專利名稱：改進(jìn)的胰島淀粉樣多肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與白蛋白和/或胰島淀粉樣多肽(amylin)受體結(jié)合的人胰島淀粉樣 多肽或其類似物的衍生物，涉及包含這些衍生物的藥物組合物，涉及獲取它們的方法以及 用作藥物的胰島淀粉樣多肽衍生物。
背景技術(shù)：
大量人群罹患糖尿病和肥胖癥并且數(shù)量還在不斷增加。糖尿病是一種利用葡萄糖 的能力部分或完全喪失的代謝疾病。許多治療方案的目標(biāo)是針對(duì)過量血糖，而其它方案則主要集中在減輕體重。用于 降低血糖的最有效抗糖尿病藥是胰島素及其類似物。長期以來，已經(jīng)知道，當(dāng)傳統(tǒng)胰島素用 于治療糖尿病時(shí)，它與體重增加有關(guān)。胰島素經(jīng)皮下注射，每日多達(dá)數(shù)次。2型糖尿病通常在早期用節(jié)食和運(yùn)動(dòng)來治療。隨著病癥發(fā)展，添加不同口服抗糖尿 病藥。在這一時(shí)期，也可使用注射用藥例如GLP-1類似物。一般而言，這些藥物對(duì)具有能釋 放胰島素和胰島淀粉樣多肽的功能性0細(xì)胞的患者最有效。人胰島淀粉樣多肽是一種長度為37個(gè)氨基酸的肽，其理化性質(zhì)使其用作藥物時(shí) 有困難。具體地講，它在體外(in-vitro)和/或離體(ex-vivo)具有形成原纖維的趨勢(shì)并 因沉淀而變得無效。一種稱為Symlin. 的藥品目前已上市，該藥品含有人胰島淀粉樣多肽 的類似物(普蘭林肽(pramlintide))。與人胰島淀粉樣多肽相比，在普蘭林肽中，37個(gè)氨 基酸中有3個(gè)被脯氨酸取代。這基本上改進(jìn)了形成原纖維的趨勢(shì)。然而，甚至是普蘭林肽 也難以在中性pH溶液中保存，因而在一種酸性溶液中提供，即Symlin 。已經(jīng)描述了具有改進(jìn)的藥動(dòng)學(xué)或藥效學(xué)(PK/PD)特性的各種胰島淀粉樣多肽類 似物和衍生物。然而，仍然需要提供具有天然人胰島淀粉樣多肽活性的類似物和衍生物，以 及具有延長的藥動(dòng)學(xué)特性的衍生物，表現(xiàn)出比天然人胰島淀粉樣多肽更高的溶解度和/或 穩(wěn)定性。發(fā)明概述本發(fā)明一方面涉及人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨 基酸，其中 a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或c)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴 氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基r連接，任選通過接頭；
其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明又一方面涉及一種用于延長人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的 作用時(shí)間的方法，所述方法的特征在于以下修飾a)修飾位置1的氨基酸殘基，即通過用任何天然氨基酸任選取代，并通過將所述 天然氨基酸與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且進(jìn)一步a.將所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或b.修飾位置2-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代，并通過將所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或；b)修飾位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過 將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或；c)修飾位置18的氨基酸殘基，即通過用精氨酸殘基取代，并且修飾位置2-17或 19-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭；d)位置18的氨基酸是精氨酸，位置25、位置28和位置29的氨基酸都是脯氨酸， 位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明也提供包含本發(fā)明衍生物的藥物組合物和本發(fā)明衍生物在制備用于治療 疾病的藥物中的用途。發(fā)明詳述本發(fā)明的目的是提供與白蛋白和/或胰島淀粉樣多肽受體結(jié)合的人胰島淀粉樣 多肽或其類似物的衍生物。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨 基酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或c)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴 氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或c)位置17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或d)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴 氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被脯氨酸取代并且任選位置18的 氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被 脯氨酸取代并且任選位置18的氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是谷氨酸或精氨酸，并且其中所述谷氨酸或精氨酸與由1-10 個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接 頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是谷氨酸或精氨酸，并且其中所述谷氨酸或精氨酸與由1-6 個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接 頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中
位置1的氨基酸殘基是谷氨酸或精氨酸，并且其中所述谷氨酸或精氨酸與由5個(gè) 氨基酸、4個(gè)氨基酸、3個(gè)氨基酸、2個(gè)氨基酸或1個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，其中所述 延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，并且位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致?！矫嫣峁┤艘葝u淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致?！矫嫣峁┤艘葝u淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置17的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置21的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。本發(fā)明一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基方面與白蛋 白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨 酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是谷氨酸或精氨酸，位置25、28和29的氨基酸殘基都是脯氨 酸，并且其中所述谷氨酸或精氨酸與由5個(gè)氨基酸、4個(gè)氨基酸、3個(gè)氨基酸、2個(gè)氨基酸或1 個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接 頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。
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一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置25、28和29的氨基酸殘基都是脯氨酸，并且位置1_17或19_37的氨基酸殘基 已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是谷氨酸或精氨酸，位置18的氨基酸殘基是精氨酸，位置25、 28和29的氨基酸殘基都是脯氨酸，并且其中所述谷氨酸或精氨酸與由5個(gè)氨基酸、4個(gè)氨 基酸、3個(gè)氨基酸、2個(gè)氨基酸或1個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，其中所述延伸與白蛋白 結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。一方面提供人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置18的氨基酸殘基是精氨酸，位置25、28和29的氨基酸殘基都是脯氨酸，并且 位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。下面是各方面的非限制性列表，其在本文其它地方有進(jìn)一步描述1. 一種具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨 基酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或c)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴 氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。2.方面1的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨 基酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或
c)位置17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或d)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴 氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。3.方面1或2的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物， 其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中a)所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭b)位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被脯氨酸取代并且任選位置18的 氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。4.方面1或2的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物， 其中位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被 脯氨酸取代并且任選位置18的氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。5.方面1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉 樣多肽或其類似物，其中位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。6.方面6的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其 類似物，其中位置17的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。7.方面1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉 樣多肽或其類似物，其中位置21的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。8.方面1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉 樣多肽或其類似物，其中位置25的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。9.方面1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉
10樣多肽或其類似物，其中位置29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。10.方面1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀粉 樣多肽或其類似物，其中位置18的氨基酸是精氨酸，位置25、位置28和位置29的氨基酸都是脯氨酸，位置 1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭。11.方面1-10中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具 有1-12個(gè)氨基酸取代。12.方面1-11中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具 有3-10個(gè)氨基酸取代。13.方面1-12中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具 有3、4、5、6、7、8或9個(gè)氨基酸取代。14.方面1-13中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀粉 樣多肽的類似物，其中與人胰島淀粉樣多肽相比，已添加0-8個(gè)額外電荷。15.方面14的衍生物，其中已通過以下方法添加0-8個(gè)額外電荷用帶電荷氨基 酸取代人胰島淀粉樣多肽或其類似物的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基和/或在N-端延伸中添加 帶電荷氨基酸，或在白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物和/或接頭中添加帶負(fù)電荷的實(shí) 體。16.方面14或15的衍生物，其中已通過以下方法添加0-8個(gè)額外電荷用谷氨酸 殘基和/或天冬氨酸殘基取代人胰島淀粉樣多肽或其類似物的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基和/ 或在N-端延伸中添加帶電荷氨基酸。17.方面14-16中任一項(xiàng)的衍生物，其中已通過以下方法添加0-8個(gè)額外電荷在 N-端延伸中添加帶電荷氨基酸。18.方面1-17中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物包含由1-10個(gè)氨基酸組成的 N-端延伸，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。19.方面18的衍生物，其中所述衍生物包含由1-8個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。20.方面19的衍生物，其中所述衍生物包含由1-6個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。21.方面20的衍生物，其中所述衍生物包含由5個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。22.方面20的衍生物，其中所述衍生物包含由4個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。23.方面20的衍生物，其中所述衍生物包含由3個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。24.方面23的衍生物，其中所述N-端延伸選自Glu-Glu-Arg、Glu-Glu-Glu和 Glu—Lys—Argo
25.方面20的衍生物，其中所述衍生物包含由2個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。26.方面25的衍生物，其中所述N-端延伸是Glu-Lys。27.方面20的衍生物，其中所述衍生物包含由1個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。28.方面25的衍生物，其中所述N-端延伸選自Arg、Lys和Glu。29.方面1的衍生物，所述衍生物包含下式1的氨基酸序列Xaai-CyS-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xa a21-Asn-Xaa23-Gly-Xaa25-Xaa26-Leu-Xaa28-Xaa29-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr 式(1) (SEQ ID No 18)其中Xaai缺失或獨(dú)立選自Lys、Arg和Glu ；Xaa3 獨(dú)立選自 Asn、Gly、Gin 和 Lys ；Xaa17 獨(dú)立選自 Ala、Val 和 Lys ；Xaa18 獨(dú)立選自 Hi s、Pro 和 Arg ；Xaa21 獨(dú)立選自 Asn、Gin 和 Lys ；Xaa23 獨(dú)立選自 Phe 和 Leu ；Xaa25 獨(dú)立選自 Ala、Pro 和 Lys ；Xaa2fJ4立選自 Val 和 lie ；Xaa28 獨(dú)立選自 Ser 和 Pro ；Xaa29 獨(dú)立選自 Ser、Pro 和 Lys ；C-端可任選衍生為酰胺；N-端可任選延伸1-10個(gè)氨基酸殘基其中氨基酸殘基Xaai與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，所述延伸能與白 蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或者氨基酸殘基乂￡1￡113￡1￡133￡1￡1173￡1￡1213￡1￡125或乂￡1￡129是賴氨酸，并且所述賴氨酸殘基 與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中如果 Xaaj 是 Lys, Xaa3 是 Asn, Xaa21 是 Asn, Xaa25 是 Ala 或 Pro,貝U Xaa29 是 Lys ；和如果乂￡ 1是6111或Arg，則所述Glu或Arg與由1_10個(gè)氨基酸組成的N_端延伸 連接，并且所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，和如果Xaa!是Lys，則式(1)中選自Xaai、Xaa3、Xaa21、Xaa25和Xaa29的位置的一個(gè)氨 基酸與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。30.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是親脂殘基。31.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基在生理pH時(shí)帶負(fù)電荷。32.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基包含在生理pH時(shí)可帶負(fù)電荷的基團(tuán)。33.方面32的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基包含羧酸基團(tuán)。34.方面29-33中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基與白蛋白非共價(jià)結(jié)合35.方面29-34中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基對(duì)人血清白蛋白的 結(jié)合親和力低于約10 y M或低于約1 y M。36.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基選自直鏈烷基、支鏈烷基、具有 羧酸基團(tuán)的基團(tuán)和部分或完全氫化環(huán)戊并菲(cyclopentanophenanthrene)骨架。37.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是汽巴克隆基(cibacronyl)殘基。38.方面29的衍生物，其中所述親脂殘基包含部分或完全氫化環(huán)戊并菲骨架。39.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基具有6_40個(gè)碳原子、8_26個(gè) 碳原子或8-20個(gè)碳原子。40.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是選自CH3 (CH2) rC0-的酰 基，其中r為4-38的整數(shù)，優(yōu)選為4-24的整數(shù)；更優(yōu)選選自CH3 (CH2)6C0_、CH3 (CH2)8C0_、
ch3 (ch2) 10co-、ch3 (ch2) 12co-、ch3 (ch2) 14co-、ch3 (ch2) 16co-、ch3 (ch2) 18co-、ch3 (ch2) 20co-和 ch3 (ch2)22co-。41.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是直鏈或支鏈烷烴a，二
