專利名稱：：多不飽和脂肪酸酯的制備和純化的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及由含有甘油三酯的組合物制備和純化多不飽和脂肪酸酯的方法。本發(fā)明還涉及含有多不飽和脂肪酸的組合物。
背景技術(shù)：
：人們希望增加多種有益營(yíng)養(yǎng)物的飲食攝取。特別有益的營(yíng)養(yǎng)物包括脂肪酸例如"-3和"-6長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)及其酯。"-3PUFA被認(rèn)為是用于預(yù)防動(dòng)脈硬化和冠心病、用于緩解炎癥性病癥和用于阻滯腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的重要飲食化合物。"-6PUFA不僅在人體中作為結(jié)構(gòu)性脂質(zhì)(structurallipid)，而且作為炎癥中多種因子例如前列腺素和白三烯的前體。長(zhǎng)鏈"-3和"-6PUFA是PUFA(多不飽和脂肪酸)的重要種類?；谂c脂肪酸的甲基端最接近的雙鍵的位置而有兩種主要系列或家族的LC-PUFA:"-3系列在第三個(gè)碳含有雙鍵，而"-6系列直到第六個(gè)碳才具有雙鍵。因此，二十二碳六烯酸(〃DHA〃)具有22個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度且從甲基端的第三個(gè)碳開始具有6個(gè)雙鍵，并被命名為〃22:6n-3〃。其它重要的"-3LC-PUFA包括二十碳五烯酸(〃EPA〃)(將其命名為"20:5n-3")和"-3二十二碳五烯酸("DPAn-3")(將其命名為"22:5n-3")。重要的"-6LC-PUFA包括花生四烯酸("ARA")(將其命名為"20:4n-6")和"-6二十二碳五烯酸(〃DPAn-6〃)(將其命名為"22:5n-6")。因?yàn)槿祟惡投喾N其它動(dòng)物不能直接合成"_3和"-6必需脂肪酸，所以必須在飲食中得到它們。PUFA的傳統(tǒng)飲食來源包括植物油、海洋動(dòng)物油、魚油和含油種子。此外，已發(fā)現(xiàn)由某些微生物產(chǎn)生的油是富含LC-PUFA的。然而，源自上述每種來源的油還含有相當(dāng)水平的飽和脂肪酸和其它不需要的雜質(zhì)。已使用很多方法從粗制油(crudedoil)中分離或純化PUFA及其衍生物。這些方法包括低溫分級(jí)結(jié)晶、尿素加合物結(jié)晶(ureaadductcrystallization)、用金屬鹽溶液萃取、在逆流柱上進(jìn)行超臨界流體分級(jí)(supercriticalfluidfractionationonco皿tercurrentcolumn)禾口高效液相色譜法。PUFA及其酯在醫(yī)藥和營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域中使用的增加已產(chǎn)生對(duì)經(jīng)濃縮且不含有雜質(zhì)的PUFA的相應(yīng)需要。然而，先前有關(guān)純化PUFA的努力遇到很多問題例如高成本和低收率(部分是由于使用苛刻試劑(harshreagent))。因此，需要分離和純化PUFA的改進(jìn)方法，所述經(jīng)分離和純化的PUFA呈可被人類和其它動(dòng)物消費(fèi)和使用的形式。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，并蒸餾所述組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟在約6(TC至約12(TC的溫度進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約2小時(shí)至約12小時(shí)的時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷選自如下的一種或多種處理精制(refining)、脫溶劑(desolventization)、除臭(deodorization)、冬化(winterization)、冷過濾(chillfiltration)禾口漂白(bleaching)。在一些實(shí)施方案中，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白。在一些實(shí)施方案中，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物來自選自如下的來源植物、微生物、動(dòng)物和它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自如下的微生物藻類、細(xì)菌、真菌和原生生物。在一些實(shí)施方案中，所述來源選自植物，所述植物選自大豆(soybean)、玉米(corn)、稻米(rice)、紅花(safflower)、向日葵(sunflower)、蕓苔(canola)、亞麻(flax)、花生(pea皿t)、芥菜(mustard)、油菜禾子(r即eseed)、鷹嘴豆(chickpea)、棉花(cotton)、扁豆(lentil)、白三葉草(whiteclover)、橄欖(olive)、棕櫚(palm)、琉璃苣(borage)、月見草(eveningprimrose)、亞麻籽(linseed)和煙草(tobacco)及它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述來源選自經(jīng)遺傳修飾的植物和經(jīng)遺傳修飾的微生物，其中所述遺傳修飾包括引入聚酮合成酶(polyketidesynthase)基因。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自如下的微生物破囊壺菌目(Thraustochytriales)、甲藻(dinoflagellate)禾口被孢霉屬(Mortierella)。在一些實(shí)施方案中，所述微生物為破囊壺菌目、裂殖壺菌屬(Schizochytrium)或石皮囊壺菌屬(Thraustochytrium)。在一些實(shí)施方案中，所述微生物為隱甲藻屬(Crypthecodinium)的甲藻。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自水生動(dòng)物的動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為具有至少18個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度的多不飽和脂肪酸。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為選自如下的多不飽和脂肪酸二十二碳六條酸(docosahexaenoicacid)、二十二碳五條酸(docosapentaenoicacid)、花生四烯酸(arachidonicacid)、二十碳五烯酸(eicos即entaenoicacid)、十八碳四烯酸(stearidonicacid)、亞麻酸(linolenicacid)、a亞麻酸(alphalinolenicacid)、Y亞麻酸(gammalinolenicacid)、共軛亞麻酸(conjugatedlinolenicacid)禾口它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸。在一些實(shí)施方案中，所述堿為具有式R0-M的堿，其中M為單價(jià)陽離子，以及R0為9(V6烷基醇的醇化物根(alkoxide)。在一些實(shí)施方案中，所述堿為乙醇鈉。在一些實(shí)施方案中，所述醇為C卜6烷基醇。在一些實(shí)施方案中，所述醇為乙醇，以及所述多不飽和脂肪酸酯為多不飽和脂肪酸乙酯。在一些實(shí)施方案中，蒸餾組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在真空下進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，蒸餾組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在低于約17(TC的溫度進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所回收的餾分含有至少約50wt.%、75wt.%、90wt.%或95wt.%的多不飽和脂肪酸酯。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟通過直接酯交換(transesterification)由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括a)將含有多不飽和脂肪酸酯的餾分與尿素在介質(zhì)中混合(combine);b)冷卻或濃縮所述介質(zhì)以形成含有尿素的沉淀物和液體餾分；以及c)將所述沉淀物與所述液體餾分分離。在一些實(shí)施方案中，所述介質(zhì)還含有可溶解多不飽和脂肪酸酯的有機(jī)溶劑。在一些實(shí)施方案中，所述有機(jī)溶劑包括具有1至4個(gè)碳原子的烷基醇。在一些實(shí)施方案中，所述有機(jī)溶劑包括乙醇。在一些實(shí)施方案中，將所述介質(zhì)冷卻至約ot:至約25t:的溫度以形成含有尿素的沉淀物。在一些實(shí)施方案中，所述含有尿素的沉淀物中的至少一部分在非氧化氣氛下形成。本發(fā)明還提供由含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物制備多不飽和脂肪酸酯的方法，其包括在醇和堿存在下對(duì)所述組合物進(jìn)行酯交換以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，并蒸餾所述組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分。本發(fā)明還提供純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，并分離出含有至少約75%多不飽和脂肪酸酯的餾分。在一些實(shí)施方案中，所述分離步驟包括蒸餾。本發(fā)明還提供制備含有多不飽和脂肪酸酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，其中含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷選自如下的一種或多種處理精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟在約6(TC至約12(TC的溫度進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約2小時(shí)至約12小時(shí)的時(shí)間。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括蒸餾所述組合物以回收含有多不飽和脂肪酸10酯的餾分的步驟。在一些實(shí)施方案中，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物來自選自如下的來源植物、微生物、動(dòng)物和它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自如下的微生物藻類、細(xì)菌、真菌和原生生物。在一些實(shí)施方案中，所述來源選自植物，所述植物選自大豆、玉米、稻米、紅花、向日葵、蕓苔、亞麻、花生、芥菜、油菜籽、鷹嘴豆、棉花、扁豆、白三葉草、橄欖、棕櫚、琉璃苣、月見草、亞麻籽和煙草及它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述來源選自經(jīng)遺傳修飾的植物和經(jīng)遺傳修飾的微生物，其中所述遺傳修飾包括引入聚酮合成酶基因。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自如下的微生物破囊壺菌目、甲藻和被孢霉屬。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自如下的微生物破囊壺菌目、甲藻和被孢霉在一些實(shí)施方案中，所述微生物為隱甲藻屬的甲藻。在一些實(shí)施方案中，所述來源為選自水生動(dòng)物的動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為具有至少18個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度的多不飽和脂肪酸。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為選自如下的多不飽和脂肪酸二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、十八碳四烯酸、亞麻酸、a亞麻酸、Y亞麻酸、共軛亞麻酸和它們的混合物。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。在一些實(shí)施方案中，所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸。在一些實(shí)施方案中，所述堿為具有式R0-M的堿，其中M為單價(jià)陽離子，以及R0為6烷基醇的醇化物根。在一些實(shí)施方案中，所述堿為乙醇鈉。在一些實(shí)施方案中，所述醇為C卜6烷基醇。在一些實(shí)施方案中，所述醇為乙醇，以及所述多不飽和脂肪酸酯為多不飽和脂肪酸乙酯。在一些實(shí)施方案中，蒸餾組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在真空下進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，蒸餾組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在低于約17(TC的溫度進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所回收的餾分含有至少約50wt.%、75wt.%、90wt.%或95wt.%的多不飽和脂肪酸酯。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟通過直接酯交換由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少約O.lwt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約0.5wt.%、1.Owt.%或1.2wt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有至少約0.lwt.%、0.3wt.%、0.4wt.%或0.5wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約92wt.X或95wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有小于約lwt.%、0.5wt.%或0.25wt.%的二十碳五烯酸或其酯。