用抗原結(jié)合化合物的方法；例如，本發(fā)明提供了一種用于誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或抑制細(xì)胞增殖的方法，包括將細(xì)胞如表達(dá)BSDL或FAPP多肽的癌細(xì)胞暴露于抗原結(jié)合化合物，其以有效量結(jié)合BSDL或FAPP多肽，以誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或抑制細(xì)胞增殖。應(yīng)當(dāng)明了，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)，"細(xì)胞增殖"可以指細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖的任何方面，例如，細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞分裂、或細(xì)胞周期的任何方面。細(xì)胞可以處于細(xì)胞培養(yǎng)物中或在哺乳動(dòng)物中，例如患有癌癥的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明還提供了一種用于誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的方法，包括將細(xì)胞暴露于抗原結(jié)合化合物(例如，外源性抗體)，其以有效量結(jié)合如本文描述的BSDL或FAPP多肽，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞的增殖。因此，本發(fā)明提供了一種用于治療患有病癥(特征在于BSDL或FAPP多肽的表達(dá)，例如，胰腺癌)的哺乳動(dòng)物的方法，包括將藥物有效量的本文披露的抗原結(jié)合化合物給予哺乳動(dòng)物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，化合物是抗體，例如二價(jià)IgG抗體，其并沒有顯著地被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化，因而可有效地誘導(dǎo)細(xì)胞的ADCC。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞)的細(xì)胞表面的至少40、60、80、100、120分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間的半衰期。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體與BSDL表位或FAPP表位(優(yōu)選由16D10特異性地識(shí)別的表位)的結(jié)合親和力為50、40、30、20、10、5、1、或更少納摩爾。本發(fā)明提供了這樣的方法，該方法用于生產(chǎn)抗原結(jié)合化合物，尤其是抗體，其特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽并且其可用于治療胰腺癌。利用本發(fā)明的方法生產(chǎn)的抗原結(jié)合化合物能夠特異性地靶向胰腺腫瘤細(xì)胞或任何其它細(xì)胞，其表達(dá)BSDL或FAPP多肽，尤其是在BSDL和/或FAPP多肽上的由抗體16D10識(shí)別的表位?？乖Y(jié)合化合物可以限制細(xì)胞增殖的病理效應(yīng)，其中通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖，以及可選地還通過(guò)中和擴(kuò)大細(xì)胞的效應(yīng)(僅借助于結(jié)合)，通過(guò)靶向它們加以破壞(通過(guò)免疫系統(tǒng))(例如，借助于ADCC)，和/或通過(guò)殺傷細(xì)胞，其中直接通過(guò)使它們與細(xì)胞毒性劑接觸，如放射性同位素、毒素、或藥物。還提供了利用抗原結(jié)合化合物來(lái)治療表達(dá)BSDL或FAPP多肽的癌癥(或與BSDL或FAPP的表達(dá)有關(guān)的病癥)的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞)的細(xì)胞表面的至少40、60、80、100、120分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間的半衰期。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有50、40、30、20、10、5、1、或更小納摩爾的與BSDL表位或FAPP表位(優(yōu)選由16D10特異性地識(shí)別的表位)的結(jié)合親和力。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是不同于16D10的抗體。在另一種實(shí)施方式中，因?yàn)榭乖Y(jié)合化合物能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的死亡和/或阻滯它們的生長(zhǎng)，所以結(jié)合BSDL和/或FAPP多肽的化合物可以用于已確認(rèn)的腫瘤，以便減小或限制這樣的腫瘤的容積，例如胰腺癌，例如在能夠或不能外科手術(shù)切除或減體的腫瘤中，或在胰腺癌中，其中腫瘤已確認(rèn)或已擴(kuò)散，例如其中胰腺癌被歸類為至少I期癌癥和/或其中在胰腺中腫瘤的尺寸在任何方向?yàn)?cm或更小，或其中胰腺癌被歸類為至少2期癌癥和/或其中在胰腺中的腫瘤尺寸在任何方向大于2cm，其中胰腺癌被歸類為2期癌癥和/或癌癥已開始生長(zhǎng)進(jìn)入胰腺周圍的附近組織，但不在附近淋巴結(jié)內(nèi)，其中胰腺癌被歸類為3期癌癥和/或可能已生長(zhǎng)進(jìn)入胰腺周圍的組織，或其中胰腺癌被歸類為4期癌癥和/或已生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近器官。在已進(jìn)展超過(guò)原位癌的腫瘤中殺傷或停止腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的能力在胰腺癌中是顯著的，因?yàn)檫@樣的癌癥經(jīng)常在發(fā)展的晚期被診斷。顯著地，在某些實(shí)施方式中，因?yàn)榻Y(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物，尤其是在當(dāng)使用抗體的情況下，將不只取決于免疫細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷(例如ADCC)，所以預(yù)期，結(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物可以有效地用于具有不足或抑制免疫系統(tǒng)的患者，和/或連同另外的抗腫瘤劑，尤其是治療劑，其已知對(duì)免疫系統(tǒng)具有不利影響。例如，無(wú)免疫應(yīng)答的(免疫缺失)患者(例如，患有HIV感染)、接受免疫抑制藥物的患者(例如，在移植以后或作為用于自身免疫性疾病的治療)、或接受化療藥物的患者尤其是用這樣的化合物加以治療的良好候選者。另外，因?yàn)楸景l(fā)明的結(jié)合BSDL或FAPP多肽并具有促凋亡或抗增殖作用的抗原結(jié)合化合物可以消除或停止胰腺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，所以可以期望在本文提供的體外和體內(nèi)方法中結(jié)合本文披露的抗原結(jié)合化合物與其它抗增生和/或促凋亡劑，以便增強(qiáng)各自的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性，并且還使得細(xì)胞可以例如首先經(jīng)受生長(zhǎng)停滯，然后通過(guò)促凋亡化合物加以根除。因此，本發(fā)明提供了一種抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽，并且其能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制胰腺腫瘤細(xì)胞的增殖。優(yōu)選地，抗原結(jié)合化合物結(jié)合于在BSDL或FAPP多肽上與抗體16D10相同的表位。在一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽(例如，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于分離的糖肽或競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于表達(dá)它的細(xì)胞)。在一種實(shí)施方式中，化合物是不同于抗體16D10的抗體。在本發(fā)明的方法的一種實(shí)施方式中，由抗原結(jié)合化合物識(shí)別的BSDL或FAPP多肽是BDSL的C端肽。在另一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽，其包括一個(gè)或多個(gè)重復(fù)的11個(gè)氨基酸的C端肽序列或由其組成，其包含具有7個(gè)氨基酸的通常不變部分，其中7個(gè)氨基酸具有序列AlaProProVaIProProThr和糖基化位點(diǎn)。所述通常不變部分可選地在任一側(cè)旁側(cè)有經(jīng)常被谷氨酸取代的甘氨酸并且在N端側(cè)包含氨基酸Asp和Ser。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物是"裸露的"，并且沒有用放射性同位素、有毒肽或毒性小分子加以功能化(例如，"裸露的"抗體)。在另一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物是一種細(xì)胞毒性抗原結(jié)合化合物并且包括一種元件，其選自由放射性同位素、有毒肽、以及毒性小分子組成的組。在另一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物是一種抗體，其是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。在另一種實(shí)施方式中，放射性同位素、有毒肽、或毒性小分子直接附著于抗原結(jié)合化合物。在另一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物是一種抗體，例如，二價(jià)嵌合或人源化抗體。在一種這樣的實(shí)施方式中，抗體包括抗體16D10的可變(抗原結(jié)合)結(jié)構(gòu)域。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體包括Fc尾部。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞)的細(xì)胞表面的至少40、60、80、100、120分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間的半衰期。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體與BSDL表位或FAPP-表位(優(yōu)選由16D10特異性地識(shí)別的表位)結(jié)合親和力為50、40、30、20、10、5、1、或更少納摩爾。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞)顯著內(nèi)化，因此能夠誘導(dǎo)靶(表達(dá)BSDL或FAPP)細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體被低巖藻糖基化(hypofucosylated)。因此，本發(fā)明提供了一種治療患有胰腺癌患者的方法，該方法包括給予患者藥物有效量的根據(jù)本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。本發(fā)明還提供了一種用于治療患者的方法，該方法包括a)評(píng)估患者體內(nèi)的胰腺癌，以及b)如果確定癌癥處于需要?dú)┘?xì)胞、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、或抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)或增殖的時(shí)期，例如其中癌癥被確立、外科手術(shù)可治療的、非外科手術(shù)可治療的、進(jìn)展超過(guò)原位癌、和/或具有至少2cm的直徑和/或歸類為至少1期，則將抗原結(jié)合化合物(例如，抗體)給予患者，其特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽并且其能夠誘導(dǎo)胰腺腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制胰腺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)或增殖。在一種實(shí)施方式中，化合物是抗體，例如，二價(jià)IgG抗體(在該實(shí)施方式和其它實(shí)施方式中，優(yōu)選包含F(xiàn)c尾部)，其沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞顯著內(nèi)化并且其能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗原結(jié)合化合物的方法，所述方法包括i)提供抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；ii)測(cè)試抗原結(jié)合化合物的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性的能力；iii)如果確定抗原結(jié)合化合物具有促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性，則選擇抗原結(jié)合化合物；以及可選地iv)生產(chǎn)一些所選擇的抗原結(jié)合化合物。在一種實(shí)施方式中，在步驟iii)中選擇的化合物是抗體，并且在步驟iv)以前被變得適合于給予人，例如通過(guò)對(duì)其進(jìn)行人源化或嵌合?？蛇x地，在步驟i)中提供多種抗原結(jié)合化合物，并且在步驟ii)中對(duì)于每種抗原結(jié)合化合物測(cè)試其誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的增殖的能力。通常，步驟ii)將涉及標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，其中使細(xì)胞，例如表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞，優(yōu)選腫瘤細(xì)胞如S0J-6細(xì)胞或獲自患有胰腺癌患者的細(xì)胞，與化合物接觸，然后評(píng)估細(xì)胞的增殖或存活，并經(jīng)常連同已知細(xì)胞凋亡或細(xì)胞生長(zhǎng)/周期調(diào)節(jié)基因的活性的分析。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗體的方法，所述方法包括i)提供抗體，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP肽；ii)測(cè)試抗體的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性；iii)測(cè)試抗體誘導(dǎo)細(xì)胞(例如表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞)的免疫細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力；iv)如果確定抗原結(jié)合化合物具有促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性并且能夠誘導(dǎo)細(xì)胞(例如，表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞)的ADCC，則選擇抗體；以及可選地v)生產(chǎn)一些所選擇的抗原結(jié)合化合物。在一種實(shí)施方式中，在驟v)以前，使在步驟iv)中選擇的抗體變得適合于給予人，例如通過(guò)對(duì)其進(jìn)行人源化或嵌合。可選地，在步驟i)中提供多種抗原結(jié)合化合物，然后在步驟ii)中對(duì)于每種抗原結(jié)合化合物測(cè)試其誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的增殖的能力。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是IgG。另外，抗體優(yōu)選為二價(jià)抗體。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體并不與非腫瘤組織交叉反應(yīng)，所述非腫瘤組織選自由扁桃體、唾液腺、周圍神經(jīng)、淋巴結(jié)、眼、骨髓、卵巢、輸卵管、甲狀旁腺、前列腺、脾、腎、腎上腺、睪丸、胸腺、輸尿管、子宮、以及膀胱組成的組。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗體的方法，所述方法包括i)提供一種抗體，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；ii)測(cè)試抗體的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性；iii)測(cè)試細(xì)胞，例如，表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞，對(duì)抗體的內(nèi)化；iv)如果確定了抗原結(jié)合化合物具有促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性并且沒有被細(xì)胞，例如表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞顯著內(nèi)化，則選擇抗體；以及可選地v)生產(chǎn)一些所選擇的抗原結(jié)合化合物。在一種實(shí)施方式中，在步驟v)以前，使在步驟iv)中選擇的抗體適用于給予人，例如通過(guò)對(duì)其進(jìn)行人源化或嵌合?？蛇x地，在步驟i)中提供多種抗原結(jié)合化合物，然后在步驟ii)中對(duì)于每種抗原結(jié)合化合物測(cè)試其誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的增殖的能力。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是IgG。另外，抗體優(yōu)選為二價(jià)抗體(并且包含F(xiàn)c尾部)。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體并不與非腫瘤組織交叉反應(yīng)，所述非腫瘤組織選自由扁桃體、唾液腺、周圍神經(jīng)、淋巴結(jié)、眼、骨髓、卵巢、輸卵管、甲狀旁腺、前列腺、脾、腎、腎上腺、睪丸、胸腺、輸尿管、子宮、以及膀胱組成的組。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有至少40、60、80、100、120分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞)的細(xì)胞表面的半衰期。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有50、40、30、20、10、5、1、或更少納摩爾的與BSDL表位或FAPP表位(優(yōu)選由16D10特異性地識(shí)別的表位)的結(jié)合親和力。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體被低巖藻糖基化。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗原結(jié)合化合物的方法，所述方法包括i)生產(chǎn)一些抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；ii)測(cè)試來(lái)自所述一些抗原結(jié)合化合物的樣品的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性；iii)如果確定了抗原結(jié)合化合物具有促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性，則選擇所述一些抗原結(jié)合化合物用作藥物和/或用于制備藥物；以及可選地iv)制備所述一些抗原結(jié)合化合物用于給予人，可選地將一定量的所選擇的抗原結(jié)合化合物與藥用載體一起配制。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗原結(jié)合化合物的方法，所述方法包括i)提供多種抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；ii)測(cè)試每種抗原結(jié)合化合物的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性的能力；iii)選擇能夠誘導(dǎo)所述細(xì)胞的凋亡或抑制所述細(xì)胞的增殖的抗原結(jié)合化合物；以及iv)可選地，使抗原結(jié)合化合物適合于給予人；和/或可選地v)制備一些所選的抗原結(jié)合化合物。在一種實(shí)施方式中，該方法包括另外的步驟，其中化合物是抗體，并且評(píng)估表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞對(duì)抗體的內(nèi)化，其中在步驟iii)中選擇的抗體基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了，其適用于治療癌癥。在另一種實(shí)施方式中，該方法包括另外的步驟，其中化合物是抗體，并且評(píng)估了抗體誘導(dǎo)細(xì)胞(例如，表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞)的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力，其中在步驟iii)中選擇的抗體能夠誘導(dǎo)細(xì)胞(例如，表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞)的ADCC的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了其適用于治療癌癥。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)抗原結(jié)合化合物的方法，包括i)提供抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于腫瘤細(xì)胞，該腫瘤細(xì)胞表達(dá)獲自1位或多位患有胰腺癌患者的BSDL或FAPP多肽；ii)測(cè)試抗原結(jié)合化合物相對(duì)于獲自l位或多位患有胰腺癌患者的腫瘤細(xì)胞的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性；iii)如果抗原結(jié)合化合物誘導(dǎo)獲自l位或多位患者的大量的腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖，則使抗原結(jié)合化合物適合于給予人；以及iv)可選地生產(chǎn)一定量的適合人的抗原結(jié)合化合物。在一種實(shí)施方式中，該方法包括另外的步驟，其中化合物是抗體，并且評(píng)估了表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞對(duì)抗體的內(nèi)化，其中在步驟iii)中所使用的抗體基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了其適用于治療胰腺癌。在另一種實(shí)施方式中，該方法包括另外的步驟，其中化合物是抗體，并且評(píng)估了抗體誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力，其中在步驟iii)中所使用的抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞的ADCC的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了其適用于治療胰腺癌。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，該方法可以包括在步驟i)以前用BSDL或FAPP多肽免疫非人哺乳動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、兔、用于人Ig基因的轉(zhuǎn)基因小鼠等)的步驟。在另一種實(shí)施方式中，該方法包括在步驟i)以前產(chǎn)生抗原結(jié)合化合物的文庫(kù)(例如借助于噬菌體展示法等)并選擇結(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物的步驟。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，步驟i)和/或步驟ii)的抗原結(jié)合化合物或抗體并不包含細(xì)胞毒性劑如放射性同位素、毒性多肽、或毒性小分子?？梢园凑崭鞣N可獲得方法的任何方法來(lái)測(cè)試每種抗原結(jié)合化合物或抗體誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制其增殖的能力。例如，所述測(cè)試可以包括但不限于檢測(cè)靶細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞、S0J-6細(xì)胞、表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞)的死亡、檢測(cè)核碎裂、檢測(cè)活性(例如，半胱天冬酶活化)或增加和/或降低與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白質(zhì)水平。類似地，可以按照各種可獲得方法的任何方法來(lái)測(cè)試化合物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖的影響，例如，計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)、密度、DNA復(fù)制、有絲分裂指數(shù)、測(cè)量與細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖有關(guān)的蛋白質(zhì)或其它分子的水平、或細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖的任何其它度量。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性的測(cè)試包括確定抗原結(jié)合化合物是否誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其生長(zhǎng)或增殖?？蛇x地，細(xì)胞表達(dá)在脂筏(lipidraft)中的BSDL或FAPP多肽。可選地，使細(xì)胞表達(dá)BSDL或FAPP多肽。可選地，細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞系。可選地，細(xì)胞是胰腺癌細(xì)胞，可選地S0J-6細(xì)胞。可選地，細(xì)胞是獲自一位或多位患有癌癥(例如，外分泌胰腺癌)患者的腫瘤細(xì)胞。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，可以在沒有免疫效應(yīng)細(xì)胞、尤其是NK細(xì)胞存在的條件下，進(jìn)行抗原結(jié)合化合物是否誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的確定。