專(zhuān)利名稱(chēng)：角蛋白衍生物及其生產(chǎn)方法
角蛋白衍生物及其生產(chǎn)方法本申請(qǐng)要求2007年10月31日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?1/001，111的優(yōu)先權(quán)。 發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及通過(guò)取代在可溶性角蛋白的賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基 團(tuán)處的至少一個(gè)化學(xué)基團(tuán)所形成的可溶性角蛋白衍生物。取代的化學(xué)基團(tuán)可以包含電荷。 可溶性角蛋白衍生物可以通過(guò)琥珀?；蚣句@化或通過(guò)與脂肪酸衍生物反應(yīng)形成。本發(fā)明 也涉及制備和使用所述可溶性角蛋白衍生物的方法。
背景技術(shù)：
角蛋白是本領(lǐng)域熟知的并存在于許多來(lái)源中，所述來(lái)源包括羊毛、羽毛和毛發(fā)。角 質(zhì)纖維由相關(guān)蛋白質(zhì)的復(fù)雜復(fù)合物組成，所述的相關(guān)蛋白質(zhì)均是角蛋白家族的組成部分。 通常稱(chēng)為角蛋白部分的這些蛋白質(zhì)可以根據(jù)其結(jié)構(gòu)和在纖維中的作用劃分成以下組作為主要存在于纖維皮質(zhì)中纖維蛋白的中間絲蛋白(IFP)；作為存在于纖維皮質(zhì)的基質(zhì)以及存在于角質(zhì)層中球蛋白的高硫蛋白(HSP)；主要存在于纖維皮質(zhì)的高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)。角質(zhì)蛋白纖維的超微結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域熟知的并且由R. C. Marshall等人，哺乳動(dòng)物 硬角蛋白的結(jié)構(gòu)禾口生化化學(xué)(Structure andBiochemistry of Mammalian Hard Keratin), Electron MicroscopyReviews, (1991) 4,47 詳盡討論。角蛋白應(yīng)用廣泛，包括它們?cè)趥€(gè)人護(hù)理制劑、傷口護(hù)理應(yīng)用、作為整形外科材料和 在產(chǎn)生高分子薄膜膜中的用途。角蛋白作用包括調(diào)理、參與膜形成以及作為保濕劑和潤(rùn)膚劑(emollient)。 為了使其制劑能有足夠的溶解度，角蛋白常常被水解后使用。角蛋白的特征之一 是含有高比例的半胱氨酸，其形成的交聯(lián)使角蛋白本身不溶。本領(lǐng)域中的一個(gè)問(wèn)題是角蛋 白的許多相要的特性如官能性在水解時(shí)丟失。而本領(lǐng)域應(yīng)用包括角蛋白在內(nèi)的水解蛋白于 個(gè)人護(hù)理用品的例子不勝枚舉。WO 98/51265披露了水解蛋白及其衍生物，特別具有高硫含量的那些蛋白質(zhì)在保 護(hù)頭發(fā)免受環(huán)境性和化學(xué)性損害侵襲的制劑中的用途。WO 98/51265的發(fā)明人使用含有水 解蛋白和聚氨基陽(yáng)離子制劑的組合以制備相邀的制劑。US 4，948，876描述了通過(guò)酶水解產(chǎn)生的S-硫半胱氨酸角蛋白肽，用作羊毛和頭 發(fā)染色的助劑。作者使用酶促消化來(lái)制備低分子量肽并達(dá)到想要的溶解度。US 4，895，722描述了通過(guò)化學(xué)水解或酶水解生成的一系列角蛋白分解產(chǎn)物在制 備化妝品中的用途。在使用角蛋白作為化妝品成分的現(xiàn)有技術(shù)中，將所用的角蛋白水解足為一種材 料，而不試圖將角蛋白源分級(jí)成其構(gòu)成組分(例如，IFP、HSP、HGTP)。水解造成角蛋白許多 有用的特性的丟失。低分子量角蛋白肽以低得多的有序程度聚積以產(chǎn)生物理性能比衍生低 分子量角蛋白肽的高分子量角蛋白低劣得多的材料。另外，分解角蛋白化學(xué)方法中會(huì)發(fā)生 半胱氨酸不可逆的轉(zhuǎn)化，這種情況下產(chǎn)生的肽產(chǎn)品已經(jīng)使其喪失了其有別于其它蛋白的特性。如通過(guò)引用方式并入本文中的美國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?006/0165635中所教授，完 整角蛋白維持了衍生所述完整角蛋白的天然角蛋白的許多受歡迎特性并具有針對(duì)角蛋白 底物的反應(yīng)性。在美國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?006/0165635中沒(méi)有提到這些完整角蛋白的衍生 物。化學(xué)品如季銨化合物、琥珀?；衔锖椭舅嵫苌锍３Ｓ糜趥€(gè)人護(hù)理產(chǎn)品以賦 予有益的化妝品特性，如調(diào)理頭發(fā)或皮膚、向皮膚提供直接著色性或賦予制劑表面活性劑 特征。然而，這些化學(xué)品類(lèi)別沒(méi)有與蛋白質(zhì)或肽相關(guān)的益處，并且遞送與人造化學(xué)品相關(guān)的 益處和蛋白材料中固有的益處存在問(wèn)題?；瘜W(xué)修飾提供了改進(jìn)蛋白功能特性的方法。常用來(lái)達(dá)到這個(gè)目的化學(xué)反應(yīng)是?；?化、琥珀酰化、酯化、氧化、還原、糖基化、磷酸化和烷基化。這些反應(yīng)通常涉及可電離的氨基 酸基團(tuán)和末端氨基。琥珀?；Ｓ糜谑称返鞍踪|(zhì)中以改善溶解性、發(fā)泡特性和乳化特性以及風(fēng)味。蛋 白質(zhì)的琥珀酰化包括引入帶負(fù)電的羰基，這將影響分子中的靜電斥力，導(dǎo)致被蛋白質(zhì)覆蓋 的諸表面之間間增強(qiáng)的靜電排斥作用，因而產(chǎn)生更大的乳化穩(wěn)定性。琥珀?；磻?yīng)涉及蛋 白質(zhì)中的胺基和較小程度地涉及羥基氨基酸。另一種化學(xué)修飾是季銨化，該步驟引起帶正電的季銨鹽添加至蛋白質(zhì)，從而產(chǎn)生 陽(yáng)離子性更大的種類(lèi)。陽(yáng)離子表面活性劑是較不有效的洗滌劑和發(fā)泡劑，但它們擁有兩種 非常重要的特性。它們的正電荷允許它們吸附在帶負(fù)電荷的基材上，從而賦予基材抗靜電 特性和軟化作用，同時(shí)一些陽(yáng)離子表面活性劑還是殺菌劑。它們經(jīng)常存在于頭發(fā)護(hù)理產(chǎn)品 (如護(hù)發(fā)素)中。又一種化學(xué)修飾是將脂肪酸分子連接到蛋白分子上的胺基并因而增加該蛋白質(zhì) 的疏水特性。因此想要提供這樣的角蛋白衍生物，它們包含化妝品特性，如調(diào)理頭發(fā)或皮膚、向 皮膚提供直接著色性或賦予制劑表面活性劑特征，同時(shí)保留其他想要的角蛋白特征。發(fā)明簡(jiǎn)述在本公開(kāi)的第一實(shí)施方案中，本申請(qǐng)的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)取代在可溶性角 蛋白的賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)處的化學(xué)基團(tuán)修飾該可溶性角蛋白以形 成可溶性角蛋白衍生物。在第一實(shí)施方案的一個(gè)方面，取代將通過(guò)琥珀?；磻?yīng)完成，在所述琥珀?；?應(yīng)中酐與可溶性角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)反應(yīng)。這 具有引起總體更多負(fù)電性的作用。在第一實(shí)施方案的另一個(gè)方面，取代將通過(guò)季銨化反應(yīng)完成，在所述的季銨化反 應(yīng)中化學(xué)基團(tuán)可以是添加至可溶性角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨 基酸基團(tuán)的帶正電荷的季銨鹽。這具有引起總體更多正電性的作用仍在第一實(shí)施方案的另一個(gè)方面，取代將通過(guò)如此方式發(fā)生，即添加長(zhǎng)鏈脂肪酸 至可溶性角蛋白上一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)，因而中和至少 一些蛋白質(zhì)電荷。長(zhǎng)鏈脂肪酸可以是長(zhǎng)鏈脂肪酸氯化物，如通過(guò)聯(lián)合月桂酸和草酰氯所形 成的長(zhǎng)鏈脂肪酸氯化物?；蛘撸舅嵫苌锟梢酝ㄟ^(guò)偶聯(lián)過(guò)程產(chǎn)生。優(yōu)選的偶聯(lián)劑是鹽酸乙基碳二亞胺(EDC)或鹽酸N-(3_ 二甲氨基丙基)_N’ -乙基碳二亞胺。在上述情況下， 分子中的靜電斥力將改變，從而產(chǎn)生增強(qiáng)的表面活性和其它特性。第一實(shí)施方案中所用的可溶性角蛋白可以是完整角蛋白和角蛋白部分。角蛋白部 分的例子包括IFP部分、HSP部分和HGTP部分?？扇苄越堑鞍卓梢允峭暾??？扇苄越堑?白可以被部分或完全水解?？扇苄越堑鞍卓梢允荢-磺化的角蛋白或部分氧化的角蛋白。在 一個(gè)方面，可溶性角蛋白可以是完整的S-磺化角蛋白中間絲蛋白部分?？扇苄越堑鞍椎陌?胱氨酸含量可以是大約4%。本公布的第二實(shí)施方案涉及通過(guò)取代可溶性角蛋白的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端 胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)處化學(xué)基團(tuán)的步驟而制備可溶性角蛋白衍生物的方法。該方法 可以包括制備角蛋白的水溶液并隨后將此水溶液與含有化學(xué)基團(tuán)的溶液混合的步驟。取代 的化學(xué)基團(tuán)可以包含向可溶性角蛋白賦予電荷的帶負(fù)電荷的基團(tuán)或者備選地包含正電荷 基團(tuán)。所述可溶性角蛋白可以與第一實(shí)施方案中上述的可溶性角蛋白相似。可以添加其他 任選組分以改變成品特性，例如PH調(diào)節(jié)劑和pH緩沖液。該方法也可以包括控制反應(yīng)溫度。在第二實(shí)施方案的一個(gè)方面，取代可以包含琥珀?；磻?yīng)。琥珀?；磻?yīng)中的取 代作用引起酐與可溶性角蛋白的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)反 應(yīng)，旨在因而形成角蛋白衍生物。該方法可以包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將這 種水溶液與含有該酐的溶液混合的步驟。在第二實(shí)施方案的另一個(gè)方面，取代可以包含季銨化反應(yīng)。季銨化反應(yīng)中的取代 作用引起添加至可溶性角蛋白的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)的 帶正電荷的季銨鹽。該方法可以包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將這種水溶液與含 有該季銨鹽的溶液混合的步驟。仍在第二實(shí)施方案的一個(gè)方面，取代可以包含?；热〈磻?yīng)或偶聯(lián)反應(yīng)。?；?氯法或偶聯(lián)反應(yīng)中的取代產(chǎn)生添加至可溶性角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/ 或羥基氨基酸基團(tuán)的脂肪酸基團(tuán)。該方法可以包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將這 種水溶液與含有長(zhǎng)鏈脂肪酸的溶液混合的步驟。長(zhǎng)鏈脂肪酸可以是通過(guò)酰氯法或通過(guò)使用 鹽酸N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺(EDC)偶聯(lián)劑所制備的月桂酰氯與月桂酸的 混合物。本公開(kāi)的第三實(shí)施方案涉及含有可溶性角蛋白衍生物的表面活性劑產(chǎn)物。所述可 溶性角蛋白衍生物可以如上文第一實(shí)施方案中所述。本公開(kāi)的第四實(shí)施方案涉及含有可溶性角蛋白衍生物的個(gè)人護(hù)理制劑。此個(gè)人護(hù) 理制劑可以包含約0. 001%至50%重量份的可溶性角蛋白衍生物。該比率可以是0. 001% 至10%或0.001 %至5%。此處可溶性角蛋白衍生物可以如上文第一實(shí)施方案中所述。因 可溶性角蛋白衍生物特性而可以使用可溶性角蛋白衍生物的個(gè)人護(hù)理制劑包含以下任意 者調(diào)理型洗發(fā)劑、身體/面部潔面乳/洗發(fā)劑、護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、摩絲、頭發(fā)定型藥水、定型噴 霧劑、燙前護(hù)理劑、燙后護(hù)理劑、爽身水、淋浴凝膠、泡沫浴凝膠、睫毛膏、指甲油、粉底液、剃 須膏和口紅。在本發(fā)明中也包括其他個(gè)人護(hù)理制劑(例如保護(hù)皮膚的洗滌劑)。本公開(kāi)的第五實(shí)施方案涉及個(gè)人護(hù)理制劑添加劑。此添加劑可以包含如上文第一 實(shí)施方案中所述的可溶性角蛋白衍生物。本公開(kāi)的第六實(shí)施方案是用于處理頭發(fā)的方法。該方法可以包括施加包含從約0. 001%至50%可溶性角蛋白衍生物的個(gè)人護(hù)理制劑至頭發(fā)的步驟。這種可溶性角蛋白衍 生物可以如上文第一實(shí)施方案中所述。本公開(kāi)的第七實(shí)施方案是用于處理頭發(fā)的方法。該方法可以包括施加包含添加劑 的個(gè)人護(hù)理制劑至頭發(fā)的步驟。此添加劑可以包含可溶性角蛋白衍生物。此處可溶性角蛋 白衍生物可以如上文第一實(shí)施例中所述。本公開(kāi)的第八實(shí)施方案是可溶性角蛋白衍生物的混合物。這種可溶性角蛋白衍生 物的混合物可以包含兩種及更多種可溶性角蛋白衍生物。這種可溶性角蛋白衍生物的混合 物可以包含第一可溶性角蛋白部分，所述的第一可溶性角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分 上的賴(lài)氨酸基處、末端胺基處、羥基氨基酸基團(tuán)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。這種可 溶性角蛋白衍生物的混合物還可以包含第二可溶性角蛋白部分，所述的第二可溶性角蛋白 部分在該可溶性角蛋白部分上的賴(lài)氨酸基處、末端胺基處、羥基氨基酸基團(tuán)處具有至少一 個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。第一和第二可溶性角蛋白部分可以是中間絲蛋白、高硫蛋白、高甘氨 酸-酪氨酸蛋白。第一可溶性角蛋白部分可以與第二可溶性角蛋白部分不同。