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少約O.lwt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約0.3wt.%、0.4wt.%或0.5wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有至少約0.5wt.%、0.75wt.%、1.Owt.%或1.2wt,%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約92wt.X或95wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有小于約lwt.%、0.5wt.%或0.25wt.%的二十碳五烯酸或其酯。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少一種額外脂肪酸或其酯，所述額外脂肪酸或其酯在壓力為0.8mmHg時(shí)具有約150-17(TC的沸點(diǎn)。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約70wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約25wt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有小于約4%的飽和脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯具有少于20個(gè)碳。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯具有14或16個(gè)碳。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約lOwt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約lOwt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有小于約4%的飽和脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯具有少于20個(gè)碳。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯具有14或16個(gè)碳。本發(fā)明還提供一種組合物，所述組合物含有至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合，其中所述組合物還含有至少一種額外脂肪酸或其酯，所述額外脂肪酸或其酯在壓力為0.5mmHg時(shí)具有約150_175°C的沸點(diǎn)。本發(fā)明還提供制備含有多不飽和脂肪酸酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，其中含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物具有選自如下的至少一12個(gè)特征至少約300ppm的磷(phosphorus)、至少約0.4%的游離脂肪酸和至少約0.2meq/kg的過氧化值(peroxidevalue)。本發(fā)明還提供純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其中所述組合物具有選自如下的至少一個(gè)特征至少約300ppm的磷、至少約0.4%的游離脂肪酸和至少約0.2meq/kg的過氧化值，所述方法包括a)在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯；以及b)蒸餾所述組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分。本發(fā)明還提供一種組合物，其包含至少約60wt.%的花生四烯酸酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還含有小于約10wt.%的二十碳五烯酸。在一些實(shí)施方案中，花生四烯酸酯為花生四烯酸乙酯。本發(fā)明還提供治療具有高水平甘油三酯的受試者的方法，其包括向所述受試者給藥權(quán)利要求68、81、94、95、99或104的組合物。本發(fā)明還提供治療患有神經(jīng)障礙、癡呆或癡呆前相關(guān)病癥(pre-dementiarelatedcondition)的受試者的方法，其包括向所述受試者給藥權(quán)利要求68、81、94、95、99或104的組合物。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供純化含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物的新穎方法。在各個(gè)方面，本發(fā)明包括在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明有利且有效地實(shí)施于沒有經(jīng)歷常規(guī)加工方法的相對(duì)粗制油(relativecrudeoil)，所述常規(guī)加工方法可包括精制、漂白、脫臭和冬化。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括由甘油三酯制備酯，然后蒸餾所得組合物以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過尿素結(jié)晶(ureacrystallization)對(duì)含有多不飽和脂肪酸酯的餾分進(jìn)行進(jìn)一步純化。本發(fā)明可有效且劃算地直接由粗制油或經(jīng)加工的油(processedoil)制備PUFA酯。用于本發(fā)明方法的起始物質(zhì)為含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物。術(shù)語〃油〃和〃含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物〃在本申請(qǐng)全文中可互換使用。本申請(qǐng)使用的〃甘油三酯〃是甘油和三個(gè)脂肪酸殘基的酯，其具有化學(xué)通式CHJ00CR1)CH(00CR2)CH2(00CR3)，其中00CR1、00CR2和00CR3各自代表脂肪酸殘基。合適的甘油三酯含有至少一個(gè)PUFA。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA具有至少18個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度。所述PUFA在本申請(qǐng)中稱為長(zhǎng)鏈PUFA或LCPUFA。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA可以是二十二碳六烯酸C22:6n-3(DHA)、"-3二十二碳五烯酸C22:5n_3(DPA)、"-6二十二碳五烯酸C22:5n-6(DPA)、花生四烯酸C20:4n-6(ARA)、二十碳五烯酸C20:5n-3(EPA)、十八碳四烯酸(SDA)、亞麻酸(LLA)、a亞麻酸(ALA)、y亞麻酸(GLA)、共軛亞麻酸(CLA)或它們的混合物。所述PUFA也可按在天然脂質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的任意常見形式存在，所述形式包括但不限于甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、磷脂、游離脂肪酸或這些脂肪酸的天然或合成衍生物形式(例如脂肪酸的鈣鹽等)。當(dāng)提到本發(fā)明使用的油或其它含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物時(shí)，其可指含有僅具有單一類型的LCPUFA殘基(例如DHA)的甘油三酯的組合物或含有具有多于一種類型的LCPUFA殘基(例如DHA、EPA和ARA中的兩種以上)的混合物的甘油三酯的組合物。含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物可由任意合適的來源得到或源自任意合適的來源，所述來源為例如植物(包括含油種子)、微生物、動(dòng)物或它們的混合物。所述微生物可以是藻類、細(xì)菌、真菌或原生生物。用于使含有營(yíng)養(yǎng)物和/或PUFA的微生物生長(zhǎng)的微生物來源禾口方f去是本領(lǐng)域已知的(IndustrialMicrobiologyandBiotechnology,2ndedition,1999，AmericanSocietyforMicrobiology)。例如，在發(fā)酵罐中所述微生物可在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。由微生物產(chǎn)生的油可用在本發(fā)明方法和組合物中。在一些實(shí)施方案中，生物體(organism)包括選自如下的那些生物體金藻(例如管毛生物界(Stramenopile)的微生物)、綠藻、硅藻(diatom)、甲藻(例如甲藻目(Dinophyceae)的微生物，其包括隱甲藻屬的成員，例如寇氏隱甲藻(Crypthecodiniumcohnii))、酵母和毛毒屬(Mucor)禾口豐皮？包毒屬的真菌(包f舌iS不限于Mortierellaalpina禾口Mortierellasect,schmuckeri)。管毛生物界微生物組群的成員包括微藻(microalgae)和藻樣微生物(algae-likemicroorganism)，其包括如下的微生物組群Hamatores、Proteromonads、0palines、Develpayella、Diplophrys、Labrinthulids(網(wǎng)粘菌)、Thraustochytrids(石皮囊壺菌)、Biosecids、Oomycetes、Hypochytridiomycetes、Commation、Reticulosphaera、Pelagomonas、Pelagococcus、Ollicola、Aureococcus、Parmales、Diatoms、Xanthophytes、Phaeophytes(褐藻)、Eustigmatophytes、Raphidophytes、Sy皿rids、Axodines(包括Rhizochromulinaales、Pedine1lales、Dictyochales)、Chrysomeridales、Sarcinochrysidales、Hydru:rales、Hibberdiales禾口Chromulinales。所述石皮囊壺菌(Thraustochytrid)包括裂殖壺菌屬(禾中包括aggregatum、limnaceum、mangrovei、minutum、octosporum)、石皮囊壺菌屬(禾中包括arudimentale、aureum、benthicola、globosum、ki皿ei、motiv咖、multirudimentale、pachydermum、prolifer咖、rose咖、striatum)、Ulkenia屬(禾中包括amoeboidea、kerguelensis、minuta、profimda、radiate、sailens、sarkariana、schizochytrops、visurgensis、yorkensis)、Aplanochytrium屬(禾中包括haliotidis、kerguelensis、profimda、stocchinoi)、J即onochytrium屬(禾中包括marinum)、Althornia屬(禾中包括crouchii)禾口Elina屬(禾中包括marisalba、sinorifica)。所述網(wǎng)粘菌(Xabrinthulid)包括Labyrinthula屬(禾中包括algeriensis、coenocystis、chattonii、macrocystis、microcystisatlantica、microcystismacrocystis、marina、minuta、roscoffensis、valkanovii、vitellina、vitellinapactfica、vitellinavitellina、zopfi)、Labyrinthomyxa屬(禾中包括marina)、Labyrinthuloides屬(禾中包括haliotidis、yorkensis)、Diplophrys屬(禾中包括archeri)、Pyrrhosorus*屬(禾中包括marinus)、Sorodiplophrys氺屬(禾中包括stercorea)、Chlamydomyxa氺屬(禾中包括labyrinthuloides、montana)。(*=目前對(duì)這些屬的確切分類學(xué)歸屬?zèng)]有達(dá)成共識(shí))。合適的微生物包括能產(chǎn)生含有"-3和/或"-6多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)的那些微生物，特別要描述的是能產(chǎn)生含有DHA、DPA、EPA或ARA的油的微生物。更具體地，優(yōu)選的微生物為藻類，例如破囊壺菌目的破囊壺菌，其包括破囊壺菌屬(包括Ulkenia屬)和裂殖壺菌屬，并包括在共同受讓的美國(guó)專利5，340，594和5，340，742中披露的破囊壺菌目(這兩項(xiàng)專利都授權(quán)給Barclay)，將這兩項(xiàng)專利都整體并入本申請(qǐng)作為參考。更優(yōu)選地，所述微生物選自具有如下鑒別特征的微生物ATCC編號(hào)20888、ATCC編號(hào)20889、ATCC編號(hào)20890、ATCC編號(hào)20891和ATCC編號(hào)20892。因?yàn)閁lkenia屬是否為不同于破囊壺菌屬的屬在專家中尚有爭(zhēng)議，所以出于本申請(qǐng)的目的，破囊壺菌屬包括Ulkenia屬。還優(yōu)選的是菌株Mortierellaschmuckeri(例如包括ATCC74371)禾口菌株Mortierellaalpina。還優(yōu)選的是菌株寇氏隱甲藻，其包括具有如下鑒別特征的微生物ATCC編號(hào)30021、30334-30348、30541-30543、30555-30557、30571、30572、30772-30775、30812、40750、50050-50060和50297-50300。含油微生物(oleaginousmicroorganism)也是優(yōu)選的。將本申請(qǐng)使用的〃含油微生物〃定義為能以脂質(zhì)形式積累大于20%其細(xì)胞干重的微生物。經(jīng)遺傳修飾的產(chǎn)生含有PUFA的油的微生物也適于本發(fā)明。這些微生物可包括天然產(chǎn)生PUFA的經(jīng)遺傳修飾的微生物和不天然產(chǎn)生PUFA但經(jīng)遺傳修飾以產(chǎn)生PUFA的微生物。合適的生物體可得自多種可得到的來源(包括從天然環(huán)境收集)。例如，美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心目前列舉了多種公眾可得到的如上鑒別的微生物菌株。本申請(qǐng)使用的任意生物體或任意具體類型的生物體包括野生株、突變體或重組類型。