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，促凋亡或抗細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖活性的測(cè)試包括確定抗原結(jié)合化合物是否在表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞中調(diào)節(jié)凋亡或細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)蛋白或標(biāo)記的活性或水平。優(yōu)選地，對(duì)于細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)蛋白是半胱天冬酶或Bcl-2家族成員。對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖，調(diào)節(jié)蛋白或標(biāo)記可以是，例如，PCNA、Ki-67、細(xì)胞周期蛋白如細(xì)胞周期蛋白D(例如，細(xì)胞周期蛋白Dl)、E2F、Rb、p53、MCM6、GSK-3P、BcllO、或BrdU摻入。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，使抗原結(jié)合化合物適合于給予人包括使抗BSDL或FAPP抗體成為嵌合抗體、人抗體、或人源化抗體。使化合物適合于給予人還可以包括將化合物與藥用載體一起配制。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，生產(chǎn)一些抗原結(jié)合化合物包括在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)表達(dá)抗原結(jié)合化合物的細(xì)胞并回收(recovering)抗原結(jié)合化合物。可選地，細(xì)胞是用來(lái)表達(dá)抗原結(jié)合化合物的重組宿主細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，化合物是單克隆抗體并且細(xì)胞是雜交瘤。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物，尤其是由所述方法生產(chǎn)的抗原結(jié)合化合物，并不包括細(xì)胞毒性劑如放射性同位素、毒性多肽、或毒性小分子。在一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物是特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗體。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，化合物是不同于16D10的抗體。在本發(fā)明的任何方法的另一種實(shí)施方式中，化合物是抗體16D10的嵌合版本、人版本、或人源化版本。在本發(fā)明的任何方法的一種實(shí)施方式中，抗原結(jié)合化合物，優(yōu)選抗體，具有Fc受體結(jié)合部分，優(yōu)選IgG同種型(可選地人IgG同種型)的重鏈恒定區(qū)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是IgGl抗體。本發(fā)明還涵蓋抗體的片段和衍生物，其具有基本上相同的抗原特異性和活性(例如，其可以結(jié)合于與親代抗體相同的抗原)。這樣的片段包括但不限于Fab片段、Fab'2片段、CDR以及ScFv。當(dāng)化合物是抗體時(shí)，該抗體通常是，例如，嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是重組嵌合抗體。在一種這樣的實(shí)施方式中，抗BSDL或FAPP抗體(例如，16D10)的小鼠重鏈的結(jié)構(gòu)域Cu2、Cu3、以及Cu4被人IgG(例如IgGl)替換。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是嵌合抗體，其中小鼠抗BSDL或FAPP抗體(例如，16D10)的恒定區(qū)被重鏈和輕鏈的人IgGl恒定區(qū)替換。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物是多聚(即交聯(lián))IgG抗體。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是四聚的(兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈)，因而是二價(jià)的。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖，并且基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化。在其它特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖，并且還能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。在其它特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體并不與組織交叉反應(yīng)，所述組織選自由扁桃體、唾液腺、周圍神經(jīng)、眼、骨髓、卵巢、輸卵管、甲狀旁腺、前列腺、脾、腎、腎上腺、睪丸、胸腺、輸尿管、子宮、以及膀胱組成的組。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有至少40、50、60、70、80、100、120、150、200分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間的結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，SOJ-6細(xì)胞)的表面的半衰期。在其它優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體具有50、40、30、20、10、5、1、或更少納摩爾的與BSDL或FAPP表位(例如，由16D10識(shí)別的表位)的結(jié)合親和力。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涵蓋按照本發(fā)明的任何方法生產(chǎn)的抗原結(jié)合化合物。本發(fā)明還涵蓋藥物劑型(pharmaceuticalformulations)，其包括任何抗原結(jié)合化合物，尤其是本發(fā)明的任何抗體，以及藥用載體，正如試劑盒一樣。試劑盒可以例如包括化合物和其使用說(shuō)明，例如用于治療胰腺癌。試劑盒可以包括化合物和載體；試劑盒可以包括在制造的(例如，玻璃、塑料或其它)容器中的化合物。還涵蓋表達(dá)抗體的細(xì)胞，例如，雜交瘤。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物或抗體與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。本發(fā)明還涵蓋抗體的片段和衍生物，其具有與抗體16D10基本上相同的抗原特異性和活性(例如，其可以結(jié)合于與親代抗體相同的抗原)。這樣的片段包括但不限于Fab片段、Fab'2片段、CDR以及ScFv。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物和/或方法明確排除抗體16D10，尤其是由這樣的細(xì)胞產(chǎn)生的IgM抗體16D10，其于2004年3月16日保藏在巴黎的CollectionNationaledeCulturedeMicroorganismes(CNCM)，編號(hào)為1-3188。因此，在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種抗體，優(yōu)選一種分離的抗體，其結(jié)合于BSDL或FAPP多肽并且其能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖，其中抗體與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽，并且其中抗體不是16D10。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種由兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈構(gòu)成的二價(jià)抗體，其中重鏈包括能夠結(jié)合于Fc受體的IgG重鏈恒定區(qū)，并且其中抗體(a)能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖；(b)能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC);以及(c)與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種二價(jià)抗體，其包括(a)包含可變區(qū)的重鏈，其中可變區(qū)包括來(lái)自氨基酸序列SEQIDN0:7(融合于人IgG鏈恒定區(qū))的一個(gè)或多個(gè)CDR;以及(b)包含可變區(qū)的輕鏈，其中可變區(qū)包括來(lái)自氨基酸序列SEQIDN0:8(可選地融合于人卡巴鏈恒定區(qū))的一個(gè)或多個(gè)CDR?？蛇x地，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞顯著14內(nèi)化來(lái)表征。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)還能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)來(lái)表征，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步表征為沒有包括細(xì)胞毒性劑如放射性同位素、毒性多肽、或毒性小分子，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)能夠誘導(dǎo)胰腺腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖來(lái)表征，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)能夠在表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞中調(diào)節(jié)凋亡調(diào)節(jié)蛋白的活性或水平來(lái)表征。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)能夠調(diào)節(jié)半胱天冬酶或Bcl-2家族成員的活性或水平來(lái)表征。在另一種實(shí)施方式中，抗體在表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖或生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白的活性或水平。在另一種實(shí)施方式中，抗體在表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(其選自由GSK-313、細(xì)胞周期蛋白Dl、以及p53組成的組)中調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖或生長(zhǎng)調(diào)節(jié)蛋白的活性或水平。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步表征為具有IgG同種型(可選地人IgG或IgGl同種型)的重鏈恒定區(qū)。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步通過(guò)為四聚抗體來(lái)表征。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步表征為是二價(jià)抗體。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步表征為是嵌合抗體、人抗體或人源化抗體。在另一種實(shí)施方式中，本文中的任何抗體可以進(jìn)一步表征為被低巖藻糖基化。在任何本文描述的抗體的一種實(shí)施方式中，抗體結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的表面，其中半衰期為至少40、60、80、100、120、180、240分鐘、或更長(zhǎng)時(shí)間。在另一種實(shí)施方式中，抗體結(jié)合于BSDL或FAPP表位，其中結(jié)合親和力為至少50、40、30、20、10、5、或1納摩爾。本發(fā)明還涵蓋一種藥物組合物，其包括任何本文描述的抗原結(jié)合化合物或抗體、以及藥用載體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋一種試劑盒，該試劑盒包括本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物或抗體，以及說(shuō)明書，其說(shuō)明如何利用所述抗原結(jié)合化合物或抗體來(lái)治療或診斷胰腺或表達(dá)FAPP或BSDL的病理特征，例如胰腺癌。在另一種實(shí)施方式中，還提供了細(xì)胞，例如，雜交瘤。在其它方面，提供了一種誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖、和/或治療患有癌癥的患者或個(gè)體的方法，該方法包括a)確定促凋亡或抗細(xì)胞增殖劑是否適合于治療癌癥或癌細(xì)胞，以及b)在肯定確定的情況下，即癌癥或癌細(xì)胞適合于用促凋亡或抗細(xì)胞增殖劑治療，則用有效量的本發(fā)明的任何抗原結(jié)合化合物接觸癌細(xì)胞。在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡或抑制其增殖和/或治療患有癌癥的患者的方法，該方法包括a)確定癌癥或癌細(xì)胞是否表達(dá)BSDL或FAPP多肽，以及b)在肯定確定的情況下，即癌癥或癌細(xì)胞表達(dá)BSDL和/或FAPP多肽，則用有效量的本發(fā)明的任何抗原結(jié)合化合物接觸癌細(xì)胞?？蛇x地，在這些方法中，接觸癌細(xì)胞的步驟包括給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物。優(yōu)選地，藥物有效量是這樣的量，其可以有效地誘導(dǎo)患者體內(nèi)的癌細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖。此外可選地在這些方法中，化合物是抗體，并且所述方法涉及另外的步驟，其中評(píng)估了表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞對(duì)抗體的內(nèi)化，或其中評(píng)估了抗體誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力，其中抗體基本上沒有被內(nèi)化或能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL和/或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷的確定表明抗體適用于步驟b)。在某些實(shí)施方式中，在沒有或相對(duì)缺乏免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如，NK細(xì)胞)的條件下進(jìn)行接觸，例如當(dāng)體外進(jìn)行這樣的方法時(shí)或當(dāng)在缺乏免疫系統(tǒng)的患者中進(jìn)行上述方法時(shí)(例如，由于諸如AIDS的病15癥，由于降低NK細(xì)胞水平的病癥，由于給予化療藥劑，或由于使用免疫抑制劑，例如連同移植操作或自身免疫性疾病的治療)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種降低患者體內(nèi)腫瘤體積的方法，包括給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞(可選地腫瘤細(xì)胞)的凋亡或抑制其增殖的方法，包括使所述細(xì)胞接觸有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物以誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡或抑制細(xì)胞的增殖?？蛇x地，所述接觸是在沒有或相對(duì)缺乏免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如，NK細(xì)胞)的條件下進(jìn)行的，和/或體外進(jìn)行的?？蛇x地，該方法進(jìn)一步包括確定抗原結(jié)合化合物是否能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖?？蛇x地，化合物是抗體，其基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化和/或能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)，并且所述接觸是在有免疫效應(yīng)(例如，NK)細(xì)胞存在的條件下進(jìn)行的。圖1說(shuō)明mAbl6D10剌激S0J-6細(xì)胞的凋亡細(xì)胞死亡的能力(與RPMI和小鼠IgM相比；y軸表示凋亡細(xì)胞的數(shù)目/cm2)。圖2示出了通過(guò)16D10進(jìn)行的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)，如用CaspAceFITC-VAD-fmk對(duì)胰腺S0J-6細(xì)胞測(cè)得的，其中用或不用半胱天冬酶抑制劑(半胱天冬酶9:Z-LEHD-fmk，半胱天冬酶8:Z-IEDT-fmk，半胱天冬酶3:Z-DEVED-fmk，以及半胱天冬酶混合物Z-VAD-fmk)對(duì)胰腺S0J-6細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，然后用mAbl6D10加以處理；mAbl6D10通過(guò)半胱天冬酶_3、半胱天冬酶_8、以及半胱天冬酶-9來(lái)剌激細(xì)胞凋亡。圖3示出了由mAbl6D10誘導(dǎo)的S0J-6細(xì)胞的凋亡，如通過(guò)DAPI染色所觀察到的；RPMI沒有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，順鉑誘導(dǎo)低水平的細(xì)胞凋亡，而抗體16D10誘導(dǎo)顯著水平的細(xì)胞凋亡。圖4示出了在凝膠上的結(jié)果，其說(shuō)明，用16D10處理細(xì)胞可誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2的減少并伴隨Bax蛋白的增加，這表明半胱天冬酶活化受Bcl-2蛋白家族的控制。該實(shí)驗(yàn)還說(shuō)明了16D10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是經(jīng)由半胱天冬酶8和9、以及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)切割加以介導(dǎo)的。最左邊的泳道表示在RPMI中的S0J-6細(xì)胞，中間的泳道表示用抗體16D10溫育的S0J-6細(xì)胞，而最右邊的泳道表示用順自溫育的S0J-6細(xì)胞。圖5示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的多克隆抗體pAbL64(其識(shí)別人BDSL/FAPP)處理S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞。pAbL64不能引起細(xì)胞生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖6示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的多克隆抗體J28處理S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞，其中多克隆抗體J28識(shí)別人BDSL/FAPP，但本發(fā)明的發(fā)明人已證明其結(jié)合來(lái)自抗體16D10的BDSL/FAPP上的不同表位。J28不能引起細(xì)胞生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)^)。圖7示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的多克隆抗體16D10(IgM)(其識(shí)別人BDSL/FAPP)處理S0J-6或PANC-1胰腺腫瘤細(xì)胞。圖7表明，16D10不能引起PANC-1細(xì)胞的生長(zhǎng)或數(shù)目的降低，其中PANC-1細(xì)胞并不表達(dá)16D10抗原但引起S0J-6細(xì)胞的減少，其中S0J-6細(xì)胞表達(dá)FAPP(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。16圖8示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的對(duì)照IgM抗體處理S0J-6或PANC-l胰腺腫瘤細(xì)胞，其表明對(duì)照IgM抗體不能引起PANC-l或SOJ-6細(xì)胞的生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖9示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的抗體16D10或?qū)φ誌gM抗體處理SOJ-6胰腺腫瘤細(xì)胞，其說(shuō)明了16D10引起細(xì)胞的減少而對(duì)照IgM抗體則沒有(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖10示出了MTT測(cè)定的結(jié)果，其中涉及用增加濃度的抗體16D10或?qū)φ誌gM抗體、以及不同濃度的甲基_b-環(huán)糊精(MBCD)并具有或沒有抗體16D10，來(lái)處理SOJ-6胰腺腫瘤細(xì)胞；當(dāng)連同16D10—起使用時(shí)MBCD會(huì)降低或消除抗體16D10的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活性。該數(shù)據(jù)表明，mAbl6D10剌激凋亡細(xì)胞死亡的能力取決于16D10抗原在膜脂RAFT微結(jié)構(gòu)域中的定位。圖11:mAbl6D10阻滯在G1/S期的細(xì)胞周期進(jìn)展并調(diào)節(jié)p53、細(xì)胞周期蛋白Dl、以及GSK-313的表達(dá)。將等量的細(xì)胞裂解液(50iig)裝載到SDS-PAGE上，轉(zhuǎn)移至硝化纖維素，并且在用mAbl6D10處理以后用特異性抗體(p53、細(xì)胞周期蛋白D1、磷酸-GSK-3P以及GSK-3P)進(jìn)行探測(cè)。P-肌動(dòng)蛋白用作內(nèi)部對(duì)照。每個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行三次(一式三份，intriplicate)。圖12:膜筏結(jié)構(gòu)的組織破壞會(huì)降低mAbl6D10效應(yīng)。以8000個(gè)細(xì)胞/孔接種S0J-6細(xì)胞并生長(zhǎng)過(guò)夜。用包含甲基-P-環(huán)糊精(MPCD)或菲律賓菌素(A)或鞘糖脂生物合成的代謝抑制劑(B)的新鮮培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基6小時(shí)，然后用具有滅活FBS(包含抗體)的新鮮培養(yǎng)基替換。通過(guò)MTT測(cè)定來(lái)確定細(xì)胞生存力。結(jié)果表示為三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值±SD。圖13:在S0J-6和PANC-1細(xì)胞中，mAbl6D10處理對(duì)E_f丐粘著蛋白/P-聯(lián)蛋白(連環(huán)蛋白)復(fù)合物的影響。用或不用25iig/ml的mAbl6D10處理S0J-6細(xì)胞24小時(shí)。通過(guò)SDS-PAGE分離(resolved)等量的細(xì)胞裂解液(50yg)，轉(zhuǎn)移至硝化纖維素，然后用特異性抗體(抗磷酸-P-聯(lián)蛋白、抗P-聯(lián)蛋白、抗E-鈣粘著蛋白以及抗P-肌動(dòng)蛋白)進(jìn)行探測(cè)。圖14示出了流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果，其表明，發(fā)現(xiàn)抗體16D10結(jié)合存在于S0J-6細(xì)胞上的抗原。x軸表示熒光強(qiáng)度而y軸表明計(jì)數(shù)。圖15示出了流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果，其表明，抗體16D10并沒有結(jié)合在PANC-1細(xì)胞上存在的抗原。x軸表示熒光強(qiáng)度而y軸表示計(jì)數(shù)。圖16示出了在HEK293T細(xì)胞中生產(chǎn)二價(jià)16D10嵌合抗體中所用的策略。圖17示出了16D10VH和VL克隆策略，包括VH、CHl、IgGl-Fc、以及VL和Ck序列。圖18示出了16D10和Recl6D10處理對(duì)S0J-6細(xì)胞增殖的影響。圖19示出了用來(lái)測(cè)試Recl6D10介導(dǎo)的NK細(xì)胞活化的策略。圖20示出了通過(guò)Recl6D10對(duì)NK細(xì)胞的CD107轉(zhuǎn)移的誘導(dǎo)。圖21示出了通過(guò)Recl6D10對(duì)NK細(xì)胞的IFN-Y分泌的誘導(dǎo)。圖22示出了利用Recl6D10和其它抗體的組織交叉反應(yīng)研究的結(jié)果。圖23示出了由重組嵌合IgGl16D10抗體誘導(dǎo)的S0J-6細(xì)胞的凋亡，如通過(guò)膜聯(lián)蛋白(Annexin)V和V/PI染色所觀測(cè)到的；細(xì)胞本身未經(jīng)受或經(jīng)受低細(xì)胞凋亡，并且每種衣霉素、IgM抗體16D10以及IgGl抗體16D10均誘導(dǎo)顯著水平的細(xì)胞凋亡。圖24分別示出了VH-16D10-HuIgGl和VL16D10-HuIgLK即pa的序列。對(duì)于每個(gè)序列，以黑體示出CDR1、CDR2以及CDR3。對(duì)于每個(gè)序列，可變區(qū)序列被加下劃線，而其余序列分別對(duì)應(yīng)于人IgGl和卡巴型的恒定區(qū)序列。具體實(shí)施方式如在本文中所使用的，除非另有規(guī)定，以下術(shù)語(yǔ)具有賦予它們的含義。如在本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"抗體"是指多克隆和單克隆抗體。取決于重鏈中恒定域的類型，抗體被指定為5個(gè)主要類型之一IgA、IgD、IgE、IgG、以及IgM。這些類型中的幾個(gè)被進(jìn)一步分為子類或同種型，如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4等。示例性的免疫球蛋白(抗體)結(jié)構(gòu)單元包括四聚體。每個(gè)四聚體由兩個(gè)相同對(duì)的多肽鏈構(gòu)成，每對(duì)具有一個(gè)"輕"鏈(約25kDa)和一個(gè)"重"鏈(約50-70kDa)。因此，四聚體，例如，IgG四聚體，是"二價(jià)的"，因?yàn)樗鼈兙哂袃蓚€(gè)抗原識(shí)別位點(diǎn)。這樣的二價(jià)四聚體，尤其是IgG四聚體，在本發(fā)明中是優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兡軌騻魉涂乖鲋?促凋亡活性并且能夠誘導(dǎo)靶細(xì)胞的ADCC(只要抗體包含F(xiàn)c尾部并且因而能夠結(jié)合于Fc受體)。每個(gè)鏈的N端限定約100至110或更多氨基酸的可變區(qū)，其主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別。術(shù)語(yǔ)可變輕鏈(\)和可變重鏈(VH)分別是指這些輕鏈和重鏈。對(duì)應(yīng)于不同類型的免疫球蛋白的重鏈恒定域分別稱作"a"、"S"、"e"、"Y"以及"P"。不同類型的免疫球蛋白的亞單位結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是眾所周知的。