專利名稱：：用于擴增和檢測呼吸道病毒的核酸序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及呼吸道病毒的檢測方法，以及用于它們的特異性檢測的化驗、試劑和試齊U盒。
背景技術(shù)：
：病毒性呼吸道感染(VRTIs)的經(jīng)濟和健康負擔(dān)極其嚴(yán)重。在美國，呼吸道感染引起接近一半的因傳染性疾病而導(dǎo)致的死亡(Wei和Norwood，2001，Obstet.Gynecol.Clin.NorthAm.28:283_304)，流感感染是第六大致死因素(Maher等，2006，Am.J.Infect.Control34:E107)。每年，大約200，000美國人因流感和與流感相關(guān)的并發(fā)癥而入院，且多于36，000人死亡。在過去的100年中，這種病毒在每年的流行病和偶爾的大爆發(fā)中已造成損失。事實上，僅在1918年的大爆發(fā)中，流感造成了超過2千萬人死亡。更快速的診斷方法將給臨床醫(yī)生提供關(guān)鍵信息，可能有助于提高對與呼吸道病毒相關(guān)的感染的控制和可能有利于削減醫(yī)療衛(wèi)生費用。過去幾十年，基于病毒基因的檢測取得了較大進展。然而，一個與基于基因的化驗相關(guān)的難題在于，遺傳材料在不同株系或種類之間的可變性。同樣地，為進行有效的診斷，適當(dāng)?shù)幕炓髾z測多種病原體的存在，或者甚至是幾種病原體株系的存在。解決這些難題的一種方法是，設(shè)計用于在相同的化驗中進行多個病原體的特異檢測的化驗，該化驗基于通過使用例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對病原體遺傳材料的擴增。然而，這種類型的化驗受到有關(guān)缺乏特異性的缺點的影響，即引物和/或探針與來自非期望株系或病原體的遺傳材料的交叉反應(yīng)，以及受到有關(guān)缺乏靈敏度和可重復(fù)性的缺點的影響。事實上，PCR引物的多重化很難進行，因為在同一容器內(nèi)同時存在幾對引物增加了錯配和形成非特異性擴增產(chǎn)物如引物二聚體的可能性。最近已評述了獲得呈現(xiàn)特異性、靈敏度和一致性基本特征的探針組組合所需的條件(Loy和Bodrossy，2006，Clin.Chim.Acta263:106-119)。根據(jù)他們的分析，高度特異性識別、高效結(jié)合和一致的熱力學(xué)行為的理想特性代表了在實踐中很難實現(xiàn)的相矛盾的目標(biāo)。他們建議使用仔細的設(shè)計原則，但是又承認已知這些原則的可預(yù)測價值對于固相載體雜交是不可靠的且需要對探針組合進行實驗驗證。他們建議的其他方法是在探針組合策略中增加冗余。然而，增加更多的探針提高了費用和復(fù)雜性，而限制了小型化和平行化能力。Briese等開發(fā)出使用PCR擴增與質(zhì)譜技術(shù)的結(jié)合可能檢測22種VRTIs的化驗(Briese等，2005，Emerg.Infect.Dis.11:310_313)。使用這種技術(shù)達到的靈敏度是靶基因的500-1000個RNA拷貝。其他小組開發(fā)了TaqMan多重PCR化驗，用于同時檢測7、9或12種呼吸道病毒，全部都包括在本發(fā)明中(Gr5ndahl等，1999，J.Clin.Microbiol.371-7；Syrmis等，2004，J.MoI.Diagn.6125-131；Templeton等，2004，J.Clin.Microb.421564-1569；Gunson等，2005，J.Clin.Virol.33:341_344；Bellau-Pujol等，2005，J.Virol.Methods126:53_63)。兩項專利已公開了通過多重PCR檢測呼吸道病毒。對于這兩項發(fā)明，目標(biāo)呼吸道病毒的特異性檢測是使用酶雜交化驗(美國專利號6，015，664)或微陣列(美國專利號6，881，835)進行的。我們對以上提及文獻描述的引物序列的分析表明，由于它們不可能檢測目標(biāo)種類的全部病毒株系，普遍性不完整。因此有對改進的試劑和化驗的需求，該試劑和化驗使得特異和靈敏地檢測大部分臨床重要的呼吸道病毒病原體。本發(fā)明設(shè)法滿足這些和其他的需求。發(fā)明概述本發(fā)明涉及呼吸道病毒的檢測方法，以及用于特異的檢測臨床上相關(guān)RNA和DNA呼吸道病毒的試劑、化驗和試劑盒。更具體地，本發(fā)明提供了用于特異和靈敏地檢測15種臨床上最重要的呼吸道病毒病原體的方法、試劑、化驗和試劑盒，所述15種臨床上最重要的呼吸道病毒病原體包括(i)A型和B型流感病毒，(ii)人類呼吸道合胞病毒(RSV)，(iii)人類偏肺病毒(hMPV)，(iv)人類腸道病毒和鼻病毒(全部已知的血清型)，(ν)副流感病毒1型、2型、3型和4型，(vi)冠狀病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV(與急性重癥呼吸綜合征(SARS)相關(guān))，以及(vii)與VRTIs相關(guān)的全部腺病毒血清型。檢測的方法可以通過用病毒特異性寡核苷酸擴增遺傳材料、通過用病毒特異性寡核苷酸與遺傳材料雜交或者通過擴增和雜交的結(jié)合來實現(xiàn)。本發(fā)明的重要優(yōu)勢在于，用于各種呼吸道病毒種類的擴增步驟可以在相似或一致的擴增條件下進行。同樣地，各種呼吸道病毒種類的擴增可以同時進行。根據(jù)本發(fā)明的一種實施方案，呼吸道病毒的檢測可以平行進行。本發(fā)明的另一個重要優(yōu)勢在于，雜交也可以在相似或一致的雜交條件下進行。此外，遺傳材料的檢測也可以在相似或一致的檢測條件下進行。因此，本發(fā)明一方面涉及用于檢測和/或鑒別呼吸道病毒的方法，該方法可以包括在雜交、擴增和/或檢測合適的條件下，將包含或被懷疑包含源自呼吸道病毒的遺傳材料的樣品與寡核苷酸或寡核苷酸組合物相接觸的步驟。所述方法、試劑、化驗和/或試劑盒可以基于特異性檢測(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒(全部已知的血清型)的5’-非編碼區(qū)，(vii)各副流感病毒1型、2型、3型和4型的融合基因，(viii)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(ix)各種冠狀病毒NL、229E和SARS-CoV的聚合酶基因，以及(χ)與VRTIs相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)。由于可以使用相似的擴增條件，本發(fā)明的一個優(yōu)勢在于，幾種呼吸道病毒種類的擴增可以在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。例如，人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的擴增可以在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的擴增可以在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。冠狀病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的擴增也可以在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。腺病毒、B型流感和副流感4型的擴增也可以在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。當(dāng)然，如果需要，呼吸道病毒的檢測可以分開進行(即在分開的或不同的試管內(nèi)和/或分開的實驗中)。本發(fā)明一方面涉及能夠與呼吸道病毒的遺傳材料特異性結(jié)合的試劑，包括引物、探針、引物組合物、探針組合物或者引物和探針的組合物。就申請人的全部所知，在此出現(xiàn)的引物和/或探針的組合物以前并未描述過。實際上，在以上提及的研究中提出的其它化驗，既不是以檢測相同靶基因為目標(biāo)，也不使用不同擴增引物/探針。相信本發(fā)明不僅可以用于檢測已知的靶病毒種類，還可以用于檢測和鑒別屬于目標(biāo)屬的仍然未知的種類。發(fā)明詳述本領(lǐng)域內(nèi)已知，遺傳材料可以通過使用為它們的特異性檢測而最優(yōu)設(shè)計的引物或探針進行擴增和/或雜交來檢測。涉及擴增來自病毒的遺傳材料的挑戰(zhàn)在于，一些病原體的遺傳材料具有單鏈或雙鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA、甚至是RNA/DNA嵌合體的形式。為設(shè)計特異性的引物和/或探針，應(yīng)當(dāng)記住試圖檢測的各病原體的遺傳材料的特征。然而，本領(lǐng)域內(nèi)熟知，通過反轉(zhuǎn)錄(RT)酶可將RNA轉(zhuǎn)化成DNA?？晒┻x擇地，例如當(dāng)合適的啟動子(如RNA聚合酶啟動子)和/或其他調(diào)控元件與其操作連接時，可將DNA轉(zhuǎn)化成RNA。因此，用于實施本發(fā)明的核酸模板(靶分子)可以是DNA(如基因組片段、合成片段、限制性片段等)或RNA，無論是單鏈或雙鏈。核酸靶分子(來自呼吸道病毒的基因組、基因或基因片段(如限制性片段))可以為純化、未純化的形式或者分離的形式。核酸靶分子可以被包含于樣品內(nèi)，所述樣品包括例如從患者處獲得的生物標(biāo)本、從環(huán)境(土壤、物體等)獲得的樣品、微生物培養(yǎng)物或組織培養(yǎng)物、細胞系、制備的純或基本上純的病原體或病原體混合物等。根據(jù)本發(fā)明，樣品可以從具有或被懷疑具有呼吸道感染癥狀的患者處獲得。寡核苷酸引物和探針設(shè)計和合成由于對寡核苷酸引物和/或探針的雜交行為缺少了解，該行為受在固相載體上的固定、立體位阻、混合靶分子解離等影響，獲得特異和靈敏的探針序列是挑戰(zhàn)，需要仔細解決。例如，非平衡熱解離模型似乎不能有效預(yù)測在哪種嚴(yán)格的條件下，哪一條引物或探針序列會理想地、特異地與其互補序列相互作用(Pozhitkov等，2007Nucl.AcidsRes.35e70)。在本研究中，從公共數(shù)據(jù)庫的序列數(shù)據(jù)中已經(jīng)形成了對于靶呼吸道病毒以及其他相關(guān)呼吸道病毒種類的多重序列比對，包括來自動物來源的病毒序列，以及來自由申請人產(chǎn)生的新序列數(shù)據(jù)，該新序列數(shù)據(jù)是通過對收集自具有VRTIs患者的臨床標(biāo)本中所選擇的靶基因進行測序而產(chǎn)生的(表1)。應(yīng)用于本發(fā)明引物和探針選擇的公共序列的登錄號列于表1中。形成的比對的肉眼觀察使得在各靶病毒種類內(nèi)選擇保守序列，同時使得區(qū)分來自其他病毒種類的序列，尤其是緊密相關(guān)的那些。該策略致使選擇出用于所選靶基因(基質(zhì)、核衣殼、融合、六鄰體、聚合酶以及5’-非編碼區(qū))的總共2145條序列，從而產(chǎn)生用于各靶病毒的特異性PCR/RT-PCR引物和探針。作為設(shè)計策略的一部分，使用商業(yè)程序(即GeneticsComputerGroup(GCG)程序，引物分析軟件Oligo6.22)，通過計算機分析來評估全部寡核苷酸(用于雜交的探針和用于通過PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)進行DNA擴增的引物)用于雜交或PCR/RT-PCR擴增的適合度。還在它們合成之前，通過證實不存在不期望的特征，如一條核苷酸的長延伸和3’端G或C殘基的高比例，評估PCR引物對的適合度。因此，本發(fā)明的引物和探針使得特異地檢測屬于以下的各靶病毒種類或?qū)俚拇硇灾晗?i)A型和B型流感病毒，(ii)人類呼吸道合胞病毒(RSV)，(iii)人類偏肺病毒(hMPV)，(iv)人類腸道病毒和鼻病毒(全部已知的血清型)，(ν)副流感病毒1型、2型、3型和4型，(vi)冠狀病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV，以及(vii)與VRTIs相關(guān)的腺病毒血清型(全部7種血清型)。測試了引物和探針的組合，并選擇出最有效的組合。雖然來自所選擇的靶基因的序列可以從公共數(shù)據(jù)庫上獲得，而且在有些情況下，已被用于開發(fā)用于檢測這些病毒的基于核酸的化驗，但是本發(fā)明的引物和/或探針序列的組合表現(xiàn)出優(yōu)于文獻中的獨特優(yōu)勢，這是因為它們被設(shè)計用于檢測各靶病毒種類的大部分株系，而不僅是檢測一種或一些株系。因此，由于本發(fā)明的試劑和化驗可以使得同時檢測和/或鑒別大部分已知的呼吸道病毒種類，包括世界上主要的傳染性株系，它們可以改進目前用于呼吸道病毒診斷的基于核酸的化驗。更具體地，本發(fā)明提供了用于呼吸道病毒檢測的試劑、化驗和試劑盒，使用(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒(全部已知的血清型)的5’-非編碼區(qū)，(vii)各副流感病毒1型、2型、3型和4型的融合基因，(viii)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(ix)各冠狀病毒NL、229E和SARS-CoV的聚合酶基因，以及(χ)與VRTIs相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)。引物或探針的寡核苷酸序列可以源自雙鏈DNA的每一條鏈。在一些情況下，所述引物或探針可以包括任何一種堿基A、G、C或T，或者類似物，且它們可以在一個或更多所選擇的核苷酸位點簡并，以保證從靶病毒種類的全部株系擴增的普遍性。簡并引物是在序列的錯配位點具有大量選擇的引物組，以允許退火到各種相關(guān)序列的擴增。例如，以下引物AIATTAGTGCTTTTAAAGCC可以是引物A￡ATTAGTGCTTTTAAAGCC禾口A1ATTAGTGCTTTTAAAGCC的等摩爾混合。簡并明顯降低了引物的特異性，意味著錯配幾率更高，和背景噪音增加；同樣，增加簡并意味著單個引物濃度降低；因而，最好避免高于512倍的簡并。因此，為避免影響化驗的靈敏度和/或特異性，應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎設(shè)計簡并引物。肌苷是一種經(jīng)修飾的堿基，其能夠與任何一種常規(guī)堿基(A、T、C或G)結(jié)合。為了使寡核苷酸中的簡并數(shù)量最小化而使用肌苷。國際生物化學(xué)聯(lián)合會(InternationalUnionofBiochemistry,IUB)的代碼IUB代碼A腺嘌呤，C胞嘧啶，G鳥嘌呤，T胸腺嘧啶，U尿嘧啶，I肌苷堿基I代碼A或CMA或GRA或TWC或GS堿基I代碼c或τYG或TKUili^幾種引物被設(shè)計用于有效地擴增在此描述的病原體。應(yīng)當(dāng)理解地是，各寡核苷酸分別具有它們自己的用途，因為除了在此描述的目的，可能會將此種寡核苷酸用于其他目的。例如，本發(fā)明的引物可以與其它引物組合用于更長或更短的擴增子的擴增。本發(fā)明的探針在檢測工具如微陣列中，可以與其他探針組合。本發(fā)明以能夠特異性擴增期望呼吸道病毒種類的引物為特征。本發(fā)明一方面涉及用于本發(fā)明方法和試劑盒的單個引物、引物對或者引物或引物對組合物。以下是引物、引物對和引物組合物的示例性實施方案。本發(fā)明在一方面涉及10至50個核苷酸長的寡核苷酸，該寡核苷酸能夠與基因特異性結(jié)合，所述基因選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(xv)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)。根據(jù)本發(fā)明，所述寡核苷酸優(yōu)選與一種呼吸道病毒種類的基因結(jié)合，而不是與其他呼吸道病毒種類的基因結(jié)合。同樣根據(jù)本發(fā)明，所述寡核苷酸能夠與一種呼吸道病毒種類的基因特異性結(jié)合，而不是與其他呼吸道病毒種類的基因特異性結(jié)合。單個引物的示例性實施方案包括以下。本發(fā)明在第一個實施方案中，提供了可以包含在SEQIDNO.78的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:79的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.80的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在還一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:81的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.82的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個另外的實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:83的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:84的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:85的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在還一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.86的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:87的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.88的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的另外的實施方案涉及可以包含在SEQIDNO.89的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的又一個另外的示例性實施方案提供了可以包含在SEQIDNO.:90的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的另一個實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.91的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的另一個實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.92的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的還一個實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.93的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明另外的實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.94的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明又一個另外的實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.95的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在進一步的示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:96的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在更進一步的示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDN0.:97的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:98的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個另外的示例性實施方案中，本發(fā)明提供了可以包含在SEQIDNO.:99的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的另一個實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.100的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明的又一個實施方案涉及可以包含在SEQIDNO.:101的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明進一步的實施方案涉及可以包含在SEQIDN0.102的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明更進一步的實施方案涉及可以包含在SEQIDNO.:103的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。