專利名稱：受損傷口愈合的組合物和治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及間隙連接并涉及傷口和傷口愈合，尤其是涉及并不以預(yù)期的速率愈合 的傷口，如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、慢性傷口、以及裂開性傷口。
背景技術(shù)：
以下包括可以有利于理解本發(fā)明的信息。這不是承認(rèn)，這里提供的任何信息是現(xiàn) 有技術(shù)，或與目前描述或要求保護(hù)的發(fā)明有關(guān)，或明確地或暗示性地提及的任何出版物或 文件是現(xiàn)有技術(shù)。在人類和其它哺乳動(dòng)物中，傷口損傷會(huì)觸發(fā)有機(jī)物的復(fù)雜級(jí)聯(lián)的細(xì)胞和生化事 件，其在大多數(shù)情況下將導(dǎo)致愈合的傷口。理想愈合的傷口是這樣的傷口，其在細(xì)胞、組織、 器官和生物體水平上恢復(fù)正常解剖結(jié)構(gòu)、功能、以及外觀。傷口愈合，不管是通過創(chuàng)傷、微 生物或異物所引發(fā)，經(jīng)由包括多個(gè)重疊階段的復(fù)雜過程進(jìn)行，該重疊階段包括發(fā)炎、上皮形 成、血管生成以及基質(zhì)沉積。通常，這些過程導(dǎo)致成熟傷口和一定程度的瘢痕形成。雖然 發(fā)炎和修復(fù)通常沿著規(guī)定的過程發(fā)生，但過程的敏感性取決于各種傷口愈合調(diào)節(jié)因子的平 衡，包括例如，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和生長因子的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。間隙連接是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)可以促進(jìn)直接的細(xì)胞間通信。間隙連接通道由兩 個(gè)連接子(半通道)形成，每個(gè)連接子由六個(gè)連接蛋白亞單位構(gòu)成。每個(gè)六聚連接子對(duì)接 (?？浚琩ock)于在反相膜中的連接子以形成單間隙連接。據(jù)報(bào)道，間隙連接通道存在于整 個(gè)身體中。組織如角膜上皮，例如，具有六至八個(gè)細(xì)胞層，還使用基底層中的連接蛋白43和 從基底至中翼細(xì)胞層的連接蛋白沈在不同層中表達(dá)不同的間隙連接通道。通常，連接蛋白 是一種蛋白質(zhì)家族，通常按照它們的分子量加以命名或在系統(tǒng)發(fā)育的基礎(chǔ)上分為α、β、以 及Y亞類。已鑒定了至少20種人和19種鼠同種型。據(jù)報(bào)道，不同的組織和細(xì)胞類型具有 連接蛋白表達(dá)的特征模式并且已表明在損傷或移植以后組織如角膜會(huì)改變連接蛋白表達(dá) 模式(Qui, C. et al.，(2003)Current Biology, 13 :1967-1703 ；Brander et al.，(2004)， J.Invest Dermatol. 122 :1310-20)。據(jù)報(bào)道，異常連接蛋白功能可能與某些疾病狀態(tài)(例如，心臟病)有關(guān)(A.C.de Carvalho, et al.，(1994)J Cardiovasc Electrophysiol 5:686)。在某些連接蛋白 中，通過添加外源性藥劑可以誘導(dǎo)周轉(zhuǎn)和運(yùn)輸性能的改變，其中外源性藥劑可以影響間 隙連接細(xì)胞間通訊的水平(Darrow et al. (1995)Circ Res 76 381 ；Lin et al. (2001) J Cell Bioll54(4) :815)。還已報(bào)道反義技術(shù)用于調(diào)節(jié)與病毒、真菌以及代謝性疾 病有關(guān)的基因的表達(dá)。參見，例如，美國專利第5，166，195號(hào)(HIV的寡核苷酸抑制劑 (oligonucleotide inhibitors of HIV))和美國專利第 5，004，810 號(hào)(寡聚體，用于雜 交于單純抱疫病毒 Vmw65 mRNA 禾口 φ制復(fù)制(oligomers for hybridizing to herpes simplex virus Vmw65mRNA and inhibiting replication))。還參見授予 Becker 禾口 Green的美國專利第7，098，190號(hào)(至連接蛋白的包含反義核苷酸的制劑(formulations comprising antisense nucleotides to connexins))。還已報(bào)道了間隙連接禾口半通道的肽抑制劑。參見例如 Berthoud et al. (2000)Am J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279 :L619_L622 ；Evans, W. H. and Boitano, S.Biochem. Soc. Trans. 29 :606-612, 以及 De Vriese A. S.，et al. (2001) Kidney Int. 61 :177_185。還參見 Green 和 Becker， W02006/134494( "Anti-connexin compounds and methods of use，，)。盡管在理解成為傷口愈合過程基礎(chǔ)的原理方面有進(jìn)展，但是在用于傷口護(hù)理的合 適的治療選項(xiàng)方面仍然存在顯著的未滿足的需要，其中所述傷口包括并不以預(yù)期的速率愈 合的傷口，如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口。本文描述并要求保護(hù)這樣的 治療性組合物和治療。

發(fā)明內(nèi)容
本文描述和要求保護(hù)的發(fā)明具有許多特征和實(shí)施方式，其包括但不限于在本發(fā)明 內(nèi)容中陳述或描述或提及的那些特征和實(shí)施方式。它并不旨在包括一切并且本文描述和要 求保護(hù)的發(fā)明并不限于或受限于在本發(fā)明內(nèi)容中確定的特點(diǎn)或?qū)嵤┓绞?，其包括的僅用于 說明目的而不是限制的目的。本發(fā)明披露內(nèi)容的方面和實(shí)施方式一般涉及治療受治療者的并不以預(yù)期的速率 愈合的傷口如緩慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開性傷口、以及慢性傷口 的方法，該方法包括將包含間隙連接調(diào)節(jié)劑(間隙連接調(diào)制劑，gap junction modulating agent)的組合物或配方給予傷口。連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種治療具有慢性傷口的受治療者的方法，該方 法包括將包含有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物給予傷口。連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑 是優(yōu)選的。在一種實(shí)施方式中，慢性傷口是壓迫性潰瘍(壓力性潰瘍)。在一種實(shí)施方式 中，慢性傷口是褥瘡性潰瘍(褥瘡)。在另一種實(shí)施方式中，慢性傷口是動(dòng)脈性潰瘍。在另 一種實(shí)施方式中，慢性傷口是靜脈性潰瘍(靜脈曲張性潰瘍)。在另一種實(shí)施方式中，慢性 傷口是靜脈停滯性潰瘍(靜脈淤滯性潰瘍)。在另一種實(shí)施方式中，慢性傷口是血管炎性潰 瘍。在又一種實(shí)施方式中，慢性傷口是糖尿病性潰瘍，如糖尿病足潰瘍。在一種進(jìn)一步的實(shí) 施方式中，慢性傷口是創(chuàng)傷性潰瘍或燒傷性潰瘍。在另一種實(shí)施方式中，慢性傷口是感染性 潰瘍，以及在另一種實(shí)施方式中，慢性傷口的特點(diǎn)在于與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍。在又一 種進(jìn)一步的實(shí)施方式中，慢性傷口是混合性潰瘍。在一種實(shí)施方式中，傷口是持續(xù)性上皮缺 損。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種治療具有裂開性傷口的受治療者的方法，該 方法包括將包含有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物給 予傷口。在一種實(shí)施方式中，受治療者是哺乳動(dòng)物。在另一種實(shí)施方式中，受治療者是人。 在另一種實(shí)施方式中，受治療者是糖尿病病人。在一個(gè)方面，受治療者是1型糖尿病病人。 在另一個(gè)方面，受治療者是2型糖尿病病人。在另一種實(shí)施方式中，哺乳動(dòng)物是運(yùn)動(dòng)動(dòng)物或?qū)櫸?。在一個(gè)方面，運(yùn)動(dòng)動(dòng)物是馬或 狗。在另一個(gè)方面，寵物是狗或貓。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種治療具有延遲愈合傷口的受治療者的方法， 該方法包括將有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑給予傷口。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種治療具有不完全愈合傷口的受治療者的方法，該方法包括將包含有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑 的組合物給予傷口。連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了持續(xù)給予傷口一定量的間隙連接調(diào)節(jié)劑一段持續(xù)時(shí)間。 進(jìn)一步根據(jù)此方面，可以促進(jìn)并不以預(yù)期的速率愈合的傷口的傷口愈合，其中傷口包括延 遲愈合傷口、受損的愈合傷口(impaired healing wound)、以及慢性傷口。在一種實(shí)施方式 中，傷口是糖尿病性潰瘍、糖尿病足潰瘍、血管炎性潰瘍(脈管炎性潰瘍)、靜脈性潰瘍、靜 脈停滯性潰瘍、動(dòng)脈性潰瘍、壓迫性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引起的潰瘍、燒傷 性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍、或混合性一種或多種潰瘍。本發(fā)明包括重復(fù)施加。優(yōu) 選的是重復(fù)施加直到看到傷口閉合正在進(jìn)行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況 下重復(fù)施加(或多次施加)。根據(jù)本發(fā)明的其它方面，可以促進(jìn)傷口再上皮化和/或肉芽組織的形成。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在具有并不以預(yù)期速率愈合的傷口的受治療者 中促進(jìn)傷口愈合的方法，其中傷口包括延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口，上述 方法包括給予抗連接蛋白43肽和抗連接蛋白31. 1肽。本發(fā)明包括重復(fù)施加。本發(fā)明的一個(gè)可替換方面涉及一種促進(jìn)皮膚傷口的上皮再形成的方法，該方法包 括將有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑，例如，抗連接蛋白肽給予具有并不以預(yù)期速率愈合的傷口 (包括，例如，延遲愈合或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者以促進(jìn)上皮再形成?？?連接蛋白肽可以靶向選自連接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31. 1以及連接蛋白43的連 接蛋白。連接蛋白43是目前優(yōu)選的靶。在另一個(gè)進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了一種在具有并不以預(yù)期速率愈合的傷口 (包括，例如，延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進(jìn)傷口愈合的 方法，該方法包括持續(xù)給予間隙連接調(diào)節(jié)劑，該間隙連接調(diào)節(jié)劑可有效調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞 分裂和生長。在另一個(gè)進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供了一種在具有并不以預(yù)期速率愈合的傷 口(包括，例如，延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進(jìn)傷口愈合 的方法，該方法包括持續(xù)給予間隙連接調(diào)節(jié)劑，該間隙連接調(diào)節(jié)劑可有效調(diào)節(jié)外層角蛋白 分泌。在一種實(shí)施方式中，可有效調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞分裂或生長的間隙連接調(diào)節(jié)劑(例如， 抗連接蛋白肽)是抗連接蛋白沈肽或抗連接蛋白43肽或它們的混合物。根據(jù)一種可替換 的實(shí)施方式，所給予的用來調(diào)節(jié)外層角質(zhì)化的間隙連接調(diào)節(jié)劑(例如，抗連接蛋白肽)是抗 連接蛋白31. 1肽。本發(fā)明包括重復(fù)施加。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在具有并不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括延 遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口)的受治療者中增加傷口愈合或閉合速率的 方法，該方法包括將有效量的間隙連接調(diào)節(jié)劑給予受治療者。在一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以全部或部分地防止或減少細(xì)胞間通訊分子穿過 間隙連接通道的流動(dòng)。在一個(gè)方面，通過閉合間隙連接(全部或部分地)，間隙連接調(diào)節(jié)劑 可以抑制細(xì)胞間通訊。在另一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以通過半通道對(duì)接(半通道停靠， hemichannel docking)全部或部分地防止或減少間隙連接的形成。