IgG和/或IgM是本發(fā)明中所采用的優(yōu)選類型的抗體，其中IgG是特別優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兪巧頎顩r下最常見的抗體并且因?yàn)樗鼈冏钊菀自趯?shí)驗(yàn)室環(huán)境下制備。另外，已發(fā)現(xiàn)，多聚抗體如IgM抗體比四聚體形式如IgG四聚體被更快速地內(nèi)化，因此較少有效地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的免疫細(xì)胞介導(dǎo)靶向(經(jīng)由ADCC)。IgG四聚體還是更為特異的，即具有比多聚IgM抗體更少的非特異性結(jié)合。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體是單克隆抗體。特別優(yōu)選的是人源化、嵌合、人、或其它適合人的抗體。"抗體"還包括任何本文描述的抗體的任何片段或衍生物。術(shù)語(yǔ)"特異性地結(jié)合于"是指抗原結(jié)合化合物或抗體在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定中可以優(yōu)選結(jié)合于結(jié)合配偶體，例如BSDL或FAPP多肽，如利用蛋白質(zhì)的重組形式、其中的表位、或在有關(guān)靶細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞、S0J-6細(xì)胞等)的表面上存在的天然蛋白質(zhì)加以評(píng)估的。競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定以及用于確定特異性結(jié)合的其它方法在下文進(jìn)一步加以描述并且是本領(lǐng)域眾所周知的。"適合人的"抗體是指任何抗體、衍生的抗體、或抗體片段，其可以安全地用于人類，例如用于本文描述的治療方法。適合人的抗體包括所有類型的人源化、嵌合、或完全人抗體，或任何這樣的抗體，其中至少抗體的一部分來(lái)自人類或用其它方式加以修飾以避免當(dāng)使用天然非人抗體時(shí)通常引起的免疫反應(yīng)。"有毒"或"細(xì)胞毒性"肽或小分子涵蓋任何化合物，其可以減慢、停止、或逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖，以任何可檢測(cè)的方式降低它們的活性，或直接或間接地殺傷它們。優(yōu)選地，有毒或細(xì)胞毒性化合物通過(guò)直接殺傷細(xì)胞、通過(guò)引起細(xì)胞凋亡或通過(guò)其它方式來(lái)起作用。如在本文中所使用的，有毒"肽"可以包括任何肽、多肽、或它們的衍生物，包括具有非天然氨基酸或修飾連鎖的肽衍生物或多肽衍生物。有毒"小分子"可以包括任何有毒化合物或元件，優(yōu)選具有小于10kD、5kD、lkD、750D、600D、500D、400D、300D、或更小的尺寸。本文中"免疫原性片段"是指任何多肽或肽片段，其能夠引發(fā)免疫反應(yīng)如(i)產(chǎn)生抗體，其結(jié)合所述片段和/或結(jié)合任何形式的包含所述片段的分子，包括膜結(jié)合受體和從其衍生的突變體，(ii)剌激T細(xì)胞反應(yīng)，其中涉及T細(xì)胞與雙分子復(fù)合體反應(yīng)，該復(fù)合體包含任何MHC分子和來(lái)自所述片段的肽，(iii)轉(zhuǎn)染的賦形劑(vehicles)的結(jié)合，如噬菌體或編碼哺乳動(dòng)物免疫球蛋白的細(xì)菌表達(dá)基因?？商鎿Q地，免疫原性片段還指能夠引發(fā)如上述所定義的免疫反應(yīng)的任何構(gòu)建物，如通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)共軛于載體蛋白的肽片段、在其氨基酸序列中包含所述肽片段的嵌合重組多肽構(gòu)建物，并且特別包括用cDNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，其中cDNA的序列包含編碼所述片段的蛋白。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，"人源化"抗體是指這樣的抗體，其中一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白的恒定和可變框架區(qū)與動(dòng)物免疫球蛋白的結(jié)合區(qū)，例如CDR融合。這樣的人源化抗體被設(shè)計(jì)成保持非人抗體(從其衍生結(jié)合區(qū))的結(jié)合特異性，而且避免相對(duì)于非人抗體的免疫反應(yīng)。"嵌合抗體"是一種抗體分子，其中(a)恒定區(qū)、或其一部分被改變、替換或交換，使得抗原結(jié)合位點(diǎn)(可變區(qū))被連接于不同或已改變類型的恒定區(qū)、效應(yīng)子功能和/或物種、或完全不同的分子，其將新的性能賦予嵌合抗體，例如，酶、毒素、激素、生長(zhǎng)因子、藥物等；或(b)可變區(qū)、或其一部分被具有不同或已改變抗原特異性的可變區(qū)改變、替換或交換。"人"抗體是這樣的抗體，該抗體獲自轉(zhuǎn)基因小鼠或其它動(dòng)物，其已被"基因改造"以響應(yīng)于抗原挑戰(zhàn)產(chǎn)生特異性人抗體(參見，例如，Greenetal.(1994)NatureGenet7:13;Lonbergetal.(1994)Nature368:856;Tayloretal.(1994)IntImmun6:579，將其全部教導(dǎo)以引用方式結(jié)合于本文)。完全人抗體還可以通過(guò)基因或染色體轉(zhuǎn)染方法、以及噬菌體展示技術(shù)來(lái)構(gòu)造，所有這些在本領(lǐng)域是已知的(參見，例如，McCaffertyetal.(1990)Nature348:552-553)。還可以通過(guò)體外活化的B細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生人抗體(參見，例如，美國(guó)專利第5，567，610和5，229，275號(hào)，將其全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。術(shù)語(yǔ)"分離的"、"純化的"或"生物純"是指這樣的材料，其基本上或本質(zhì)上沒有通常伴隨它的成分(如在其天然狀態(tài)所發(fā)現(xiàn)的)。典型地利用分析化學(xué)技術(shù)如聚丙烯酰胺凝膠電泳或高性能液相層析法來(lái)確定純度和均勻性。作為存在于制劑(pr印aration)中的主要物種的蛋白是基本上純化的。如在本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"生物樣品"包括但不限于生物流體(例如，血清、淋巴樣液、血液)、細(xì)胞樣品或組織樣品(例如，骨髓或胰腺活檢)。本文中術(shù)語(yǔ)"多肽"、"肽"以及"蛋白質(zhì)"可互換使用以指氨基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于氨基酸聚合物，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是相應(yīng)天然存在的氨基酸的人造化學(xué)模擬物，以及指天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。當(dāng)針對(duì)例如細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)、或載體使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"重組體"是指細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或載體通過(guò)引入異源核酸或蛋白質(zhì)或改變天然核酸或蛋白質(zhì)已被修飾，或細(xì)胞來(lái)自如此修飾的細(xì)胞。因此，例如，重組細(xì)胞表達(dá)在細(xì)胞的天然(非重組)形式中不存在的基因，或表達(dá)天然基因，其以其他方式被異常表達(dá)、表達(dá)不足或根本不表達(dá)。用于產(chǎn)生抗原結(jié)合化合物的一般方法術(shù)語(yǔ)"抗原結(jié)合化合物"是指一種分子，優(yōu)選蛋白質(zhì)分子，其特異性地結(jié)合于抗原，例如，BSDL或FAPP多肽(或糖變體或其其他變體或衍生物，如本文所定義的)，并比其它化合物具有更大的親合力和/或相對(duì)于非BSDL或FAPP多肽具有特異性或選擇性?？乖Y(jié)合化合物可以是蛋白、肽、核酸、碳水化合物、脂質(zhì)、或小分子量化合物，其優(yōu)先結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的特異性結(jié)合劑是抗體，如多克隆抗體、單克隆抗體(mAb)、嵌合抗體、CDR嫁接抗體、多特異性抗體、雙特異性抗體、催化性抗體、人源化抗體、人抗體、"裸露"抗體、以及它們的片段、變體或衍生物，其單獨(dú)或連同其他氨基酸序列(通過(guò)已知技術(shù)提供)?？梢岳萌魏芜m宜的方法來(lái)獲得特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物。雖然在評(píng)估它們誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖(例如，直接殺傷細(xì)胞、經(jīng)由凋亡調(diào)節(jié)途徑發(fā)信號(hào)、核碎裂、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞周期)的能力以前，將通常測(cè)試它們與BSDL或FAPP多肽的結(jié)合，但應(yīng)當(dāng)明了，可以以任何適宜的次序進(jìn)行測(cè)試，例如出于方便，其取決于測(cè)定的特性以及所涉及的抗原結(jié)合化合物?？梢岳萌魏芜m宜的方式來(lái)鑒定本發(fā)明的化合物，例如利用高通量篩選來(lái)篩查大量分子的BSDL或FAPP結(jié)合活性或促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性。可替換地，可以制備和測(cè)試較少數(shù)目的或甚至單獨(dú)的分子，例如，一小組與具有期望性能的已知化合物有關(guān)的化合物或具有期望性能的已知化合物的衍生物。測(cè)隨洽麵藩在獲得抗原結(jié)合化合物以后，通常是評(píng)估其以下能力與靶細(xì)胞相互作用，影響靶細(xì)胞的活性，和/或誘導(dǎo)耙細(xì)胞的凋亡或抑制耙細(xì)胞的增殖?？梢栽谏鲜龇椒ǖ娜魏芜m宜的階段實(shí)施評(píng)估抗原結(jié)合化合物誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡或抑制其增殖的能力，并且本文提供了實(shí)例。這種誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制增殖的能力的評(píng)估可以用于一個(gè)或多個(gè)不同的步驟，其涉及用于治療用途的抗體(或其它化合物)的鑒定、生產(chǎn)和/或開發(fā)。例如，可以在用來(lái)鑒定候選抗原結(jié)合化合物的篩選方法的背景中、或在其中選擇抗原結(jié)合化合物并使其變得適合人(例如，在抗體的情況下變成嵌合的或人源化的)的方法中，評(píng)估促凋亡或抗細(xì)胞生長(zhǎng)/增殖活性，其中已獲得表達(dá)抗原結(jié)合化合物的細(xì)胞(例如，表達(dá)重組抗原結(jié)合化合物的宿主細(xì)胞)，并評(píng)估其產(chǎn)生功能抗體(或其它化合物)的能力，和/或其中已產(chǎn)生一些抗原結(jié)合化合物并評(píng)估其活性(例如，以測(cè)試成批或大量的產(chǎn)物)。通常，將已知抗原結(jié)合化合物特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。該步驟可以涉及測(cè)試多種(例如，利用高通量篩選方法的極大數(shù)目或更小數(shù)目)抗原結(jié)合化合物的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性，或測(cè)試單一化合物(例如，當(dāng)提供了結(jié)合于BSDL和/或FAPP多肽的單抗體時(shí))。因此，除結(jié)合于BSDL或FAPP多肽以外，還可以評(píng)估抗原結(jié)合化合物誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡或抑制其增殖的能力。在一種實(shí)施方式中，將表達(dá)BSDL和/或FAPP多肽的細(xì)胞引入到平板中，例如，96孔板，然后暴露于不同量的相關(guān)化合物(例如，抗體)。通過(guò)添加活體染料，即由完整細(xì)胞吸收的活體染料，如AlamarBlue(BioSourcelnternational，Camarillo，CA)，然后洗滌以除去過(guò)量染料，可以借助于光密度來(lái)測(cè)量活細(xì)胞的數(shù)目(被抗體殺傷或抑制的細(xì)胞越多，則光密度越低)。(參見，例如，Connollyetal.(2001)JPharmExpTher298:25-33，將其披露的全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。另一個(gè)實(shí)例是使用染色劑來(lái)檢測(cè)核碎裂；DAPI(4'，6-二脒基-2-苯基吲哚)可以用來(lái)結(jié)合DNA，然后可以通過(guò)檢測(cè)熒光來(lái)對(duì)片段化進(jìn)行可視化。為了測(cè)量細(xì)胞增殖或生長(zhǎng)，可以使用任何適宜的方法如確定細(xì)胞數(shù)或密度，確定有絲分裂指數(shù)，或用來(lái)確定在細(xì)胞周期中細(xì)胞的數(shù)目或它們的位置的任何其它方法。同樣可以使用任何其它適宜的體外細(xì)胞凋亡測(cè)定、用來(lái)測(cè)量細(xì)胞增殖或存活的測(cè)定、或用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞活性的測(cè)定，正如可以使用體內(nèi)測(cè)定，例如將抗體給予包含靶細(xì)胞的動(dòng)物模20型(例如，小鼠)，然后檢測(cè)隨著時(shí)間抗體給予對(duì)靶細(xì)胞的存活或活性的影響?？梢杂脕?lái)確定抗原結(jié)合化合物是否具有促凋亡活性的測(cè)定還包括這樣的測(cè)定，其確定化合物對(duì)細(xì)胞凋亡機(jī)制(machinery)的成分的影響。例如，如在本文的實(shí)施例中提供的，可以使用這樣的測(cè)定，其用來(lái)檢測(cè)與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白質(zhì)的增加或減少。在一個(gè)實(shí)施例中，將細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞或其它表達(dá)BDSL和/或FAPP的細(xì)胞)暴露于抗原結(jié)合化合物，并測(cè)量促凋亡和/或抗凋亡蛋白的水平或活性，例如Bcl-2蛋白家族成員(例如，Bcl-2、Bax、Bac、Bad等)、或半胱天冬酶(例如，半胱天冬酶3、7、8和/或9)。并不表達(dá)16D10抗原的細(xì)胞可以可選地用作對(duì)照(例如，PANC-1細(xì)胞)。在本發(fā)明的方法中可以使用任何抗原結(jié)合化合物，優(yōu)選適合人的抗體，其可以可檢測(cè)地停止或逆轉(zhuǎn)腫瘤生長(zhǎng)或者殺傷或停止腫瘤細(xì)胞的增殖(體外或體內(nèi))。優(yōu)選地，抗原結(jié)合化合物能夠殺傷或停止增殖(例如，在體外或體內(nèi)防止靶細(xì)胞數(shù)目的增加)，并且最優(yōu)選地抗原結(jié)合化合物可以誘導(dǎo)這樣的靶細(xì)胞的死亡，導(dǎo)致這樣的細(xì)胞的總數(shù)目的減少。在某些實(shí)施方式中，抗體能夠引起靶細(xì)胞的數(shù)目或靶細(xì)胞的增殖減少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%。耙細(xì)胞可以是，例如，表達(dá)BDSL或FAPP的細(xì)胞、表達(dá)BDSL或FAPP表位(由16D10識(shí)別)的癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、和/或S0J-6細(xì)胞。因此，在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用于生產(chǎn)適用于治療表達(dá)BSDL或FAPP多肽的增生癥如胰腺癌的抗原結(jié)合化合物的方法，該方法包括以下步驟a)提供多種抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；b)測(cè)試抗原結(jié)合化合物進(jìn)行結(jié)合以直接誘導(dǎo)大量靶細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的能力；c)從所述多種抗原結(jié)合化合物選擇和/或生產(chǎn)一種抗原結(jié)合化合物，其能夠直接誘導(dǎo)靶細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖。在任何本發(fā)明的方法中，"大量"可以指例如，30%、40%、50%，優(yōu)選60%、70%、80%、90%或更高百分比的細(xì)胞。在獲得抗原結(jié)合化合物以后，通常是評(píng)估其誘導(dǎo)ADCC的能力。測(cè)試抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)通常涉及評(píng)估細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性反應(yīng)，其中具有結(jié)合的抗FAPP/BSDL抗體的表達(dá)FAPP/BSDL的耙細(xì)胞(例如，S0J-6細(xì)胞或其它表達(dá)BDSL或FAPP的細(xì)胞)由攜帶Fc受體的效應(yīng)細(xì)胞加以識(shí)別，并隨后被溶解而無(wú)需涉及補(bǔ)體。并不表達(dá)16D10抗原的細(xì)胞可以可選地用作對(duì)照(例如，PANC-1細(xì)胞)。在本文的實(shí)施例部分中描述了一種示例性的ADCC測(cè)定。當(dāng)測(cè)試或沒有測(cè)試抗原結(jié)合化合物是否具有誘導(dǎo)靶細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的能力時(shí)，可以測(cè)試誘導(dǎo)ADCC的能力。在測(cè)試抗原結(jié)合化合物的(a)誘導(dǎo)ADCC和(b)誘導(dǎo)靶細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的能力的情況下，可以以任何次序進(jìn)行(a)和(b)的測(cè)定。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用于生產(chǎn)適用于治療表達(dá)BSDL或FAPP多肽的增生癥如胰腺癌的抗原結(jié)合化合物的方法，該方法包括以下步驟a)提供多種抗原結(jié)合化合物，其特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽；b)測(cè)試抗原結(jié)合化合物進(jìn)行結(jié)合以誘導(dǎo)大量靶細(xì)胞的ADCC的能力；c)從所述多種抗原結(jié)合化合物中選擇和/或產(chǎn)生一種抗原結(jié)合化合物，其能夠直接誘導(dǎo)靶細(xì)胞的ADCC。在任何本發(fā)明的方法中，"大量"可以指例如，30%、40%、50%，優(yōu)選60%、70%、80%、90%或更高百分比的細(xì)胞。通過(guò)不僅就它們對(duì)于BSDL或FAPP抗原的特異性而且就它們對(duì)于癌細(xì)胞(例如，胰腺癌細(xì)胞)的特異性來(lái)評(píng)估本發(fā)明的抗體或其它化合物。標(biāo)準(zhǔn)方法可以用來(lái)測(cè)試化合物或抗體在不同細(xì)胞或組織中的交叉反應(yīng)性，包括在動(dòng)物中的體內(nèi)方法(例如，原位免疫21染色)和利用分離的細(xì)胞或細(xì)胞系的體外方法(例如，蛋白質(zhì)印跡)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體并不與非腫瘤組織進(jìn)行交叉反應(yīng)，所述非腫瘤組織選自由扁桃體、唾液腺、周圍神經(jīng)、淋巴結(jié)、眼、骨髓、卵巢、輸卵管、甲狀旁腺、前列腺、脾、腎、腎上腺、睪丸、胸腺、輸尿管、子宮、以及膀胱組成的組。牛產(chǎn)BSDL和/或FAPP多肽如本文所描述的，在某些實(shí)施方式中，獲得抗原結(jié)合化合物(例如，小鼠的免疫)和/或評(píng)估抗原結(jié)合化合物(例如，評(píng)估與BSDL或FAPP多肽的結(jié)合)可以涉及BSDL或FAPP多肽的使用?？梢砸员绢I(lǐng)域已知的任何適宜的方法來(lái)制備BSDL或FAPP多肽。例如在W02005/095594(將其披露的全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)中，提供了BSDL或FAPP多肽以及用于制備它們的示例性方法。BSDL或FAPP多肽可以是全長(zhǎng)BSDL或FAPP多肽或其一部分。BSDL或FAPP多肽可以可選地被連接于另一個(gè)元件，其包括但不限于第二多肽、標(biāo)記(tag)、聚合物、或任何其它適宜的分子。BSDL或FAPP多肽通常將是糖肽。在一個(gè)實(shí)施例中，BSDL或FAPP多肽包括或由糖肽組成，其中糖肽包括或衍生自BSDL的重復(fù)C端序列(在正常胰腺分泌物中存在的消化脂解酶)。在另一個(gè)實(shí)施例中，BSDL或FAPP多肽包括或由糖肽組成，其中糖肽包括或衍生自FAPP(BSDL的一種癌胚形式)的重復(fù)C端序列，其中FAPP是胰腺病變的特異性標(biāo)記。在某些實(shí)施方式中，BSDL或FAPP多肽包括11個(gè)氨基酸的重復(fù)C端肽序列，其包括具有7個(gè)氨基酸(具有序列AlaProProValProProThr)的通常不變部分以及糖基化位點(diǎn)。所述通常不變部分在任一側(cè)旁側(cè)有經(jīng)常被谷氨酸取代的甘氨酸并且包含在N端側(cè)上的氨基酸Asp和Ser。如在W02005/095594中所示出的，這樣的具有糖肽結(jié)構(gòu)的多肽可以通過(guò)宿主細(xì)胞的表達(dá)和分泌加以制備，例如來(lái)自中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CH0)細(xì)胞，其包括基因構(gòu)建物(包括DNA分子，其編碼C端肽的一個(gè)或多個(gè)重復(fù)序列，尤其是BSDL的重組體，例如所有或部分的16個(gè)重復(fù)序列)以及還包括基因構(gòu)建物如DNA分子，其編碼至少一種具有糖基轉(zhuǎn)移酶活性的酶，尤其選自由Core2|3(1_6)N_乙酰基葡糖氨基轉(zhuǎn)移酶，巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶FUT3(其具有a(1-3)和a(1-4)巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性)，或巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶FUT7(其僅具有a(1-3)巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶活性)，從而構(gòu)成胰腺癌的所述特異性標(biāo)記。在一個(gè)實(shí)例中，W02005/095594提供了一種優(yōu)選重組的、可以分離或純化的糖肽，其包括BSDL或FAPP的1至40個(gè)重復(fù)C端多肽(由11個(gè)氨基酸構(gòu)成)，所述多肽被糖基化并攜帶糖基化表位，可選地與患有I型糖尿病的患者的經(jīng)誘導(dǎo)的抗體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，并且純化自人或動(dòng)物來(lái)源的生物流體或重組體?？梢酝ㄟ^(guò)在傳統(tǒng)的宿主細(xì)胞(包括引發(fā)糖基化所需的酶促系統(tǒng)(enzymaticmachinery))中進(jìn)行表達(dá)來(lái)產(chǎn)生重組多肽，所述宿主細(xì)胞被基因修飾以便包括編碼所述多肽的基因和編碼一種或多種酶的基因，其中所述酶選自糖基轉(zhuǎn)移酶并且尤其選自Core2P(1-6)N_乙?；咸前被D(zhuǎn)移酶(縮寫為C2GnT)、a(1-3)半乳糖基轉(zhuǎn)移酶、巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶3(縮寫為FUT3)以及巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶7(縮寫為FUT7)。產(chǎn)生對(duì)BSDL或FAPP多肽具有特異性的單克隆抗體本發(fā)明涉及抗體、抗體片段、或抗體衍生物的生產(chǎn)、鑒定和/或應(yīng)用，其中抗體、抗體片段、或抗體衍生物適用于人類并且靶向BSDL或FAPP多肽?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的各種技術(shù)中的任一種技術(shù)來(lái)生產(chǎn)本發(fā)明的抗體。通常，通過(guò)用包含BSDL或FAPP多肽的免疫原免疫非人類的動(dòng)物(優(yōu)選小鼠)來(lái)產(chǎn)生它們。BSDL或FAPP多肽可以包括整個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞膜、分離的BSDL或FAPP多肽、或BSDL或FAPP多肽的片段或衍生物，通常為免疫原性片段，B卩，包含表位的多肽的一部分，其中表位暴露在表達(dá)多肽的細(xì)胞的表面上。這樣的片段通常包含成熟多肽序列的至少7個(gè)連續(xù)氨基酸，甚至更優(yōu)選地至少其10個(gè)連續(xù)氨基酸。應(yīng)當(dāng)明了，任何其它BSDL或FAPP蛋白，其有時(shí)或總是存在于所有或部分腫瘤細(xì)胞(在一些或所有患者中)的表面上，可以用于抗體的產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)例中，免疫原是S0J-6細(xì)胞。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，用來(lái)產(chǎn)生抗體的BSDL或FAPP多肽是人糖肽。本發(fā)明的抗體可以是全長(zhǎng)抗體或抗體片段或衍生物?？贵w片段的實(shí)例包括Fab、Fab，、Fab，-SH、F(ab，)2、以及Fv片段；雙特異抗體(雙抗體，diabodies);單鏈Fv(scFv)分子；僅包含一個(gè)輕鏈可變域的單鏈多肽，或其片段，其包含輕鏈可變域的三個(gè)CDR，而沒有相關(guān)的重鏈部分；僅包含一個(gè)重鏈可變區(qū)的單鏈多肽，或其片段，其包含重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR，而沒有相關(guān)的輕鏈部分；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。這樣的片段和衍生物以及制備它們的方法在本領(lǐng)域是眾所周知的。例如，胃蛋白酶可以用來(lái)消化鉸鏈區(qū)中二硫鍵以下的抗體以產(chǎn)生F(ab)'2，F(xiàn)ab的一種二聚體(其本身是通過(guò)二硫鍵連接于VH_CH1的輕鏈)?？梢栽跍睾蜅l件下還原F(ab)'2以斷開鉸鏈區(qū)中的二硫鍵，從而將F(ab)'2二聚體轉(zhuǎn)化成Fab'單體。Fab'單體基本上是具有部分鉸鏈區(qū)的Fab(參見FundamentalImmunology(Pauled.，3ded.1993))。雖然各種抗體片段是根據(jù)完整抗體的消化來(lái)定義的，但技術(shù)人員將明了，這樣的片段可以通過(guò)化學(xué)方法或通過(guò)利用重組DNA方法來(lái)從新合成。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體是IgG，例如，IgGl、抗體，并且是四聚(二價(jià))抗體。