羧酸的酰基。42.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是選自H00C (CH2) SC0_的?；?， 其中s為4-38的整數(shù)，優(yōu)選為4-24的整數(shù)；更優(yōu)選選自H00C(CH2)14C0-、H00C (CH2) 16C0_、 H00C (CH2) 18C0-、H00C (CH2) 20C0-和 H00C (CH2) 22C0_。43.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式CH3(CH2)vC0_NHCH(C00H) (CH2)2C0-的基團(tuán)，其中V為10-24的整數(shù)。44.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式CH3(CH2) WC0-NHCH((CH2)2C00H)C0-的基團(tuán)，其中 w 為 8-24 的整數(shù)。45.方面29-30的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式-NHCH(COOH) (CH2)4NH-C0(CH2)yCH3的基團(tuán)，其中y為8-18的整數(shù)。46.方面29的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是其中1為12、13、
14、15、16、17、18、19 或 20。47.方面29-46中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基通過接頭是通過賴 氨酸殘基的氨基連接。48.方面29-47中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述接頭包含1_4個(gè)氨基酸殘基。49.方面 48 的衍生物，其中所述接頭是 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu、Glu、 Glu-Glu、Glu-Glu-Arg。50.方面29-49中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述接頭包含一個(gè)或多個(gè)烷撐二醇單元， 例如1-5個(gè)乙二醇單元。51.方面29-50中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述接頭包含_C(0)_(CH2) !-0- [ (CH2CH2-0] m- (CH2) p- [NHC (0) - (CH2) f0- [ (CH2) n-0] m- (CH2) p] q-NH-，其中l(wèi)、m、n和p獨(dú)立地為1-5，q為0-5。
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52.方面29-51中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述接頭包含十六烷?；被酋；糠?。53.包含方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。54.方面53的藥物組合物，其適于胃腸外給藥。55.用作藥物的方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物。56.用作藥物的方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物，用于治療或預(yù)防高血糖癥、2型糖尿 病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異常(dyslipidemia)、認(rèn) 知障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合征、消化 不良和胃潰瘍。57.用作藥物的方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物，用于延遲或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn)程。58.用作藥物的方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物，用于減少食物攝取，減少0細(xì)胞凋 亡，增加0細(xì)胞功能和0細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)細(xì)胞的葡萄糖敏感性。方面1-42 中任一項(xiàng)的衍生物在制備藥物中的用途。59.方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于治療或預(yù)防以下疾病的藥物中的用 途高血糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異 常、認(rèn)知障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合征、 消化不良和胃潰瘍。60.方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于延遲或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn)程的 藥物中的用途。61.方面1-52中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于以下目的的藥物中的用途減少食物 攝取，減少細(xì)胞凋亡，增加細(xì)胞功能和細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)細(xì)胞的葡 萄糖敏感性。62. 一種用于延長人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的作用時(shí)間的方法， 所述方法的特征在于以下修飾a)修飾位置1的氨基酸殘基，即通過用任何天然氨基酸任選取代，并通過將所述 天然氨基酸與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且進(jìn)一步a.將所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或b.修飾位置2-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代，并通過將所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或；b)修飾位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過 將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或；c)修飾位置18的氨基酸殘基，即通過用精氨酸殘基取代，并且修飾位置2-17或 19-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭；d)位置18的氨基酸是精氨酸，位置25、位置28和位置29的氨基酸都是脯氨酸， 位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白 結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。
其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。63.方面62的方法，其中人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的作用時(shí)間延 長至超過約40小時(shí)。64.方面62或63中任一項(xiàng)的方法，其中所述人胰島淀粉樣多肽或其類似物如同方 面1-52中任一項(xiàng)的進(jìn)一步定義。65. 一種用于治療、預(yù)防或緩解患者的以下疾病的方法高血糖癥、2型糖尿病、葡 萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、X綜合征或血脂異常，所述方法包括給予患者方面1-52 中任一項(xiàng)的衍生物或方面53或54的藥物組合物。66. 一種用于制備方面53或54的藥物組合物的方法，所述方法包括將方面1_52 中任一項(xiàng)的衍生物與藥學(xué)上可接受的物質(zhì)和/或賦形劑混合。67.實(shí)施例的胰島淀粉樣多肽衍生物。本發(fā)明進(jìn)一步歸納于下列方面la. 一種具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，或位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭；或位置3、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基 與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨 酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通 過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。2a.方面la的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其 中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中 所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接，或位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；或位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；或位置21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與 白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；
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或位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨 酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通 過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。3a.方面la或2a的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生 物，其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接，或位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；并且任選位置18的氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。4a.方面la或2a的具有SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生 物，其中位置3、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基 與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；并且任選位置18的氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。5a.方面la或2a的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多 肽，其中位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基 酸，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接，或位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；或位置3、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基 與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；或位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨 酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通 過接頭。6a.方面la_4a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀 粉樣多肽或其類似物，其中位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭。7a.方面6a的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或
16其類似物，其中位置3的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基連接，任選通過接頭。8a.方面la_4a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀 粉樣多肽或其類似物，其中位置21的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭。9a.方面la_4a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀 粉樣多肽或其類似物，其中位置25的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭。10a.方面la_4a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀 粉樣多肽或其類似物，其中位置29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié) 合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭。11a.方面la_4a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島淀 粉樣多肽或其類似物，其中位置18的氨基酸是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘 基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接 頭。12a.方面la-lla中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生 物具有1-12個(gè)氨基酸取代。13a.方面la_12a中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生 物具有1-10個(gè)氨基酸取代。14a.方面la_13a中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生 物具有1-8個(gè)氨基酸取代。15a.方面1_14中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物 具有1-6個(gè)氨基酸取代。16a.方面la_15a中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生 物具有1-4個(gè)氨基酸取代。17a.方面la_16a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQ IDN0 17的人胰島 淀粉樣多肽的類似物，其中與人胰島淀粉樣多肽相比，已添加0-8個(gè)額外電荷。18a.方面17a的衍生物，其中已通過以下方法添加0_8個(gè)額外電荷用帶電荷氨 基酸取代人胰島淀粉樣多肽或其類似物的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基和/或在N-端延伸中添 加帶電荷氨基酸，或在白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物和/或接頭中添加帶負(fù)電荷的實(shí) 體。19a.方面17a或18a的衍生物，其中已通過以下方法添加0_8個(gè)額外電荷用谷 氨酸殘基和/或天冬氨酸殘基取代人胰島淀粉樣多肽或其類似物的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘 基和/或在N-端延伸中添加帶電荷氨基酸。頁20a.方面17a_19a中任一項(xiàng)的衍生物，其中已通過以下方法添加0_8個(gè)額外電荷 在N-端延伸中添加帶電荷氨基酸。21a.方面la_3a、5a或12a_20a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物包含由1_10 個(gè)氨基酸組成的N-端延伸，其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連 接。22a.方面21a的衍生物，其中所述衍生物包含由1_8個(gè)氨基酸組成的N_端延伸， 其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。23a.方面22a的衍生物，其中所述衍生物包含由1_6個(gè)氨基酸組成的N_端延伸， 其中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。24a.方面23a的衍生物，其中所述衍生物包含由5個(gè)氨基酸組成的N_端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。25a.方面24a的衍生物，其中所述衍生物包含由4個(gè)氨基酸組成的N_端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。26a.方面25a的衍生物，其中所述衍生物包含由3個(gè)氨基酸組成的N_端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。27a.方面26a的衍生物，其中所述衍生物包含由2個(gè)氨基酸組成的N_端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。28a.方面27a的衍生物，其中所述衍生物包含由1個(gè)氨基酸組成的N_端延伸，其 中所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接。29a.方面la的衍生物，所述衍生物包含下式1的氨基酸序列Xaai-CyS-Xaa3-Thr -Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Asn-Xaa23-Gly-Xaa25-Xaa26-Leu-Xaa28-Xaa29-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr式(1)(SEQ ID No :18)其中Xaai缺失或獨(dú)立選自Lys和Glu ；
Xaa3 獨(dú)立選自 Asn、Gly 和 Lys ；Xaa17 獨(dú)立選自 Ala、Val 和 Lys ；Xaa18 獨(dú)立選自 Hi s、Pro 和 Arg ；Xaa21 獨(dú)立選自 Asn、Gin 和 Lys ；Xaa23 獨(dú)立選自 Phe 和 Leu ；Xaa25 獨(dú)立選自 Ala、Pro 和 Lys ；Xaa26 獨(dú)立選自 Val 禾口 lie ；Xaa28 獨(dú)立選自 Ser 和 Pro ；Xaa29 獨(dú)立選自 Ser、Pro 和 Lys ；C-端可任選衍生為酰胺； N-端可任選延伸1-10個(gè)氨基酸殘基其中如果 Xaaj 是 Lys, Xaa3 是 Asn, Xaa21 是 Asn, Xaa25 是 Ala 或 Pro,貝U Xaa29 是 Lys ；和如果乂脅1是6111，則所述Glu與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物進(jìn)一步連接，和如果Xaa!是Lys，則式(1)中選自Xaai、Xaa3、Xaa21、Xaa25和Xaa29的位置的一個(gè)氨 基酸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭。30a.方面la_29a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物與聚乙二醇聚合物連接。31a.方面30a的衍生物，其中所述聚乙二醇聚合物是分子量為至少30kD的聚乙二 32a.方面30a_31a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述聚乙二醇聚合物是支鏈聚乙33a.方面la_29a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物與白蛋白結(jié)合殘基連接。34a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是親脂殘基。35a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基在生理pH時(shí)帶負(fù)電荷。36a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基包含能帶負(fù)電荷的基團(tuán)。37a.方面36a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基包含羧酸基團(tuán)。38a.方面33a_37a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基與白蛋白非共價(jià)
纟口口。39a.方面33a_38a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基對(duì)人血清白蛋白 的結(jié)合親和力低于約10 y M或低于約1 y M。40a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基選自直鏈烷基、支鏈烷基、具有 羧酸基團(tuán)的基團(tuán)和部分或完全氫化環(huán)戊并菲骨架。41a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是汽巴克隆基(cibacronyl)殘基。42a.方面34a的衍生物，其中所述親脂殘基包含部分或完全氫化環(huán)戊并菲骨架。43a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基具有6_40個(gè)碳原子、8_26個(gè)碳 原子或8-20個(gè)碳原子。44a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是選自CH3 (CH2) rC0-的酰 基，其中r為4-38的整數(shù)，優(yōu)選為4-24的整數(shù)；更優(yōu)選選自CH3(CH2)6C0_、CH3(CH2)8C0_、