本發(fā)明還涉及可以包含至少兩種以上描述的核酸的寡核苷酸的混合物或組合物。為了實施本發(fā)明的方法，選擇了幾種引物組。各引物組可以包含至少一種能夠特異性擴增遺傳材料的引物。因此，被檢測的樣品可以在適合核酸擴增的條件下暴露于引物組。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，引物組可以能夠在相似的擴增條件下擴增病毒的遺傳材料。引物對的示例性實施方案包括以下。包括可以包含在SEQIDNO.78的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.79的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸的引物對。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.80的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.81的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.82的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.83的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。根據(jù)本發(fā)明，人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒可以通過以上限定的引物對組合物或混合物擴增。在又一個另外的示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.:84的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.85的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDN0.86的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.87的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDN0.88的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.89的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在進一步的示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.:90的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.:91的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。根據(jù)本發(fā)明，A型流感、副流感1型、副流感2型、副流感3型可以通過以上限定的弓丨物對組合物或混合物擴增。在更進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDN0.92的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.93的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDN0.94的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.95的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在又一個實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDN0.96的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.97的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。根據(jù)本發(fā)明，冠狀病毒SARS_CoV、229E、NL和0C43可以通過以上限定的引物對組合物或混合物擴增。在另一個示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.98的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.99的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.:100的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.101的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。在進一步的示例性實施方案中，本發(fā)明涉及引物對，該引物對包括可以包含在SEQIDNO.:102的5，端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.103的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸。根據(jù)本發(fā)明，腺病毒、B型流感和副流感4型可以通過以上限定的引物對組合物或混合物擴增。所選擇的引物對和探針的更具體的實施方案列于表2中。更具體地根據(jù)這些引物對的特異性、靈敏性和它們擴增各目標(biāo)種或?qū)賰?nèi)所有或大部分成員的能力而被選擇。公共數(shù)據(jù)庫分析確實表明，使用表2中描述的引物對擴增的核酸序列僅對15種靶病毒中的一種具有特異性。本發(fā)明還以從使用以上描述的PCR引物對擴增的區(qū)域選擇的雜交探針為特征，即在PCR擴增子內(nèi)結(jié)合。本發(fā)明另一方面涉及可以包含單個的探針和探針組合物的寡核苷酸，其可以用于在此描述的方法和試劑盒。為實施本發(fā)明，被測樣品可以在適合于雜交的條件下暴露于探針。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述探針可以能夠在相似的雜交條件下與遺傳材料雜交。本發(fā)明包括了可以包含在表2中列出的任何一種探針或者其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，列舉的表達方式將被單獨或共同地應(yīng)用于各核酸序列。探針的示例性實施方案包括以下可以包含在SEQIDN0.106或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.107或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.108或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.109或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.110或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.111或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.112或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.113或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.114或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.115或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.116或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.117或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.118或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.119或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.120或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.194或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.195或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.196或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.121或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.122或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.123或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.124或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.125或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.126或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.127或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.197或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.198或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷。酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.199或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.200或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.128或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.129或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.130或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.131或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.132或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.133或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。單個探針的其他具體實施方案涉及可以包含在表2中列出且確定用于1重的任意一種核酸的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的單個核酸。單個探針的其他示例性實施方案包括以下可以包含在SEQIDN0.134或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.135或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.136或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.137或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.138或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.139或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.140或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.141或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.142或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.143或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.144或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.145或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.146或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.147或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.148或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.149或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.150或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.151或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.152或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.201或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.202或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.203或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.204或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.205或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.206或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.207或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.208或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.153或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.154或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.155或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.156或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.157或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.158或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.209或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.225或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.226或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.,221或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.228或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.229或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。單個探針的其他具體實施方案涉及可以包含在表2中列出且確定用于2重的任意一種核酸的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的單個核酸。單個探針的又一個示例性實施方案包括在表2中被確定用于3重的那些核酸，例如以下可以包含在SEQIDN0.159或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.160或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.161或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.162或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.163或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.164或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。