對(duì)這些生物體進(jìn)行培養(yǎng)或使這些生物體生長(zhǎng)的生長(zhǎng)條件是本領(lǐng)域已知的，且就這些生物體中的至少一些而言合適的生長(zhǎng)條件參見例如美國(guó)專利5，130，242、美國(guó)專利5，407，957、美國(guó)專利5，397，591、美國(guó)專利5，492，938、美國(guó)專利5，711，983和美國(guó)專利6，607，900，將這些專利都整體并入本申請(qǐng)作為參考。當(dāng)使用微生物油時(shí)，將所述微生物在有效的培養(yǎng)基(在本申請(qǐng)中將其定義為能促進(jìn)油產(chǎn)生的任意培養(yǎng)基)中培養(yǎng)。優(yōu)選地，所述有效的培養(yǎng)基也促進(jìn)微生物快速生長(zhǎng)。所述微生物可按常規(guī)發(fā)酵模式培養(yǎng)，所述常規(guī)發(fā)酵模式包括但不限于分批培養(yǎng)、補(bǔ)料分批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)。適于本發(fā)明組合物和方法的油的另一種來源包括植物來源，例如含油種子植物。在可選擇的實(shí)施方案中，產(chǎn)生PUFA的植物可包括經(jīng)遺傳工程化以表達(dá)產(chǎn)生PUFA的基因的那些植物和天然產(chǎn)生PUFA的那些植物。所述基因可包括對(duì)參與經(jīng)典脂肪酸合成酶途徑的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因或?qū)⑴cPUFA聚酮合成酶(PKS)途徑的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因。參與經(jīng)典脂肪酸合成酶途徑的基因和蛋白質(zhì)及經(jīng)遺傳修飾(用所述基因轉(zhuǎn)化)的生物體例如植物參見例如NapierandSayanova，ProceedingsoftheNutritionSociety(2005)，64:387-393、Robertetal.，F(xiàn)unctionalPlantBiology(2005)32:473-479或美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/0172682。PUFAPKS途徑、參與該途徑的基因和蛋白質(zhì)及針對(duì)表達(dá)和產(chǎn)生PUFA而經(jīng)遺傳修飾(用所述基因轉(zhuǎn)化)的微生物和植物詳細(xì)描述在美國(guó)專利6，140，486、美國(guó)專利6，566，583、美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20020194641、美國(guó)專利7，211，418、美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20050100995Al、美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20070089199、PCT公開號(hào)W005/097982和美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20050014231中，將它們各自整體并入本申請(qǐng)作為參考。適于用在本發(fā)明中的含油種子作物包括經(jīng)遺傳修飾以產(chǎn)生上述PUFA的大豆、玉米、稻米、紅花、向日葵、蕓苔、亞麻、花生、芥菜、油菜籽、鷹嘴豆、棉花、扁豆、白三葉草、橄欖、棕櫚油、琉璃苣、月見草、亞麻籽和煙草。用于微生物和植物的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。用于微生物的轉(zhuǎn)化技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并參見例如Sambrooketal.，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLabsPress。用于對(duì)甲藻進(jìn)行轉(zhuǎn)化的通用技術(shù)(可對(duì)其進(jìn)行調(diào)整以用于寇氏隱甲藻)詳細(xì)描述在LohuisandMiller,ThePlantJournal(1998)13(3):427-435中。用于對(duì)破囊壺菌進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的通用技術(shù)詳細(xì)描述在美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)20030166207(2003年9月4日公開)中。用于對(duì)植物進(jìn)行遺傳工程化的方法也是本領(lǐng)域公知的。例如，已開發(fā)出多種用于對(duì)植物進(jìn)行轉(zhuǎn)化的方法，其包括生物轉(zhuǎn)化方案和物理轉(zhuǎn)化方案。參見例如Mikietal.，〃ProceduresforIntroducingForeignDNAintoPlants"inMethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology,Glick，B.R.andThompson,J.E.Eds.(CRCPress,Inc.,BocaRaton，1993)pp.67-88。此夕卜，用于對(duì)植物細(xì)胞或組織進(jìn)行轉(zhuǎn)化和使植物再生的載體和體外培養(yǎng)方法是可得到的。參見例如Gruberetal.，〃VectorsforPlantTransformation〃inMethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnology,Glick，B.R.andThompson，J.E.Eds.(CRCPress,Inc.，BocaRaton，1993)pp.89-119。還參見Horschetal.，Science227:1229(1985)、Kado，C.I.，Crit.Rev.Plant.Sci.10:1(1991)、Moloneyetal.，PlantCellR印orts8:238(1989)、美國(guó)專利4，940，838、美國(guó)專利5，464，763、Sanfordetal.，Part.Sci.Technol.5:27(1987)、Sanford,J.C.，TrendsBiotech.6:299(1988)、Sanford,J.C.，Physiol.Plant79:206(1990)、Kleinetal.，Biotechnology10:268(1992)、Zhangetal.，Bio/Technology9:996(1991)、Deshayesetal.，EMB0J.，4:2731(1985)、Christouetal.，ProcNatl.Acad.Sci.USA84:3962(1987)、Hainetal.，Mol.Gen.Genet.199:161(1985)、Draperetal.，PlantCellPhysiol.23:451(1982)、Do皿etal.，InAbstractsofVIIthInternationalCongressonPlantCellandTissueCultureIAPTC，A2_38，p.53(1990)、D'Halluinetal.，PlantCell4:1495-1505(1992)禾口Spenceretal.，PlantMol.Biol.24:51-61(1994)。當(dāng)含油種子植物為含有PUFA的油的來源時(shí)，可收獲所述種子并進(jìn)行加工以從所收獲的種子中除去任意雜質(zhì)、碎屑(debris)或不可消化的部分。加工步驟基于含油種子的類型而變化且是本領(lǐng)域已知的。加工步驟可包括脫粒(例如當(dāng)將大豆種子與豆莢分離時(shí))、剝殼(除去果實(shí)、種子或堅(jiān)果的干燥外部包覆物或外殼)、干燥、凈化、碾碎(griding)、磨粉(milling)和壓片(flaking)。在所述種子已被加工從而除去任意雜質(zhì)、碎屑或不可消化的物質(zhì)后，可將它們加到水溶液中，然后混合以形成漿液。在一些實(shí)施方案中，在與水混合前進(jìn)行磨粉、破碎或壓片。以該方式產(chǎn)生的漿液可按與就微生物發(fā)酵液所述相同的方式進(jìn)行處理和加工。適于本發(fā)明組合物和方法的含有PUFA的油的另一種生物質(zhì)來源包括動(dòng)物來源。動(dòng)物來源的實(shí)例包括水生動(dòng)物(例如魚、海洋哺乳動(dòng)物和甲殼類動(dòng)物例如磷蝦(krill)和其它磷!l!下(euphausid))和動(dòng)物組織(例如腦、肝、眼等)及動(dòng)物產(chǎn)品例如蛋和奶。用于從所述來源中回收含有PUFA的油的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。盡管在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物可以是粗制油(以下更詳細(xì)地討論)，但可用在本發(fā)明中的其它所述組合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適方法從它們的來源中回收。例如，油可通過用溶劑(例如氯仿、己烷、二氯甲烷、甲醇等)萃取來回收，或通過超臨界流體萃取來回收?？蛇x擇地，所述油可使用萃取技術(shù)來萃取，所述萃取技術(shù)參見例如美國(guó)專利6，750，048和PCT專利申請(qǐng)US01/01806(這兩項(xiàng)專利都是2001年1月19日提交的且題目為〃SolventlessExtractionProcess")，將它們整體并入本申請(qǐng)作為參考。其它萃取和/或純化技術(shù)參見PCT專利申請(qǐng)PCT/IB01/00841(題目為"MethodfortheFractionationofOilandPolarLipid-ContainingNativeRawMaterials''且在2001年4月12日提交)、PCT專利申請(qǐng)PCT/IB01/00963(題目為"MethodfortheFractionationofOilandPolarLipid—ContainingNativeRawMaterialsUsingWater—SolubleOrganicSolventandCentrifugation"且在2001年4月12日提交)、美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/291，484(題目為"ProductionandUseofaPolarLipid_RichFractionContainingStearidonicacidandGammaLinolenicfromPlantSeedsandMicrobes，，且在2001年5月14日提交)、美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/290，899(題目為"ProductionandUseofaPolar-LipidFractionContainingco_3and/orco-6HighlyUnsaturatedFattyAcidsfromMicrobes,GeneticallyModifiedPlantSeedsandMarineOrganisms，，且在2001年5月14日提交)、美國(guó)專利6，399，803(題目為"ProcessforS印aratingaTriglycerideComprisingaDocosahexaenoicAcidResiduefromaMixtureofTriglycerides，，、在2000年2月17日提交且在2002年6月4日授權(quán))和PCT專利申請(qǐng)US01/01010(題目為"ProcessforMakinganEnrichedMixtureofPolyunsaturatedFattyAcidEsters"且在2001年1月11日提交)，將這些文獻(xiàn)都整體并入本申請(qǐng)作為參考?？蓪?duì)經(jīng)萃取的油進(jìn)行減壓蒸發(fā)以得到濃縮的油物質(zhì)的樣品。用于對(duì)生物質(zhì)進(jìn)行酶處理以回收脂質(zhì)的方法參見美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/377，550(題目為〃HIGH-QUALITYLIPIDSANDMETHODSFORPRODUCINGBYENZYMATICLIBERATIONFROMBIOMASS"且在2002年5月3日提交)、PCT專利申請(qǐng)PCT/US03/14177(題目為〃HIGH-QUALITYLIPIDSANDMETH0DSFORPRODUCINGBYENZYMATICLIBERATIONFR0MBI0MASS"且在2003年5月5日提交)、共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)10/971，723(題目為〃HIGH-QUALITYLIPIDSANDMETHODSF0RPR0DUCINGBYLIBERATIONFROMBIOMASS"且在2004年10月22日提交)、歐洲專利公開號(hào)0776356和美國(guó)專利5，928，696(這兩項(xiàng)專利的題目都為"Processforextractingnativeproductswhicharenotwater—solublefromnativesubstancemixturesbycentrifugalforce")，將這些文獻(xiàn)公開的內(nèi)容整體并入本申請(qǐng)作為參考。在一些實(shí)施方案中，得自上述來源的油可作為用于本發(fā)明方法的起始物質(zhì)，甚至當(dāng)所述油沒有經(jīng)歷常規(guī)加工時(shí)也可如此?？刹唤?jīng)歷的所述常規(guī)加工的實(shí)例包括精制(例如物理精制、硅膠精制(silicarefining)或苛性堿精制(causticrefining))、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和/或漂白。因此，在一些實(shí)施方案中，含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷選自如下的一種或多種處理精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白，以及在其它實(shí)施方案中，所述組合物沒有經(jīng)歷精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白中的任一種。在本發(fā)明另一個(gè)方面，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物可以是這樣的油，所述油具有沒有經(jīng)歷常規(guī)加工(例如精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白)的油的特征。因此，合適的油可具有未經(jīng)加工的油的化學(xué)特征或物理特征。例如，所述油可含有如下水平的不希望的組分(例如雜質(zhì))，所述水平通常在經(jīng)常規(guī)加工的油中是不存在的。