本公開(kāi)的第九實(shí)施方案是產(chǎn)生可溶性角蛋白衍生物的混合物的方法。該方法可以 包括第一可溶性角蛋白部分與第二可溶性角蛋白部分混合的步驟，其中所述的第一可溶性 角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分上的賴(lài)氨酸基處、末端胺基處、羥基氨基酸基團(tuán)處具有 至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)，所述的第二可溶性角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分上的賴(lài)氨 酸基處、末端胺基處、羥基氨基酸基團(tuán)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。第一和第二可溶性 角蛋白部分可以是中間絲蛋白、高硫蛋白、高甘氨酸-酪氨酸蛋白。第一可溶性角蛋白部分 可以與第二可溶性角蛋白部分不同。附圖簡(jiǎn)述本發(fā)明的其他方面因僅通過(guò)舉例方式給出的以下描述并參考附圖而變得更明晰， 其中Si顯示了說(shuō)明琥珀?；鞍踪|(zhì)樣品的電荷特征的圖，其中0%=未衍生化的蛋 白質(zhì)(完整角蛋白)，28% =樣品SPA，74% =樣品SPB，79% =樣品SPC和83% =樣品SPD ；Sl顯示完整角蛋白和琥珀?；鞍椎腜H-溶解度曲線；Sl顯示了說(shuō)明季銨化蛋白質(zhì)樣品的電荷特征的圖，其中0 % =未衍生化的(完整 角蛋白)，7 % =樣品 QuatA，41 % =樣品 QuatB，65 % =樣品 QuatC 和 85 % =樣品 QuatD ；圖4顯示完整角蛋白和季銨化蛋白的PH-溶解度曲線；M5顯示未經(jīng)處理頭發(fā)的電子顯微鏡電鏡(SEM)圖像(樣品E和F)(放大倍率 800x)；M6顯示未經(jīng)處理頭發(fā)的SEM圖像(樣品E和F)(放大倍率2000x)；Ml顯示經(jīng)十二烷基硫酸鈉(SLES)洗滌的頭發(fā)的SEM圖像(樣品A和B)(放大 倍率800x)；M8顯示經(jīng)SLES洗滌的頭發(fā)SEM圖像(樣品A和B)(放大倍數(shù)2000x)；Ml顯示經(jīng)琥珀?；堑鞍讟悠稴PC洗滌的頭發(fā)的SEM圖像(樣品C和D)(放大 倍率800x)；SIO顯示經(jīng)SPC洗滌的頭發(fā)的SEM圖像(樣品C和D)(放大倍率2000x)；

圖11顯示對(duì)對(duì)不同頭發(fā)樣品(A-F)提取的發(fā)脂質(zhì)的TLC分析，其中CE，膽固醇酯；FFAE，脂肪酸酯；FFA，游離脂肪酸；Chol，膽固醇；Cer，神經(jīng)酰胺；TG，甘油三酯；圖12顯示平均梳理力計(jì)算[在本例中計(jì)算為=(100+160+170+180+200)/5 = 162]和在對(duì)每條力量/拉伸長(zhǎng)度曲線計(jì)算平均梳理用力中所用的圖；^13顯示對(duì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中處理和未處理的發(fā)束的梳理力測(cè)量的平均值圖；圖14顯示對(duì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中處理和未處理的發(fā)束梳理力所測(cè)量最高峰倌的平均倌 圖；圖15顯示對(duì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中處理和未處理的發(fā)束梳理力所報(bào)告最高峰倌的平均倌 圖；ΜΙ6顯示全部鑒定人對(duì)(處理和未處理的)不同發(fā)束就高分子量季銨化衍生物 而言的不同問(wèn)題的選擇百分?jǐn)?shù)；和，an顯示全部鑒定人對(duì)(處理和未處理的)不同發(fā)束就低分子量季銨化衍生物 而言的不同問(wèn)題的選擇百分?jǐn)?shù)。優(yōu)選實(shí)施方案的詳述在本公開(kāi)的第一實(shí)施方案，披露了可溶性角蛋白衍生物。該可溶性角蛋白衍生物 包含對(duì)可溶性角蛋白的修飾，因而該可溶性角蛋白已經(jīng)通過(guò)對(duì)取代該可溶性角蛋白上一個(gè) 和多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)受到修飾以形成衍生物。角蛋白是以大量胱氨酸為特征的一個(gè)蛋白質(zhì)家族，所述胱氨酸通過(guò)二硫鍵賦予角 蛋白高程度度的交聯(lián)。角蛋白也是高度有序的蛋白質(zhì)，對(duì)許多生物組織提供基礎(chǔ)性結(jié)構(gòu)作 用。另外，二硫交聯(lián)鍵的存在提供針對(duì)體內(nèi)酶降解的一定程度的恢復(fù)力，從而允許在 角蛋白內(nèi)部遞送的任何物質(zhì)維持在特定位置持續(xù)一段可控制的時(shí)間。因?yàn)榻堑鞍资翘烊徊蝗艿?，所以角蛋白必須?jīng)化學(xué)修飾以產(chǎn)生可溶性角蛋白。修 飾成可溶的任何角蛋白可以用在本發(fā)明中，正如本領(lǐng)域已知的用于增溶角蛋白的方法可以 用來(lái)提供用于本發(fā)明中的可溶性角蛋白。一種這樣的方法涉及化學(xué)修飾角蛋白以形成如美國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?，148，327 中所述的S-磺化角蛋白，所述文獻(xiàn)通過(guò)弓I用的方式并入本文。在第一實(shí)施方案的一個(gè)方面，可溶性角蛋白是指S-磺化角蛋白。S-磺化角蛋白 是經(jīng)歷一個(gè)過(guò)程的角蛋白，其中角蛋白內(nèi)胱氨酸氨基酸之間的二硫鍵被可逆地修飾以生成 極性官能團(tuán)，所述極性官能團(tuán)允許受控地再引入原先存在于角蛋白中的天然二硫交聯(lián)鍵。 S-磺化角蛋白具有優(yōu)勢(shì)地以S-硫半胱氨酸形式存在的半胱氨酸/胱氨酸。這種高度極性 基團(tuán)賦予蛋白一定程度的溶解度。盡管在溶液中穩(wěn)定，然而S-磺基是不穩(wěn)定的半胱氨酸衍 生物，對(duì)硫醇如半胱氨酸以及其他還原劑具有高度反應(yīng)性。與還原劑的反應(yīng)導(dǎo)致S-硫半胱 氨酸轉(zhuǎn)變返回成胱氨酸。S-硫半胱氨酸在化學(xué)上不同于磺基丙氨酸，雖然兩種基團(tuán)都含有 SO3-基?；腔彼嵬ㄟ^(guò)氧化半胱氨酸或胱氨酸不可逆地產(chǎn)生并且一旦形成則不能再通過(guò) 形成二硫交聯(lián)鍵返回半胱氨酸。S-硫半胱氨酸對(duì)半胱氨酸具有反應(yīng)性并輕易形成二硫交聯(lián) 鍵。在第一實(shí)施方案的另一個(gè)方面，可溶性角蛋白是部分氧化的角蛋白。部分氧化意 指角蛋白中>85%的胱氨酸已經(jīng)被氧化成磺基丙氨酸，此外，被氧化成相對(duì)小數(shù)目的其它 氧化敏感性氨基酸。角蛋白的部分氧化導(dǎo)致因角蛋白中胱氨酸氨基酸之間的二硫鍵轉(zhuǎn)化成磺基丙氨酸而增溶角蛋白。第一實(shí)施方案的可溶性角蛋白應(yīng)可以是沒(méi)有分裂成不同部分的完整角蛋白。在備 選的實(shí)施例中，角蛋白可以是角蛋白部分。硬α角蛋白(如從人發(fā)、羊毛、動(dòng)物纖維、角、蹄 或其它哺乳動(dòng)物來(lái)源衍生的那些硬α角蛋白)可以根據(jù)生物學(xué)特性，尤其其分子量和氨基 酸組成而劃分成特定組分。美國(guó)公開(kāi)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?006/0165635詳細(xì)描述了具體組成并且 通過(guò)引用的方式并入本文。上文確定的角蛋白部分可以劃分成角蛋白家族內(nèi)部的不同組， 并且包含中間絲蛋白(IFP)、高硫蛋白(HSP)和高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)。中間絲蛋白由Orwin等人(哺乳動(dòng)物硬角蛋白的結(jié)構(gòu)和生化化學(xué)(Structure and Biochemistry of Mammalian Hard Keratin)， Electron Microscopy Reviews, (1991)4,47)詳細(xì)描述并且也由Gillespie稱(chēng)作低硫蛋白(皮膚的生物化學(xué)和生理學(xué) (Biochemistryand physiology of the skin),第 1 卷，Goldsmith 編著，倫敦牛津大學(xué)出 版社，1983年，第475-510頁(yè))。中間絲蛋白家族的關(guān)鍵特征是40_60kD范圍內(nèi)的分子量和 約4%半胱氨酸含量(以一半胱氨酸測(cè)量)。高硫蛋白家族也由Orwin和Gillespie在上文提到的相同出版物中充分描述。這 個(gè)蛋白質(zhì)家族具有巨大程度的異質(zhì)性，但是可以表征為具有10_30kD范圍內(nèi)的分子量和大 于10%的半胱氨酸含量。該家族的一個(gè)亞類(lèi)是超高硫蛋白，其可以具有直至34%的半胱氨
酸含量。高甘氨酸-酪氨酸蛋白家族也由Orwin和Gi 1 Iespie在上文提到的相同出版物中 充分描述。該家族也稱(chēng)作高酪氨酸蛋白并且具有以下特征低于IOkD的分子量、一般大于 10%的酪氨酸含量和一般大于20%的甘氨酸含量。為本發(fā)明的目的，“角蛋白部分”是純化形式的角蛋白，其優(yōu)勢(shì)地(盡管并非全部) 含有一個(gè)如上所述的不同蛋白質(zhì)類(lèi)。第一實(shí)施例的可溶性角蛋白可以是完整的。術(shù)語(yǔ)“完整”指沒(méi)有被明顯水解的蛋 白質(zhì)，同時(shí)水解定義為借助水的添加而裂解鏈。Gillespie認(rèn)為“完整”是指處于角質(zhì)化聚 合狀態(tài)下的蛋白或者更進(jìn)一步指復(fù)合以形成羊毛和毛發(fā)中完整角蛋白的多肽亞基。為本說(shuō) 明書(shū)的目的，“完整”是指Gillespie中所述的多肽亞基。這些多肽亞基等同于自然形式下 的角蛋白，而沒(méi)有借助角質(zhì)化過(guò)程所形成的二硫交聯(lián)鍵。完整角蛋白和角蛋白部分在待決美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)申請(qǐng)?zhí)?008/0038327中更詳細(xì)地 討論并且所述完整申請(qǐng)通過(guò)引用的方式并入本文?？扇苄越堑鞍卓梢允撬獾?。水解指借助水的添加而裂解鏈。以這種方式水解的 角蛋白也可以稱(chēng)作角蛋白肽或寡肽。為本說(shuō)明書(shū)的目的，術(shù)語(yǔ)“水解的蛋白質(zhì)”包括肽類(lèi)。 應(yīng)當(dāng)了解在本公開(kāi)中提及的衍生化包括衍生化完整蛋白質(zhì)和水解的蛋白質(zhì)(肽)。作為例 子，本發(fā)明人所理解的反應(yīng)圖解如下文示意圖1中所示 蛋白質(zhì)鏈寡肽
其中R =角蛋白或肽基底，并且X和Y是標(biāo)準(zhǔn)氨基酸側(cè)鏈。示意圖1示意圖1闡釋了衍生化之前的水解過(guò)程，盡管實(shí)際上應(yīng)當(dāng)理解水解可以在衍生化 之后發(fā)生并且以上示意圖不得視為限制性。也應(yīng)當(dāng)理解除非另外注明或說(shuō)明(例如提到完整蛋白質(zhì)時(shí))，如本文中所用的術(shù) 語(yǔ)“蛋白質(zhì)”包括完整的蛋白質(zhì)和肽?？扇苄越堑鞍卓梢蕴幱谌芤褐?，所述溶液是用于個(gè)人護(hù)理制劑中的任何適宜溶 液，如水。水溶液可以具有適合制備水溶液的可溶性角蛋白對(duì)溶液的任意比率。對(duì)于個(gè)人 護(hù)理制劑，可溶性角蛋白的水溶液可以是從0. 001至50 %重量份的可溶性角蛋白。用來(lái)產(chǎn)生可溶性角蛋白衍生物的化學(xué)基團(tuán)可以包含向可溶性角蛋白賦予其電荷 的帶負(fù)電荷的基團(tuán)或正電荷基團(tuán)。該化學(xué)基團(tuán)可以在可溶性角蛋白的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨 基酸基團(tuán)的位置處接合至該可溶性角蛋白。該化學(xué)基團(tuán)通過(guò)取代可溶性角蛋白的一個(gè)或多 個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)連接至角蛋白。在本文中所披露第一實(shí)施方案的一個(gè)方面，披露了一種可溶性角蛋白衍生物，其 中該可溶性角蛋白已經(jīng)借助琥珀?；艿叫揎棽⑶铱梢员环Q(chēng)作可溶性角蛋白琥珀?；?生物。琥珀?；磻?yīng)中的取代作用引起酐與該角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基和/或末 端胺基反應(yīng)并且較小程度地與羥基氨基酸反應(yīng)以形成角蛋白衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中， 取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白并且X =任選取代的烷基。更具體地，X可以是(CH2)n，其 中η可以是從2到6。在具體的例子中，認(rèn)為使用優(yōu)選試劑琥珀酐(X = CH2CH2)的反應(yīng)基于如下示意圖 2中所示的以下過(guò)程發(fā)生 其中R=可溶性角蛋白。