這樣的二價(jià)IgG抗體是優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兿鄬?duì)容易制備和使用，并且它們結(jié)合各種性能，這使它們可以最大限度地靶向表達(dá)BSDL/FAPP的腫瘤細(xì)胞。尤其是，它們具有與表達(dá)BSDL/FAPP的腫瘤細(xì)胞足夠的結(jié)合親和力(優(yōu)于，例如，單價(jià)形式；通常具有在納摩爾水平，例如，10-1納摩爾，的結(jié)合親和力)，使得它們可以有效地誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖。此外，因?yàn)樗鼈儼現(xiàn)c尾部，所以它們可以有效地誘導(dǎo)靶細(xì)胞的免疫細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)(雖然應(yīng)當(dāng)明了，此特點(diǎn)對(duì)于它們的效力來(lái)說(shuō)并不是必要的，這是由于直接靶向表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的能力)。另外，二價(jià)抗FAPP/BSDLIgG抗體(與多聚，例如，IgM形式相比)基本上沒有被靶細(xì)胞內(nèi)化，從而增強(qiáng)它們的ADCC介導(dǎo)性能。最后，因?yàn)楸景l(fā)明的二價(jià)抗BSDL/FAPP抗體有效地結(jié)合所有這些期望的特點(diǎn)，所以它們可以"裸露地"使用，即沒有附著部分如細(xì)胞毒性肽或放射性同位素(雖然這樣的修飾形式，其將引入用于殺傷表達(dá)BSDL/FAPP的靶細(xì)胞的又一種機(jī)制，也可以使用，但仍然屬于本發(fā)明的范圍內(nèi))。單克隆或多克隆抗體的制備在本領(lǐng)域是眾所周知的，并且可以使用任何大量可用的技術(shù)(參見，例如，Kohler&Milstein，Nature256:495-497(1975);Kozboretal.，ImmunologyToday4:72(1983);Coleetal.，pp.77_96inMonoclonalAntibodiesandCancerTherapy(1985))。用于生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(美國(guó)專利第4，946，778號(hào))可以適用于將抗體生產(chǎn)成期望的多肽，例如，BSDL或FAPP多肽。此外，轉(zhuǎn)基因小鼠、或其它生物如其它哺乳動(dòng)物，可以用來(lái)表達(dá)人源化抗體、嵌合抗體、或類似修飾的抗體?？商鎿Q地，噬菌體展示技術(shù)可以用來(lái)鑒定抗體和異數(shù)Fab片段，其特異性地結(jié)合于所選的抗原(參見，例如，McCaffertyetal.，Nature348:552-554(1990);Marksetal.，Biotechnology10:779-783(1992))。在一種實(shí)施方式中，該方法包括從文庫(kù)或所有組成部分選擇單克隆抗體或其片段或衍生物，其與BSDL或FAPP多肽進(jìn)行交叉反應(yīng)。例如，該所有組成部分可以是抗重組)所有組成部分，可選地通過(guò)任何適宜的結(jié)構(gòu)(例如，噬菌體、細(xì)菌、合成復(fù)合物等)加以展示。用抗原免疫非人哺乳動(dòng)物的步驟可以以本領(lǐng)域眾所周知的任何方式來(lái)進(jìn)行(參見，例如，E.HarlowandD丄ane，Antibodies:ALaboratoryManual.，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY(1988))。通常，將免疫原懸浮或溶解在緩沖液中，可選地包含佐劑，如完全弗氏佐劑。用于確定免疫原的量、緩沖液的類型以及佐劑的量的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的，并且并不以任何方式限制本發(fā)明。類似地，足以剌激抗體生產(chǎn)的免疫的位置和頻率在本領(lǐng)域也是眾所周知的。在一種典型的免疫方案中，在第1天并在約1周后再次用抗原腹腔內(nèi)注射非人類的動(dòng)物。接著是在約20天回憶注射抗原，可選地連同佐劑如不完全弗氏佐劑。靜脈內(nèi)進(jìn)行回憶注射并且可以重復(fù)連續(xù)多天。接著是在40天的促升注射(靜脈內(nèi)或腹腔內(nèi))，通常沒有佐劑。此方案導(dǎo)致在約40天以后產(chǎn)生抗原特異性抗體的B細(xì)胞的生產(chǎn)。還可以使用其它方案，只要它們導(dǎo)致表達(dá)抗體的B細(xì)胞的生產(chǎn)，其中抗體靶向在免疫中使用的抗原。在另一種實(shí)施方式中，從非免疫非人哺乳動(dòng)物分離淋巴細(xì)胞，體外生長(zhǎng)，然后暴露于細(xì)胞培養(yǎng)物中的免疫原。然后收獲淋巴細(xì)胞并進(jìn)行下文描述的融合步驟。對(duì)于單克隆抗體，對(duì)于本發(fā)明來(lái)說(shuō)其是優(yōu)選的，下一個(gè)步驟是從免疫非人哺乳動(dòng)物分離細(xì)胞，例如，淋巴細(xì)胞、脾細(xì)胞、或B細(xì)胞，其后將那些脾細(xì)胞、或B細(xì)胞、或淋巴細(xì)胞融合于永生細(xì)胞，以便形成產(chǎn)生抗體的雜交瘤。因此，如在本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"由免疫動(dòng)物制備抗體"包括從免疫動(dòng)物獲得B細(xì)胞/脾細(xì)胞/淋巴細(xì)胞，并利用那些細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生表達(dá)抗體的雜交瘤，以及直接從免疫動(dòng)物的血清獲得抗體。例如從非人哺乳動(dòng)物分離脾細(xì)胞是本領(lǐng)域眾所周知的，并且例如涉及從麻醉的非人哺乳動(dòng)物除去脾，將它切割成小片并從脾膠囊擠壓脾細(xì)胞并通過(guò)細(xì)胞過(guò)濾器的尼龍網(wǎng)而進(jìn)入適當(dāng)?shù)木彌_液，以便產(chǎn)生單細(xì)胞懸浮液。洗滌細(xì)胞，離心并再懸浮在裂解任何紅血細(xì)胞的緩沖液中。再次離心溶液并最后將沉淀物中的剩余淋巴細(xì)胞再懸浮在新鮮緩沖液中。在分離和存在于單細(xì)胞懸浮液中以后，將產(chǎn)生抗體的細(xì)胞融合于永生細(xì)胞系。這通常是小鼠骨髓瘤細(xì)胞系，雖然可用于產(chǎn)生雜交瘤的許多其它永生細(xì)胞系在本領(lǐng)域是已知的。優(yōu)選的小鼠骨髓瘤系包括但不限于那些小鼠骨髓瘤系，其來(lái)自M0PC-21和MPC-ll小鼠月中瘤，其可獲自SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego，Calif.U.S.A.，X63Ag8653禾口SP-2細(xì)胞(可獲自AmericanTypeCultureCollection,Rockville，MarylandU.S.A.)。利用聚乙二醇等實(shí)現(xiàn)融合。然后使所得的雜交瘤在選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，其中選擇性培養(yǎng)基包含一種或多種物質(zhì)，其抑制非融合、親代骨髓瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)或存活。例如，如果親代骨髓瘤細(xì)胞缺少次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT或HPRT)，則用于雜交瘤的培養(yǎng)基通常將包括次黃嘌呤、氨基蝶呤、以及胸腺嘧啶(HAT培養(yǎng)基)，這些物質(zhì)可防止HGPRT缺少細(xì)胞的生長(zhǎng)。雜交瘤可以生長(zhǎng)在巨噬細(xì)胞的飼養(yǎng)層上。巨噬細(xì)胞優(yōu)選來(lái)自非人哺乳動(dòng)物的同胞(littermates)，其用來(lái)分離脾細(xì)胞并在平板接種雜交瘤前的數(shù)天通常用不完全弗氏佐劑等弓l發(fā)。融合方法描述在例如(Goding，"MonoclonalAntibodies-PrinciplesandPractice,"pp.59-103(AcademicPress,1986))中，將其披露的內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文。24使細(xì)胞可以生長(zhǎng)在選擇性培養(yǎng)基中足夠長(zhǎng)的時(shí)間用于集落形成和抗體生產(chǎn)。這通常在7至14天之間。然后測(cè)定雜交瘤集落的抗體生產(chǎn)，其中抗體特異性地識(shí)別期望的底物，例如BSDL和/或FAPP多肽。測(cè)定通常是比色ELISA型測(cè)定，雖然可以采用任何測(cè)定，其可以適于雜交瘤在其中生長(zhǎng)的孔。其它測(cè)定包括免疫沉淀和放射免疫測(cè)定。檢查對(duì)于期望的抗體生產(chǎn)為陽(yáng)性的孔以確定是否存在一個(gè)或多個(gè)不同的集落。如果存在多于一個(gè)的集落，則可以再克隆和生長(zhǎng)細(xì)胞以確保僅單細(xì)胞引起集落產(chǎn)生期望的抗體。通常再克隆和再測(cè)定具有單表觀集落的陽(yáng)性孔，以確保僅檢測(cè)和產(chǎn)生一種單克隆抗體。然后還可以測(cè)定雜交瘤或雜交瘤集落的抗體的生產(chǎn)，其中抗體能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞周期。通?？梢栽谠撨^(guò)程的任何階段進(jìn)行該測(cè)定，只要可以獲得抗體并在體外測(cè)定中加以評(píng)估。然而，最優(yōu)選地，在鑒定了特異性地識(shí)別BSDL和/或FAPP多肽的抗體以后，可以測(cè)試其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞、S0J-6細(xì)胞、在其表面表達(dá)BSDL和/或FAPP多肽的任何細(xì)胞等)的生長(zhǎng)或增殖的能力。還可以測(cè)試抗體的誘導(dǎo)ADCC的能力(例如，借助于NK細(xì)胞活化；參見實(shí)施例)。然后在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基(如DMEM或RPMI-1640)中大量生長(zhǎng)證實(shí)為產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤。可替換地，雜交瘤細(xì)胞可以體內(nèi)生長(zhǎng)，如動(dòng)物中的腹水腫瘤。在足夠生長(zhǎng)以產(chǎn)生期望的單克隆抗體以后，從細(xì)胞分離出包含單克隆抗體(或腹水流體)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并純化其中存在的單克隆抗體。通常通過(guò)凝膠電泳、透析、層析來(lái)進(jìn)行純化，其中使用A蛋白或G蛋白-瓊脂糖凝膠，或連接于載體(如瓊脂糖或瓊脂糖凝膠珠)的抗小鼠Ig(均描述在例如AntibodyPurificationHandbook,AmershamBiosciences,publicationNo.18-1037-46，EditionAC中，將其披露的內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。通常通過(guò)利用低pH緩沖液(pH為3.0或更小的甘氨酸或乙酸鹽緩沖液)從A蛋白/G蛋白柱洗脫結(jié)合抗體，其中立即中和含抗體部分。如果需要，對(duì)這些部分進(jìn)行匯集、透析、以及濃縮。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，編碼抗體(其結(jié)合存在于BSDL或FAPP多肽上的決定子)的DNA分離自雜交瘤，置于適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中用于轉(zhuǎn)染到適當(dāng)?shù)乃拗髦小Ｈ缓笏拗饔糜谥亟M生產(chǎn)抗體，其變體，其活性片段，或人源化或嵌合抗體，其包括抗體的抗原識(shí)別部分。取決于特定的實(shí)施方式，可以可選地評(píng)估由宿主細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞(其表達(dá)BSDL或FAPP多肽)增殖的能力，或在存在NK細(xì)胞和(表達(dá)BSDL或FAPP的)耙細(xì)胞的條件下誘導(dǎo)ADCC(例如，NK細(xì)胞活化)的能力。利用常規(guī)程序(例如，通過(guò)利用寡核苷酸探針，其能夠特異性地結(jié)合于編碼小鼠抗體的重鏈和輕鏈的基因)，可以容易地對(duì)編碼本發(fā)明的單克隆抗體的DNA進(jìn)行分離和測(cè)序。在分離以后，可以將DNA放入表達(dá)載體中，其然后被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞如大腸桿菌細(xì)胞、猿C0S細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CH0)細(xì)胞、或骨髓瘤細(xì)胞(其并不以其他方式產(chǎn)生免疫球蛋白)中，從而在重組宿主細(xì)胞中獲得單克隆抗體的合成。編碼抗體的DNA在細(xì)菌中的重組表達(dá)在本領(lǐng)域是眾所周知的(參見，例如，Skerraetal.(1993)Curr.Op.Immunol.5:256;以及Pluckthun(1992)Immunol.Revs.130:151)。還可以通過(guò)選擇免疫球蛋白的組合文庫(kù)來(lái)產(chǎn)生抗體，如例如在Wardetal.(1989)Nature341:544中所披露的。在一種具體實(shí)施方式中，抗體結(jié)合與單克隆抗體16D10基本上相同的表位或決定25子(參見，例如，W02005/095594，將其全部披露內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。產(chǎn)生IgM抗體16D10的細(xì)胞于2004年3月16日保藏在巴黎的CollectionNationaledeCulturedeMicroorganismes(CNCM)中，編號(hào)為1-3188。在某些實(shí)施方式中，抗體是不同于16D10的抗體。術(shù)語(yǔ)"結(jié)合于與單克隆抗體x基本上相同的表位或決定子"是指抗體"可以與x競(jìng)爭(zhēng)"，其中x是16D10等。利用各種免疫篩選測(cè)定(其中可以評(píng)估抗體競(jìng)爭(zhēng))中的任何一種可以容易地鑒定一種或多種抗體，其結(jié)合于與所述的單克隆抗體基本上相同的表位。這樣的測(cè)定在本領(lǐng)域中是常規(guī)的(參見，例如，美國(guó)專利第5，660，827號(hào)，將其以引用方式結(jié)合于本文)。應(yīng)當(dāng)明了，實(shí)際確定抗體所結(jié)合的表位決不需要鑒定這樣的抗體，其結(jié)合于與所述的單克隆抗體相同或基本相同的表位。例如，在待檢查的試驗(yàn)抗體獲自不同來(lái)源的動(dòng)物、或甚至具有不同Ig同種型的情況下，可以采用簡(jiǎn)單的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，其中對(duì)照(例如，16D10)和試驗(yàn)抗體被混合(或預(yù)吸附)，并施加于包含含表位蛋白的樣品，例如BSDL或FAPP多肽?；贓LISA、放射免疫測(cè)定、蛋白質(zhì)印跡的方案，以及BIACORE的使用(如描述在例如實(shí)施例部分中)適用于上述簡(jiǎn)單的競(jìng)爭(zhēng)研究并且在本領(lǐng)域是眾所周知的。在某些實(shí)施方式中，在施加于含抗原(例如，BSDL或FAPP多肽)的樣品以前，將對(duì)照抗體(例如，i6Di0)與不同量(例如，i:io或i:ioo)的試驗(yàn)抗體預(yù)混合一段時(shí)間。在其它實(shí)施方式中，可以在暴露于抗原樣品期間簡(jiǎn)單混合對(duì)照和不同量的試驗(yàn)抗體。只要可以區(qū)分結(jié)合抗體與游離抗體(例如，通過(guò)利用分離或洗滌技術(shù)來(lái)消除未結(jié)合抗體)以及對(duì)照抗體與試驗(yàn)抗體(例如，通過(guò)利用物種或同種型特異性二抗或通過(guò)用可檢測(cè)標(biāo)記特異性地標(biāo)記對(duì)照抗體)，則能夠確定如果試驗(yàn)抗體減少對(duì)照抗體與抗原的結(jié)合，就表明試驗(yàn)抗體基本上識(shí)別與對(duì)照抗體相同的表位。在沒有完全不相關(guān)抗體存在的條件下(標(biāo)記)對(duì)照抗體的結(jié)合將是對(duì)照高值。通過(guò)溫育標(biāo)記對(duì)照抗體(例如，16D10)與完全相同類型的非標(biāo)記抗體(例如，16D10)，將獲得對(duì)照低值，其中將發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)并減少標(biāo)記抗體的結(jié)合。在試驗(yàn)測(cè)定中，在存在試驗(yàn)抗體的條件下，標(biāo)記抗體反應(yīng)性的顯著降低表明了識(shí)別相同表位的試驗(yàn)抗體，即與標(biāo)記對(duì)照抗體"交叉反應(yīng)"的試驗(yàn)抗體。任何試驗(yàn)抗體，其以在約l:10到約i:ioo之間的對(duì)照試驗(yàn)抗體的任何比率減少標(biāo)記對(duì)照與每種抗原的結(jié)合至少50%以上、優(yōu)選70%，被認(rèn)為是結(jié)合于與對(duì)照基本上相同的表位或決定子的抗體。優(yōu)選地，這樣的試驗(yàn)抗體將減少對(duì)照抗體與抗原的結(jié)合至少90%。在一種實(shí)施方式中，可以通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)來(lái)評(píng)估競(jìng)爭(zhēng)。首先用已知特異性地結(jié)合于受體(例如，表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞，以及16D10抗體)的對(duì)照抗體溫育攜帶給定激活受體的細(xì)胞，然后用試驗(yàn)抗體進(jìn)行溫育，其中試驗(yàn)抗體已標(biāo)記有，例如，熒光色素或生物素。如果用飽和量的對(duì)照抗體進(jìn)行預(yù)溫育所獲得的結(jié)合是抗體在沒有用對(duì)照抗體預(yù)溫育的情況下所獲得的結(jié)合的80%，優(yōu)選50%、40%或更少(熒光的平均值)，則認(rèn)為試驗(yàn)抗體與對(duì)照抗體競(jìng)爭(zhēng)。可替換地，如果對(duì)于用飽和量待試驗(yàn)抗體預(yù)溫育的細(xì)胞，用標(biāo)記對(duì)照(通過(guò)熒光色素或生物素)獲得的結(jié)合是在沒有用上述抗體預(yù)溫育的情況下獲得的結(jié)合的80%，優(yōu)選50%、40%、或更少，則認(rèn)為試驗(yàn)抗體與對(duì)照競(jìng)爭(zhēng)。在一種優(yōu)選的實(shí)施例中，可以采用簡(jiǎn)單的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，其中試驗(yàn)抗體被預(yù)吸附并以飽和濃度施加至其上固定用于抗體結(jié)合的底物的表面，例如BSDL或FAPP多肽，或其包含表位的部分，已知其被16D10結(jié)合。上述表面優(yōu)選為BIACORE芯片。然后使對(duì)照抗體(例如，16D10)以底物飽和濃度與上述表面接觸，并測(cè)量對(duì)照抗體的底物表面結(jié)合。在沒有試驗(yàn)抗體存在的條件下，將對(duì)照抗體的這種結(jié)合與對(duì)照抗體與含底物表面的結(jié)合進(jìn)行比較。在試驗(yàn)測(cè)定中，在有試驗(yàn)抗體存在的條件下對(duì)照抗體與含底物表面的結(jié)合的顯著減少表明了識(shí)別相同表位的試驗(yàn)抗體，即，與對(duì)照抗體"交叉反應(yīng)"的試驗(yàn)抗體。減少對(duì)照抗體與包含抗原的底物的結(jié)合至少30%或更優(yōu)選40%的任何試驗(yàn)抗體被認(rèn)為是結(jié)合于與對(duì)照抗體基本上相同的表位或決定子的抗體。優(yōu)選地，這樣的試驗(yàn)抗體將減少對(duì)照抗體與底物的結(jié)合至少50%。應(yīng)當(dāng)明了，對(duì)照和試驗(yàn)抗體的次序可以顛倒，即對(duì)照抗體首先被結(jié)合于表面，其后使試驗(yàn)抗體與上述表面接觸。優(yōu)選地，對(duì)于底物抗原具有更高親合力的抗體首先被結(jié)合于含底物的表面，因?yàn)轭A(yù)期對(duì)于二抗(假設(shè)抗體進(jìn)行交叉反應(yīng))所觀測(cè)到的結(jié)合的減少將具有更大的幅度。這樣的測(cè)定的另外的實(shí)例提供在實(shí)施例和Saunaletal.(1995)J.Immunol.Meth183:33-41中，將其披露的內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文。在鑒定了特異性地識(shí)別BSDL或FAPP多肽的抗體以后，可以利用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)試其結(jié)合于腫瘤細(xì)胞如S0J-6細(xì)胞系或獲自患有癌癥(如胰腺癌)的患者的任何其它細(xì)胞的能力，以及測(cè)試其誘導(dǎo)相同細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖的能力。還可以評(píng)估細(xì)胞激活NK細(xì)胞或誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的靶細(xì)胞的ADCC的能力。f頓肝A制勺碰在獲得單克隆抗體(通常在非人類的動(dòng)物中，其可以特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽)以后，抗體將通常被修飾以使它們適合于人類的治療應(yīng)用。例如，它們可以是人源化抗體、嵌合抗體、或利用本領(lǐng)域眾所周知的方法選自人抗體的文庫(kù)。這樣的適合人的抗體可以直接用于本發(fā)明的治療方法，或可以進(jìn)一步被衍生化。此外，取決于本發(fā)明的特定實(shí)施方式，可以在使它們適合于人類治療應(yīng)用以前和/或以后，測(cè)試抗體的促凋亡或抗細(xì)胞增殖活性。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，在插入表達(dá)載體以前，例如，通過(guò)用人重鏈和輕鏈恒定域的編碼序列代替同源非人序列(例如，Morrisonetal.(1984)PNAS81:6851)，或通過(guò)將非免疫球蛋白多肽的所有或部分編碼序列共價(jià)連接于免疫球蛋白編碼序列，可以對(duì)產(chǎn)生本發(fā)明的抗體(例如，結(jié)合于與抗體16D10相同的表位的抗體)的雜交瘤的DNA進(jìn)行修飾。以該方式，制備了"嵌合"或"雜交"抗體，其具有原抗體的結(jié)合特異性。通常，這樣的非免疫球蛋白多肽代替本發(fā)明的抗體的恒定域。在一種特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體被人源化。根據(jù)本發(fā)明的抗體的"人源化"形式是特異性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、或抗體的其它抗原結(jié)合亞序列)，其包含來(lái)自小鼠或其它非人免疫球蛋白的最小序列。一般來(lái)說(shuō)，人源化抗體是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中來(lái)自受體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基被來(lái)自原抗體(供體抗體)的CDR的殘基替換，同時(shí)保持原抗體的期望的特異性、親合力、以及能力。在某些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架殘基可以被相應(yīng)的非人殘基替換。另外，人源化抗體可以包括在受體抗體或在輸入的CDR或框架序列中未發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善和優(yōu)化抗體性能。通常，人源化抗體將包括基本上所有的至少一個(gè)，并且通常兩個(gè)可變域，其中所有或基本上所有的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于原抗體的CDR區(qū)，并且所有或基本上所有的FR區(qū)是人免疫球蛋白共有序列的FR區(qū)。對(duì)于進(jìn)一步的詳情，參見Jonesetal.(1986)Nature321:522;Reichmannetal.(1988)27Nature332:323;Verhoeyenetal.(1988)Science239:1534(1988);Presta(1992)Curr.Op.Struct.Biol.2:593;將其全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文。在制備人源化抗體中所使用的人可變域(輕鏈和重鏈兩者)的選擇對(duì)于減少抗原性是非常重要的。按照所謂的"最適合"方法，相對(duì)于已知的人可變域序列的整個(gè)文庫(kù)來(lái)篩選本發(fā)明的抗體的可變域的序列。于是最接近小鼠的人序列視為人源化抗體的人框架(FR)(Simsetal.(1993)J.Immun.，151:2296;ChothiaandLesk(1987)J.Mol.Biol.196:901)。另一種方法使用特定框架，其來(lái)自輕鏈或重鏈的特定亞組的所有人抗體的共有序列。該相同的框架可以用于多種不同的人源化抗體(Carteretal.(1992)PNAS89:4285;Prestaetal.(1993)J.Immunol.51:1993))。進(jìn)一步重要的是，抗體被人源化同時(shí)保留它們對(duì)FAPP/BSDL、優(yōu)選人FAPP/BSDL、最優(yōu)選由16D10特異性地識(shí)別的表位(例如，抗體可以與16D10競(jìng)爭(zhēng)表位結(jié)合)的高親和力、以及其它有利的生物學(xué)特性。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，根據(jù)一種優(yōu)選的方法，利用親代和人源化序列的三維模型通過(guò)分析親代序列和各種設(shè)想的人源化產(chǎn)物的方法來(lái)制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型是通?？尚械模⑶沂潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。可獲得計(jì)算機(jī)程序，其說(shuō)明和展示所選的候選免疫球蛋白序列的可能的三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)。檢查這些展示允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析這樣的殘基，其影響候選免疫球蛋白結(jié)合它的抗原的能力。以這種方式，可以從共有和輸入序列選擇并結(jié)合FR殘基，以便獲得期望的抗體特性，如對(duì)于目標(biāo)抗原的增加的親和力。通常，CDR殘基直接并最顯著涉及影響抗原結(jié)合。還可以按照各種其它技術(shù)來(lái)產(chǎn)生人抗體，如通過(guò)使用(為了免疫)其它轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其已被基因改造成表達(dá)人抗體所有組成部分。在這種技術(shù)中，人重鏈和輕鏈基因座的元件被引入到小鼠或其它動(dòng)物中，以靶向破壞內(nèi)源性重鏈和輕鏈基因座(參見，例如，Jakobovitzetal.(1993)Nature362:255;Greenetal.(1994)NatureGenet.7:13;Lonbergetal.(1994)Nature368:856;Tayloretal.(1994)Int.Immun.6:579，將其全部披露內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)?？商鎿Q地，可以通過(guò)基因或染色體轉(zhuǎn)染方法、或通過(guò)抗體所有組成部分的選擇(利用噬菌體展示法)來(lái)構(gòu)建人抗體。