例如，所述油可含有約300ppm的磷至約1000ppm的磷。在一些實(shí)施方案中，所述油含有至少約300卯m的磷、至少約400ppm的磷、至少約500卯m的磷、至少約600卯m的磷、至少約650ppm的磷、至少約700ppm的磷、至少約750ppm的磷、至少約800ppm的磷、至少約850ppm的磷、至少約900ppm的磷、至少約950ppm的磷或至少約1000卯m的磷。在另一個(gè)方面，所述油可含有范圍為約O.4wt.%至約1.4wt.%的游離脂肪酸。在一些實(shí)施方案中，所述油含有至少約0.4wt.%的游離脂肪酸、至少約0.6wt.%的游離脂肪酸、至少約0.8wt.%的游離脂肪酸、至少約0.9wt.%的游離脂肪酸、至少約1.Owt.%的游離脂肪酸、至少約1.lwt.%的游離脂肪酸、至少約1.2wt.%的游離脂肪酸、至少約1.3wt.%的游離脂肪酸或至少約1.4wt.%的游離脂肪酸。在另一個(gè)方面，所述油可具有范圍為約0.2meq/kg至約2.5meq/kg的過氧化值。在一些實(shí)施方案中，所述油具有至少約O.2meq/kg的過氧化值、至少約0.4meq/kg的過氧化值、至少約0.6meq/kg的過氧化值、至少約0.8meq/kg的過氧化值、至少約1.0meq/kg的過氧化值、至少約1.2meq/kg的過氧化值、至少約1.4meq/kg的過氧化值、至少約1.5meq/kg的過氧化值、至少約1.6meq/kg的過氧化值、至少約1.7meq/kg的過氧化值、至少約1.8meq/kg的過氧化值、至少約1.9meq/kg的過氧化值、至少約2.Omeq/kg的過氧化值、至少約2.lmeq/kg的過氧化值、至少約2.2meq/kg的過氧化值、至少約2.3meq/kg的過氧化值、至少約2.4meq/kg的過氧化值或至少約2.5meq/kg的過氧化值。在一些實(shí)施方案中，粗制油可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)從微生物中分離出來而不經(jīng)歷進(jìn)一步的精制或純化。在所述實(shí)施方案中，所述油為僅經(jīng)歷溶劑萃取(例如己烷萃取、異丙醇萃取等)的微生物油(microbialoil)。在其它實(shí)施方案中，含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物(例如以上描述的油)可經(jīng)歷進(jìn)一步的加工步驟(例如精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和/或漂白)。所述〃經(jīng)加工的〃油包括經(jīng)歷溶劑萃取和一個(gè)或多個(gè)上述額外加工步驟的微生物油。在一些實(shí)施方案中，油經(jīng)最低程度加工。〃經(jīng)最低程度加工的〃油包括經(jīng)歷溶劑萃取和過濾的微生物油。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)最低程度加工的油還經(jīng)歷冬化。本發(fā)明方法涉及在醇和堿存在下使含有具有PUFA殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備PUFA酯。適于在本發(fā)明中使用的醇包括具有1至6個(gè)碳原子的任意低級(jí)烷基醇(即(V6烷基醇)。拋開理論的束縛，認(rèn)為在本發(fā)明方法中使用低級(jí)烷基醇可制備PUFA低級(jí)烷基酯。例如，使用乙醇可制備乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述醇為甲醇或乙醇。在這些實(shí)施方案中，所制備的PUFA酯分別為PUFA甲酯或PUFA乙酯。在本發(fā)明方法中，所述醇通常占所述組合物、所述醇和所述堿的混合物的約25wt.X至約50wt.X、約30wt.X至約45wt.%或約35wt.X至約40wt.%。在一些實(shí)施方案中，所述醇占所述組合物、所述醇和所述堿的混合物的約38wt.%。在一些實(shí)施方案中，可將所述組合物和所述堿加到純的乙醇或純的甲醇中。通常，所使用的醇量可隨含有具有PUFA殘基的甘油三酯的油或組合物在醇中的溶解度而變化。本領(lǐng)域已知的適于用作反應(yīng)物的任意堿都可用在本發(fā)明中。具有式RO-M的堿(其中M為單價(jià)陽離子，以及RO為(Ve烷基醇的醇化物根)特別適于本發(fā)明。合適的堿的實(shí)例包括元素鈉、甲醇鈉、乙醇鈉、甲醇鉀和乙醇鉀。在一些實(shí)施方案中，所述堿為乙醇鈉。在本發(fā)明方法中，所述堿通常以如下量加到含有所述組合物和所述醇的反應(yīng)步驟中甘油三酯的約0.5至約1.5摩爾當(dāng)量、甘油三酯的約0.7至約1.4摩爾當(dāng)量、甘油三酯的約0.9至約1.3摩爾當(dāng)量或甘油三酯的約1.0至約1.2摩爾當(dāng)量。在一些實(shí)施方案中，所述堿通常以如下量加到含有所述組合物和所述醇的反應(yīng)步驟中甘油三酯的約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、0.95、1.0、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.10、1.15、1.2、1.3、1.4或1.5摩爾當(dāng)量。在一些實(shí)施方案中，所述堿以甘油三酯的1.04摩爾當(dāng)量加到含有所述組合物和所述醇的反應(yīng)步驟中。使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物、醇和堿在如下溫度一起反應(yīng)如下時(shí)間，所述溫度和時(shí)間允許脂肪酸殘基與醇形成酯。合適的反應(yīng)時(shí)間和溫度可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定以形成酯。拋開理論的束縛，認(rèn)為在反應(yīng)步驟中PUFA殘基與甘油三酯的甘油骨架斷裂，且就每個(gè)PUFA殘基而言形成酯。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟在以下溫度進(jìn)行約6(TC至約12(TC、約7(TC至約11(TC、約75t:至約IO(TC或約8(TC至約9(TC的溫度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟在以下溫度進(jìn)行約75t:、8(TC、85t:、9(rC或95t:。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約2小時(shí)至約12小時(shí)、約3小時(shí)至約11小時(shí)、約4小時(shí)至約10小時(shí)、約5小時(shí)至約9小時(shí)或約6小時(shí)至約8小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，在醇和堿存在下使組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約5.5、6、6.5、7、7.5、8或8.5小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，使油組合物、醇和堿反應(yīng)的步驟可通過使組分回流來進(jìn)行以制備PUFA酯。在其它實(shí)施方案中，使油組合物反應(yīng)的步驟可在不使反應(yīng)組分回流的溫度進(jìn)行。例如，在大于大氣壓的壓力下進(jìn)行使油組合物反應(yīng)的步驟，這可提高存在于反應(yīng)混合物中的溶劑的沸點(diǎn)。在所述條件下，反應(yīng)可在如下溫度進(jìn)行但不會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)組分回流，溶劑在所述溫度和大氣壓下將沸騰。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)在如下壓力進(jìn)行約5至約20磅/平方英寸(psi)、約7至約15psi或約9至約12psi。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)在如下壓力進(jìn)行約7、8、9、10、11或12psi。在壓力下進(jìn)行的反應(yīng)可在上述反應(yīng)溫度進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，在壓力下進(jìn)行的反應(yīng)可在約70°C、75°C、80°C、85°C或90°C進(jìn)行。可對(duì)含有PUFA酯的反應(yīng)混合物進(jìn)行進(jìn)一步加工以由所述混合物得到PUFA酯。例如，所述混合物可被冷卻、用水稀釋和用溶劑(例如己烷)萃取水溶液以制備含有PUFA酯的組合物。用于洗滌和/或萃取粗反應(yīng)混合物的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，PUFA酯如下從反應(yīng)混合物中分離對(duì)組合物進(jìn)行蒸餾以回收含有多不飽和脂肪酸酯的餾分。以該方式可將反應(yīng)混合物中包含重要PUFA酯的靶標(biāo)餾分從反應(yīng)混合物中分離并回收。在一些實(shí)施方案中，所述蒸餾在真空下進(jìn)行。拋開理論的束縛，與非真空的情況相比，真空蒸餾使蒸餾在較低溫度完成，因此可防止酯降解。蒸餾溫度通常為12(TC至約170°C。在一些實(shí)施方案中，蒸餾步驟在以下溫度進(jìn)行低于約18(TC、低于約175t:、低于約17(TC、低于約165t:、低于約16(TC、低于約155。C、低于約15(TC、低于約145。C、低于約14(TC、低于約135"或低于約130°C。用于真空蒸餾的壓力通常為約O.lmmHg至約10mmHg。在一些實(shí)施方案中，用于真空蒸餾的壓力為約0.1、0.5、1、1.5、2、2，5、3、3.5或4mmHg。本發(fā)明方法可用于制備含有高百分比PUFA酯的組合物。例如，所述組合物可含有約50wt.X至約100wt.X的PUFA酯，且在其它實(shí)施方案中，所述組合物可含有至少約50wt.X、至少約55wt.X、至少約60wt.X、至少約65wt.X、至少約70wt.%、至少約75wt.X、至少約80wt.X、至少約85wt.X、至少約90wt.X、至少約95wt.%或至少約99wt.%的PUFA酉旨。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA酯經(jīng)歷尿素結(jié)晶步驟。當(dāng)尿素在含有PUFA酯(例如DHA酯)和使用上述技術(shù)通過對(duì)甘油酯來源進(jìn)行酯交換而形成的飽和脂肪酸酯的溶液中19結(jié)晶時(shí)，形成含有尿素和至少一部分所述飽和脂肪酸酯的沉淀物。然而，該沉淀物與初始反應(yīng)混合物相比含有相當(dāng)較小分?jǐn)?shù)的PUFA酯。相反地，大部分PUFA酯留在溶液中，因此可容易地與所沉淀的飽和脂肪酸酯分離。尿素結(jié)晶分離方法包括首先形成含有脂肪酸酯和尿素的溶液。尿素的量?jī)?yōu)選與待從溶液中分離的飽和脂肪酸的總量成比例。當(dāng)從上述酯交換反應(yīng)混合物中分離脂肪酸酯時(shí)，脂肪酸酯的混合物與尿素的質(zhì)量比(massratio)通常為約1:2。所述溶液也優(yōu)選含有可溶解尿素和所需PUFA酯的有機(jī)溶劑，并更優(yōu)選含有可溶解尿素和混合物中所有脂肪酸酯的有機(jī)溶劑。合適的溶劑的實(shí)例包括具有l(wèi)至4個(gè)碳的烷基醇，其中甲醇和乙醇是較優(yōu)選的，且乙醇是最優(yōu)選的。脂肪酸酯的混合物與溶劑的體積比(volumetricratio)優(yōu)選為約1:10。優(yōu)選地，將基本所有尿素都溶解在溶液中。這可通常經(jīng)由加熱溶液來實(shí)現(xiàn)。然而，優(yōu)選不將所述溶液加熱至高于有機(jī)溶劑沸點(diǎn)的溫度。通常，將所述溶液加熱至約60°C、65。C、70。C、75。C或8(TC。—旦將尿素溶解，就將PUFA酯加到溶液中。加入后如果留有固體，則可將混合物加熱直到固體溶解?？蓪⑷芤豪鋮s以形成含有脂肪酸酯的尿素加合物(ureaadduct)的沉淀物。在一些實(shí)施方案中，將溶液冷卻至約Ot:至約25°C(例如約15t:至約25°C)。在其它實(shí)施方案中，將溶液冷卻至約(TC、約5t:、約1(TC、約15t:、約2(TC、約25。C或約2(TC至約25t:。一旦將溶液冷卻，就可將其在冷卻溫度靜置一段時(shí)間(通常不長(zhǎng)于約20小時(shí))，其間偶爾攪拌。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，在形成溶液(含有脂肪酸酯和所溶解的尿素)后，含有尿素的沉淀物通過對(duì)溶液進(jìn)行濃縮來形成。例如，可通過蒸發(fā)溶液中的一部分溶劑而將溶液濃縮。所除去的溶劑量?jī)?yōu)選足以使溶液中的尿素濃度超過飽和濃度。在尿素結(jié)晶分離方法中，可將溶液保持在非氧化氣氛中，所述非氧化氣氛為例如基本由惰性氣體、氮?dú)饣蛩鼈兊慕M合組成的氣氛，其中基本由氮?dú)饨M成的氣氛是最優(yōu)選的。使用所述氣氛可有助于使對(duì)PUFA酯中的碳_碳雙鍵的氧化最小化。在已形成含有尿素的沉淀物后，可將所述沉淀物與富含PUFA酯的液體餾分分離。這可例如通過過濾或離心來實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述沉淀物可隨后用少量有機(jī)溶劑(優(yōu)選用尿素飽和)洗滌以回收與沉淀物留在一起的任意殘留的未沉淀的所需PUFA酯。接下來，可將該溶劑與所述液體餾分混合?？蓪⑺鲆后w餾分濃縮，與水混合，然后其中的酯可用非極性溶劑從所得混合物中萃取。例如，可通過從所述液體餾分中蒸發(fā)一部分溶劑而將所述液體餾分濃縮(然而所蒸發(fā)的溶劑量?jī)?yōu)選不大到進(jìn)一步使尿素沉淀的程度)。隨后與所得經(jīng)濃縮的液體餾分混合的水量可在寬范圍內(nèi)變化。優(yōu)選地，水與經(jīng)濃縮的液體餾分的體積比為約2:l(在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中還引入足夠的酸(優(yōu)選為H^0》以中和尿素)。可用于從所得經(jīng)濃縮的母液/水混合物中萃取所述脂肪酸酯的非極性溶劑可以是例如石油醚、戊烷、己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯或庚烷，其中己烷是最優(yōu)選的。非極性溶劑與經(jīng)濃縮的母液/水混合物的體積比優(yōu)選為約2:3。在其它實(shí)施方案中，所述液體餾分也可用略微極性的有機(jī)溶劑萃取以使脂肪酸酯(其是略微極性的)的回收最大化。合適的略微極性的溶劑的實(shí)例包括乙醚和乙酸乙酯，其中乙醚是最優(yōu)選的。優(yōu)選地，略微極性的溶劑與所述母液/水混合物的體積比為約2:3。在用該略微極性的溶劑萃取后，可優(yōu)選將所述溶劑與在最初萃取中使用的非極性溶劑混合。萃取結(jié)束后，任意殘留的水可如下從萃取溶劑中除去例如所述溶劑用鹽水洗滌和/或使所述溶劑通過無水鹽(例如硫酸鈉)。然后溶液優(yōu)選通過例如蒸發(fā)一部分溶劑來濃縮。