單個探針的進一步示例性實施方案包括以下可以包含在SEQIDNO.165或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.166或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.167或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.168或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.169或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.170或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.171或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.172或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.173或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.174或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.175或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.176或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.177或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.178或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.179或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.180或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.181或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.182或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.183或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.210或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDNO.211或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.212或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.213或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.214或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDNO.184或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.185或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.186或其互補序列的5，端和/或3，端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸?？梢园赟EQIDN0.187或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。可以包含在SEQIDN0.188或其互補序列的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的核酸。單個探針的其他具體實施方案涉及可以包含在表2中列出且確定用于4重的任意一種核酸的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的單個核酸。寡核苷酸(即核酸，如引物和/或探針)可以包含標(biāo)記。標(biāo)記可以存在于核酸內(nèi)。標(biāo)記可以附著于核酸的5’端。標(biāo)記可以附著于寡核苷酸的3’端。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物和至少兩種探針的亞組合物)用于鼻病毒和/或腸道病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDNO.106,SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110,SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115,SEQIDNO.:116，SEQIDNO.:117，SEQIDN0.118,SEQIDNO.:119，SEQIDNO.:120,SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于人類呼吸道合胞病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列:SEQIDNO.121,SEQIDNO.-.122,SEQIDNO.:123，SEQIDNO.-.124,SEQIDNO.:125,SEQIDNO.-.126,SEQIDNO.-.127,SEQIDNO.-.197,SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.:200或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于人類偏肺病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDNO.128,SEQIDNO.:129，SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或它們的互補序列。根據(jù)本發(fā)明，上述的各寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，或者可以附著于固相載體的特異性位點。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于A型流感病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序歹丨J:SEQIDNO.134,SEQIDNO.135,SEQIDNO.136，SEQIDNO.137,SEQIDNO.138，SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.:142，SEQIDNO.143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.:145，SEQIDNO.:146，SEQIDNO.:147，SEQIDNO.148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.:152，SEQIDNO.201，SEQIDN0.:202，SEQIDNO.:203，SEQIDNO.:204，SEQIDNO.:205，SEQIDNO.206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.:208或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于副流感1型的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序歹丨J:SEQIDNO.:153和SEQIDN0.154或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于副流感2型的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDN0.155,SEQIDNO.:156和SEQIDNO.:157或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于副流感3型的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDNO.:158,SEQIDNO.:209和SEQIDNOs.:225至229或它們的互補序列。根據(jù)本發(fā)明，以上各寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，或者可以附著于固相載體的特異性位點。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于冠狀病毒SARS-CoV的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列:SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于冠狀病毒229E的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列=SEQIDN0.161或其互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括所有探針的組合或至少兩種探針的亞組合)用于冠狀病毒NL的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列=SEQIDNO.:162或其互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括所有探針的組合或至少兩種探針的亞組合)用于冠狀病毒0C43的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序歹丨J=SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或它們的互補序列。根據(jù)本發(fā)明，以上各寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，或者可以附著于固相載體的特異性位點。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于腺病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDNO.165,SEQIDNO.:166，SEQIDNO.:167，SEQIDNO.:168，SEQIDNO.169，SEQIDNO.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173,SEQIDNO.:174，SEQIDNO.175,SEQIDNO.176,SEQIDNO.177,SEQIDNO.:178或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于B型流感病毒的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序列SEQIDNO.179,SEQIDNO.:180，SEQIDNO.:181，SEQIDNO.:182，SEQIDNO.183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.:212，SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.:214或它們的互補序列。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，任何一種具有序列或由序列組成的寡核苷酸可以被單獨或共同(包括全部探針的組合物或至少兩種探針的亞組合物)用于副流感病毒4型的檢測，所述序列選自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加、缺失或者添加和缺失組合的序歹Ij:SEQIDNO.184，SEQIDNO.185,SEQIDNO.186,SEQIDNO.187,SEQIDNO.188或它們的互補序列。根據(jù)本發(fā)明，以上各寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，或者可以附著于固相載體的特異性位點。選擇用于最佳多重化驗的探針的更具體的實施方案列于表2。這些探針通過與用所選擇的引物對擴增的靶病毒核酸雜交，或者與用信號擴增方法如高靈敏度生物傳感器的未擴增的靶病毒核酸雜交，能夠用于檢測15種靶病毒。當(dāng)探針與其它探針組合用于同時檢測多種病毒時，探針的特異性將基本上不受其它探針存在的影響，即它仍然與靶病毒核酸雜交。優(yōu)選地，選擇用于一種病毒的探針，不與來自其他病毒的核酸雜交。引物或探針可以是由使用者決定的任何合適的長度。在本發(fā)明的實施方案中，弓丨物和/或探針(兩者是相互獨立的)可以是，例如10至50個核苷酸長(包含在內(nèi)地)，10至40、10至35、10至30、12至40、12至25個核苷酸長(包含在內(nèi)地)、15至25個核苷酸長(包含在內(nèi)地)、15至20個核苷酸長(包含在內(nèi)地)等。雖然為了簡潔的目的，在此并未提供長度為10至50個核苷酸長的組合物的全部列表，但是旨在涵蓋可以為10至50個核苷酸(包含在內(nèi)地)的各種或每一種可能的組合物。以下提供的僅是此種可能組合的一些實例12至25、10至30、11至30、10至29、11至29、15至17、14至21等。在此所使用的術(shù)語“至少兩種”包含“至少三種”、“至少四種”、“至少五種”、“至少六種”、“至少七種”、“至少八種”、“至少九種”、“至少十種”、“至少i^一種”、“至少十二種”、“至少十三種”、“至少十四種”、“至少十五種”、“至少十六種”、“至少十七種”、“至少十八種”、“至少十九種”、“至少二十種”、至少二i^一種”、“至少二十二種”、“至少二十三種”、“至少二十四種”、“至少二十五種”、“至少二十六種”、“至少二十七種”、“至少二十八種”等。在本發(fā)明另一個實施方案中，引物和/或探針(二者相互獨立)可以是至少10個核苷酸長，至少11個核苷酸長，至少12個核苷酸長，至少13個核苷酸長，至少14個核苷酸長，至少15個核苷酸長，至少16個核苷酸長，至少17個核苷酸長，至少18個核苷酸長，至少19個核苷酸長，至少20個核苷酸長，至少21個核苷酸長，至少22個核苷酸長，至少23個核苷酸長，至少24個核苷酸長，至少25個核苷酸長，至少26個核苷酸長等。表2中所描述的引物和/或探針可以由此在它們的5’端和/或3’端包含核苷酸添加。這些核苷酸的同一性可能會改變。在一些情況下，核苷酸可以從常規(guī)的A，T，G或C堿基中選擇，而在另一些情況下，核苷酸可能是本領(lǐng)域內(nèi)已知的經(jīng)修飾的核苷酸。然而，在本發(fā)明的一個實施方案中，核苷酸添加可以與存在于表1中列出的任何一種相應(yīng)的基因序列或存在于公共數(shù)據(jù)庫中的核苷酸相對應(yīng)。在此所使用的術(shù)語“包含在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，b)在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，或者c)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加和在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加。在此所使用的術(shù)語“包含在其5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失，b)在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失，或者c)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失和在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失。在此所使用的術(shù)語“包含在其5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加和/或而在其5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，而在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失，或者b)在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，而在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失，c)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，和在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸添加，或者d)在其5’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失，和在其3’端有0，1，2，3，4或5個核苷酸缺失。術(shù)語“包含有0至5個”還包含“包含有1至5個”，“包含有2至5個”，“包含有3至5個”，包含有4至5個”，“包含有0至4個”，“包含有1至4個”，“包含有2至4個”，“包含有3至4個”，“包含有0至3個”，“包含有1至3個”，“包含有2至3個”，“包含有0至2個”，“包含有0至1個”，“包含有0個”，“包含有1個”，“包含有2個”，“包含有3個”，“包含有4個”或“包含有5個”。根據(jù)本發(fā)明，引物和/或探針可以被標(biāo)記。在本發(fā)明的一個實施方案中，引物可以被標(biāo)記，因此提供被標(biāo)記的靶擴增子。根據(jù)本發(fā)明，生成的擴增子可以通過與屬和/或種特異性捕獲探針雜交來檢測。在其他實施方案中，標(biāo)記探針可以是有用的。適合在本發(fā)明中使用的可檢測的標(biāo)記物包括通過光譜學(xué)、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電學(xué)、光學(xué)或化學(xué)方法可檢測的任何一種組分。本發(fā)明中有用的標(biāo)記物包括用于采用標(biāo)記的抗生蛋白鏈菌素連接體染色的生物素，磁珠(如Dynabeads)，熒光染料(如熒光素、德克薩斯紅、羅丹明、綠色熒光蛋白等)，放射性同位素標(biāo)記(如3H,125I，35S,14C,或32P)，磷光標(biāo)記物，酶(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶以及在ELISA中普遍使用的其他酶)，以及諸如膠體金或有色玻璃或塑料(如聚苯乙烯、聚丙烯、乳膠等)珠的比色標(biāo)記物。教示這些標(biāo)記物使用的專利包括美國專利號3，817，837；3,850，752；3,939，350；3,996，345；4,277，437；4，275，149和4，366，241，在此為了所有目的將各專利全文引入作為參考。熒光標(biāo)記物可以在體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)期間方便地加入，因而代表著令人感興趣的方法。除了在此提及的病毒特異性寡核苷酸，所述方法和試劑盒還可以包括對照，如對照引物、對照探針、對照樣品等。雖然對照的示例性實施例已在表4中提供，本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員將理解，可以使用任何類型的對照來驗證該方法。