在這種技術(shù)中，抗體可變域基因被讀框內(nèi)克隆到絲狀噬菌體的主要或次要外殼蛋白基因中，并顯示為在噬菌體顆粒的表面上的功能性抗體片段。由于絲狀顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體的功能特性的選擇還導(dǎo)致基因的選擇，其中基因編碼呈現(xiàn)這些特性的抗體。以這種方式，噬菌體模擬B細(xì)胞的一些特性(參見，例如，Johnsonetal.(1993)CurrOpStructBiol3:5564-571;McCaffertyetal.(1990)Nature348:552-553，將其全部披露內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。還可以通過(guò)體外活化的B細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生人抗體(參見，例如，美國(guó)專利第5，567，610號(hào)和第5，229，275號(hào)，將其全部披露內(nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)。在一種實(shí)施方式中，利用用于免疫的動(dòng)物如XenoMouse⑧(Abgenix，F(xiàn)remont,CA)來(lái)制備"人源化"單克隆抗體。XenoMouse是一種小鼠宿主，其已使它的免疫球蛋白基因被功能性人免疫球蛋白基因替換。因此，由這種小鼠或在形成自這種小鼠的B細(xì)胞的雜交瘤中產(chǎn)生的抗體已經(jīng)被人源化。XenoMouse描述在美國(guó)專利第6，162，963號(hào)(將其全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文)中。利用HuMAb-MouseTM(Medarex)可以獲得一種類似的方法。本發(fā)明的抗體還可以被衍生為"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分相同于或同源于原抗體中的相應(yīng)序列，同時(shí)鏈的其余部分相同于或同源于在來(lái)自另一物種或?qū)儆诹硪环N抗體類或子類的抗體、以及上述抗體的片段中的相應(yīng)序列，只要它們呈現(xiàn)出期望的生物活性即可(參見，例如，Morrisonetal.(1984)PNAS81:6851;美國(guó)專利第4，816，567號(hào))。重組16D10抗體的結(jié)構(gòu)特性在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體是嵌合或人源化IgG抗體，其是利用16D10抗體(或另一種抗體，其結(jié)合于與16D10相同的表位)的可變域序列(例如，整個(gè)可變域、其一部分、或CDR)加以制備的。例如，抗體可以是Rec16dl0或等價(jià)抗體、嵌合抗體，其中16D10的小鼠重鏈恒定區(qū)的Cu2、Cu3、Cu4域已被人IgGlFc替換。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體是嵌合抗體，其中抗FAPP/BSDL抗體如16D10的VH和VL被重鏈和輕鏈的人IgG(例如，IgGl)恒定區(qū)替換。本發(fā)明的優(yōu)選抗體是二價(jià)單克隆抗體，其包括16D10的可變區(qū)或CDR，如在本文中產(chǎn)生、分離、以及結(jié)構(gòu)和功能上表征和描述的。在一個(gè)實(shí)施例中，抗體是在實(shí)施例9中描述的嵌合抗體(recl6D10);在另一個(gè)實(shí)施例中，抗體是可替換的二價(jià)嵌合抗體，其由(兩個(gè))重鏈(包括融合于人IgGl恒定區(qū)的16D10的重鏈可變區(qū))和(兩個(gè))輕鏈(包括融合于人lgL卡巴恒定區(qū)的16D10的輕鏈可變區(qū))構(gòu)成。這些抗體的全長(zhǎng)、可變、以及CDR序列列在表1中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離的單克隆抗體、或其抗原結(jié)合部分，包括(a)包括氨基酸序列的VH區(qū)，其中氨基酸序列選自由SEQIDNO:3、5、7以及9-11組成的組，以及(b)包括氨基酸序列的VL區(qū)，其中氨基酸序列選自由SEQIDN0:4、6、S以及12-14組成的組；其中抗體特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽。優(yōu)選的重鏈和輕鏈組合包括(a)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列的重鏈，以及(b)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的輕鏈；(a)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的重鏈，以及(b)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的輕鏈；以及(a)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，以及(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了這樣的抗體，其包括16D10的重鏈和輕鏈CDR1、CDR2和/或CDR3、或它們的組合。利用Kabat系統(tǒng)描述了CDR區(qū)(Kabatetal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)。16D10的重鏈CDR位于SEQIDNO:7中的氨基酸位置31-35(CDR1;對(duì)于CDR1，Chotia編號(hào)為26-35)、位置50-67(CDR2)以及位置97-106(CDR3)。16D10的輕鏈CDR位于SEQIDNO:8中的氨基酸位置24-40(CDR1)、位置56-62(CDR2)以及位置95-102(CDR3)。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離的單克隆抗體、或其抗原結(jié)合部分，包括(a)VHCDRl，其包括SEQIDNO:9的氨基酸序列；(b)VHCDR2，其包括SEQIDNO:10的氨基酸序列；(c)VHCDR3，其包括SEQIDNO:11的氨基酸序列；(d)VLCDRl，其包括SEQIDNO:12的氨基酸序列;(e)VLCDR2，其包括SEQIDNO:13的氨基酸序列；以及(f)VLCDR3，其包括SEQIDNO:14的氨基酸序列；其中抗體特異性地結(jié)合FAPP或BSDL。優(yōu)選地，所述抗體包括重鏈可變區(qū)，其包括融合于人IgG鏈恒定區(qū)的VHCDRl、VHCDR2以及VHCDR3;以及輕鏈可變區(qū)，其包括融合于人卡巴鏈恒定區(qū)的VLCDRl、VHCDR2以及VHCDR3。優(yōu)選地，所述人IgG鏈恒定區(qū)包括SEQIDNO15的氨基酸序列、或其一部分、或與其至少80%、90%或95%相同的序列。優(yōu)選地，所述人卡巴鏈恒定區(qū)包括SEQIDNO16的氨基酸序列、或其一部分、或與其至少80%、90%或95%相同的序列。優(yōu)選地，抗體是包括兩個(gè)所述重鏈和兩個(gè)所述輕鏈的四聚體。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體包括來(lái)自VHJ558.48小鼠種系H鏈免疫球蛋白基因的VH區(qū)和/或來(lái)自VK8-27小鼠種系L鏈免疫球蛋白基因的VL區(qū)。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種分離的單克隆抗體、或其抗原結(jié)合部分，包括(a)本文描述的VH區(qū)(例如，可變區(qū)、其部分、或包括本文描述的VHCDR1、CDR2和/或CDR3的可變區(qū))，其融合于人IgG鏈恒定區(qū)，以及(b)本文描述的VL區(qū)(S卩，可變區(qū)、其部分、或包括本文描述的VHCDR1、CDR2和/或CDR3的可變區(qū))，其融合于人卡巴鏈恒定區(qū)；其中抗體特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽。示例性的IgG鏈恒定區(qū)包括具有SEQIDNO:15的序列的恒定區(qū)(其獲自抗體利妥昔單抗(RituxanTM，Genentech，CA))，或其一部分。示例性的人卡巴鏈恒定區(qū)包括具有SEQIDNO:16的序列的恒定區(qū)(其獲自抗體利妥昔單抗(Rituxan,Genentech，CA))，或其一部分。在又一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體包括重鏈和輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列，該氨基酸序列同源于本文描述的優(yōu)選抗體的氨基酸序列，并且其中抗體保留本發(fā)明的抗FAPP/BSDL抗體的期望的功能特性。例如，本發(fā)明提供了一種分離的單克隆抗體、或其抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中(a)VH區(qū)包括一種氨基酸序列，其至少80X相同于選自由SEQIDNO:3、5、7以及9-ll組成的組中的氨基酸序列；(b)VL區(qū)包括一種氨基酸序列，其至少80X相同于選自由SEQIDNO:4、6、S以及12-14組成的組中的氨基酸序列；(c)抗體特異性地結(jié)合于FAPP或BSDL多肽并且呈現(xiàn)出至少一種本文描述的功能特性，優(yōu)選多種本文描述的功能特性。在其它實(shí)施方式中，CDR、VH和/或VL、或恒定區(qū)氨基酸序列可以85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同于以上陳述的序列?？梢酝ㄟ^(guò)編碼SEQIDN0:3至14的CDR、VH和/或VL、或SEQIDNO:15和16的恒定區(qū)的核酸分子的誘變(例如，定位或PCR介導(dǎo)誘變)來(lái)獲得一種抗體，該抗體具有CDR、VH和/或VL區(qū)，其與以上陳述序列的CDR、VH和/或VL、或恒定區(qū)具有高(8卩，80%或更大)同一性，接著測(cè)試編碼改變抗體的保留功能(例如，F(xiàn)APP/BSDL結(jié)合親和力、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)或減慢腫瘤細(xì)胞的增殖、ADCC的誘導(dǎo))。兩個(gè)序列之間的百分比同一性是由序列共享的相同位置的數(shù)目的函數(shù)(即，％同一性=相同位置的數(shù)目/位置總數(shù)X100)，考慮到間隙數(shù)目、以及每個(gè)間隙的長(zhǎng)度，其中間隙需要被引入以獲得兩個(gè)序列的最優(yōu)序列對(duì)比?？梢岳眯蛄蟹治鲕浖械臄?shù)學(xué)算法來(lái)實(shí)現(xiàn)序列的比較以及確定兩個(gè)序列之間的百分比同一性。蛋白質(zhì)分析軟件配對(duì)類似序列，其中利用相似性的度量，其被指定給各種取代、缺失以及其它修飾，包括保守氨基酸取代。兩個(gè)氨基酸序列之間的百分比同一性可以例如利用Needleman和Wunsch(J.Mol.Bio1.48:444-453(1970))算法來(lái)確定，其已結(jié)合到GCG軟件包的GAP程序中(可在http:〃www.gcg.com處獲得)，其中利用Blossum62矩陣或PAM250矩陣，以及16、14、12、10、8、6、或4的間隙權(quán)重和1、2、3、4、5、或6的長(zhǎng)度權(quán)重。還可以利用FASTA來(lái)比較多肽序列，其中使用默認(rèn)或建議的參數(shù)。GCG版本6.1中的一種程序，F(xiàn)ASTA(例如，F(xiàn)ASTA2和FASTA3)提供了在查詢與搜索序列之間最佳重疊區(qū)的序列對(duì)比和序列百分比同一性(Pearson,MethodsEnzymol.1990;183:63-98;Pearson，MethodsMol.Biol.2000;132:185-219)。還可以利用E.Meyers和W.Miller的算法(Comput.Appl.Biosci.，1988;11-17)(其已被結(jié)合到ALIGN程序(版本2.0)中)來(lái)確定兩個(gè)氨基酸序列之間的百分比同一性，其中使用PAM120權(quán)重殘基表、12的間隙長(zhǎng)度罰分以及4的間隙罰分。用于比較一種序列與包含在數(shù)據(jù)庫(kù)中的其它序列的另一種算法是計(jì)算機(jī)程序31BLAST,尤其是blastp，其中使用默認(rèn)參數(shù)。參見例如，Altschuletal.，J.Mol.Biol.1990;215:403-410;Altschuletal.，NucleicAcidsRes.1997;25:3389-402(1997);均以引用方式結(jié)合于本文。本發(fā)明的蛋白質(zhì)序列可以用作"查詢序列"以進(jìn)行對(duì)公共數(shù)據(jù)庫(kù)的搜索，從而例如鑒定相關(guān)序列?？梢岳肁ltschul等人1990(上文)的XBLAST程序(版本2.0)進(jìn)行這樣的搜索?？梢杂肵BLAST程序進(jìn)行BLAST蛋白質(zhì)搜索，其中得分二50、字長(zhǎng)二3，以獲得同源于本發(fā)明的抗體分子的氨基酸序列。為了獲得用于比較目的的帶有間隙的序列對(duì)比，可以使用帶有間隙的BLAST,如在Altschul等人，1997(上文)中所描述的。當(dāng)使用BLAST和帶有間隙的BLAST程序時(shí)，可以使用各個(gè)程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。參見http://www.ncbi.nlm.nih.gov。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗體包括VH區(qū)(其包括CDR1、CDR2以及CDR3序列)，以及VL區(qū)(其包括CDR1、CDR2以及CDR3序列)，其中一個(gè)或多個(gè)這些CDR或可變區(qū)序列包括指定的基于本文描述的優(yōu)選抗體(例如，16D10和SEQIDNO3_14中的任何一種)的氨基酸序列、或其保守修飾，并且其中抗體保留本發(fā)明的抗FAPP/BSDL抗體的期望的功能特性。保守序列修飾可以是任何氨基酸修飾，其并不顯著影響或改變包含氨基酸序列的抗體的結(jié)合特性。這樣的保守修飾包括氨基酸取代、添加以及缺失?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，如定位誘變和PCR介導(dǎo)誘變將修飾引入到本發(fā)明的抗體中。"保守"氨基酸取代通常是那些取代，其中氨基酸殘基被具有側(cè)鏈的氨基酸殘基(具有類似的理化性質(zhì))替換。在本領(lǐng)域已定義了具有類似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)，具有酸性側(cè)鏈的氨基酸(例如，天門冬氨酸、谷氨酸)，具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)，具有P-分支側(cè)鏈的氨基酸(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)以及具有芳族側(cè)鏈的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，在本發(fā)明的抗體的CDR區(qū)內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被來(lái)自相同側(cè)鏈家族的其它氨基酸殘基替換并且利用本文描述的功能測(cè)定可以測(cè)試所改變抗體的保留功能(即，在以上(c)、(d)以及(e)中陳述的功能)。編碼16D10抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的核酸序列分別顯示在SEQIDNOl和2中。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種二價(jià)單克隆抗體，其包括16D10的重鏈可變區(qū)，其轉(zhuǎn)錄和翻譯自核苷酸序列(包含SEQIDNOl或其片段)(例如，編碼16D10VH區(qū)的CDR1、CDR2和/或CDR3的序列)，以及16D10的輕鏈可變區(qū)，其轉(zhuǎn)錄和翻譯自核苷酸序列(包含SEQIDNO2或其片段)(例如，編碼16D10VL區(qū)的CDR1、CDR2和/或CDR3的序列)。在又一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，二價(jià)抗體包括在其重鏈中的CDR1、CDR2和/或CDR3或存在于抗體16D10中的重鏈可變區(qū)，其中抗體16D10于2004年3月16日保藏在巴黎的CollectionNationaledeCulturedeMicroorganismes(CNCM)中，編號(hào)為1-3188，以及包括在其輕鏈中的CDR1、CDR2和/或CDR3或存在于所述抗體16D10中的輕鏈可變區(qū)，其中抗體16D10于2004年3月16日保藏在巴黎的CollectionNationaledeCulturedeMicroorganismes(CNCM)中，編號(hào)為1-3188。恒定區(qū)優(yōu)化鑒于本發(fā)明的抗體誘導(dǎo)表達(dá)FAPP或BSDL多肽的細(xì)胞的ADCC的能力，還可以借助于增加它們的誘導(dǎo)ADCC的能力的修飾來(lái)制備本發(fā)明的抗體。典型的修飾包括修飾的人IgGl恒定區(qū)，其包括至少一個(gè)氨基酸修飾(例如，取代、缺失、插入)，和/或改變類型的糖基化，例如，低巖藻糖基化。這樣的修飾可以例如增加結(jié)合于在效應(yīng)(例如，NK)細(xì)胞上的FcyRIIIa。已證明，在恒定區(qū)中的某些改變的糖基化模式會(huì)增加抗體的ADCC能力。可以通過(guò)，例如，在具有改變的糖基化機(jī)制的宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體，來(lái)完成這樣的碳水化合物修飾。在本領(lǐng)域已描述了具有改變的糖基化機(jī)制的細(xì)胞并且可以用作宿主細(xì)胞，其中表達(dá)本發(fā)明的重組抗體，從而產(chǎn)生具有改變的糖基化的抗體。參見，例如，Shields,R.L.etal.(2002)J.Biol.Chem.277:26733—26740;Umanaetal.(1999)Nat.Biotech.17:176-1，以及歐洲專利第EP1，176，195號(hào)；PCT公開號(hào)WO06/133148;WO03/035835;WO99/5434280;將其全部?jī)?nèi)容以引用方式結(jié)合于本文。通常，具有改變的糖基化的這樣的抗體具有特定的N-聚糖結(jié)構(gòu)，其產(chǎn)生某些期望的性能，包括但不限于增強(qiáng)的ADCC和效應(yīng)細(xì)胞受體結(jié)合活性，其是相比于非修飾抗體或具有天然存在的恒定區(qū)的抗體以及由小鼠骨髓瘤NSO和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞(ChuandRobinson，CurrentOpinionBiotechnol.2001，12:180-7)產(chǎn)生的抗體、HEK293T表達(dá)的抗體(如在本文的實(shí)施例部分中產(chǎn)生的)、或通常用來(lái)產(chǎn)生重組治療性抗體的其它哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞系所產(chǎn)生的抗體。在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中產(chǎn)生的單克隆抗體在每個(gè)重鏈的Asn297處包含N-連接的糖基化位點(diǎn)。在抗體上的聚糖通常是復(fù)雜的雙觸角結(jié)構(gòu)，其具有非常低或沒有等分N-乙?；被咸?等分GlcNAc)和高水平的核心巖藻糖基化。聚糖未端包含非常低或沒有末端唾液酸以及可變量的半乳糖。關(guān)于對(duì)抗體功能的糖基化的綜述，參見例如，Wright&Morrison,TrendBiotechnol.15:26-31(1997)。相當(dāng)多的工作表明，抗體聚糖結(jié)構(gòu)的糖組成的變化可以改變Fc效應(yīng)子功能。有助于抗體活性的重要的碳水化合物結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是巖藻糖殘基，其借助于a-1，6鍵連接于Fc區(qū)N-連接的低聚糖的最內(nèi)部的N-乙酰基氨基葡糖(GlacNAc)殘基(Shieldsetal.，2002)。FcYR結(jié)合需要存在低聚糖，其共價(jià)連接在Fc區(qū)中的保守Asn297處。最近已表明，非巖藻糖基化結(jié)構(gòu)伴隨顯著增加的體外ADCC活性。組織學(xué)上，在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生的抗體包含約2至6%的非巖藻糖基化群體。已報(bào)道YB2/0(大鼠骨髓瘤)和Lecl3細(xì)胞系(CHO系的一種凝集素突變體，其具有不足的GDP-甘露糖4，6-脫水酶，導(dǎo)致缺少GDP巖藻糖或GDP糖中間體，其是a6_巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的底物)可以產(chǎn)生具有78至98%非巖藻糖基化物種的抗體。在其它實(shí)例中，RNA干擾(RNAi)或敲除技術(shù)可以用來(lái)基因改造細(xì)胞以降低FUT8mRNA轉(zhuǎn)錄水平或完全敲除基因表達(dá)，并且已報(bào)道這樣的抗體包含高達(dá)70%的非巖藻糖基化聚糖。在其它實(shí)例中，可以用糖基化抑制劑來(lái)處理產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系;Zhouetal.Biotech,andBioengin.99:652-665(2008)描述了用a_甘露糖苷酶I抑制劑，高爾基體甘露糖苷酶I的抑制劑，來(lái)處理CHO細(xì)胞，導(dǎo)致產(chǎn)生具有非巖藻糖基化寡甘露糖型N-葡聚糖的抗體。因此，在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，抗體將包括恒定區(qū)，該恒定區(qū)包括至少一個(gè)在Fc區(qū)中的氨基酸改變，其可以改善抗體結(jié)合于FcyRIIla和/或ADCC。在另一個(gè)方面，本發(fā)明的抗體組合物包括本文描述的嵌合、人或人源化抗體，其中組合物中的至少20%、30%、3340%、50%、60%、75%、85%或95%的抗體具有恒定區(qū)，該恒定區(qū)包括缺乏巖藻糖的核心碳水化合物結(jié)構(gòu)。雖然未衍生化或未修飾形式的抗體，尤其是IgGl或IgG3類型的抗體，或未衍生化抗體(包括在恒定區(qū)中的修飾以改善抗體結(jié)合于FcyRIIIa和/或ADCC)預(yù)期會(huì)誘導(dǎo)表達(dá)FAPP或BDSL多肽的腫瘤細(xì)胞(如在來(lái)自胰腺癌患者的那些細(xì)胞中)的凋亡和/或抑制其增殖，但還可以制備衍生化的抗體以使它們具有細(xì)胞毒性。當(dāng)使用這樣的衍生化抗體的二價(jià)IgG形式時(shí)，它們可以因此以至少以下三種不同的方式靶向腫瘤細(xì)胞通過(guò)ADCC(例如，當(dāng)抗體包括結(jié)合的Fc受體時(shí)，例如借助于它們的恒定區(qū))，通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖，以及通過(guò)殺傷細(xì)胞(借助于細(xì)胞毒性部分)。在一種實(shí)施方式中，在抗體被分離并變得適用于人類以后，它們被衍生化以使它們對(duì)細(xì)胞具有毒性。以這種方式，將抗體給予癌癥患者將導(dǎo)致抗體與表達(dá)FAPP和/或BDSL多肽的癌細(xì)胞的相對(duì)特異性結(jié)合，從而提供另外的方式來(lái)直接殺傷或抑制細(xì)胞。仆洽驗(yàn)辦巾,ffl利用本發(fā)明的方法生產(chǎn)的抗體在治療表達(dá)BDSL或FAPP多肽的胰腺癌和/或腫瘤(例如，乳腺癌)方面是特別有效的。在一個(gè)方面，當(dāng)實(shí)施本發(fā)明時(shí)，可以表征或評(píng)估患者體內(nèi)的癌癥。這對(duì)于確定根據(jù)本發(fā)明是否可以有利地治療癌癥是有用的。例如，因?yàn)楸景l(fā)明的抗原結(jié)合化合物具有促凋亡和抗細(xì)胞增殖活性，所以它們可以用來(lái)直接殺傷腫瘤細(xì)胞和/或減小或限制腫瘤的體積。抗原結(jié)合化合物在治療表達(dá)BDSL或FAPP多肽的腫瘤(已擴(kuò)散超過(guò)原位癌，在任何方向具有小于2cm的尺寸)，和/或在治療轉(zhuǎn)移瘤和/或轉(zhuǎn)移性腫瘤方面可能具有特別有利的特性。本發(fā)明的化合物很好適于治療胰腺癌，其中誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的死亡或減慢它們的生長(zhǎng)或增殖是有利和/或必要的。這包括但不限于胰腺癌，其中腫瘤被確立或已經(jīng)擴(kuò)散，其中癌癥已進(jìn)展超過(guò)原位癌，例如其中胰腺癌被歸類為至少I期癌癥和/或其中在胰腺中的腫瘤尺寸在任何方向?yàn)?cm或更小，或其中胰腺癌被歸類為至少2期癌癥和/或其中在胰腺中的腫瘤尺寸在任何方向大于2cm，其中胰腺癌被歸類為2期癌癥和/或癌癥已開始生長(zhǎng)進(jìn)入胰腺周圍的附近組織，但不在附近淋巴結(jié)內(nèi)部，其中胰腺癌被歸類為3期癌癥和/或可能已生長(zhǎng)進(jìn)入胰腺周圍的組織，或其中胰腺癌被歸類為4期癌癥和/或已生長(zhǎng)進(jìn)入鄰近器官。在已進(jìn)展超過(guò)原位癌的腫瘤中殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的能力在胰腺癌中是顯著的，因?yàn)檫@樣的癌癥經(jīng)常在發(fā)展的晚期被診斷。使用任何一種或多種常用方法來(lái)評(píng)估或表征胰腺癌。通常借助于試驗(yàn)和程序(其產(chǎn)生胰腺以及其周圍區(qū)域的圖片)來(lái)診斷胰腺癌。用來(lái)查明是否癌細(xì)胞已在胰腺內(nèi)和周圍擴(kuò)散的方法被稱為分期。用來(lái)檢測(cè)、診斷、以及分期胰腺癌的試驗(yàn)和程序通常同時(shí)進(jìn)行?？梢酝ㄟ^(guò)程序如胸部x射線、體檢和病史、CT掃描(CAT掃描)、MRI(磁共振成像)、PET掃描(正電子發(fā)射斷層掃描)、超聲內(nèi)窺鏡(EUS)、腹腔鏡檢查、內(nèi)窺鏡逆行胰膽管造影(ERCP)、經(jīng)皮肝穿剌膽管造影(PTC)、和/或通過(guò)活檢來(lái)評(píng)估疾病的分期以及是否可以通過(guò)手術(shù)來(lái)除去胰腺癌。在活檢中，除去細(xì)胞或組織以便病理學(xué)家可以在顯微鏡下觀察它們以檢查癌癥征兆，和/或可選地檢查BDSL或FAPP多肽的表達(dá)。如本文所討論的，利用SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡，本發(fā)明的發(fā)明人已證明，用16D1034處理細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2的減少以及促凋亡Bax蛋白的增加。還已證明，抗體會(huì)增加p53和GSK-3P活性以及降低細(xì)胞周期蛋白D1水平。因此本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和方法可以有利地用于在細(xì)胞中調(diào)節(jié)Bcl-2家族成員蛋白活性的方法，優(yōu)選在細(xì)胞中調(diào)節(jié)Bcl-2家族成員蛋白水平，優(yōu)選降低Bcl-2蛋白表達(dá)和/或增加Bax蛋白表達(dá)。類似地，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和方法還可以有利地用于在細(xì)胞中調(diào)節(jié)細(xì)胞周期活性和/或在Gl/S轉(zhuǎn)換處封閉細(xì)胞的方法，優(yōu)選增加p53或GSK-313活性或和/或降低細(xì)胞周期蛋白Dl水平。細(xì)胞可以是表達(dá)BDSL或FAPP多肽的任何細(xì)胞，優(yōu)選腫瘤細(xì)胞(例如，胰腺腫瘤細(xì)胞)，優(yōu)選在脂筏中表達(dá)BDSL或FAPP多肽的細(xì)胞。