例如，本發(fā)明方法可用于由粗制Mortierellaalpina油純化花生四烯酸乙酯。通過己烷萃取由Mortierellaalpina得到的粗制油(通常其中ARA含量為約0.5g/g油)可直接使用而不經(jīng)任意進(jìn)一步加工(例如冬化和/或RBD加工)?？稍谑覝睾偷?dú)庀聦?50mL無水乙醇(absoluteethanol)加到在一升燒瓶中的175g(約0.2摩爾)粗制油中?？蓪⒒旌衔飻嚢?5分鐘以得到均勻溶液。然后可向所述溶液中加入67g濃度為21X的NaOEt(乙醇鈉)/EtOH(乙醇)溶液(約1.04摩爾當(dāng)量)，并可將混合物在氮?dú)庀禄亓骷s10小時(shí)。反應(yīng)過程可通過氣相色譜法(GC)和/或薄層色譜法(TLC)來監(jiān)測(cè)。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，可蒸餾除去約75mL乙醇，并可將混合物在氮?dú)庀吕鋮s至室溫。可向冷卻的混合物中加入300mL己烷，并可將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后可向混合物中加入300mL去離子水，并可將混合物再攪拌15分鐘。在取出并保存有機(jī)層后，水層可用300mL己烷洗滌兩次。合并的有機(jī)層可用200mL飽和NaCl溶液洗滌。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行的GC分析可用于確定ARA乙酯在粗產(chǎn)物中的量。在一些實(shí)施方案中，粗產(chǎn)物中的約50X為ARA乙酯，其中其余物質(zhì)主要為低分子量乙酯。粗產(chǎn)物然后可經(jīng)歷真空分餾或其它純化方法。在一些實(shí)施方案中，在對(duì)粗產(chǎn)物進(jìn)行分餾后可得到純度大于約60%的ARA乙酯。拋開理論的束縛，認(rèn)為本發(fā)明方法使具有PUFA殘基的甘油三酯發(fā)生直接的酯交換以產(chǎn)生PUFA酯。先前方法使用長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間和大量試劑且使油經(jīng)歷苛刻條件(例如高溫和高酸性條件)。因此，本申請(qǐng)披露的方法提供較有效和較經(jīng)濟(jì)的純化方法，所述純化方法得到純的產(chǎn)物。而且，本申請(qǐng)披露的方法可用于粗制油和經(jīng)純化的油，這使效率和成本節(jié)約得以額外增加。本發(fā)明其它實(shí)施方案包括由本申請(qǐng)所述方法制備的組合物。如上所述，所述組合物可含有大于約50wt.X，大于約55wt.X等的PUFA酯。在所述實(shí)施方案中，所述組合物可含有至少約89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.X的PUFA酯。在其它實(shí)施方案中，所述組合物還可含有低于約10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.25或0.lwt.%的二十碳五烯酸。本發(fā)明組合物可包括如上所述的任意PUFA酯，所述PUFA即DHA、"-3DPA、"-6DPA、ARA、SDA、LLA、ALA、GLA或CLA或它們的組合。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含乙酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約89wt.X的DHA酯。在其它實(shí)施方案中，所述組合物含有至少約89wt.%的DHA酯和DPA酯的組合。本發(fā)明組合物也包括含有至少約60、65、70、75、80、85、90或95wt.XARA酯的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述ARA酯可以是ARA乙酯。在其它實(shí)施方案中，所述組合物還可含有低于約10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.25或0.lwt.%的二十碳五烯酸。本發(fā)明還提供如下組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸(DHA)乙酯和至少約O.lwt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)。這些組合物可通過本申請(qǐng)披露的方法來制備。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中DHA乙酯的量可以是至少約91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.%。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中C28:8的量可以是至少約0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5wt.%。所述C28:8可呈甘油三酯形式或酯形式。例如，所述C28:8可呈乙酯形式。本發(fā)明還提供如下組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸(DHA)乙酯和至少約O.lwt.X的DPA(n-3)。這些組合物可通過本申請(qǐng)披露的方法來制備。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中DHA乙酯的量可以是至少約91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.%。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中DPA(n-3)的量可以是至少約O.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或l.Owt.X的DPA(n-3)。所述DPA(n-3)可呈甘油三酯形式或酯形式。例如，所述DPA(n-3)可呈乙酯形式。在一些實(shí)施方案中，所述組合物含有DHA乙酯、C28:8和DPA(n-3)中的全部三種，其中DHA乙酯、C28:8和DPA(n-3)的濃度范圍如上所述。在其它實(shí)施方案中，所述組合物除DHA乙酯和C28:8外還可含有低于約1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.lwt.X的EPA。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可含有低于約O.25wt.X的EPA。所述EPA可呈甘油三酯形式或酯形式。例如，所述EPA可呈乙酯形式。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可含有Owt.X的EPA。本發(fā)明還提供如下組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少一種額外脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物中DHA乙酯的量可以是至少約91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.%。在一些實(shí)施方案中，所述額外脂肪酸在壓力為0.8mmHg時(shí)可具有約150-17(TC的沸點(diǎn)。本發(fā)明還包括如下組合物，其包含至少約70wt.%的二十二碳六烯酸(DHA)乙酯和至少約25wt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。本發(fā)明組合物還包括如下組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可含有至少約91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n_6)乙酯的組合。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含至少約lOwt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約10wt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。在其它實(shí)施方案中，所述組合物可包含至少約15或20wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約15或20wt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。本發(fā)明還提供如下組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合及至少一種額外脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含至少約91、92、93、94、95、96、97、98或99wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合。在一些實(shí)施方案中，所述額外脂肪酸在壓力為0.8mmHg時(shí)可具有約150-17(TC的沸點(diǎn)。如上所述的DHA/DPA(n-6)組合物還可包含低于約4%的飽和脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述組合物可包含低于約3.5%、3.0%、2.5%、2.0%、1.5%、1.0%或0.5%的飽和脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯可含有少于20個(gè)的碳，且為例如含有19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9或8個(gè)碳的飽和脂肪酸或其酯。在一些實(shí)施方案中，所述飽和脂肪酸或其酯可具有14或16個(gè)碳。本發(fā)明PUFA酯和組合物(有時(shí)統(tǒng)稱為"PUFA酯")可用在藥品中。在一些實(shí)施方案中，所述藥品可含有PUFA酯而不具有額外藥物活性劑。在其它實(shí)施方案中，所述藥品可含有藥物活性劑。藥物活性劑的實(shí)例包括他汀類藥物(statin)、抗高血壓藥物、抗糖尿病藥物、抗癡呆藥物、抗抑郁藥物、抗肥胖藥物、食欲抑制劑及提高記憶和/或認(rèn)知功能的藥物。所述藥品還可含有任意藥用賦型劑、載體、粘合劑或本領(lǐng)域已知的其它制劑組分。通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯和本發(fā)明組合物適于用作治療劑和實(shí)驗(yàn)劑。本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案包括制備用于治療缺乏PUFA的嬰兒的PUFA酯。所述PUFA酯可包括在如下腸胃外制劑中，所述腸胃外制劑可通過腸胃外途徑而給藥至嬰兒以強(qiáng)化對(duì)嬰兒的PUFA供給。優(yōu)選的腸胃外途徑包括但不限于皮下途徑、皮內(nèi)途徑、靜脈內(nèi)途徑、肌內(nèi)途徑和腹膜內(nèi)途徑。腸胃外制劑可包含本發(fā)明PUFA酯和適于腸胃外遞送的載體。本申請(qǐng)使用的〃載體〃是指適于作為媒介物用于將分子或組合物遞送至合適的體內(nèi)作用部位的任意物質(zhì)。所述載體的實(shí)例包括但不限于水、磷酸鹽緩沖鹽水、林格(Ringer's)溶液、葡萄糖溶液、含有血清的溶液、漢克(Hank's)溶液和其它生理平衡水溶液。合適的載體還包括基于油的載體、非水性溶液、混懸液和乳液。實(shí)例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)、可注射的有機(jī)酯(例如油酸乙酯、聚氧化乙烯蓖麻油(polyethoxylatedcastoroil)(Crem即hor))和本領(lǐng)域已知的其它物質(zhì)?？山邮艿囊杂行У姆绞浇o藥PUFA酯的方案包括各個(gè)劑量大小、劑量數(shù)目、劑量給藥頻率和給藥模式。所述方案可由本領(lǐng)域技術(shù)人員基于各種變量來確定，所述變量包括嬰兒體重和PUFA缺乏程度。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案包括制備用于治療成人特別是孕婦的PUFA酯。所述產(chǎn)物可用于增加溫血?jiǎng)游锏娜橹虚L(zhǎng)鏈PUFA的水平。可接受的用于將PUFA酯給藥至成人的方案包括腸胃外供給技術(shù)(parenteralfeedingtechnique)或?qū)⒈景l(fā)明PUFA酯封裝在膠囊[例如明膠(即可消化的)膠囊]中用于口服給藥和/或置于液體飲食制劑(liquiddietformulation)中。液體飲食制劑可包含如下液體組合物，所述液體組合物含有適于補(bǔ)充飲食的營(yíng)養(yǎng)物或足以作為全部飲食(completediet)的營(yíng)養(yǎng)物。通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯和本發(fā)明組合物也可用于治療如下受試者(例如人類或動(dòng)物)，所述受試者具有高水平甘油三酯，其包括患有甘油三酯血癥(triglyceridemia)的受試者。例如，空腹甘油三酯為150mg/dL或更高的受試者可受益于用本發(fā)明PUFA酯進(jìn)行的治療，另外餐后甘油三酯的升高可通過用本發(fā)明PUFA酯進(jìn)行治療來降低。在一些實(shí)施方案中，可將單獨(dú)的PUFA酯給藥至受試者以治療高水平甘油三酯。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA酯可以是DHA或ARA。在其它實(shí)施方案中，可將PUFA酯的組合給藥至受試者以治療高水平甘油三酯。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA酯的組合可包含w-3PUFA和w-6PUFA(例如DHA和DPAn_6)。在一些實(shí)施方案中，所述PUFA酯可占給藥至受試者的組合物的約90%。所述PUFA酯可與其它組分和賦型劑(例如上述載體)一起給藥。所述PUFA酯也可用于治療患有與高水平甘油三酯有關(guān)的疾病(例如心血管疾病或高血壓)的受試者。本發(fā)明PUFA酯和組合物可用于治療患有神經(jīng)障礙、癡呆和癡呆前相關(guān)病癥的受試者。這些病癥包括阿爾茨海默病(Alzheimer'sDisease)、血管性癡呆(VascularDementia)、混合型癡呆(MixedDementia)、盧伊體癡呆(DementiawithLewyBodies)禾口由藥物、譫妄或抑郁造成的繼發(fā)性癡呆。適于與本發(fā)明PUFA酯和組合物一起使用的治療性化合物包括如下任意治療性化合物，所述治療性化合物可用于保護(hù)個(gè)體而使其不患有本申請(qǐng)所述任意病癥或疾病，并23可包括蛋白質(zhì)、氨基酸、藥物、其它天然產(chǎn)物和碳水化合物。所述治療性化合物就所治療的具體疾病或病癥而言是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。