呼吸道病毒擴增和檢測的方法本發(fā)明的其他方面提供了檢測呼吸道病毒的方法，所述方法可以包括將含有或被懷疑含有病原體的樣品暴露于寡核苷酸混合物的步驟，所述寡核苷酸混合物包括能夠特異性與呼吸道病毒種類的遺傳材料結(jié)合的多寡核苷酸，所述呼吸道病毒種類選自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人類呼吸道合胞病毒(RSV)，(iv)人類偏肺病毒(hMPV)，(ν)人類腸道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠狀病毒0C43，(xii)冠狀病毒NL，(xiii)冠狀病毒229E，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV以及(xv)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型。根據(jù)本發(fā)明，所述寡核苷酸混合物可以能夠在相似的擴增條件下擴增遺傳材料和/或可以能夠在相似的雜交條件下與遺傳材料雜交。所述方法具體應(yīng)用于在此描述的呼吸道病毒的靶基因的檢測。根據(jù)本發(fā)明，該多寡核苷酸種類可以包含可以能夠特異性擴增遺傳材料的多組引物對。因而，所述樣品在適合于核酸擴增的條件下被暴露于多組引物對。同樣根據(jù)本發(fā)明，該多寡核苷酸種類可以包含可以能夠與呼吸道病毒種類的遺傳材料雜交的探針。因而，所述樣品在適合于雜交的條件下被暴露于該探針。在此所使用的術(shù)語“寡核苷酸種類”是指具有核酸序列的寡核苷酸，該核酸序列可區(qū)別于其他寡核苷酸的核酸序列。目前用于擴增遺傳材料的一種方法是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)或反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)。然而，在一些情況下，核酸可以是不要求擴增的足夠量。在本發(fā)明中，設(shè)計了使用一步RT-PCR方法的四重化驗，用于擴增和檢測來自以上提及的呼吸道病毒的核酸。RT和PCR結(jié)合于一個步驟中能便于防止污染。然而通常需要最優(yōu)化試劑和條件，以使兩種酶都有高效活性。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，已發(fā)現(xiàn)將擴增反應(yīng)分離成四重便于操作。然而，擴增可以被分離成多于四個反應(yīng)。例如，雖然不太方便，1，2，3或4重的病毒在相關(guān)時可以被再劃分為2，3或4個不同的擴增反應(yīng)。在本發(fā)明中，用于各重的PCR擴增能使用相同的溫度循環(huán)曲線進行，由此使得全部核酸靶的擴增在相同的時間(同時地)在單個儀器(如熱循環(huán)器)內(nèi)進行。雖然經(jīng)常通過PCR或RT-PCR進行核酸擴增，但是還存在其他方法。這種方法的非限制性實例包括定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Q-PCR)、連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴增(TMA)、自主序列復(fù)制(3SR)、基于核酸序列的擴增(NASBA)、鏈置換擴增(SDA)、重組酶聚合酶擴增(RPA)、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)、解鏈酶依賴性擴增(HDA)、解鏈酶依賴性等溫DNA擴增(tHDA)、分支DNA(bDNA)、環(huán)狀探針技術(shù)(CPT)、固相擴增(SPA)、滾環(huán)擴增技術(shù)(RCA)、實時RCA、固相RCA、結(jié)合分子鎖式探針的RCA(MPP/RCA)、基于核酸識體的RCA(aptamer-RCA)、錨定SDA、引物延伸預(yù)擴增(PEP)、簡并寡核苷酸引物PCR(DOP-PCR)、不依賴序列的單一引物擴增(SISPA)、接頭連接PCR、核酸酶依賴性信號擴增(NDSA)、網(wǎng)狀分枝擴增(RAM)、多重置換擴增(MDA)、實時RAM，以及全基因組擴增(WGA)(ffestin,L.等，2000,Nat.Biotechnol.18199-204；Notomi,T.^,2000,NucleicAcidsRes.28:e63；Vincent,Μ.等，2004，EMBOreports5:795_800；Piepenburg,0.等，2006，PLoSBiology4:E204；Yi,J.等，2006，NucleicAcidsRes.34:e81；Zhang,D.等，2006，Clin.Chim.Acta36361-70；McCarthy,E.L.等，2007，Biosens.Biotechnol.22:126_1244；Zhou,L.等，2007，Anal.Chem.79:7492_7500；Coskun,S.禾口Alsmadi，0.，2007，Prenat.Diagn.27:297_302；Biagini,P.等，2007，J.Gen.Virol.882629-2701；Gill,P.等，2007，Diagn.Microbiol.Infect.Dis.59243-249；Lasken,R.S.andEgholm,Μ.，2003,TrendsBiotech.21531-535)。在此應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的范圍并不限于特異性檢測技術(shù)。傳統(tǒng)地，擴增核酸的檢測通過標(biāo)準(zhǔn)溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠電泳進行。簡而言之，10μ1的擴增混合物通過含有0.25μg/mL溴化乙錠的2%瓊脂糖凝膠電泳分離。然后在UV紫外透射儀下肉眼可見擴增子。通過與分子量梯度相比較來評估擴增子的大小。然而很清楚也可以使用用于特異性擴增產(chǎn)物檢測的其他方法，這些方法對于常規(guī)診斷可能更快和更實用。這些方法可以基于擴增之后或擴增期間的熒光檢測。用于監(jiān)測擴增DNA的一種簡單方法是通過測量插入劑如溴化乙錠或SYBRGreenI(MolecularProbes)熒光的增加而測定它的形成速率。若是需要更特異的檢測，基于熒光的技術(shù)能監(jiān)測在核酸擴增反應(yīng)期間特異性產(chǎn)物的出現(xiàn)。雙標(biāo)記熒光探針的應(yīng)用，如在利用Taq聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性的TaqMan體系(AppliedBiosystems)中，是一個良好的實例(LivakK.J.等，1995，PCRMethodsAppl.4:357_362)。TaqMan可以在擴增期間進行，且這種“實時”檢測在密閉容器內(nèi)進行，因而消除了PCR后(post-PCR)樣品處理并因此防止擴增子交叉轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。幾種其他基于熒光的檢測方法可以在實時中進行。這種基于熒光的實例包括鄰近雜交探針(Wittwer，C.T.等，1997，BioTechniques22:130_138)、分子信標(biāo)探針(TyagiS.和KramerF.R.1996.Nat.Biotech.14303~308)和蝎型探針(Whitcomb等，1999，Nat.Biotech.17804-807)0鄰近雜交探針通常被設(shè)計在擴增引物的內(nèi)部。一個探針的3’端用供體熒光團標(biāo)記，而鄰近探針的5’端用受體熒光團標(biāo)記。當(dāng)兩個探針在靠得很近的地方(間隔1至5個核苷酸)特異性雜交時，被外部光源激發(fā)的供體熒光團發(fā)出的光被第二個受體吸收而發(fā)出更多的熒光并產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)信號。分子信標(biāo)探針具有莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，其中環(huán)為探針，在莖的底部一端為熒光部分，另一端為猝滅部分。分子信標(biāo)在它們與它們的靶雜交時經(jīng)歷了熒光構(gòu)象的變化，因此從它的猝滅劑分離出來熒光染料。在裝備了內(nèi)置熒光計的空氣熱循環(huán)儀中，F(xiàn)RET原理已被應(yīng)用于PCR擴增子的實時檢測(Wittwer，CT.等1997，BioTechniques22:130-138)。用于PCR擴增子實時檢測的儀器能夠加速PCR循環(huán)，無論是與熒光插入劑如SYBRGreenI還是與FRET檢測相結(jié)合?；跓晒鈾z測的方法在常規(guī)診斷中應(yīng)用特別有前途，因為它們很簡單、快速并能定量。實施例部分提供了擴增條件的示例性實施方案。然而，在此所使用的術(shù)語“擴增條件”涉及適合于獲得靶的可檢測量的溫度和/或孵育時間。因此，術(shù)語“相似的擴增條件”意指若是期望，可以對各靶在相似的溫度下進行化驗。術(shù)語“相似的擴增條件”還指若是期望，可以對各靶在相似的孵育時間下進行化驗。在一些情況下，術(shù)語“相似的擴增條件”還涉及擴增循環(huán)的次數(shù)。然而，本領(lǐng)域內(nèi)熟知，循環(huán)的次數(shù)并不總是嚴(yán)格的。例如，一些樣品可以在其他樣品之前被移除或被留下進行附加擴增循環(huán)。在其他情況下，術(shù)語“相似的擴增條件”還涉及所使用的緩沖液和擴增試劑(酶、核苷酸、鹽等)的性質(zhì)。術(shù)語“相似的擴增條件”還指條件(例如，時間、緩沖液、循環(huán)次數(shù)、溫度等)可以稍微改變或可以相同。實施例部分提供了檢測條件的示例性實施方案。然而，在此所使用的術(shù)語“檢測條件”涉及適合于獲得可檢測的信號(例如，熒光發(fā)射、發(fā)射光譜等)的溫度和/或孵育時間，或適合于獲得可檢測信號的其他參數(shù)。術(shù)語“相似的檢測條件”還指條件可以稍微改變或可以相同。實施例部分提供了雜交條件的示例性實施方案。在此所使用的術(shù)語“相似的雜交條件”意指若是期望，可以對各靶在相似的溫度下進行雜交化驗。術(shù)語“相似的雜交條件”還指若是期望，可以對各靶在相似的孵育時間下進行化驗。術(shù)語“相似的雜交條件”還可以涉及所使用的雜交溶液的性質(zhì)(鹽、嚴(yán)格性等)。術(shù)語“相似的雜交條件”還指條件(例如，時間、溶液、溫度等)可以稍微改變或可以相同。病原體的檢測和鑒別可以通過測序進行。核酸材料的同時擴增和檢測還可以使用實時PCR進行。在此還包含在液體化驗或固相化驗(芯片、陣列、微珠、薄膜、膜等)中的檢測。因此，擴增子檢測可以通過使用種-特異性的內(nèi)部探針的雜交來進行，所述探針能夠與期望的擴增產(chǎn)物結(jié)合。此種探針可以設(shè)計成與用在此描述的引物所擴增的擴增子特異性雜交。所述探針可以用生物素、地高辛或任何其他報告分子標(biāo)記。在示例性實施方案中，本發(fā)明中描述的引物可以用熒光團或包括但不限于Cy3、Cy5等的染料標(biāo)記。雜交反應(yīng)的“嚴(yán)格性”可被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易地確定，通常是依賴于探針長度、清洗溫度和鹽濃度的經(jīng)驗性的計算。一般而言，為了進行適當(dāng)?shù)耐嘶穑^長的探針要求較高的溫度，而較短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于變性DNA在互補鏈存在時，在低于它們的解鏈溫度的環(huán)境下的再退火能力而定。探針和可雜交的序列之間所期望的同源性程度越高，可以使用的相對溫度越高。因此，結(jié)果就是相對溫度越高可能傾向于使得反應(yīng)條件越嚴(yán)格，而較低溫度的反應(yīng)條件沒有那么嚴(yán)格。通常靶核酸的雜交在中等至高度的嚴(yán)格性條件下進行。這種高度的嚴(yán)格條件使得探針和靶之間的相互作用具有更高的特異性。雜交可以使用附著于固相載體的探針和包含擴增子的雜交溶液在室溫(19-25°C)下進行。使用微流控設(shè)備可以實現(xiàn)活躍的雜交，其中包含擴增子的雜交溶液在微陣列上流動。清洗步驟可以用允許在不同嚴(yán)格性下雜交的溶液進行。操作的微流控型式通常在15分鐘內(nèi)進行，包括清洗和漂洗步驟。本領(lǐng)域人員很清楚，可以改變核酸雜交和清洗條件，且仍然能實現(xiàn)靈敏度和特異性可比較的水平，只要全部過程導(dǎo)致用于核酸識別的可比較的嚴(yán)格性即可。因此，設(shè)計出靶向PCR擴增子的內(nèi)部區(qū)域的探針(即捕獲探針)，該PCR擴增子使用以上描述的擴增引物組生成?；谥懊枋龅年P(guān)于探針的序列組合物和它在擴增子上的定位的最優(yōu)要求，使用多個序列比對選擇出這些捕獲探針(Peytavi等，2005，Clin.Chem.39:89_96)。為涵蓋靶病毒種或?qū)俚娜炕虼蟛糠种晗?，已設(shè)計出用于靶病毒普遍性的種_特異性/屬_特異性檢測的幾種探針。這些捕獲探針可以用于實時PCR檢測(如TaqMan探針、分子信標(biāo))，用于固相載體雜交(如微陣列雜交、基于磁珠的核酸捕獲、膜上雜交)或其他。表2提供了探針的示例性實施方案。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的是，可以設(shè)計用于檢測使用表2中的引物對生成的PCR擴增子的其他探針，雖然具有不同的效率或特異性。同樣地，探針的同一性不限于在此提供的列表，或具體提供于表2中的，而是還擴展至可以能夠與PCR擴增子的其他區(qū)域特異性結(jié)合的任意一種探針，包括PCR擴增子的正義鏈或反義鏈。寡核苷酸的微陣列代表了對于多參數(shù)化驗的非常有用的技術(shù)，其被本發(fā)明涵蓋。可獲得的低或中密度陣列(HellerMJ.等，pp221-224，In=Harrison,D.J.JPvandenBerg,Α.,1998,Micrototalanalysissystems'98,KluwerAcademicPublisher,Dordrecht)可特異性地捕獲熒光標(biāo)記的擴增子。用于雜交的檢測方法不限于熒光；可供選擇的檢測方法的一些實例是電位分析法、比色法和等離子共振。除了通過雜交檢測，核酸微陣列還可以通過雜交用于進行快速測序。質(zhì)譜分析也可以應(yīng)用于擴增子的快速鑒別，甚至是擴增產(chǎn)物的測序(ChiuN.H.和Cantor0.R.，1999，Clin.Chem.451578；BerkenkampS.等，1998，Science281:260-262)。為了化驗方式的今后，還考慮到將包括樣品制備、基因擴增、檢測和數(shù)據(jù)分析的步驟整合于μTAS(Anderson,R.C.等，pp.11-16.In=Harrison,D.J.，禾口vandenBerg,A.，1998,Micrototalanalysissystems'98,KluwerAcademicPublisher,Dordrecht)。在又一個實施方案中，使用本發(fā)明描述的探針而無需先PCR擴增。有前途的超靈敏檢測技術(shù)，例如基于核酸/聚合物復(fù)合體的光學(xué)性能的聚合生物傳感器的應(yīng)用(Najari，Α.等，2006，Anal.Chem.78:7896_7899；Dore,K.等，2006，J.Fluoresc.16:259_265；Ho,H.-A.等，2005J.Am.Chem.Soc.12712673-12676；Dore,K.等，2004，J.Am.Chem.Soc.1264240-4244；Ho,H.-A.等，2002，Angew.Chem.Int.Ed.411548-1551)可以使得使用雜交探針捕獲和檢測靶病原體種類，而無需先PCR擴增。本發(fā)明還涉及陣列，其包含固相基底(載體)和附著于固相基底(載體)或與固相基底(載體)相關(guān)聯(lián)的多種位置可識別的探針。各探針可以包含不同的核酸序列，且可以能夠特異性地結(jié)合(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(xv)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)。根據(jù)本發(fā)明，所述各探針可以各自包括10至50個核苷酸。在另一方面，本發(fā)明提供陣列，其可以包含a)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:106，SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110，SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.:116，SEQIDNO.:117，SEQIDNO.:118，SEQIDNO.:119，SEQIDNO.:120，SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；b)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:121，SEQIDNO.:122，SEQIDNO.:123，SEQIDNO.:124，SEQIDNO.:125，SEQIDNO.:126，SEQIDNO.:127，SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.:200或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；c)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸添加和/或缺失的寡核苷酸SEQIDNO.:128，SEQIDNO.:129，SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；d)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDN0.134,SEQIDN0.135,SEQIDN0.136,SEQIDN0.137，SEQIDN0.138,SEQIDN0.139,SEQIDN0.140,SEQIDN0.141,SEQIDN0.142,SEQIDN0.:143，SEQIDN0.:144，SEQIDN0.:145，SEQIDN0.:146，SEQIDN0.:147，SEQIDN0.:148，SEQIDN0.:149，SEQIDN0.:150，SEQIDN0.:151，SEQIDN0.:152，SEQIDN0.:201，SEQIDN0.:202，SEQIDN0.:203，SEQIDN0.:204，SEQIDN0.:205，SEQIDN0.206,SEQIDN0.:207和SEQIDNO.:208或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；e)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:153和SEQIDNO.:154或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；f)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDN0.155,SEQIDNO.:156和SEQIDNO.:157或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；g)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQIDNOs225至229或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；h)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；i)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDN0.161或其互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；j)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.162或其互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；k)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；1)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.165,SEQIDNO.166,SEQIDNO.167,SEQIDN0.168，SEQIDNO.169,SEQIDNO.170,SEQIDNO.171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173,SEQIDNO.174,SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176，SEQIDNO.:177和SEQIDNO.:178或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；m)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDN0.179,SEQIDN0.180,SEQIDN0.181，SEQIDN0.182，SEQIDN0.183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.:212，SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.:214或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；η)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDΝ0.184,SEQIDN0.185,SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187和SEQIDNO.:188或它們的互補序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3，端。