細(xì)胞可以是其中一種或多種Bcl-2家族成員的活性(或P53、細(xì)胞周期蛋白D1、或GSK-3P)(例如，生物活性和/或蛋白表達(dá))被異常調(diào)節(jié)的細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞)，即，與正常細(xì)胞(例如，非腫瘤細(xì)胞)相比，活性被增加或降低，和/或特征在于相對(duì)于其它促或抗凋亡或者促或抗細(xì)胞周期蛋白的失衡。人Bcl-2家族的成員共享四個(gè)特征同源域(稱為Bcl-2同源(BH)域)(命名為BH1、BH2、BH3以及BH4)中的一個(gè)或多個(gè)。已知BH域?qū)τ诠δ苁顷P(guān)鍵的，并且這些域的缺失(經(jīng)由分子克隆)會(huì)影響存活/凋亡率。抗凋亡Bcl-2蛋白，如Bcl-2和Bcl-xL，保存所有四個(gè)BH域。BH域還用來(lái)將促凋亡Bcl-2蛋白細(xì)分為那些具有多個(gè)BH域(例如，Bax、Bcl-xS以及Bak)的蛋白或那些僅具有BH3域(例如，Bid、Bim以及Bad)的蛋白。Bcl-2對(duì)于細(xì)胞凋亡過(guò)程是必不可少的，因?yàn)樗种萍?xì)胞死亡過(guò)程的引發(fā)。免疫組織化學(xué)染色已通常用來(lái)檢測(cè)在腫瘤中Bcl-2家族成員的表達(dá)水平。已發(fā)現(xiàn)，在某些情況下，胰腺腫瘤可以過(guò)度表達(dá)Bcl-2;這些腫瘤細(xì)胞預(yù)期會(huì)耐細(xì)胞凋亡。還已經(jīng)表明，約50%的胰腺腫瘤過(guò)度表達(dá)抗凋亡Bcl-xL，并且Bcl-xL的增強(qiáng)表達(dá)與更短的患者存活有關(guān)，而Bax的正調(diào)節(jié)伴隨更長(zhǎng)的存活。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療或殺傷表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞(具有Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常)的方法，該方法包括使細(xì)胞與本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物接觸。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療具有腫瘤的患者(具有Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常)的方法，該方法包括給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療或殺傷表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的方法，該方法包括(a)確定細(xì)胞的特征是否在于Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常，以及(b)如果細(xì)胞的特征在于Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常，則使細(xì)胞與本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物接觸。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療具有腫瘤的患者的方法，該方法包括(a)確定是否患者患有特征為Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常的腫瘤，以及(b)如果腫瘤的特征在于Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常，則給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種治療或殺傷表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的方法，該方法包括a)確定是否細(xì)胞的特征在于細(xì)胞周期蛋白Dl的過(guò)度表達(dá)或缺乏p53或GSK-313活性，以及b)如果細(xì)胞的特征在于細(xì)胞周期蛋白Dl的過(guò)度表達(dá)或缺乏p53或GSK-3P活性，則使細(xì)胞與本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物接觸。在一種方法中，細(xì)胞是患有癌癥(例如，胰腺癌)患者中存在的腫瘤細(xì)胞，并且該方法用來(lái)治療上述患者?？梢酝ㄟ^(guò)任何適宜的方法，例如基于免疫組織化學(xué)或核酸探針或引物的方式，來(lái)確定腫瘤或細(xì)胞是否具有Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常(或改變的細(xì)胞周期蛋白Dl或p53或GSK-313活性或水平)，并且可以檢測(cè)多個(gè)參數(shù)中的任何參數(shù)，如例如確定腫瘤或細(xì)胞是否包含(harbor)能夠產(chǎn)生Bcl_2家族成員調(diào)節(jié)異常(或改變的細(xì)胞周期蛋白Dl或p53或GSK-3P活性或水平)的突變，突變的Bcl-2家族成員(或細(xì)胞周期蛋白Dl或p53或GSK-3P)，Bcl-2家族成員(或細(xì)胞周期蛋白Dl或p53或GSK-313)的增加或減少表達(dá)(例如，通過(guò)確定蛋白水平和/或轉(zhuǎn)錄物)。在一個(gè)方面，調(diào)節(jié)異常包括抗凋亡Bcl-2家族成員(例如，Bcl-2、Bcl-xL)的增加的活性和/或促凋亡Bcl-2家族成員(例如，Bax等)的降低的活性。如在Giovannetti等人(2006)Mol.Cancer.Ther.5(6):1387-1395中所總結(jié)的，認(rèn)為凋亡途徑的調(diào)節(jié)可以是胰腺癌對(duì)抗癌化療治療(處理)僅顯示有限敏感性的原因之一。Fahy等人(BritishJournalofCancer(2003)89，391-397)研究了Bcl_2和Bax在化療敏感性中的調(diào)節(jié)。絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT的活化在胰腺癌中是常見的；其抑制可以使細(xì)胞對(duì)化療的凋亡效應(yīng)敏感。Fahy等人檢查了在胰腺癌細(xì)胞中NF-kB轉(zhuǎn)錄因子的活化和BCL-2基因家族的隨后的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。磷脂酰肌醇-3激酶或AKT的抑制導(dǎo)致Bcl-2的降低的蛋白水平和Bax的增加的蛋白水平。此外，AKT的抑制降低了NF-kB的功能，其能夠轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)Bcl-2基因。抑制該途徑對(duì)胰腺癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)水平幾乎沒有影響，但增加了化療的凋亡效應(yīng)。因此本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物可以有利地用來(lái)使表達(dá)BDSL或FAPP多肽的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞(例如，胰腺腫瘤細(xì)胞)敏感于用化療藥物的治療。藥劑通?？梢允侨魏嗡巹?，其要求細(xì)胞能夠經(jīng)受細(xì)胞凋亡以便是有效的。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，該藥劑是已知胰腺腫瘤或腫瘤細(xì)胞對(duì)其是或變得部分或完全抗性的藥劑。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物可以用來(lái)治療具有化療抗性、表達(dá)BDSL或FAPP多肽的腫瘤患者。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物可以用來(lái)治療具有表達(dá)BDSL和/或FAPP多肽的腫瘤患者，并連同化療藥物，通常是作為其機(jī)制的一部分所需要的藥物，以致它的細(xì)胞靶能夠經(jīng)受細(xì)胞凋亡(或?qū)?xì)胞凋亡沒有抗性)。可選地，腫瘤或患者已先前用化療藥劑加以治療和/或腫瘤對(duì)用化療藥劑進(jìn)行的治療具有抗性(即，在沒有用本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物進(jìn)行聯(lián)合治療的情況下)。在一個(gè)實(shí)施例中，尤其是關(guān)于胰腺癌的治療，藥劑是核苷類似物(例如，吉西他濱)。在另一個(gè)實(shí)施例中，藥劑是紫杉烷類化合物(taxane)(例如，紫杉醇和多西他賽以及其類似物等)。在另一個(gè)實(shí)施例中，藥劑是抗代謝物、烷化劑、細(xì)胞毒性抗生素或拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。雖然將明了，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和化療藥劑將經(jīng)常分開給予，但還涵蓋包含本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和化療藥劑的組合物。這樣的組合物可以用于本文描述的任何方法。在一個(gè)方面，因此本發(fā)明提供了一種使表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞對(duì)化療藥劑敏感的方法，該方法包括使細(xì)胞與本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物接觸。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療或殺傷表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的方法，該方法包括使細(xì)胞與本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和化療藥劑接觸。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療具有腫瘤的患者的方法，該方法包括聯(lián)合給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和化療藥劑。如在本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合"、"連同"或"組合療法"(可互換使用)是指這樣的情況，其中兩種或更多種藥劑(例如，本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物和化療藥劑)影響相同疾病的治療或預(yù)防。術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合"、"連同"或"組合療法"的使用并不限制將藥劑給予患有疾病的受治療者的次序。可以在給予患有疾病的受治療者第二療法以前(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、4536分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周以前)、同時(shí)、或隨后(例如，5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周、或12周以后)給予第一療法。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的化合物可以有效地靶向表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞，其中簡(jiǎn)單地借助于它們結(jié)合于細(xì)胞，即無(wú)需細(xì)胞毒性部分或誘導(dǎo)ADCC，所以它們特別可用于治療患有缺陷免疫系統(tǒng)的患者(其可以被說(shuō)成是具有"相對(duì)缺乏"的免疫細(xì)胞或免疫功能)。這樣的患者可以包括患有影響其免疫系統(tǒng)的疾病或病癥的患者，例如，先天或獲得性免疫缺陷病、HIV感染、淋巴瘤、白血病、慢性疲勞免疫功能障礙綜合癥、愛_巴病毒感染、病毒感染后疲勞綜合癥，或由于給予免疫抑制化合物，例如，連同移植物，用于治療障礙如自身免疫性疾病，或使用化療藥劑來(lái)治療癌癥。因此，本發(fā)明提供了一種治療患有癌癥的無(wú)免疫應(yīng)答患者的方法，該方法包括給予患者藥物有效量的本發(fā)明的抗原結(jié)合化合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，化合物是抗體。在其它實(shí)施方式中，抗體被衍生有細(xì)胞毒性部分以增強(qiáng)對(duì)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的直接殺傷。在某些實(shí)施方式中，該方法包括這樣的步驟，其中癌細(xì)胞的樣品是在給予步驟以前獲自患者，并且證實(shí)了化合物結(jié)合于和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖的能力。在一種實(shí)施方式中，藥物有效量是任何量，其足以誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞(例如，獲自患者的癌細(xì)胞)的凋亡或抑制其增殖。本發(fā)明還提供了組合物，例如，藥物組合物，其包括在任何適宜載體中的任何本發(fā)明的化合物、抗體(包括其片段和衍生物)，并且其含量可有效地抑制患者體內(nèi)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的增殖或活性、或有效地殺傷上述細(xì)胞。該組合物通常進(jìn)一步包括藥用載體。應(yīng)當(dāng)明了，本發(fā)明的將抗體和組合物給予患者的方法還可以用來(lái)治療動(dòng)物，或用來(lái)在用于人疾病的動(dòng)物模型中測(cè)試任何本文描述的方法或組合物的效力?？捎糜谶@些組合物的藥用載體包括但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白，如人血清白蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘氨酸，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠體二氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，基于纖維素的物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇以及羊毛脂。根據(jù)另一種實(shí)施方式，本發(fā)明的抗體組合物可以進(jìn)一步包括一種或多種另外的治療劑，其包括通常用于特定的治療用途(為此正給予抗體)的藥劑(例如，胰腺癌)。另外的治療劑將通常以典型地在單藥治療中該藥劑用于待治療的特定疾病或病癥的量而存在于組合物中。關(guān)于實(shí)體腫瘤治療，可以連同經(jīng)典方式，如手術(shù)、放射治療、化療等來(lái)使用本發(fā)明。因此本發(fā)明提供了組合療法，其中在手術(shù)或放射治療的同時(shí)、以前、或以后，使用結(jié)合BSDL或FAPP多肽的化合物；或在常規(guī)化療劑、放射治療劑或抗血管生成劑、或靶向免疫毒素的同時(shí)、以前或以后，將化合物給予患者?？梢砸詥我唤M合物或作為兩種不同的組合物(利用不同的給藥途徑)，將結(jié)合BSDL或FAPP多肽的化合物和抗癌藥劑同時(shí)給予患者。當(dāng)連同本發(fā)明的療法使用一種或多種藥劑(例如，抗癌藥劑)時(shí)，并不要求組合結(jié)果是當(dāng)分開進(jìn)行每種治療時(shí)所觀測(cè)到的效果的相加。雖然至少加性效應(yīng)通常是所期望的，但高于單一療法之一的任何增加的腫瘤細(xì)胞增殖效應(yīng)將是有利的。此外，并不特別要求組合治療呈現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)，雖然這當(dāng)然是可能和有利的。用結(jié)合BSDL或FAPP多肽的化合物進(jìn)行治療可以在其它抗胰腺癌藥劑治療以前或以后，例如間隔為數(shù)分鐘至數(shù)周和數(shù)月。因?yàn)楸景l(fā)明的結(jié)合BSDL或FAPP多肽的化合物直接對(duì)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞而不是主要依賴于免疫介導(dǎo)機(jī)制(例如，ADCC)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或抑制細(xì)胞增殖，所以預(yù)期，本發(fā)明的化合物可以連同已報(bào)道對(duì)免疫系統(tǒng)具有負(fù)面或抑制效應(yīng)的藥劑一起使用。例如，化療可以用來(lái)治療癌癥，包括胰腺癌。各種化療藥劑可以用于本文披露的組合治療方法。設(shè)想為示例性的化療藥劑包括干擾DNA復(fù)制、有絲分裂和染色體分離的藥劑，以及破壞多核苷酸前體的合成和保真度的藥劑。例如，藥劑包括烷化劑、抗代謝物、細(xì)胞毒性抗生素、長(zhǎng)春花生物堿、酪氨酸激酶抑制劑、金屬蛋白酶以及C0X-2抑制劑。已報(bào)道酪氨酸激酶抑制劑體內(nèi)對(duì)患者免疫反應(yīng)具有不利影響，并且已報(bào)道金屬蛋白酶抑制劑具有血液毒性。另外，化合物可以有效地用于無(wú)免疫應(yīng)答的患者，如患有AIDS的患者或患有其它免疫疾病的患者(例如，淋巴瘤、白血病)，或用于接受免疫抑制藥物的患者如環(huán)孢素、硫唑嘌呤(Imuran)、或皮質(zhì)類固醇，連同器官移植或作為對(duì)免疫疾病的治療如牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、或克羅恩病。仆洽驗(yàn)i會(huì)迷械予脂巾,ffl如本文證明的，本發(fā)明的二價(jià)抗體特別有效地檢測(cè)表達(dá)BDSL或FAPP多肽的細(xì)胞(例如，乳腺癌)，因?yàn)樵摽贵w當(dāng)具有二價(jià)形式時(shí)具有高親合力，而沒有對(duì)并不表達(dá)BDSL或FAPP多肽的組織的非特異性染色。因此這些抗體將有利地用于診斷、預(yù)后和/或預(yù)測(cè)涉及表達(dá)BDSL或FAPP多肽的細(xì)胞的病態(tài)，包括胰腺病變?nèi)缫认侔?、胰腺炎以及I型糖尿病、以及乳腺癌和心血管疾病。例如，利用本發(fā)明的抗體可以表征或評(píng)估患者體內(nèi)的胰腺(或乳腺)癌。這對(duì)于確定患者是否具有涉及表達(dá)BDSL或FAPP多肽的細(xì)胞的病理特征是有用的。該方法還可以用來(lái)確定是否具有這樣的病理特征的患者可以用對(duì)表達(dá)BDSL或FAPP的細(xì)胞有效的療法加以治療。例如，該方法可以用來(lái)確定是否患者將響應(yīng)于結(jié)合BDSL或FAPP的抗原結(jié)合化合物(例如，本發(fā)明的任何抗體)。因此本文描述的抗體可以用于檢測(cè)(優(yōu)選體外)胰腺病理特征，尤其是胰腺癌。這樣的方法將通常涉及使來(lái)自患者的生物樣品與根據(jù)本發(fā)明的抗體接觸并檢測(cè)免疫復(fù)合物的形成，其來(lái)自抗體與生物樣品之間的免疫反應(yīng)。優(yōu)選地，生物樣品是如通過(guò)活檢獲得的胰腺組織的樣品(用于免疫組織化學(xué)測(cè)定的組織切片)，或生物流體(例如，血清、尿、胰液或乳汁)?？梢灾苯油ㄟ^(guò)標(biāo)記根據(jù)本發(fā)明的抗體或間接通過(guò)添加揭示根據(jù)本發(fā)明的抗體(二抗、鏈霉親合素/生物素標(biāo)記等)的存在的分子來(lái)檢測(cè)復(fù)合物。例如，可以通過(guò)將抗體耦合于放射性或熒光標(biāo)記來(lái)完成標(biāo)記。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，這些方法是眾所周知的。當(dāng)檢測(cè)癌癥時(shí)，F(xiàn)APP或BDSL多肽存在于生物樣品中的陽(yáng)性確定將通常表明，患者對(duì)于胰腺病理特征(例如，胰腺癌)是陽(yáng)性的。因此，本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的抗體在用于制備可以體內(nèi)或體外用于檢測(cè)胰腺病理特征的診斷組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明的抗體還將可用于確定是否主體適合于用靶向表達(dá)FAPP或BSDL多肽的細(xì)胞、或靶向FAPP或BSDL多肽本身的治療藥劑(治療劑)進(jìn)行治療，或用于預(yù)測(cè)受治療者對(duì)上述治療的反應(yīng)。優(yōu)選地，治療藥劑是結(jié)合FAPP或BSDL多肽的抗原結(jié)合片段(例如，抗體、本發(fā)明的抗體)。本發(fā)明的抗體還將可用于評(píng)估具有癌癥的受治療者對(duì)用結(jié)合FAPP或BSDL多肽38的抗體進(jìn)行治療的反應(yīng)；這樣的方法將通常涉及評(píng)估是否患者具有表達(dá)FAPP或BSDL多肽(由本發(fā)明的抗體結(jié)合)的癌細(xì)胞，F(xiàn)APP或BSDL多肽的表達(dá)表明響應(yīng)受治療者?；颊呔哂斜磉_(dá)FAPP或BDSL的癌細(xì)胞的陽(yáng)性確定表明，患者將是用結(jié)合FAPP或BSDL多肽的抗體(例如，本發(fā)明的抗體)進(jìn)行治療的陽(yáng)性響應(yīng)者。響應(yīng)受治療者的鑒定還使得這些方法可以用于治療具有癌癥的受治療者。還可以評(píng)估是否患者具有表達(dá)FAPP或BSDL多肽(由本發(fā)明的抗體結(jié)合)的癌細(xì)胞，被本發(fā)明的抗體結(jié)合的FAPP或BSDL多肽的表達(dá)表明了響應(yīng)受治療者，以及用結(jié)合FAPP或BSDL多肽的抗體(例如，本發(fā)明的抗體)治療所述受治療者，其癌細(xì)胞表達(dá)FAPP或BSDL多肽?？梢岳缋帽疚拿枋龅脑\斷方法，如通過(guò)從患者獲得生物樣品并使樣品與根據(jù)本發(fā)明的抗體接觸，然后檢測(cè)免疫復(fù)合物的形成(其來(lái)自所述抗體與所述生物樣品之間的免疫反應(yīng))，來(lái)評(píng)估是否患者具有表達(dá)FAPP或BSDL多肽的癌細(xì)胞。生物樣品可以是胰腺組織(活檢)的樣品或生物流體(例如，血清、尿、胰液以及乳汁)。還涵蓋用于胰腺病理特征、尤其是胰腺癌的診斷或預(yù)后試劑盒，其包括根據(jù)本發(fā)明的抗體?？蛇x地，試劑盒包括用于診斷或預(yù)后的本發(fā)明的抗體、以及用于治療的本發(fā)明的抗體。所述試劑盒可以另外包括借助其檢測(cè)免疫復(fù)合物(來(lái)自生物樣品與本發(fā)明的抗體之間的免疫反應(yīng))的方式，尤其是使得能夠檢測(cè)所述抗體的試劑。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了的，化療藥劑的適當(dāng)劑量將通常大約是已經(jīng)在臨床治療中采用的量，其中單獨(dú)或連同其它化療藥劑來(lái)給予化療藥劑。本發(fā)明的另外的方面和優(yōu)點(diǎn)披露在以下實(shí)驗(yàn)部分中，其應(yīng)被看作是說(shuō)明性的而不是限制本申請(qǐng)的范圍。實(shí)施例材料和方法抗體和其它試劑POD標(biāo)記的抗兔IgG、POD標(biāo)記的抗小鼠IgG、以及對(duì)于兔和小鼠免疫球蛋白的其它抗體來(lái)自RocheDiagnostics(Manheim，德國(guó))、Calbiochem(SanDiego，CA)或CellSignaling(Beverly,MA)。過(guò)氧化物酶(POD)軛合山羊抗兔IgG和抗小鼠IgG分別來(lái)自CellSignaling和Calbiochem(SanDiego，CA)。相對(duì)于肌動(dòng)蛋白和不相干的小鼠卡巴IgM的抗體、蛋白酶抑制劑的混合物、碘化丙啶以及阿非迪霉素來(lái)自Sigma(StLouis，MO)。相對(duì)于Bcl-2的抗體獲自SantaCruzBiotechnology(SantaCruz，CA)。其它抗體(切割的半胱天冬酶_3(Asp175)、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-7(Aspl75)、半胱天冬酶_7、切割的半胱天冬酶_9(Asp330)、半胱天冬酶_9、切割的PARP(Asp214)、PARP以及Bcl-2來(lái)自CellSignaling(Beverly,MA)。RPMI1640、DMEM培養(yǎng)基、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶-EDTA以及液體分離非酶購(gòu)買自C咖brex(C咖brexBiosciences,Emerainville，法國(guó))或lxmza(XeVallois-Perret，法國(guó))。半胱天冬酶抑制劑來(lái)自Alexis(SanDiego，CA)或Calbiochem。針對(duì)Bax和E-f丐粘著蛋白的抗體獲自SantaCruzBiotechnology(SantaCruz，CA)。相對(duì)于P-聯(lián)蛋白的抗體獲自Abeam(Cambridge,區(qū))。異硫氰酸熒光素(FITC)軛合的山羊抗小鼠IgM來(lái)自Sigma。Alexa軛合的山羊抗兔IgG和抗小鼠IgG來(lái)自Molecularprobes(Carlsbad,CA)。串珠鐮孢菌素Bl、串珠鐮孢菌素B2、L_環(huán)絲氨酸、苯基_2_癸酰基氨基-3-嗎啉基-1-丙醇(PDMP)、甲基-環(huán)糊精(MPCD)、菲律賓菌素、TritonX_100、3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-溴化四唑(MTT)、碘化丙啶(PI)以及阿非迪霉素獲自Sig腿。蛋白酶抑制劑混合物片劑來(lái)自RocheDiagnostic(Meylan，法國(guó))。DAPI(4，，6-二脒基-2-苯基吲哚，二鹽酸鹽)來(lái)自Promega(Madison，WI)。單克隆抗體mAbl6D10，其識(shí)別肽并且可以識(shí)別胚胰腺泡蛋白(FAPP)的0_糖基化C端結(jié)構(gòu)域，胰腺膽鹽依賴性脂肪酶(BSDL)的一種癌胚糖同種型(glycoisoform，僅與附著聚糖的數(shù)目或種類不同的蛋白的同種型)，以及多克隆抗體(pAbL64)，其針對(duì)人BSDL(和FAPP)，是在我們的實(shí)驗(yàn)室制備，如在W02005/095594中所描述的。所有其它產(chǎn)品均具有最好的可獲得等級(jí)。細(xì)胞和試劑在補(bǔ)充有丙酮酸鈉(lmM)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100iig/ml)以及10%熱滅活的FCS(PANbiotech)的DMEM(Gibco)中培養(yǎng)HEK293T細(xì)胞。在補(bǔ)充有丙酮酸鈉(lmM)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100yg/ml)以及10%熱滅活的FCS(PANbiotech)的RPMI(Gibco)中培養(yǎng)S0J-6細(xì)胞。Lipofectamine2000試劑、Trizol、SuperscriptII逆轉(zhuǎn)錄酶以及pcDNA3.1載體購(gòu)自Invitrogen。細(xì)包培養(yǎng)細(xì)胞系(S0J-6和Panc-l)來(lái)自人胰(腺)癌。在37。C下在補(bǔ)充有10%FCS、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100iig/ml)、以及兩性霉素B(fongizone)(0.1%)的RPMI1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)S0J-6細(xì)胞，其組成性表達(dá)FAPP。在37t:下在補(bǔ)充有10XFCS、谷氨酰胺(2Mm)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100iig/ml)、以及兩性霉素B(0.1%)的DMEM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并不表達(dá)FAPP的PANC-1細(xì)胞。