與本發(fā)明組合物或制劑聯(lián)用的一些優(yōu)選的治療性化合物包括但不限于他克林(Tacrine)(C0GNEX);多萘哌齊(Don印ezil)(ARICEPT);利伐斯的明(Rivastigmine)(EXEL0N);加蘭他敏(Galantamine)(REMINYL);美金剛(Memantine)(AKATIN0L);噻嗯環(huán)戊酉旨(Neotropin);益智藥(Nootropic);a-生育酚(維生素E);司來吉蘭(Selegeline)(ELDEPRYL);非甾類抗炎藥(NSAIDS);銀杏內(nèi)酯(Gingkobiloba);雌激素(estrogen);P_分泌酶抑制劑；疫苗，其包括基于液體或脂質(zhì)體的疫苗，所述疫苗溶解腦中的斑塊；B族維生素(Bcomplexvitamin);鈣通道阻斷劑；HMGCoA還原酶抑制劑；他汀類和其它抗膽固醇藥物(例如Zocor(辛伐他汀(simvastatin))、Lipitor(阿托伐他汀牽丐(atorvastatincalcium))、Lescol(氟伐他汀(fluvastatin))、Lopid(吉非貝齊(gemfibrozil))或Pravachol(普伐他汀納(pravastatinsodium));甘蔗脂肪醇類(polic眼nol);貝特類(fibrate);氯碘羥喹(Clioquinol);和其它天然產(chǎn)物(例如姜黃素(curcumin)、木脂素(lignan)、植物雌激素(phytoestrogen)、植物甾醇(phytosterol)、煙酸(niacin)禾口維生素補(bǔ)充齊U(vitaminsupplement))。劑量和給藥途徑是本領(lǐng)域已知的并可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。盡管本發(fā)明PUFA酯和組合物可局部給藥或注射給藥，但最優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥。可將所述PUFA以如下形式給藥至個(gè)體營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和/或食品和/或藥物制劑和/或飲料。優(yōu)選的食品類型為醫(yī)藥食品(medicalfood)(例如在如下制劑中的食品，所述制劑在醫(yī)師的監(jiān)督下服用或外部給藥，所述食品旨在對(duì)疾病或病癥進(jìn)行具體的飲食管理，其中明確的營(yíng)養(yǎng)需要基于已知的科學(xué)原則通過醫(yī)藥評(píng)價(jià)來確定)。對(duì)于嬰兒，所述脂肪酸以嬰兒配方(infantformula)、斷奶食品(weaningfood)、罐裝幼兒食品(jarredbabyfood)、母乳強(qiáng)化劑和/或嬰兒谷物(infantcereal)的形式給予嬰兒。本發(fā)明主題涵蓋生物學(xué)可接受的任意劑型及其組合。所述劑型的實(shí)例包括但不限于咀嚼片劑、快速溶解片劑、泡騰片劑、可復(fù)原粉末劑(reconstitutab1epowder)、酏劑、液體制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、片劑、多層片劑、雙層片劑、膠囊劑、軟明膠膠囊劑、硬明膠膠囊劑、小膠囊劑(c即let)、錠劑(lozenge)、咀嚼錠劑、珠劑(bead)、粉末劑(powder)、顆粒劑(granule)、粒子劑(particle)、微粒劑(microparticle)、可分散顆茅立劑(dispersiblegra皿le)、扁囊劑(cachet)、灌洗劑(douche)、栓劑(suppository)、乳膏劑、局部用制劑(topical)、吸入劑(inhalant)、氣霧吸入劑(aerosolinhalant)、貼劑(patch)、顆粒吸入劑(particleinhalant)、植入齊U(implant)、儲(chǔ)庫植入劑(d印otimplant)、可消化齊U(ingestible)、注射齊U(injectable)、輸注齊U(infusion)、健康棒(healthbar)、糖果(confection)、谷物(cereal)、谷物涂層(cerealcoating)、食品(food)、營(yíng)養(yǎng)食品(nutritivefood)、功能食品(functionalfood)和它們的組合。上述劑型的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。優(yōu)選地，富含所需PUFA的食品選自以下組群，所述組群包括但不限于烘焙貨品(bakedgoods)和混合料；口香糖(chewinggum);早餐谷物(breakfastcereal);奶酪制品(cheeseproduct);堅(jiān)果和基于堅(jiān)果的制品(nut-basedproduct);明膠(gelatin)、布丁(pudding)和餡料(filling);冷凍乳制品(frozendairyproduct);奶制品(milkproduct);乳制品類似物；軟糖(softcandy);湯和湯混合料(soupmix);快餐(snackfood);經(jīng)加工的果汁(processedfruitjuice);經(jīng)加工的蔬菜汁(processedvegetablejuice);月旨肪(fat)禾口油(oil);魚制品(fishproduct);植物蛋白制品(plantproteinproduct);禽制品(poultryproduct);禾口肉制品(meatproduct)。本發(fā)明還包括制備本發(fā)明上述任意組合物的方法，例如使用本領(lǐng)域已知的任意合適方法將所述組合物的組分混合成任意合適的遞送形式。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明方法適于用在以下個(gè)體中，所述個(gè)體為脊椎動(dòng)物綱的成員即哺乳動(dòng)物，其包括但不限于靈長(zhǎng)類動(dòng)物、家畜和寵物(例如伴侶動(dòng)物(companionanimal))。最典型地，個(gè)體可以是人類個(gè)體。術(shù)語〃個(gè)體〃可與術(shù)語〃受試者〃或〃患者"互換使用，并且是指本發(fā)明方案或方法的受試者。因此，個(gè)體可包括健康的正常的(沒有患病的)個(gè)體及患有本申請(qǐng)所述癡呆前(pre-dementia)或癡呆或其癥狀或指征或處于發(fā)展出這些疾病風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體。通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯可用于制備PUFA鹽。在一些實(shí)施方案中，PUFA鹽可如下制備在堿金屬堿例如堿金屬氫氧化物(例如氫氧化鉀)存在下使本發(fā)明PUFA酯反應(yīng)。由本發(fā)明PUFA酯制備的PUFA鹽可用在各種應(yīng)用中，例如用在食品、飲料和藥物中。在一些實(shí)施方案中，使用本發(fā)明PUFA酯制備的PUFA鹽是水溶性的，并可直接用在食品、飲料和藥物中。通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯可用在任意動(dòng)物食品原料(foodmaterial)中，特別是用在人類食品原料中，從而得到PUFA濃度提高的食品。脂肪酸在食品中的天然量在食品之間是不同的。本發(fā)明食品可具有正常量的PUFA或改變量的PUFA。在前一種情況下，一部分天然存在的脂質(zhì)可被本發(fā)明PUFA酯所代替。在后一種情況下，天然存在的脂質(zhì)可被本發(fā)明PUFA酯所補(bǔ)充?？蓪UFA酯加到嬰兒食品中，例如加到嬰兒配方和幼兒食品(babyfood)中。根據(jù)本發(fā)明，嬰兒是指嬰兒和小于約兩歲的兒童，特別是指早產(chǎn)兒。一些PUFA是嬰兒配方和幼兒食品中特別重要的組分，這是因?yàn)閶雰旱目焖偕L(zhǎng)(即體重在生命的第一年翻兩番或翻三番)。PUFA酯對(duì)嬰兒配方進(jìn)行補(bǔ)充的有效量為這樣的量，所述量接近PUFA在人類母乳中的濃度。加到嬰兒配方或幼兒食品中的PUFA酯的優(yōu)選量為總脂肪酸的約0.1至約1.0%，更優(yōu)選為總脂肪酸的約0.1至約0.6%，且甚至更優(yōu)選為總脂肪酸的約0.4%。本發(fā)明另一個(gè)方面包括含有食品材料(foodmaterial)及本發(fā)明PUFA酯的食品?？蓪UFA酯加到食品材料中以制備PUFA濃度提高的食品。本申請(qǐng)使用的術(shù)語〃食品材料〃是指供人類或非人類動(dòng)物食用的任意食品類型。本發(fā)明還包括制備食品的方法，其包括將通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯加到食品材料中。適于制備本發(fā)明食品的食品材料包括動(dòng)物食品。術(shù)語〃動(dòng)物〃是指屬于動(dòng)物界的任意生物體，并包括但不限于靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人類和猴子)、家畜和寵物。術(shù)語〃食品"包括供所述動(dòng)物食用的任意產(chǎn)品。供人類消費(fèi)的優(yōu)選食品材料包括嬰兒配方和幼兒食品。供寵物消費(fèi)的優(yōu)選食品材料包括狗糧?？稍谏a(chǎn)的各個(gè)階段將通過本發(fā)明方法制備的PUFA酯加到范圍廣泛的產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品為例如烘焙貨品、維生素補(bǔ)充劑、飲食補(bǔ)充劑(dietsupplement)、粉狀飲料(powdereddrink)等。使用本發(fā)明組合物可制備多種成品或半成品粉狀食品(powderedfoodproduct)。含有本發(fā)明產(chǎn)物的部分食品包括面團(tuán)(dough)、面糊(batter)、烘焙食品(baked25fooditem)，其包括例如蛋糕(cake)、奶酪蛋糕(cheesecake)、派(pie)、紙托蛋糕(cupcake)、曲奇餅(cookie)、餅干棒(bar)、面包(bread)、面包巻(roll)、餅干(biscuit)、松餅(muffin)、酥皮點(diǎn)心(pastry)、烤餅(scone)和面包丁(crouton);液體食品，例如飲料、能量飲料(energydrink)、嬰兒配方(infantformula)、液體膳食(liquidmeal)、果汁(fruitjuice)、多維生素糖槳(multivitaminsyrup)、膳食替代品(mealr印lacer)、醫(yī)藥食品(medicinalfood)和糖槳；半固體食品，例如幼兒食品(babyfood)、酸奶(yogurt)、奶酪(cheese)、谷物(cereal)、薄烤餅混合料(pancakemix);食品棒(foodbar)，其包括會(huì)g量棒(energybar);力口工肉類(processedmeat);冰淇淋；冷凍舌甘點(diǎn)(frozendessert);冷凍酸奶(frozenyogurt);華夫混合料(wafflemix);沙拉調(diào)味料(saladdressing);和蛋替代品混合料(r印lacementeggmix)。還包括烘焙貨品，例如曲奇餅、薄脆餅(cracker)、甜食(sweetgood)、零食蛋糕(snackcake)、派、燕麥花巻(granola)/零食棒(snackbar)和烤制酥皮點(diǎn)心(toasterpastry);鹽制零食(saltedsnack)，例如土豆片、玉米片、玉米餅(tortillachip)、擠出零食(extrudedsnack)、爆米花(popcorn)、椒鹽巻餅(pretzel)、炸薯?xiàng)l(potatocrisp)和堅(jiān)果；特色零食(specialtysnack)，例如蘸料(dip)、水果干零食(driedfruitsnack)、肉類零食(meatsnacks)、豬肉皮(porkrind)、保健食品棒(healthfoodbar)和稻米/玉米蛋糕；和糖果零食(confectionarysnack)，例如糖果(candy)。盡管通過具體的方法、產(chǎn)物和生物體披露了本發(fā)明，但本發(fā)明意在包括根據(jù)本申請(qǐng)披露的教導(dǎo)而可得到且可使用的所有方法、產(chǎn)物和生物體，其包括本領(lǐng)域技術(shù)人員可得到的所有替代形式、改變形式和優(yōu)化形式。出于說明目的提供以下實(shí)施例和試驗(yàn)結(jié)果而不是意在限制本發(fā)明范圍。實(shí)施例1該實(shí)施例說明了本發(fā)明由含有二十二碳六烯酸的單細(xì)胞油(singlecelloil)純化二十二碳六烯酸乙酯(DHA乙酯)的方法。在室溫和氮?dú)庀聦?50mL無水乙醇(Et0H)加到在一升燒瓶中的175g(約0.2摩爾甘油三酯)DHASCO⑧-T油(MartekBiosciencesCorporation,Columbia,MD，其DHA含量為0.4g/g油)中。DHASCC^-T油由微藻寇氏隱甲藻制備。將混合物攪拌15分鐘，從而得到均勻溶液。然后向溶液中加入67g濃度為21%的乙醇鈉/乙醇溶液(Na0Et/Et0H)(其為甘油三酯的約1.04摩爾當(dāng)量)，并使混合物在氮?dú)庀禄亓骷s9小時(shí)。反應(yīng)過程通過氣相色譜法(GC)和薄層色譜法(TLC)來監(jiān)測(cè)。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，蒸餾除去約75mLEt0H。然后將反應(yīng)混合物在氮?dú)庀吕鋮s至室溫。向冷卻的反應(yīng)混合物中加入300mL己烷，并將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后向混合物中加入300mL去離子水，并將混合物再攪拌15分鐘。在取出并保存有機(jī)層后，水層用300mL己烷洗滌兩次。棄去深褐色水層。然后合并的有機(jī)層用200mL飽和NaCl溶液洗滌。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行的GC分析表明存在約44.7%的DHA乙酯；其余物質(zhì)主要為低分子量乙酯(參見表1)。將合并的有機(jī)層減壓濃縮。然后使粗濃縮物經(jīng)歷真空分餾(vac皿mfractionaldistillation)。在溫度為100-150。C且壓力為0.8mmHg的情況下收集低分子量乙酯。該餾分的主要組分為油酸酯、飽和C-14酯和飽和C-12酯(oleic,saturatedC-14andC-12ester)。在溫度為155-165。C且壓力為0.8mmHg的情況下收集DHA乙酯。對(duì)DHA乙酯餾分進(jìn)行的GC分析顯示DHA純度為約91.3X(參見表1)。由所述分餾得到68g(86%收率)DHA乙酯，其為淺黃色油狀物。表1.對(duì)DHASCO②-T油酯交換和蒸餾產(chǎn)物進(jìn)行的GC分析<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例2該實(shí)施例說明了本發(fā)明由粗制寇氏隱甲藻油純化二十二碳六烯酸乙酯(DHA乙酯)的方法。通過己烷萃取由寇氏隱甲藻得到的粗制油(DHA含量為0.5g/g油)無需任何進(jìn)一步加工(例如冬化和/或RBD加工)即直接使用。