示意圖2琥珀酰化可以使用S-磺化中間絲角蛋白部分和琥珀酐完成。琥珀酐與S-磺化角 蛋白部分中的伯胺基(賴(lài)氨酸和氨基端)反應(yīng)。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲氨酸、 蘇氨酸和酪氨酸)處較小程度地發(fā)生。這些多樣的反應(yīng)產(chǎn)生羧酸官能性。如應(yīng)當(dāng)理解，在 賴(lài)氨酸基團(tuán)的情況下，該反應(yīng)使可溶性角蛋白具有有時(shí)候?yàn)檎娦缘陌被嶙兂删哂袔ж?fù) 電菏的羧基。這使可溶性角蛋白具有更多負(fù)電荷的作用。也可以使用其它試劑調(diào)節(jié)琥珀?；^(guò)程，所述的其它試劑包括，例如，其它不同的 酐化合物(例如，鄰苯二甲酐、戊二酐、丁酐或醋酐)。備選地，對(duì)甲苯磺酰氯可以用作所述 試劑以產(chǎn)生連接有芳香環(huán)的磺酰胺化蛋白。在一個(gè)方面，琥珀酐或者其它試劑應(yīng)可以按照大約從1份至10份琥珀酐對(duì)100份 可溶性角蛋白的比率添加至可溶性角蛋白。在更具體的例子中，以大約從1份琥珀酐對(duì)25 份可溶性角蛋白的比率添加琥珀酐。在反應(yīng)步驟期間，pH可以控制在7. 0至9. 0之間。由于pH在反應(yīng)期間趨向降低， 因而可以通過(guò)添加提高PH的物質(zhì)如氫氧化鈉來(lái)控制pH。另外，在反應(yīng)步驟期間，溫度可以控制在大約1°C至10°C之間，更優(yōu)選地至約5°C。在第一實(shí)施方案的另一個(gè)方面，可溶性角蛋白衍生物可以借助季銨化反應(yīng)修飾。 季銨化反應(yīng)中的取代作用引起帶正電荷的季銨鹽添加至該蛋白質(zhì)中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基 和/或末端胺基。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)處較小程 度地發(fā)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R=可溶性角蛋白，X = NH或0，Y=任選取代的烷基并且R'=烷基。在一 個(gè)具體例子中，X可以是NH，Y可以是CH2CH(OH)CH2并且R'可以是CH3。在一個(gè)具體例子中，認(rèn)為使用優(yōu)選試劑的反應(yīng)基于如下示意圖3中所示的以下過(guò) 程發(fā)生 其中R=可溶性角蛋白。示意圖3季銨化可以使用縮水甘油三甲基氯化銨(GTMAC)完成。GTMAC與可溶性角蛋白中 伯胺基(賴(lài)氨酸)和末端胺基(氨基端)反應(yīng)。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲氨酸、 蘇氨酸和酪氨酸)處較小程度地發(fā)生。如應(yīng)當(dāng)理解，在賴(lài)氨酸基的情況下，該反應(yīng)將使可溶 性角蛋白具有有時(shí)候?yàn)檎娦缘陌被嶙兂删哂袔д姾实谋惶砑又量扇苄越堑鞍字匈?lài) 氨酸基或末端胺基的季銨鹽。這使可溶性角蛋白具有更為正電荷的作用。盡管以上描述了 GTMAC，然而應(yīng)當(dāng)理解可以使用其它季鹽而不脫離本發(fā)明的范圍，關(guān)鍵目的是反應(yīng)基團(tuán)連接至能夠與可溶性角蛋白反應(yīng)的季鹽。例如，可以使用其它季鹽，尤 其連接有環(huán)氧基的包含長(zhǎng)鏈如C1(I、C12、C14、C16、C4(I并且甚至更長(zhǎng)鏈的那些季鹽。如所示，環(huán) 氧基團(tuán)是受歡迎的。這是因?yàn)樵摶鶊F(tuán)是高度反應(yīng)性的并且蛋白質(zhì)的長(zhǎng)鏈連接至季氮，最常 見(jiàn)地產(chǎn)生式R-N(CH2)nR2分子，其中R1為角蛋白或肽，并且R2是含有季氮的部分。在一個(gè)方面，GTMAC可以按照大約從1份至10份GTMAC對(duì)80份可溶性角蛋白的 比率添加至可溶性角蛋白。在一個(gè)具體例子中，以1份GTMAC對(duì)16份可溶性角蛋白的比率 添加GTMAC。在反應(yīng)步驟期間，溫度可以控制在大約40°C。在一個(gè)實(shí)施方案中，GTMAC可以按照這樣的比率添加至水解的可溶性角蛋白，所述 的比率適合引起如OPA分析所確定的全部末端胺基和酪氨酸側(cè)鏈胺基的大于85%置換。仍在第一實(shí)施方案的另一個(gè)方面，披露了具有長(zhǎng)鏈脂肪酸的可溶性角蛋白衍生 物。在這個(gè)方面，取代作用引起帶負(fù)電荷的脂肪酸基團(tuán)添加至該蛋白質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨 酸基和/或末端胺基。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)處較 小程度地進(jìn)行。術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)鏈”意指長(zhǎng)度是ClO或更長(zhǎng)的脂肪酸。優(yōu)選地，該脂肪酸是CltT18 鏈。在一個(gè)方面，取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R=可溶性角蛋白，X = NH或0，^4 =重復(fù)的脂肪酸鏈并且n = 10 至40。在一個(gè)具體例子中，X可以是NH，B可以是(CH2) η并且η可以在10至18范圍內(nèi)。在一個(gè)具體例子中，認(rèn)為使用優(yōu)選試劑的反應(yīng)基于如下示意圖4中所示的以下過(guò) 程發(fā)生 其中R =可溶性角蛋白，X = 0或NH并且J^l=重復(fù)的脂肪酸鏈。示意圖4在上述過(guò)程中，長(zhǎng)鏈脂肪酸是脂肪酸酰氯，如通過(guò)合并月桂酸與草酰氯所形成的 那種脂肪酸酰氯。在其他實(shí)施例中，可以使用其他試劑替代草酰氯(例如，亞硫酰氯、無(wú)機(jī) 鹵化物和通常含有COCI基團(tuán)的試劑)。在這個(gè)備選中，溫度維持在1°C至10°C的溫度持續(xù) 該蛋白質(zhì)反應(yīng)期間，并且PH維持在約8. 0?；蛘?，脂肪酸衍生物可以通過(guò)偶聯(lián)過(guò)程產(chǎn)生。認(rèn)為使用優(yōu)選試劑的反應(yīng)基于如下 示意圖5中所示的以下過(guò)程發(fā)生
其中R=可溶性角蛋白，X = NH或0，并且重復(fù)的脂肪酸鏈。流程5 在上述過(guò)程中，優(yōu)選的偶聯(lián)劑為EDC即鹽酸N- (3- 二甲氨基丙基)-N’ -乙基碳二 亞胺。也可以使用本領(lǐng)域已知的其它偶聯(lián)劑而不脫離本發(fā)明的范圍。在一個(gè)方面，將脂肪酸以這樣的比率添加至水解的角蛋白，所述的比率適合引起 如OPA分析所確定的全部末端胺基和酪氨酸側(cè)鏈胺基的大于85%置換。在本公開(kāi)的第二實(shí)施方案中，披露了用于制備可溶性角蛋白衍生物的方法。該方 法包括將化學(xué)基團(tuán)置換至可溶性角蛋白的一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基、末端胺基和/或羥基氨基 酸基團(tuán)的步驟。更具體地，該方法包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將此水溶液與含 有該化學(xué)基團(tuán)的溶液混合的步驟。該化學(xué)基團(tuán)可以包含向可溶性角蛋白賦予電荷的帶負(fù)電 荷的基團(tuán)或正電荷基團(tuán)?？梢蕴砑悠渌芜x組分以改變最終的產(chǎn)品特性，例如PH調(diào)節(jié)劑和 PH緩沖液。該方法也可以包括控制反應(yīng)溫度。在第二實(shí)施方案的一個(gè)方面，用于制備可溶性角蛋白衍生物的方法包括完成琥珀 ?；磻?yīng)的步驟。琥珀?；磻?yīng)中的取代作用引起酐與可溶性角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸 基和/或末端胺基反應(yīng)并且較小程度地與羥基氨基酸反應(yīng)以形成可溶性角蛋白衍生物。該 方法包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將此水溶液與含有該酐的溶液混合的步驟。琥珀?；梢允褂苗牯瓿伞ｇ牯c可溶性角蛋白中的伯胺基(賴(lài)氨酸和氨 基端)反應(yīng)并且較小程度地與羥基氨基酸(絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)反應(yīng)以產(chǎn)生羧酸官 能性。也可以使用如先前討論的其它試劑。琥珀酐可以按照大約從1份至10份琥珀酐對(duì)100份可溶性角蛋白的比率添加至 可溶性角蛋白。在一個(gè)具體例子中，以大約從1份琥珀酐對(duì)25份可溶性角蛋白的比率添加 琥珀酐。在反應(yīng)步驟期間，pH可以控制在8. 0至8. 2之間。由于pH在反應(yīng)期間趨向降低， 因而可以通過(guò)添加提高PH的物質(zhì)如氫氧化鈉來(lái)控制pH。另外，在反應(yīng)步驟期間，溫度可以控制在大約1°C至10°C之間，更優(yōu)選地至約5°C。在本公開(kāi)的第二實(shí)施方案的另一個(gè)方面，用于制備可溶性角蛋白衍生物的方法包 括季銨化反應(yīng)的步驟。季銨化反應(yīng)中的取代作用引起帶正電荷的季銨鹽與可溶性角蛋白中 的賴(lài)氨酸基和/或末端胺基反應(yīng)。該方法包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨后將此水溶 液與含有季銨鹽的溶液混合的步驟。季銨化可以使用縮水甘油三甲基氯化銨(GTMAC)完成。GTMAC與可溶性角蛋白中的伯胺基(賴(lài)氨酸)和末端胺基(氨基端)反應(yīng)。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲氨 酸、蘇氨酸和酪氨酸)處較小程度地發(fā)生。也可以使用如先前討論的其它季鹽。GTMAC可以按照大約從1份至10份GTMAC對(duì)80份可溶性角蛋白的比率添加至可 溶性角蛋白。在一個(gè)具體例子中，GTMAC可以按照1份GTMAC對(duì)16份可溶性角蛋白的比率 添力口。。在反應(yīng)步驟期間，溫度可以控制在大約40°C。仍在第二實(shí)施方案的另一個(gè)方面，制備可溶性角蛋白衍生物的方法可以包括?；?氯法或EDC偶聯(lián)反應(yīng)的步驟。酰基氯法或EDC偶合反應(yīng)中的取代引起脂肪酸基團(tuán)添加至可 溶性角蛋白中一個(gè)或多個(gè)賴(lài)氨酸基和/或末端胺基。該反應(yīng)也可以在羥基氨基酸基團(tuán)(絲 氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)上較小程度地發(fā)生。。該方法包括制備可溶性角蛋白的水溶液并隨 后將此水溶液與含有長(zhǎng)鏈脂肪酸的溶液混合的步驟。長(zhǎng)鏈脂肪酸可以是借助?；确óa(chǎn)生 的月桂酰氯或是與偶聯(lián)劑鹽酸N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺(EDC)聯(lián)合使用的 月桂酸。在優(yōu)選的?；确ㄆ陂g，反應(yīng)溶液的溫度可以維持在大約1°C至10°C之間并且保 持在大約8的pH上。在第三實(shí)施方案中，披露了含有可溶性角蛋白衍生物的表面活性劑產(chǎn)品。本文中 披露的可溶性角蛋白衍生物具有表面活性劑特性，包括降低液體(如水)的表面張力，因而 導(dǎo)致更容易擴(kuò)散和降低不同介質(zhì)之間界面張力的能力。這是可理解的，因?yàn)楸景l(fā)明的可溶 性角蛋白衍生物是兩親性的，具有疏水“尾部”和親水“頭部”。這意味它們是在有機(jī)溶劑 和水中可溶解的。盡管基礎(chǔ)角蛋白也顯示某種程度的表面活性性質(zhì)，然而本公開(kāi)的可溶性 角蛋白衍生物因取代反應(yīng)所引起的電荷改變而表現(xiàn)更強(qiáng)的表面活性性質(zhì)。例如，與基礎(chǔ)角 蛋白相比，減半濃度的本公開(kāi)的可溶性角蛋白衍生物可以用來(lái)實(shí)現(xiàn)相同程度的表面張力降 低。另外，采用本公開(kāi)可溶性角蛋白衍生物的發(fā)泡作用(表面活性劑的另一個(gè)特性)比采 用基礎(chǔ)角蛋白的發(fā)泡作用大得多和持久得多，即便與基礎(chǔ)角蛋白相比，采用明顯更第濃度 的可溶性角蛋白衍生物。可溶性角蛋白衍生物可以作為表面活性劑單獨(dú)用于制劑中。在備 選中，可溶性角蛋白衍生物與制劑中的其它表面活性劑聯(lián)合使用。在本公開(kāi)的第四實(shí)施方案中，披露了包含可溶性角蛋白衍生物的個(gè)人護(hù)理制劑。 術(shù)語(yǔ)“個(gè)人護(hù)理制劑”包括意圖與人體任何外部(包括口腔黏膜和牙齒)接觸旨在實(shí)現(xiàn)如 下作用的任何物質(zhì)或制品，所述作用包含改變體味、改善身體外觀、清潔身體、保持身體處 于良好狀態(tài)或熏香身體。個(gè)人護(hù)理制劑可以含有約0. 001%至50%重量份的可溶性角蛋白衍生物。該比率 優(yōu)選地是0. 001%至10%重量份，并且更優(yōu)選地是0. 001%至5%。個(gè)人護(hù)理制劑還可以包 含任何合適的化妝品載體。所述可溶性角蛋白衍生物可以是如上文在第一實(shí)施方案中詳述的可溶性角蛋白 衍生物。其中因可溶性角蛋白衍生物特性而可以使用角蛋白衍生物的個(gè)人護(hù)理制劑包含 以下任意者調(diào)理型洗發(fā)劑、身體/面部潔面乳/洗滌劑、護(hù)發(fā)素、發(fā)膠、摩絲、頭發(fā)定型藥 水、定型噴霧、燙前護(hù)理劑、燙后護(hù)理劑、爽身水、淋浴凝膠、泡沫浴凝膠、睫毛膏、指甲油、粉 底液、剃須膏和口紅。在本發(fā)明中也包括輔助實(shí)現(xiàn)上述特性的其他個(gè)人護(hù)理制劑，例如保護(hù)皮膚免遭干燥的洗滌劑。在本公開(kāi)的第五實(shí)施方案中，披露了用于個(gè)人護(hù)理制劑的包含可溶性角蛋白衍生 物的添加劑。所述可溶性角蛋白衍生物可以是如上文在第一實(shí)施方案中詳述的可溶性角蛋 白衍生物。該添加劑可以添加之任何適宜的個(gè)人護(hù)理制劑，例如上文在第四實(shí)施方案中所 述的那些。添加劑可以按0.1至5%重量份范圍的量添加至個(gè)人護(hù)理制劑。個(gè)人護(hù)理制劑 也可以包含任何合適的化妝品載體。在第六實(shí)施方案中，披露了處理頭發(fā)的方法。該方法可以包括施加個(gè)人護(hù)理制劑 至頭發(fā)的步驟，所述的個(gè)人護(hù)理制劑包含從約0. 001%至50%的可溶性角蛋白衍生物。所 述可溶性角蛋白衍生物可以是如上文在第一實(shí)施方案中描述的可溶性角蛋白衍生物?？梢?使用任何適宜的個(gè)人護(hù)理制劑，如上文所述那些個(gè)人護(hù)理制劑中的任意者。在第六實(shí)施例 的方法中使用的個(gè)人護(hù)理制劑可以按照任何合適的量施加至任意類(lèi)型的頭發(fā)。在第七實(shí)施方案中，披露了處理頭發(fā)的備選方法。該方法可以包括施加個(gè)人護(hù)理 制劑至頭發(fā)的步驟，所述的個(gè)人護(hù)理制劑包含添加劑。該添加劑可以包含可溶性角蛋白衍 生物。所述可溶性角蛋白衍生物可以是如上文在第一實(shí)施方案中描述的可溶性角蛋白衍生 物?？梢栽趥€(gè)人護(hù)理制劑中包含任意適宜劑量的添加劑并且任意適宜量的個(gè)人護(hù)理制劑可 以施加至頭發(fā)。含有添加劑的個(gè)人護(hù)理制劑可以施加至任意類(lèi)型的頭發(fā)并且可以是任意的 上述個(gè)人護(hù)理制劑。在第八實(shí)施方案中，披露了可溶性角蛋白衍生物的混合物。這種可溶性角蛋白混 合物可以包含兩種或更多種可溶性角蛋白衍生物?？扇苄越堑鞍籽苌锏幕旌衔锟梢跃哂?受歡迎的體積和半胱氨酸含量。提高的半胱氨酸含量(尤其是S-磺化Cys和氧化Cys (磺 基丙氨酸))可以引起作為個(gè)人護(hù)理制劑的材料的效能改善。改善的體積可以使得制造流 程更有商業(yè)可行性。所述可溶性角蛋白衍生物可以是如上文在第一實(shí)施方案中描述的任意的那些可 溶性角蛋白衍生物。在本實(shí)施例的一個(gè)方面，可溶性角蛋白衍生物是如上文更詳細(xì)描述的 具有取代的化學(xué)基團(tuán)的可溶性角蛋白部分。在混合物中使用的可溶性角蛋白衍生物的可溶 性角蛋白部分可以是中間絲蛋白、高硫蛋白或高甘氨酸-酪氨酸蛋白。所述可溶性角蛋白 部分可以是S-磺化或部分氧化的。如前詳述，可溶性角蛋白部分可以是完整的或水解的?？扇苄越堑鞍籽苌锏幕旌衔锟梢园哂胁煌堑鞍撞糠值目扇苄越堑鞍籽?生物。換句話說(shuō)，如果可溶性角蛋白衍生物的混合物包含第一可溶性角蛋白衍生物(其包 含具有取代的化學(xué)基團(tuán)的角蛋白)和第二可溶性角蛋白衍生物(其包含具有取代的化學(xué)基 團(tuán)的角蛋白)，則第一可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分可以與第二可溶性角蛋白衍生物 的角蛋白部分不同。在一個(gè)具體例子中，第一可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分是角蛋白 中間絲蛋白而第一可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分可以是高硫蛋白或高甘氨酸-酪氨 酸蛋白。可以在制造可溶性角蛋白衍生物的混合物的方法中使用所述角蛋白部分的任意組