在37t:下在補(bǔ)充有10%滅活FCS、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100iig/ml)、以及兩性霉素B(0.1%)的RPMI1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)表達(dá)mAbl6D10的16D10雜交瘤。細(xì)胞死亡分析用在具有滅活FCS的RPMI1640中的mAbl6D10或順鉑處理以后，收獲細(xì)胞，用冰冷PBS洗滌，然后在室溫下在黑暗中再懸浮在Isoflow緩沖液中的冷碘化丙啶溶液(0.5mg/ml)中IO分鐘。利用CoulterFACSCalibur進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖如先前描述的(Mosmannetal.，1983JImmunolMethods,65(1-2):55-63)，利用MTT測(cè)定來(lái)確定細(xì)胞增殖。簡(jiǎn)單地說(shuō)，在96孔培養(yǎng)板中在適當(dāng)?shù)陌?0%FCS的完全培養(yǎng)基中在亞匯合時(shí)接種細(xì)胞。通過(guò)具有10X滅活FCS的新鮮培養(yǎng)基更換培養(yǎng)基24小時(shí)，包括增加濃度的針對(duì)FAPP的抗體(pAbL64、mAbJ28以及mAbl6D10)。用PBS洗滌細(xì)胞并在完全培養(yǎng)基中用100ii1的MTT(0.5mg/ml)溫育3小時(shí)，用PBS洗滌并最后在37。C下用DMSO溫育30分鐘。通過(guò)利用MR5000微量板分光光度計(jì)在550nm處測(cè)量吸光度來(lái)確定細(xì)胞生長(zhǎng)。一式三份地進(jìn)行所有獨(dú)立的確定并與對(duì)照進(jìn)行比較。用于CD107轉(zhuǎn)移和IFN-Y生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀測(cè)定。單獨(dú)或在有recl6D10(30iig/mL)或rituxan(B細(xì)胞單克隆抗體)(10iig/mL)存在的條件下，以等于1的效應(yīng)子/靶比率，使解凍純化的人NK細(xì)胞(用100UI/mL的IL-2剌激或未剌激過(guò)夜)與S0J-6或B221細(xì)胞系進(jìn)行混合。然后在37t:下在有FITC軛合的抗CD107mAb(BectonDickinson)和莫能星(sigma)存在的條件下溫育細(xì)胞4小時(shí)。在溫40育以后，用包含2mMEDTA的PBS洗滌細(xì)胞以破壞細(xì)胞結(jié)合物并染色細(xì)胞外標(biāo)記(PC5軛合的抗CD56和PC7軛合的抗CD3，其購(gòu)買自Beckmancoulter)。然后細(xì)胞被固定和透化，其中利用IntraPr印試劑(BeckmanCoulter)。禾U用購(gòu)買自BectonDickinson的PE軛合的抗IFN-y來(lái)揭示細(xì)胞內(nèi)IFN-y。然后用FACScanto(BectonDickinson)來(lái)分析樣品。流式細(xì)胞術(shù)在以下條件下，通過(guò)間接熒光來(lái)進(jìn)行在S0J-6和PANC-1細(xì)胞表面上的抗原的檢測(cè)。通過(guò)在37t:下用非酶促解離液(Calbiochem)處理15分鐘來(lái)從培養(yǎng)板釋放細(xì)胞。在4t:下進(jìn)行所有隨后的步驟。用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗滌細(xì)胞，用PBS中的2X多聚甲醛固定15分鐘，然后用PBS中的1%BSA洗滌15分鐘。將抗原暴露于特異性抗體2小時(shí)，用PBS洗滌，并且最后用適當(dāng)?shù)腇ITC標(biāo)記的二抗溫育45分鐘。然后洗滌細(xì)胞，再懸浮在isoflow緩沖液中，并用CoulterFACSCalibur裝置加以分析。利用冷PBSlx/BSA0.2%/疊氮鈉0.05%緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。在1小時(shí)期間并在4t:下，利用不同抗體進(jìn)行染色到圓形96孔板中，其中使用5X104個(gè)細(xì)胞/孔。然后在用第二試劑溫育以前洗滌細(xì)胞兩次。在兩次洗滌以后，在收獲以前，將細(xì)胞再懸浮到PBS1X/甲醛1%中。用FACScan(BectonDickinson,SanJose，CA)獲得染色并利用Flowjo軟件分析結(jié)果。然后用mAbl6D10或不相關(guān)的IgM(用作陰性對(duì)照)溫育S0J-6細(xì)胞，其中S0J-6細(xì)胞被5g/ml阿非迪霉素(真核細(xì)胞核DNA復(fù)制的可逆抑制劑，其在S早期阻斷細(xì)胞周期)預(yù)處理6小時(shí)或未經(jīng)預(yù)處理。借助于非酶促細(xì)胞解離溶液從培養(yǎng)板釋放細(xì)胞，用PBS+A洗滌，在-2(TC下用70%乙醇固定，然后用PBS+洗滌。將細(xì)胞再懸浮在isoflow緩沖液中的400iig/ml碘化丙啶溶液中，然后在室溫下溫育30分鐘，如已經(jīng)描述的[Mi-Lianetal.，2004]。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布并通過(guò)ModFit軟件(VeritySoftwareHouse,Inc.，Topsham，ME)進(jìn)行分析。利用分別在488nm處和在610nm處的激發(fā)和發(fā)射來(lái)記錄單一事件的紅色熒光，以測(cè)量DNA指數(shù)。從16D10雜交瘤提取RNA和制備cDNA將16D10雜交瘤細(xì)胞(5Xl(f個(gè)細(xì)胞)再懸浮在lml的Trizol試劑中。通過(guò)添加200iU氯仿來(lái)進(jìn)行RNA提取。在離心(15分鐘，13，000rpm)以后，借助于500異丙醇從水相沉淀RNA。在溫育(10分鐘，RT)和離心(10分鐘，13，000)以后，用70%乙醇洗滌RNA并再離心(5分鐘，13，000rpm)。將RNA再懸浮在H20(無(wú)核糖核酸酶水)中。利用SuperscriptII逆轉(zhuǎn)錄酶來(lái)獲得cDNA，其中使用2yg的特異性RNA并按照制造商的說(shuō)明。通過(guò)PCR反應(yīng)來(lái)檢查cDNA質(zhì)量，其中使用5'GTGAAGGTCGGTGTGAACGGATT(SEQIDNO:17)和3，CTAAGCAGTTGGTGGTGCAGGAT(SEQIDNO:18)寡核苷酸以擴(kuò)增GAPDH。16D10抗體的VH和VL域的克隆通過(guò)PCR從cDNA擴(kuò)增16D10抗體的VL-Ck域，其中使用5'AAGCTAGCATGGAATCACAGACTCAGGCT(SEQIDNO:19)和3，AAGCGGCCGCCTAACACTCATTTCTGTTGAAG(SEQIDNO:20)寡核苷酸。在TA克隆和測(cè)序以后，將序列克隆到在NheI與NotI限制位點(diǎn)之間的pcDNA3.1載體中。通過(guò)PCR從cDNA擴(kuò)增16D10抗體的VH-CH1域，其中使用5'AAGAATTCATGGAATGGAGCTGGGTCTTTC(SEQIDNO:21)和3'AAGGTACCTGGAATGGGCACATGCAGATC(SEQIDNO:22)寡核苷酸。在TA克隆和測(cè)序以后，將序列克隆到在EcoRI與Kpnl限制位點(diǎn)之間的958cosFClink載體中。轉(zhuǎn)染在轉(zhuǎn)染到75em2燒瓶(5Xl()6個(gè)細(xì)胞/燒瓶)以前24小時(shí)，將HEK-293T細(xì)胞接種在沒有抗生素的DMEM中。使用15iig的pcDNA3.1/VL-Ck構(gòu)建物和15yg的958cosFClink/VH-CH1構(gòu)建物進(jìn)行轉(zhuǎn)染，其中按照制造商的說(shuō)明使用Lipofectamine2000。為確保用于轉(zhuǎn)染的DNA純度，使用了來(lái)自Qiagen的Maxi制備的無(wú)內(nèi)毒素試劑盒。所使用的Lipofectamine:DNA比率固定為2:1。在轉(zhuǎn)染后的第4、8、以及12天收獲培養(yǎng)上清液。抗體的純化利用A蛋白瓊脂糖凝膠CL-4B珠(GEHealthcare)從上清液純化16D10。在4°C和旋轉(zhuǎn)下進(jìn)行批量純化。然后在被裝載到柱上以前，在fC和1500rpm下對(duì)珠進(jìn)行離心5分鐘。在IXPBS中充分洗滌以后，在4t:下相對(duì)于IXPBS緩沖液透析過(guò)夜以前，利用甘氨酸0.1MpH3緩沖液洗脫抗體。SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡在6孔培養(yǎng)板的包含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)基中生長(zhǎng)S0J-6細(xì)胞。在亞匯合時(shí)，除去培養(yǎng)基并用包含10%滅活FCS的新鮮RPMI培養(yǎng)基更換24小時(shí)。然后用mAbl6D10或順鉑溫育S0J-6細(xì)胞24小時(shí)。在溫育結(jié)束時(shí)，用冰冷PBS(沒有Na+和Mg++)洗滌細(xì)胞三次，收獲然后通過(guò)離心沉淀。洗滌沉淀物兩次并在4t:下溶解在0.5ml的裂解緩沖液(10mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl、1%TritonX-IOO、lmM苯甲脒以及磷酸酶抑制劑)中。在溶解以后，通過(guò)在4t:下以10，000g離心10分鐘來(lái)澄清勻漿物。保存一個(gè)等分部分，用于蛋白測(cè)定，其中利用二辛可寧酸測(cè)定(Pierce，Rockford，IL)。將在還原SDS緩沖液中的蛋白質(zhì)(50iig/泳道)分離到10、12、或15%聚丙烯酰胺上，其中借助于0.1%SDS(按照待分離蛋白質(zhì)的分子量范圍)。在電泳遷移以后，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行銀染色?？商鎿Q地，利用MiniTransblot電泳細(xì)胞(BioRad，Hercule，OR)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝化纖維素膜上，并通過(guò)利用適當(dāng)?shù)囊豢购投箒?lái)免疫檢測(cè)轉(zhuǎn)移的蛋白。在洗滌以后，按照制造商的說(shuō)明(RocheDiagnostics，瑞士)用化學(xué)發(fā)光底物來(lái)顯影膜。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)省略一抗或通過(guò)利用非免疫血清來(lái)包括對(duì)照。細(xì)胞凋亡和半胱天冬酶活性在按照制造商的說(shuō)明在培養(yǎng)基中添加最終濃度為10iiM的CaspACEFITC-VAD-fmk原位標(biāo)記(Promega)以前，用在包含滅活FCS的RPMI中的mAbl6D10或小鼠IgM處理生長(zhǎng)在8孔板(聚苯乙烯容器，BDFalcon)中的細(xì)胞24小時(shí)。然后用PBS洗滌細(xì)胞，在2%多聚甲醛中固定15分鐘，然后再次洗滌。在半胱天冬酶作用于FITC-VAD-fmk以后，凋亡細(xì)胞變成發(fā)熒光的，然后在熒光顯微鏡下對(duì)10個(gè)現(xiàn)場(chǎng)隨機(jī)檢查的收集物一式三份確定熒光細(xì)胞的數(shù)目。用于實(shí)施例14的細(xì)胞凋亡測(cè)定(通過(guò)嵌合重組16D10進(jìn)行的細(xì)胞凋亡)在開始實(shí)驗(yàn)前72小時(shí)，將S0J-6細(xì)胞(20.104個(gè)細(xì)胞/孔)接種到24孔板上。用20iig/ml的16D10IgM、或20yg/ml的另外重組的16D10IgGl抗體(該抗體包含16D10可變區(qū)，其分別連接融合于重鏈和輕鏈的人IgGl恒定區(qū)和人卡巴輕鏈區(qū))、25iig/ml衣霉素或50iig/ml衣霉素溫育細(xì)胞。在按照制造商的說(shuō)明利用膜聯(lián)蛋白V-FITCApoptosisDetectionKitI(BDPharmingen)培養(yǎng)24小時(shí)以后，進(jìn)行膜聯(lián)蛋白V/PI染色。用FACScan(BectonDickinson,SanJose，CA)獲得染色，然后利用Flowjo軟件來(lái)分析結(jié)果。核染色在用mAb16D10或順鉑處理以后，用冰冷PBS洗滌細(xì)胞，在-2(TC下用70%乙醇固定和透化5分鐘，然后在室溫下用在PBS中的稀釋1/1000的DAPI溶液染色1分鐘。然后用PBS洗滌細(xì)胞。通過(guò)熒光顯微鏡檢查了細(xì)胞的核形態(tài)。統(tǒng)計(jì)分析所有數(shù)據(jù)表示為平均值±SD。利用非配對(duì)學(xué)生t檢驗(yàn)來(lái)確定組之間的顯著性差異。*P<0.01的數(shù)值被視為統(tǒng)計(jì)顯著的。實(shí)施例1-用mAbl6D10處理的胰腺SOJ-6細(xì)胞經(jīng)受通過(guò)細(xì)胞凋亡的細(xì)胞死亡24小時(shí)以上如本文描述的，研究了mAb16D10剌激SOJ-6細(xì)胞的凋亡的細(xì)胞死亡的能力。觀察到，抗體16D10導(dǎo)致SOJ-6細(xì)胞的凋亡(與RPMI和小鼠IgM相比，如圖1所示，y軸表示凋亡細(xì)胞的數(shù)目/cm2)。實(shí)施例2-16D10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通過(guò)半胱天冬酶_3、半胱天冬酶_8、以及半胱天冬酶_9活化來(lái)介導(dǎo)在該實(shí)驗(yàn)中，借助于作用于胰腺SOJ-6細(xì)胞的CaspAceFITC-VAD-fmk來(lái)測(cè)量由16D10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，其中用或不用半胱天冬酶抑制劑(半胱天冬酶9:Z-LEHD-fmk、半胱天冬酶8:Z-IEDT-fmk、半胱天冬酶3:Z-DEVED-fmk、以及半胱天冬酶混合物Z-VAD-fmk)對(duì)胰腺S0J-6細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，然后用mAb16D10對(duì)其進(jìn)行處理。圖2表明，mAbl6D10通過(guò)半胱天冬酶_3、半胱天冬酶-8以及半胱天冬酶-9來(lái)剌激細(xì)胞凋亡。還可以通過(guò)DAPI染色來(lái)觀察由mAbl6D10誘導(dǎo)的S0J-6細(xì)胞的凋亡。結(jié)果示在圖3中，其中RPMI沒有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，順鉑誘導(dǎo)低水平的細(xì)胞凋亡，而抗體16D10誘導(dǎo)顯著水平的細(xì)胞凋亡，如通過(guò)圖3中的細(xì)胞上的輕著色所觀察到的，其對(duì)應(yīng)于核碎裂。實(shí)施例3-通過(guò)Bcl-2蛋白家族來(lái)控制16D10利用如本文描述的SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡，觀察到，用16D10處理細(xì)胞誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2的減少并伴隨Bax蛋白的增加，這表明半胱天冬酶活化受Bcl-2蛋白家族的控制。該實(shí)驗(yàn)還證明了，16D10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是經(jīng)由半胱天冬酶8和9、以及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)切割加以介導(dǎo)。圖4示出在凝膠上的結(jié)果，其中最左邊的泳道表示在RPMI中的S0J-6細(xì)胞，中間的泳道表示用抗體16D10溫育的S0J-6細(xì)胞，而最右邊的泳道表示用順自溫育的S0J-6細(xì)胞。實(shí)施例4-mAb16D10,但不是抗體pAbL64和mAbJ28，其均針對(duì)BDSL和/或FAPP，可以抑制胰腺腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)利用本文描述的MTT測(cè)定來(lái)評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)。圖5示出了用增加濃度的多克隆抗體pAbL64(其識(shí)別人BDSL和/或FAPP)對(duì)S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞的處理。圖5表明，pAbL64不能引起細(xì)胞生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)X)。圖6示出了用增加濃度的多克隆抗體J28對(duì)S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞的處理，其中多克隆抗體J28識(shí)別人BDSL和/或FAPP，但本發(fā)明的發(fā)明人先前已證明其結(jié)合來(lái)自抗體16D10的BDSL和/或FAPP上的不同表位。圖6表明，J28不能引起細(xì)胞生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖7示出了用增加濃度的多克隆抗體16D10(IgM)(其識(shí)別人BDSL和/或FAPP)對(duì)S0J-6或PANC-1胰腺腫瘤細(xì)胞的處理。圖7表明，16D10不能引起PANC-1細(xì)胞(其并不表達(dá)16D10抗原)生長(zhǎng)或數(shù)目的降低，但卻引起S0J-6細(xì)胞(其表達(dá)FAPP)生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖8示出了用增加濃度的對(duì)照IgM抗體對(duì)S0J-6或PANC-1胰腺腫瘤細(xì)胞的處理，其表明對(duì)照IgM抗體既不能引起PANC-l細(xì)胞也不能引起S0J-6細(xì)胞的生長(zhǎng)或數(shù)目的降低(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖9示出了用增加濃度的抗體16D10或?qū)φ誌gM抗體對(duì)S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞的處理，其表明16D10引起細(xì)胞減少而對(duì)照IgM抗體則沒有(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)％)。圖IO示出了用增加濃度的抗體16D10或?qū)φ誌gM抗體、以及各種濃度的甲基-b-環(huán)糊精(MBCD)(具有或沒有抗體16D10)對(duì)S0J-6胰腺腫瘤細(xì)胞的處理，其表明16D10引起細(xì)胞的減少而對(duì)照IgM抗體則沒有(x軸是mAb濃度而y軸是細(xì)胞生長(zhǎng)X)。當(dāng)連同16D10—起使用時(shí)MBCD可降低或消除抗體16D10的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活性。這些數(shù)據(jù)表明，mAb16D10剌激凋亡的細(xì)胞死亡的能力取決于16D10抗原在膜脂筏微結(jié)構(gòu)域中的定位。實(shí)施例5-mAbl6D10調(diào)節(jié)S0J-6細(xì)胞的細(xì)胞周期以及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)。我們接著希望知道是否mAbl6D10誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是由于(部分地)細(xì)胞周期的阻滯。通過(guò)觀測(cè)在沒有或用阿非迪霉素預(yù)處理、沒有或用mAbl6D10處理S0J-6細(xì)胞以后的DNA分布，評(píng)估了在處理以后的S0J-6細(xì)胞的細(xì)胞周期分布。每個(gè)實(shí)驗(yàn)一式三份進(jìn)行三次。借助于流式細(xì)胞術(shù)，我們使用了特異性DNA標(biāo)記、碘化丙啶來(lái)確定細(xì)胞周期的不同時(shí)期。用mAbl6D10處理S0J-6細(xì)胞導(dǎo)致Gl/S阻滯(Gl/S:96%)和凋亡細(xì)胞的增加(6%)，而在G2/M期的細(xì)胞百分比降低(4%)。當(dāng)通過(guò)阿非迪霉素使細(xì)胞在G1/S期同步時(shí)，證實(shí)了這些結(jié)果。確實(shí)，在阿非迪霉素處理以后，還觀察到細(xì)胞從G2/M到G1/S期以及從G1/S到凋亡的移動(dòng)。在后一種情況下，因?yàn)榧?xì)胞被封閉在Gl/S期，所以移動(dòng)發(fā)生在從S期到G0/G1期以及從G0/G1期到細(xì)胞凋亡。我們對(duì)PANC-1細(xì)胞進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)，并在mAbl6D10處理以后沒有觀察到對(duì)細(xì)胞周期的影響。接著分析了不同細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白、尤其是P53和細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。正如預(yù)期的，用mAbl6D10處理細(xì)胞增加了p53的表達(dá)并降低了細(xì)胞周期蛋白Dl的表達(dá)(圖11)。因?yàn)橥ㄟ^(guò)GSK-3P可以直接調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白Dl表達(dá)(Diehletal.，1998GenesDev.12(22):3499-511)，所以我們接著集中于在用mAbl6D10挑戰(zhàn)以后這種激酶在S0J-6細(xì)胞中的表達(dá)水平。雖然總GSK-3P的表達(dá)是不變的，但在用mAbl6D10溫育細(xì)胞以后觀察到磷酸-GSK-313(無(wú)活性形式)的減少(圖11)。這些結(jié)果一起表明，用mAbl6D10對(duì)細(xì)胞的處理會(huì)誘導(dǎo)GSK-3P的活化，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白D1的降解并導(dǎo)致細(xì)胞在G1/S期的阻滯。實(shí)施例6-膜筏結(jié)構(gòu)的組織破壞降低了mAbl6D10的抗增殖效應(yīng)。多個(gè)研究已表明，BSDL與人胰腺S0J-6腫瘤細(xì)胞表面上的筏脂域有關(guān)(Aubert-Joussetetal.，2004Structure,12(8):1437-47)。用良好證明的藥物進(jìn)行的膜脂域的藥理操作已用來(lái)研究脂筏在許多系統(tǒng)中的作用。為此，我們使用了甲基_13_環(huán)糊精(MI3CD)和菲律賓菌素，描述分別用來(lái)消耗膜筏中的膽固醇或螯合膽固醇的藥物(Chenetal.，2002JBiolChem.;277(51):49631-7)。如圖12A所示，在有甲基_P-環(huán)糊精和菲律賓菌素存在的條件下mAbl6D10的抗增殖效應(yīng)會(huì)降低。鞘脂還參與筏結(jié)構(gòu)；因而，我們使用了(糖)鞘脂生物合成的代謝抑制劑(Aubert-Joussetetal.，2004)。雖然以有效濃度(10iiM)進(jìn)行了試驗(yàn)，但L-環(huán)-絲氨酸(LCS)(絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的抑制劑)和串珠鐮孢菌素1或2(都是二氫神經(jīng)酰胺合成酶的抑制劑)均不干擾mAbl6D10的抗增殖效應(yīng)(圖12B)。我們接著試驗(yàn)了苯基_癸?；鶃啺被鵢嗎啉基_丙醇(PDMP)，鞘糖脂合成的一種抑制劑，其作用于鞘脂合成的最后步驟(Lefrancoisetal.，2002，JBiolChem.277(19):17188-99)。如圖12B所示，PDMP削弱了mAbl6D10對(duì)SOJ-6細(xì)胞增殖的影響。這些結(jié)果表明，16D10抗原可能位于富含膽固醇的微結(jié)構(gòu)域中，以及16D10抗原與這些筏微結(jié)構(gòu)域的這種締合可以是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡所必要的。然而，這些微結(jié)構(gòu)域的新合成似乎并不涉及這種途徑。因此，富含膽固醇的微結(jié)構(gòu)域的完整性是在胰腺腫瘤細(xì)胞表面存在16D10抗原的先決條件。實(shí)施例7-mAbl6D10在SOJ-6細(xì)胞中調(diào)節(jié)E_鈣粘著蛋白表達(dá)和P_聯(lián)蛋白定位。Roitbak等人(2005)說(shuō)明了，P_聯(lián)蛋白和E_鈣粘著蛋白復(fù)合物與在人腎上皮細(xì)胞中的脂筏標(biāo)記窖蛋白-l有關(guān)。這些分子可以將發(fā)信號(hào)的作用賦予這些脂筏域。進(jìn)行免疫印跡以檢查通過(guò)胰腺腫瘤細(xì)胞進(jìn)行的E-鈣粘著蛋白和P-聯(lián)蛋白的表達(dá)。如圖13所示，與用不相關(guān)的IgM處理的細(xì)胞相比，來(lái)自用mAbl6D10處理的SOJ-6細(xì)胞的裂解液呈現(xiàn)高E-鈣粘著蛋白表達(dá)。通過(guò)免疫熒光顯微鏡證明了響應(yīng)于mAbl6D10處理在SOJ-6細(xì)胞的質(zhì)膜處E-鈣粘著蛋白的過(guò)度表達(dá)，其中用或不用mAbl6D10處理SOJ-6細(xì)胞24小時(shí)，洗滌，用多聚甲醛固定，并用1XBSA和0.05X皂甙(在PBS中)飽和，在二抗FITC488nm或Alexa594nm以后，用一抗(抗E-鈣粘著蛋白、抗P_聯(lián)蛋白、抗磷酸_P_聯(lián)蛋白)進(jìn)一步溫育。用或未用mAbl6D10處理的PANC-1細(xì)胞并不在它們的質(zhì)膜處表達(dá)E_鈣粘著蛋白(數(shù)據(jù)未示出)。此結(jié)果提示，E-鈣粘著蛋白的過(guò)度表達(dá)依賴于在細(xì)胞表面存在16D10抗原以及用mAbl6D10進(jìn)行的處理。然而，mAbl6D10并不誘導(dǎo)P_聯(lián)蛋白表達(dá)的顯著變化(圖13)。為了確定是否用mAbl6D10進(jìn)行的處理可以影響P_聯(lián)蛋白的定位，接著進(jìn)行了熒光顯微鏡分析。在用mAbl6D10處理S0J-6細(xì)胞以后在胞質(zhì)室中發(fā)現(xiàn)P-聯(lián)蛋白，而在未處理細(xì)胞中其定位在質(zhì)膜處。許多研究已表明，在沒有Wnt信號(hào)的情況下，P-聯(lián)蛋白的殘基的磷酸化引導(dǎo)此蛋白至降解，其中通過(guò)遍在蛋白依賴性蛋白酶體途徑(Aberleetal.，1997EMB0J.16(13):3797-804和Orfordetal.，1997Bio1Chem.272(40):24735-8)。確實(shí)，在用mAbl6D10處理的細(xì)胞中P-聯(lián)蛋白被磷酸化(圖13)，這提示P-聯(lián)蛋白不能易位到細(xì)胞核以激活靶基因如細(xì)胞周期蛋白D1而是應(yīng)被降解。此外，e-聯(lián)蛋白可以由GSK-3P加以調(diào)節(jié)，其中GSK-3P本身在用mAbl6D10處理的細(xì)胞中被激活(圖ll)。這些結(jié)果證實(shí)了我們先前的實(shí)驗(yàn)，其表明mAbl6D10誘發(fā)在Gl/S期的細(xì)胞周期阻滯。這些結(jié)果表明，mAbl6D10滅活13-聯(lián)蛋白并恢復(fù)E-鈣粘著蛋白在人胰腺腫瘤細(xì)胞中的直接或間接表達(dá)。最后，我們希望確定是否在筏微結(jié)構(gòu)域中E-鈣粘著蛋白、!3-聯(lián)蛋白、以及16D10抗原的締合是mAbl6D10誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡所需要的(圖13)。實(shí)施例8-S0J-6而不是PANC-1細(xì)胞表達(dá)由16D10識(shí)別的抗原如本文說(shuō)明的，在S0J-6細(xì)胞中抗體16D10能夠抑制細(xì)胞生長(zhǎng)但在PANC-1細(xì)胞中則不能。進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)以研究是否由16DIO識(shí)別的抗原存在于細(xì)胞表面上。結(jié)果示于圖14和15，其分別表示S0J-6細(xì)胞和PANC-1細(xì)胞。