在另一個(gè)方面，間隙連 接調(diào)節(jié)劑可以誘導(dǎo)半通道或間隙連接的全部或部分閉合。在又一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑 可以全部或部分地阻斷或抑制半通道開放(敞開)。在一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以全部 或部分地減少或防止半通道或間隙連接的開放。在一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以防止或減少半通道或間隙連接的活性或功能。如本文描述的調(diào)節(jié)連接蛋白43間隙連接和半通道 的連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的藥物組合物。 優(yōu)選地，該藥物組合物進(jìn)一步包含藥用載體、稀釋劑或賦形劑。例如，本發(fā)明包括藥物組合 物，該藥物組合物包含(a)治療有效量的藥用連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑和(b)藥用載體 或稀釋劑。本發(fā)明還涉及間隙連接調(diào)節(jié)劑與敷料、繃帶、基質(zhì)以及覆蓋物一起的應(yīng)用。在一個(gè) 方面，本發(fā)明包括一種合成或天然存在的傷口愈合基質(zhì)，該基質(zhì)包含間隙連接調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選 連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑是連接蛋白43間隙連 接調(diào)節(jié)劑，例如，抗連接蛋白43肽或擬肽(肽模擬物，ρ印tidomimetic)。它們還涉及在重復(fù)施加中間隙連接調(diào)節(jié)劑單獨(dú)地或與敷料、繃帶、基質(zhì)以及覆蓋 物一起的應(yīng)用，例如，每周一次直到愈合完成或如所期望的。在一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑是肽化合物。在一個(gè)方面，肽化合物是擬肽、擬肽、抗 體或其抗原結(jié)合片段。在一個(gè)方面，抗原結(jié)合片段是F(V)、Fab、Fab，或F(ab，)2抗連接蛋 白43抗體片段。在一個(gè)方面，抗體是嵌合或人源化抗體。在一個(gè)方面，抗體片段是嵌合或 人源化抗體片段。在另一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑是間隙連接磷酸化誘導(dǎo)劑，優(yōu)選連接蛋白 43間隙連接磷酸化化合物。在本發(fā)明的一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑被配制成用于局部給予。在本發(fā)明的一個(gè) 方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑被配制成凝膠。在又一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑被配制成用于緩慢或 延長釋放。本發(fā)明包括重復(fù)施加間隙連接調(diào)節(jié)劑。連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。
具體實(shí)施例方式并不以預(yù)期速率愈合的傷口，包括緩慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷 口、裂開性傷口、以及慢性傷口，經(jīng)常導(dǎo)致感染并且可以導(dǎo)致截肢或死亡。通過間隙連接的 細(xì)胞間通信在傷口愈合中發(fā)揮關(guān)鍵作用。已發(fā)現(xiàn)，使用某些化合物(包括本文描述或提及 的那些化合物)可以阻斷、抑制、或改變細(xì)胞通訊，其可以促進(jìn)并不以預(yù)期速率愈合的傷口 的閉合和愈合，其中傷口包括緩慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開性傷口、 以及慢性傷口。對(duì)于所有的用途，連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。^X如在本文中所使用的，“障礙”是將受益于一種藥劑的任何障礙、疾病、或病癥，其 中所述藥劑促進(jìn)傷口愈合和/或減少瘢痕形成。例如，包括與神經(jīng)病性、缺血性、和微血管 病變有關(guān)的傷口相關(guān)異常；骨區(qū)[尾骨(骶骨的)、髖關(guān)節(jié)(轉(zhuǎn)節(jié)的)、臀(坐骨的)、或足 跟]上的壓力；再灌注損傷；以及與瓣膜反流病因和相關(guān)病癥有關(guān)的病癥。如在本文中所使用的，“受治療者”是指任何哺乳動(dòng)物，包括人、家畜和農(nóng)場動(dòng)物、 以及動(dòng)物園里的動(dòng)物、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物、或?qū)櫸?，如狗、馬、貓、羊、豬、牛等。本文中優(yōu)選的哺乳動(dòng)物 是人，包括成年人、兒童、以及老年人。如在本文中所使用的，“預(yù)防”是指全部或部分地預(yù)防、或改善或控制。如在本文中所使用的，術(shù)語“治療”是指治療性治療和預(yù)防措施。如在本文中所使用的，關(guān)于本發(fā)明的化合物或組合物的“治療有效量”是指足以誘
7導(dǎo)期望的生物、藥物、或治療結(jié)果的量。所述結(jié)果可以是疾病或障礙或病癥的體征、癥狀、或 起因的緩和，或生物系統(tǒng)的任何其它期望的改變。在本發(fā)明中，所述結(jié)果將涉及全部或部分 地促進(jìn)和/或改善傷口愈合，包括傷口愈合和傷口閉合的速率。其它益處包括全部或部分 地減少腫脹、發(fā)炎和/或瘢痕形成。如在本文中所使用的，“同時(shí)”用來指同時(shí)給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，例如， 肽或阻斷劑，而術(shù)語“組合(聯(lián)合)”用來指如果它們不是同時(shí)或以物理組合給予的話，那么 它們?cè)谝欢〞r(shí)間范圍內(nèi)“依次”給予，使得它們均可用于治療作用。因此，“依次”給予可以 允許在給予一種藥劑以后的數(shù)分鐘(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30)或數(shù)小時(shí)、數(shù)天、 數(shù)周或數(shù)月內(nèi)給予另一種藥劑，只要一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑同時(shí)以有效量存在。成分 的給予之間的時(shí)間延遲將取決于成分的確切性質(zhì)、它們之間的相互作用、以及它們各自的 半壽期而變化。術(shù)語“擬肽”和“模擬物”包括天然存在的和合成的化合物，這些化合物可以具有 與它們模擬的蛋白區(qū)基本上相同的結(jié)構(gòu)和功能特性。在連接蛋白的情況下，這些化合物可 以模擬，例如，涉及連接子-連接子對(duì)接(停靠)和細(xì)胞間通道形成的相反連接蛋白的細(xì)胞 外環(huán)、和/或半通道連接蛋白的細(xì)胞外環(huán)。如在本文中所使用的，術(shù)語“肽類似物”是指這樣的化合物，其性能類似于模板 肽的性能并且可以是非肽類藥物。包括基于肽的化合物的“擬肽”(還稱作肽模擬物)， 還包括基于上述非肽的化合物如肽類似物。結(jié)構(gòu)上類似于治療上有用的肽的擬肽可以用 來產(chǎn)生相當(dāng)或增強(qiáng)的治療或預(yù)防效果。通常，擬肽是范例多肽(即，具有生物或藥理功能 或活性的多肽)的結(jié)構(gòu)或功能模擬物(例如相同或相似)，但還可以具有可選地被選自 由例如-CH2NH-、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH = CH-(順式和反式)、-coch2-、-CH(OH)CH2-,以 及-CH2SO-組成的組中的鍵取代的一個(gè)或多個(gè)肽鍵。模擬物可以完全由天然氨基酸、合成 化合物、氨基酸的非天然類似物構(gòu)成，或是部分天然肽氨基酸和氨基酸的部分非天然類似 物的嵌合分子。模擬物還可以包含任何量的天然氨基酸保守替代，只要這樣的替代同樣并 不顯著改變模擬活性。在連接蛋白的情況下，這些模擬物可以模擬，例如，涉及連接子-連 接子對(duì)接(停靠)和細(xì)胞間通道形成的相反連接蛋白的細(xì)胞外環(huán)。例如，模擬組合物可以 用作間隙連接調(diào)節(jié)劑，如果它能夠向下調(diào)節(jié)連接子的生物作用或活性，如，例如，預(yù)防連接 子的對(duì)接(?？?以形成間隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通信，或預(yù)防連接子的開放以將細(xì)胞質(zhì)暴 露于細(xì)胞外環(huán)境。擬肽包括本文描述的那些擬肽、以及如本領(lǐng)域可以已知的那些擬肽，不管 是現(xiàn)在已知或以后開發(fā)的。通常，如在本文中以其不同形式所使用的，具有間隙連接活性的術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”和 “調(diào)節(jié)”是指全部或部分地抑制間隙連接或半通道的作用或活性并且可以起間隙連接調(diào)節(jié) 劑的作用。如在本文中所使用的，術(shù)語“蛋白質(zhì)”是指經(jīng)由肽鍵連接的兩種或更多種單獨(dú)氨基 酸(不論是否是天然存在的)的任何聚合物，如當(dāng)結(jié)合于一個(gè)氨基酸(或氨基酸殘基)的 α-碳的羧酸基團(tuán)的羧基碳原子變成共價(jià)結(jié)合于與相鄰氨基酸的α-碳結(jié)合的氨基基團(tuán)的 氨基氮原子時(shí)所發(fā)生的。這些肽結(jié)合鍵、以及構(gòu)成它們的原子(即，α -碳原子、羧基碳原子 (以及它們的取代基氧原子)、以及氨基氮原子(和它們的取代基氫原子))形成蛋白質(zhì)的 “多肽主鏈”。此外，如在本文中所使用的，術(shù)語“蛋白質(zhì)”理解成包括術(shù)語“多肽”和“肽”(在本文中其有時(shí)可以交替使用)。類似地，在本文中，除非另有說明，否則蛋白質(zhì)片段、類似物、 衍生物、以及變體可以稱作“蛋白質(zhì)”，并且將被視為“蛋白質(zhì)”。術(shù)語蛋白質(zhì)的“片斷”是指 包含少于蛋白質(zhì)的所有氨基酸殘基的多肽。蛋白質(zhì)的“結(jié)構(gòu)域”也是片斷，并且包含經(jīng)常需 要以賦予活性或功能的蛋白質(zhì)的氨基酸殘基。術(shù)語“傷口敷料”是指用于局部施加至傷口的敷料并且排除適合于全身給藥的組 合物。例如，可以將一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑分散在傷口接觸材料如編織或非編織紡織 材料的固體片中或之上，或可以分散在泡沫如聚氨酯泡沫的層中，或分散在水凝膠如聚氨 酯水凝膠、聚丙烯酸水凝膠、明膠、羧甲基纖維素、果膠、藻酸鹽、和/或透明質(zhì)酸酯水凝膠 中，例如分散在凝膠或軟膏中。在某些實(shí)施方式中，將一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑分散在生 物可降解片材料中或之上，其中上述片材料提供了活性組分持續(xù)釋放到傷口中，例如凍干 膠原、凍干膠原/藻酸鹽混合物(可從來自Johnson & Johnson Medical Limited的注冊(cè)商 標(biāo)FIBRAC0L獲得)或凍干膠原/氧化再生纖維素(可從來自Johnson & Johnson Medical Limited的注冊(cè)商標(biāo)PR0M0GRAN獲得)的片。如在本文中所使用的，“傷口促進(jìn)基質(zhì)，，包括例如，合成或天然存在的基質(zhì)如膠原， 非細(xì)胞基質(zhì)，交聯(lián)生物支架分子，基于組織的生物工程結(jié)構(gòu)框架，生物工程生物假體，以及 其它植入結(jié)構(gòu)如例如，可用于促進(jìn)傷口愈合的適合于細(xì)胞浸潤和增殖的血管移植物。另 外合適的生物基質(zhì)材料可以包括化學(xué)修飾的膠原組織以減少抗原性和免疫原性。其它合 適的實(shí)例包括用于傷口敷料的膠原片，無抗原或抗原減少的非細(xì)胞基質(zhì)(Wilson G J et al. (1990) Trans Am Soc ArtifIntern 36 :340-343)，或其它生物基質(zhì)，其已被設(shè)計(jì)成減少 對(duì)異種移植材料的抗原反應(yīng)?？捎糜诖龠M(jìn)傷口愈合的其它基質(zhì)可以包括例如，經(jīng)處理的牛 心包蛋白，其包含不溶性膠原和彈性蛋白(Courtman Dff et al. (1994) J Biomed Mater Res 28 =655-666)，以及其它非細(xì)胞組織，其可以用來為宿主細(xì)胞遷移提供天然微環(huán)境以加速組 織再生(Malone J M et al. (1984) J Vasc Surg 1 :181-91)。本發(fā)明預(yù)期了包含本文描述 的一種或多種抗連接蛋白肽或擬肽(包括抗連接蛋白43肽和擬肽)的合成或天然基質(zhì)。如在本文中所使用的，術(shù)語“傷口 ”包括對(duì)任何組織的損傷，包括，例如，延遲或難 以愈合的傷口、以及慢性傷口。傷口的實(shí)例可以包括開放性傷口和閉合性傷口。術(shù)語“傷 口”還可以包括例如，以不同方式引發(fā)的并具有不同特點(diǎn)的對(duì)皮膚和皮下組織的損傷(例 如，來自長期臥床休息的褥瘡以及由創(chuàng)傷誘導(dǎo)的傷口)。傷口可以取決于傷口深度分為4個(gè) 等級(jí)之一 i)I級(jí)限于上皮的傷口 ；ii)II級(jí)延伸到真皮中的傷口 ；iii)III級(jí)延伸到皮 下組織中的傷口 ；以及iv) IV級(jí)(或全層傷口)其中骨被暴露的傷口(例如，骨壓點(diǎn)如更 大的轉(zhuǎn)節(jié)或骶骨)。術(shù)語“II度創(chuàng)面(部分厚度傷口，部分皮質(zhì)受損傷口，partial thickness wound) ”是指包括I-III級(jí)的傷口 ；II度創(chuàng)面的實(shí)例包括褥瘡、靜脈停滯性潰瘍、以及糖尿 病性潰瘍。本發(fā)明預(yù)期治療并不以預(yù)期速率愈合的類型的所有傷口，包括延遲愈合傷口、不 完全愈合傷口、以及慢性傷口?！安⒉灰灶A(yù)期的速率愈合的傷口”是指對(duì)任何組織的損傷，包括延遲或難以愈合的 傷口(包括延遲或不完全愈合傷口)、以及慢性傷口。