根據(jù)本發(fā)明，各寡核苷酸可以附著于固相載體或者可以與固相載體相關(guān)聯(lián)。進一步根據(jù)本發(fā)明，各寡核苷酸可以位于可尋址的位置。在另外的方面，本發(fā)明還涉及包含在此描述的至少兩種寡核苷酸的寡核苷酸文庫。根據(jù)本發(fā)明，各寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，或者可以附著于固相載體。如上所述，本發(fā)明一方面涉及包含在此描述的寡核苷酸的試劑盒。更具體地，本發(fā)明涉及試劑盒，其可以包含10至50個核苷酸長的多種寡核苷酸，所述寡核苷酸能夠與基因特異性結(jié)合，所述基因選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(XV)腺病毒的六鄰體區(qū)。根據(jù)本發(fā)明，所述多種寡核苷酸的各寡核苷酸可以能夠結(jié)合一種呼吸道病毒種類的基因，而不結(jié)合其他呼吸道病毒種類基因。在本發(fā)明的實施方案中，所述試劑盒可以包含用于特異性擴增人類腸道病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和偏肺病毒的多種寡核苷酸。所述用于特異性擴增人類腸道病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和偏肺病毒的多種寡核苷酸可以在單獨分離的容器內(nèi)提供，各容器包含單一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特異性寡核苷酸引物對。多種寡核苷酸還可以在包含用于各靶基因擴增的寡核苷酸混合物的單個容器內(nèi)提供。在另一個實施方案中，所述試劑盒可以包含用于特異性擴增A型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型和副流感病毒3型的多種寡核苷酸。所述用于特異性擴增A型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型和副流感病毒3型的多種寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，各容器包含單一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特異性寡核苷酸引物對。所述多種寡核苷酸還可以在包含用于各靶基因擴增的寡核苷酸混合物的單個容器內(nèi)提供。在另外的實施方案中，所述試劑盒可以包含用于特異性擴增冠狀病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的多種寡核苷酸。所述用于特異性擴增冠狀病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的多種寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，各容器包含單一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特異性寡核苷酸引物對。所述多種寡核苷酸還可以在包含用于各靶基因擴增的寡核苷酸混合物的單個容器內(nèi)提供。在進一步的實施方案中，所述試劑盒可以包含用于特異性擴增腺病毒、B型流感病毒和副流感病毒4型的多種寡核苷酸。所述用于特異性擴增腺病毒、B型流感病毒和副流感病毒4型的多種寡核苷酸可以在分離的容器內(nèi)提供，各容器包含單一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特異性寡核苷酸引物對。所述多種寡核苷酸還可以在包含用于各靶基因擴增的寡核苷酸混合物的單個容器內(nèi)提供。所述試劑盒還可以包含以上提及的兩組、三組或四組病毒的多種寡核苷酸。根據(jù)本發(fā)明，所述試劑盒可以包含在分離的容器內(nèi)或附著于固相載體的用于檢測靶基因的寡核苷酸(如探針)。在其他方面，本發(fā)明還涉及用于診斷有需要的個體呼吸道感染的方法。所述方法可以包括，采用能夠與呼吸道病毒種類的遺傳材料特異性結(jié)合的寡核苷酸，檢測從個體獲得的樣品中病原體的存在或不存在，所述呼吸道病毒種類選自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人類呼吸道合胞病毒，(iv)人類偏肺病毒，(ν)人類腸道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠狀病毒0C43，(xii)冠狀病毒NL，(xiii)冠狀病毒229E，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV，以及(XV)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型。根據(jù)本發(fā)明，病原體的存在可以指征與被檢測的病原體相關(guān)的呼吸道感染。在本發(fā)明的實施方案中，病原體的存在或不存在可以通過檢測來自呼吸道病毒種類的遺傳材料來確定，如，例如(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和/或(xv)腺病毒的六鄰體區(qū)以及它們的組合。本發(fā)明的更多細節(jié)通過以下非限制性的實施例來說明。實施例1使用PCR引物的組合以多重形式特異性擴增和檢測15種臨床重要的呼吸道病毒使用MagazorbRNA提取試劑盒(Cortex,SanLeandro,CA)和KingFisherML儀器(ThermoScientific，Waltham，CA)從病毒細胞培養(yǎng)上清液中提取RNA。用1μ1純化的RNA進行RT-PCR。20-μ1PCR混合物包含如以下所述分離成不同重的各引物(SEQIDNos78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，100，101，102和103)0.6-。用于裂解對照的引物(SEQIDNos104和105)為0.3μΜ。使用一步RT-PCR試劑盒(Qiagen)進行RT-PCR。病毒從美國模式培養(yǎng)物收集中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)以及從CHULPavilionoftheCentreHospitalierUniversitairedeQuebec(CHUQ)得到的呼吸道臨床標(biāo)本獲得。PCR實驗在PTC-200熱循環(huán)儀(Bio-Rad)上使用以下的溫度曲線進行于50°C下反轉(zhuǎn)錄單次循環(huán)30分鐘，然后反轉(zhuǎn)錄酶于95°C下失活15分鐘，以及TaqDNA聚合酶活化之后進行45次PCR循環(huán)，包括于95°C下變性15秒、54°C下引物退火10秒和72°C下延伸25秒的步驟。已開發(fā)出用于擴增和鑒別大部分臨床相關(guān)的呼吸道病毒的四重PCR化驗(表2)。1重包括用于檢測和鑒別人類呼吸道合胞病毒、人類偏肺病毒、人類鼻病毒/腸道病毒(全部血清型)的引物，以及用于擴增裂解對照的引物。2重包括用于檢測和鑒別副流感病毒1、2和3型以及A型流感病毒的引物。3重包括用于檢測和鑒別冠狀病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV的引物。最后，4重包括用于檢測和鑒別與人類呼吸道感染相關(guān)的腺病毒的全部7種血清型(1，2，3，4，5，7和21)、副流感病毒4型以及B型流感病毒的引物。表2提供了用于各靶病毒的所選擇的PCR引物和靶基因列表。擴增產(chǎn)物通過如先前所述的瓊脂糖凝膠電泳分析(Ke,D.，等，2000，Clin.Chem.46:324_31)。多重RT-PCR化驗的評估確定分析的靈敏度選擇用于各病毒的部分或全部靶基因如下進行PCR-擴增和克隆。使用表5描述的病毒如上所述進行RT-PCR。擴增后使用Τ0Ρ0-ΤΑ克隆試劑盒(Invitrogen)直接克隆擴增子。轉(zhuǎn)化到DH5amaxefficiency(Invitrogen)導(dǎo)致回收到運載插入PCR產(chǎn)物的重組質(zhì)粒。對于各靶基因，包含插入擴增子的幾種克隆被測序，以確保不存在可歸因于TaqDNA聚合酶造成的核苷酸的錯誤組合。在Sequencher3.O軟件(GeneCodes)的協(xié)助下進行序列裝配。在通過測序證實插入DNA的準(zhǔn)確性后，線性化含有感興趣基因的靶向部分的重組質(zhì)粒，然后按照廠商說明使用AmpliscribeT7_Flash試劑盒(Epicentre)用300至600ng質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)錄。隨后使用來自Rneasy試劑盒(Qiagen)的RNA清除方案(cleanupprotocol)或KingfisherML上的Magazorb試劑盒(Cortex)按照廠商說明純化生成的RNA，無需裂解步驟。RNA的定量使用Ultrospec2000(Pharmacia)于260nm下通過分光光度測定法進行，然后將這些數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成拷貝數(shù)/μ1。在AgilentBioanalyzer上可視化RNA轉(zhuǎn)錄體，以證實沒有降解(RNA6000NanoLabChipKit)。這些轉(zhuǎn)錄體被用于確定各重化驗的分析靈敏度，通過用對應(yīng)于各基因靶向部分的已知量的轉(zhuǎn)錄體強化(spiking)各PCR反應(yīng)。對15種呼吸道病毒的檢測限制取決于靶基因，其范圍是每個RT-RCR反應(yīng)病毒基因組的50至100個拷貝(表2)?；炋禺愋院推毡樾缘拇_定對于各靶病毒，使用從細胞培養(yǎng)物中提取的高度濃縮的病毒RNA，以及人類基因組DNA的10000個基因組拷貝當(dāng)量，和一般與呼吸道感染相關(guān)的細菌(即肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血桿菌和嗜肺軍團菌)的30000個基因組拷貝當(dāng)量來證實RT-PCR化驗的特異性。使用人類DNA作為模板時，在溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠上觀察到非特異性的RT-PCR擴增產(chǎn)物。類似地，用來自其他呼吸道病毒的基因組RNA/DNA，也觀察到非特異性擴增。另一方面，用來自所選擇的細菌基因組DNA作為模板，并未觀察到非特異性擴增產(chǎn)物。使用來自2株腸道病毒、1株柯薩奇病毒、2株鼻病毒、3株RSV、3株hMPV、4株A型流感病毒、8株B型流感病毒、5株副流感病毒1型、2株副流感病毒2型、2株副流感病毒3型、8株副流感病毒4型和8株腺病毒的100個病毒基因組拷貝當(dāng)量來證實化驗的普遍性。對于全部目標(biāo)種類，特定病毒種類的所有株系都被靶向該種類的多重RT-PCR化驗高效擴增和檢測。作為本發(fā)明的目的，該多重RT-PCR化驗當(dāng)與標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠電泳相結(jié)合用于擴增子檢測時，使得靈敏和普遍地擴增出15種臨床最重要的呼吸道病毒。實施例2在微陣列芯片上同時檢測15種呼吸道病毒一般地，雙鏈擴增產(chǎn)物在95°C變性1至5分鐘，然后在雜交前于冰上冷卻。由于雙鏈擴增子易于與它們的互補鏈再結(jié)合而不是與探針雜交，單鏈擴增子可能有利地用于雜交。一種生成單鏈擴增子的方法是采用來自λ噬菌體的核酸外切酶消化一條鏈。一條鏈的優(yōu)先消化可以通過使用用于互補鏈的5-初始磷酸化引物和用于目標(biāo)鏈的熒光標(biāo)記引物來實現(xiàn)(Boissinot等2007，Clin.Chem.,532020-3)。簡而言之，通過將10單位的λ核酸外切酶(New-EnglandBiolabs)直接加入到PCR反應(yīng)產(chǎn)物中，并于37°C下孵育5分鐘消化用此種修飾引物的生成的擴增子。這種被消化的擴增產(chǎn)物可以容易地應(yīng)用于微陣列雜交，無需任何預(yù)加熱處理。微陣列通常通過點樣針頭將寡核苷酸探針點樣至載玻片表面而制備，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知存在其他表面和用于將探針附著到表面的其他方法，這些也都被本發(fā)明涵蓋。側(cè)流式微陣列代表了最近快速固相載體雜交技術(shù)的實例(Carter和Cary，2007，Nucl.AcidsRes.35:e74)0對于以下描述的說明性實例，將經(jīng)5’氨基-接頭修飾的寡核苷酸探(Microplottingsolutionplus,TeleChemInternational),^ji用VIRTEKSDDC-2陣列器(Bio-RadLaboratories)以30μM點樣于超純酸載玻片(SuperAldehydeslides,Genetix)上。除了DNA或RNA寡核苷酸，核苷酸類似物如肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)和硫代磷酸酯可以作為探針使用，也是本發(fā)明的目的。全部雜交實驗使用如上所述的λ核酸外切酶消化的擴增產(chǎn)物來進行。引物(SEQ78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，100，101，102和103)用于RT-PCR步驟。用于微陣列與各RT-PCR四重化驗雜交的捕獲探針描述于表2中。全部雜交實驗的陽性對照由氨基修飾的20-mer寡核苷酸與它的Cy3標(biāo)記的20-mer互補鏈的雜交組成。被動雜交通過以下進行將4.8μL的PCR擴增反應(yīng)加入至含有6ΧSSPE,0.03%PVP，30%甲酰胺+5nMCy3_bbcl的15.2μ1雜交溶液中，室溫(例如19_25°C)1小時。隨后使用含有0.1%SDS的2xSSPE緩沖液(OmniPurEMD)清洗載玻片5分鐘，之后用2xSSPE緩沖液的溶液漂洗5分鐘。微流控雜交如先前所述進行(Peytavi等，2005，39:89-96)。使用ScanArray4000XL微陣列掃描儀(GSILumonics/PackardBiochips,Billerica,MA)獲得所有載玻片的熒光圖像，用GenePixPro6.0(MolecularDevices)進行數(shù)據(jù)分析。操作的微流控型式可以在15分鐘內(nèi)進行，包括清洗和漂洗步驟。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，可以改進核酸雜交和清洗條件，且仍然達到靈敏度和特異性可比較的水平，只要全過程導(dǎo)致用于核酸識別的可比較的嚴(yán)格性即可。本發(fā)明的優(yōu)勢在于，全部微陣列雜交和清洗操作可以在對所有探針和多重擴增組合物一致的條件下進行?；烄`敏度的確定如實施例1所述使用RNA轉(zhuǎn)錄體的連續(xù)稀釋來進行，所述RNA轉(zhuǎn)錄體來自克隆到質(zhì)粒的各靶基因。各PCR反應(yīng)用已知量的靶基因強化、并被擴增和雜交到微陣列上。用微陣列檢測的分析靈敏度相當(dāng)于使用溴化乙錠染色凝膠檢測獲得的結(jié)果(即對15種呼吸道病毒的檢測限度取決于靶基因，范圍是病毒基因組的50至100個拷貝(表2)。如實施例1中描述驗證化驗的特異性。通過RT-PCR擴增后，制備PCR反應(yīng)，用于在寡核苷酸捕獲探針的微陣列上雜交。雖然實施例1中證明人和病毒的核酸材料的RT-PCR擴增生成非特異性的擴增子，但是在微陣列上未觀測到交叉雜交?；灥钠毡樾允褂萌鐚嵤├?中描述的來自各靶病毒種類不同株系的100個病毒基因組拷貝當(dāng)量進行證實。對于所有目標(biāo)種類，使用靶向該種的多重RT-PCR化驗高效地擴增并檢測已知病毒種的全部株系。作為本發(fā)明的目的，用于微陣列雜交的捕獲探針使得特異、靈敏和普遍地檢測通過RT-PCR生成的來自15種臨床最重要的呼吸道病毒的擴增子。實施例3采用取自患者的臨床呼吸道標(biāo)本評估多重PCR化驗收集取自三歲以下兒童的鼻咽抽吸物(NPA)并按等份試樣冷凍直至開始進行研究。用于臨床研究的患者的選擇標(biāo)準(zhǔn)為呼吸道疾病癥狀的醫(yī)療咨詢，醫(yī)師要求進行A型和B型流感和/或RSV的快速免疫診斷測試(BINAX)。使用以下操作提取和純化來自NPA樣品的遺傳材料將850μ1異硫氰酸胍(GT)(4.5Μ)加入至裝有0.005g硅珠的1.5ml試管中。之后，在試管內(nèi)加入200μ1NPA標(biāo)本，通過倒置混合10分鐘。GT溶液使得裂解可能存在于NPA樣品內(nèi)的病毒，并使釋放的核酸結(jié)合于硅珠。于IOOOOg下離心試管1分鐘并除去上清液。用750μ1的70%乙醇(使用DEPC制備)處理粒狀珠，以清洗核酸，然后再于IOOOOg下離心試管1分鐘。除去上清液后，在小粒中加入含有1μ1RNasin(Promega)的30μ1DEPC水，于60°C下孵育10分鐘，以釋放核酸。