合 O在本實(shí)施方案的另一個(gè)方面，可以根據(jù)每種可溶性角蛋白衍生物的可溶性角蛋白 衍生物組分選擇不同可溶性角蛋白衍生物在可溶性角蛋白衍生物的混合物內(nèi)部的比率。在 第一可溶性角蛋白衍生物包含中間絲蛋白并且第二可溶性角蛋白衍生物包含高硫蛋白或 高甘氨酸-酪氨酸蛋白的情況下，第一可溶性角蛋白衍生物對(duì)第二可溶性角蛋白衍生物的比率可以是任意的合適比率。在一個(gè)方面，該比率由所用的角蛋白來(lái)源決定。在第九實(shí)施方案中，披露了產(chǎn)生可溶性角蛋白衍生物的混合物的方法。該方法一 般可以包括將兩種或更多種可溶性角蛋白衍生物混合在一起的步驟。在本實(shí)施例的一個(gè)方 面，所述可溶性角蛋白衍生物是如上文更詳細(xì)描述的具有取代的化學(xué)基團(tuán)的可溶性角蛋白 部分。在混合物中使用的可溶性角蛋白衍生物的可溶性角蛋白部分可以是中間絲蛋白、高 硫蛋白或高甘氨酸-酪氨酸蛋白。所述可溶性角蛋白部分可以是S-磺化或部分氧化的。如 前詳述，可溶性角蛋白部分可以是完整的或水解的。在第九實(shí)施方案的方法中混合在一起的可溶性角蛋白衍生物可以包含具有不同 角蛋白部分的可溶性角蛋白衍生物。換句話說(shuō)，如果可溶性角蛋白衍生物的混合物包含第 一可溶性角蛋白衍生物(其包含具有取代的化學(xué)基團(tuán)的角蛋白)和第二可溶性角蛋白衍生 物(其包含具有取代的化學(xué)基團(tuán)的角蛋白)，則第一可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分可 以與第二可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分不同。在一個(gè)具體例子中，第一可溶性角蛋白 衍生物的角蛋白部分是角蛋白中間絲蛋白而第一可溶性角蛋白衍生物的角蛋白部分可以 是高硫蛋白或高甘氨酸-酪氨酸蛋白?？梢栽谥圃炜扇苄越堑鞍籽苌锏幕旌衔锏姆椒ㄖ?使用所述角蛋白部分的任意組合。在本實(shí)施例的另一個(gè)方面，不同可溶性角蛋白衍生物可以基于每種可溶性角蛋白 衍生物的可溶性角蛋白衍生物組分以某些比率混合在一起。例如，如果包含中間絲蛋白的 第一可溶性角蛋白衍生物與包含高硫蛋白或高甘氨酸-酪氨酸蛋白的第二可溶性角蛋白 衍生物混合，第一可溶性角蛋白衍生物對(duì)第二可溶性角蛋白衍生物的比率可以是任意的合 適比率。在一個(gè)方面，該比率由所用的角蛋白來(lái)源決定。
實(shí)施例實(shí)施例1制造琥珀酰化角蛋白衍生物 本實(shí)施例描述針對(duì)可溶性角蛋白衍生化的研究。它描述琥珀酰化可溶性角蛋白的 方法和所得衍生物的性能。通過(guò)添加琥珀酐至反應(yīng)進(jìn)行完整可溶性角蛋白中間絲蛋白的琥珀酰化。琥珀酐與 完整可溶性角蛋白IFP中的伯胺基(賴(lài)氨酸和氨基端)反應(yīng)并且較小程度地與羥基氨基酸 (絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸)反應(yīng)以產(chǎn)生羧酸官能性。如應(yīng)當(dāng)理解，在賴(lài)氨酸基的情況下，這 意味著一個(gè)有時(shí)候?yàn)檎娦缘陌被嵋呀?jīng)被帶負(fù)電荷的羧基取代。這應(yīng)當(dāng)使完整可溶性角 蛋白IFP在特性方面更為負(fù)電性。更具體地，該方法由以下步驟完成⑴在水浴中冷卻pH8的IOOg完整可溶性角蛋白IFP(3. 2%溶液)至5°C ；(ii)經(jīng)1小時(shí)時(shí)間添加8. 3g琥珀酐。反應(yīng)期間通過(guò)添加ImolL-1NaOH將pH值維 持在8與8. 2之間；(iii) 一旦pH值停止變化，攪拌該溶液1小時(shí)；(iv)添加酸以降低溶液pH至3并析出可溶性角蛋白衍生物；(ν)可溶性角蛋白衍生物通過(guò)過(guò)濾收集并用水洗滌后凍干以產(chǎn)生樣品'SPD'。將上述方法遵循相同流程對(duì)其他三種情況重復(fù)，不過(guò)使用較少的琥珀酐 4. 15g(SPC)，2. 075g(SPB)和Ig(SPA)琥珀酐，以產(chǎn)生樣品。隨后分析這些樣品以確定反應(yīng)程度。使用灰化法確定樣品中存在的可溶性角蛋白衍生物的量。將樣品加熱至700°C并 且將留下的固體作為完整固體的百分?jǐn)?shù)測(cè)量。所分析的樣品產(chǎn)生高于99. 5%的固體中可溶 性角蛋白衍生物含量，這顯示所得固體是基本純的固體角蛋白衍生物。在Perkin-EImer2000 FT-IR上將全部樣品的紅外光譜記錄為KBr盤(pán)。SPB、SPC 和SPD的紅外光譜因羰基而在約1730CHT1處顯示迥異信號(hào)，表明存在與可溶性角蛋白衍生 物連接的酸基團(tuán)。SPA的光譜僅顯示微弱羰基信號(hào)?？扇苄越堑鞍籽苌锏娜〈潭?DS) 由反應(yīng)中的過(guò)量琥珀酐決定。需要龐大過(guò)量以獲得高DS。使用Bertrand-Harb等人的OPA(鄰苯二甲醛)法在可溶性角蛋白衍生物中檢測(cè) 到伯胺。50ml OPA標(biāo)準(zhǔn)液從25ml的0. Imoir1硼酸鈉、2. 5ml的20% SDS、40mg溶解于Iml MeOH中的OPA和100 μ L巰基乙醇制備。體積用水補(bǔ)足至50ml。該試劑每日配制并且貯藏 在25°C黑暗下直至使用。將未知樣品以2g/L蛋白質(zhì)濃度于δΟπιπιοΙΓ1磷酸鈉緩沖液中制 備。100 μ L每種樣品與2ml OPA標(biāo)準(zhǔn)液混合，孵育2分鐘后記錄340nm處的吸光率。使用 L-亮氨酸制備0. 25至2. OOmmolL-1的一系列標(biāo)準(zhǔn)品，從所述標(biāo)準(zhǔn)品衍生校準(zhǔn)曲線。表1顯 示如使用OPA法所確定的酪氨酸取代的程度。表1 :0ΡΑ法所確定的酪氨酸取代的程度 在琥珀?；磻?yīng)中，N-琥珀?；某潭韧ǔ８哂?-琥珀酰化，原因在于pH> 5快 速斷裂的0-琥珀酰酪氨酸酯鍵。使用膠體滴定技術(shù)測(cè)定分子的電荷。向5ml的0. 1 %可溶性角蛋白衍生物溶液添 加緩沖液(PH 3. 5、7或9. 5)和幾滴甲苯胺藍(lán)并用1/400N聚(乙烯基)硫酸鉀(PVSK)溶 液滴定以確定溶液中存在的正電荷的量。為了確定負(fù)電荷數(shù)量，向已知量的1/400N氯化聚 (二烯丙基二甲基銨)(PDAC)中添加5ml的0. 1 %可溶性角蛋白衍生物溶液、所述緩沖液 PH 3.5、7或9.5)和幾滴甲苯胺藍(lán)并用PVSK反滴定。預(yù)期琥珀?；a(chǎn)生了負(fù)電荷存在增 加和正電荷更少的可溶性角蛋白衍生物，原因是帶正電荷的賴(lài)氨酸基已經(jīng)被變成帶負(fù)電荷 的C00—。膠體滴定法顯示情況正是這樣，即可測(cè)量的負(fù)電荷數(shù)量大幅提高并且可測(cè)量的正 電荷數(shù)量是幾乎測(cè)量不到的(圖1和表2)。觀察到存在的負(fù)電荷的量隨琥珀?；潭仍黾?而提高，從而表明已經(jīng)生成負(fù)電性遞增的物質(zhì)種類(lèi)。表2 使用膠體滴定法測(cè)量的電荷量。 通過(guò)在pH2至10之間制備可溶性角蛋白衍生物的分散體測(cè)量pH溶解度曲線， 其中振蕩所述分散體1小時(shí)(每隔15分鐘監(jiān)測(cè)pH并根據(jù)需要添加酸/堿)。將固形物過(guò) 濾出、干燥并稱(chēng)重以確定在所設(shè)定PH處溶解的可溶性角蛋白衍生物的量。pH-%溶解度的 曲線允許估計(jì)等電點(diǎn)或Pl和化學(xué)修飾對(duì)Pl的影響。PH溶解度曲線(圖2)顯示酸性pH下 的溶解度隨DS增加而穩(wěn)定提高。這因添加帶負(fù)電荷的基團(tuán)引起，其中所述帶負(fù)電荷的基團(tuán) 引起分子的Pl遷移至更低的PH值，從而提高在該pH值之上的溶解度。使用Hitachi F-4000熒光分光光度計(jì)記錄可溶性角蛋白衍生物樣品的發(fā)射光譜。 使用的激發(fā)波長(zhǎng)是340nm，發(fā)射頻帶和激發(fā)頻帶均為5nm。樣品是水中的0. 01 %樣品。在表 3中顯示琥珀酰化蛋白質(zhì)的最大發(fā)射。表3:蛋白發(fā)射光譜的入_ 具有較低DS的樣品SPA顯示最大發(fā)射的輕微變化，最大值紅移至340. Onm。在樣 品SPD的情況下，增加琥珀?；鹱畲蟀l(fā)射的更大紅移和在369. 8處增長(zhǎng)的一個(gè)新拐點(diǎn)。 導(dǎo)入大體積的帶負(fù)電荷的琥珀?；鶊F(tuán)已經(jīng)導(dǎo)致更多色氨酸暴露于極性環(huán)境，可能通過(guò)因不 利的電荷排斥作用所致的可溶性角蛋白衍生物強(qiáng)制解折疊作用實(shí)現(xiàn)。使用上文方法學(xué)，但使用水解的角蛋白作為基礎(chǔ)蛋白質(zhì)材料而非完整角蛋白，本 發(fā)明人完成其他實(shí)驗(yàn)。在這種情況下，關(guān)于改變的電荷和取代作用方面所發(fā)現(xiàn)的結(jié)果是可 比較的。結(jié)果顯示角蛋白的琥珀?；a(chǎn)生了與起始角蛋白相比，具有增加的負(fù)電荷存在性 并具有不同特征的角蛋白衍生物。與非衍生的角蛋白相比，琥珀?；慕堑鞍籽苌镲@示 降低的pi，同時(shí)正電荷增加。實(shí)施例2-制造季銨化的角蛋白衍生物本實(shí)施例描述針對(duì)可溶性角蛋白衍生化的研究。它描述季銨化可溶性角蛋白的方法。通過(guò)添加帶正電荷的季銨鹽至可溶性角蛋白中的賴(lài)氨酸基和末端胺基進(jìn)行可溶 性角蛋白的季銨化。發(fā)現(xiàn)該反應(yīng)用具有相同特性的化合物每次在相同條件下進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)時(shí) 是可重復(fù)的。更具體地，可溶性角蛋白的季銨化可以使用以下方法進(jìn)行(i)向含有40. 25g可溶性角蛋白溶液的4個(gè)肖特瓶(3.2%，pH= 7. 57，每瓶含 有 1. 25g 蛋白質(zhì))以變化的量(QuatA 中 0. 625ml (0. 5g)，QuatB 中 1. 25ml (Ig)，QuatC 中 2. 5ml (2g)，QuatD中5ml (4g))添加縮水甘油三甲基氯化銨。(ii)將瓶子密封并充分振搖，之后置于預(yù)熱在40°C的振蕩培養(yǎng)箱中18小時(shí)。(iii)18小時(shí)后，從培養(yǎng)箱取出樣品并透析，之后凍干。隨后使用如上文對(duì)琥珀酰化所述的相同方法分析產(chǎn)生的樣品以確定季銨化反應(yīng) 的程度。下文是從該分析中發(fā)現(xiàn)的結(jié)果。透析后，通過(guò)灰化法發(fā)現(xiàn)樣品(QuatA-D)為大于99%的可溶性角蛋白，QuatA例 外，其中觀察到該樣品是96%的可溶性角蛋白。對(duì)每個(gè)樣品(QuatA-D)所測(cè)量的紅外光譜 沒(méi)有相對(duì)于完整角蛋白的光譜顯示可察覺(jué)的差異，因?yàn)槿〈簧婕叭魏螐?qiáng)烈的紅外活躍信 號(hào)。可溶性角蛋白衍生物的取代程度(DS)由反應(yīng)中所用縮水甘油三甲基氯化銨(GTMAC) 的量決定。表4顯示如使用OPA法所確定的賴(lài)氨酸的取代程度。表4.由OPA法確定的賴(lài)氨酸的取代程度 使用膠體滴定技術(shù)測(cè)定樣品Q(chēng)uatA-D的電荷。該技術(shù)利用帶正電荷的聚電解質(zhì)與 帶負(fù)電荷的聚電解質(zhì)之間的反應(yīng)來(lái)確定以未知方式存在的電荷的量。所用的帶負(fù)電荷的聚 電解質(zhì)-甲聚(乙烯基)硫酸鉀(PVSK)與甲苯胺藍(lán)相互作用，從而產(chǎn)生紫紅色溶液，因而 帶正電荷的物質(zhì)種類(lèi)可以直接用滴定直至藍(lán)色溶液變成紫紅色。帶負(fù)電荷的聚電解質(zhì)需要 具有添加至該溶液的已知量的帶正電荷的聚電解質(zhì)-二烯丙基二甲基氯化銨(PDAC)并隨 后用PVSK反滴定。需要在容許可電離基團(tuán)的幾個(gè)pH水平上重復(fù)對(duì)可溶性角蛋白衍生物的 滴定。該技術(shù)也依賴(lài)于能夠接近分子內(nèi)部的全部電荷。在可溶性角蛋白衍生物的情況下， 可溶性角蛋白衍生物經(jīng)歷的折疊過(guò)程可能引起一些電荷與可溶性角蛋白衍生物的其他部 分緊密結(jié)合并因而在滴定中是不可用的。在完整角蛋白上進(jìn)行的滴定顯示僅少量正電荷是 可檢測(cè)的，所述的量隨PH值升高而減少，同時(shí)可檢測(cè)到大約10倍更多的負(fù)電荷，所述的量 如預(yù)期那樣隨PH值升高而增加。對(duì)于角蛋白而言，已知這種角蛋白衍生物在本質(zhì)上是負(fù)電 性的，因?yàn)榘腚装彼峄鵖-磺化，其中所述的半胱氨酸基因低PH值而帶負(fù)電荷。當(dāng)對(duì)樣品 QuatA-D進(jìn)行滴定時(shí)，顯而易見(jiàn)在A-C的情況下正電荷的量略微增加并且對(duì)于D而言大范圍增加，同時(shí)負(fù)電荷的量顯著減少(表5和圖3)。樣品中存在的負(fù)電荷的量本不應(yīng)當(dāng)受化學(xué) 反應(yīng)影響并且負(fù)電荷的減少歸因于結(jié)合負(fù)電性物質(zhì)種類(lèi)的現(xiàn)存正電荷的量增加。在QuatD 的情況下，觀察到未檢測(cè)出負(fù)電荷物質(zhì)種類(lèi)。該樣品中賴(lài)氨酸的取代程度僅略微高于C中 的取代程度，然而該特點(diǎn)顯著地改變。可能原因是其他氨基酸可能以如此龐大的過(guò)量進(jìn)行 反應(yīng)。也可能是未反應(yīng)的GTMAC仍存在于溶液中，盡管因樣品接受的透析處理，這是不可能 的。表5.