并不以預(yù)期速率愈合的傷口的實(shí)例包 括潰瘍?nèi)缣悄虿⌒詽?、糖尿病足潰瘍、血管炎性潰瘍、?dòng)脈性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈停滯 性潰瘍、燒傷性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引起的潰瘍、壓迫性潰瘍、褥瘡性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍、以及混合性潰瘍。其它并不以預(yù)期速率愈合的傷口包括裂開性傷口。如在本文中所使用的，延遲或難以愈合的傷口可以包括，例如，至少部分地特征在 于以下的傷口 1)延長的發(fā)炎期，幻緩慢形成細(xì)胞外基質(zhì)，和/或幻降低速率的上皮形成 或閉合。術(shù)語“慢性傷口，，是指未愈合的傷口。例如，在3個(gè)月內(nèi)未愈合的傷口被認(rèn)為是慢 性的。慢性傷口包括，例如，壓迫性潰瘍、糖尿病性潰瘍、糖尿病足潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈停 滯性潰瘍、動(dòng)脈性潰瘍、血管炎性潰瘍、燒傷性潰瘍、創(chuàng)傷引起的潰瘍、感染性潰瘍、混合性 潰瘍、以及壞疽性膿皮病。慢性傷口可以是動(dòng)脈性潰瘍，該動(dòng)脈性潰瘍包括由完全或部分動(dòng) 脈阻塞引起的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈性或靜脈停滯性潰瘍，該靜脈性或靜脈停滯性潰 瘍包括由靜脈瓣功能不良和相關(guān)的血管疾病引起的潰瘍。在某些實(shí)施方式中，提供了一種 治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于壓迫性潰瘍的以下AHCPR期中的一個(gè)或多 個(gè)1期、2期、3期、和/或4期。如在本文中所使用的，慢性傷口還可以包括，例如，至少部分地特征在于以下的傷 口 1)傷口發(fā)炎的慢性自我持續(xù)狀態(tài)、2)不足和有缺陷的傷口細(xì)胞外基質(zhì)、幻不良反應(yīng)的 (衰老的)傷口細(xì)胞(包括成纖維細(xì)胞)、4)有限的細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生、和/或幻部分由于缺 乏必要的細(xì)胞外基質(zhì)安排和缺乏用于遷移的腳手架而導(dǎo)致上皮再形成衰退。慢性傷口的特 征還可以在于1)長期發(fā)炎和蛋白水解活性，其導(dǎo)致潰瘍性病變，該潰瘍性病變包括例如， 糖尿病性潰瘍、壓迫性潰瘍(褥瘡性潰瘍)、靜脈性潰瘍、以及動(dòng)脈性潰瘍，幻在受影響的區(qū) 域中基質(zhì)的逐步沉積，幻更長的修復(fù)時(shí)間，4)更小的傷口收縮，幻更慢的上皮再形成，以及 6)增加的肉芽組織厚度。示例性慢性傷口可以包括“壓迫性潰瘍”。示例性壓迫性潰瘍可以包括基于 AHCPR(Agency for Health Care Policy and Research, U. S. Department of Health and Human Services)指南的傷口分類的所有4個(gè)期，包括例如，1期。I期壓迫性潰瘍是可觀 察到的完整皮膚的壓力相關(guān)改變，與身體上的相鄰或相反區(qū)域相比，其標(biāo)志可以包括以下 一種或多種的變化皮膚溫度(溫暖或涼爽)、組織一致性(結(jié)實(shí)或松軟潮濕感)和/或感 覺(疼痛、搔癢)。在輕色素沉著皮膚中，潰瘍表現(xiàn)為限定區(qū)域的持續(xù)發(fā)紅，而在較深的膚 色中，潰瘍可以呈現(xiàn)持續(xù)的紅色、藍(lán)色、或紫色色調(diào)。1期潰瘍形成可以包括完整皮膚的非 發(fā)白紅斑(nonblanchable erythema)和皮膚潰瘍的預(yù)示性病變。在具有較深膚色的個(gè)體 中，皮膚變色、溫暖、水腫、硬化、或硬度也可以是1期潰瘍的標(biāo)志。2期2期潰瘍形成的特 征可以在于部分皮膚層喪失，其涉及表皮、真皮、或兩者。該潰瘍是表面的并且臨床上呈現(xiàn) 為磨損、水皰、或較淺的腔洞。3期3期潰瘍形成的特征可以在于全層皮膚損失，該全層皮 膚損失涉及皮下組織的損傷或壞死，其可以向下延伸到但不通過下面的筋膜。該潰瘍臨床 上呈現(xiàn)為較深的腔洞并伴有或未伴有鄰近組織的破壞。4期4期潰瘍形成的特征可以在于 全層皮膚損失并伴有廣泛的破壞、組織壞死、或?qū)∪?、骨、或支持結(jié)構(gòu)(例如，腱、關(guān)節(jié)囊) 的損傷。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于壓 迫性潰瘍的以下AHCPR期中的一個(gè)或多個(gè)1期、2期、3期、和/或4期。示例性慢性傷口可以包括“褥瘡性潰瘍”。示例性褥瘡性潰瘍可以起因于對(duì)骨性隆 起的長期的和未被釋放的壓力的結(jié)果，其導(dǎo)致局部缺血。該傷口傾向于發(fā)生在相對(duì)于卸載 重量不能重新定位自己的患者，如癱瘓、無意識(shí)、或嚴(yán)重虛弱的人中。如由美國健康與人類服務(wù)部(D印artment of Health and Human Services)所定義的，主要預(yù)防措施包括高危 患者的鑒定；經(jīng)常評(píng)估；以及預(yù)防措施如有計(jì)劃的重新定位、適當(dāng)?shù)臏p壓寢具、防潮、以及 適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)狀況。治療選項(xiàng)可以包括例如，減壓、手術(shù)和酶清創(chuàng)術(shù)、濕潤傷口護(hù)理、以及細(xì)菌 負(fù)荷的控制。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在 于褥瘡性潰瘍或潰瘍形成，其由對(duì)骨性隆起的長期的、未被釋放的壓力產(chǎn)生，這導(dǎo)致局部缺 血。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于褥瘡性 潰瘍或潰瘍形成，其由對(duì)骨性隆起的長期的、未被釋放的壓力產(chǎn)生，這導(dǎo)致局部缺血。示例性慢性傷口可以包括“動(dòng)脈性潰瘍”。慢性動(dòng)脈性潰瘍通常理解成這樣的潰 瘍形成，其伴隨動(dòng)脈硬化性和高血壓性心血管病。它們是疼痛的、邊界清晰的，并且經(jīng)常在 外側(cè)下肢和足趾上發(fā)現(xiàn)。動(dòng)脈性潰瘍可以包括那些特征在于完全或部分動(dòng)脈阻塞的潰瘍， 該動(dòng)脈阻塞可以導(dǎo)致組織壞死和/或潰瘍形成。動(dòng)脈性潰瘍的體征可以包括，例如，四肢無 脈；痛苦的潰瘍形成；小穿刺性潰瘍，其通常是邊界清楚的；涼爽或寒冷的皮膚；延遲的毛 細(xì)管返回時(shí)間(簡單地說，推動(dòng)足趾的末端并釋放，正常顏色應(yīng)該在約3秒或更短時(shí)間內(nèi)返 回足趾)；萎縮性外觀皮膚(例如，磨損的、薄、干燥)；以及指和足發(fā)的損失。示例性慢性傷口可以包括“靜脈性潰瘍”。示例性靜脈性潰瘍可以包括最常見類型 的影響下肢的潰瘍并且可以通過靜脈瓣的功能不良來表征。正常靜脈具有防止血液回流的 瓣膜。當(dāng)這些瓣膜變得無能時(shí)，靜脈血的回流會(huì)引起靜脈充血。來自紅細(xì)胞的血紅蛋白會(huì) 逃逸并滲漏到血管外空間中，引起通常觀察到的褐色變色。已表明，圍繞靜脈性潰瘍的皮膚 的經(jīng)皮氧分壓會(huì)降低，這提示存在阻礙該區(qū)域的正常血管分布的力。淋巴管引流和流量在 這些潰瘍中也發(fā)揮作用。靜脈性潰瘍可以出現(xiàn)在內(nèi)踝附近并且通常與水腫和硬結(jié)下肢一起 發(fā)生；它可以是膚淺的、不太疼痛并且可以存在有來自受影響部位的滲出性排出。在某些實(shí) 施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于起因于完全或部分 動(dòng)脈阻塞的動(dòng)脈性潰瘍或潰瘍形成。示例性慢性傷口可以包括“靜脈停滯性潰瘍”。瘀積性潰瘍是與靜脈功能不全有關(guān) 的病變并且更通常存在于內(nèi)踝上，通常伴隨壓凹性水腫、靜脈曲張、斑點(diǎn)狀色素沉著、紅斑、 以及不可觸知的瘀點(diǎn)和紫癜。郁積性皮炎和潰瘍通常是搔癢的而不是疼痛的。示例性靜脈 停滯性潰瘍的特征可以在于下肢的慢性被動(dòng)性靜脈充血，其導(dǎo)致局部缺氧。這些傷口發(fā)病 的一種可能的機(jī)制包括阻礙氧穿過粗血管周纖維蛋白套囊擴(kuò)散到組織中。另一種機(jī)制是滲 入血管周組織的大分子捕獲對(duì)維持皮膚完整性所需要的生長因子。另外，由于靜脈充血，較 大白細(xì)胞的流動(dòng)會(huì)放慢，阻塞了毛細(xì)血管，變得激活，并且損害血管內(nèi)皮，以傾向于潰瘍形 成。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由靜脈 瓣的功能不良和相關(guān)的血管疾病引起的靜脈性潰瘍或潰瘍形成。在某些實(shí)施方式中，提供 了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由下肢的慢性被動(dòng)性靜脈充血和/ 或?qū)е碌木植咳毖跻鸬撵o脈停滯性潰瘍或潰瘍形成。示例性慢性傷口可以包括“糖尿病性潰瘍”。糖尿病患者傾向于由于神經(jīng)和血管 并發(fā)癥而引起的潰瘍形成，包括足部潰瘍。周圍神經(jīng)病可以引起腳和/或腿中改變的或完 全喪失的感覺?；加谐林仄谏窠?jīng)病的糖尿病患者會(huì)失去敏銳-遲鈍辨別的所有能力。在患 有神經(jīng)病的患者中，對(duì)足的任何切口或創(chuàng)傷可以完全未注意到達(dá)數(shù)天或數(shù)周。并非不常見 的是，當(dāng)事實(shí)上潰瘍已存在相當(dāng)一段時(shí)間時(shí)，使患有神經(jīng)病的患者注意到潰瘍“剛剛出現(xiàn)”。對(duì)于神經(jīng)病患者，已表明，嚴(yán)格的葡萄糖控制可以放慢該疾病的進(jìn)展。作為降低的感覺的結(jié) 果，還可以發(fā)生沙爾科足畸形。在他們的足部具有“正常”感覺的人能夠自動(dòng)感到何時(shí)太大 壓力正置于足部區(qū)域上。一旦確定，我們的身體本能地移動(dòng)位置以緩解這種應(yīng)力。患有沉 重期神經(jīng)病的患者會(huì)失去這種感到持續(xù)的壓力損傷的能力，結(jié)果，可以發(fā)生組織局部缺血 和壞死，其導(dǎo)致例如，足底潰瘍。另外，在足骨中的微小骨折，如果被忽視和未治療，則可以 導(dǎo)致外貌損傷、慢性腫脹以及另外的骨性隆起。微血管病是糖尿病患者的顯著并發(fā)癥之一， 其也可以導(dǎo)致潰瘍形成。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷 口的特征在于由于糖尿病的神經(jīng)和血管并發(fā)癥引起的糖尿病足潰瘍和/或潰瘍形成。示例性慢性傷口可以包括“創(chuàng)傷性潰瘍”。由于對(duì)身體的創(chuàng)傷性損傷可以形成示例 性的創(chuàng)傷性潰瘍。這些損傷包括，例如，對(duì)動(dòng)脈、靜脈或淋巴系統(tǒng)的損害；對(duì)骨骼的骨結(jié)構(gòu)的 改變；組織層-表皮、真皮、皮下軟組織、肌肉或骨的損失；對(duì)身體部位或器官的損害以及身 體部位或器官的損失。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口 的特征在于與對(duì)身體的創(chuàng)傷性損傷有關(guān)的潰瘍形成。示例性慢性傷口可以包括“燒傷性潰瘍”，包括例如，由于燒傷而發(fā)生的潰瘍形成， 其中燒傷包括1度燒傷(即，皮膚的表面的紅色區(qū)域)；2度燒傷(起泡受傷部位，在已除去 水皰液以后，其可以自發(fā)愈合)；3度燒傷(燒傷，穿過整個(gè)皮膚并且通常需要外科手術(shù)干預(yù) 用于傷口愈合)；燙傷(可以起因于滾燙的熱水、油脂或散熱器用液)；熱灼傷(可以起因于 火焰，通常為深度燒傷)；化學(xué)燒傷(可以起因于酸和堿，通常為深度燒傷)；電燒傷(房子 周圍的低電壓或工作中的高電壓)；爆炸焰燒傷(通常為表面損傷)；以及接觸燒傷(通常 為深度燒傷并且可以起因于消聲器尾管、熱熨斗以及火爐)。在某些實(shí)施方式中，提供了一 種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與對(duì)身體的燒傷有關(guān)的潰瘍形成。示例性慢性傷口可以包括“血管炎性潰瘍”。血管炎性潰瘍還發(fā)生在下肢上并且 是疼痛的、邊界清晰的病變，其可以具有伴隨的可觸知的紫癜和出血性大皰。膠原病、敗血 癥、以及各種血液學(xué)病癥(例如，血小板減少、異常蛋白血)可以是這種嚴(yán)重的急性病癥的 起因。示例性慢性傷口可以包括壞疽性膿皮病。壞疽性膿皮病存在為小腿的單個(gè)或多 個(gè)、非常敏感的潰瘍。深紅色至紫色的、破壞的邊界圍繞化膿性中心缺陷?；顧z通常不能揭 示血管炎。在一半患者中，它伴隨全身性疾病如潰瘍性結(jié)腸炎、局限性回腸炎、或白血病。在 某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與壞疽性膿 皮病有關(guān)的潰瘍。示例性慢性傷口可以包括眼潰瘍，該眼潰瘍包括角膜潰瘍或頑固性(慢性)潰瘍。 還包括眼的持續(xù)性上皮缺損。這些可以發(fā)生在人中并且也發(fā)生在運(yùn)動(dòng)動(dòng)物(如馬)和寵物 (包括狗)中。示例性慢性傷口可以包括感染性潰瘍。感染性潰瘍?cè)谟酶鞣N生物體直接接種后發(fā) 生并且可以伴隨顯著的局限性腺病。實(shí)例有分枝桿菌感染、炭疽病、白喉癥、芽生菌病、孢子 絲菌病、土拉菌病、以及貓抓熱。初期梅毒的生殖器潰瘍通常是非敏感的并具有干凈、堅(jiān)實(shí) 的基質(zhì)。軟下疳和腹股溝肉芽腫的那些潰瘍傾向于為粗糙的、暗淡的、以及更加無節(jié)制的病 變。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與感染 有關(guān)的潰瘍形成。