在室溫和氮?dú)庀聦?50mL無水乙醇加到在一升燒瓶中的175g(約0.2摩爾甘油三酯)粗制油中。將混合物攪拌15分鐘，從而得到均勻溶液。然后向溶液中加入67g濃度為21%的NaOEt/EtOH溶液(其為甘油三酯的約1.04摩爾當(dāng)量)，并使混合物在氮?dú)庀禄亓骷s10小時(shí)。反應(yīng)過程通過GC和TLC來監(jiān)測(cè)。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，蒸餾除去約75mL乙醇，并在氮?dú)庀聦⒒旌衔锢鋮s至室溫。向冷卻的混合物中加入300mL己烷，并將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后向混合物中加入300mL去離子水，并將混合物再攪拌15分鐘。在取出并保存有機(jī)層后，水層用300mL己烷洗滌兩次。合并的有機(jī)層然后用200mL飽和NaCl溶液洗滌。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行的GC分析表明存在約51%的DHA乙酯；其余物質(zhì)主要為低分子量乙酯(參見表2)。將合并的有機(jī)層減壓濃縮。然后使粗濃縮物經(jīng)歷真空分餾。在溫度為100-150°C且壓力為0.8mmHg的情況下收集低分子量乙酯。該餾分的主要組分為油酸酯、飽和C-14酯和飽和C-12酯。在溫度為155-165"且壓力為0.8mmHg的情況下收集DHA乙酯。對(duì)DHA乙酯餾分進(jìn)行的GC分析顯示DHA純度為約92X(參見表2)。由所述分餾得到69g(66%收率)DHA乙酯，其為淺黃色油狀物。表2.對(duì)粗制寇氏隱甲藻油酯交換和蒸餾產(chǎn)物進(jìn)行的GC分析<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實(shí)施例3該實(shí)施例說明了本發(fā)明由粗制裂殖壺菌屬種(Schizochytriumsp.)油純化二十二碳六烯酸乙酯(其形式為DHA乙酯/DPA乙酯混合物)的方法。通過己烷萃取由裂殖壺菌屬種得到的粗制油無需任何進(jìn)一步加工(例如冬化和/或RBD加工)即直接使用。在室溫和氮?dú)庀聦?50mL無水乙醇加到在一升燒瓶中的175g(約0.2摩爾甘油三酯)粗制油(DHA含量為40X且DPA含量為15%)中。將混合物攪拌15分鐘，從而得到均勻溶液。然后向溶液中加入67g濃度為21X的NaOEt/EtOH溶液(其為甘油三酯的約1.04摩爾當(dāng)量)，并使混合物在氮?dú)庀禄亓骷s10小時(shí)。反應(yīng)過程通過GC和TLC來監(jiān)測(cè)。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，蒸餾除去約65mL乙醇，并在氮?dú)庀聦⒒旌衔锢鋮s至室溫。向冷卻的混合物中加入300mL己烷，并將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后向混合物中加入300mL去離子水，并將混合物再攪拌15分鐘。在取出并保存有機(jī)層后，水層用300mL己烷洗滌兩次。合并的有機(jī)層用200mL飽和NaCl溶液洗滌。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行的GC分析表明存在約40%的DHA乙酯和15%的DPA乙酯；其余物質(zhì)主要為低分子量乙酯(參見表3)。將合并的有機(jī)層減壓濃縮。然后使粗濃縮物經(jīng)歷真空分餾。在溫度為100-150°C且壓力為0.8mmHg的情況下收集低分子量乙酯。該餾分的主要組分為飽和C_14乙酯和飽和C-16乙酯。在溫度為155-17(TC且壓力為約0.5mmHg的情況下收集DHA乙酯/DPA乙酯混合物。對(duì)DHA/DPA乙酯餾分進(jìn)行的GC分析顯示組合純度(combinedpurity)為約93%(參見表3)。由所述分餾得到85g(85X收率)DHA/DPA乙酯，其為極淺黃色油狀物。表3.對(duì)粗制裂殖壺菌屬種油酯交換和蒸餾產(chǎn)物進(jìn)行的GC分析。樣品酯交換后的有機(jī)層真空分餾后含有DHA/DPA乙酯的餾分%22:6(n-3)DHA40.0767.31%22:5(n-6)DPA15.0925.86%20:5(n-3)EPA1.210.32%額外組分43.636.5實(shí)施例4該實(shí)施例說明了對(duì)來自寇氏隱甲藻油和裂殖壺菌屬種油的粗制和經(jīng)純化的PUFA乙酯進(jìn)行的GC分析。通過己烷萃取由裂殖壺菌屬種或寇氏隱甲藻得到的粗制油無需任何進(jìn)一步加工(例如冬化和/或RBD加工)即直接使用。然后使粗制油經(jīng)歷如以上實(shí)施例2和3中所述的酯交換反應(yīng)。然后使粗乙酯經(jīng)歷如上所述的尿素加合(ureaadduction)，或經(jīng)歷如實(shí)施例2和3中所述的蒸餾。然后對(duì)每種樣品及DPA乙酯產(chǎn)物或DHA乙酯產(chǎn)物進(jìn)行GC分析(Nu-ChekPr印，Inc.，Elysian，MN)。結(jié)果示于下表4(裂殖壺菌屬種)或下表5(寇氏隱28甲藻)中。對(duì)來自寇氏隱甲藻油的粗制和經(jīng)蒸餾的乙酯進(jìn)行兩種分析。表4.對(duì)裂殖壺菌屬種乙酯產(chǎn)物進(jìn)行的GC分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>脂肪酸粗乙酯對(duì)粗制油進(jìn)行尿素加合后的乙酯對(duì)粗制油進(jìn)行蒸餾后的乙酯Nu-ChekDPAEE%C22:6(n-3)DHA40.6557.6771.830.00%額外組分4.957.190.940.80實(shí)施例5該實(shí)施例說明了本發(fā)明通過尿素結(jié)晶(ureacrystallization)由含有二十二碳六條酸的單細(xì)胞油(docosahexaneoicacid—containingsinglecelloil)的月旨肪酸乙酉旨混合物純化二十二碳六烯酸乙酯(DHA乙酯)的方法。在7(TC和氮?dú)庀聦⒅舅嵋阴サ?50g粗混合物(其如下得到對(duì)含有二十二碳六烯酸的單細(xì)胞DHASGO⑧-T油(由微藻寇氏隱甲藻制備)進(jìn)行酯交換)加到262.5g尿素(其為酯的1.75重量當(dāng)量)于1050mL甲醇(其為酯的7體積當(dāng)量)中的溶液中。將所得尿素和酯的混合物繼續(xù)在7(TC和氮?dú)庀录訜?小時(shí)。首先將混合物冷卻至2(TC，然后冷卻至o-4t:，從而完成尿素加合物結(jié)晶。將混合物再在o-4t:放置2小時(shí)。然后在o-4t:過濾所結(jié)晶的尿素加合物。濾液用300mL水稀釋，且混合物用稀硫酸酸化至pH為1_2。經(jīng)酸化的溶液用己烷(300mLX3)萃取。合并的己烷萃取物用飽和NaCl溶液洗滌。經(jīng)洗滌的己烷溶液用無水硫酸鈉干燥，并真空濃縮，從而得到70-75%的理論收率。通常，GC分析顯示以上所得DHA乙酯的純度為約90-96%(800-860mg/g)。表5.對(duì)寇氏隱甲藻乙酯產(chǎn)物進(jìn)行的GC分析脂肪酸粗乙酯對(duì)粗制油進(jìn)行尿素加合后的乙酯對(duì)粗制油進(jìn)行蒸餾后的乙酯粗乙酯#2對(duì)粗制油進(jìn)行蒸餾后的乙酯#2Nu-ChekD鵬E%C8:00.190.000.000.360.000.00%C10:00.950.000.001.860.000.00%C12:04.040.000.007.180.000.00%C13:00.000.090.000.000.000.00%C14:013.770.000.0019.990.000.00%C14:l0.170.000.000.190.000.00%C16:011.080.000.1016.150.000.10%C16:l2.830.000.002.240.000.0030<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>**未確定以上說明書描述了本發(fā)明原理、優(yōu)選實(shí)施方案和操作模式。然而，本申請(qǐng)意在保護(hù)的發(fā)明不應(yīng)該被解釋為限于所披露的具體形式，這是因?yàn)樗鼍唧w形式是說明性而非限制性的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可在不背離本發(fā)明主旨的情況下進(jìn)行更改和變化。因此，應(yīng)該認(rèn)為實(shí)施本發(fā)明的上述最佳模式本質(zhì)上是示例性的，而不應(yīng)該認(rèn)為其限制了所附權(quán)利要求書中所述的本發(fā)明范圍和主旨。權(quán)利要求一種純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其包括a)在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯；和b)蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分。2.權(quán)利要求l的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟在約6(TC至約120。C的溫度進(jìn)行。3.權(quán)利要求1的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約2小時(shí)至約12小時(shí)的時(shí)間。4.權(quán)利要求l的方法，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷選自如下的一種或多種處理精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白。6.權(quán)利要求l的方法，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物來自選自如下的來源植物、微生物、動(dòng)物和它們的混合物。7.權(quán)利要求6的方法，其中所述來源為選自如下的微生物藻類、細(xì)菌、真菌和原生生物。8.權(quán)利要求6的方法，其中所述來源選自植物，所述植物選自大豆、玉米、稻米、紅花、向日葵、蕓苔、亞麻、花生、芥菜、油菜籽、鷹嘴豆、棉花、扁豆、白三葉草、橄欖、棕櫚、琉璃苣、月見草、亞麻籽和煙草及它們的混合物。9.權(quán)利要求6的方法，其中所述來源選自經(jīng)遺傳修飾的植物和經(jīng)遺傳修飾的微生物，其中所述遺傳修飾包括引入聚酮合成酶基因。10.權(quán)利要求6的方法，其中所述來源為選自如下的微生物破囊壺菌目微生物、甲藻和被孢霉屬微生物。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述微生物為破囊壺菌目微生物。12.權(quán)利要求ll的方法，其中所述微生物為裂殖壺菌屬微生物。13.權(quán)利要求ll的方法，其中所述微生物為破囊壺菌屬微生物。14.權(quán)利要求10的方法，其中所述微生物為隱甲藻屬的甲藻。15.權(quán)利要求6的方法，其中所述來源為選自水生動(dòng)物的動(dòng)物。16.權(quán)利要求1的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為具有至少18個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度的多不飽和脂肪酸。17.權(quán)利要求l的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為選自如下的多不飽和脂肪酸二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、十八碳四烯酸、亞麻酸、a亞麻酸、Y亞麻酸、共軛亞麻酸和它們的混合物。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。19.權(quán)利要求17的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸。20.權(quán)利要求l的方法，其中所述堿為具有式RO-M的堿，其中M為單價(jià)陽離子，以及RO為C卜e烷基醇的醇化物根。21.權(quán)利要求l的方法，其中所述堿為乙醇鈉。22.權(quán)利要求1的方法，其中所述醇為C卜6烷基醇。23.權(quán)利要求1的方法，其中所述醇為乙醇，以及所述多不飽和脂肪酸酯為多不飽和脂肪酸乙酯。24.權(quán)利要求l的方法，其中蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在真空下進(jìn)行。25.權(quán)利要求24的方法，其中蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在低于約17(TC的溫度進(jìn)行。26.權(quán)利要求1的方法，其中所回收的餾分含有至少約50wt.%的多不飽和脂肪酸酯。27.權(quán)利要求1的方法，其中所回收的餾分含有至少約75wt.%的多不飽和脂肪酸酯。28.權(quán)利要求1的方法，其中所回收的餾分含有至少約90wt.%的多不飽和脂肪酸酯。29.權(quán)利要求1的方法，其中所回收的餾分含有至少約95wt.%的多不飽和脂肪酸酯。30.權(quán)利要求1的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟通過直接酯交換由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。31.權(quán)利要求1的方法，其還包括a)將含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分與尿素在介質(zhì)中混合；b)冷卻或濃縮所述介質(zhì)以形成含有尿素的沉淀物和液體餾分；以及c)將所述沉淀物與所述液體餾分分離。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述介質(zhì)還含有可溶解所述多不飽和脂肪酸酯的有機(jī)溶劑。33.權(quán)利要求32的方法，其中所述有機(jī)溶劑包括具有1至4個(gè)碳原子的烷基醇。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述有機(jī)溶劑包括乙醇。35.權(quán)利要求31的方法，其中將所述介質(zhì)冷卻至約ot:至約25t:的溫度以形成所述含有尿素的沉淀物。36.權(quán)利要求31的方法，其中所述含有尿素的沉淀物中的至少一部分在非氧化氣氛下形成。37.—種由含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物制備多不飽和脂肪酸酯的方法，其包括a)在醇和堿存在下對(duì)所述組合物進(jìn)行酯交換以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯；以及b)蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分。38.