然后將試管內(nèi)的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至Spin-X柱(0，22μΜ濾器，F(xiàn)isherScientific)，根據(jù)他們的方案純化從柱上洗脫的遺傳材料。遺傳材料的擴增和檢測按照實施例1和2中的描述進行?？偣矞y試了134份NPA標(biāo)本?；诤怂岬臏y試，其中106份為RSV-陽性。相比之下，基于使用BINAX化驗的平行測試，134份NPA標(biāo)本中僅有89份為RSV陽性。其他被檢測的病毒，包括腸道病毒/鼻病毒(η=18)、冠狀病毒0C43(n=10)、腺病毒(η=9)、PIV-3(η=3)、PIV-4(η=3)、hMPV(η=3)以及A型(η=1)禾口B型(η=2)流感病毒。八份標(biāo)本對所有測試病毒為陰性。實施例1和2中描述的分子化驗使得快速和靈敏地檢測來自NPA標(biāo)本的呼吸道病毒。應(yīng)當(dāng)注意的是，一些未檢測的病毒在人群內(nèi)有相對較低的流行性(如造成SARS-CoV的冠狀病毒)，而我們未在測試的臨床標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)任何一種并不奇怪。我們相信本發(fā)明提供了能夠達到特異性、靈敏性和一致性鑒別15種呼吸道病毒種類的目的的試劑。這些試劑可以滿足用于在固相載體上檢測的條件要求。雖然本發(fā)明在此通過示例性實施方案的方式進行了描述，但是其可以被改變而不背離本發(fā)明的范圍和性質(zhì)。本說明書涉及許多文獻，其內(nèi)容在此全部引入作為參考。表1.用于設(shè)計檢測15種呼吸道病毒的PCR引物和雜交探針的靶基因序列列表*通過本研究確定的基因序列與對應(yīng)病毒分離物的CCRI(“CentredeRechercheenInfectiologie”收集)編號相一致，他們的每一個指定一個SEQIDNO0從公共數(shù)據(jù)庫中可獲得的基因序列與用它們的基因登錄號相一致，未指定其SEQIDNO。—呼吸道病毒I把基因I鑒定*ISEQIDNOs_CCRI-15830__10__CCRI-15707__？__CCRI-15634__8__CCRI-15615__I___CCRI-15592__6__CCRI-15591__5__CCRM5590__4__CCRI-15589__3_________CCRI-15587__2__CCRI-15586__1______CCRI-15588__11__CCRI-16240__13__CCRI-16130__12___CCRI-16241__14_U65575;u65569;dq009919;ay947475;y651387;af398876;af138719;af115287;af038274;af038272;afO30271;A型‘；充咸1盾ay611525ii;ay210270ii;ay210269ii;人ay210268ii;ay210267ii;ay210266ii;ay210265ii;ay210264ii;ay210263ii;ay210262ii;ay210261ii;ay210260ii;ay210259ii;ay210258ii;ay210257ii;ay210256ii;ay210255ii;ay210254ti;ay210253ii;ay210252ii;ay210251ii;ay210250ii;ay210249ii;ay210248ii;ay210247ii;ay210246ii;ay210245ii;ay210244ii;ay210243ii;ay210242ii;ay21Q241ii;ay210240ii;ay210239ii;ay210065ii;ay210064ii;ay210063ii;ay210062ii;ay210061ii;ay210060ii;ay210059ii;ay210058ii;ay210057ii;ay210056ii;ay210055ii;ay210054ii;ay210053ii;ay210052m;ay210051ii;ay210050ii;ay210049ii;ay210048ii;ay21004/ii;ay210046ii;ay210045ii;ay210044ii;ay210043ii;ay210042ii;ay210041ii;ay210040ii;ay210039ii;ay210038ii;ay210Q37ii;ay210036ii;ay210035ii;ay210034ii;ay210033ii;ay210032ii;ay210031ii;ay210030ii;ay210029ii;ay210028ii;ay210027ii;ay210026ii;af255374ii;af255373ii;af255372ii;af255371ii;af255370ii;af255369ii;af255368ii;af255367ii;af255366ii；af255365ii；af255364ii;af255363ii;af115287i;af115286;_^_I_af084284i;af084283i;af084282i;_|_<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>呼吸道病毒把基因鑒別ΛSEQIDNOscoxa2_af303036;coxa2_af412341;coxa3_af303037;coxa3一af412342;coxa5af303044;coxa5:af412343;coxa6一af412344;coxa7—af412345;coxa7一af068879;coxa10laf412346;coxa12_af412348;coxa12_af303042;coxal2_af303041；coxal3_af303040;coxa14_af412349;coxal5_af412350;coKa17_af412351;coxal7_af412347;coxal8_af412354;coxal8=af412352;coxal8__af303038;coxal9_af412353;coxa20一af303039;coxa21_af076999;coxa21_af068880;coxa21_af412355;coxa21:aj001339;coxa22:af412356;coxa24—af068881；coxbl—ay373044;coxbl_ay373038;coxb1_ay373041;coxbl_ay373039;coxb1_ay373040;coxbl一ay373037;coxb1_ay373042;coxbl_ay373043;coxb1_ay373045;coxbT_ay373036;coxbT_s76767;coxb2_ay373052;coxb2_ay373046;coxb2_ay373057;coxb2_ay373055;coxb2_ay373054;coxb2_ay373058;coxb2一ay373051;coxb2二ay373050;coxb2—ay373053;coxb2一ay373049;coxb2_ay373056;coxb2:ay373048;coxb2_ay373047;coxb2:af225474;coxb2_af225473;coxb3_ay373063;coxb3_ay373062;coxb3:ay373061;coxb3_ay373064;coxb3—ay373059;coxb3_ay373066;coxb3ay373067;coxb3_ay373060;coxb4_ay373076;coxb4_ay373073;coxb4_ay373075;coxb4_ay373074;coxb4二ay373072;coxb4_ay373069;coxb4_ay373068;coxb4_ay373070;coxb4:ay373071;coxb4_ay373084;coxb5_ay373079;coxb5_ay373089;coxb5__ay373088;coxb5—ay373087;coxb5:ay373082;coxb5_ay373065;coxt)5二ay373086;coxb5一ay373085;coxb5—ay373083;coxb5__ay373081;coxb5_ay373080;coxb5一ay373078;coxb6~af225476;coxb6_af225475;coxb4:ay373077;coxb6_ay373090;coxb6_af225478;coxb6_af225477;echo4_af447482;echo6_af447481;echol1_af447484;echo11_af447485;echol1_af447486;ehol1_af447487;echol1_af447472;echol1_af447474;echol1—af447475;echol1一af447476;echol1一af447477;echol9_af447479;echo19:aW47480;echol9_af447483;echo30ls76768;echo30—s76769;entero75_ay556070;entero74_ay556057;entero90_ay773285;enteroca55_af241359;enterolT_af068885;entero69_ay302560;entero69一af412376;__^_entero70_nc001430;enteroe71u0Q872;I__呼吸道病毒靶基因鑒別*SEQIDNOsentero71_ab183003;entero71_ay465356;rhinola_af108179;rhino6_a"542425;rhino7_af108185;rhinol3_af542452;rhinol7_af542419;rhino2faf108180;rhino27—af542449;rhino29=af108181;rhino37_af108182;rhino43_af542450;rhino45_af542451；rhino51一af542422;rhino52_af542423;rhino59二af542424;rhino58_af108183;rhino62_af108184;「hino69—af542426;rhino70_af542427;rhino72_af108186;rhino84~af542429;rhino86_af542431；rhino87l"ay062273;rhino87_af108187;rhino91一af542432;rhino92_af108149;rhino93一af108154;rhino93_af108155;rhino93二af108151；rhino93_af108152;rhino93=afl08150;rhino94—af108161;rhino94:af108159;rhino94_af108157;rhino94=af108158;rhino94_af108156;rhino94_af108160;rhino95_af108176;rhino95_af108175;rhino95_af108174;rhino95_af108167;rhino95_af108163;rhino95_af108164;rhino95_af108170;rhino95_af108173;rhino95_af108162;rhino95—af108169;rhino93_af108153;rhino95~af108172;rhino95_af108171；rhino95二af108165;rhino95_af108178;rhino95二af108166;___rhino95af108168;rhino95~af108177__PIV-I融合_CCRI-15598__38__CCRI-15560__39_Af016279;af016279i;af457102;af016279;_af457102i;m22347_______CCRI-15838__40_PIV-2融合_CCRI-15641____CCRI-15839______x57559;m55698;m60182;af213351____PIV-3融合_CCRI-15672__45____________CCRI-15867_____D00016;M14892;M21649;S82195;_S82195i;X05303;zll575_____CCRI-15706__47_冠狀病毒OC43基質(zhì)ay391777;ay585228;ay585229;m93390；ay391777;ay585228;ay585229;____ay391777;ay903459;ay382775;ay903460__冠狀病毒229E聚合酶X69721;af304460;nc_002645<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>表3.為本發(fā)明保留的引物和探針百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>*存在于各PCR反應(yīng)的內(nèi)部對照模板使得各PCR擴增和/或微陣列雜交的效率得以證實，以及保證了沒有核酸擴增和/或檢測過程的顯著抑制。細胞裂解對照由加入至各PCR反應(yīng)中的細胞組成，也驗證了細胞裂解和核酸提取過程的效率。表5.克隆的RT-PCR產(chǎn)物作為內(nèi)部對照模板，用于確定化驗的分析靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>權(quán)利要求一種檢測呼吸道病毒的方法，所述方法包括將包含或被懷疑包含病原體的樣品暴露于寡核苷酸混合物，所述寡核苷酸混合物包括能夠特異性與呼吸道病毒種類的遺傳材料相結(jié)合的多寡核苷酸，所述呼吸道病毒種類選自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人類呼吸道合胞病毒，(iv)人類偏肺病毒，(v)人類腸道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(x)副流感病毒4型，(xi)冠狀病毒OC43，(xii)冠狀病毒NL，(xiii)冠狀病ˉ229E，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV和(xv)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型，其中所述各寡核苷酸混合物能夠在相似的擴增條件下擴增遺傳材料，或者能夠在相似的雜交條件下與遺傳材料雜交。2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述呼吸道病毒種類的遺傳材料選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)畐Ij流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六鄰體區(qū)以及它們的組合。3.權(quán)利要求1或2所述方法，其中所述多寡核苷酸種類包括能夠特異性擴增所述遺傳材料的多組引物對，并且其中所述樣品在適合于核酸擴增的條件下被暴露于所述多組引物對。4.權(quán)利要求1或2所述方法，其中所述多寡核苷酸種類包含探針，各探針能夠與所述呼吸道病毒種類的遺傳材料雜交，并且其中所述樣品在適合于雜交的條件下被暴露于所述探針。5.權(quán)利要求1至4中任一項所述方法，其中所述遺傳材料為RNA或者DNA。6.權(quán)利要求1至5中任一項所述方法，其中所述樣品使用特異性針對各呼吸道病毒的遺傳材料的多寡核苷酸進行擴增。7.權(quán)利要求1至5中任一項所述方法，其中所述各呼吸道病毒種類的遺傳材料被擴增。8.權(quán)利要求1至7中任一項所述方法，其中所述擴增在分離的小瓶或容器內(nèi)進行。9.權(quán)利要求1至8中任一項所述方法，其中所述擴增在對各呼吸道病毒種類相似的擴增條件下進行。10.權(quán)利要求1至9中任一項所述方法，其中所述各呼吸道病毒的擴增是同時進行的。11.權(quán)利要求1至7中任一項所述方法，其中所述對人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的擴增在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。12.權(quán)利要求1至7中任一項所述方法，其中所述A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的擴增在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。13.權(quán)利要求1至7中任一項所述方法，其中所述冠狀病毒SARS、冠狀病毒229E/NL和冠狀病毒0C-43的擴增在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。14.權(quán)利要求1至7中任一項所述方法，其中所述腺病毒、B型流感和副流感4型的擴增在相同的小瓶或容器內(nèi)進行。15.權(quán)利要求11至14中任一項所述方法，其中所述擴增在相似的擴增條件下進行。16.權(quán)利要求11至15中任一項所述方法，其中所述擴增是同時進行的。17.權(quán)利要求3至16中任一項所述方法，其中所述引物對的組選自a)包含在SEQIDNO.78的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.79的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，b)包含在SEQIDNO.80的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.81的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，c)包含在SEQIDNO.82的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.83的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，d)包含在SEQIDNO.84的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.85的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，e)包含在SEQIDNO.:86的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.87的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，f)包含在SEQIDNO.88的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.89的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，g)包含在SEQIDNO.90的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.91的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，h)包含在SEQIDNO.92的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.93的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，，i)包含在SEQIDNO.94的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.95的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，j)包含在SEQIDNO.:96的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.97的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，k)包含在SEQIDNO.98的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.99的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，1)包含在SEQIDNO.:100的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.101的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，m)包含在SEQIDNO.102的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.103的5’端有0至5個核苷酸添加或缺失的核酸，以及n)a)至m)中任意一種的組合。