如在本文中所使用的，術(shù)語“裂開性傷口，，是指這樣的傷口，通常為已破裂或裂開 的手術(shù)傷口。在某些實(shí)施方式中，提供了一種治療并不以預(yù)期速率愈合的傷口的方法，其中 傷口的特征在于裂開。間隙連接調(diào)節(jié)劑本文描述的某些藥劑能夠調(diào)節(jié)或影響分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞之內(nèi)和之外(例如阻斷或 抑制)。因此，本文描述的某些間隙連接調(diào)節(jié)劑可以調(diào)節(jié)細(xì)胞通訊(例如細(xì)胞與細(xì)胞)。某 些間隙連接調(diào)節(jié)劑可以調(diào)節(jié)或影響分子在細(xì)胞質(zhì)和周質(zhì)間隙或細(xì)胞外間隙之間的傳遞。這 樣的藥劑通常靶向半通道(還稱作連接子)，該半通道可以獨(dú)立參與小分子在細(xì)胞質(zhì)和細(xì) 胞外間隙或組織之間的交換。因此，本文提供的化合物可以直接或間接減少細(xì)胞之間(經(jīng) 由間隙連接)或細(xì)胞與細(xì)胞外間隙或組織之間(經(jīng)由半通道)的偶聯(lián)，并且對(duì)分子從細(xì)胞 轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外間隙中的調(diào)節(jié)是在本發(fā)明的某些化合物和實(shí)施方式的范圍之內(nèi)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可以使用任何分子，該分子能夠誘導(dǎo)對(duì)分子通過間隙連 接或半通道的通道(例如轉(zhuǎn)運(yùn))的所期望的抑制。在特定實(shí)施方式中，還提供了調(diào)節(jié)分子 通過間隙連接或半通道的通道的化合物(例如，調(diào)節(jié)分子從細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞外間隙 的通道的那些化合物)。在有或沒有間隙連接解偶聯(lián)的情況下，上述化合物可以調(diào)節(jié)分子 通過間隙連接或半通道的通道。上述化合物包括，例如，結(jié)合蛋白、多肽、以及其它有機(jī)化合 物，其可以，例如，全部或部分地阻斷間隙連接或半通道的功能或活性。某些間隙連接抑制劑列在Evans，W. H. and Boitano, S. Biochem. Soc. Trans. 29 606-612(2001)中。已報(bào)道了間隙連接和半通道的肽抑制劑(包括擬肽)。參見例如 Berthoud,V. M. et al. ,Am J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 279 :L619-L622 (2000) ；De Vriese et al. , Kidney Int.61 177-185(2001) ；Boitano S. and Evans W.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 279 :L623_L63(K2000)。如在本文中所使用的，“間隙連接調(diào)節(jié)劑”可以廣泛地包括可以全部或部分地防 止、減少或調(diào)節(jié)半通道或間隙連接的活性、功能、或形成的那些藥劑或化合物。在某些實(shí)施 方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以全部或部分地防止或減少半通道或間隙連接的功能。在某些 實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)半通道或間隙連接的全部或部分閉合。在其它實(shí)施方式 中，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以全部或部分地阻斷半通道或間隙連接。在某些實(shí)施方式中，間隙連 接調(diào)節(jié)劑可以全部或部分地減少或防止半通道或間隙連接的開放。在某些實(shí)施方式中，通 過間隙連接調(diào)節(jié)劑進(jìn)行的間隙連接或半通道的所述阻斷或閉合通過預(yù)防或減少小分子通 過開放通道流入和流出細(xì)胞外間隙或周質(zhì)間隙而可以減少或抑制細(xì)胞外半通道通訊。阻斷 半通道和/或間隙連接開放的擬肽、以及間隙連接磷酸化化合物目前是優(yōu)選的。在某些實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以防止、減少或改變半通道或間隙連接的 活性或功能。如在本文中所使用的，間隙連接活性或功能的改變可以包括閉合間隙連接、 閉合半通道、和/或分子或離子通過間隙連接和/或半通道的通道。在某些另外的方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以包括，例如，脂族醇；辛醇；庚醇；麻醉 藥(例如氟烷)、恩氟烷、氟烷、丙泊酚以及硫噴妥(戊硫代巴比妥)；花生四烯酸乙醇胺 (anandamide)；芳氨基苯甲酸酯(FFA 氟芬那酸和類似的衍生物，其是親脂的)；甘珀酸； 查耳酮(2'，5' - 二羥基查耳酮)；CHF(氯羥基呋喃酮)；CMCF(3-氯-4-(氯甲基)-5-羥 基-2(5H)_呋喃酮)；地塞米松；多柔比星(以及其它蒽醌衍生物)；類花生酸血栓烷A(2)(TXA(2))模擬物；NO(—氧化氮)；脂肪酸(例如花生四烯酸、油酸以及脂肪氧合酶代謝產(chǎn) 物；芬那酸(氟芬那酸(FFA)、尼氟酸(NA)以及甲氯芬那酸(MFA))；染料木黃酮；甘草次酸 (GA) :18a-甘草次酸和18-β-甘草次酸、以及它們的衍生物；林旦；溶血磷脂酸；甲氟喹； 甲萘醌；2-甲基-1，4-萘醌、維生素K (3)；萘酚平；網(wǎng)田酸；油酰胺；油酸；通過細(xì)胞內(nèi)酸化 的PH調(diào)節(jié)劑；例如酸化劑；多不飽和脂肪酸；脂肪酸GJIC抑制劑(例如油酸和花生四烯 酸)；奎尼定；奎寧；所有反式視黃酸；以及他莫昔芬。示例性間隙連接調(diào)節(jié)劑可以包括但不限于多肽(例如擬肽、抗體、它們的結(jié)合 片段、以及合成構(gòu)建物)、和其它間隙連接封閉劑、以及間隙連接蛋白磷酸化劑。在授予 Jensen等人的美國專利第7，153，822號(hào)、美國專利第7，250，397號(hào)、以及各類專利公開 中已報(bào)道了用于閉合間隙連接的示例性化合物(例如磷酸化連接蛋白43酪氨酸殘基)。 在Green等人，W02006134494中報(bào)道了示例性的肽和擬肽。還參見Gourdie等人，參見 W02006069181,以及 Griffith，參見 W02003032964。如在本文中所使用的，“間隙連接磷酸化劑”可以包括那些藥劑或化合物，該藥劑 或化合物能夠誘導(dǎo)連接蛋白氨基酸殘基上的磷酸化以便誘導(dǎo)間隙連接或半通道閉合，因而 誘導(dǎo)間隙連接調(diào)節(jié)。磷酸化的示例性部位包括在連接蛋白上的酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘 基中的一種或多種。在某些實(shí)施方式中，磷酸化的調(diào)節(jié)可以發(fā)生在一種或多種連接蛋白上 的一個(gè)或多個(gè)殘基上。示例性的間隙連接磷酸化劑在本領(lǐng)域中是眾所周知的并且可以包 括，例如，c-Src酪氨酸激酶或其它G蛋白偶聯(lián)受體激動(dòng)劑。參見Gi印mans B (2001) J. Biol. Chem.，Vol. 276，Issue 11,8544-8549 在一種實(shí)施方式中，在一種或多種這些殘基上的磷 酸化的調(diào)節(jié)會(huì)影響半通道功能，尤其通過閉合半通道。在另一種實(shí)施方式中，在一種或多種 這些殘基上的磷酸化的調(diào)節(jié)會(huì)影響間隙連接功能，尤其通過閉合間隙連接。靶向連接蛋白 43間隙連接和半通道的閉合的間隙連接磷酸化劑是優(yōu)選的。包括結(jié)合蛋白(例如抗體、抗體片段等)、肽、擬肽、以及擬肽的多肽化合物是間隙 連接的合適的調(diào)節(jié)劑。結(jié)合蛋白包括，例如，單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(包括，例如，F(xiàn)ab、 F(ab' )2以及Fv片斷)；單鏈抗體；單鏈Fv;以及單鏈結(jié)合分子如那些單鏈結(jié)合分子，其 包含，例如，結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈、CH2以及CH3結(jié)構(gòu)域、重組抗體以及抗體片段，其能夠結(jié)合抗 原決定簇(即，通常稱作表位的分子的部分)，該抗原決定簇與特定抗體或其它結(jié)合分子接 觸。包括抗體、抗體片段等的這些結(jié)合蛋白可以是嵌合的或人源化的或以其它方式變得在 它們將給予的受治療者中是較少免疫原性的，并且可以合成、重組生產(chǎn)、或在表達(dá)文庫中產(chǎn) 生。設(shè)想本領(lǐng)域中已知的或以后發(fā)現(xiàn)的任何結(jié)合蛋白，如本文提及的和/或本領(lǐng)域中更詳 細(xì)地描述的那些結(jié)合蛋白。例如，結(jié)合蛋白不僅包括抗體等，而且還包括配體、受體、擬肽、 或其它結(jié)合片段或分子(例如，通過噬菌體展示產(chǎn)生的)，其結(jié)合于靶(例如連接蛋白、連接 子、間隙連接、或相關(guān)分子)。結(jié)合分子將通常具有期望的特異性，包括但不限于結(jié)合特異性、以及期望的親和 力。親和力，例如，可以是大于或等于約lof1、大于或等于約ιο 1、大于或等于約ιο 1、 大于或等于約IO8M4的Ka。甚至大于約IO8M4的親和力是合適的，如等于或大于約lOl1、 約ΚΓΜ—1、約ΙΟ1^1、以及約IO1I1的親和力。利用常規(guī)技術(shù)，可以容易地確定根據(jù)本發(fā)明 的結(jié)合蛋白的親和力，例如 *katchard et al.，(1949) Ann. N. Y. Acad. Sci. 51 :660 描述的那些常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明包括使用肽(包括一種和多種擬肽)來調(diào)節(jié)間隙連接和半通道。通過使用 獲自水療法圖的數(shù)據(jù)，已提出，連接蛋白含有四個(gè)跨膜-跨越區(qū)以及兩個(gè)短細(xì)胞外環(huán)。連接 蛋白的第一和第二胞外區(qū)的定位的進(jìn)一步特征在于用于在分裂間隙連接上相應(yīng)表位的免 疫定位的抗肽抗體的所報(bào)道的生產(chǎn)。Goodenough D. A. (1988) J Cell Bioll07 :1817-1824 ； Meyer R. Α. (1992) J Cell Biol 119:179-189。可以體外合成肽或它們的變體，例如，通過固相肽合成方法或通過酶催化肽合成 法或借助于重組DNA技術(shù)。固相肽合成方法是一種已確立和廣泛使用的方法，該方法描 述在如以下的參考文獻(xiàn)中Stewart et al.，(1969) Solid Phase Peptide Synthesis, Ε.H. Freeman Co. , San Francisco ；Merrifield, (1963)J.Am. Chem. Soc. 85 2149 ； Meienhofer in"Hormonal Proteins and Peptides,，，ed. ；C. H. Li, Vol. 2 (Academic Press, 1973), pp.48-267 ； VX R Bavaay and Merrifield，“The Peptides, "eds.E. Gross and F. Meienhofer，Vol. 2 (Academic Press，1980)pp. 3-285。可以通過以下來進(jìn)一步純化這些 肽在免疫親和或離子交換柱上的分餾；乙醇沉淀；反相HPLC ；在硅膠(silica)或在陰離 子交換樹脂如DEAE上的層析；色譜聚焦；SDS-PAGE ；硫酸銨沉淀；使用例如kphadex G-75 的凝膠過濾；配體親和層析；或從非極性溶劑或非極性/極性溶劑混合物結(jié)晶或沉淀。通過 結(jié)晶或沉淀進(jìn)行的純化是優(yōu)選的。由兩個(gè)相鄰細(xì)胞貢獻(xiàn)的半通道的胞外結(jié)構(gòu)域彼此“對(duì)接(?？?”以形成完整的間 隙連接通道。干擾這些胞外結(jié)構(gòu)域的相互作用的試劑可以削弱細(xì)胞間通訊，或干擾對(duì)細(xì)胞 外環(huán)境的半通道開放。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括這樣的肽，該肽包含對(duì)應(yīng)于連接蛋白(例如連接蛋白45、43、 26、30、31. 1、以及37)的跨膜區(qū)(例如第一至第四)的氨基酸序列。在本發(fā)明中，優(yōu)選使用 包括這樣的肽的間隙連接調(diào)節(jié)劑，所述肽包含對(duì)應(yīng)于連接蛋白43的部分跨膜區(qū)的氨基酸 序列。間隙連接調(diào)節(jié)劑可以包含這樣的肽，該肽包含對(duì)應(yīng)于連接蛋白45的部分跨膜區(qū) 的氨基酸序列。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括具有包含SEQ. ID. NO 1的約5至20個(gè)鄰接氨基酸 的氨基酸序列的肽、具有包含SEQ. ID. NO 1的約8至15個(gè)鄰接氨基酸的氨基酸序列的肽、 或具有包含SEQ. ID. NO :1的約11至13個(gè)鄰接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它實(shí)施方式涉 及這樣的間隙連接調(diào)節(jié)化合物，該化合物是具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列 包含SEQ. ID. NO 1的至少約5、至少約6、至少約7、至少約8、至少約9、至少約10、至少約 11、至少約12、至少約13、至少約14、至少約15、至少約20、至少約25、或至少約30個(gè)鄰接 氨基酸。在本文提供的某些間隙連接調(diào)節(jié)化合物中，對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO :1的位置46-75和 199-2 處的氨基酸的連接蛋白45的胞外結(jié)構(gòu)域可以用來開發(fā)特定的肽序列。本文描述的 某些肽具有對(duì)應(yīng)于在SEQ. ID. NO 1的位置46-75和199-2 處的區(qū)的氨基酸序列。這些肽 并不需要具有與SEQ. ID. NO 1的那些部分相同的氨基酸序列，并且可以進(jìn)行保守氨基酸變 化，使得這些肽保留結(jié)合活性或功能活性?？商鎿Q地，該肽可以靶向連接蛋白而不是胞外結(jié) 構(gòu)域的區(qū)(例如并不對(duì)應(yīng)于位置46-75和199-228的SEQ. ID. NO 1的部分)。此外，合適的間隙連接調(diào)節(jié)劑可以包括這樣的肽，該肽包含對(duì)應(yīng)于連接蛋白43的 部分跨膜區(qū)的氨基酸序列。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括具有包含SEQ. ID. NO 2的約5至20個(gè)鄰