—種純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其包括a)在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯；以及b)分離出含有至少約75%多不飽和脂肪酸酯的餾分。39.—種制備含有多不飽和脂肪酸酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物沒有經(jīng)歷選自如下的一種或多種處理精制、脫溶劑、除臭、冬化、冷過濾和漂白。40.權(quán)利要求39的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟在約6(TC至約120。C的溫度進(jìn)行。41.權(quán)利要求39的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟進(jìn)行約2小時(shí)至約12小時(shí)的時(shí)間。42.權(quán)利要求39的方法，其還包括蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟。43.權(quán)利要求39的方法，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物來自選自如下的來源植物、微生物、動(dòng)物和它們的混合物。44.權(quán)利要求43的方法，其中所述來源為選自如下的微生物藻類、細(xì)菌、真菌和原生生物。45.權(quán)利要求43的方法，其中所述來源選自植物，所述植物選自大豆、玉米、稻米、紅花、向日葵、蕓苔、亞麻、花生、芥菜、油菜籽、鷹嘴豆、棉花、扁豆、白三葉草、橄欖、棕櫚、琉璃苣、月見草、亞麻籽和煙草及它們的混合物。46.權(quán)利要求43的方法，其中所述來源選自經(jīng)遺傳修飾的植物和經(jīng)遺傳修飾的微生物，其中所述遺傳修飾包括引入聚酮合成酶基因。47.權(quán)利要求43的方法，其中所述來源為選自如下的微生物破囊壺菌目微生物、甲藻和被孢霉屬微生物。48.權(quán)利要求47的方法，其中所述微生物為破囊壺菌目微生物。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述微生物為裂殖壺菌屬微生物。50.權(quán)利要求48的方法，其中所述微生物為破囊壺菌屬微生物。51.權(quán)利要求47的方法，其中所述微生物為隱甲藻屬的甲藻。52.權(quán)利要求43的方法，其中所述來源為選自水生動(dòng)物的動(dòng)物。53.權(quán)利要求39的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為具有至少18個(gè)碳的鏈長(zhǎng)度的多不飽和脂肪酸。54.權(quán)利要求39的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為選自如下的多不飽和脂肪酸二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、十八碳四烯酸、亞麻酸、a亞麻酸、Y亞麻酸、共軛亞麻酸和它們的混合物。55.權(quán)利要求54的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為二十二碳六烯酸。56.權(quán)利要求54的方法，其中所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸。57.權(quán)利要求39的方法，其中所述堿為具有式R0-M的堿，其中M為單價(jià)陽離子，以及R0為(V6烷基醇的醇化物根。58.權(quán)利要求39的方法，其中所述堿為乙醇鈉。59.權(quán)利要求39的方法，其中所述醇為C卜6烷基醇。60.權(quán)利要求39的方法，其中所述醇為乙醇，以及所述多不飽和脂肪酸酯為多不飽和脂肪酸乙酯。61.權(quán)利要求42的方法，其中蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在真空下進(jìn)行。62.權(quán)利要求61的方法，其中蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分的步驟在低于約17(TC的溫度進(jìn)行。63.權(quán)利要求42的方法，其中所回收的餾分含有至少約50wt.%的多不飽和脂肪酸酯。64.權(quán)利要求42的方法，其中所回收的餾分含有至少約75wt.%的多不飽和脂肪酸酯。65.權(quán)利要求42的方法，其中所回收的餾分含有至少約90wt.%的多不飽和脂肪酸酯。66.權(quán)利要求42的方法，其中所回收的餾分含有至少約95wt.%的多不飽和脂肪酸酯。67.權(quán)利要求39的方法，其中在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)的步驟通過直接酯交換由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。68.—種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少約O.lwt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。69.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物含有至少約O.5wt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。70.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物含有至少約1.Owt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。71.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物含有至少約1.2wt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。72.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.lwt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。73.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.3wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。74.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.4wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。75.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.5wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。76.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物含有至少約92wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。77.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物含有至少約95wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。78.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有小于約lwt.%的二十碳五烯酸或其酯。79.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有小于約0.5wt.%的二十碳五烯酸或其酯。80.權(quán)利要求68的組合物，其中所述組合物還含有小于約0.25wt.%的二十碳五烯酸或其酯。81.—種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少約O.lwt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。82.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物含有至少約0.3wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。83.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物含有至少約0.4wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。84.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物含有至少約0.5wt.%的二十二碳五烯酸(n-3)或其酯。85.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.5wt.%的4，7，10，13，16，’19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。86.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有至少約0.75wt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。87.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有至少約1.Owt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。88.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有至少約1.2wt.%的4，7，10，13，16，19，22，25-二十八碳八烯酸(C28:8)或其酯。89.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物含有至少約92wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。90.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物含有至少約95wt.%的二十二碳六烯酸乙酯。91.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有小于約lwt.%的二十碳五烯酸或其酯。92.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有小于約0.5wt.%的二十碳五烯酸或其酯。93.權(quán)利要求81的組合物，其中所述組合物還含有小于約0.25wt.%的二十碳五烯酸或其酯。94.一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯，其中所述組合物還含有至少一種額外脂肪酸或其酯，所述額外脂肪酸或其酯在壓力為O.8mmHg時(shí)具有約150-170。C的沸點(diǎn)。95.—種組合物，其包含至少約70wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約25wt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。96.權(quán)利要求95的組合物，其中所述組合物還含有小于約4%的飽和脂肪酸或其酯。97.權(quán)利要求96的組合物，其中所述飽和脂肪酸或其酯具有少于20個(gè)碳。98.權(quán)利要求96的組合物，其中所述飽和脂肪酸或其酯具有14或16個(gè)碳。99.一種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合。100.權(quán)利要求99的組合物，其中所述組合物含有至少約10wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和至少約lOwt.%的二十二碳五烯酸(n-6)乙酯。101.權(quán)利要求99的組合物，其中所述組合物還含有小于約4%的飽和脂肪酸或其酯。102.權(quán)利要求IOI的組合物，其中所述飽和脂肪酸或其酯具有少于20個(gè)碳。103.權(quán)利要求101的組合物，其中所述飽和脂肪酸或其酯具有14或16個(gè)碳。104.—種組合物，其包含至少約90wt.%的二十二碳六烯酸乙酯和二十二碳五烯酸(n-6)乙酯的組合，其中所述組合物還含有至少一種額外脂肪酸或其酯，所述額外脂肪酸或其酯在壓力為0.5mmHg時(shí)具有約150_175°C的沸點(diǎn)。105.—種制備含有多不飽和脂肪酸酯的組合物的方法，其包括在醇和堿存在下使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯，其中所述含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物具有選自如下的至少一個(gè)特征至少約300卯m的磷、至少約0.4%的游離脂肪酸和至少約0.2meq/kg的過氧化值。106.—種純化含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物的方法，其中所述組合物具有選自如下的至少一個(gè)特征至少約300ppm的磷、至少約0.4%的游離脂肪酸和至少約0.2meq/kg的過氧化值，所述方法包括a)在醇和堿存在下使所述組合物反應(yīng)以由所述甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯；以及b)蒸餾所述組合物以回收含有所述多不飽和脂肪酸酯的餾分。107.—種組合物，其包含至少約60wt.%的花生四烯酸酯。108.權(quán)利要求107的組合物，其中所述組合物還含有小于約10wt.%的二十碳五烯酸。109.權(quán)利要求107的組合物，其中所述花生四烯酸酯為花生四烯酸乙酯。110.—種治療具有高水平甘油三酯的受試者的方法，其包括向所述受試者給藥權(quán)利要求68、81、94、95、99或104的組合物。111.一種治療患有神經(jīng)障礙、癡呆或癡呆前相關(guān)病癥的受試者的方法，其包括向所述受試者給藥權(quán)利要求68、81、94、95、99或104的組合物。全文摘要本發(fā)明包括用于制備和純化多不飽和脂肪酸酯的方法，其包括在醇和堿存在下使含有具有多不飽和脂肪酸殘基的甘油三酯的組合物反應(yīng)以由甘油三酯制備多不飽和脂肪酸酯。所述組合物可以是含有多不飽和脂肪酸的沒有經(jīng)常規(guī)加工的組合物?？赏ㄟ^蒸餾對(duì)經(jīng)反應(yīng)的組合物進(jìn)行進(jìn)一步加工。文檔編號(hào)C07C51/00GK101796014SQ200880104965公開日2010年8月4日申請(qǐng)日期2008年6月27日優(yōu)先權(quán)日2007年6月29日發(fā)明者克里什納·拉曼,克里斯·盧加特,尼爾·萊寧格,李禎洙申請(qǐng)人:馬泰克生物科學(xué)公司