季銨化樣品中由膠體滴定法測(cè)定的電荷量 可溶性角蛋白衍生物在不同PH的溶解度部分地取決于在該pH下存在的已電離基 團(tuán)的數(shù)目?？扇苄越堑鞍籽苌飳⒃谄潆婋x點(diǎn)(Pl)處溶解性最小，因?yàn)樵谠揚(yáng)H處，分子的 總體電荷將是中性的。與溶解度強(qiáng)烈依賴(lài)于取代程度的完整角蛋白相比時(shí)，發(fā)現(xiàn)這些樣品 在酸性介質(zhì)中具有減少的溶解度。觀察到(85%取代的)樣品D在pH = 7處透析期間大 量地析出。圖4顯示完整角蛋白和季銨化樣品Q(chēng)uatA-D的pH-溶解度曲線。從該曲線顯而 易見(jiàn)樣品的溶解度在較低PH隨增加的季銨化而降低。發(fā)現(xiàn)樣品D是極不可溶解，在pH = 9 處僅達(dá)到60%溶解度。QuatD中溶解度的匱乏可能歸因于自我積聚，因?yàn)槟壳按嬖诿黠@量 的與負(fù)電荷締合的現(xiàn)存正電荷。這些結(jié)果表明Pl如所預(yù)期隨增加的SD移向更高的pH。在表6中顯示完整角蛋白和季銨化樣品Q(chēng)uatA-D的發(fā)射譜的λ_。完整角蛋白的 光譜在338nm處具有最大值。對(duì)于QuatA和B，這些偏移極小，而對(duì)于QuatC和D，見(jiàn)到向較 短波長(zhǎng)的輕微偏移。認(rèn)為色氨酸殘基暴露于極性更大環(huán)境造成發(fā)射紅移，因而藍(lán)移可能因 發(fā)射性氨基酸經(jīng)歷極性更小的環(huán)境而發(fā)生。正電荷的增加可能促進(jìn)蛋白質(zhì)更緊密地折疊， 而非先前遭遇的排斥效應(yīng)。表6.蛋白質(zhì)發(fā)射光譜的λΜΧ 上述實(shí)驗(yàn)使用完整角蛋白來(lái)形成衍生物。利用水解的角蛋白，產(chǎn)生其他水解角蛋 白衍生物(命名為QuatP)。QuatP溶液由如下步驟制造(i)將250ml的15. 1 %未修飾肽溶液置入容量為500ml肖特瓶。(ii)調(diào)節(jié)pH至9，因?yàn)檫@應(yīng)當(dāng)使得可用于反應(yīng)的游離胺基的量最大化。添加 12.5ml的GTMAC(縮水甘油三甲基氯化銨)并且將該瓶充分振搖并用石蠟?zāi)っ芊狻⒃撈?置于40°C和120轉(zhuǎn)/分鐘的預(yù)熱振搖水浴中48小時(shí)。季銨化肽QuatP的成功制備由OPA法證實(shí)。發(fā)現(xiàn)該修飾肽比未修飾的肽具有更 少的游離胺基(35. 77%游離胺基已經(jīng)被修飾)。計(jì)算修飾肽的終濃度是14. 38% (初始為 15. 1%).這個(gè)額外的實(shí)驗(yàn)表明基礎(chǔ)蛋白質(zhì)可以是完整角蛋白或水解的角蛋白部分。采取優(yōu)化季銨化反應(yīng)的另一項(xiàng)試驗(yàn)以理解什么影響取代程度并因而輔助發(fā)展時(shí) 間和試劑的最高效用法。總之，發(fā)現(xiàn)取代程度隨增加的時(shí)間和GTMAC量而提高。因此，優(yōu)化 其中時(shí)間是次要考慮的過(guò)程的一種方法將是使用更少試劑并允許該過(guò)程允許更長(zhǎng)的時(shí)間 段。也發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)溶液的濃度影響取代程度，使用更濃的蛋白質(zhì)溶液引起更多取代發(fā)生。對(duì) 樣品起作用的方法(例如透析或酸)不影響取代程度。發(fā)現(xiàn)反應(yīng)溶液的初始PH對(duì)取代程 度產(chǎn)生一些影響，同時(shí)最適pH值是 大約9。以上的結(jié)果顯示可溶性角蛋白的季銨化產(chǎn)生具有不同季銨化取代程度的角蛋白 衍生物，所述角蛋白衍生物相對(duì)于初始角蛋白顯示不同的生物學(xué)特性。所述結(jié)果還表明對(duì) 于季銨化角蛋白衍生物，Pi已經(jīng)升高并且現(xiàn)存正電荷的量也已經(jīng)增加。此外，顯示該過(guò)程 是可重復(fù)的并且可以?xún)?yōu)化以修整所需的取代程度。實(shí)施例3-脂肪酸取代描述了用于化學(xué)修飾可溶性角蛋白的備選辦法。在第一方法中，脂肪酸酰氯用來(lái)形成入下文示意圖4中所示的脂肪酸角蛋白衍生 物(FAP) 反應(yīng)式4
其中R=角蛋白或肽基底，X = NH或者0，[]n =重復(fù)的脂肪酸鏈。更具體地，使用以下方法進(jìn)行完整的可溶性角蛋白中間絲蛋白(IFP)與長(zhǎng)脂肪酸 鏈的反應(yīng)以形成第一樣品(FAPl)⑴在351于N2下經(jīng)10分鐘逐滴添加0. 41g草酰氯至無(wú)水CH2CI2(IOml)中的 0. 5g月桂酸；(ii)在35°C攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，隨后在真空下除去溶劑；(iii)將所得固體溶解在IOml丙酮中并逐漸滴加至25ml或者250ml的5%可溶 性角蛋白溶液，在PH = 8冰浴總劇烈攪拌；(iv)反應(yīng)期間通過(guò)添加0. Imol/LNaOH將pH維持于最初水平；(ν)繼續(xù)攪拌，隨后降低pH以析出可溶性角蛋白衍生物；(vi)將固體濾出，用丙酮洗滌以除去任何未反應(yīng)的月桂酸，并隨后凍干。通過(guò)改變?cè)鹿鹚?草酰氯的量產(chǎn)生名為FAP2、FAP3和FAP4的其他樣品，并且在 FAP2的情況下，還通過(guò)降低pH至7產(chǎn)生樣品。然后分析所述樣品以確定反應(yīng)程度。在名為“EDC偶聯(lián)”的第二種方法中，使用偶聯(lián)劑EDC(鹽酸N_(3_ 二甲氨基丙 基)-N’ -乙基碳二亞胺)，使中間絲蛋白與脂肪酸鏈借助示意圖5中所示的過(guò)程反應(yīng)。 其中R =角蛋白或肽基底，X = NH或0并且[]n =重復(fù)的脂肪酸鏈?；瘜W(xué)反應(yīng)式5更具體地，用來(lái)形成EDC產(chǎn)物(命名為“EDCP”)的方法包括步驟(i)將無(wú)水乙酸乙酯(IOml)中的0. Ig月桂酸，57mgN_羥基琥珀酰亞胺(NHS)和 0. 112gEDC在室溫N2下混合在一起；(ii)將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜并隨后過(guò)濾以除去二環(huán)己基脲，隨后在真空下除去溶 劑；(iii)將所得固體溶解于5ml THF(四氫呋喃)中并緩慢添加至含有δχΚ^πιοΙΓ1 碳酸氫鈉的50ml的5%可溶性角蛋白溶液；(iv)隨后將溶液攪拌過(guò)夜，之后降低pH以析出可溶性角蛋白衍生物；(ν)將固體濾出并凍干。分析所述樣品以確定反應(yīng)程。在下表7中匯總主要過(guò)程變化和由OPA法確定的測(cè)量賴(lài)氨酸取代程度的概述。表7. OPA方法測(cè)定賴(lài)氨酸取代程度 可溶性角蛋白衍生物的取代程度(DS)主要由反應(yīng)中所用月桂酰氯或月桂酸的量 決定。如可以理解，難以獲得100%賴(lài)氨酸基取代，因?yàn)槟承┵?lài)氨酸因可溶性角蛋白衍生物 折疊而處在不可接近的位置。觀察到對(duì)這些樣品所實(shí)現(xiàn)的取代量少于用季銨化和琥珀?；?所實(shí)現(xiàn)的取代量。這歸因于月桂酸的巨大尺寸，從而阻止月桂酸接近某些賴(lài)氨酸位置。似 乎可獲得的最大取代作用可以是約50%，因?yàn)樘岣咴噭┑牧扛哂?0倍過(guò)量已經(jīng)對(duì)反應(yīng)程 度產(chǎn)生不利影響。測(cè)量FAP3的疏水性表明FAP3比未修飾的角蛋白明顯更為疏水。使用上文方法學(xué)， 但使用水解的角蛋白作為基礎(chǔ)蛋白質(zhì)材料而非完整角蛋白，本發(fā)明人完成其他實(shí)驗(yàn)。在這種情況下，關(guān)于改變的電荷和取代作用方面所發(fā)現(xiàn)的結(jié)果是可比較的?；?上文脂肪酸衍生物的修飾法包括使用脂肪酸。例如，可以使用其他脂肪酸，尤其由長(zhǎng)鏈鹽如 c12、c14、c16、c4(l或更長(zhǎng)鏈鹽組成的那些脂肪酸。在其他實(shí)施例中，可以使用其他試劑替代草 酰氯，例如亞硫酰氯、無(wú)機(jī)鹵化物和通常帶COCI基團(tuán)的試劑。實(shí)施例4-其他角蛋白部分的用途來(lái)自中間絲蛋白部分(IFP)的完整角蛋白是優(yōu)選的蛋白部分。如本說(shuō)明書(shū)中較早 所指出，角蛋白可以分割成其他部分，包括作為纖維皮層基質(zhì)中以及角質(zhì)層中存在的球狀 蛋白質(zhì)的硫蛋白(HSP)和主要存在于纖維皮層中的高甘氨酸酪氨酸蛋白(HGTP)。應(yīng)當(dāng)理解 本發(fā)明不僅限于中間絲蛋白部分，因?yàn)镠SP和HGTP部分也具有該蛋白質(zhì)中的相同胺基和相
同羥基氨基酸。例如，對(duì)于使用HSP和HGTP的琥珀?；^(guò)程將發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)將如以下示意圖6
中所示 其中R =角蛋白或者肽基底示意圖6
中所示
類(lèi)似地，對(duì)于使用HSP和HGTP的季銨化過(guò)程將發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)將如以下示意圖7 其中R =角蛋白或者肽基底示意圖7對(duì)于使用HSP和HGTP的脂肪酸或者EDC偶聯(lián)過(guò)程將發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)將如以下示 意圖8中所示 R =角蛋白或者肽基底，X = N或O并且[]n =重復(fù)的脂肪酸鏈。示意圖8實(shí)施例5-表面活性劑特性測(cè)試可溶性角蛋白衍生物的表面活性特性與其他非衍生性角蛋白例如可溶性中間絲 蛋白部分平行地測(cè)試，并與其他已知量值比較。在實(shí)施例1和實(shí)施例2中分別描述的樣品SPC和QuatC完成表面張力測(cè)量。如下 表8中所示，可溶性角蛋白衍生物的表面張力降低特性是與輕度污染的自來(lái)水和非衍生化 角蛋白可比的。令人驚訝地，僅需要一半濃度的非衍生角蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)相同的表面張力降低效果。表8.表面張力測(cè)量 還進(jìn)行起泡實(shí)驗(yàn)以檢驗(yàn)所引起的泡沫高度和泡沫在塌陷前保持完整的時(shí)間。如下 表9中所示，就發(fā)泡和塌陷時(shí)間而言，可溶性角蛋白衍生物表現(xiàn)得明顯好于非衍生化角蛋 白。令人驚訝地，為達(dá)到相同效果，可溶性角蛋白衍生物的濃度也明顯小于非衍生化角蛋白。表9.起泡實(shí)驗(yàn) 完成其他實(shí)驗(yàn)以通過(guò)形成油包水(w/o)乳液檢驗(yàn)可溶性角蛋白衍生物的乳化作 用。該方法包括將15ml烹調(diào)用大豆油(樣品1)或者15ml蓖麻油(樣品2)與15ml水在IOml可溶性角蛋白衍生物存在下振搖的步驟。隨后將分散體靜置大約1分鐘并隨后檢驗(yàn)以 檢查乳液的存在或不存在。在兩種樣品中，油包水(w/o)乳液形成，這表明本發(fā)明的可溶性 角蛋白衍生物可以作為乳化劑并且具有有用的表面活性劑特性?？偠灾?，所述可溶性角蛋白衍生物顯示出表面活性劑特。此外，這些特性顯示與 非衍生化角蛋白差異明顯。實(shí)施例6—含有衍生化角蛋白的個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品和制劑現(xiàn)在提供使用本發(fā)明可溶性角蛋白衍生物的多種個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品的例子。應(yīng)當(dāng)理解 因多種有益特性，所述可溶性角蛋白衍生完全適合在個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中使用。例如，所述可溶 性角蛋白衍生物具有與皮膚結(jié)合并截留水分于皮膚中從而濕化皮膚的能力。如應(yīng)當(dāng)從本說(shuō) 明書(shū)的稍后例子中理解，所述可溶性角蛋白衍生物特性也用于護(hù)發(fā)產(chǎn)品中，因?yàn)榭扇苄越?蛋白衍生物的使用由于梳理力降低和“感覺(jué)”改善而使頭發(fā)打理更容易。以下例僅以說(shuō)明 方式提供并且不不當(dāng)視為限制性的。在每種制劑中，以說(shuō)明性水平包含“角蛋白衍生物。角蛋白衍生物是已經(jīng)使用包含 上文所述方法加以修飾以包含正電菏或負(fù)電荷區(qū)域的角蛋白。除非另外說(shuō)明，便利的是提 供稀薄水溶液形式的可溶性角蛋白衍生物并且在所述制劑種包含適宜量的這種溶液以實(shí) 現(xiàn)所示的角蛋白衍生物水平。百分?jǐn)?shù)表述為W/V。調(diào)理洗發(fā)劑十二烷基硫酸鈉28%25.0%月桂醇聚醚-2磷酸酯鈉70 %4.0椰油酰胺DEA 70%3.5椰油酰丙基甜菜堿(30% )3.0角蛋白衍生物0.5氯化鈉適量檸檬酸適量香料適量防腐劑適量水適量至100 方法混合35. Og水、桂醇聚醚-2磷酸酯鈉菏十二烷基硫酸鈉。加熱至65°直到 溶解。添加椰油酰胺DEA并使其冷卻。將甜菜堿與水混合并添加至相A。添加角蛋白衍生 物，用檸檬酸調(diào)節(jié)PH至6. 5。根據(jù)需要，添加防腐劑和香料，用氯化鈉調(diào)節(jié)至所需的稠度并
添加其余水。發(fā)膠卡波姆(CarbopolUltrez 10)0. 5%EDTA 二鈉0.05甘油4. 0三乙醇胺(20%)3.0角蛋白衍生物0.45防腐劑適量芳香適量
水適量至100方法加熱60g水至70°并向其添加卡波姆、EDTA 二鈉和甘油。劇烈混合。冷卻。 添加三乙醇胺以調(diào)節(jié)PH值至6. 3。添加角蛋白衍生物。并入防腐劑并添加其余水。徹底混
合并按照需要添加香料。透明的潔體/潔面劑和洗發(fā)劑十二烷基硫酸銨28%25.0%月桂醇聚醚磺基琥珀酸酯二鈉20.0椰油酰丙基甜菜堿8. 0角蛋白衍生物0.5氯化鈉適量香料(parfum)適量防腐劑適量水(aqua)適量至 100護(hù)發(fā)素西曲氯銨5.0%硬脂醇4. 5角蛋白衍生物0.25香料適量防腐劑適量水適量至100發(fā)用摩絲角蛋白衍生物0.25%氫化牛脂三甲基氯化銨0.20壬苯醇醚-100. 35醇10.0丁燒-4810. 0水適量至100固發(fā)液卡波姆(CarbopolUltrez 10)2. 0%礦物油(輕)0. 20角蛋白衍生物0.25醇37. 5香料適量水適量至100發(fā)膠VA/巴豆酸酯A/馬來(lái)酸異丁酯共聚物(Resyn 28-2930)1. 60%氨基甲基丙醇0. 15PEG-75 羊毛月旨0.20