ch3 (ch2) 10co-、ch3 (ch2) 12co-、ch3 (ch2) 14co-、ch3 (ch2) 16co-、ch3 (ch2) 18co-、ch3 (ch2) 20co-和 ch3 (ch2)22co-。45a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是直鏈或支鏈烷烴a，二 羧酸的?；?6a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是選自H00C(CH2)SC0_的酰基， 其中s為4-38的整數(shù)，優(yōu)選為4-24的整數(shù)；更優(yōu)選選自H00C(CH2)14C0-、H00C (CH2) 16C0_、 H00C (CH2) 18C0-、H00C (CH2) 20C0-和 H00C (CH2) 22C0_。47a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式CH3 (CH2) vC0_NHCH(C00H) (CH2)2C0-的基團(tuán)，其中V為10-24的整數(shù)。48a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式CH3(CH2) WC0-NHCH((CH2)2C00H)C0-的基團(tuán)，其中 w 為 8-24 的整數(shù)。49a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式C00H(CH2) xC0_的基團(tuán)，其 中x為8-24的整數(shù)。
50a.方面34a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是式-NHCH(COOH) (CH2)4NH-C0(CH2)yCH3的基團(tuán)，其中y為8-18的整數(shù)。51a.方面33a的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是肽，例如包含小于40個(gè)氨基 酸殘基的肽。52a.方面33a_51a中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基任選通過接頭是 通過賴氨酸殘基的氨基連接的。53a.包含方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合 物。54a.方面53a的藥物組合物，其適于胃腸外給藥。55a.用作藥物的方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物。56a.用作藥物的方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物，用于治療或預(yù)防高血糖癥、2型 糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異常、認(rèn)知障礙、動(dòng) 脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍。57a.用作藥物的方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物，用于延遲或阻止2型糖尿病的疾 病進(jìn)程。58a.用作藥物的方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物，用于減少食物攝取，減少0細(xì)胞 凋亡，增加0細(xì)胞功能和0細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)0細(xì)胞的葡萄糖敏感性。59a.方面la_42a中任一項(xiàng)的衍生物在制備藥物中的用途。60a.方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于治療或預(yù)防以下疾病的藥物中的 用途高血糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂 異常、認(rèn)知障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合 征、消化不良和胃潰瘍。61a.方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于延遲或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn) 程的藥物中的用途。62a.方面la_52a中任一項(xiàng)的衍生物在制備用于以下目的的藥物中的用途減少 食物攝取，減少0細(xì)胞凋亡，增加0細(xì)胞功能和0細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)0細(xì)胞的葡 萄糖敏感性。63a. 一種用于延長人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的作用時(shí)間的方法， 所述方法的特征在于以下修飾修飾位置1的氨基酸殘基，即通過用任何天然氨基酸任選取代，并且通過將所述 天然氨基酸與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且進(jìn)一步將所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，或修飾位置2-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代，并通過將所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭，或；修飾位置3、21、25或29的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述 賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭，或；
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修飾位置18的氨基酸殘基，即通過用精氨酸殘基取代，并且修飾位置2-17或 19-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基或聚乙二醇聚合物連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。64a.方面63a的方法，其中人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的作用時(shí)間 延長至超過約40小時(shí)。65a.方面63a或64a中任一項(xiàng)的方法，其中所述人胰島淀粉樣多肽或其類似物如 同方面la_52a中任一項(xiàng)的進(jìn)一步定義。66a. 一種用于治療、預(yù)防或緩解患者的以下疾病的方法高血糖癥、2型糖尿病、 葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、X綜合征或血脂異常，所述方法包括給予患者方面 la-52a中任一項(xiàng)的衍生物或方面53a或54a的藥物組合物。67a. 一種用于制備方面53a或54a的藥物組合物的方法，所述方法包括將方面 la-52a中任一項(xiàng)的衍生物與藥學(xué)上可接受的物質(zhì)和/或賦形劑混合。一方面，提供表現(xiàn)出高效力的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。又一方面， 提供比人胰島淀粉樣多肽的效力有所改進(jìn)的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。再一 方面，提供具有與普蘭林肽相似效力的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。再一方面， 提供比普蘭林肽的效力有所改進(jìn)的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。術(shù)語“效力”(或活性)是指本發(fā)明衍生物對(duì)胰島淀粉樣多肽受體的親和力并且可 在本文測(cè)定部分所述的螢光素酶測(cè)定中進(jìn)行檢測(cè)。一方面，提供物理穩(wěn)定的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。又一方面，提供 比人胰島淀粉樣多肽的物理穩(wěn)定性更高的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物。對(duì)于本發(fā)明的衍生物而言，本文所用的術(shù)語“物理穩(wěn)定性”是指當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)暴露給熱 機(jī)應(yīng)力和/或與不穩(wěn)定界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用時(shí)，蛋白質(zhì)不形成生 物失活和/或不溶性蛋白質(zhì)聚集體的趨勢(shì)。可通過目測(cè)、本文其它地方所述的ThT原纖維 形成測(cè)定和/或濁度測(cè)定，評(píng)價(jià)含水蛋白質(zhì)制劑的物理穩(wěn)定性。本文所用的術(shù)語“人胰島淀粉樣多肽”是指具有SEQ ID NO 17所示序列的人胰 島淀粉樣多肽。該術(shù)語包括但不限于一種來自胰臟0細(xì)胞的37個(gè)氨基酸的人肽激素，稱 為amylin (胰島淀粉樣多肽)，與胰島素共分泌。人胰島淀粉樣多肽具有下列氨基酸序列 Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-S er-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO 17)。因此，結(jié)構(gòu)式為 Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-S er-Asn-Thr-Tyr-NH2 (SEQ ID NO 17)(如下所示)并具有位于2個(gè)Cys殘基之間的二硫橋 和C-端酰胺基團(tuán)。
人胰島淀粉樣多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已被其它氨基酸殘基獨(dú)立取代和/或其中人 胰島淀粉樣多肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已缺失和/或其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已添 加到人胰島淀粉樣多肽。一方面，取代或添加是用任何天然氨基酸。胰島淀粉樣多肽類似 物也包括在SEQ ID NO: 17中的至少一個(gè)或多個(gè)氨基酸位置上具有插入、缺失和/或取代的 胰島淀粉樣多肽。氨基酸插入、缺失或取代的數(shù)量可以是至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 或12個(gè)。插入或取代可以是用其它天然或非天然氨基酸、合成氨基酸、肽模擬物或其它化 合物。本文所用的術(shù)語“天然氨基酸”是選自以下的氨基酸(通常是括號(hào)中的3個(gè)字 母的代碼&1個(gè)字母的代碼)甘氨酸(Gly&G)、脯氨酸(Pro&P)、丙氨酸(Ala&A)、纈氨酸 (Val&V)、亮氨酸(Leu&L)、異亮氨酸(Ile&I)、甲硫氨酸(Met&M)、半胱氨酸(Cys&C)、苯丙 氨酸(Phe&F)、酪氨酸(Tyr&Y)、色氨酸(Trp&W)、組氨酸(His&H)、賴氨酸(Lys&K)、精氨酸 (Arg&R)、谷氨酰胺(Gln&Q)、天冬酰胺(Asn&N)、谷氨酸(Glu&E)、天冬氨酸(Asp&D)、絲氨酸 (Ser&S)和蘇氨酸(Thr&T)。如果因打字錯(cuò)誤，與常用代碼比有偏差，就采用常用代碼。本 發(fā)明胰島素中存在的氨基酸優(yōu)選是可由核酸編碼的氨基酸。在本發(fā)明的一個(gè)方面，氨基酸殘基的添加或缺失可在肽的N-端和/或肽的C-端 發(fā)生。一方面，氨基酸殘基的取代或添加包括谷氨酸殘基、賴氨酸殘基、精氨酸殘基、組 氨酸殘基和/或天冬氨酸殘基的取代和/或添加，從而得到與母體胰島淀粉樣多肽相比具 有0-8個(gè)額外電荷的胰島淀粉樣多肽類似物。又一方面，氨基酸殘基的取代或添加包括谷 氨酸殘基、精氨酸殘基和/或天冬氨酸殘基的取代和/或添加，從而得到與母體胰島淀粉樣 多肽相比具有0-8個(gè)額外電荷的胰島淀粉樣多肽類似物。還一方面，氨基酸殘基的取代或 添加包括谷氨酸殘基和/或精氨酸殘基(s)的取代和/或添加，從而得到與母體胰島淀粉 樣多肽相比具有0-8個(gè)額外電荷的胰島淀粉樣多肽類似物。再一方面，氨基酸殘基的取代 或添加包括谷氨酸殘基的取代和/或添加，從而得到與母體胰島淀粉樣多肽相比具有0-8 個(gè)額外電荷的胰島淀粉樣多肽類似物。人胰島淀粉樣多肽類似物一方面優(yōu)選具有30-45個(gè)天然存在或非天然存在的氨 基酸，優(yōu)選35-40個(gè)天然存在或非天然存在的氨基酸。本文所用的術(shù)語“衍生物”是指這樣的肽其中肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基已被修 飾，例如通過烷基化、?；Ⅴバ纬?、酰胺形成或通過馬來酰亞胺偶聯(lián)。本文所用的術(shù)語“人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物”或“胰島淀粉樣多肽衍 生物”是指人胰島淀粉樣多肽的衍生物或人胰島淀粉樣多肽類似物的衍生物。在本發(fā)明的又一方面，人胰島淀粉樣多肽類似物與人胰島淀粉樣多肽具有足夠的 同源性，使得它表現(xiàn)出人胰島淀粉樣多肽的至少70%體內(nèi)活性。本發(fā)明的衍生物能夠與以下受體結(jié)合或以別的方式直接或間接相互作用胰島淀 粉樣多肽受體，或者胰島淀粉樣多肽本身可與之相互作用而引起生物反應(yīng)(例如減少食物 攝取)的一種或多種其它受體。本發(fā)明的衍生物可與胰島淀粉樣多肽受體結(jié)合，其親和力 好于20nM、10nM或5nM，更優(yōu)選其親和力好于2nM、lnM、0. 5nM、0. 2nM或0. 10nM。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的衍生物可保留胰島淀粉樣多肽的生物活性的至少 約 25%、優(yōu)選約 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或 99%。另一方面，本發(fā)明的衍生物表現(xiàn)出改進(jìn)的生物活性。又一方面，本發(fā)明的衍生物表現(xiàn)出胰島淀粉樣多肽 的生物活性的至少約110%、125%、130%、140%、150%、200%或更高。術(shù)語“活性”一方面是指降低食欲和/或增加飽感的能力。在本發(fā)明的一個(gè)方面， 按照例如在標(biāo)題“測(cè)定”之下的藥理學(xué)測(cè)定I和II中所述，通過對(duì)降低食欲能力的測(cè)定而 測(cè)定活性。在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的衍生物相對(duì)于溶媒給予可表現(xiàn)出有能力減少累積 食物攝取量5%以上，優(yōu)選15%以上，更優(yōu)選25%以上，甚至更優(yōu)選35%以上或40%以上， 最優(yōu)選50%以上。本文所用的術(shù)語“作用時(shí)間”是指可測(cè)定藥理學(xué)效應(yīng)(例如食物攝取減少)的時(shí) 間跨度。在本發(fā)明的一個(gè)方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，胰島淀粉樣多肽衍生物在體外 和/或離體很少有可能形成原纖維?？稍诶缧g(shù)語“物理穩(wěn)定性”定義之下所述的硫黃素 T試驗(yàn)(Thioflavin T test)中，對(duì)原纖維形成趨勢(shì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。一方面，與普蘭林肽相比，在類似條件下，本發(fā)明的胰島淀粉樣多肽衍生物具有 形成含a螺旋構(gòu)象的趨勢(shì)增加。通過在220nm處負(fù)性摩爾圓二色信號(hào)(negative molar circular dichroism signal)強(qiáng)度來評(píng)價(jià)a螺旋的含量，a螺旋的經(jīng)典CD光譜信號(hào)為 正峰約190nm，負(fù)峰約208nm。在本發(fā)明的一個(gè)方面，通過標(biāo)準(zhǔn)方法(例如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的ELISA)測(cè)定， 與普蘭林肽相比，胰島淀粉樣多肽衍生物的藥動(dòng)學(xué)特性延長。在本發(fā)明的另一方面，胰島淀 粉樣多肽衍生物的血漿丁/2為至少1小時(shí)。在本發(fā)明的另一方面，血漿P/2為至少1. 5小時(shí)。 在本發(fā)明的另一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿TY2.為至少2小時(shí)。在本發(fā)明的另一 方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿P/2為至少4小時(shí)。在本發(fā)明的另一方面，胰島淀粉樣 多肽衍生物的血漿TK為至少6小時(shí)。在本發(fā)明的另一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿 T!/2為至少8小時(shí)。在本發(fā)明的另一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿Tl/2為至少12小 時(shí)。在本發(fā)明的另一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿TY2為至少16小時(shí)。在本發(fā)明的 另一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的血漿TK為至少24小時(shí)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，胰島淀 粉樣多肽衍生物的血漿P/2為至少48小時(shí)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，胰島淀粉樣多肽衍生物 的血漿TA為至少96小時(shí)。在本發(fā)明的又一方面，人胰島淀粉樣多肽類似物具有修飾的人胰島淀粉樣多肽的 氨基酸序列，使得有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22個(gè)
氨基酸與人胰島淀粉樣多肽的相應(yīng)位置上的氨基酸不同。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包括22個(gè)或小于22個(gè)修 飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包括小于 21個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包 括小于20、小于19、小于18、小于17、小于16、小于15、小于15、小于13、小于12、小于11、小 于10個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物 包括小于9個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比， 類似物包括小于8個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽 相比，類似物包括小于7個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉
23樣多肽相比，類似物包括小于6個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面，與人胰 島淀粉樣多肽相比，類似物包括小于5個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一方面， 與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包括小于4個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的又一 方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包括小于3個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明 的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物包括小于2個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在 本發(fā)明的又一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，類似物僅包括1個(gè)修飾(取代、缺失、添加)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，人胰島淀粉樣多肽類似物具有修飾的人胰島淀粉樣多肽的 氨基酸序列，使得12個(gè)氨基酸殘基被取代或缺失。在本發(fā)明的一個(gè)方面，人胰島淀粉樣多肽類似物具有修飾的人胰島淀粉樣多肽的 氨基酸序列，使得12個(gè)氨基酸殘基被取代或缺失并且N-端延伸1-10個(gè)氨基酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)方面，人胰島淀粉樣多肽類似物具有修飾的人胰島淀粉樣多肽的 氨基酸序列，使得11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個(gè)氨基酸殘基被取代或缺失。在本發(fā)明的一個(gè)方面，人胰島淀粉樣多肽類似物具有修飾的人胰島淀粉樣多肽的 氨基酸序列，使得11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個(gè)氨基酸殘基被取代或缺失并且N-端延伸 1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基。在本發(fā)明的一個(gè)方面，修飾是取代。在本發(fā)明的一個(gè)方面，修飾是缺失。在本發(fā)明 的一個(gè)方面，修飾是添加。一方面，人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物在N-端延伸。又一方面，人胰島 淀粉樣多肽或其類似物的衍生物在N-端延伸，其中N-端延伸是由1-10個(gè)氨基酸、1-8個(gè) 氨基酸或1-6個(gè)氨基酸組成。又一方面，人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物在N-端延 伸，其中N-端延伸是由5個(gè)氨基酸、4個(gè)氨基酸、3個(gè)氨基酸、2個(gè)氨基酸或1個(gè)氨基酸組成。 又一方面，N-端延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭。一方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO. 17的人胰島淀粉樣多肽衍生物。另一方面，本發(fā)明涉及人胰島淀粉樣多肽類似物的衍生物。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-12個(gè)氨基酸 取代。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-6個(gè)氨基酸 取代。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-5個(gè)氨基酸 取代。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-4個(gè)氨基酸 取代。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-3個(gè)氨基酸 取代。在本發(fā)明的另一方面，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有1-2個(gè)氨基酸 取代。另一方面，本發(fā)明涉及人胰島淀粉樣多肽類似物的衍生物，所述衍生物依照本發(fā) 明被進(jìn)一步修飾，其中人胰島淀粉樣多肽類似物是25Pro 28Pro 29Pro人胰島淀粉樣多肽 (SEQ ID NO 1)
Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr (SEQ ID NO :1)。另一方面，本發(fā)明涉及衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基，任選通過接頭是通過賴 氨酸殘基的氨基連接的。另一方面，本發(fā)明涉及衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物，任選 通過接頭是通過賴氨酸殘基的a-氨基連接的。另一方面，本發(fā)明涉及衍生物，其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基通過接頭 連接。本文所用的術(shù)語“與...連接”是指通過化學(xué)鍵的化學(xué)連接。例如賴氨酸殘基與白 蛋白結(jié)合殘基通過化學(xué)鍵連接。作為實(shí)例，這樣的化學(xué)鍵可通過賴氨酸￡氨基的衍生化， 通過與白蛋白結(jié)合殘基例如長脂肪酸的活性酯?；玫健１景l(fā)明所用的連接兩個(gè)化學(xué)部分的其它實(shí)例包括但不限于烷基化、酯形成、酰胺 形成或馬來酰亞胺偶聯(lián)。本文所用的術(shù)語“白蛋白結(jié)合殘基，，是指在本發(fā)明一方面與人血清白蛋白非共價(jià) 結(jié)合的殘基。與治療性多肽連接的白蛋白結(jié)合殘基通常對(duì)人血清白蛋白的親和力(結(jié)合常 數(shù))小于10yM，優(yōu)選小于lyM。已知一系列白蛋白結(jié)合殘基是含有4-40個(gè)碳原子的線狀 和分枝的親脂部分、具有環(huán)戊并菲骨架的化合物、四唑、具有10-30個(gè)氨基酸殘基的肽等?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的若干方法測(cè)定白蛋白結(jié)合親和力。在一種方法中，待測(cè)衍生 物用例如1251或3H進(jìn)行放射性標(biāo)記并與固定化白蛋白一起孵育(Kurtzhals等，Biochem. J.，312，725-731 (1995))。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，求出衍生物的結(jié)合。在另一種方法中，相關(guān)化合物帶 上放射性標(biāo)記，再用系列稀釋的待測(cè)衍生物與所述化合物競爭性結(jié)合固定在例如SPA珠上 的白蛋白。競爭的EC50值就是衍生物親和力的度量。在第三種方法中，在不同濃度的白蛋 白中測(cè)定衍生物的受體親和力或效力，作為白蛋白濃度的函數(shù)，衍生物相對(duì)親和力或效力 的改變反映了其對(duì)白蛋白的親和力。在本發(fā)明的一個(gè)方面，白蛋白結(jié)合殘基包含可帶負(fù)電荷的基團(tuán)。本文所用的術(shù)語“Cm-烷基”是指具有1-6個(gè)碳原子的飽和支鏈、直鏈或環(huán)狀烴 基。代表性實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正 戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、正己基、異己基、環(huán)己烷等。本文所用的術(shù)語“接頭(linker) ”或“間隔基(spacer)，，(間隔基和接頭這兩個(gè)術(shù) 語在本說明書中可互換使用)是指將肽與白蛋白結(jié)合殘基或聚乙二醇聚合物間隔開的化 學(xué)部分。本文所用的術(shù)語“親水接頭”或“親水間隔基”是指以包含至少5個(gè)重原子的化學(xué) 部分使肽和白蛋白結(jié)合殘基間隔開的接頭/間隔基，其中這些重原子有30-50%是N或0。在本發(fā)明的一個(gè)方面，與母體胰島淀粉樣多肽相比，接頭包含一個(gè)或多個(gè)帶負(fù)電 荷的實(shí)體，以得到本發(fā)明的胰島淀粉樣多肽衍生物，其中0-8個(gè)額外電荷已添加到所述分 子上。在本發(fā)明的一個(gè)方面，接頭包含具有1-7個(gè)亞甲基，優(yōu)選2個(gè)亞甲基的非支鏈烷烴 a，二羧酸基團(tuán)，所述接頭形成介于肽的氨基與白蛋白結(jié)合殘基的氨基之間的橋。
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在本發(fā)明的另一方面，接頭包含一個(gè)或多個(gè)烷撐二醇單元，例如1-5個(gè)烷撐二醇 單元。烷撐二醇單元在又一方面是乙二醇、丙二醇或丁二醇，但也可為更高的烷撐二醇。在本發(fā)明的另一方面，接頭是選自以下的親水接頭- (CH2) xD [ (CH2) nE] m (CH2) p-Qq-，其中l(wèi)、m 和 n 獨(dú)立地為 l_20，p 為 0-10，Q 為-Z- (CH2) xD [ (CH2) nG] m (CH2) p-，Q為0-5的整數(shù)，每個(gè)D、每個(gè) E 和每個(gè) G 獨(dú)立選自-0-、-NR3-、-N(C0R4) _、_PR5 (0)-和 _P (OR6) (0)-， 其中R3、R5、R5和R6獨(dú)立地為氫或Cm-烷基， Z 選自-C (0) NH-、-C (0) NHCH2_、_0C (0) NH_、_C (0) NHCH2CH2-、_C (0) CH2_、_C (0) CH =CH-、- (CH2) s-、-C (0) -、-C (0) 0-或-NHC (0)-，其中 s 為 0 或 1。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中1為1或2，n和m獨(dú)立地 為 1-10，p 為 0-10。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中D為-0-。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中E為-0-。在本發(fā)明的又一方面，親水接頭是-CH20[(CH2)20]m(CH2)pQq-，其中m為1-10，p為 1-3，Q 為-Z-CH20[(CH2)20]m(CH2)p-，其中 Z 如上定義。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中q為1。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中G為-0-。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中Z選自-C(0)NH-、_C(0) NHCH2-和-oc (0) NH-。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中q為0。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中1為2。在本發(fā)明的另一方面，接頭是如上定義的親水接頭，其中n為2。在本發(fā)明的一個(gè)方面，使用了以化學(xué)部分使肽與白蛋白結(jié)合殘基間隔開的“親水 接頭” B。在本發(fā)明的一個(gè)方面，親水接頭B 為-C (0) - (CH2) fO- [ (CH2CH2_0] m_ (CH2) p- [NHC (0) - (CH2)「0- [ (CH2) n-0] m- (CH2) p] q-NH_，其中l(wèi)、m、n和p獨(dú)立地為1-5，q為0-5。在本發(fā)明的又一方面，親水接頭B為-C (0) -CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2 [NHC (0) -CH2-0_CH2CH20-CH2CH2] q-NH_，其中q 為 0_5。在本發(fā)明的又一方面，親水接頭B為-C (0) -CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-NHC (0) -CH2-0_CH2CH20-CH2CH2-NH-。在本發(fā)明的又一方面，親水接頭B為_[CH2CH20]m+1 (CH2)pQq-其中m和p獨(dú)立地為0-10，q為0-5和Q 為如上定義的 UOgiDKOgnGKOyp-。在本發(fā)明的又一方面，親水接頭B為- (CH2) f0- [ (CH2) n-0] m- (CH2) p- [C (0) NH- (CH2) r0- [ (CH2) n_0] m_ (CH2) p] q-，
其中l(wèi)、m、n和p獨(dú)立地為1-5，q為0-5。在本發(fā)明的又一方面，接頭包含除Cys之外的氨基酸殘基，或二肽(例如Gly-Lys、 Glu-Glu 或 Glu-Arg)或三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Glu 或 Glu-Glu-Arg)。合適PEG聚合物通常是市售的或可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的技術(shù)來制備。在本發(fā)明的一個(gè)方面，PEG聚合物的分子量大于700D，又一方面，分子量大于5kD， 還一方面，大于10kD，甚至又一方面，大于20kD。PEG聚合物可以是線狀或分枝的。當(dāng)PEG 聚合物大于20Kda時(shí)，PEG聚合物優(yōu)選具有分枝結(jié)構(gòu)，例如43kD分枝PEG-肽(Shearwater 2001，目錄號(hào) 2D3X0T01，mPEG2_MAL)?？赏ㄟ^將PEG連接在肽表面上與受體相互作用相反的一側(cè)，而完成PEG在完整肽 上的連接。在本發(fā)明的一個(gè)方面，PEG的連接可發(fā)生在人胰島淀粉樣多肽或其類似物的位置 2、3、4、5或6被賴氨酸殘基或半胱氨酸取代的氨基酸殘基上，任選通過接頭。在本發(fā)明的 又一方面，PEG的連接可發(fā)生在人胰島淀粉樣多肽或其類似物的位置23、24、25、26、27或28 被賴氨酸殘基或半胱氨酸取代的氨基酸殘基上，任選通過接頭。在本發(fā)明的還一方面，PEG 的連接可發(fā)生在人胰島淀粉樣多肽或其類似物的位置32、33、34、35、36或37被賴氨酸殘基 或半胱氨酸取代的氨基酸殘基上，任選通過接頭。有若干策略用于將PEG偶聯(lián)到肽上(參見例如Veronese，Biomaterials 22: 405-417,2001)，其全部內(nèi)容都通過引用結(jié)合到本文中。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠利用眾 所周知的技術(shù)，將PEG聚合物與本文所述的人胰島淀粉樣多肽或胰島淀粉樣多肽類似物連接。簡而言之，半胱氨酸PEG化是一種用于位點(diǎn)特異性PEG化的方法，可通過以下步驟 來完成在人胰島淀粉樣多肽或胰島淀粉樣多肽類似物的一個(gè)特定位置上引入獨(dú)特半胱氨 酸突變，然后使所得肽與半胱氨酸特異性PEG化試劑(例如PEG-馬來酰亞胺)反應(yīng)。有 必要使肽突變，以便允許位點(diǎn)特異性PEG化。例如，如果肽含有半胱氨酸殘基，這些殘基就 有必要用保守氨基酸取代，以確保位點(diǎn)特異性PEG化。另外，可將剛性接頭，包括但不限于 “GGS”、“GGSGGS”和“PPPS”，添加到其C端，但在PEG連接位點(diǎn)(即獨(dú)特半胱氨酸殘基)之
、r -刖。在本發(fā)明的一個(gè)方面，白蛋白結(jié)合殘基是親脂殘基。又一方面，親脂殘基通過綴合 化學(xué)(conjugation chemistry)(例如通過烷基化、?；?、酯形成或酰胺形成)，任選通過 接頭與賴氨酸殘基連接，或通過馬來酰亞胺偶聯(lián)與半胱氨酸殘基連接。在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基在生理pH時(shí)帶負(fù)電荷。在本發(fā)明的另一方 面，白蛋白結(jié)合殘基包含可帶負(fù)電荷的基團(tuán)。一個(gè)優(yōu)選的可帶負(fù)電荷的基團(tuán)是羧酸基團(tuán)。在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基與白蛋白非共價(jià)結(jié)合。在本發(fā)明的另一方 面，白蛋白結(jié)合殘基對(duì)人血清白蛋白的結(jié)合親和力好于約1(^11或好于約1111。在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基選自直鏈烷基、支鏈烷基、具有羧酸基 團(tuán)的基團(tuán)和部分或完全氫化環(huán)戊并菲骨架。在本發(fā)明的一個(gè)方面，白蛋白結(jié)合殘基包含四唑。一方面，白蛋白結(jié)合殘基為 (oy^-四唑基。一方面，白蛋白結(jié)合殘基為(CH2)15-四唑基。在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基是汽巴克隆基(cibacronyl)殘基。
在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基具有6-40個(gè)碳原子、8-26個(gè)碳原子或8_20 個(gè)碳原子。在本發(fā)明的又一方面，白蛋白結(jié)合殘基是選自CH3(CH2)X0-的酰基，其中r為 4-38 的整數(shù)，優(yōu)選為 4-24 的整數(shù)；更優(yōu)選選自 CH3(CH2)6C0-、CH3 (CH2) 8C0_、CH3 (CH2) 1(1C0_、
ch3 (ch2) 12co-、ch3 (ch2) 14co-、ch3 (ch2) 16co-、ch3 (ch2) 18co-、ch3 (ch2) 20co-和 ch3 (ch2) 22co-。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是直鏈或支鏈烷烴a，二羧酸的酰基。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是選自H00C(CH2)sC0-的?；渲衧 為4-38的整數(shù)，優(yōu)選為4-24的整數(shù)；更優(yōu)選包選自H00C (CH2) 14C0_、H00C (CH2) 16C0_、 H00C (CH2) 18C0-、H00C (CH2) 20C0-和 H00C (CH2) 22C0_。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是式CH3(CH2)vC0-NHCH(C00H) (CH2)2C0_的 基團(tuán)，其中v為10-24的整數(shù)。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是式CH3(CH2)wC0-NHCH((CH2)2C00H)C0-的 基團(tuán)，其中w為8-24的整數(shù)。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是式C00H(CH2)xC0-的基團(tuán)，其中x為8_24 的整數(shù)。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是式-NHCH(COOH) (CH2)4NH_C0(CH2)yCH3的 基團(tuán)，其中y為8-18的整數(shù)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是-C(0)-(CH2) !-0- [ (CH2CH2-0] m- (CH2) p- [NHC (0) - (CH2) f0- [ (CH2) n-0] m- (CH2) p] q-NH-w,其中l(wèi)、m、n和p獨(dú)立地為1-5，q為0-5，和W選自CH3 (CH2) 6C0-、CH3 (CH2) 8C0_、CH3 (CH2) 10C0_、CH3 (CH2) 12CO-、CH3 (CH2) 14CO-、 ch3 (ch2) 16co-、ch3 (ch2) 18co-、ch3 (ch2) 20co-、ch3 (ch2) 22co-、hooc (ch2) 14co-、hooc (ch2) 16co-、
H00C (CH2) 18C0-、HOOC (CH2) 20C0-和 HOOC (CH2) 22C0_。 在本發(fā)明的一個(gè)方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是-C (0) -CH2-0-CH2CH2-0-CH2 CH2 [NHC (0) -CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2] q-NH_Ac，其中q為0-5并且其中Ac為乙?；?。在本發(fā)明的另一方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是式-C (0) -CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-NHC (0) -CH2-0-CH2CH20_CH2CH2-NH-Ac 的基團(tuán)，其中 Ac為乙?；?。在本發(fā)明的另一方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是 其中B如上定義，Z、V、q和w如下定義。在本發(fā)明的另一方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是 其中Z 為 CH3 或 C00H，V 為 H 或 COOH，q 為 7-21，w 為 0-5，k 為 0-5，B 為 _C (0) - (CH2) !-0- [ (CH2CH2-0] m- (CH2) p- [NHC (0) - (CH2) fO- [ (CH2) n-0] m- (CH2) p] q-NH-，其中l(wèi)、m、n和p獨(dú)立地為1-5，q為0-5。在本發(fā)明的另一方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是 其中Z為CH3或C00H，V為H或C00H，q為7-21，w為0-5，k為0-5。在本發(fā)明的 另一方面，Z為CH3，V為C00H。在本發(fā)明的另一方面，V為H，Z為C00H。在本發(fā)明的另一 方面，V為H，Z為CH3。在本發(fā)明的另一方面，V和Z都為C00H。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，q為 13-19，更優(yōu)選q為13-15。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，k為1-4，更優(yōu)選1-2。在本發(fā)明的優(yōu)選方 面，w為1-4，更優(yōu)選1-2。在本發(fā)明的另一方面，結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基和接頭是 其中Z為CH3或C00H，q為7-21，k為0-5。在本發(fā)明的另一方面，Z為CH3。在本 發(fā)明的另一方面，Z為C00H。在本發(fā)明的優(yōu)選方面，q為13-19，更優(yōu)選q為13、14或15。在 本發(fā)明的優(yōu)選方面，k為1-4，更優(yōu)選為1或2。在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基是肽，例如包含小于40個(gè)氨基酸殘 基的肽。作為白蛋白結(jié)合殘基的大量小肽及其鑒定方法可參見J.Biol Chem. 277, 38 (2002)35035-35043o在本發(fā)明的另一方面，白蛋白結(jié)合殘基任選通過接頭是通過賴氨酸殘基的氨 基連接。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過接頭與母體 肽連接，所述接頭是除Cys之外的氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或 Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg 或 Glu-Glu-Glu)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中母體肽 的羧基與Lys殘基的氨基或含有Lys殘基的二肽、三肽、四肽或多肽的氨基形成酰胺鍵，并 且Lys殘基的其它氨基或含有Lys殘基的二肽、三肽或多肽的其它氨基與親脂殘基的羧基 形成酰胺鍵。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過接頭與母體 肽連接，所述接頭是除Cys之外的氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg 或 Glu-Glu-Glu)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中母體肽