15接氨基酸的氨基酸序列的肽、具有包含SEQ. ID. NO 2的約8至15個(gè)鄰接氨基酸的氨基酸序 列的肽、或具有包含SEQ. ID. NO 2的約11至13個(gè)鄰接氨基酸的氨基酸序列的肽。其它間 隙連接調(diào)節(jié)劑包括具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列包含SEQ. ID. NO 2的至少 約5、至少約6、至少約7、至少約8、至少約9、至少約10、至少約11、至少約12、至少約13、至 少約14、至少約15、至少約20、至少約25、或至少約30個(gè)鄰接氨基酸。其它間隙連接調(diào)節(jié) 劑包含對(duì)應(yīng)于SEQ. ID. NO 2的位置37-76和178-208處的氨基酸的連接蛋白43的胞外結(jié) 構(gòu)域。間隙連接調(diào)節(jié)劑包括本文描述的肽，這些肽具有這樣的氨基酸序列，該氨基酸序列對(duì) 應(yīng)于在SEQ. ID. NO 2的位置37-76和178-208處的區(qū)。這些肽不需要具有與SEQ. ID. NO 2的那些部分相同的氨基酸序列，并且可以進(jìn)行保守氨基酸變化，使得這些肽保留結(jié)合活性 或功能活性?？商鎿Q地，肽可以靶向連接蛋白而不是胞外結(jié)構(gòu)域的區(qū)(例如并不對(duì)應(yīng)于位
置 37-76和 178-208 的 SEQ. ID. NO 2 的部分)O
其它間隙連接調(diào)節(jié)劑包括羧基末端多肽。
連接蛋白 45 (SEO. ID. NO 1)
MetSerTrpSerPheLeuThrArgLeuLeuGluGlulieHisAsnHis
151015
SerThrPheValGlyLyslieTrpLeuThrValLeulieValPheArg
202530
IleValLeuThrAlaValGlyGlyGluSerlieTyrTyrAspGluGln
354045
SerLysPheValCysAsnThrGluGlnProGlyCysGluAsnValCys
505560
TyrAspAlaPheAlaProLeuSerHisValArgPheTrpValPheGln
65707580
IlelieLeuValAlaThrProSerValMetTyrLeuGlyTyrAlalie
859095
HisLyslieAlaLysMetGluHisGlyGluAlaAspLysLysAlaAla
100105110
ArgSerLysProTyrAlaMetArgTrpLysGlnHisArgAlaLeuGlu
115120125
GluThrGluGluAspAsnGluGluAspProMetMetTyrProGluMet
130135140
GluLeuGluSerAspLysGluAsnLysGluGlnSerGlnProLysPro
145150155160
LysHisAspGlyArgArgArglieArgGluAspGlyLeuMetLyslie
165170175
TyrValLeuGlnLeuLeuAlaArgThrValPheGluValGlyPheLeu
180185190
lieGlyGlnTyrPheLeuTyrGlyPheGlnValHisProPheTyrVal
195200205
160105]CysSerArgLeuProCysProHisLyslieAspCysPhelieSerArg0106]2102152200107]ProThrGluLysThrliePheLeuLeulieMetTyrGlyValThrGly0108]2252302352400109]LeuCysLeuLeuLeuAsnlieTrpGluMetLeuHisLeuGlyPheGly0110]2452502550111]ThrlieArgAspSerLeuAsnSerLysArgArgGluLeuGluAspPro0112]2602652700113]GlyAlaTyrAsnTyrProPheThrTrpAsnThrProSerAlaProPro0114]2752802850115]GlyTyrAsnlieAlaValLysProAspGlnlieGlnTyrThrGluLeu0116]2902953000117]SerAsnAlaLyslieAlaTyrLysGlnAsnLysAlaAsnThrAlaGln0118]3053103153200119]GluGlnGlnTyrGlySerHisGluGluAsnLeuProAlaAspLeuGlu0120]3253303350121]AlaLeuGlnArgGlulieArgMetAlaGlnGluArgLeuAspLeuAla0122]3403453500123]ValGlnAlaTyrSerHisGlnAsnAsnProHisGlyProArgGluLys0124]3553603650125]LysAlaLysValGlySerLysAlaGlySerAsnLysSerThrAlaSer0126]3703753800127]SerLysSerGlyAspGlyLysAsnSerValTrplie0128]3853903950129]連接蛋白43(SEQ.ID. NO 2)0130]MetGlyAspTrpSerAlaLeuGlyLysLeuLeuAspLysValGlnAla0131]1510150132]TyrSerThrAlaGlyGlyLysValTrpLeuSerValLeuPheliePhe0133]2025300134]ArglieLeuLeuLeuGlyThrAlaValGluSerAlaTrpGlyAspGlu0135]3540450136]GlnSerAlaPheArgCysAsnThrGlnGlnProGlyCysGluAsnVal0137]5055600138]CysTyrAspLysSerPheProlieSerHisValArgPheTrpValLeu0139]657075800140]GlnlieliePheValSerValProThrLeuLeuTyrLeuAlaHisVal0141]8590950142]PheTyrValMetArgLysGluGluLysLeuAsnLysLysGluGluGlu0143]1001051100144]LeuLysValAlaGlnThrAspGlyValAsnValAspMetHisLeuLys0145]1151201250146]GlnIleGlulieLysLysPheLysTyrGlylieGluGluHisGlyLys0147]1301351400148]ValLysMetArgGlyGlyLeuLeuArgThrTyrlielieSerlieLeu0149]1451501551600150]PheLysSerliePheGluValAlaPheLeuLeulieGlnTrpTyrlie0151]1651701750152]TyrGlyPheSerLeuSerAlaValTyrThrCysLysArgAspProCys0153]1801851900154]ProHisGlnValAspCysPheLeuSerArgProThrGluLysThrlie0155]1952002050156]PheIleliePheMetLeuValValSerLeuValSerLeuAlaLeuAsn0157]2102152200158]IleIleGluLeuPheTyrValPhePheLysGlyValLysAspArgVal0159]2252302352400160]LysGlyLysSerAspProTyrHisAlaThrSerGlyAlaLeuSerPro0161]2452502550162]AlaLysAspCysGlySerGlnLysTyrAlaTyrPheAsnGlyCysSer0163]2602652700164]SerProThrAlaProLeuSerProMetSerProProGlyTyrLysLeu0165]2752802850166]ValThrGlyAspArgAsnAsnSerSerCysArgAsnTyrAsnLysGln0167]2902953000168]AlaSerGluGlnAsnTrpAlaAsnTyrSerAlaGluGlnAsnArgMet0169]3053103153200170]GlyGlnAlaGlySerThrlieSerAsnSerHisAlaGlnProPheAsp0171]3253303350172]PheProAspAspAsnGlnAsnSerLysLysLeuAlaAlaGlyHisGlu0173]3403453500174]LeuGlnProLeuAlalieValAspGlnArgProSerSerArgAlaSer0175]3553603650176]SerArgAlaSerSerArgProArgProAspAspLeuGlulie0177]3703753800178]間隙連接調(diào)節(jié)肽可以包含對(duì)應(yīng)于部分連接蛋白胞外結(jié)構(gòu)域(具有保守氨
代)的序列，使得該肽是功能上活性的間隙連接調(diào)節(jié)化合物。示例性的保守氨基酸替代包 括例如用另一種非極性氨基酸替代非極性氨基酸、用另一種芳族氨基酸替代芳族氨基酸、 用另一種脂族氨基酸替代脂族氨基酸、用另一種極性氨基酸替代極性氨基酸、用另一種酸 性氨基酸替代酸性氨基酸、用另一種堿性氨基酸替代堿性氨基酸、以及用另一種可電離氨
18基酸替代可電離氨基酸。靶向連接蛋白43的示例性肽示出在以下表1中。Ml、2、3以及4分別是指連接蛋 白43蛋白的第一至第四跨膜區(qū)。E2分別是指第一和第二細(xì)胞外環(huán)。表1.細(xì)胞間通訊的肽類抑制劑(cx43)
0181]FEVAFLLIQffIM3&E2(SEQ.ID.NO:3)0182]LLIQffYIGFSLE2(SEQ.ID.NO:4)0183]SLSAVYTCKRDPCPHQE2(SEQ.ID.NO:5)0184]VDCFLSRPTEKTE2(SEQ.ID.NO:6)0185]SRPTEKTIFIIE2&M4(SEQ.ID.NO:7)0186]LGTAVESAffGDEQM1&E1(SEQ.ID.NO:8)0187]QSAFRCNTQQPGEl(SEQ.ID.NO:9)0188]QQPGCENVCYDKEl(SEQ.ID.NO:10)0189]VCYDKSFPISHVREl(SEQ.ID.NO:11) 表2提供了在抑制半通道或間隙連接功能中所使用的另外的示例性連接蛋白肽。 在其它實(shí)施方式中，對(duì)肽或它們的片斷進(jìn)行保守氨基酸變化。
0191]表2.細(xì)胞間通訊的另外的肽類抑制劑(CX32、CX43)0192]連接蛋白位置AA' s和序列0193]Cx32E139-7 MESVWGDEIKSSFICNTLQPGCNSVCYDHFFPISHVR (SEQ. ID. NO 12)0194]Cx32E141-52ESVffGDEKSSFI(SEQ.ID.NO:13)0195]Cx32E152-63ICNTLQPGCNSV(SEQ.ID.NO:14)0196]Cx32E162-73SVCYDHFFPISH(SEQ.ID.NO:15)0197]Cx32E264-188RLVKCEAFPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO:16)0198]Cx32E2166-177VKCEAFPCPNTV(SEQ.ID.NO:17)0199]Cx32E2177-188VDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO:18)0200]Cx32E163-75VCYDHFFPISHVR(SEQ.ID.NO:19)0201]Cx32E145-59VffGDEKSSFICNTLQPGY(SEQ.ID.NO:20)0202]Cx32E146-59DEKSSFICNTLQPGY(SEQ.ID.NO:21)0203]Cx32E2182-192SRPTEKTVFTV(SEQ.ID.NO:22)0204]Cx32/Cx43E2182-188/ SRPTEKT0205]201-207(SEQ.ID.NO:23)0206]連接蛋白位置M's和序列0207]Cx32El 52-63ICNTLQPGCNSV(SEQ. ID. NO24)0208]Cx40E2 177-192FLDTLHVCRRSPCPHP(SEQ. ID. NO25)0209]Cx43E2 188-205KRDPCHQVDCFLSRPTEK(SEQ. ID. NO26)0210]表3提供了用于連接蛋白家族成員的細(xì)胞外環(huán)，其用來開發(fā)本文描述的肽抑制
劑。在某些非限制性實(shí)施方式中，在表4中提供的肽、以及它們的片斷用作肽抑制劑。在 其它非限制性實(shí)施方式中，該表中包含肽的約8至約15、約11至約13個(gè)鄰接氨基酸的肽 是本發(fā)明的肽抑制劑?？梢詫?duì)肽或它們的片斷進(jìn)行保守氨基酸變化。參見Boitano S. and Evans W. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 279 :L623_L63(K2000)。
表3.用于各種連接蛋白家族成員的細(xì)胞外環(huán)ElhuCx26KEVWGDEQADFVCNTLQPGCKNVCYDHYFPISHIR(SEQ. ID.NO:27)huCx30QEVWGDEQEDFVCNTLQPGCKNVCYDHFFPVSHIR(SEQ. ID.NO:28)huCx30.3EEVWDDEQKDFVCNTKQPGCPNVCYDEFFPVSHVR(SEQ. ID.NO:29)huCx31ERVWGDEQKDFDCNTKQPGCTNVCYDNYFPISNIR(SEQ. ID.NO:30)huCx31.1ERVWSDDHKDFDCNTRQPGCSNVCFDEFFPVSHVR(SEQ. ID.NO31)huCx32ESVWGDEKSSFICNTLQPGCNSVCYDQFFPISHVR(SEQ. ID.NO32)huCx36ESVWGDEQSDFECNTAQPGCTNVCYDQAFPISHIR(SEQ. ID.NO33)huCx37ESVWGDEQSDFECNTAQPGCTNVCYDQAFPISHIR(SEQ. ID.NO34)huCx40.1RPVYQDEQERFVCNTLQPGCANVCYDVFSPVSHLR(SEQ. ID.NO35)huCx43ESAWGDEQSAFRCNTQQPGCENVCYDKSFPISHVR(SEQ. ID.NO36)huCx46EDVWGDEQSDFTCNTQQPGCBNVCYBRAFPISHIR(SEQ. ID.NO37)huCx46.6EAIYSDEQAKFTCNTRQPGCDNVCYDAFAPLSHVR(SEQ. ID.NO38)huCx40ESSffGDEQADFRCDTIQPGCQNVCTDQAFPISHIR(SEQ. ID.NO39)huCx45GESIYYDEQSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVR(SEQ. ID.NO40)E2huCx26MYVFYVMYDGFSMQRLVKCNAWPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO 41)huCx30MYVFYFLYNGYHLPWVLKCGIDPCPNLVDCFISRPTEKT(SEQ.ID.NO 42)huCx30.3LYIFHRLYKDYDMPRVVACSVEPCPHTVDCYISRPTEKK(SEQ.ID.NO 43)huCx31LYLLHTLWHGFNMPRLVQCANVAPCPNIVDCYIARPTEKK(SEQ.ID.NO 44)huCx31.1LYVFHSFYPKYILPPVVKCHADPCPNIVDCFISKPSEKN(SEQ.ID.NO 45)huCx32MYVFYLLYPGYAMVRLVKCDVYPCPNTVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO 46)huCx36LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO 47)huCx37LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO 48)huCx40.1GALHYFLFGFLAPKKFPCTRPPCTGVVDCYVSRPTSKS(SEQ.ID.NO 49)huCx43LLIQWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKT(SEQ.ID.NO 50)huCx46IAGQYFLYGFELKPLYRCDRWPCPNTVDCFISRPTEKT(SEQ.ID.NO 51)huCx46.6LVGQYLLYGFEVRPFFPCSRQPCPHVVDCFVSRPTEKT(SEQ.ID.NO 52)hucx40IVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKN(SEQ.ID.NO 53)huCx45LIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKT(SEQ.ID.NO 54)不同連接蛋白同種型的E2結(jié)構(gòu)域的序列示出在表3中。注意，肽SEQ. ID. NO :7的