在圖14中，發(fā)現(xiàn)抗體16D10結(jié)合存在于S0J-6細(xì)胞上的抗原，而在圖15中，抗體16D10并不結(jié)合存在于PANC-1細(xì)胞上的抗原。在每種情況下，將16D10結(jié)合與陰性對(duì)照和對(duì)照小鼠IgM(Sigma)進(jìn)行比較。x軸表示熒光強(qiáng)度而y軸表示計(jì)數(shù)。45實(shí)施例9-在HEK293T細(xì)胞中二價(jià)16D10嵌合抗體的生產(chǎn)通過(guò)雜交瘤DNA的RT-PCR擴(kuò)增獲得對(duì)應(yīng)于小鼠16D10抗體的VH和VL鏈的cDNA。H:借助于人IgGl-Fc，VH和CHI域被擴(kuò)增，克隆，測(cè)序以及亞克隆到讀框內(nèi)的COS-fc-link載體中。L:VL和Ck域被擴(kuò)增，克隆，測(cè)序以及亞克隆到pcDNA3表達(dá)載體中。產(chǎn)生了一種嵌合抗體，其包括小鼠16D10抗體的可變(Fab2'樣)域和人IgGl抗體的恒定(Fc)域。該抗體被稱作recl6D10。在HEK293T細(xì)胞中瞬時(shí)(通過(guò)958C0S-Fc-link-VH-16D10和pcDNA3-VL-16D10載體的共轉(zhuǎn)染)或穩(wěn)定地(通過(guò)利用pcDNA6-Fc-VH-16D10和pcDNA3-VL_16D10載體的共轉(zhuǎn)染)產(chǎn)生抗體。在Prot-A純化以后，通過(guò)SDS-PAGE分析來(lái)確認(rèn)所產(chǎn)生抗體的純度和產(chǎn)率，并通過(guò)對(duì)SOJ-6細(xì)胞進(jìn)行的FACS來(lái)確認(rèn)活性。參見圖16、圖17。用胰蛋白酶溫育IgM16D10抗體和嵌合recl6D10，以研究其對(duì)結(jié)合于SOJ-6細(xì)胞的影響。發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶顯著降低兩種抗體與細(xì)胞的結(jié)合。實(shí)施例10-IgM16D10的內(nèi)化利用共焦顯微鏡鏡進(jìn)行的脈沖追蹤實(shí)驗(yàn)用來(lái)評(píng)估在培養(yǎng)基中IgM16D10抗體與活細(xì)胞的相互作用。(脈沖在4t:下30分鐘；追蹤在37t:的培養(yǎng)基中0或2小時(shí)。)。觀察到，在兩小時(shí)內(nèi)，幾乎所有的mAb都被內(nèi)化。一部分mAb與LAMP1共定位。實(shí)施例11-抗體對(duì)細(xì)胞增殖的影響檢查了IgM抗體16D10和嵌合抗體recl6D10對(duì)S0J-6細(xì)胞增殖的影B向。在不包含抗體、包含不同量的16D10或recl6D10抗體、或包含不相關(guān)的IgG抗體的培養(yǎng)基中溫育細(xì)胞。25或50iig/ml的抗體16D10減少細(xì)胞增殖大約50%，而25和50yg/ml的recl6D10分別減少增殖大于20%和大于35%(圖18)。因此，Rec16D10和16D10IgM均對(duì)S0J-6增殖具有直接的負(fù)面影響。實(shí)施例12-檢查recl6D10激活NK細(xì)胞(ADCC)的能力用耙S0J-6細(xì)胞連同NK細(xì)胞、用IL-2(100U/ml)進(jìn)行或不進(jìn)行過(guò)夜處理來(lái)溫育嵌合抗體recl6D10(30yg/ml)(圖19)。作為對(duì)照，與靶B221細(xì)胞一起使用Rituxan抗體(10iig/ml)。以1/1(100000個(gè)NK/孔)的比率使用效應(yīng)細(xì)胞和耙細(xì)胞。用抗體和耙細(xì)胞溫育來(lái)自兩種供體(NK1和NK2)的解凍純化的NK細(xì)胞。通過(guò)CD107染色和IFN-y分泌檢查了NK細(xì)胞的活化。在IL-2處理以后并在有S0J-6細(xì)胞存在的條件下，recl6D10分別在大約53%和45%的NK1和NK2細(xì)胞中誘導(dǎo)CD107正染色(相比于在不包含抗體或包含Rituxan(B細(xì)胞單克隆抗體)的對(duì)照中的<30%和<20%)(圖20)。在類似條件下，大約30%的NK1和NK2細(xì)胞分泌IFN-y(相比于分別在NK1和NK2細(xì)胞中在沒有抗體或包含Rituxan的情況下的小于16%和13%)(圖21)。這些結(jié)果說(shuō)明了，在有靶細(xì)胞存在的條件下，二價(jià)抗體(具有人IgGFc部分)recl6D10可以有效地激活NK細(xì)胞，并且因而可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。實(shí)施例13-IgM16D10和IgGrecl6D10抗體的組織特異性通過(guò)檢查各自對(duì)各種健康組織的染色，評(píng)估了IgM16D10和嵌合IgGrecl6D10抗體的染色特異性。IgM抗體16D10對(duì)各種組織呈現(xiàn)正染色，上述組織包括扁桃體、唾液腺、周圍神經(jīng)、眼、骨髓、卵巢、輸卵管、甲狀旁腺、前列腺、脾、腎、腎上腺、睪丸、胸腺、輸尿管、子宮、以及膀胱。相反，用嵌合抗體recl6D10進(jìn)行的染色對(duì)于每種這些健康組織均是陰性的。因此，就缺乏非特異性交叉反應(yīng)性而言，嵌合IgG抗體recl6D10優(yōu)于IgM抗體16D10(圖22)。實(shí)施例14-16D10和recl6D10與固定的S0J-6細(xì)胞的結(jié)合在初步的FACS實(shí)驗(yàn)中，觀察到規(guī)則的16D10mAb染色似乎穩(wěn)定在固定的S0J-6細(xì)胞上，這表明IgM形式結(jié)合于具有良好親和力的細(xì)胞表面抗原。對(duì)于二價(jià)16D10形式，細(xì)胞表面結(jié)合是較少穩(wěn)定的，其中平均半衰期為約80分鐘。考慮到至今在InnatePharma已研究的大多數(shù)抗體具有5X105至5X106M—5—1的K。n速率締合常數(shù)，則可以估計(jì)重組16D10抗體二價(jià)親合力為納摩爾數(shù)量級(jí)(例如，10至1納摩爾)，其與治療性抗體的工業(yè)開發(fā)相容。實(shí)施例15-利用重組16D10IgGl誘導(dǎo)S0J-6細(xì)胞的凋亡。在初步的實(shí)驗(yàn)中，觀察到，二價(jià)、嵌合重組16D10抗體能夠誘導(dǎo)S0J-6細(xì)胞的凋亡，如在培養(yǎng)2小時(shí)以后通過(guò)膜聯(lián)蛋白V和膜聯(lián)蛋白V/PI染色所評(píng)估的。16D10的IgGl和IgM形式均誘導(dǎo)S0J-6細(xì)胞的凋亡。比較了兩種抗體的凋亡活性，其中衣霉素和沒有進(jìn)行處理作為對(duì)照。結(jié)果示在圖23中。本說(shuō)明書中引用的所有出版物和專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容均以引用方式結(jié)合于本文，如每個(gè)單獨(dú)出版物或?qū)＠暾?qǐng)被明確和單獨(dú)指出通過(guò)引用所結(jié)合的。雖然為清晰理解起見，通過(guò)舉例說(shuō)明和實(shí)施例已較詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易明了，在不背離所附權(quán)利要求的精神或范圍的情況下，可以對(duì)其進(jìn)行某些變化和改進(jìn)。權(quán)利要求一種生產(chǎn)適用于治療癌癥的抗原結(jié)合化合物的方法，所述方法包括i)提供特異性地結(jié)合于BSDL或FAPP多肽的抗原結(jié)合化合物；ii)測(cè)試所述抗原結(jié)合化合物對(duì)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的促凋亡活性；iii)如果確定所述抗原結(jié)合化合物對(duì)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞具有促凋亡活性，則選擇所述抗原結(jié)合化合物；以及iv)產(chǎn)生一些所選擇的抗原結(jié)合化合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括這樣的步驟，所述步驟包括測(cè)試所述抗原結(jié)合化合物對(duì)于誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的ADCC活性的能力，并且如果確定所述抗原結(jié)合化合物具有誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的ADCC活性的能力，則選擇所述抗原結(jié)合化合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，進(jìn)一步包括其中制備所述抗原結(jié)合化合物以用于給予人的步驟。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述用于給予人的制備包括將所述化合物與藥用載體一起配制。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述腫瘤細(xì)胞獲自一位或多位患有癌癥的患者。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述細(xì)胞在脂筏中表達(dá)BSDL和/或FAPP。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述細(xì)胞是使得能表達(dá)BSDL或FAPP的重組細(xì)胞。9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述細(xì)胞是S0J-6細(xì)胞。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在沒有免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行步驟ii)。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述免疫效應(yīng)細(xì)胞是NK細(xì)胞。12.根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，步驟ii)包括確定所述抗原結(jié)合化合物是否在所述表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞中調(diào)節(jié)凋亡或細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)蛋白的活性或水平。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述調(diào)節(jié)蛋白是半胱天冬酶或Bcl-2家族成員。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟iv)包括在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生所述抗原結(jié)合化合物的宿主細(xì)胞并回收所述抗原結(jié)合化合物。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合化合物是抗體，而所述宿主細(xì)胞是產(chǎn)生所述抗體的雜交瘤。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合化合物并不包括細(xì)胞毒性劑如放射性同位素、毒性多肽、或毒性小分子。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合化合物是特異性地結(jié)合BSDL或FAPP多肽的抗體。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合化合物與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述抗體具有IgG同種型的重鏈恒定區(qū)。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述IgG同種型是人IgGl同種型。21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述抗體是嵌合抗體、人抗體或人源化抗體。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述抗體包括抗體16D10或另一種抗體的可變區(qū)，其中所述另一種抗體與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中，所述抗體是抗體16D10的嵌合重組形式，其中重鏈恒定區(qū)的Cii2、Cii3、以及Cii4結(jié)構(gòu)域已被人IgGl序列替換。24.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述抗體是二價(jià)抗體。25.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述抗體基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化。26.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。27.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，進(jìn)一步包括另外的步驟，其中評(píng)估了通過(guò)所述表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞進(jìn)行的所述抗體的內(nèi)化，其中所述抗體基本上沒有被所述細(xì)胞內(nèi)化的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了所述抗體適用于治療癌癥。28.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，進(jìn)一步包括另外的步驟，其中評(píng)估了所述抗體誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力，其中所述抗體能夠誘導(dǎo)所述細(xì)胞的所述細(xì)胞介導(dǎo)殺傷的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了所述抗體適用于治療癌癥。29.—種根據(jù)權(quán)利要求1至28中任一項(xiàng)所述的方法生產(chǎn)的抗原結(jié)合化合物。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的抗原結(jié)合化合物，其中，所述抗原結(jié)合化合物與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的抗原結(jié)合化合物，其中，所述化合物是不同于抗體16D10的抗體。32.—種藥物組合物，包括根據(jù)權(quán)利要求29所述的抗原結(jié)合化合物、以及藥用載體。33.—種抗體，結(jié)合于BSDL或FAPP多肽并且能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖，其中所述抗體與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽，并且其中所述抗體是不同于16D10的抗體。34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的抗體，其中，所述抗體是二價(jià)的。35.根據(jù)權(quán)利要求33-34所述的抗體，其中，所述抗體具有IgG同種型的重鏈恒定區(qū)。36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的抗體，其中，所述抗體具有人IgG同種型的重鏈恒定區(qū)。37.根據(jù)權(quán)利要求35-36所述的抗體，其中，所述抗體具有能夠結(jié)合于Fc受體的重鏈恒定區(qū)。38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的抗體，其中，所述抗體能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)。39.—種由兩個(gè)重鏈和兩個(gè)輕鏈構(gòu)成的二價(jià)抗體，其中所述重鏈包括能夠結(jié)合于Fc受體的IgG重鏈恒定區(qū)，并且其中所述抗體(a)能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖；(b)能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC);以及(c)與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。40.—種二價(jià)抗體，包括(a)包括可變區(qū)的重鏈，其中所述可變區(qū)包括來(lái)自SEQIDNO:7的氨基酸序列、融合于人IgG鏈恒定區(qū)的一個(gè)或多個(gè)CDR;以及(b)包括可變區(qū)的輕鏈，其中所述可變區(qū)包括來(lái)自SEQIDN0:8的氨基酸序列、可選地融合于人卡巴鏈恒定區(qū)的一個(gè)或多個(gè)CDR。41.根據(jù)權(quán)利要求33至40所述的抗體，其中，所述重鏈包括來(lái)自SEQIDNO:7的氨基酸序列的CDR1、CDR2以及CDR3，而所述輕鏈包括來(lái)自SEQIDNO:8的氨基酸序列的CDRl、CDR2以及CDR3。42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的抗體，其中，所述重鏈包括SEQIDN0:7的氨基酸序列。43.根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的抗體，其中，所述輕鏈包括SEQIDNO:8的氨基酸序列。44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的抗體，其中，所述抗體由包括SEQIDNO:l的核酸序列產(chǎn)生。45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的抗體，其中，所述抗體由包括SEQIDN0:2的核酸序列產(chǎn)生。46.根據(jù)權(quán)利要求40至45所述的抗體，其中，所述重鏈恒定區(qū)或IgG同種型是人IgGl。47.根據(jù)權(quán)利要求40至45所述的抗體，其中，所述重鏈恒定區(qū)或IgG同種型是非人IgG同種型。48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的抗體，其中，所述重鏈恒定區(qū)包括至少90X相同于SEQIDNO:15的氨基酸序列。49.根據(jù)權(quán)利要求40至48所述的抗體，其中，所述輕鏈恒定區(qū)包括至少90%相同于SEQIDNO:16的氨基酸序列。50.—種二價(jià)抗體，包括(a)重鏈，所述重鏈包括SEQIDNO:5的氨基酸序列；以及(b)輕鏈，所述輕鏈包括來(lái)自SEQIDN0:6的氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)CDR。51.根據(jù)權(quán)利要求33至50所述的抗體，其中，所述抗體并不包括選自由放射性同位素、毒性多肽、以及毒性小分子組成的組中的細(xì)胞毒性劑。52.根據(jù)權(quán)利要求33至51所述的抗體，其中，所述抗體能夠誘導(dǎo)胰腺腫瘤細(xì)胞的凋亡或抑制其增殖。53.根據(jù)權(quán)利要求52所述的抗體，其中，所述抗體調(diào)節(jié)凋亡或細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)蛋白在表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞中的活性或水平。54.根據(jù)權(quán)利要求53所述的抗體，其中，所述調(diào)節(jié)蛋白是半胱天冬酶或Bcl-2家族成員。55.根據(jù)權(quán)利要求33至54所述的抗體，其中，所述抗體基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化。56.根據(jù)權(quán)利要求33至55所述的抗體，其中，所述抗體是嵌合抗體、人抗體或人源化抗體。57.根據(jù)權(quán)利要求33至56所述的抗體，其中，所述抗體結(jié)合于表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞，并具有至少80分鐘的半衰期。58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的抗體，其中，所述表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞是SOJ-6細(xì)胞。59.根據(jù)權(quán)利要求33至58所述的抗體，其中，所述抗體具有低于10納摩爾的與BSDL表位或FAPP表位的結(jié)合親和力。60.根據(jù)權(quán)利要求33至59所述的抗體，其中，所述抗體包括Ig^區(qū)，其中所述Ig^區(qū)已被修飾成增加與Fc受體的結(jié)合。61.根據(jù)權(quán)利要求33至59所述的抗體，其中，所述抗體被低巖藻糖基化。62.—種藥物組合物，包括根據(jù)權(quán)利要求33至61所述的抗體、以及藥用載體。63.—種試劑盒，包括62所述的抗體、以及在治療胰腺癌時(shí)使用所述抗體的說(shuō)明書。64.根據(jù)權(quán)利要求29至62所述的抗體或藥物組合物在制備藥物中的應(yīng)用。65.—種二價(jià)抗體，具有低于10納摩爾的與BSDL表位或FAPP表位的結(jié)合親和力并且與抗體16D10競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合于BSDL或FAPP多肽。66.根據(jù)權(quán)利要求65所述的抗體，其中，所述抗體具有IgG同種型的重鏈恒定區(qū)。67.根據(jù)權(quán)利要求43所述的抗體，其中，所述表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞是S0J-6細(xì)胞。68.—種結(jié)合物，包括根據(jù)權(quán)利要求29至31、33至61或65至67中任一項(xiàng)所述的抗體以及可檢測(cè)標(biāo)記。69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的結(jié)合物，其中，所述可檢測(cè)標(biāo)記選自放射性同位素、熒光染料、抗原_抗體對(duì)的成員、不同于BSDL或FAPP多肽的抗體、凝集素_碳水化合物對(duì)的成員；抗生物素蛋白；生物素；受體-配體對(duì)的成員；或分子印記聚合物-分子印跡系統(tǒng)的成員。70.—種表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求33至61或65至67所述的抗體的宿主細(xì)胞。71.—種試劑盒，包括根據(jù)權(quán)利要求29至31、33至61或65至67所述的抗體、以及在診斷胰腺癌中使用所述抗體的說(shuō)明書。72.根據(jù)權(quán)利要求29至31、33至61或65至67所述的抗體在用于檢測(cè)表達(dá)BSDL或FAPP多肽的細(xì)胞中的應(yīng)用。73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的應(yīng)用，其中，所述細(xì)胞是胰腺癌細(xì)胞。74.根據(jù)權(quán)利要求29至31、33至61或65至67所述的抗體在用于診斷胰腺癌的方法中的應(yīng)用。75.—種誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡或抑制癌細(xì)胞的增殖、或治療患有癌癥的患者的方法，所述方法包括a)確定所述癌癥或癌細(xì)胞是否表達(dá)BSDL或FAPP多肽并且適合于用促凋亡或抗細(xì)胞增殖劑進(jìn)行治療；以及b)在肯定確定了所述癌癥或癌細(xì)胞表達(dá)BSDL或FAPP多肽并且適合于用促凋亡或抗細(xì)胞增殖劑進(jìn)行治療的情況下，使所述癌癥或癌細(xì)胞與有效量的根據(jù)權(quán)利要求29至31或33至61所述的抗原結(jié)合化合物接觸。76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述接觸所述癌癥或癌細(xì)胞的步驟包括給予所述患者藥物有效量的所述抗原結(jié)合化合物。77.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，其中，所述藥物有效量是在所述患者中足以誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡或抑制癌細(xì)胞增殖的量。78.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述接觸是在沒有或相對(duì)缺乏免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行的。79.根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中，所述免疫效應(yīng)細(xì)胞是NK細(xì)胞。80.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，體外進(jìn)行所述接觸。81.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，進(jìn)一步包括給予所述患者化療藥劑。82.根據(jù)權(quán)利要求76所述的方法，其中，所述患者是免疫缺失的患者。83.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合化合物是抗體。84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中，所述抗體是二價(jià)IgG抗體。85.根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，進(jìn)一步包括這樣的步驟，其中評(píng)估了通過(guò)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞進(jìn)行的所述抗體的內(nèi)化、或所述抗體誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷(ADCC)的能力，其中所述抗體基本上沒有被表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞內(nèi)化或能夠誘導(dǎo)表達(dá)BSDL或FAPP的細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)殺傷的發(fā)現(xiàn)表明所述抗體適用于治療所述患者。86.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述癌癥或癌細(xì)胞具有Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常。87.根據(jù)權(quán)利要求86所述的方法，其中，所述Bcl-2家族成員調(diào)節(jié)異常是Bcl-2的過(guò)度表達(dá)或Bax的降低的表達(dá)。88.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述癌癥或癌細(xì)胞對(duì)化療藥劑是有抗性的。89.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中，所述癌癥或癌細(xì)胞是胰腺癌。全文摘要本發(fā)明涉及用于制備適用于治療癌癥的抗原結(jié)合化合物的方法、抗原結(jié)合化合物以及它們的應(yīng)用。文檔編號(hào)C07K16/32GK101778867SQ200880018487公開日2010年7月14日申請(qǐng)日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2007年6月8日發(fā)明者勞倫特·戈捷,埃里克·馬斯,多米尼克·隆巴爾多,本杰明·羅西,莉迪·克雷申切申請(qǐng)人:地中海大學(xué);法國(guó)國(guó)家健康與醫(yī)療研究院;依奈特制藥公司