的氨基與氨基酸殘基或二肽、三肽、四肽或多肽接頭的羧基形成酰胺鍵，并且氨基酸殘基或 二肽、三肽或多肽接頭的氨基與親脂殘基的羧基形成酰胺鍵。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過接頭與母體 肽連接，所述接頭是除Cys之外的氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或 Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg 或 Glu-Glu-Glu)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中母體肽 的羧基與氨基酸殘基接頭或二肽、三肽、四肽或多肽接頭的氨基形成酰胺鍵，而氨基酸殘基 接頭或二肽、三肽或多肽接頭的羧基與親脂殘基的氨基形成酰胺鍵。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過接頭與母體 肽連接，所述接頭是除Cys之外的氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或 Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg 或 Glu-Glu-Glu)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中母體肽 的羧基與Asp或Glu的接頭或含有Asp或Glu殘基的二肽、三肽、四肽或多肽接頭的氨基形 成酰胺鍵，而接頭的羧基與親脂殘基的氨基形成酰胺鍵。在本發(fā)明的一個(gè)方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的C-端可以以酸或酰胺來終止。在 一個(gè)優(yōu)選的方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的C-端是酰胺。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過含有賴氨酸殘 基的N-端延伸與母體肽連接，所述賴氨酸殘基是Lys，或是二肽(例如Gly-Lys)，或是三 肽(例如 Gly-Gly-Lys)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由在 N-端位置含有Lys的5-10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中Lys殘基或含有Lys殘基的二 肽、三肽、四肽或多肽的N-端Lys殘基的氨基與親脂殘基的羧基形成酰胺鍵。一方面，酰胺 鍵介于賴氨酸殘基的氨基與親脂殘基之間。一方面，酰胺鍵介于賴氨酸殘基的a-氨 基與親脂殘基之間。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過N-端延伸 與母體肽連接，所述N-端延伸是氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或 Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu, Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中所述 N-端延伸的N-端氨基酸的氨基與親脂殘基的羧基形成酰胺鍵。又一方面，本發(fā)明涉及胰島淀粉樣多肽衍生物，其中親脂殘基通過N-端延伸 與母體肽連接，所述N-端延伸是氨基酸殘基，或是二肽(例如Gly-Lys、Glu-Arg或 Glu-Glu)，或是三肽(例如 Gly-Gly-Lys、Glu-Glu-Arg)，或是四肽(例如 Glu-Glu-Glu, Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Arg-Glu-Glu)，或是由5_10個(gè)氨基酸組成的多肽，并且其中所述 N-端延伸的N-端氨基酸的羧基與親脂殘基的氨基形成酰胺鍵。在本發(fā)明的一個(gè)方面，胰島淀粉樣多肽衍生物的氨基酸序列選自KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 1)，KCKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 2)，KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY(SEQ ID No. 3)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 4)，KCNTATCATQRLANFLKHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 5)，KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 6)，KCNTATCATQRLANFLVRSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 7)，CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 8)，KCKTATCATQRLANFLVPSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 9)，KCNTATCATQRLANFLVRSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 10)，KCKTATCATQRLANFLVRSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 11)，KCGTATCATQRLANFLARSSNNFGPILSPTNVGSNTY(SEQ ID No. 12)，EERECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 13)，KCKTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 14)，ECKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 15)，EECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 16).KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY (SEQ ID No. 17，人胰島淀粉樣多肽).EERECQTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 19).EEEECQTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 20).CKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 21).CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 22).ECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 23).RCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 24).ERCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 25).RRCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 26).KKCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 27).RKCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 28).EKRKCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 29).EKRCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 30).EERECKTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 31).ECQTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No. 32)其中至少一個(gè)氨基酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。又一方面，胰島淀粉樣多肽衍生物中僅有1個(gè)賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連 接，任選通過接頭。在一個(gè)優(yōu)選方面，具有SEQ ID NO 1_16中任一氨基酸序列的胰島淀粉樣多肽衍生 物的C-端是酰胺。在本發(fā)明的又一方面，與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基選自
在本發(fā)明的一個(gè)方面，胰島淀粉樣多肽衍生物選自KCKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 2)，其中位置 3 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基或與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY(SEQ ID No 3)，其中位置 29 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基或與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 4)，其中位置 21 的賴氨酸殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCNTATCATQRLANFLKHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 5)，其中位置 17 的賴氨酸
殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 6)，其中位置 25 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCNTATCATQRLANFLVRSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 7)，其中位置 25 的賴氨酸
殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 CNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 8)，其中位置 1 的半胱氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基或與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接
和 KCKTATCATQRLANFLVPSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 9)，其中位置 3 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接
和 KCNTATCATQRLANFLVRSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 10)，其中位置 1 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基連接KCKTATCATQRLANFLVRSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 11)，其中位置 3 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基連接KCGTATCATQRLANFLARSSNNFGPILSPTNVGSNTY(SEQ ID No 12)，其中位置 3 的甘氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 EERECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 13)，其中位置 1 的谷
氨酸殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KCKTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 14)，其中位置 3 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 ECKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 15)，其中位置 3 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基連接 EECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 16)，其中位置 1 的谷氨
酸殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的白蛋白結(jié)合殘基連接 EERECQTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 19)或EEEECQTATCATQ RLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 20)，其中位置1的谷氨酸殘基和具有下式的白
蛋白結(jié)合殘基連接 CKTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 21)，其中位置 2 的賴氨酸
殘基和具有結(jié)構(gòu)式選自下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 CNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 22)，其中位置 1 的半胱氨
酸殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 ECNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 23)，其中位置 1 的谷氨酸
殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 RCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 24)，其中位置 1 的精氨酸
殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 ERCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 25)，其中位置 1 的谷氨
酸殘基和具有下式的白蛋白結(jié)合殘基連接 RRCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No 26)和RKCNTATCATQRLAN FLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY, (SEQ ID No 28)，其中位置1的精氨酸殘基和具有下式的與接
頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 KKCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPI LPPTNVGSNTY (SEQ ID No 27)，其中位置 1 的賴氨
酸殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 EKRKCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY (SEQ ID No 29)和EKRCNTATCATQR LANFLVHSSNNFGPI LPPTNVGSNTY (SEQ ID No 30)，其中位置1的谷氨酸殘基和具有下式的白
蛋白結(jié)合殘基連接 EERECKTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 31)，其中位置 3 的賴
氨酸殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接
和ECQTATCATQRLANFLVRSSQNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No 32)，其中位置 1 的谷氨酸
殘基和具有下式的與接頭結(jié)合的白蛋白結(jié)合殘基連接 本發(fā)明又一方面涉及一種用于延長人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的 作用時(shí)間的方法，所述方法的特征在于a)修飾位置1的氨基酸殘基，即通過用任何天然氨基酸任選取代，并通過將所述 天然氨基酸與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且進(jìn)一步a.將所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或b.修飾位置2-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代，并通過將所述賴氨酸 殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)修飾位置3的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘 基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，和任選修飾位置1的氨基酸，即通過用谷氨酰胺 殘基取代；或c)修飾位置17、21、25或29的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將 所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或d)修飾位置18的氨基酸殘基，即通過用精氨酸殘基取代，并且進(jìn)一步修飾位置 1-17或19-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋 白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；e)位置18的氨基酸是精氨酸，位置25、位置28和位置29的氨基酸都是脯氨酸， 并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白 蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，其中人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi) 的作用時(shí)間延長至超過約40小時(shí)。肽(例如人胰島淀粉樣多肽或其類似物)的產(chǎn)生是本領(lǐng)域眾所周知的。因此，可通 過傳統(tǒng)肽合成方法產(chǎn)生本發(fā)明的肽，所述方法例如固相肽合成，使用t-Boc或Fmoc化學(xué)或 其它熟知的技術(shù)，參見例如Greene 禾口 Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis，，， John ffiley&Sons,19990肽也可通過以下方法產(chǎn)生所述方法包括培養(yǎng)宿主細(xì)胞，所述宿 主細(xì)胞含有編碼多肽的DNA序列并能在合適營養(yǎng)培養(yǎng)基中、在允許表達(dá)肽的條件下表達(dá)多 肽。對(duì)于含有非天然氨基酸殘基的肽，應(yīng)當(dāng)對(duì)重組細(xì)胞進(jìn)行修飾，致使將非天然氨基酸摻入 肽中，例如通過使用tRNA突變體。藥物組合物可通過例如以下文獻(xiàn)所述的常規(guī)技術(shù)制備含有本發(fā)明衍生物的藥物組合物 Remington' s Pharmaceutical Sciences，1985或Remington :The Science and Practiceof Pharmacy, % 19 版，1995。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供包含本發(fā)明肽的藥物制劑。一方面，肽在制劑中的濃度 為約0. lmg/ml至約25mg/ml。另一方面，肽在制劑中的濃度為約lmg/ml至約10mg/ml。另一方面，制劑的pH為2.0-10.0。另一方面，制劑的pH為2.0-7. 0。還一方面，制劑的pH為2. 5-4. 5。還一方面，制劑的pH為2.5-4. 0。制劑還可包含緩沖系統(tǒng)、防腐劑、等滲劑、螯合劑、穩(wěn)定劑和/或表面活性劑。這些 賦形劑在藥物組合物中的用途是技術(shù)人員眾所周知的。為了方便起見，可參見Remington The Science and Practice ofPharmacy,% 19 版，1995。在本發(fā)明的一個(gè)方面，藥物制劑是含水制劑，即制劑含水。這樣的制劑通常是溶液 劑或混懸劑。在本發(fā)明的又一方面，藥物制劑是含水溶液劑。術(shù)語“含水制劑”定義為包含 至少50% (重量)水的制劑。同樣，術(shù)語“含水溶液劑”定義為包含至少50% (重量)水 的溶液劑，術(shù)語“含水混懸劑”定義為包含至少50% (重量)水的混懸劑。另一方面，藥物制劑是凍干制劑，在臨用前由醫(yī)師或患者向其中加入溶劑和/或 稀釋劑。另一方面，藥物制劑是干燥制劑(例如凍干或噴霧干燥)，無需任何預(yù)先溶解就可 使用。