角蛋白衍生物0.25醇65.05丁燒 3028.0燙發(fā)前藥水TEA十二醇硫酸鹽30.0%椰油酰丙基二甲胺氧化物10.0椰油酰胺DEA7. 5椰油酰胺丙基甜菜堿20.0椰油酰胺MEA3. 0角蛋白衍生物0.5香料適量防腐劑適量水適量燙發(fā)后藥水角蛋白衍生物0.5%椰油酰丙基二甲胺氧化物10.0甘油3. 0羥丙基甲基纖維素1.5香料適量防腐劑適量水適量至100保濕霜鯨蠟醇和鯨蠟硬脂醇聚醚-205.0%鯨蠟硬脂醇2. 0礦物油(輕)5. 0角蛋白衍生物0.5防腐劑0. 3香料適量水適量至100爽身水和洗手劑聚甘油-3甲基葡萄糖二硬脂酸酯4. 0%硬脂酰/山崳醇蜂蠟酸酯3. 0辛基十二烷醇4. 0鱷梨樹(shù)油6. 0礦物油3. 0西蒙得木油2. 0角蛋白衍生物0.5神經(jīng)酰胺III0.2丙二醇3. 0
防腐劑 適量香料(香精) 適量水適量至100抗皺處理霜 山崳酰乳酰乳酸鈉 鯨蠟硬脂醇 2.0%甘油硬脂酸酯 2.6棕櫚酸異丙酯 6.0向日葵籽油 6.0角蛋白衍生物 0.5甘油3.0維生素C磷酸鎂和卵磷脂 6.0(咖啡因-C，R. 1. Τ. A) 防腐劑 適量水 適量至100面部保濕霜 肉豆蔻醇乳酸酯3.0%羊毛脂醇聚醚-25 (和)鯨蠟醇聚醚_2 (和)油醇聚醚-25和1. 0 硬脂醇聚醚-25 (聚氧乙烯-25，羊毛脂醇)礦物油(70黏度)16. 5
凡士林3. 0
生育三烯酸1. 0
卡波姆9340. 75
角蛋白衍生物0. 5
三乙醇胺(10%水溶液)7. 5
防腐劑適量
香料適量
水適量至100
保濕爽身水
甲基葡萄糖二油酸酯2. 0%
甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯1. 5
甲基葡萄糖醇聚醚-201. 5
鯨蠟硬脂醇醇(和)鯨蠟ξ■脂醇聚醚-201. 5
棕櫚酸異丙酯3. 0
神經(jīng)酰胺3，己基癸醇2. 0
甲基葡萄糖聚醚-103. 0
角蛋白衍生物0. 5
卡波姆13420. 2
三乙醇胺0. 2
酯(和) 取物(Ea
香料適量
防腐劑適量
水適量至100
陽(yáng)離子爽身水液
異硬脂酰胺丙基月桂乙酰基二甲基氯化銨 5. 0% 乳酰胺MEA3. 0
異硬脂醇新戊酸酯15. 0
肉豆蔻酸肉豆蔻酯1.0
十六(烷)醇4.0
甘油異硬脂酸酯3. 5
角蛋白衍生物0.5
防腐劑適量
水適量至100
男性面部調(diào)理劑
卡波姆(Carbopol Ul trez 10)0. 4%
丙二醇1.0
PPG-5- 丁醇聚醚0. 5
β-葡聚糖2.0
PEG-60氫化蓖麻油0. 5
三乙醇胺(99%)0.4
角蛋白衍生物0.5
SD-39C酒精(定量)5. 0
防腐劑適量
香料適量
水適量至100
剃須后保濕處理劑
鯨蠟硬脂醇聚醚-12 (和)鯨蠟硬脂醇聚醚-20 (和)鯨蠟醇(和)鯨蠟醇棕櫚酸
甘油硬脂酸酯(Emulgade，Henkel) 6. 0%
鯨蠟硬脂醇1. 0
二辛基醚8. 0
辛基十二烷醇4. 0
甘油3.0
卡波姆(CarbopolUltrez 10)0. 3
角蛋白衍生物0.5
沒(méi)藥醇0. 2
水(和)透明質(zhì)酸鈉(和)小麥(Triticum vulgare)胚芽油(和)釀酒酵母提 shave, Pentapharm)4. 0
三乙醇胺適量
香料適量防腐劑 水
抗氧化霜 甘油(99.7% ) 黃原膠 EDTA 二鈉 氫化聚異丁烯 棕櫚酸異丙酯 凡士林
二甲基硅氧烷 環(huán)戊硅氧烷 硬脂醇聚醚_2 PEG-100硬脂酸鹽 鯨蠟醇
棕櫚酸乙基己酯
適量
適量至100
3. 0% 0. 15
0.05
1.0 5. 0 0. 75 0. 75 3. 0 1. 0
1.9
2.0 3. 0
聚丙烯酰胺(和)C13-14異構(gòu)烷(和)月桂醇聚醚_7 (sijpigel 305，Seppic) 角蛋白衍生物0.5
甘油(和)水(和)葡萄(Vitis vinifera)籽提取物(Collaborative)
防腐劑
香料
水
液體洗滌劑 十二烷基硫酸鈉 椰子酰胺DEA 角蛋白衍生物 氯化鈉 防腐劑 檸檬酸 水
淋浴凝膠 十二烷基硫酸鈉 月桂酰肌氨酸鈉 椰油酰胺丙基甜菜堿 椰油酰胺丙基羥磺酸甜菜堿 甘油
角蛋白衍生物 EDTA四鈉
適量 適量
適量至100
50% 3. 0 0. 25
適量
適量 適量
適量至100
35% 5. 0 10. 0 5. 0 2. 0 0. 15 0. 25
檸檬酸適量香料適量防腐劑適量水適量至100泡沫浴凝膠月桂基硫酸TEA40%月桂酰二乙醇胺10.0亞油酸二乙醇胺7.0PEG-75 羊毛脂油5. 0角蛋白衍生物0.25EDTA 四鈉0. 5香料適量防腐劑適量染料適量水適量至100指甲油——第一涂層角蛋白衍生物10%氫氧化鈉(4%)10.0角蛋白部分(SHSP或SPEP)適量十二烷基硫酸鈉適量染料或色素適量水適量至100亮甲油角蛋白衍生物10.0%角蛋白部分(SHSP或磺化角蛋白肽)適量氫氧化鈉(4%)10.0十二烷基硫酸鈉適量水適量至100睫毛膏PEG-83. 0%黃膠原0. 50四羥丙基乙二胺1. 3巴西棕櫚蠟8. 0蜂蠟4. 0異二十烷4. 0聚異丁烯4.0硬脂酸5. 0甘油硬脂酸酯1. 0角蛋白衍生物0.2510. 0 8. 0 2. 0
色素
聚氨基甲酸脂-1 VP/VA共聚物
防腐劑適量
香料適量
水適量至100 粉底液
聚山梨醇酯800. 1%
氫氧化鉀0. 98
角蛋白衍生物0.25
二氧化鈦/滑石粉，80%0.1
滑石粉3. 76
氧化鐵黃/滑石粉，80%0.8
氧化鐵紅/滑石粉，80 %0. 38
色氧化鐵黑/滑石粉，80%0. 06
丙二醇6.0
硅酸鎂鋁1. 0
纖維素膠0. 12 二-PPG-3十四烷基醚己二酸 12.0 鯨蠟硬脂醇(和)鯨蠟硬脂醇聚醚-20磷酸酯，3. 0 二鯨蠟醇磷酸酯(Crodafos CS 200酸)
硬脂醇聚醚-102. 0
鯨蠟醇0.62
硬脂醇聚醚_20. 5
防腐劑適量
水適量至100 剃須膏
椰油醇硫酸酯鈉5.0%
角蛋白衍生物0.25
甘油7.0
月桂醇磺基琥珀酸酯二鈉50. 0
EDTA 二鈉適量
氯化鈉適量
檸檬酸適量
香料適量
防腐劑適量
水適量至100 唇膏
辛基十二烷醇22%油醇
角蛋白衍生物
C30-45烷基聚甲基硅氧烷
羊毛脂油
凡士林
有機(jī)皂土 36 (Rheox) 抗氧化劑20 (Eastman) 色素/蓖麻油 防腐劑適量 環(huán)聚二甲基硅氧烷 亞硫酸鹽直發(fā)劑 卡波姆(Carbopol 940) 硫酸氫銨 縮二脲
鯨蠟硬脂醇聚醚-20 角蛋白衍生物 香料
氫氧化銨28% 水
直發(fā)后中和液 碳酸氫鈉 碳酸鈉 EDTA
鯨蠟硬脂醇聚醚-20 角蛋白衍生物 香料 水
舒緩前調(diào)理劑 陽(yáng)離子聚胺 咪唑烷基脲 角蛋白衍生物 香料 防腐劑 水
堿金屬氫氧化物直發(fā)劑(Lye) 皂土
十二烷基硫酸鈉 PEG-75羊毛脂 凡士林
8.O 0. 16 20. O 14. O 5. O 0. 6 0. 1 10. 0
適量至100
1.50%
9.0
10.0
2.0 0. 5 適量
適量至pH = 7. 2
適量至100
2. 35% 2. 94 0. 15 0. 2 0. 5 適量
適量至100
2. 0% 0. 25
0.5
適量 適量
適量至100
1.0% 1. 5
1. 5 12. 0
鯨蠟硬脂醇醇12. 0
氫氧化鈉3. 1
角蛋白衍生物0. 5
香料適量
水適量至100
舒緩后洗發(fā)洗發(fā)劑
十二烷基硫酸鈉10. 0%
椰油酰胺DEA3. 0
EDTA0. 2
角蛋白衍生物0. 5
檸檬酸適量至PH = 5
香料適量
防腐劑適量
水適量至100
生發(fā)油/角質(zhì)層保護(hù)劑
甘油5. 5%
EDTA0. 07
卡波姆(Carbopol Ultrez 10)0. 33
三乙醇胺(20% )1. 0
角蛋白衍生物0. 5
乙醇10. 0
防腐劑適量
水適量至100
免洗護(hù)發(fā)素
十六烷醇5. 0%
甘油硬脂酸酯3. 0
凡士林0. 7
肉豆蔻酸異丙酯1. 5
聚山梨醇酯601. 0
聚二甲基硅氧烷醇和環(huán)甲硅油4. 0
甘油7. 0
EDTA0. 1
D-泛醇0. 2
角蛋白衍生物0. 5
環(huán)甲基硅酮4. 0
香料適量
防腐劑適量
水適量至100
染頭后調(diào)理劑
季銨鹽-40角蛋白衍生物兩性離子_2羥乙基纖維素磷酸香料水一次性染發(fā)造型凝膠二甲聚硅氧烷共聚多元醇PPG-10甲基葡萄糖醚聚乙烯吡咯烷酮三異丙醇胺卡波姆(Carbopol940)月桂醇聚醚-23苯氧乙醇角蛋白衍生物乙二胺四乙酸D&C 橙色 4Ext D&C 紫色 2FD&C 黃色 60. 02酒精5. 0香料適量水適量至100實(shí)施例7-琥珀?；瘜?duì)頭發(fā)物理性質(zhì)的影響完成一項(xiàng)試驗(yàn)以確定與用工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品如十二烷基硫酸鈉(SLES)相比，用含有琥 珀?；堑鞍籽苌锏娜芤悍磸?fù)洗滌后發(fā)束的物理性質(zhì)。進(jìn)行電子顯微鏡電鏡(SEM)和 TLC分析以探索因?qū)Πl(fā)束進(jìn)行的不同處理所致發(fā)纖維的表面形態(tài)和脂質(zhì)含量變化。通過(guò)稱(chēng)量大約1. 5g天然紅色頭并用線繩將頭發(fā)扎成束而形成6條發(fā)束。這些發(fā) 束通過(guò)用2%十二烷基硫酸鈉(SLES)溶液(從70% SLES制備并稀釋以獲得2%溶液)洗 滌2分鐘進(jìn)行預(yù)處理并用溫水(約40°C )充分淋洗超過(guò)2分鐘。隨后，發(fā)束在空氣中干燥。之后，使用以下方法學(xué)對(duì)發(fā)束進(jìn)行不同的洗滌處理(每個(gè)洗滌處理完成兩次)· SLES洗滌處理使用SLES洗滌頭發(fā)1周時(shí)間。如此方式完成洗滌將發(fā)束置于 振搖臺(tái)上的5% SLES溶液中1小時(shí)，之后用溫水(約40°C )徹底淋洗(直至無(wú)泡沫，無(wú)表 面活性劑留下))2分鐘并隨后在空氣中干燥。該洗滌方法每天進(jìn)行2次，總計(jì)10次洗滌?！そ堑鞍籽苌锵礈焯幚?。使用琥珀酰化角蛋白衍生物(在較旱例子中叫做樣 品“SPC”)洗滌頭發(fā)1周時(shí)間。洗滌如上所述完成，因而將發(fā)束置于振搖臺(tái)上的5% SLES 溶液中1小時(shí)，之后用溫水(約40°C )徹底淋洗(直至無(wú)泡沫，無(wú)表面活性劑留下)2分鐘 并隨后在空氣中干燥。該洗滌方法每天進(jìn)行2次，總計(jì)10次洗滌。洗滌后，獲得一式兩份標(biāo)記的頭發(fā)樣品(A，B)SLES洗滌的頭發(fā)；(C，D)SPC洗滌的
2, 0%0.54, 02.0
適量調(diào)節(jié)pH = 4. 5
適量
適量至100
1.5%1, 02.51.10 61, 00.20.50.01
0. 12 0. 02毛發(fā)；(E，F(xiàn))未處理的頭發(fā)。電子顯微鏡電鏡(SEM)分析在全部頭發(fā)樣品(A至F)上進(jìn)行電子顯微鏡電鏡分析，以評(píng)價(jià)不同處理所致的發(fā) 纖維表面形態(tài)的可能改變。為此，使用導(dǎo)電碳膠帶將發(fā)樣品封裝到IOmm黃銅端頭并且從金/鈀源濺射鍍膜。 鍍層厚度為約200埃。使用Jeol JSM 6100掃描電子顯微鏡研究樣品。該顯微鏡以7. OkV 操作并且在15mm工作距離上觀察樣品。每個(gè)頭發(fā)樣品觀察10根纖維并拍攝代表性圖像。 獲得的圖像在圖5-10中顯示。所得圖像表明樣品A(SLES洗滌的頭發(fā))顯示全部樣品的角質(zhì)層損傷最嚴(yán)重，表明 SLES洗滌方法是導(dǎo)致頭發(fā)表面最嚴(yán)重?fù)p傷的過(guò)程。這種損傷，特別是角質(zhì)層立起，可以在從 頭發(fā)表面洗去所述產(chǎn)品時(shí)發(fā)生。對(duì)SPC處理的頭發(fā)觀察到較少損傷。結(jié)果還表明殘留物存在于全部樣品上，但是如所預(yù)料那樣，未處理的頭發(fā)樣品 (樣品E和F)顯示最少的殘留物。在使用角蛋白衍生物溶液SPC (樣品C和D)處理的頭發(fā) 樣品上觀察到最多殘留物。這些樣品上多個(gè)區(qū)域內(nèi)角化層模糊，顯示一層相對(duì)持久的表面 活性蛋白質(zhì)層保護(hù)該角化層。脂質(zhì)的萃取分析全部頭發(fā)樣品(A至F)的脂質(zhì)用200毫升15氯仿/甲醇(2 1)混合物用索氏 萃取法提取所有毛發(fā)(A至F)脂質(zhì)，首先用200毫升15氯仿/甲醇(2 1)共沸7小時(shí)并 最終，最后將浸泡在該氯仿/甲醇混合混合物中浸泡過(guò)夜。然后將不同的提取液濃縮，并在 分析前溶解于10毫升的ml氯仿和-甲醇(2 1)待用中。提取后，所得的三種提取物是 (一式兩份)(A，B)來(lái)自SLES所洗滌頭發(fā)的提取物；(C，D)來(lái)自SPC所洗滌頭發(fā)的；(E，F(xiàn)) 來(lái)自未處理頭發(fā)的提取物。如下表10中所示，與未處理頭發(fā)樣品提取的脂質(zhì)的量相比時(shí)，洗滌過(guò)的頭發(fā)樣品 (SLES和SPC處理)產(chǎn)生較低水平的提取脂質(zhì)。在兩種不同洗滌處理之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)所提取 脂質(zhì)的量的差異。表10-從不同頭發(fā)樣品提取的脂質(zhì)的百分?jǐn)?shù) 脂質(zhì)分析在氮?dú)饬飨赂稍锼鎏崛∥镏敝了鼈冞_(dá)到恒重，進(jìn)一步分析所提取脂質(zhì)的總量。 每種提取物用他通過(guò)薄層層析法用以下溶劑系統(tǒng)定性地分析各提取物醚石油乙醚 40-60 乙酸=100 97 3。通過(guò)TLC平板浸泡在10% CuS04/8% H3PO4溶液中10秒并 后將該平板在180°C加熱10分鐘，用所述溶液檢測(cè)到斑點(diǎn)。