最后4個(gè)氨基酸是第四膜結(jié)構(gòu)域的一部分。表4提供了用于連接蛋白家族成員的胞外結(jié)構(gòu)域，其可以用來開發(fā)肽間隙連接調(diào) 節(jié)齊U。在表4中提供的肽、以及它們的片斷還可以用作肽間隙連接調(diào)節(jié)劑。上述肽可以包 含該表4中肽序列的約8至約15、或約11至約13個(gè)鄰接氨基酸?？梢詫?duì)肽或它們的片斷 進(jìn)行保守氨基酸變化。表4.胞外結(jié)構(gòu)域肽VDCFLSRPTEKT (SEQ. ID. NO 6)
肽SRPTEKTIFII(SEQ. ID. NO7)
huCx43LLIQWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKTIFII(SEQ. ID. NO:55)
huCx26MYVFYVMYDGFSMQRLVKCNAWPCPNTVDCFVSRPTEKTVFTV(SEQ. ID.NO56)
huCx30YVFYFLYNGYHLPWVLKCGIDPCPNLVDCFISRPTEKTVFTI(SEQ. ID.NO57)
huCx30.3LYIFHRLYKDYDMPRVVACSVEPCPHTVDCYISRPTEKKVFTY(SEQ. ID.NO58)
huCx31LYLLHTLWHGFNMPRLVQCANVAPCPNIVDCYIARPTEKKTY(SEQ. ID.NO59)
huCx31.1LYVFHSFYPKYILPPVVKCHADPCPNIVDCFISKPSEKNIFTL(SEQ. ID.NO60)
huCx32MYVFYLLYPGYAMVRLVKCDVYPCPNTVDCFVSRPTEKTVFTV(SEQ. ID.NO61)
huCx36LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKTIFII(SEQ. ID.NO62)
huCx37LYGWTMEPVFVCQRAPCPYLVDCFVSRPTEKTIFII(SEQ. ID.NO63)
huCx40.IGALHYFLFGFLAPKKFPCTRPPCTGVVDCYVSRPTEKSLLML(SEQ. ID.NO64)
huCx46IAGQYFLYGFELKPLYRCDRWPCPNTVDCFISRPTEKTIFII(SEQ. ID.NO65)
huCx46.6LVGQYLLYGFEVRPFFPCSRQPCPHVVDCFVSRPTEKTVFLL(SEQ. ID.NO66)
huCx40IVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYSRPTEKNVFIV(SEQ. ID.NO67)
huCx45LIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKTIFLL(SEQ. ID.NO68)表5提供了參照連接蛋白40的細(xì)胞外環(huán)(El和E2)示出的連接蛋白40的肽抑制 劑。粗體氨基酸定向于連接蛋白40的跨膜區(qū)。表5. Cx40肽抑制劑ElLGTAAESSffGDEQADFRCDTIQPGCQNVCTDQAFPISHIRFffVLQ(SEQ.ID.NO:69)
LGTAAESSffGDEQA(SEQ.ID.NO:70)
DEQADFRCDTIQP(SEQ.ID.NO:71)
TIQPGCQNVCTDQ(SEQ.ID.NO:72)
VCTDQAFPISHIR(SEQ.ID.NO:73)
AFPISHIRFffVLQ(SEQ.ID.NO:74)
E2
MEVGFIVGQYFIYGIFLTTLHVCRRSPCPHPVNCYVSRPTEKNVTIV(SEQ.ID.NO:75)
MEVGFIVGQYF(SEQ.ID.NO:76)
IVGQYFIYGIFL(SEQ.ID.NO:77)
GIFLTTLHVCRRSP(SEQ.ID.NO:78)
RRSPCPHPVNCY(SEQ.ID.NO:79)
VNCYVSRPTEKN(SEQ.ID.NO:80)
SRPTEKNVFIV(SEQ.ID.NO:81)表6提供了參照連接蛋白45的細(xì)胞外環(huán)(El和E2)示出的連接蛋白45的肽抑制 劑。粗體氨基酸定向于連接蛋白45的跨膜區(qū)。表6. Cx45肽抑制劑El LTAVGGESIYYDEQSKFVCNTEQPGCENVCYDAFAPLSHVRFWVFQ
LTAVGGESIYYDEQS
(SEQ. ID. NO 82) (SEQ. ID. NO 83)
DEQSKFVCNTEQP(SEQ.ID.NO:84)
TEQPGCENVCYDA(SEQ.ID.NO:85)
VCYDAFAPLSHVR(SEQ.ID.NO:86)
APLSHVRFffVFQ(SEQ.ID.NO:87)
E2
FEVGFLIGQYFLYGFQVHPFYVCSRLPCHPKIDCFISRPTEKTIFLL(SEQ.ID.NO:88)
FEVGFLIGQYF(SEQ.ID.NO:89)
LIGQYFLYGFQV(SEQ.ID.NO:90)
GFQVHPFYVCSRLP(SEQ.ID.NO:91)
SRLPCHPKIDCF(SEQ.ID.NO:92)
IDCFISRPTEKT(SEQ.ID.NO:93)
SRPTEKTIFLL(SEQ.ID.NO:94)在某些實(shí)施方式中，優(yōu)選的是，某些肽抑制劑阻斷半通道而沒有間隙連接的 期望的阻斷。雖然不希望受限于任何特定理論或機(jī)制，但還是認(rèn)為，某些擬肽(例 如VCYDKSFPISHVR(SEQ.ID.NO :11))會(huì)阻斷半通道而沒有引起間隙連接的解偶聯(lián)。肽 SRPTEKTIFIKSEQ. ID. NO 7)還可以例如用來阻斷半通道而沒有間隙連接的解偶聯(lián)。肽 SRGGEKNVFIV(SEQ. ID. NO :95)可以用作對(duì)照序列(DeVriese et al. ,Kidney Internat. 61 177-185 (2002)) ο用于連接蛋白45的肽抑制劑的實(shí)例是YVCSRLPCHP(SEQ. ID. NO :96)、 QVHPFYVCSRL(SEQ. ID.NO :97)、FEVGFLIGQYFLY(SEQ.ID.NO :98)、GQYFLYGFQVHP (SEQ. ID. NO 99)、GFQVHPFYVCSR(SEQ. ID. NO :100)、AVGGESIYYDEQ (SEQ. ID. NO :101)、 YDEQSKFVCNTE (SEQ. ID. NO :102)、NTEQPGCENVCY (SEQ. ID. NO :103)、CYDAFAPLSHVR (SEQ. ID. NO :104)、FAPLSHVRFffVF (SEQ. ID. NO :105)禾口 LIGQY (SEQ. ID. NO :106)、QVHPF (SEQ. ID. NO :107)、YVCSR (SEQ. ID. NO :108)、SRLPC (SEQ. ID. NO :109)、LPCHP (SEQ. ID. NO 110)禾口 GESIY (SEQ. ID. NO :111)、YDEQSK (SEQ. ID. NO :112)、SKFVCN (SEQ. ID. NO :113)、 TEQPGCEN(SEQ. ID. NO :114)、VCYDAFAP (SEQ. ID. NO :115)、LSHVRFffVFQ (SEQ. ID. NO :116)。 肽在長度上可以僅為3個(gè)氨基酸，包括SRL、PCH、LCP、CHP、IYY、SKF、QPC、VCY、APL、HVR, 或更長，例如:LIQYFLYGFQVHPF(SEQ. ID. NO :117)、VHPFYCSRLPCHP (SEQ. ID. NO :118)、 VGGESIYYDEQSKFVCNTEQPG (SEQ. ID. NO :119)、TEQPGCENVCYDAFAPLSHVRF (SEQ. ID. NO :120)、 AFAPLSHVRFffVFQ(SEQ. ID. NO :121)。示例性的肽還可以包括在屬于Griffith的W0200303^64中報(bào)道的那些 肽，包括，例如，與連接蛋白的一種或多種間隙沈和27細(xì)胞外環(huán)部分同源的合成肽、 VCYDQAFPISHIR(SEQ. ID. NO 122)、VCYDKSFPISHVR (SEQ. ID. NO :123)、SRPTEKTIFII (SEQ. ID. NO :124)、SRPTEKNVFIV(SEQ. ID. NO :125)、RVDCFLSRPTEK (SEQ. ID. NO :126)、 PVNCYVSRPTEK(SEQ. ID. NO :127)、IVDCYVSRPTEK(SEQ. ID. NO :128)、SRPTEKT(SEQ. ID. NO :129)、VCYDQAFPISHIR(SEQ. ID. NO :130)、VCYDKSFPISHVRI (SEQ. ID. NO :131)、 SRPTEKTIFII(SEQ. ID. NO :132)、SRPTEKNVFIV (SEQ.ID.NO :133)、RVDCFLSRPTEK(SEQ. ID. NO :134)、PVNCYVSRPTEK (SEQ. ID. NO :135)、以及 IVDCYVSRPTEK (SEQ. ID. NO :136)、 SRPTEKT(SEQ. ID. NO :137)。本文討論了同源性和同源物。這樣的多肽通常與相關(guān)序列具有至少約70%同源性、優(yōu)選至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約97%或至少約99%的同源性，所述 相關(guān)序列例如在至少約15、至少約20、至少約40、至少約100個(gè)更多連續(xù)多肽的區(qū)上?？梢曰诒绢I(lǐng)域中的任何方法來計(jì)算同源性。例如UWGCGPackage (軟件包)提供 了 BESTFIT程序，該程序可以用來計(jì)算同源性(例如基于它的默認(rèn)設(shè)置而使用)(Devereux et al (1984) Nucleic Acids Research 12:387-395)。PILEUP 和 BLAST 算法可以用來計(jì)算 同源性或?qū)⑿蛄信懦梢恍?通?；谒鼈兊哪J(rèn)設(shè)置)，例如如在Altschul S. F. (1993) J Mol Evol 36 :290-300 ；Altschul, S, F et al(1990)J Mol Biol 215 :403-10 中所描述的。通過 National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi. nlm.nih.gov/)可以公開獲得用于進(jìn)行BLAST分析的軟件。這種算法涉及首先通過識(shí)別在 查詢序列中長度W的短字來識(shí)別高得分序列對(duì)(HSP)，當(dāng)對(duì)比在數(shù)據(jù)庫序列中相同長度的 字時(shí)，上述短字匹配或滿足一定的正估值閾值得分Τ。T被稱作鄰近字得分閾值(Altschul 等人，上文)。這些初始鄰近字命中(hits)作為種子，用于引發(fā)搜索以發(fā)現(xiàn)包含它們的HSP。 沿著每個(gè)序列在兩個(gè)方向擴(kuò)展字命中，直到可以增加累計(jì)序列對(duì)比得分。當(dāng)累計(jì)序列對(duì)比 得分從其最大達(dá)到值下降量X時(shí)，當(dāng)由于一個(gè)或多個(gè)負(fù)得分殘基序列對(duì)比的累積而引起累 積得分變成零或以下時(shí)；或達(dá)到任一序列的末端時(shí)，則停止在每個(gè)方向上的字命中的擴(kuò)展。BLAST算法參數(shù)W、T以及X確定了序列對(duì)比的敏感性和速度。BLAST程序使用11 的字長(W)、BL0SUM62 得分矩陣(參見 Henikoff and Henikoff (1992)Proc. Natl. Acad. Sci.USA 89 :10915-10919)、50 的序列對(duì)比(B)UO 的期望值(E)、M = 5、N = 4、以及兩條 鏈的比較作為默認(rèn)值。 BLAST算法對(duì)兩個(gè)序列之間的相似性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；參見例如，Kar 1 in and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :5873_5787。由 BLAST 算法提供的相似性的 一種度量是最小總和概率(P(N))，其提供兩個(gè)核苷酸序列之間的匹配將偶然發(fā)生的概率的 指示。例如，如果在比較第一序列與第二序列時(shí)最小總和概率小于約1、優(yōu)選小于約0. 1、更 優(yōu)選小于約0. 01、以及最優(yōu)選小于約0. 001，則一序列被認(rèn)為類似于另一序列。同源序列通常不同于相關(guān)序列至少約(或不大于)2、5、10、15、20個(gè)更多突變(其 可以是替代、缺失或插入)?？梢源┻^與計(jì)算同源性有關(guān)的上述任何區(qū)來測(cè)量這些突變。