在本發(fā)明的又一方面，緩沖劑選自乙酸鈉、碳酸鈉、檸檬酸(鹽/酯)、甘氨酰甘氨 酸、組氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉和三(羥甲基)_氨基 甲烷、N-二(羥乙基)甘氨酸(biCine)、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(tricine)、蘋果 酸、琥珀酸(鹽/酯)、馬來酸、富馬酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。這些具體緩沖劑的每 一種都構(gòu)成本發(fā)明的替代方面。在本發(fā)明的又一方面，制劑還包含藥學(xué)上可接受的防腐劑。在本發(fā)明的又一方面， 制劑還包含等滲劑。在本發(fā)明的又一方面，制劑還包含螯合劑。在本發(fā)明的又一方面，制劑還包含穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑在藥物組合物中的用途是技 術(shù)人員眾所周知的。為了方便起見，可參見Remington :The Science and Practice of Pharmacy,% 19 片反，1995。更具體地講，本發(fā)明的組合物是穩(wěn)定的液體藥物組合物，其治療活性成分包含在 液體藥物制劑貯存期間可有可能出現(xiàn)聚集體形成的多肽?！熬奂w形成”是指多肽分子間 的物理相互作用，導(dǎo)致寡聚物的形成，其可保持可溶性，或是從溶液中沉淀的可見的大聚集 體?！百A存期間”是指液體藥物組合物或制劑一旦制備之后，并未立即用于患者。而是在制 備后，以液體形式、冷凍狀態(tài)或干燥形式包裝并貯存，用于以后重配成適于給予患者的液體 形式或其它形式?！案稍镄问健笔侵父稍锏囊后w藥物組合物或制劑，即通過凍干(即冷凍干燥；參見 例如 Williams 和 Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38 48-59)、噴霧干燥(參見 Masters (1991) in Spray-Drying Handbook(^15 ；Longman Scientific and Technical, Essez，U. K.)，第 491-676 頁；Broadhead 等(1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18 :1169_1206 ； 和 Mumenthaler 等(1994)Pharm. Res. 11 :12-20)、或風(fēng)干(Carpenter 和 Crowe(1988)Cryobiology 25 :459_470 ；和 Roser (1991) Biopharm. 4 :47_53)。多肽在液體藥物組合物 貯存期間形成聚集體，可對(duì)該多肽的生物活性造成不利影響，導(dǎo)致藥物組合物療效喪失。此 外，聚集體的形成可引起其它問題，例如當(dāng)用輸注系統(tǒng)給予含多肽的藥物組合物時(shí)，會(huì)阻塞 導(dǎo)管、膜或泵。本發(fā)明的藥物組合物也可包含一定量的氨基酸基料(amino acidbase)，其足以減 少組合物貯存期間由多肽形成的聚集體?！鞍被峄稀笔侵高@樣的氨基酸或氨基酸組合 其中任何給定氨基酸以其游離堿形式或以其鹽形式存在。當(dāng)使用氨基酸組合時(shí)，所有氨基 酸都可以其游離堿形式存在，所有都可以其鹽形式存在，或者某一些以其游離堿形式存在， 而另一些以其鹽形式存在。一方面，用于制備本發(fā)明組合物的氨基酸是攜帶帶電荷側(cè)鏈的 那些，例如精氨酸、賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。特定氨基酸(例如甲硫氨酸、組氨酸、咪唑、 精氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、蘇氨酸及其混合物)的任何立體異構(gòu)體(即 L、D或其混合物)或這些立體異構(gòu)體的組合，都可存在于本發(fā)明的藥物組合物中，只要所述 特定氨基酸以其游離堿形式或其鹽形式存在。一方面，使用L-立體異構(gòu)體。本發(fā)明的組合 物也可與這些氨基酸的類似物一起配制?！鞍被犷愃莆铩笔侵柑烊淮嬖诘陌被岬难苌?物，其對(duì)減少本發(fā)明液體藥物組合物貯存期間由多肽引起的聚集體形成具有所需效果。合 適的精氨酸類似物包括例如氨基胍、鳥氨酸和N- —乙基L-精氨酸，合適的甲硫氨酸類似物 包括乙硫氨酸和丁硫氨酸，合適的半胱氨酸類似物包括S-甲基-L半胱氨酸。與其它氨基 酸一樣，氨基酸類似物以其游離堿形式或其鹽形式摻入到組合物中。在本發(fā)明的又一方面， 氨基酸或氨基酸類似物的使用濃度足以阻止或延遲蛋白質(zhì)的聚集。藥物組合物也可包含額外的穩(wěn)定劑，其可進(jìn)一步增強(qiáng)其中的治療活性多肽的穩(wěn) 定性。穩(wěn)定劑在藥物組合物中的用途是技術(shù)人員眾所周知的。為了方便起見，可參見 Remington :The Science and Practice ofPharmacy，第 19 片反，1995。在本發(fā)明的又一方面，制劑還包含表面活性劑。在本發(fā)明的又一方面，制劑還包含 蛋白酶抑制劑。為了抑制自動(dòng)催化，蛋白酶抑制劑的使用在含有蛋白酶的酶原的藥物組合 物中尤其有用。在本發(fā)明的肽藥物制劑中也可含有其它成分。這類額外成分可包含潤濕劑、乳化 劑、抗氧化劑、填充劑、張力調(diào)節(jié)劑、螯合劑、金屬離子、油性溶媒、蛋白質(zhì)(例如人血清白蛋 白、明膠或蛋白)和兩性離子(例如氨基酸，例如甜菜堿、?；撬?、精氨酸、甘氨酸、賴氨酸和 組氨酸)。這類額外成分當(dāng)然不應(yīng)對(duì)本發(fā)明藥物制劑的總體穩(wěn)定性具有不利影響?？蓪⒑斜景l(fā)明人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的藥物組合物在若干部 位給予需要這類治療的患者，例如在局部(例如皮膚和粘膜部位)、在旁路吸收部位(例如 在動(dòng)脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、心臟內(nèi)給藥)和在相關(guān)吸收部位(例如在皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)或腹腔內(nèi)給 藥)。本發(fā)明藥物組合物的給予可通過若干給藥途徑給予需要所述治療的患者，所述途 徑例如舌、舌下、含服、口腔、口服、胃腸內(nèi)、鼻腔、肺部(例如通過細(xì)支氣管和肺泡或其組 合)、上皮、真皮、經(jīng)皮、陰道、直腸、眼內(nèi)(例如通過結(jié)膜)、輸尿管和胃腸外。本發(fā)明的組合物可以若干劑型給予，例如溶液劑、混懸劑、乳劑、微型乳劑、復(fù)合乳 齊U、泡沫劑、油膏劑、貼劑、硬膏劑、軟膏劑、片劑、包衣片劑、沖洗劑(rinses)、膠囊劑(例如 硬質(zhì)明膠膠囊劑和軟質(zhì)明膠膠囊劑)、栓劑、直腸膠囊劑、滴劑、凝膠劑、噴霧劑、粉劑、氣溶膠、吸入劑、滴眼劑、眼用軟膏劑、眼用沖洗劑、陰道栓劑、陰道環(huán)、陰道軟膏劑、注射用溶液 劑、原位轉(zhuǎn)化溶液劑(例如原位膠凝、原位固化(in situ setting)、原位沉淀、原位結(jié)晶)、 輸注用溶液劑和植入物。本發(fā)明的組合物也可通過共價(jià)、疏水和靜電相互作用，與藥物載體、遞藥系統(tǒng)和高 級(jí)遞藥系統(tǒng)(advanced drug delivery system)合用或與之連接，從而進(jìn)一步增強(qiáng)人胰島 淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的穩(wěn)定性，增加生物利用度，增加溶解度，降低不良反應(yīng)， 達(dá)到本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的長期治療，并增加患者順從性或其任何組合。本發(fā)明的組合物可呈固體制劑、半固體制劑、粉劑和溶液劑形式，用于肺部給予人 胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，使用例如計(jì)量吸入器、干粉吸入器和噴霧器，所有這 些裝置都是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。本發(fā)明的組合物可用于控釋(controlledrelease)、緩釋(sustainedrelease)、 延釋(protracting release)、阻釋(retarded release)禾口慢釋放(slowrelease)藥物遞 送系統(tǒng)的制劑。胃腸外給藥可用注射器、任選筆型注射器(pen-like syringe)，通過皮下、肌內(nèi)、 腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射來完成。或者，胃腸外給藥通過輸注泵來完成。一個(gè)進(jìn)一步的選項(xiàng)是 組合物，其可以是溶液劑或混懸劑，用于以鼻腔或肺部噴霧形式給予人胰島淀粉樣多肽或 其類似物的衍生物。一個(gè)更進(jìn)一步的選項(xiàng)是，含有本發(fā)明的人胰島淀粉樣多肽或其類似物 的衍生物的藥物組合物也可用于經(jīng)皮給藥，例如通過無針頭注射或貼劑(任選離子電滲貼 劑)，或用于經(jīng)粘膜給藥(例如含服)。人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物可通過肺部途徑、在溶媒中作為溶液劑、 混懸劑或干粉劑給予，使用任何適于肺部遞藥的已知類型的裝置。這些裝置的實(shí)例包括 但不限于常見的3類用于肺部遞藥的氣溶膠發(fā)生裝置，可包括噴射或超聲噴霧器、計(jì)量吸 入器或干粉吸入器(參見 Yu J, Chien YW. Pulmonary drug delivery physiologic 和 mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14 (4) (1997)395-453)。術(shù)語“穩(wěn)定制劑”是指與肽的水溶液相比，其物理穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性或理化穩(wěn)定 性有所增加的制劑。對(duì)于蛋白質(zhì)制劑或藥物制劑而言，本文所用的術(shù)語“物理穩(wěn)定性”是指當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)暴 露給熱機(jī)應(yīng)力和/或與不穩(wěn)定界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用時(shí)，蛋白質(zhì)不 形成生物失活和/或不溶性蛋白質(zhì)聚集體的趨勢(shì)。在將裝入合適容器(例如藥筒或小瓶) 的含水蛋白質(zhì)制劑以不同溫度和不同時(shí)間周期暴露給機(jī)械/物理應(yīng)力(例如攪拌)之后， 可通過目測(cè)和/或濁度測(cè)定，評(píng)價(jià)所述制劑的物理穩(wěn)定性。在黑暗背景下，在強(qiáng)烈聚焦光線 中進(jìn)行制劑的目測(cè)。制劑濁度的特征在于濁度的目測(cè)評(píng)分等級(jí)，例如評(píng)分為0-3 (無濁度制 劑對(duì)應(yīng)的目測(cè)評(píng)分為0，而在日光下具有目測(cè)濁度的制劑對(duì)應(yīng)的目測(cè)評(píng)分為3)。當(dāng)制劑在 日光下具有目測(cè)濁度時(shí)，對(duì)于蛋白質(zhì)聚集而言，就認(rèn)為制劑是物理不穩(wěn)定的?；蛘撸赏ㄟ^ 技術(shù)人員熟知的簡單的濁度測(cè)定來評(píng)價(jià)制劑濁度。也可通過使用蛋白質(zhì)構(gòu)象狀態(tài)的光譜試 劑或探針來評(píng)價(jià)含水蛋白質(zhì)制劑的物理穩(wěn)定性。探針優(yōu)選是優(yōu)先與蛋白質(zhì)的非天然構(gòu)象異 構(gòu)體結(jié)合的小分子。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的小分子光譜探針的一個(gè)實(shí)例是硫黃素T。硫黃素T是一 種熒光染料，已廣泛用于檢測(cè)淀粉樣蛋白原纖維(amyloid fibril)。在原纖維的存在下和 或許還存在其它蛋白質(zhì)構(gòu)型的情況下，硫黃素T引起最大值在約450nm處的新激發(fā)光并增強(qiáng)了在約482nm處的發(fā)射光，當(dāng)與原纖維蛋白形式結(jié)合時(shí)。未結(jié)合的硫黃素T在這樣的波 長下基本上無熒光。其它小分子可用作蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)從天然狀態(tài)向非天然狀態(tài)轉(zhuǎn)變的探針。例如優(yōu)先與 暴露的蛋白質(zhì)的疏水部分(hydrophobic patch)結(jié)合的“疏水部分”探針。在蛋白質(zhì)天然 狀態(tài)下，疏水部分通常都掩埋在蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi)，但當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)開始解折疊或變性時(shí)，就會(huì) 暴露出來。這些小分子光譜探針的實(shí)例是芳族疏水染料，例如蒽(antrhacene)、吖啶、菲咯 啉等。其它光譜探針是金屬_氨基酸絡(luò)合物，例如疏水氨基酸的金屬鈷絡(luò)合物，所述疏水氨 基酸例如苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸和纈氨酸等。對(duì)于蛋白質(zhì)制劑或藥物制劑，本文所用的術(shù)語“化學(xué)穩(wěn)定性”是指在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 中沒有化學(xué)共價(jià)變化，因此，與天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相比，不會(huì)導(dǎo)致潛在的生物學(xué)效力降低和或 潛在的免疫原性增加的化學(xué)降解產(chǎn)物的形成。根據(jù)天然蛋白質(zhì)的種類和特性的不同以及 蛋白質(zhì)所接觸的環(huán)境的不同，可形成各種化學(xué)降解產(chǎn)物。在本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的蛋 白質(zhì)制劑的貯存和使用期間，大多數(shù)情況下可能無法完全避免對(duì)化學(xué)降解的消除，經(jīng)?？?觀察到化學(xué)降解產(chǎn)物數(shù)量不斷增加。大部分蛋白質(zhì)都傾向于脫酰胺作用，該過程中谷氨 酰胺?；鶜埢蛱於０孵；鶜埢膫?cè)鏈酰胺基水解而形成游離羧酸。其它降解途徑包 括形成高分子量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其中兩個(gè)或兩個(gè)以上蛋白質(zhì)分子通過轉(zhuǎn)酰胺基作用和/或二 硫化物相互作用而彼此共價(jià)結(jié)合，導(dǎo)致形成共價(jià)結(jié)合的二聚體、寡聚體和多聚體降解產(chǎn)物 (Stability of Protein Pharmaceuticals,Ahern. T. J. Manning M. C. ,Plenum Press,New York 1992)?？商峒暗幕瘜W(xué)降解的另一種變異形式就是氧化(例如甲硫氨酸殘基的氧化)。 可通過在接觸不同環(huán)境條件之后的不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定化學(xué)降解產(chǎn)物的含量，來評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)制 劑的化學(xué)穩(wěn)定性(降解產(chǎn)物通常因例如增加溫度而加速形成)。通常按照分子大小和/或 電荷，使用不同的色譜技術(shù)(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)來分離每種降解產(chǎn)物并測(cè)定 其含量。在本發(fā)明的一個(gè)方面，包含人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的藥物制劑在 超過6周使用和超過3年貯存后保持穩(wěn)定。在本發(fā)明的另一方面，包含人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的藥物制劑在 超過4周使用和超過3年貯存后保持穩(wěn)定。在本發(fā)明的又一方面，包含人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的藥物制劑在 超過4周使用和超過兩年貯存后保持穩(wěn)定。在本發(fā)明的甚至又一方面，包含人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物的藥物制 劑在超過2周使用和超過兩年貯存后保持穩(wěn)定。另一方面，本發(fā)明涉及用作藥物的本發(fā)明衍生物。一方面，本發(fā)明的衍生物用于制備用于治療或預(yù)防以下疾病的藥物高血糖癥、2 型糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異常、認(rèn)知障礙、動(dòng) 脈粥樣硬化、心肌梗塞、中風(fēng)、冠心病和其它心血管疾病、炎癥性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍。另一方面，本發(fā)明的衍生物用作藥物，用于延遲或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn)程。另一方面，本發(fā)明的衍生物用作藥物，用于減少食物攝取，減少0 "細(xì)胞凋亡，增 加細(xì)胞功能和細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)細(xì)胞的葡萄糖敏感性。
在本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的衍生物用作藥物，用于治療或預(yù)防以下疾病高血 糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異常、認(rèn)知 障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合征、消化不 良和胃潰瘍；或用于延遲或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn)程；或用于減少食物攝取，減少0 _細(xì) 胞凋亡，增加細(xì)胞功能和細(xì)胞量，和/或用于恢復(fù)細(xì)胞的葡萄糖敏感性。在本發(fā)明的又一方面提供用于治療或預(yù)防高血糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量減 低、1型糖尿病、肥胖癥、高血壓、X綜合征、血脂異常、認(rèn)知障礙、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗塞、 冠心病和其它心血管疾病、中風(fēng)、炎癥性腸綜合征、消化不良和胃潰瘍的方法，或用于延遲 或阻止2型糖尿病的疾病進(jìn)程的方法，或用于減少食物攝取、減少0細(xì)胞凋亡、增加日細(xì) 胞功能和0細(xì)胞量和/或用于恢復(fù)0細(xì)胞的葡萄糖敏感性的方法；所述方法包括給予需 要所述治療的患者治療有效量的本發(fā)明衍生物。用本發(fā)明衍生物的治療也可與第二種或更多種例如選自以下的藥理學(xué)活性物質(zhì) 聯(lián)用抗糖尿病藥、抗肥胖癥藥、食欲調(diào)節(jié)藥、抗高血壓藥、用于治療和/或預(yù)防糖尿病所致 或相關(guān)并發(fā)癥的藥物、以及用于治療和/或預(yù)防肥胖癥所致或相關(guān)并發(fā)癥和疾病的藥物。 這些藥理學(xué)活性物質(zhì)的實(shí)例是胰島素、磺酰脲、雙胍、美格列奈、葡糖苷酶抑制劑、高血糖 素拮抗劑、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制劑、參與刺激糖原異生和/或糖原分解的肝酶的抑 制劑、葡萄糖攝取調(diào)節(jié)劑、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的化合物例如抗高血脂藥例如HMG CoA抑制劑(他 汀類)、減少食物攝取的化合物、RXR激動(dòng)劑和作用于0細(xì)胞ATP依賴性鉀通道的藥物；考 來烯胺、考來替泊、氯貝丁酯、吉非貝齊、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普羅布考、右甲狀 腺素、內(nèi)他列奈(neteglinide)、瑞格列奈邛-阻滯藥類(例如阿普洛爾、阿替洛爾、噻嗎洛 爾、吲哚洛爾、普萘洛爾和美托洛爾)、ACE (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶)抑制劑(例如貝那普利、卡 托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、alatriopril、喹那普利和雷米普利)、鈣通道阻滯 藥類(例如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地爾硫,草和維拉帕米)以 及a-阻滯藥類(例如多沙唑嗪、烏拉地爾、哌唑嗪和特拉唑嗪；CART(可卡因苯丙胺調(diào)節(jié) 的轉(zhuǎn)錄物)激動(dòng)劑、NPY(神經(jīng)肽Y)拮抗劑、MC4(黑皮質(zhì)素4)激動(dòng)劑、食欲肽(orexin)拮 抗劑、TNF(腫瘤壞死因子)激動(dòng)劑、CRF(促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子)激動(dòng)劑、CRF BP(促 腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子結(jié)合蛋白)拮抗劑、尿皮質(zhì)素(urocortin)激動(dòng)劑、0 3激動(dòng)劑、 MSH(促黑素細(xì)胞激素)激動(dòng)劑、MCH(黑素細(xì)胞濃縮激素)拮抗劑、CCK (縮膽囊素)激動(dòng)劑、 5-羥色胺重?cái)z取抑制劑、5-羥色胺和去甲腎上腺素重?cái)z取抑制劑、混合5-羥色胺和去甲腎 上腺素能化合物、5HT(5-羥色胺)激動(dòng)劑、鈴蟾肽激動(dòng)劑、甘丙肽拮抗劑、生長激素、生長激 素釋放化合物、TRH(促甲狀腺素(thyreotropin)釋放激素)激動(dòng)劑、UCP 2或3(解偶聯(lián)蛋 白2或3)調(diào)節(jié)劑、瘦蛋白激動(dòng)劑、DA激動(dòng)劑(溴隱亭(bromocriptin)、doprexin)、脂肪酶 /淀粉酶抑制劑、RXR (類視黃醇X受體)調(diào)節(jié)劑、TR 0激動(dòng)劑；組胺H3拮抗劑、胃泌素和 胃泌素類似物。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明衍生物與一個(gè)或多個(gè)上述化合物和任選一個(gè)或多個(gè)另外的藥理 學(xué)活性物質(zhì)的任何合適組合都被認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本文所引用的所有參考文獻(xiàn)，包括出版物、專利申請(qǐng)和專利都通過引用其全部結(jié) 合到本文中，其程度如同每篇參考文獻(xiàn)單獨(dú)而具體指明通過引用其全部結(jié)合并列舉在本文 中一樣(以法律所允許的最大程度)。