在圖11顯示不同頭發(fā)樣品的脂質(zhì)的薄層層析分析結(jié)果。結(jié)果表明對(duì)于不同的頭 發(fā)樣品，可能在某些類(lèi)別的脂質(zhì)的量上存在細(xì)微差異。此外，這些差異太小而不能視為顯著 性沒(méi)有意義，這表明頭發(fā)內(nèi)部脂質(zhì)沒(méi)有因?qū)Πl(fā)束所作的處理而改變。試驗(yàn)總結(jié)在這個(gè)實(shí)施例中，比較了兩種不同的洗滌液方法的損傷作用，一種洗滌方法使用 工業(yè)表面活性劑(SLES)并且另一種方法使用琥珀?；琴|(zhì)蛋白衍生物(SPC)。發(fā)纖維的初 步處理結(jié)果表明兩種洗滌方法修飾了發(fā)纖維，導(dǎo)致感官效果(如所處理頭發(fā)的柔軟度和順 滑度)改變。SEM研究展示了因每個(gè)樣品接受的不同處理所致的頭發(fā)樣品表面形態(tài)狀況的差 異。比較兩種不同處理，SEM結(jié)果顯示SLES處理最有損傷性的并且SPC處理對(duì)發(fā)纖維涂層， 從而形成可以起到保護(hù)角質(zhì)層的持久表面活性蛋白質(zhì)層。提取物的TLC分析結(jié)果沒(méi)有顯示不同樣品之間的任何差異，表明發(fā)纖維的內(nèi)部脂 質(zhì)因所進(jìn)行的不同處理而改變。棚列8-崖挑驢H麵·■口向本研究的目的是確定水解的季銨化角蛋白衍生物對(duì)頭發(fā)的影響。將含有和不含有 角蛋白衍生物的護(hù)發(fā)理制劑施加至發(fā)束并且測(cè)量相關(guān)特性如梳理力(易打理性)并與可溶 性羊毛角蛋白肽和其他聚合調(diào)理劑比較。為了支持頭發(fā)梳理力結(jié)果，使用小組測(cè)驗(yàn)評(píng)價(jià)頭 發(fā)的感官特性(柔軟度等)。在本試驗(yàn)中使用的角蛋白衍生物樣品是如上所述的QuatP。使用每種發(fā)束中的大約3. 3g頭發(fā)組成4條發(fā)束。用2% SLES溶液(用準(zhǔn)備的70% SLES稀釋成2%的溶液)洗滌每條發(fā)束2分鐘， 用溫水(約40°C )徹底淋洗(洗至無(wú)泡沫，無(wú)表面活性劑殘留))2分鐘。接下來(lái)，將發(fā)束在 空氣中晾干。每條發(fā)束用2% SLES溶液(從70% SLES制備并稀釋以獲得2%溶液)洗滌 2分鐘并用溫水(約40°C )充分淋洗超過(guò)2分鐘。隨后，發(fā)束在空氣中干燥。在洗滌發(fā)束后和任何處理前，對(duì)發(fā)束進(jìn)行梳理力實(shí)驗(yàn)以消除可能的纏繞、打綹等 和確保全部發(fā)束具有相同初始特性。借助梳子向上梳理發(fā)束并記錄力量對(duì)伸長(zhǎng)圖。在完成 第一梳理后。該過(guò)程對(duì)每條發(fā)束重復(fù)總計(jì)10個(gè)梳理循環(huán)。記錄梳理次數(shù)和測(cè)試期間的任 何困難(如纏結(jié)，打綹等)。對(duì)于每個(gè)力量/伸長(zhǎng)圖，記錄3種不同參數(shù)平均力量(其如圖12中所示通過(guò)從 第一主峰到最后主峰取得量值并劃分成5等份，采用每列中的最高峰并外推至最高峰的力 軸確定)，由Instron儀給出的最高峰圖和最高峰。隨后計(jì)算幾何平均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差百 分?jǐn)?shù)，所述幾何平均值隨后用來(lái)確定已處理發(fā)束的梳理力。頭發(fā)樣品經(jīng)過(guò)以下處理·未處理。樣品1保持不處理，作為空白對(duì)照?！ふ{(diào)理劑基質(zhì)處理樣品2用蒸餾水濕潤(rùn)2分鐘。在濕潤(rùn)時(shí)，施加3g調(diào)理劑基質(zhì) 并使其留在頭發(fā)上2分鐘，之后用溫水(約40°C )徹底淋洗2分鐘。隨后在空氣中干燥頭 發(fā)。非衍生化水解角蛋白調(diào)理劑處理如此制備水解角蛋白調(diào)理劑添加1. Og水 解角蛋白并用調(diào)理劑基質(zhì)補(bǔ)足至100. 0g，隨后充分混合。樣品3用蒸餾水濕潤(rùn)2分鐘。在 濕潤(rùn)時(shí)，施加3g調(diào)理劑基質(zhì)并使其留在頭發(fā)上2分鐘，之后用溫水(約40°C)徹底淋洗2分鐘。隨后在空氣中干燥頭發(fā)?！?1 %季銨化角蛋白衍生物(名為'QUATP')調(diào)理劑處理如此制備QUATP角蛋 白衍生物(其按照例子1中所述的方法產(chǎn)生)調(diào)理劑添加1. Og QUATP并用調(diào)理劑基質(zhì) (與水解角蛋白所用的相同)補(bǔ)足至100. Og,隨后充分混合。樣品4用蒸餾水濕潤(rùn)2分鐘。 在濕潤(rùn)時(shí)，施加3g調(diào)理劑基質(zhì)并使其留在頭發(fā)上2分鐘，之后用溫水(約40°C )徹底淋洗 2分鐘。隨后在空氣中干燥頭發(fā)。在已經(jīng)處理并干燥全部發(fā)束后，測(cè)量梳理力。梳理力測(cè)量與預(yù)處理梳理力測(cè)量部 分中所述實(shí)施。該過(guò)程對(duì)每條發(fā)束重復(fù)總計(jì)10個(gè)梳理循環(huán)并相對(duì)于預(yù)處理結(jié)果計(jì)算幾何 平均值，并進(jìn)行一尾Student' s t檢驗(yàn)。表11-13總結(jié)了對(duì)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)所發(fā)現(xiàn)的梳理力平均值，其中完成所述實(shí)驗(yàn)來(lái)確定不 同頭發(fā)樣品的梳理參數(shù)。圖13-15顯示這些結(jié)果的曲線圖。表11-所測(cè)量梳理力的平均值 如上所示，所述結(jié)果顯示未處理與處理的頭發(fā)樣品之間在所測(cè)量的梳理力方面的 顯著差異(t-student檢驗(yàn)ρ < 0. 05)。全部結(jié)果引起梳理頭發(fā)需要的力量降低，這表明頭 發(fā)打理性改善。對(duì)不同處理的評(píng)價(jià)表明最好結(jié)果歸因于調(diào)理劑基質(zhì)處理，所述調(diào)理劑基質(zhì) 處理與未處理的頭發(fā)相比降低梳理力約60% (顯著差異，ρ < 0. 05)，與其他處理相比梳理 力降低約30%更低(顯著差異，ρ < 0. 05)。當(dāng)考慮平均梳理力值時(shí)，在Keratec-PEP處理 與QUATP處理之間不存在顯著差異。表12-所測(cè)量最高梳理力的平均值 (曲線圖和所報(bào)告的)最高峰數(shù)據(jù)也表明與未處理的值相比，3種處理方法通過(guò)減 少梳理頭發(fā)所需的梳理力而改善頭發(fā)打理性(顯著差異，student t檢驗(yàn)，ρ < 0. 05)。對(duì) 這3種不同處理的評(píng)價(jià)顯示調(diào)理劑基質(zhì)處理與QUATP調(diào)理劑處理之間不存在顯著差異。用 調(diào)理劑基質(zhì)的處理產(chǎn)生略微較好的結(jié)果，所述的調(diào)理劑基質(zhì)處理引起兩個(gè)處理力參數(shù)相對(duì)于未處理頭發(fā)值下降約58% (student t檢驗(yàn)ρ < 0. 05)并且與水解角蛋白處理值相比時(shí) 下降約 35% (student t 檢驗(yàn) ρ < 0. 05)。使用具有12名評(píng)判者的小組測(cè)驗(yàn)評(píng)價(jià)處理的頭發(fā)的感官特性。所述測(cè)驗(yàn)在空調(diào) 房間(20°C和60%相對(duì)濕度)中進(jìn)行，其中成對(duì)比較全部(未經(jīng)處理和處理的)4條發(fā)束并 且就每對(duì)樣品詢(xún)問(wèn)以下問(wèn)題1.哪條發(fā)束更柔軟？2.哪條發(fā)束更順滑？3.哪條發(fā)束你更喜歡？全部結(jié)果隨后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析=Spearman秩相關(guān)系數(shù)用來(lái)檢驗(yàn)不同評(píng)判者之間的 一致度并且卡方檢驗(yàn)用來(lái)調(diào)查志愿者的回答分布是否彼此不同。圖16顯示了評(píng)判者關(guān)于小組測(cè)驗(yàn)的選擇百分?jǐn)?shù)的結(jié)果。第一個(gè)統(tǒng)計(jì)分析表明在 3個(gè)問(wèn)題中全部評(píng)判者顯示高程度的一致性(顯著性水平P < 0. 05)。數(shù)據(jù)顯示在3個(gè)不 同測(cè)驗(yàn)中評(píng)判者在選擇QUATP調(diào)理劑處理的樣品和調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品方面存在明顯 趨向。比較這兩個(gè)樣品，QUATP調(diào)理劑處理存在略微較好的結(jié)果。對(duì)于測(cè)驗(yàn)1，結(jié)果顯示40%評(píng)判者認(rèn)為QUATP調(diào)理劑處理的樣品更柔軟，同時(shí)34% 評(píng)判者認(rèn)為調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品更柔軟，17%評(píng)判者認(rèn)為水解角蛋白處理的樣品更柔軟 并且最后的8%評(píng)判者認(rèn)為未處理的頭發(fā)樣品最柔軟(未處理與QUATP調(diào)理劑處理的樣品 之間顯著差異(ρ <0.05))。在第二測(cè)試中，可以再次見(jiàn)到=QUATP調(diào)理劑處理的樣品具有最高百分?jǐn)?shù)，44%評(píng) 判者選擇該樣品作為更柔軟的樣品(QUATP處理的樣品與未處理的樣品與水解角蛋白處理 的樣品之間顯著差異，P < 0. 05 ；QUATP處理的樣品與調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品之間無(wú)顯著差 異)，同時(shí)32%評(píng)判者傾向于調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品，18%評(píng)判者認(rèn)為水解角蛋白處理的 樣品更柔軟，并且6%評(píng)判者認(rèn)為未處理的樣品最柔軟。最后，在最末測(cè)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)相同的行為特征，評(píng)判者偏好QUATP(42% )和調(diào)理劑 基質(zhì)(38%)處理的頭發(fā)樣品(相對(duì)于未處理和水解角蛋白處理的樣品而言顯著差異ρ < 0. 05 ；這二者之間無(wú)顯著差異)。同時(shí)水解角蛋白調(diào)理劑(15% )和未處理(6% )的頭 發(fā)樣品的百分?jǐn)?shù)最低。試驗(yàn)總結(jié)數(shù)據(jù)證實(shí)了三種不同調(diào)理劑(QUATP調(diào)理劑、基礎(chǔ)調(diào)理劑、水解角蛋白調(diào)理劑)對(duì) 頭發(fā)的調(diào)理作用。這種調(diào)理作用由下降的梳理力顯示，所述的下降的梳理力反映為更健康、 更年輕的頭發(fā)表面并且與消費(fèi)者覺(jué)察頭發(fā)打理性更佳相關(guān)。研究結(jié)果還顯示與其他調(diào)理劑相比，納入低分子量季銨化角蛋白沒(méi)有顯著改善頭 發(fā)調(diào)理過(guò)程。但是比較所述兩種蛋白肽處理，QUATP肽似乎比水解角蛋白肽表現(xiàn)更好。實(shí)施例9完整季銨化角蛋白衍生物對(duì)頭發(fā)物理特性的影響本實(shí)施例的目的是評(píng)價(jià)來(lái)自羊毛的完整季銨化角蛋白對(duì)頭發(fā)的影響。本例中所用 的方法與上文例8中所用的方法相同，除了例8中所用的水解季銨化角蛋白(QimtP)用本 例中的完整季銨化角蛋白衍生物(命名為QUATC并在例2中描述)代替之外。在表14-16顯示梳理力結(jié)果，平均化所完成的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)。表-14所測(cè)量梳理力的平均值
取得的測(cè)量值顯示未處理與處理的頭發(fā)樣品之間在所測(cè)量梳理力方面的顯著差 異(計(jì)11如肚4檢驗(yàn)？<0.05)。全部結(jié)果引起梳理頭發(fā)需要的力量降低，這表明頭發(fā)打理 性改善。對(duì)不同處理的評(píng)價(jià)表明最好結(jié)果歸因于QUATC處理，其中所述QUATC處理相對(duì)于未 處理的頭發(fā)降低梳理力約55% (student-t檢驗(yàn)ρ < 0. 05)或相對(duì)于其他處理降低約30% 更低(s tudent-t 檢驗(yàn) ρ < 0. 05)。表-15所測(cè)量最高梳理力的平均值 表16-所報(bào)告最高梳理力的平均值 (曲線圖和所報(bào)告的)最高峰數(shù)據(jù)也表明與未處理的值相比，3種處理方法通過(guò)減 少梳理頭發(fā)所需的梳理力而改善頭發(fā)打理性(顯著差異，student t檢驗(yàn)，ρ < 0. 05)。對(duì) 這3種不同處理的評(píng)價(jià)顯示隨QUATC處理存在最明顯的結(jié)果，其中所述的QUATC處理引起 兩個(gè)處理力參數(shù)相對(duì)于未處理的頭發(fā)值下降約60% (student t檢驗(yàn)ρ < 0. 05)并且與其 余調(diào)理劑處理相比時(shí)下降約30% (student t檢驗(yàn)ρ < 0. 1)。圖17顯示了評(píng)判者關(guān)于小組測(cè)驗(yàn)的選擇百分?jǐn)?shù)的結(jié)果。第一個(gè)統(tǒng)計(jì)分析表明在 3個(gè)問(wèn)題中全部評(píng)判者顯示高程度的一致性(顯著性水平P < 0. 05)。數(shù)據(jù)顯示在3個(gè)不 同測(cè)驗(yàn)中評(píng)判者在選擇QUATP調(diào)理劑處理的樣品和完整角蛋白調(diào)理劑處理的樣品方面存 在明顯趨向。第1次測(cè)試結(jié)果顯示，小組測(cè)驗(yàn)70%評(píng)判者70%回答者選擇QUATP調(diào)理劑和完整 角蛋白調(diào)理劑處理的樣品為更柔軟，12%回答者認(rèn)為未處理的樣品是最柔軟的樣品(未處 理與蛋白質(zhì)處理的樣品之間顯著差異P < 0. 05)，并且18%回答者認(rèn)為調(diào)理劑基處理的樣 品最柔軟，盡管在所述不同的處理之間不存在顯著差異。在第二測(cè)試中，可以再次見(jiàn)到70%評(píng)判者選擇QUATC調(diào)理劑和完整角蛋白處理 的樣品為更順滑的樣品，6%評(píng)判者認(rèn)為未處理的樣品更順滑(未處理的樣品與蛋白質(zhì)處 理的樣品之間顯著差異，P < 0. 05)并且32%評(píng)判者傾向于調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品。在這 個(gè)測(cè)試中，在所述處理之間存在顯著差異(顯著性水平P < 0. 05)，同時(shí)總計(jì)42%評(píng)判者選 擇QUATC調(diào)理劑處理的樣品為最順滑者。最后一次的測(cè)試中，要求評(píng)判者選擇他們偏好哪種樣品。發(fā)現(xiàn)相同的行為特征，即71%評(píng)判者選擇QUATC調(diào)理劑和完整角蛋白調(diào)理劑處理的樣品，同時(shí)有20%評(píng)判者傾向于 調(diào)理劑基質(zhì)處理的樣品，剩下9%評(píng)判者選擇未處理的樣品(未處理的樣品與蛋白質(zhì)處理 的樣品之間顯著差異，P < 0. 05 ；不同處理方法之間無(wú)顯著差異)。試驗(yàn)總結(jié)本研究展示了完整的季銨化角蛋白對(duì)對(duì)頭發(fā)的調(diào)理作用。這種調(diào)理作用由下降的 梳理力顯示，所述的下降的梳理力反映為更健康、更年輕的頭發(fā)表面并且與消費(fèi)者覺(jué)察頭 發(fā)打理性更佳相關(guān)。本發(fā)明的諸方面僅通過(guò)示例方式描述并且應(yīng)當(dāng)理解可以對(duì)其修改和添加而不脫 離如所附權(quán)利要求書(shū)中所定義的本發(fā)明范圍。
權(quán)利要求
包含可溶性角蛋白的可溶性角蛋白衍生物，所述可溶性角蛋白在該可溶性角蛋白上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。