18.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒通過a)、b)和c)限定的組的引物對擴增。19.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型通過d)、e)，f)和g)限定的組的引物對擴增。20.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述冠狀病毒SARS、冠狀病毒229E/NL和冠狀病毒0C-43通過h)、i)和j)限定的組的引物對擴增。21.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述腺病毒、B型流感和副流感4型通過k)、1)和m)限定的組的引物對擴增。22.權(quán)利要求17至21中任一項所述的方法，其中所述探針能夠特異性的結(jié)合到通過所述組的引物對擴增的PCR擴增子。23.權(quán)利要求5至22中任一項所述的方法，其中所述探針選自包含以下任意一種在其5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加、缺失，或者添加和缺失組合的核酸SEQIDNO.106，SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110，SEQIDNO.111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.116,SEQIDNO.:117，SEQIDNO.:118，SEQIDNO.119,SEQIDNO.:120，SEQIDNO.:121，SEQIDNO.122,SEQIDNO.:123，SEQIDNO.124,SEQIDNO.125,SEQIDNO.:126，SEQIDNO.127,SEQIDNO.128,SEQIDNO.129,SEQIDNO.130,SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132，SEQIDNO.133,SEQIDNO.:134，SEQIDNO.:135，SEQIDNO.136,SEQIDNO.137，SEQIDNO.:138，SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.142，SEQIDNO.:143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.:145，SEQIDNO.:146，SEQIDNO.147，SEQIDNO.:148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.152，SEQIDNO.153,SEQIDNO.:154，SEQIDNO.:155，SEQIDNO.:156，SEQIDNO.:157，SEQIDNO.:158，SEQIDNO.159,SEQIDNO.160,SEQIDNO.:161，SEQIDNO.:162，SEQIDNO.:163，SEQIDNO.164,SEQIDNO.:165，SEQIDNO.166,SEQIDNO.:167，SEQIDNO.:168，SEQIDNO.169,SEQIDNO.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173，SEQIDNO.:174，SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176，SEQIDNO.:177，SEQIDNO.178，SEQIDNO.:179，SEQIDNO.:180，SEQIDNO.:181，SEQIDNO.:182，SEQIDNO.183，SEQIDNO.:184，SEQIDNO.:185，SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187，SEQIDNO.188，SEQIDNO.194,SEQIDNO.:195，SEQIDNO.196,SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199,SEQIDNO.:200，SEQIDNO.:201，SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.-.203,SEQIDNO.:204,SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.-.206,SEQIDNO.-.207,SEQIDNO.:208，SEQIDNO.:209,SEQIDNO.-.210,SEQIDNO.:211，SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213，SEQIDNO.:214,SEQIDNO.:225，SEQIDNO.226,SEQIDNO.:227，SEQIDNO.228,SEQIDNO.:229互補序列以及它們的組合。24.一種能夠特異性的結(jié)合到基因的10至50個核苷酸長的寡核苷酸，所述基因選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229Ε的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(XV)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到一種呼吸道病毒的基因而非其他種類呼吸道病毒的基因。25.一種包含權(quán)利要求24所述的寡核苷酸的試劑盒。26.一種包含多種能夠特異性結(jié)合到呼吸道病毒基因的10至50個核苷酸長的寡核苷酸的試劑盒，所述基因選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六鄰體區(qū)，其中所述多種寡核苷酸能夠在相似的擴增條件下擴增基因，或者能夠在相似的雜交條件下與基因雜交。27.權(quán)利要求26所述的試劑盒，其中所述試劑盒包括多種用于特異性擴增人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的寡核苷酸，其中提供的所述多種用于特異性擴增人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的寡核苷酸在分離的容器內(nèi)，各容器包含單一的寡核苷酸或各容器包含病毒特異性寡核苷酸引物對，或者提供的所述多種用于特異性擴增人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的寡核苷酸在單個容器內(nèi)，所述容器包含用于各基因擴增的寡核苷酸混合物。28.權(quán)利要求26或27所述的試劑盒，其中所述試劑盒包括多種用于特異性擴增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸，其中提供的所述多種用于特異性擴增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸在分離的容器內(nèi)，各容器包含單一的寡核苷酸或各容器包含病毒特異性寡核苷酸引物對，或者提供的所述多種用于特異性擴增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的多種寡核苷酸在單個容器內(nèi)，所述容器包含用于各基因擴增的寡核苷酸混合物。29.權(quán)利要求26至28中任一項所述的試劑盒，其中所述試劑盒包括多種用于特異性擴增冠狀病毒SARS、冠狀病毒229E/NL和冠狀病毒0C-43的寡核苷酸，其中提供的所述多種用于特異性擴增冠狀病毒SARS、冠狀病毒229E/NL和冠狀病毒0C-43的多種寡核苷酸在分離的容器內(nèi)，各容器包含單一的寡核苷酸或各容器包含病毒特異性寡核苷酸引物對，或者提供的所述多種用于特異性擴增冠狀病毒SARS、冠狀病毒229E/NL和冠狀病毒0C-43的多種寡核苷酸在單個容器內(nèi)，所述容器包含用于各基因擴增的寡核苷酸混合物。30.權(quán)利要求25至29中任一項所述的試劑盒，其中所述試劑盒包括多種用于特異性擴增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸，其中提供的所述多種用于特異性擴增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸在分離的容器內(nèi)，各容器包含單一的寡核苷酸或各容器包含病毒特異性寡核苷酸引物對，或者提供的所述多種用于特異性擴增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸在單個容器內(nèi)，所述容器包含用于各基因擴增的寡核苷酸混合物。31.權(quán)利要求26至30中任一項所述的試劑盒，進一步包括用于各呼吸道病毒基因擴增的寡核苷酸。32.權(quán)利要求26至31中任一項所述的試劑盒，進一步包括在分離的容器內(nèi)或附著于固相載體的用于基因檢測的寡核苷酸。33.一種寡核苷酸，其選自a)包含以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.78,SEQIDNO.79,SEQIDNO.80,SEQIDNO.:81，SEQIDNO.:82，SEQIDNO.:83，SEQIDNO.:84，SEQIDNO.:85,SEQIDNO.86,SEQIDNO.:87,SEQIDNO.88,SEQIDNO.89,SEQIDNO.90,SEQIDNO.:91，SEQIDNO.:92，SEQIDNO.:93，SEQIDNO.:94，SEQIDNO.-.95,SEQIDNO.96,SEQIDNO.:97，SEQIDNO.:98，SEQIDNO.99,SEQIDNO.:100，SEQIDNO.:101,SEQIDNO.:102和SEQIDNO.103；b)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸，C)包含在a)的5’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一種的互補序列。34.權(quán)利要求33所述的寡核苷酸，其中所述核酸包括標(biāo)記。35.權(quán)利要求34所述的寡核苷酸，其中所述標(biāo)記位于寡核苷酸的5’端。36.一種包含至少兩種權(quán)利要求33至36中任一項所述的寡核苷酸的寡核苷酸混合物。37.一種包括寡核苷酸對的寡核苷酸混合物，所述寡核苷酸對選自a)包含在SEQIDNO.78的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.79的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；b)包含在SEQIDNO.80的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.81的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；c)包含在SEQIDNO.:82的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.83的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；d)包含在SEQIDNO.84的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.85的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；e)包含在SEQIDNO.86的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.87的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；f)包含在SEQIDNO.88的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.89的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；g)包含在SEQIDNO.90的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.91的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；h)包含在SEQIDNO.92的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.93的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；i)包含在SEQIDNO.94的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.95的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；j)包含在SEQIDNO.96的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.97的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；k)包含在SEQIDNO.98的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.99的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；1)包含在SEQIDNO.:100的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.101的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸；m)包含在SEQIDNO.:102的5，端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.103的5’端有O至5個核苷酸添加或缺失的核酸，以及n)a)至m)中任意一種的組合。38.一種用于特異性檢測或擴增人類腸道病毒、鼻病毒、人類呼吸道合胞病毒和人類偏肺病毒的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:78，SEQIDNO.79,SEQIDNO.:80，SEQIDNO.:81，SEQIDNO.:82，SEQIDNO.83；b)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一種的互補序列。39.一種用于特異性檢測或擴增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:84，SEQIDNO.:85,SEQIDNO.:86，SEQIDNO.:87，SEQIDNO.88,SEQIDNO.:89，SEQIDNO.-.90,SEQIDNO.91；b)包含在a)的5’端有O至5個核苷酸添加的寡核苷酸，c)包含在a)的5’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一種的互補序列。40.一種包含用于特異性檢測或擴增冠狀病毒SARS-CoV、冠狀病毒229E、冠狀病毒NL和冠狀病毒0C43的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:92，SEQIDNO.93,SEQIDNO.-.94,SEQIDNO.-.95,SEQIDNO.:96，SEQIDNO.97；b)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一種的互補序列。41.一種用于特異性檢測或擴增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:98，SEQIDNO.99,SEQIDNO.:100，SEQIDNO.:101，SEQIDNO.:102和SEQIDNO.103；b)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一種的互補序列。42.一種寡核苷酸，其選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:106至SEQIDNO.:188，SEQIDNO.:194至SEQIDNO.:213，SEQIDNO.:214禾口SEQIDNO.:225至SEQIDNO.:229E；b)包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的核酸；c)包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的核酸；d)包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的核酸；以及e)以上任意一種的互補序列。43.權(quán)利要求42所述的寡核苷酸，其中所述核酸包括標(biāo)記。44.權(quán)利要求43所述的寡核苷酸，其中所述標(biāo)記位于核酸的5’或3’端。45.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到鼻病毒和/或腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.106,SEQIDNO.107,SEQIDNO.108，SEQIDNO.109,SEQIDNO.110，SEQIDNO.111，SEQIDNO.112,SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.:116，SEQIDNO.117，SEQIDNO.118,SEQIDNO.119，SEQIDNO.:120，SEQIDNO.194,SEQIDNO.195和SEQIDNO.196；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。46.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到人類呼吸道合胞病毒，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:121，SEQIDNO.122,SEQIDNO.123,SEQIDNO.124,SEQIDNO.125,SEQIDNO.126,SEQIDNO.127,SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.200；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。