本文所采用的所有標(biāo)題和副標(biāo)題都僅為方便起見，不應(yīng)視為以任何方式限制本發(fā)明。本文所提供的任何和所有實(shí)施例或示例性語言(例如“例如”)的使用，都僅僅是 為了更好地說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明范圍的限制，除非另有說明。本說明書中的語 言都不應(yīng)視為意指任何未要求保護(hù)的要素是本發(fā)明實(shí)踐中必不可少的。本文對(duì)專利文件的引用和結(jié)合僅僅是為了方便起見，并不反映對(duì)這些專利文件的 有效性、專利性(patentability)和/或可實(shí)施性的任何觀點(diǎn)。按照可適用法律的許可，本發(fā)明包括對(duì)本文所附權(quán)利要求書所述主題的所有修改 和等同實(shí)施方案。測(cè)定藥理學(xué)測(cè)定(I)-用胰島淀粉樣多肽衍生物進(jìn)行對(duì)食欲的功效測(cè)試實(shí)驗(yàn)方案，使 用隨意飲食飼養(yǎng)的大鼠模型。用 Sprague Dawley(SD)大鼠(來自 Taconic Europe, Denmark)進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。實(shí) 驗(yàn)開始時(shí)，大鼠體重為200-250g。大鼠到貨至少10-14天后才開始實(shí)驗(yàn)，以便讓其適應(yīng)實(shí) 驗(yàn)設(shè)施。在此期間至少2次處理動(dòng)物。當(dāng)?shù)截洿笫髥为?dú)籠養(yǎng)1周后，以顛倒的光/暗周期 (是指白天無光照而夜晚有光照)籠養(yǎng)2周。既然大鼠在暗周期期間正?；顒?dòng)并吃掉它們 的每日食物攝取量的大部分，在關(guān)燈之前早晨給大鼠用藥。這種做法導(dǎo)致最低數(shù)據(jù)誤差和 最高試驗(yàn)靈敏度。實(shí)驗(yàn)在大鼠飼養(yǎng)籠(home cage)內(nèi)進(jìn)行，在整個(gè)適應(yīng)周期和實(shí)驗(yàn)周期中， 讓大鼠隨意進(jìn)食和飲水。每一劑量的衍生物都在一組5-8只大鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。每組試驗(yàn)都 包括6-8只大鼠的溶媒組。按照體重，通過腹膜內(nèi)(ip)、口服(po)或皮下(sc)給予大鼠一 次0.01-3mg/kg溶液劑。記錄每組的給藥時(shí)間。給藥后，把大鼠放回其飼養(yǎng)籠中，在此它們 可以隨意進(jìn)食和飲水。通過每小時(shí)一次的在線記錄或手工記錄，連續(xù)記錄每只動(dòng)物的食物 消耗達(dá)7小時(shí)，然后在24小時(shí)后和有時(shí)在48小時(shí)后進(jìn)行記錄。在實(shí)驗(yàn)期結(jié)束時(shí)，給動(dòng)物實(shí) 施安樂死。把各數(shù)據(jù)記錄在微軟excel表中。用Grubbs統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)異常值后，將其去掉， 結(jié)果用GraphPad Prism程序繪制圖表。藥理學(xué)測(cè)定(II)-用胰島淀粉樣多肽衍生物進(jìn)行對(duì)食欲的功效測(cè)試實(shí)驗(yàn)方案，使 用按時(shí)間表飼養(yǎng)的大鼠模型。M TAC :SPRDimol ；^鼠$ ffistar ( * 自 M&B Breeding andResearch Centre A/S,Denmark)進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，大鼠體重為200_250g。大鼠到貨至少10-14天后 才開始實(shí)驗(yàn)，體重為180-200g。每一劑量的衍生物都在一組6-8只大鼠中進(jìn)行試驗(yàn)。每組 試驗(yàn)都包括6-8只大鼠的溶媒組。當(dāng)動(dòng)物到貨后，將其單獨(dú)籠養(yǎng)。至少7天后才開始研究，開始訓(xùn)練其進(jìn)食時(shí)間表， 讓其在介于3-7小時(shí)的預(yù)定時(shí)間周期內(nèi)隨意進(jìn)食和飲水。在白天的剩余時(shí)間內(nèi)，大鼠將不 能隨意進(jìn)食，但僅可飲水。1周內(nèi)，大鼠將按照設(shè)定時(shí)間表吃掉完全每日定量。既然當(dāng)撤去 光照時(shí)大鼠正常地開始食物攝取并在夜晚吃掉它們的每日食物攝取量的大部分，這種做法 導(dǎo)致允許監(jiān)測(cè)白天的食物攝取，并且通常將會(huì)意味著與隨意飲食飼養(yǎng)的大鼠相比，溶媒組 誤差較少。在10-14天的適應(yīng)期期間，讓大鼠隨意進(jìn)食和飲水。在此期間，至少3次處理動(dòng) 物。實(shí)驗(yàn)在大鼠飼養(yǎng)籠中進(jìn)行。恰好在給藥之前，將大鼠按照體重隨機(jī)分配到不同治療組(n = 6-8)。在讓其隨意進(jìn)食前15-30分鐘，按照體重，通過腹膜內(nèi)(ip)、口服(po)或皮下 (sc)給予它們0.01-3mg/kg溶液劑。記錄每組的給藥時(shí)間。給藥后，把大鼠放回其飼養(yǎng)籠 中，在此它們可以隨意進(jìn)食和飲水。在時(shí)間表期間，通過每小時(shí)一次的在線記錄或手工記 錄，連續(xù)記錄每只動(dòng)物的食物消耗。在實(shí)驗(yàn)期結(jié)束時(shí)，給動(dòng)物實(shí)施安樂死。把各數(shù)據(jù)記錄在微軟excel表中。用Grubbs統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)異常值后，將其去掉， 結(jié)果用GraphPad Prism程序繪制圖表。螢光素酶測(cè)定法(II)1.胰島淀粉樣多肽測(cè)定法概要先前已報(bào)道(PoynerDR 等，2002，Pharmacological Reviews 54 (2) 233-246)，胰 島淀粉樣多肽所致的胰島淀粉樣多肽受體的活化(降鈣素受體和受體活性調(diào)節(jié)肽RAMP共 表達(dá))，導(dǎo)致cAMP胞內(nèi)濃度增加。因此，轉(zhuǎn)錄在含有多拷貝cAMP反應(yīng)元件(CRE)的啟動(dòng)子 下被激活。因此，通過使用CRE螢光素酶報(bào)道基因來測(cè)定胰島淀粉樣多肽活性是可行的，所 述CRE螢光素酶報(bào)道基因被引入到還表達(dá)胰島淀粉樣多肽受體的BHK細(xì)胞中。2.胰島淀粉樣多肽3(a)/CRE-luc細(xì)胞系的構(gòu)建用人降鈣素受體(CTa)和CRE-反應(yīng)性螢光素酶報(bào)道基因來穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BHK570細(xì)胞 系。采用標(biāo)準(zhǔn)方法，用RAMP-3進(jìn)一步轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系。這會(huì)使降鈣素受體轉(zhuǎn)變?yōu)橐葝u淀粉樣 多肽3(a)受體。甲氨蝶呤、新霉素和潮霉素分別是螢光素酶、降鈣素受體和RAMP-3的選擇 標(biāo)記。3.胰島淀粉樣多肽螢光素酶測(cè)定法為了進(jìn)行活性測(cè)定，將BHK胰島淀粉樣多肽3 (a) //CRE-luc細(xì)胞接種到白色96孔 培養(yǎng)板上，密度約為20，000個(gè)細(xì)胞/孔。這些細(xì)胞是在100 u 1生長培養(yǎng)基(含有以下成分 的DMEM :10%FBSU%青霉素/鏈霉素、ImM丙酮酸鈉、250nM甲氨蝶呤、500 u g/ml新霉素和 400 u g/ml潮霉素)中。在37°C和5% C02下孵育過夜之后，將生長培養(yǎng)基更換為50 u 1/孔 的測(cè)定培養(yǎng)基(DMEM(不含酚紅)、Glumamax 、10% FBS和10mM Hepes, pH 7,4) 此外，加 入溶于測(cè)定緩沖液中的50 u 1/孔的標(biāo)準(zhǔn)品或樣品。在37°C和5% C02下孵育4小時(shí)后，除 去標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的測(cè)定培養(yǎng)基并更換為10(^1/孔PBS。此外，加入10(^1/孔LucLite 。 將各板密封并在室溫下孵育30分鐘。最后，在TopCounter (Packard)上用SPC (單光子計(jì) 數(shù))模式測(cè)量發(fā)光。用于評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)制劑物理穩(wěn)定性的ThT原纖維形成測(cè)定的概論肽的物理穩(wěn)定性低下可導(dǎo)致形成淀粉樣蛋白原纖維，在樣品中觀察到這樣的原纖 維是井然有序的線狀大分子結(jié)構(gòu)，并最終導(dǎo)致凝膠的形成。通常通過目測(cè)樣品而對(duì)其進(jìn)行 測(cè)定。然而，這類測(cè)定是非常主觀的，取決于觀察者。因此，使用小分子指示探針要有利得 多。硫黃素T(ThT)就是這樣一種探針，當(dāng)與原纖維結(jié)合時(shí)具有明顯的熒光信號(hào)[Naiki等 (1989)Anal. Biochem. 177，244—249 ；LeVine (1999)Methods. Enzymol. 309，274-284]。用具有下列表達(dá)式的S形曲線可描述原纖維形成的時(shí)程[Nielsen等(2001) Biochemistry 40,6036-6046] 式中，F(xiàn)是在時(shí)間t的ThT熒光。常數(shù)、是達(dá)到最大熒光的50%所需要的時(shí)間。 肽的部分折疊中間體的形成被認(rèn)為是原纖維形成的常見起始機(jī)制。這些中間體中 的少數(shù)成核而形成模板，而更多中間體可裝配在其上并且原纖維形成繼續(xù)進(jìn)行。滯后時(shí)間 相當(dāng)于建立臨界量的核的間隔時(shí)間，而表觀速率常數(shù)則是原纖維本身形成的速率。樣品制備每次測(cè)定之前都要新制備樣品。各實(shí)施例中都描述了每種樣品的組成。樣品的pH 用適量的濃NaOH和HC104或HC1調(diào)節(jié)至期望值。將溶于水的硫黃素T貯液加入到樣品中，終濃度為lyM。取200 ill的等分樣品放入96孔微量板(Packard 0ptiPlate -96,白色聚苯乙 烯)。通常，將各樣品一式4份或8份(對(duì)應(yīng)于一種試驗(yàn)條件)放入一列孔中。該板用Scotch Pad (Qiagen)密封。孵育和熒光檢測(cè)在給定溫度下孵育，振搖并在Fluoroskan Ascent FL熒光讀板器或Varioskan讀 板器(Thermo Labsystems)中對(duì)ThT熒光發(fā)射進(jìn)行測(cè)定。溫度調(diào)節(jié)至37°C。在所有給出數(shù) 據(jù)中，定軌振搖都調(diào)節(jié)至960rpm，振幅為1mm。使用通過444nm濾色片的激發(fā)光并測(cè)定通過 485nm濾色片的發(fā)射光，進(jìn)行熒光測(cè)定。每輪一開始都是在測(cè)定溫度下孵育該板長達(dá)10分鐘。在所需時(shí)間周期，每隔20 分鐘測(cè)量該板一次。每次測(cè)量之間，按照所述，將該板振搖和加熱。數(shù)據(jù)處理將測(cè)量點(diǎn)數(shù)據(jù)保存在微軟Excel格式中，用于進(jìn)一步處理，并用GraphPad Prism 進(jìn)行繪制曲線和擬合。在原纖維不存在時(shí)，來自ThT的背景發(fā)射光可忽略不計(jì)。數(shù)據(jù)點(diǎn)通 常是4份或8份樣品的平均值并給出標(biāo)準(zhǔn)偏差誤差棒(standard deviation error bar) 0 只有同一實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)(即在同一板上的樣品)才顯示在同一圖表中，以確保各實(shí)驗(yàn)間原 纖維形成的相對(duì)度量。數(shù)據(jù)集可擬合到等式(1)。然而，因?yàn)樵谶@種情況下，在測(cè)量期間并非總能達(dá)到完 全S曲線，所以原纖維形成的程度表示為按照不同時(shí)間點(diǎn)的樣品平均值的ThT熒光表并給 出標(biāo)準(zhǔn)偏差。
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說明書
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描述原纖維形成的兩個(gè)重要參數(shù)是用、_2 X計(jì)算出的滯后時(shí)間和表觀速率常數(shù)1^_ = 1/
T o
rrift
r
_/ kapp = 1/T
49實(shí)施例按照下述肽合成法，制備出實(shí)施例1-51的化合物一種肽合成方法是通過在基于微波的Liberty肽合成儀(CEMCorp.，North Carolina)的Fmoc化學(xué)。樹脂是Tentagel S RAM，裝載量為0. 25mmol/g。偶聯(lián)化學(xué)是溶于 NMP的DIC/HOAt，使用溶于NMP的0. 3M氨基酸溶液并且摩爾過量6_8倍。偶聯(lián)條件是5分 鐘，可達(dá)70°C。脫保護(hù)是用溶于NMP的5%哌啶，可達(dá)70°C。所用的被保護(hù)氨基酸是0. 3M 標(biāo)準(zhǔn)Fmoc-氨基酸(由例如Anaspec或Novabiochem供應(yīng))，其溶于含有0. 3M HOAt的NMP。另一種肽合成方法是在Applied Biosystems 433肽合成儀上，以0. 25mmol或 1. Ommol規(guī)模，使用制造商供應(yīng)的FastMoc UV方案，該方案使用HBTU (六氟磷酸2_(1H_苯 并三唑-1-基-)-1，1，3，3四甲基脲鐺)或HATU (六氟磷酸0- (7-氮雜苯并三唑基)_1， 1，3，3-四甲基脲鐺)在NMP中介導(dǎo)偶聯(lián)，并用UV監(jiān)測(cè)Fmoc保護(hù)基的脫保護(hù)。用于肽的酰 胺合成的起始樹脂是Rink-Amide樹脂。所用的被保護(hù)的氨基酸衍生物是標(biāo)準(zhǔn)Fmoc-氨基 酸(由例如Anaspec或Novabiochem供應(yīng))，用于適用于ABI433A合成儀的預(yù)稱重柱。當(dāng)需要賴氨酸側(cè)鏈的化學(xué)修飾時(shí)，將賴氨酸摻入作為Lys(Mtt)，N-端氨基酸也摻 入到序列中，作為Boc-氨基酸，或者，如果摻入N-端氨基酸作為Fmoc-氨基酸，則除去Fmoc 基團(tuán)并且N-端通過用6當(dāng)量Boc-碳酸酯和6當(dāng)量DIPEA/NMP處理30分鐘而受到保護(hù)。 樹脂用NMP和DCM洗滌，通過將樹脂懸浮在純凈六氟異丙醇中達(dá)20分鐘，再用DCM和NMP 洗滌而除去Mtt基團(tuán)。通過采用肽合成所用的相同方法，即通過在Liberty或ABI 433上 的一個(gè)或多個(gè)自動(dòng)化步驟或通過在室溫下的一個(gè)或多個(gè)手工偶聯(lián)步驟，添加一個(gè)或多個(gè)下 述構(gòu)建模塊(building block)而進(jìn)行賴氨酸的化學(xué)修飾。合成之后，樹脂用DCM洗滌并干 燥，然后用TFA/TIPS/水(92. 5/5/2. 5)處理2小時(shí)，再通過用4倍體積二乙醚沉淀，將肽從 樹脂上裂解下來。進(jìn)一步用二乙醚洗滌并干燥之后，將肽重新溶于水中，濃度為l_2mg/ml， 將pH調(diào)節(jié)至約4. 5，再通過用1.1當(dāng)量[Pt(IV)l，2-乙二胺2C12]C12處理過夜而形成二硫 橋。或者，通過用10當(dāng)量的碘/NMP處理1小時(shí)，在樹脂上形成二硫橋。在此情況下，在裂 解和乙醚沉淀之后，直接純化粗制肽。純化粗制肽通過半制備型HPLC，在裝有5 y或7 ii C_18硅膠的20mmX250mm柱上 進(jìn)行純化。將肽溶液泵至HPLC柱上，并將沉淀的肽溶于5ml 50%乙酸H20中并用水稀釋至 20ml，注入柱中，然后在50分鐘內(nèi)，在40°C用40-60% CH3CN/0. 1 % TFA梯度洗脫，流速為 lOml/min。收集含有肽的流分。用水稀釋洗脫液之后，將純化的肽凍干。為了分析HPLC-流分和終產(chǎn)物，用214nm紫外檢測(cè)和例如Vydac218TP54 4. 6mmx250mm 5 u C-18 硅膠柱(The S印arations Group, Hesperia, USA)并在 42°C，按照 例如lml/min的流速洗脫，進(jìn)行了 RP-HPLC分析。通常使用下列4種不同洗脫條件中的1 種A1 用含有0. 1M(NH4)2S04的緩沖液(其用濃H2S04調(diào)節(jié)至pH 2. 5)平衡柱子并在 50分鐘內(nèi)，用溶于同一緩沖液的— 60% CH3CN梯度洗脫。B1 用 0. 1 % TFA/H20平衡柱子并在 50 分鐘內(nèi)，用 0% CH3CN/0. 1 % TFA/H20 — 60% CH3CN/0. 1% TFA/H20 梯度洗脫。B6 用 0. 1 % TFA/H20平衡柱子并在 50 分鐘內(nèi)，用 0% CH3CN/0. 1 % TFA/H20 — 90%CH3CN/0. 1% TFA/H20 梯度洗脫?；蛘?，用214nm 紫夕卜檢測(cè)和 Symmetry300, 3. 6mmx 150mm, 3. 5 u C-18 硅膠柱 (Waters)并在42°C，按照lml/min的流速洗脫，進(jìn)行了 RP-HPLC分析。B4 用 0. 05 % TFA/H20 平衡柱子并在 15 分鐘內(nèi)，用 5% CH3CN/0. 05 % TFA/ H20 — 95% CH3CN/0. 05% TFA/H20 梯度洗脫。肽的結(jié)構(gòu)特征通過MALDI-MS在Bruker Microflex上予以證實(shí)。所用縮略語HBTU 六氟磷酸2-(lH_苯并三唑-1-基_) -1，1，3，3四甲基脲鐺
Fmoc :9H-芴_9_基甲氧基羰基Boc 叔丁氧基羰基Mtt 4-甲基三苯甲基DCM: 二氯甲烷TIPS 三異丙基硅烷TFA:三氟乙酸NMP 1-甲基-吡咯烷-2-酮HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑DIC 二異丙基碳二亞胺Trt:三苯基甲基按照上述方法，用下列構(gòu)建模塊和下列序列，制備實(shí)施例1-51的化合物
實(shí)施例1力-0-(17-羧基庚?；?-6111-[61111]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例2 :N- e 3_ (17-羧基十七烷?；?-[Lys3]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例3 :N- e 3_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (17-羧基十七烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?_[Lys3]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例4 :N- e 29-(19-羧基十九烷?；?-[Lys29]-普蘭林肽(1_37) 實(shí)施例5 :N- e 29-(17-羧基十七烷酰基)-[Lys29]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例6 :N-e 29-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(19-羧基十九烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?_[Lys29]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例7 :N-￡ 21-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(19-羧基十九烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙酰基)_[Lys21]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例8 :N- e 17- (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (19-羧基十九烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?_[Lysl7]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例9 :N- e 25- (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (17-羧基十七烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?-[Argl8，Lys25]-普蘭林肽(1_37) 實(shí)施例10 :N-e 25-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(19-羧基十九烷酰基氨基)乙氧基]乙 氧基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?_[Lys25]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例11 :N-e 3_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基-4-(17-羧基十七烷?；?基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-[Lys3]_普 蘭林肽(1-37) 實(shí)施例12 :N- e 3_ [2_ (2_ {2_ [2_ (2_ {2_ [ (S) _4_ 羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨 基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰基]-[Lys3]_普 蘭林肽(1-37) 實(shí)施例13 :N_ ￡ 3- (2- {2_ [2_ (2_ {2_ [2_ (19-羧基十九烷?；被?乙氧基]乙氧 基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙?；?_[Lys3]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例14 :N- e 3_ (19_羧基十九烷?；?-[Lys3]-普蘭林肽(1_37) 實(shí)施例16 :N_ a _[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷?；被?丁?；鵠-[Argl8， Leu23, Val26]-普蘭林肽(2-37) 實(shí)施例17 :N_a-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)_4-羧基 _4-{4_ 羧基 _4-[4_ 羧 基-4-(17-羧基十七烷?；被?丁?；被鵠丁?；被鶀 丁?；被?乙氧基]乙氧 基}乙酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙酰基)_[Argl8，Leu23，Val26]_普蘭林肽(2_37)