同源序列通常以顯著高于背景的水平來選擇性地雜交于原始序列。通常利用中等 至高嚴(yán)格性的條件來實(shí)現(xiàn)選擇性雜交。然而，可以在本領(lǐng)域已知的任何合適條件下來進(jìn)行 這樣的雜交( 參見 Sambrook et al. (1989) ,Molecular Cloning :A Laboratory Manual) 間隙連接調(diào)節(jié)劑包括這樣的藥劑，其可以關(guān)閉或阻斷間隙連接和/或半通道或以 其它方式防止或減少經(jīng)由間隙連接的細(xì)胞與細(xì)胞通訊或防止或減少經(jīng)由半通道與細(xì)胞外 環(huán)境的細(xì)胞通訊。它們包括可以全部或部分地防止、減小或抑制半通道或間隙連接的活性、 功能、或形成的藥劑或化合物。在某些實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑會(huì)誘導(dǎo)半通道或間隙連接的全部或部分閉 合。在其它實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑會(huì)全部或部分地阻斷半通道或間隙連接。在某些 實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑會(huì)全部或部分地減少或防止半通道或間隙連接的開放。在某些實(shí)施方式中，通過防止或減少小分子通過開放通道流向和流出細(xì)胞外間隙 或周質(zhì)間隙，間隙連接或半通道通過間隙連接調(diào)節(jié)劑的所述阻斷或閉合可以減少或抑制細(xì)胞外半通道通訊。在授予Jensen等人的美國專利第7，153，822號(hào)、美國專利第7，250，397號(hào)、以及 各類專利公開中已報(bào)道了用于閉合半通道或間隙連接的間隙連接調(diào)節(jié)劑(例如磷酸化連 接蛋白43酪氨酸殘基)。還參見Gourdie等人，參見W02006069181，關(guān)于連接蛋白羧基末 端多肽，據(jù)說其可以，例如，抑制ZO-I蛋白結(jié)合。Gourdie等人，W02006069181描述了包含 這樣的肽的配方的應(yīng)用。如在本文中所使用的，“間隙連接磷酸化劑”可以包括能夠誘導(dǎo)連接蛋白氨基酸殘 基上的磷酸化以便誘導(dǎo)間隙連接或半通道閉合的那些藥劑或化合物。磷酸化的示例性部位 包括在連接蛋白上的酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘基中的一種或多種。在某些實(shí)施方式中，磷 酸化的調(diào)節(jié)可以發(fā)生在一種或多種連接蛋白上的一種或多種殘基上。示例性間隙連接磷 酸化劑在本領(lǐng)域中是眾所周知的并且可以包括，例如，c-Src酪氨酸激酶或其它G蛋白偶聯(lián) 受體激動(dòng)劑。參見 Gi 印 mans B, J. Biol. Chem.，Vol.276，Issue 11,8544-8549, March 16, 2001。在一種實(shí)施方式中，在一種或多種這些殘基上的磷酸化的調(diào)節(jié)會(huì)影響半通道功能，尤 其通過閉合半通道。在另一種實(shí)施方式中，在一種或多種這些殘基上的磷酸化的調(diào)節(jié)會(huì)影 響間隙連接功能，尤其通過閉合間隙連接。靶向連接蛋白43間隙連接和半通道的閉合的間 隙連接磷酸化劑是優(yōu)選的。還有的其它抗連接蛋白劑包括連接蛋白羧基末端多肽。參見Gourdie等人， W02006/069181。在某些另外的方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以包括，例如，脂族醇；辛醇；庚醇；麻醉藥 (例如氟烷)、恩氟烷、氟烷、丙泊酚以及硫噴妥；花生四烯酸乙醇胺；芳氨基苯甲酸酯(FFA : 氟芬那酸和類似的衍生物，其是親脂的)；甘珀酸；查耳酮(2'，5' - 二羥基查耳酮)； CHF (氯羥基呋喃酮)；CMCF (3-氯-4-(氯甲基)-5-羥基-2 (5H)-呋喃酮)；地塞米松；多柔 比星(以及其它蒽醌衍生物)；類花生酸血栓烷AO) (TXA(2))模擬物；NO(—氧化氮)；脂 肪酸(例如花生四烯酸、油酸以及脂肪氧合酶代謝產(chǎn)物；芬那酸(氟芬那酸(FFA)、尼氟酸 (NFA)以及甲氯芬那酸(MFA))；染料木黃酮；甘草次酸(GA) :18a_甘草次酸和18-β-甘草 次酸、以及它們的衍生物；林旦；溶血磷脂酸；甲氟喹；甲萘醌；2-甲基-1，4-萘醌、維生素 K(3)；萘酚平調(diào)田酸；油酰胺；油酸；通過細(xì)胞內(nèi)酸化的PH調(diào)節(jié)劑；例如酸化劑；多不飽和 脂肪酸；脂肪酸GJIC抑制劑(例如油酸和花生四烯酸)；奎尼定；奎寧；所有反式視黃酸； 以及他莫昔芬。劑型、配方以及給藥本發(fā)明的間隙連接調(diào)節(jié)劑(通常以本文所討論的配方的形式)可以給予需要治療 的受治療者，如具有本文提及的任何傷口的受治療者。因此可以改善受治療者的傷口。因 此，通過治療，間隙連接調(diào)節(jié)劑和配方可以用于治療受治療者的身體。它們可以用于制造藥 物以治療本文提及的任何傷口。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了這樣的配方，通過該配方可以以瞬時(shí)和部位特異性方式 向下調(diào)節(jié)細(xì)胞間和/或半通道通訊?？梢苑奖愕厥褂盟幱幂d體配制間隙連接調(diào)節(jié)劑以產(chǎn)生 所期望的最終濃度。間隙連接調(diào)節(jié)劑可以以基本上分離的形式存在。應(yīng)當(dāng)理解，產(chǎn)品可以與載體或稀 釋劑混合，該載體或稀釋劑將不會(huì)干擾產(chǎn)品的預(yù)期目的，并且仍然被看作基本上分離的。本發(fā)明的產(chǎn)品還可以以基本上純化的形式，在這種情況下，它將通常包含約80%、85%、或 90%，例如至少約95%、至少約98%或至少約99%的肽(或其它間隙連接調(diào)節(jié)劑)或制劑
的干質(zhì)量。
取決于預(yù)期的給藥途徑，本發(fā)明的藥物產(chǎn)品、藥物組合物、聯(lián)合制劑以及藥物可 以，例如，采取以下形式溶液、混懸劑、滴注劑、藥膏、乳膏劑、凝膠劑、泡沫、噴霧劑、軟 膏劑、乳劑、洗劑、涂劑、緩釋劑型、或粉劑，并且通常包含0.01%至約的活性組分、約 1% -50%的活性組分、約2% -60%的活性組分、約2% -70%的活性組分、或高達(dá)約90%的 活性組分。其它合適的劑型包括基于Pluronic (普流尼克)凝膠的劑型、基于羧甲基纖維 素(CMC)的劑型、以及基于羥丙基甲基纖維素(HPMC)的劑型。合適的劑型(包括pluronic 凝膠)，例如包含約10%至約15%，合適地約12%的pluronic凝膠。其它有用的劑型包括 緩慢或延遲釋放制劑?？梢岳冒ǖ幌抻诿髂z、黃芪膠、或纖維素衍生物的合適的膠凝劑來制備凝 膠劑或膠凍劑，并且凝膠劑或膠凍劑可以包括甘油(作為保濕劑)、軟化劑、以及防腐劑。軟 膏劑是半固體制劑，該半固體制劑由加入到脂肪基質(zhì)、蠟基質(zhì)、或合成基質(zhì)中的活性組分構(gòu) 成。合適的乳膏劑的實(shí)例包括但不限于油包水乳劑和水包油乳劑。通過利用合適的乳化劑 可以配制油包水乳膏劑，其中乳化劑的性能類似但不限于脂肪醇如十六醇或十六醇十八醇 混合物以及乳化蠟的性能?？梢岳萌榛瘎┤缇畚魍写既榛瀬砼渲扑腿楦鄤：线m 的性能包括在廣泛的PH值范圍內(nèi)改進(jìn)乳狀液的粘度以及物理和化學(xué)穩(wěn)定性的能力。水溶 性或水溶混性膏基質(zhì)(膏用底物)可以包含防腐劑體系并且還可以加以緩沖以維持可接受 的生理PH值。可以配制泡沫制劑以利用惰性推進(jìn)劑經(jīng)由合適的涂藥器從加壓的氣霧罐進(jìn)行遞 送。用于配制泡沫基質(zhì)的合適的賦形劑包括但不限于丙二醇、乳化蠟、十六醇、以及硬脂酸 甘油酯。潛在的防腐劑包括羥苯甲酯和羥苯丙酯。優(yōu)選地，間隙連接調(diào)節(jié)劑與藥用載體或稀釋劑組合以產(chǎn)生藥物組合物。合適的載 體和稀釋劑包括等滲鹽水溶液，例如磷酸鹽緩沖液。合適的稀釋劑和賦形劑還包括，例如， 水、鹽水、葡萄糖、甘油等、以及它們的組合。此外，如果需要的話，還可以存在一些物質(zhì)如濕 潤劑或乳化劑、穩(wěn)定劑或PH值緩沖劑。術(shù)語“藥用載體”是指任何藥物載體，該藥物載體本身并不誘導(dǎo)對(duì)接受組合物的個(gè) 體有害的抗體的產(chǎn)生，并且其可以給予而沒有過分的毒性。合適的載體可以是較大的、緩慢 代謝的大分子如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、以及氨基酸共聚物。還可以存在藥用鹽，例如，無機(jī)酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等；以及 有機(jī)酸的鹽如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。合適的載體材料包括任何載體或媒介物(賦形劑)，其通常用作用于乳膏劑、 洗劑、噴霧劑、泡沫、凝膠劑、乳劑、洗劑或涂劑(用于局部給藥)的基質(zhì)。實(shí)例包括乳化 齊 、包括烴基質(zhì)的惰性載體、乳化基質(zhì)、非毒性溶劑或水溶性基質(zhì)。特別合適的實(shí)例包括 pluronics, HPMC、CMC以及其它基于纖維素的組分、羊毛脂、硬石蠟、液體石蠟、黃軟石蠟或 軟性白石蠟、白蜂蠟、黃蜂蠟、十六醇十八醇混合物、十六醇、二甲基硅氧烷、乳化蠟、肉豆蔻 酸異丙酯、微晶蠟、油醇以及硬脂醇。優(yōu)選地，藥用載體或媒介物是凝膠，合適地非離子型聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物凝膠，例如，Pluronic凝膠，優(yōu)選PluronicF-127 (BASF Corp.)。該凝膠是特別優(yōu)選的，因?yàn)?它在低溫下是液體但在生理溫度下會(huì)快速凝固，這可以將ODN成分的釋放限制于施加部位 或緊鄰上述部位。在本發(fā)明的劑型(配方)中還可以包括助劑如酪蛋白、明膠、白蛋白、膠劑、藻酸 鈉、羧甲基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素或聚乙烯醇。其它合適的劑型(配方)包括基于pluronic凝膠的劑型、基于羧甲基纖維素 (CMC)的劑型、以及基于羥丙基甲基纖維素(HPMC)的劑型。組合物可以被配制成用于遞送 的任何所期望的形式，其包括局部、滴注、胃腸道外、肌內(nèi)、皮下、或經(jīng)皮給予。其它有用的劑 型包括緩慢或延遲釋放制劑。對(duì)于給定受治療者或傷口的有效劑量可以通過例行試驗(yàn)或本領(lǐng)域已知或以后開 發(fā)的其它方法來確定。例如，為了配制一定范圍的劑量值，可以使用細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研 究。上述化合物的劑量優(yōu)選在這樣的劑量范圍內(nèi)，其對(duì)于至少50%的群體是治療有效的，并 且在該水平下呈現(xiàn)很少或不呈現(xiàn)毒性。在本發(fā)明的方法和組合物中采用的每種間隙連接調(diào)節(jié)劑的有效劑量可以取決于 許多因素而變 化，這些因素包括所采用的一種或多種特定的間隙連接調(diào)節(jié)劑、給藥方式、給 藥頻率、正治療的傷口、正治療傷口的嚴(yán)重性、給藥途徑、待治療患者亞群體的需要或個(gè)別 患者的需要，上述不同需要可以起因于年齡、性別、體重、患者特有的有關(guān)醫(yī)療傷口。給予患者的間隙連接調(diào)節(jié)劑的劑量將取決于各種因素如患者的年齡、體重和一般 傷口情況、正治療的傷口、以及正給予的特定間隙連接調(diào)節(jié)劑。合適的劑量可以基于間隙連接調(diào)節(jié)劑的量/kg受治療者的體重，并且包括約 0. 001至約100mg/kg體重如約0. 01至約40mg/kg體重。然而合適的劑量可以是約0. 001 至約0. lmg/kg體重如約0. 01至約0. 050mg/kg體重。合適的劑量可以是約0. 001至約0. lmg/kg體重如約0. 01至約0. lmg/kg體重。 然而，合適的劑量可以是約0. 001至約0. 25mg/kg體重，包括約0. 001至約0. 050mg/kg體 重?？商鎿Q地，例如，在某些實(shí)施方式中，每種受治療者化合物的劑量將通常在約Ing至約1 微克/kg體重、約Ing至約0. 1微克/kg體重、約Ing至約10ng/kg體重、約IOng至約0. 1 微克/kg體重、約0. 1微克至約1微克/kg體重、約20ng至約lOOng/kg體重、約0. OOlmg 至約100mg/kg體重、約0. Olmg至約10mg/kg體重、或約0. Img至約lmg/kg體重的范圍內(nèi)。 在某些實(shí)施方式中，每種受治療者化合物的劑量將通常在約0. OOlmg至約0.0lmg/kg體重、 約0. Olmg至約0. lmg/kg體重、約0. Img至約lmg/kg體重、或約Img至約10mg/kg體重的 范圍內(nèi)。如果使用多于一種的間隙連接調(diào)節(jié)劑，則每種間隙連接調(diào)節(jié)劑的劑量無需在與其 它相同的范圍內(nèi)。約1至100、200、300、400、500微克、以及高達(dá)1毫克/施加的劑量是合適的。間 隙連接調(diào)節(jié)劑劑量包括，例如，約1、約2、約3、約4、或約5微克、約5至約10微克、約10至 約15微克、約15至約20微克、約20至約30微克、約30至約40微克、約40至約50微克、 約50至約75微克、約75至約100微克、約100微克至約250微克、以及250微克至約500