47.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到人類偏肺病毒，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:128，SEQIDNO.129,SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.133；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。48.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到A型流感病毒，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:134，SEQIDNO.135,SEQIDNO.136,SEQIDNO.137,SEQIDNO.138,SEQIDNO.139,SEQIDNO.140,SEQIDNO.:141，SEQIDNO.-.142,SEQIDNO.:143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.145,SEQIDNO.146,SEQIDNO.147,SEQIDNO.148,SEQIDNO.149,SEQIDNO.150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.-.152,SEQIDNO.-.201,SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.(203，SEQIDNO.:204，SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.:206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.208；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。49.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到副流感1型，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:153和SEQIDNO.154；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。50.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到副流感2型，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:155，SEQIDNO.156和SEQIDNO.157；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。51.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到副流感3型，并且其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQIDNO.225至229；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。52.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到冠狀病毒SARS-CoV，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:159和SEQIDNO.160；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。53.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到冠狀病毒229E，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.161；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。54.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到冠狀病毒NL，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.162；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。55.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到冠狀病毒0C43，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:163和SEQIDNO.164；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸添加的寡核苷酸；C)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。56.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到腺病毒，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:165，SEQIDNO.166,SEQIDNO.167,SEQIDNO.168,SEQIDNO.:169，SEQIDNO.170,SEQIDNO.171,SEQIDNO.:172，SEQIDNO.:173，SEQIDNO.:174，SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176,SEQIDNO.:177和SEQIDNO.178；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。57.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到B型流感病毒，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:179，SEQIDNO.180,SEQIDNO.181，SEQIDNO.182,SEQIDNO.183,SEQIDNO.210，SEQIDNO.211,SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213和SEQIDNO.214；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。58.權(quán)利要求42至44中任一項所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能夠結(jié)合到副流感病毒4型，其中所述寡核苷酸選自a)具有以下序列或由以下序列組成的寡核苷酸，所述序列選自SEQIDNO.:184，SEQIDNO.185，SEQIDNO.186，SEQIDNO.187和SEQIDNO.188；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5個核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5個核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一個有O至5個核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一種的互補序列。59.一種包含至少一種權(quán)利要求45、46和47中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸組合，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體上的特異性位點。60.一種包含至少一種權(quán)利要求48、49、50和51中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸組合，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體上的特異性位點。61.一種包含至少一種權(quán)利要求52、53、54和55中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸組合，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體上的特異性位點。62.一種包含至少一種權(quán)利要求56、57和58中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸組合，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體上的特異性位點。63.一種包含至少一種權(quán)利要求45至58中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸組合，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體上的特異性位點。64.一種包含至少兩種權(quán)利要求33至35、42至57或58中任一項所述寡核苷酸的寡核苷酸文庫。65.權(quán)利要求64所述的寡核苷酸文庫，其中所述各寡核苷酸在分離的容器內(nèi)提供或者附著于固相載體。66.一種包含固相基底和多種附著于固相基底的位置可識別的探針的陣列，其中所述各探針包含不同的核酸序列，并且能夠特異性結(jié)合到(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒OC43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(XV)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型的六鄰體區(qū)，所述各探針各自包含10至50個核苷酸。67.一種陣列，其包括a)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失O至5個核苷酸SEQIDNO.106,SEQIDNO.107,SEQIDNO.108,SEQIDNO.:109，SEQIDNO.110,SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.115,SEQIDNO.116,SEQIDNO.:117，SEQIDNO.118,SEQIDNO.:119，SEQIDNO.120，SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；b)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDN0.121,SEQIDNO.-.122,SEQIDNO.123,SEQIDNO.-.124,SEQIDNO.:125,SEQIDNO.-.126,SEQIDNO.-.127,SEQIDNO.-.197,SEQIDNO.:198，SEQIDNO.199和SEQIDNO.200或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；c)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至`5個核苷酸SEQIDNO.128,SEQIDNO.129,SEQIDNO.130,SEQIDNO.131,SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；d)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失O至5個核苷酸SEQIDNO.134,SEQIDNO.135,SEQIDNO.`136,SEQIDNO.:137，SEQIDNO.:138,SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.-.142,SEQIDNO.`143,SEQIDNO.144,SEQIDNO.:145，SEQIDNO.146,SEQIDNO.147,SEQIDNO.148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.-.152,SEQIDNO.201，SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.-.203,SEQIDNO.-.204,SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.:208或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或`3’端；e)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:153和SEQIDNO.:154或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；f)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.155,SEQIDNO.:156和SEQ`IDNO.:157或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；g)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQ`IDNO.:225，SEQIDNO.:226，SEQIDNO.227,SEQIDNO.228和SEQIDNO.:229或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；h)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；i)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:161或者其互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；j)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:162或者其互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；k)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；1)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至5個核苷酸SEQIDNO.165,SEQIDNO.:166，SEQIDNO.`167,SEQIDNO.168,SEQIDNO.:169,SEQIDNO.-.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.-.172,SEQIDNO.-.173,SEQIDNO.174,SEQIDNO.175,SEQIDNO.176,SEQIDNO.:177和SEQIDNO.:178或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；m)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失0至`5個核苷酸SEQIDNO.179,SEQIDNO.180,SEQIDNO.181,SEQIDNO.182,SEQIDNO.:183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.214或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；η)至少一種選自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含將以下序列添加和/或缺失O至5個核苷酸SEQIDNO.:184，SEQIDNO.:185，SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187和SEQIDNO.:188或者它們的互補序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；其中所述各寡核苷酸附著于固相載體，并且其中所述各寡核苷酸位于可尋址的位置。68.一種用于診斷有需要的個體呼吸道感染的方法，所述方法包括用能夠與呼吸道病毒種類的遺傳材料特異性結(jié)合的寡核苷酸檢測從個體獲得的樣品中病原體的存在或不存在，所述呼吸道病毒種類選自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人類呼吸道合胞病毒，(iv)人類偏肺病毒，(ν)人類腸道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠狀病毒0C43，(xii)冠狀病毒NL，(xiii)冠狀病毒229E，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV和(xv)與呼吸道感染相關(guān)的腺病毒血清型，其中所述病原體的存在是與病原體相關(guān)的呼吸道感染的指征。69.權(quán)利要求68所述的方法，其中所述病原體的存在或不存在通過檢測來自呼吸道病毒種類的遺傳材料確定，其中所述遺傳材料選自(i)A型流感病毒的基質(zhì)基因，(ii)B型流感病毒的基質(zhì)基因，(iii)人類呼吸道合胞病毒的核衣殼基因，(iv)人類偏肺病毒的核衣殼基因，(ν)人類腸道病毒的5’-非編碼區(qū)，(vi)鼻病毒的5’-非編碼區(qū)，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠狀病毒0C43的基質(zhì)基因，(xii)冠狀病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠狀病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠狀病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六鄰體區(qū)以及它們的組合。70.一種用于檢測和/或鑒別呼吸道病毒的方法，包括將包含或被懷疑包含源自呼吸道病毒的遺傳材料的樣品與權(quán)利要求24至58中任一項所限定的寡核苷酸或寡核苷酸混合物在雜交、擴增和/或檢測的合適條件下相接觸。71.權(quán)利要求70所述的方法，其中所述擴增是在相似的擴增條件下進行的。72.權(quán)利要求70所述的方法，其中所述檢測是在相似的檢測條件下進行的。全文摘要本發(fā)明涉及檢測的方法，以及用于15種臨床重要的呼吸道病毒的特異性檢測的化驗、試劑和試劑盒，所述呼吸道病毒包括A型和B型流感病毒、人類呼吸道合胞病毒、人類偏肺病毒、人類腸道病毒、鼻病毒的全部血清型、腺病毒的7種血清型、副流感病毒1、2、3和4型，以及冠狀病毒NL、229E、OC43和SARS-CoV。本發(fā)明使得在單次化驗中檢測這些各種呼吸道病毒。文檔編號C07H21/04GK101801993SQ200880107417公開日2010年8月11日申請日期2008年7月17日優(yōu)先權(quán)日2007年7月17日發(fā)明者E·勒布朗,G·博伊文,J·弗雷奈特,M·G·伯杰龍,M·伯西諾特,N·迪翁申請人:拉瓦勒大學(xué)