HO- 實(shí)施例18 :N- e 3_ [ (S) _4_羧基_4_ (17_羧基十七烷?；被?丁?；鵠-[Lys3， Prol8]_ 普蘭林肽(1-37)
實(shí)施例19 :N-e 3-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷?；?氨基)丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-[Lys3， Prol8]_ 普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例20 :N- e 3_ (2_ {2_ [2~ (2~ {2_ [2~ ((S) ~4~ 羧基 ~4~ {4_ 羧基 ~4~ [4_ 羧 基-4-(17-羧基十七烷?；被?丁酰基氨基]丁?；被鶀 丁酰基氨基)乙氧基]乙氧 基}乙?；被?乙氧基]乙氧基}乙?；?-[Lys3，Pr018]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例21 :^0-(17-羧基庚?；?-[六伐18]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例22 :N- e 3_ (17-羧基庚?；?-[Lys3，Argl8]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例23 :N-￡ 1-[(S)_4-羧基_4-(17-羧基十七烷?；被?丁酰基]-[Gly3， Alal7，Argl8，Ser28]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例24 :N-a-(17_ 羧基庚酰基)-[Argl8，Leu23，Val26]-普蘭林肽(2-37) 實(shí)施例25 :N_a -(19-羧基十九烷酰基)-Glu-Glu-Arg_[Glul]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例26 :N-￡ 25-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4_((S)_4-羧 基-4-{(S)-4-羧基-4-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷?；被?丁?；被鵠丁?；?氨基}丁?；被?丁?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙酰 基]-[Lys25]_ 普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例27 :N- e 25-[(S)_4_羧基-4_(17_羧基十七烷?；被?丁酰 基]-[Lys25]_ 普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例28 :N-￡ 3-[(S)_4-羧基_4-(17-羧基十七烷?；被?丁酰基]-[Lys3， Argl8, Gln21, Leu23, Val26]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例29力-￡3-(17-羧基庚?；?-[61111，1^83，611118]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例30 :N- e 3_ [2_ (2_ {2_ [4_ (16-1H-四唑_5-基-十六烷?；被酋；?丁 ?；被鵠乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-[Lys3]普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例31 :N-a-[4-(16-lH-四唑_5_基-十六烷?；被酋；?-丁酰 基]-Glu-Glu-Arg-[Glul]普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例32 :N- ￡ 3 (19-羧基十九烷?；?Glu-Glu-Arg-Glu) [Lys3, Argl8, Gln21， Leu23，Val26]普蘭林肽 實(shí)施例33 :N- e 3_ (2_ (2_ (2-(19-羧基十九烷?；?Glu-Glu-氨基)乙氧基)乙 氧基)乙酰基)[Lys3，Argl8, Gln21，Leu23，Val26]普蘭林肽(1-37)
實(shí)施例34 :N- e 3_ (19-羧基十九烷酰基-Glu-Glu-Glu-Glu) [Lys3,Argl8,Gln21, Leu23, Val26]普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例35 :N-a-(19-羧基十九烷?；?-Glu-Glu-Arg-[Glul，Gln3，Argl8, Gln21, Leu23, Val26]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例36 :N- a - (2_ (2_ (2-(19-羧基十九烷?；鵢Glu_氨基)乙氧基)乙氧基) 乙?；?[Glul, Gln3, Argl8, Gln21, Leu23, Val26]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例37 :N-a-(19_ 羧基十九烷?；?-Glu-Glu-Glu_[Glul，Gln3，Argl8, Gln21, Leu23, Val26]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例38 :N-a-[(S)-4-羧基_4-(19_羧基十九烷?；被?丁酰 基]-Glu-Glu-Arg-[Glul]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例39 :N_ a-{4-羧基-4-[4-(16-1H-四唑-5-基-十六烷?；被酋；?丁 ?；被鵠丁?；鶀-Glu-Glu-Arg-[Glul]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例40 :N- a - (4_羧基_4_ {6_ [4_ (16_1H_四唑_5_基-十六烷酰基氨磺?；? 丁酰基氨基]己?；被鶀 丁?；?-GlU-GlU-Arg-[GlUl]-普蘭林肽(1_37) 實(shí)施例41 :N_a -(17-羧基十七烷酰基)-Glu-Glu-Arg_[Glul]普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例42 :N- e 3_{4_羧基-4-[4-(16_lH-四唑_5_基-十六烷?；被酋；? 丁?；被鵠丁?；鶀_[Lys3]-普蘭林肽(2-37) 實(shí)施例43 :N-a-[ (S) _4_羧基_4_(19-羧基十九烷酰基氨基)丁?；鵠-普蘭林 肽(2-37) 實(shí)施例44 :N- a - (2_ {2_ [2_ ((S) _2_ {(S) _4_ 羧基 _2_ [ (S) _4_ 羧基-2-(19-羧基 十九烷酰基氨基)丁?；被鵠丁酰基氨基}-5-胍基戊酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙 ?；?-[Glul]_普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例45 :N-a-[(S)-4-羧基-4_(19_羧基十九烷?；被?丁酰 基]-[Argl]-普蘭林肽(1-37)
N VN T A T-n\-A TQRLANFLVHSSNNFGP I LPPTNVGSN T-N'Sr-NH2 HOHOoH 0實(shí)施例46 :N_ a-(19-羧基十九烷酰基)-Glu-[Argl]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例47 :N-a-[(S)-4-羧基-4_(19_羧基十九烷?；被?丁酰 基]-Arg-[Argl]-普蘭林肽(1-37)

實(shí)施例48 :N-a-[ (S) _4_羧基_4_(19-羧基十九烷?；被?丁?；鵠-Lys-普 蘭林肽(1-37) 實(shí)施例49 :N_ a _[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁?；鵠_Arg_普 蘭林肽(1-37) 實(shí)施例50 :N_a -(19-羧基十九烷?；?-Glu-Lys-Arg-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例51力-[1-(19-羧基十九烷?；?-6111-1^8-[六印1]-普蘭林肽(1-37) 實(shí)施例1-51的胰島淀粉樣多肽衍生物按照上述“胰島淀粉樣多肽螢光素酶測(cè)定法”進(jìn)行了測(cè)試，結(jié)果見表1。這些衍生物的受體親和力按照上述“胰島淀粉樣多肽受體結(jié) 合測(cè)定法”進(jìn)行了測(cè)試，結(jié)果見表1。表1中的HPLC洗脫數(shù)據(jù)是在分析型HPLC系統(tǒng)中，在 20分鐘內(nèi)用乙腈/TFA的10%— 90%梯度洗脫而測(cè)得的。表1 肽合成 一種肽合成方法是通過在基于微波的Liberty肽合成儀(CEMCorp.，North Carolina)的Fmoc化學(xué)。樹脂是Tentagel S RAM，裝載量為0. 25mmol/g。偶聯(lián)化學(xué)是溶于 NMP的DIC/HOAt，使用溶于NMP的0. 3M氨基酸溶液并且摩爾過量6_8倍。偶聯(lián)條件是5分 鐘，可達(dá)70°C。脫保護(hù)是用溶于NMP的5%哌啶，可達(dá)70°C。當(dāng)需要賴氨酸側(cè)鏈的化學(xué)修 飾時(shí)，將賴氨酸摻入作為Lys (Mtt)，并且N-端氨基酸通過用Boc-碳酸酯處理而受到保護(hù)。 通過將樹脂懸浮在純凈六氟異丙醇中達(dá)20分鐘，再用DCM和NMP洗滌而除去Mtt基團(tuán)。通 過手工合成或通過在Liberty上的一個(gè)或多個(gè)自動(dòng)化步驟，再通過手工偶聯(lián)，進(jìn)行賴氨酸 的化學(xué)修飾。另一種肽合成方法是通過在ABI 433上的Fmoc化學(xué)，并用HBTU偶聯(lián)。合成 之后，樹脂用DCM洗滌并干燥，然后用TFA/TIS/水(92. 5/5/2. 5)處理2小時(shí)，再通過用二 乙醚沉淀，將肽從樹脂上裂解下來。進(jìn)一步用二乙醚洗滌并干燥之后，將肽重新溶于水中， 濃度為1-211^/1111，將？11調(diào)節(jié)至約4.5，再通過用1當(dāng)量[Pt(IV)l，2-乙二胺2C12]C12處理 過夜，形成二硫橋。立即通過標(biāo)準(zhǔn)RP-HPLC，在C18柱上，使用乙腈/TFA來純化肽。或者，通 過用10當(dāng)量的碘/NMP處理1小時(shí)，在樹脂上形成二硫橋，在此情況下，在裂解和乙醚沉淀之后，直接純化粗制肽。肽的結(jié)構(gòu)特征通過MALDI-MS予以證實(shí)。所用縮略語DMF :N, N 二甲基甲酰胺HBTU 六氟磷酸2_ (1H-苯并三唑基-)_1，1，3，3四甲基脲鐺Fmoc :9H_芴_9_基甲氧基羰基Boc 叔丁氧基羰基Mtt 4-甲基三苯甲基DCM: 二氯甲烷TIS 三異丙基硅烷)TFA:三氟乙酸NMP :1-甲基-吡咯烷-2-酮HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑DIC 二異丙基碳二亞胺。
權(quán)利要求
一種具有SEQ ID NO17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中a)位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基酸，其中a.所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或b.位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或b)位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；或c)位置18的氨基酸殘基是精氨酸，并且位置1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO17中的氨基酸編號(hào)一致。
2.權(quán)利要求1的具有SEQID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中 位置1的氨基酸殘基是與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接的任何天然氨基酸，其中a)所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，b)位置2-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭；并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被脯氨酸取代并且任選位置18的氨基 酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO :17中的氨基酸編號(hào)一致。
3.權(quán)利要求1的具有SEQID NO 17的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，其中 位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭并且位置25、位置28和位置29的氨基酸殘基已被脯氨 酸取代并且任選位置18的氨基酸殘基是精氨酸；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO :17中的氨基酸編號(hào)一致。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的衍生物，其中，與人胰島淀粉樣多肽相比，所述衍生物具有 1-12個(gè)氨基酸取代。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的衍生物，其中所述衍生物是SEQIDNO 17的人胰島淀粉樣 多肽的類似物，其中與人胰島淀粉樣多肽相比，已添加0-8個(gè)額外電荷。
6.權(quán)利要求1的衍生物，所述衍生物包含下式1的氨基酸序列Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Xaa17 -Xaal8-Ser-Ser-Xaa21-Asn-Xaa23-Gly-Xaa25-Xaa26-Leu-Xaa28-Xaa29-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-Xaa38 式(1) (SEQ ID No 18) 其中Xaa1缺失或獨(dú)立選自Lys、Arg和Glu ； Xaa3 獨(dú)立選自 Asn、Gly、Gln 和 Lys ；Xaa17 獨(dú)立選自 Ala、Val 和 Lys ； Xaa18 獨(dú)立選自 His、Pro 和 Arg ； Xaa23獨(dú)立選自Phe和Leu ； Xaa21 獨(dú)立選自 Asn、Gln 和 Lys ； Xaa25 獨(dú)立選自 Ala、Pro 和 Lys ； Xaa2J立選自 Val 禾口 Ile ； Xaa28獨(dú)立選自Ser和Pro ；獨(dú)立選自Ser、Pro禾口 Lys ； C-端可任選衍生為酰胺； N-端可任選延伸1-10個(gè)氨基酸殘基其中氨基酸殘基Xaa1與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，所述延伸能與白蛋白 結(jié)合殘基進(jìn)一步連接，任選通過接頭，或者氨基酸殘基Xaa1、Xaa3、Xaa17、Xaa21、Xaa25或Xaa29是賴氨酸，并且所述賴氨酸殘基與白 蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭；其中如果 Xaa1 是 Lys, Xaa3 是 Asn, Xaa21 是 Asn, Xaa25 是 Ala 或 Pro,貝U Xaa29 是 Lys ；禾口 如果Xaa1是Glu或Arg，則所述Glu或Arg與由1_10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接， 并且所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基進(jìn)一步連接；和如果Xaa1是Lys，則式(1)中選自Xaa1Jaa3Jaa2^Xaa25和Xaa29的位置的一個(gè)氨基酸 與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭。
7.權(quán)利要求6的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基是羧酸或 其中1為12、13、14、15、16、17、18、19 或 20。
8.權(quán)利要求7的衍生物，其中所述白蛋白結(jié)合殘基通過接頭是通過賴氨酸殘基的ε -氨基連接并且其中所述接頭選自乙二醇、1-4個(gè)氨基酸殘基 一個(gè)或多個(gè)單元。
9.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的衍生物和藥學(xué)上可 接受的賦形劑。
10.用作藥物的權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的衍生物。
11.一種用于治療、預(yù)防或緩解患者的高血糖癥、2型糖尿病、葡萄糖耐量減低、1型糖 尿病、肥胖癥、X綜合征或血脂異常的方法，所述方法包括給予患者權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng) 的衍生物或權(quán)利要求9的藥物組合物。
12.—種制備權(quán)利要求9的藥物組合物的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng) 的衍生物與藥學(xué)上可接受的物質(zhì)和/或賦形劑混合。
13.一種用于延長人胰島淀粉樣多肽或其類似物在患者體內(nèi)的作用時(shí)間的方法，所述 方法的特征在于以下修飾a)修飾位置1的氨基酸殘基，即通過用任何天然氨基酸任選取代，并通過將所述天然氨基酸與由1-10個(gè)氨基酸組成的N-端延伸連接，并且進(jìn)一步a.將所述延伸與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或b.修飾位置2-37的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代，并通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或/b)修飾位置3、17、21、25或29的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連接，任選通過接頭，或.c)修飾位置18的氨基酸殘基，即通過用精氨酸殘基取代，并且修飾位置2-17或19-37 的氨基酸殘基，即通過用賴氨酸殘基取代并且通過將所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合殘基連 接，任選通過接頭；d)位置18的氨基酸是精氨酸，位置25、位置28和位置29的氨基酸都是脯氨酸，位置 1-17或19-37的氨基酸殘基已被賴氨酸殘基取代，并且其中所述賴氨酸殘基與白蛋白結(jié)合 殘基連接，任選通過接頭；其中所述氨基酸編號(hào)與SEQ ID NO 17中的氨基酸編號(hào)一致。
全文摘要
本發(fā)明涉及與胰島淀粉樣多肽受體結(jié)合并與白蛋白結(jié)合化合物連接的人胰島淀粉樣多肽或其類似物的衍生物，涉及包含這些衍生物的藥物組合物和獲取它們的方法。
文檔編號(hào)C07K14/575GK101855240SQ200880116427
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2008年9月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月11日
發(fā)明者J·劉, L·沙弗, T·克魯斯 申請(qǐng)人:諾沃-諾迪斯克有限公司