2.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白是完整的。
3.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白是水解的。
4.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含帶負(fù)電荷的 基團(tuán)。
5.如權(quán)利要求4中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性 角蛋白琥珀?；苌?。
6.如權(quán)利要求4中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白并且X =任選取代的烷基。
7.如權(quán)利要求6中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中X=(CH2)n并且η = 2至6。
8.如權(quán)利要求4中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性 角蛋白脂肪酸衍生物。
9.如權(quán)利要求4中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白，X = NH或0，H=重復(fù)鏈脂肪酸；并且η = 1至如。
10.如權(quán)利要求9中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中X= NH或0，4H= (CH2)并且N =10 至 18。
11.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含正電荷基團(tuán)。
12.如權(quán)利要求11中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶 性角蛋白季銨化衍生物。
13.如權(quán)利要求11中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白、X = NH或0，Y =任選取代的烷基鏈，R'=烷基鏈。
14.如權(quán)利要求13中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中X= NH，Y = CH2CH(OH)CH2并 且 R' = CH3。
15.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白是S-磺化的。
16.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白包含角蛋白中間 絲蛋白部分。
17.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高硫蛋白部分。
18.如權(quán)利要求1中所述可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高甘氨 酸-酪氨酸蛋白部分。
19.產(chǎn)生可溶性角蛋白衍生物的方法，該方法包括在可溶性角蛋白上一個(gè)位點(diǎn)處完成 化學(xué)基團(tuán)取代反應(yīng)的步驟，所述位點(diǎn)選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合 組成的組。
20.如權(quán)利要求19中所述的方法，其中可溶性角蛋白是完整的。
21.如權(quán)利要求19中所述的方法，其中可溶性角蛋白被水解。
22.如權(quán)利要求19中所述的方法，其中化學(xué)基團(tuán)包含帶負(fù)電荷的基團(tuán)。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角蛋白琥珀酰化 衍生物。
24.如權(quán)利要求22中所述的方法，其中化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白，X =任選取代的低級(jí)烷基。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中X= (CH2)n, η = 2至6。
26.如權(quán)利要求22所述的方法，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角蛋白脂肪酸衍 生物。
27.如權(quán)利要求22所述的方法，其中化學(xué)基團(tuán)包含 其中R=角蛋白的可溶性蛋白中，X = NH或0，Η =重復(fù)脂肪酸鏈并且N= 10至40。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中X= ΝΗ，= (CH2)并且η = 10至18。
29.如權(quán)利要求19中所述的方法，其中化學(xué)基團(tuán)包含正電荷基團(tuán)。
30.如權(quán)利要求29中所述的方法，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角蛋白季銨化 衍生物。
31.如權(quán)利要求29中所述的方法，其中化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白，X = NH或0，Y =任選取代的烷基鏈并且R =烷基鏈.
32.如權(quán)利要求31中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中X= ΝΗ，Y = CH2CH(OH)CH2并 且 R' = CH3。
33.如權(quán)利要求31中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白S-磺化的。
34.如權(quán)利要求19中所述方法，其中可溶性角蛋白包含角蛋白中間絲蛋白。
35.如權(quán)利要求19中所述方法，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高硫蛋白。
36.如權(quán)利要求19中所述方法，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高甘氨酸-酪氨酸蛋白。
37.包含可溶性角蛋白衍生物的表面活性劑產(chǎn)品，所述可溶性角蛋白衍生物包含可溶 性角蛋白，所述可溶性角蛋白在該蛋白上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其 組合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。
38.個(gè)人護(hù)理品配方，包含從約0.001%至50%重量份的可溶性角蛋白衍生物。
39.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角 蛋白，所述可溶性角蛋白在選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組 中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。
40.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中可溶性角蛋白是完整的
41.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中可溶性角蛋白是水解的。
42.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含帶負(fù)電荷的基團(tuán)。
43.如權(quán)利要求42中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中可溶性角蛋白衍生物包含角蛋白琥 珀?；苌铩?br> 44.如權(quán)利要求42中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白，X =任選取代的低級(jí)烷基
45.如權(quán)利要求44中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中X= (CH2)n并且η = 2至6。
46.如權(quán)利要求42中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角 蛋白脂肪酸衍生物。
47.如權(quán)利要求42中所述的個(gè)人護(hù)理品配方，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R =可溶性角蛋白，X = NH或者0，W=重復(fù)脂肪酸鏈并且η = 1至如。
48.如權(quán)利要求47中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中X= MUd= (CH2)并且n= 10至18。
49.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中取代的化學(xué)基團(tuán)包含正電荷基團(tuán)。
50.如權(quán)利要求49中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中的可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角 蛋白季銨化衍生物。
51.如權(quán)利要求49中所述個(gè)人護(hù)理制劑中取代的化學(xué)基團(tuán)包含 其中R可溶性角蛋白，X = NH或者0，Y =任選取代的烷基鏈并且R’ =烷基鏈。
52.如權(quán)利要求51中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中X= NH，Y = CH2CH(OH)CH2并且R'=CH3。
53.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中可溶性角蛋白衍生物是S-磺化。
54.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中可溶性角蛋白包含角蛋白中間絲蛋白 部分。
55.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高硫蛋白部分。
56.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中可溶性角蛋白包含角蛋白高甘氨 酸-酪氨酸蛋白部分。
57.用于個(gè)人護(hù)理制劑的包含可溶性角蛋白衍生物的添加劑，所述可溶性角蛋白衍生 物包含可溶性角蛋白，所述可溶性角蛋白在該蛋白上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基 酸基團(tuán)及其組合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。
58.用于處理頭發(fā)或皮膚的方法，該方法包括施加個(gè)人護(hù)理制劑的步驟，所述的個(gè)人護(hù) 理制劑包含從約0. 001%至50%可溶性角蛋白衍生物。
59.通過(guò)施加包含添加劑的個(gè)人護(hù)理制劑的步驟處理頭發(fā)和皮膚的方法，所述添加劑 包含可溶性角蛋白衍生物，所述可溶性角蛋白衍生物包含可溶性角蛋白，所述可溶性角蛋 白在該蛋白上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組中的一個(gè)位 點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)。
60.可溶性角蛋白衍生物混合物，包含第一種可溶性角蛋白部分，所述可溶性角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分上選自由賴(lài) 氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代 的化學(xué)基團(tuán)；第二可溶性角蛋白部分，所述可溶性角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分上選自由賴(lài)氨 酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的 化學(xué)基團(tuán)。其中第一種可溶性角蛋白部分和第二種可溶性角蛋白部分分別選自由中間絲蛋白、高 硫蛋白、高甘氨酸_酪氨酸蛋白組成的組；并且其中第一可溶性角蛋白部分與第二可溶性角蛋白部分不相同。
61.產(chǎn)生可溶性角蛋白混合物的方法，該方法包括步驟將第一種可溶性角蛋白部分與第二種可溶性角蛋白部分混合，其中所述的第一可溶性 角蛋白部分在該可溶性角蛋白部分上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組 合組成的組中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)，所述的第二可溶性角蛋白部分 在該可溶性角蛋白部分上選自由賴(lài)氨酸基、末端胺基、羥基氨基酸基團(tuán)及其組合組成的組 中的一個(gè)位點(diǎn)處具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)；其中第一種可溶性角蛋白部分和第二種可溶性角蛋白部分分別選自由中間絲蛋白、高 硫蛋白、高甘氨酸_酪氨酸蛋白組成的組；并且其中第一種可溶性角蛋白部分與第二種可溶性角蛋白部分不相同。
62.如權(quán)利要求1中所述的可溶性角蛋白衍生物，其中可溶性角蛋白是部分氧化的。
63.如權(quán)利要求19中所述的方法，其中可溶性角蛋白是部分氧化的。
64.如權(quán)利要求38中所述的個(gè)人護(hù)理制劑，其中可溶性角蛋白是部分氧化的。
全文摘要
公開(kāi)了可溶性角蛋白衍生物。所述可溶性角蛋白衍生物可以包括在可溶性角蛋白的賴(lài)氨酸基團(tuán)末端胺基和/或羥基氨基酸基團(tuán)上具有至少一個(gè)取代的化學(xué)基團(tuán)的可溶性角蛋白。可溶性角蛋白衍生物可以通過(guò)琥珀?；蚣句@化或通過(guò)與脂肪酸衍生物反應(yīng)形成。所述可溶性角蛋白衍生物可以用于個(gè)人護(hù)理制品，并且還包括包括幾種不同可溶性角蛋白衍生物的混合物。
文檔編號(hào)C07K1/00GK101903397SQ200880121968
公開(kāi)日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2008年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月31日
發(fā)明者斯蒂文·喬弗里·埃特肯, 松雅·瑪麗·斯科特, 愛(ài)麗莎·德恩·羅迪克-蘭茲洛塔, 羅伯特·詹姆斯·凱利 申請(qǐng)人:凱拉普雷斯特技術(shù)有限公司