微克。還提供了約0. 5至約1. 0毫克或更大的劑量。可替換地，在本發(fā)明的組合物中每種間隙連接調(diào)節(jié)劑的劑量可以通過參照相對(duì)于 將施加區(qū)域的大小、長度、深度、面積或體積的組合物的濃度來確定。例如，在某些局部施加中，可以基于在藥物組合物中的質(zhì)量(例如克)或濃度(例如yg/ul)/施加區(qū)域的長度、 深度、面積、或體積來計(jì)算藥物組合物的劑量。因此，其它有用的劑量范圍為約ι至約 ο微 克/平方厘米傷口大小。某些劑量將是約1-2、約1-5、約2-4、約5-7、以及約8_10微克/平 方厘米傷口大小。其它有用的劑量是大于約10微克/平方厘米傷口大小，其包括約15微 克/平方厘米傷口大小、約20微克/平方厘米傷口大小、約25微克/平方厘米傷口大小、 約30微克/平方厘米傷口大小、約35微克/平方厘米傷口大小、約40微克/平方厘米傷口 大小、約50微克/平方厘米傷口大小、以及約100至約150微克/平方厘米傷口大小。其 它劑量包括約150-200微克/平方厘米、約200-250微克/平方厘米、約250-300微克/平 方厘米、約300-350微克/平方厘米、約350-400微克/平方厘米、以及約400-500微克/ 平方厘米。還有其它的劑量包括500-1000微克/平方厘米范圍的劑量。其它劑量可以是 1-10毫克/ 平方厘米。緩釋劑型可以特別適用于抗連接蛋白肽和擬肽。在某些實(shí)施方式中，可以在治療部位和/或鄰近治療部位，以約0. 01微摩爾(μ Μ) 或0. 05 μ M至約200 μ Μ、或高達(dá)300 μ M或高達(dá)1000 μ Μ、或高達(dá)2000 μ M或高達(dá)3200 μ M 或更大的最終濃度、以及在這些劑量數(shù)值范圍內(nèi)的任何劑量和劑量范圍來施加間隙連接調(diào) 節(jié)劑組合物。優(yōu)選地，以約0. 05 μ M至約100 μ M的最終濃度來施加間隙連接調(diào)節(jié)劑(包括 抗連接蛋白肽或擬肽組合物)，更優(yōu)選地，以約1. 0 μ M至約50 μ M的最終濃度來施加間隙 連接調(diào)節(jié)劑組合物，并且更優(yōu)選地，以約5-10 μ M至約30-50 μ M的最終濃度來施加間隙連 接調(diào)節(jié)劑組合物。另外，以約8μΜ至約20 μ M的最終濃度來施加組合的間隙連接調(diào)節(jié)劑 組合物，以及可替換地，以約10 μ M至約20 μ M的最終濃度、或以約10至約15 μ M的最終 濃度，來施加間隙連接調(diào)節(jié)劑組合物。在某些其它實(shí)施方式中，以約ΙΟμΜ的最終濃度來 施加間隙連接調(diào)節(jié)劑。在其它實(shí)施方式中，以約20μΜ、30μΜ、40μΜ、50μΜ、60μΜ、70μΜ、 80 μ Μ,90 μ Μ、100 μ Μ、10-200 μ Μ、200-300 μ Μ,300-400 μ Μ,400-500 μ Μ、500-600 μ Μ、 600-700 μ Μ, 700-800 μ Μ、800_900 μ Μ、或 900-1000 μ M 或 1000-1500 μ Μ、或 1500-2000 μ M 或2000-3000 μ M或更大的最終濃度、或這些范圍內(nèi)的任何劑量，來施加抗連接蛋白劑。在又一種另外的實(shí)施方式中，以約1-15 μ M的最終濃度來施加間隙連接調(diào)節(jié)劑組 合物。間隙連接調(diào)節(jié)劑的劑量包括，例如，約0. 1-1、1-2、2-3、3_4、或4-5微克(μ g)、約5 至約10μ g、約10至約15μ g、約15至約20μ g、約20至約30μ g、約30至約40μ g、約40 至約50 μ g、約50至約75 μ g、約75至約100 μ g、約100 μ g至約250 μ g、以及250 μ g至約 500 μ g。如上文所述，還提供了 0. 5至約1. 0毫克或更大的劑量。劑量體積將取決于待治療部位的大小，并且可以在，例如，約25-100 μ L至約 100-200 μ L、約200-500 μ L至約500-1000 μ L的范圍。毫升劑量還適用于更大的治療部位。方便地，以足夠的量給予組合物，以在給予以后，向下調(diào)節(jié)所述連接蛋白的表達(dá)、 或調(diào)節(jié)間隙連接形成或連接子開放至少約0. 5至1小時(shí)、至少約1-2小時(shí)、至少約2-4小時(shí)、 至少約4-6小時(shí)、至少約6-8小時(shí)、至少約8-10小時(shí)、至少約12小時(shí)、或至少約24小時(shí)。在本發(fā)明的組合物和方法中，每種間隙連接調(diào)節(jié)劑的劑量還可以通過參照相對(duì)于 將施加區(qū)域的大小、長度、深度、面積或體積的組合物的濃度來確定。例如，在某些局部和 其它用途中，例如，滴注法中，可以基于藥物組合物的質(zhì)量(例如微克)或濃度(例如yg/ μ 1)/施加區(qū)域的長度、深度、面積、或體積來計(jì)算藥物組合物的劑量。
若干種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合使用可以減少任何個(gè)別成分需要的劑量，因?yàn)椴煌?成分的作用的起始和持續(xù)時(shí)間可以是互補(bǔ)的。在這樣的組合療法中，可以一起或分別地、以 及同時(shí)或在一天內(nèi)的不同時(shí)間遞送不同的活性劑。
可以以單獨(dú)的或分開的施加來給予劑量?？梢砸淮谓o予劑量，或可以重復(fù)施加。通 常，每周進(jìn)行重復(fù)施加約一次，或當(dāng)傷口愈合可能似乎停止或放慢時(shí)進(jìn)行重復(fù)施加?？梢韵?隔1至7天或更長時(shí)間施加劑量?？梢赃M(jìn)行重復(fù)施加，例如，每周、或每兩周、或每月或以其 它頻率，例如如果和當(dāng)傷口愈合放慢或停止時(shí)?？商鎿Q地，對(duì)于一些適應(yīng)癥，如某些眼部應(yīng) 用，可以采用更加頻繁地給予劑量，直到每小時(shí)。可以通過相同或不同的途徑來給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。優(yōu)選地，通過局 部給予(外周或直接到部位)來遞送一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，包括但不限于利用載體 (如敷料和其它基質(zhì))和藥物劑型(如凝膠劑、混合劑、混懸劑以及軟膏劑)來局部給予。 在一種實(shí)施方式中，載體包含生物相容膜或進(jìn)入治療部位中的插入物。在另一種實(shí)施方式 中，載體包含敷料或基質(zhì)。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，載體組合物可以是緩釋載體組合 物，其中一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑被分散在緩釋固體基質(zhì)如藻酸鹽、膠原、或合成可生物 吸收聚合物的基質(zhì)中。優(yōu)選地，載體組合物是無菌的或低生物負(fù)荷的。在一種實(shí)施方式中， 可以使用包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的洗液。配方的間隙連接調(diào)節(jié)劑成分的遞送可以發(fā)生在一段時(shí)間內(nèi)，在一些情況下為約 1-2小時(shí)、約2-4小時(shí)、約4-6小時(shí)、約6-8、或約24小時(shí)或更長時(shí)間，在某些矯形治療或更 加嚴(yán)重?fù)p傷或傷口或在慢性或延遲愈合傷口的治療中，可以是特別有利的。在一些情況下， 細(xì)胞損失可以充分?jǐn)U展到手術(shù)部位以外至周圍細(xì)胞。這樣的損失可以發(fā)生在最初手術(shù)的24 小時(shí)內(nèi)并且通過間隙連接細(xì)胞間通信來介導(dǎo)。因此，間隙連接調(diào)節(jié)劑的給予，例如，用于連 接蛋白表達(dá)的向下調(diào)節(jié)、或連接子開放的阻斷，將調(diào)節(jié)細(xì)胞之間的通訊、或進(jìn)入細(xì)胞外間隙 的損失(在連接子調(diào)節(jié)的情況下)，以及使另外的細(xì)胞損失或損傷或損傷的后果降至最小 程度。雖然遞送期將取決于要誘導(dǎo)向下調(diào)節(jié)的部位和所期望的治療效果，但提供了連續(xù) 或緩釋遞送約1-2小時(shí)、約2-4小時(shí)、約4-6小時(shí)、約6-8、或約24小時(shí)或更長時(shí)間。根據(jù)本 發(fā)明，這是通過在劑型中包含間隙連接調(diào)節(jié)劑、以及藥用載體或賦形劑來實(shí)現(xiàn)的。根據(jù)一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以局部給予(在待治療部位)。在一個(gè)方面，間 隙連接調(diào)節(jié)劑與藥用載體或稀釋劑組合以產(chǎn)生藥物組合物。合適的載體和稀釋劑包括等滲 鹽水溶液，例如磷酸鹽緩沖液。在另一個(gè)方面，組合物可以配制成用于肌內(nèi)、皮下、或經(jīng)皮給 予。本文描述的給藥途徑和劑量旨在僅作為用于任何特定患者和傷口的劑量的指導(dǎo)。敷料和基質(zhì)在一個(gè)方面，以敷料或基質(zhì)的形式提供了一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí) 施方式中，以液體、半固體或固體組合物的形式提供了一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，用于直 接施加，或?qū)⒔M合物施加至固體接觸層如藥用紗布或基質(zhì)的表面、或加入固體接觸層如藥 用紗布或基質(zhì)中。可以例如以液體或凝膠劑的形式提供敷料組合物?？梢赃B同用于局部施 加的常規(guī)藥物賦形劑一起提供一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。合適的載體包括=Pluronic凝 膠，泊洛沙姆凝膠，包含纖維素衍生物的水凝膠，其中纖維素衍生物包括羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素以及它們的混合物；以及包含聚丙烯酸的水 凝膠(卡波普)。合適的載體還包括用于局部藥物制劑的乳膏/軟膏，例如，基于聚西托醇 乳化軟膏的乳膏。上述載體可以包括藻酸鹽(作為增稠劑或刺激劑)，防腐劑如苯甲醇，控 制PH值的緩沖劑如磷酸氫二鈉/磷酸二氫鈉，調(diào)節(jié)同滲濃度的藥劑如氯化鈉，以及穩(wěn)定劑 如 EDTA0在一種實(shí)施方式中，在天然或合成基質(zhì)上給予一種或多種抗連接蛋白肽或擬肽， 例如抗連接蛋白43肽或擬肽。合適的敷料或基質(zhì)可以包括，例如，以下制劑并連同一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。 連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的1)吸收劑合適的吸收劑可以包括,例如，吸收件敷料,其可以提供，例如，半附著 質(zhì)量或非附著層，并結(jié)合于纖維的高度吸收層，如例如，纖維素、棉花或人造絲。可替換地， 吸收劑可以用作主要或輔助敷料。2)合適的藻酸鹽包括，例如，敷料，該敷料是非編織、非粘附墊子和系帶， 其由來源于海藻的天然多糖纖維或干凝膠構(gòu)成。合適的藻酸鹽敷料可以，例如，在與滲出物 接觸以后通過離子交換過程而形成濕凝膠。在某些實(shí)施方式中，藻酸鹽敷料被設(shè)計(jì)成軟的 和適合的、容易填塞、蓋住(tuck)或施加于不規(guī)則形狀區(qū)域上。在某些實(shí)施方式中，藻酸鹽 敷料可以與第二敷料一起使用。3)抗微牛物敷料在需要或期望的情況下，合適的抗微生物敷料可以包括，例如， 可以促進(jìn)生物活性劑遞送的敷料，如，例如，銀和聚六亞甲基雙胍(PHMB)，以維持抵抗感染 的效力。在某些實(shí)施方式中，合適的抗微生物敷料可以例如，作為海綿、浸漬編織紡布、薄膜 敷料、吸收性產(chǎn)品、島狀敷料、尼龍織物、非粘附阻擋層、或上述材料的組合而獲得。4)生物及生物合成材料合適的生物敷料或生物合成敷料可以包括，例如，凝膠、 溶液或半透片，其來自天然來源。在某些實(shí)施方式中，將凝膠或溶液施加至治療部位并用敷 料覆蓋，用于屏障保護(hù)。在另一種實(shí)施方式中，原位放置片，其可以作為膜，并在單次施加以 后保留在適當(dāng)位置。5)膠原合適的膠原敷料可以包括，例如，凝膠、墊子、顆粒、糊劑、粉劑、片或溶 液，其來源于例如，牛、豬或禽源或其它天然來源或供體。在某些實(shí)施方式中，膠原敷料可以 與治療部位滲出物相互作用以形成凝膠。在某些實(shí)施方式中，膠原敷料可以連同輔助敷料
一起使用。 6) ff合物合適的復(fù)合物敷料可以包括,例如，這樣的敷料,其將物理上不同的成 分結(jié)合成單一產(chǎn)品以提供多種功能，如，例如，細(xì)菌屏障、吸收和附著。在某些實(shí)施方式中， 復(fù)合物敷料由例如多層構(gòu)成并且結(jié)合半或非附著墊子。在某些實(shí)施方式中，復(fù)合勉還可以 包括例如，非編織織物帶或透明薄膜的粘附邊緣。在某些其它實(shí)施方式中，復(fù)合物敷料可以 作為例如，主要或輔助敷料起作用，以及在又一種實(shí)施方式中，可以連同局部藥物組合物一 起使用敷料。7)^MM:合適的接觸層敷料可以包括，例如，薄的非粘附片，其被放置在一個(gè)區(qū) 域上以防止組織例如與施加于治療部位的其它藥劑或敷料直接接觸。在某些實(shí)施方式中， 接觸層可以被展開以符合治療部位的區(qū)域形狀并且是多孔的以便于滲出物穿過，從而被覆 蓋的輔助敷料吸收。在又一種實(shí)施方式中，可以連同局部藥物組合物一起使用接觸層敷料。
8)彈 件繃帶合適的彈性繃帶可以包括，例如，伸展并符合身體輪廓的敷料。在某 些實(shí)施方式中，織物成分可以包括例如，棉花、聚酯纖維、人造絲或尼龍。在某些其它實(shí)施方 式中，彈性繃帶可以例如，提供吸收劑作為第二層或敷料，以將覆蓋物保持在適當(dāng)位置、施 加壓力或保護(hù)治療部位。9) Μ:合適的泡沫敷料可以包括，例如，具有能夠保持流體的較小開放單元 (open cell)的片和其它形狀泡沫聚合物溶液(包括聚氨酯)。示例性的泡沫可以例如連 同其它材料一起進(jìn)行浸漬或?qū)訅骸Ｔ谀承?shí)施方式中，可以基于泡沫的厚度和組成來調(diào)節(jié) 吸收能力。在某些其它實(shí)施方式中，與治療部位接觸的區(qū)域可以是非粘附的，以易于去除。 在又一種實(shí)施方式中，可以連同可用作抗感染屏障的粘附邊緣和/或透明薄膜涂層一起使 用泡沫。10)紗布以及非編織敷料合適的紗布敷料和編織敷料可以包括，例如，具有不同 吸收程度的干編織或非編織海綿和包裹材料。示例性的織物成分可以包括，例如，棉花、聚 酯纖維或人造絲。在某些實(shí)施方式中，紗布和非編織敷料可以是無菌或非無菌地可用的 (散裝)并且具有或沒有粘附邊緣。示例性的紗布敷料和編織敷料可以用于清潔、填塞以及 覆蓋各種治療部位。11)親水膠合適的親水膠敷料可以包括,例如，糯米紙、粉劑或糊劑，其由明膠、 果膠或羧甲基纖維素構(gòu)成。在某些實(shí)施方式中，糯米紙是自粘的并且在有或沒有粘附邊緣 的情況下可用以及以各種形狀和大小。示例性的親水膠可用于需要外形修復(fù)的區(qū)域上。在 某些實(shí)施方式中，可以連同輔助敷料一起使用粉劑和糊劑親水膠。12)水凝膠(無定形)合適的無定形水凝膠敷料可以包括，例如，水、聚合物以及 其它組分的沒有形狀的配方，其被設(shè)計(jì)成提供水分和維持濕性愈合環(huán)境和/或再水化治療 部位。在某些實(shí)施方式中，可以連同輔助敷料覆蓋物一起使用水凝膠。13)水凝膠浸漬敷料合適的浸漬水凝膠敷料可以包括，例如，用無定形水凝膠 飽和的紗布和非編織海綿、繩子以及條帶。無定形水凝膠可以包括例如，水、聚合物以及 其它組分的沒有形狀的配方，其被設(shè)計(jì)成向干燥的治療部位提供水分以及維持濕性愈合環(huán)
^Mi ο14)水凝膠片合適的水凝膠片可以包括例如，交聯(lián)親水性聚合物的三維網(wǎng)絡(luò)，其 中聚合物不溶于水并通過溶脹與水溶液相互作用。示例性的水凝膠是高度適合的和可滲透 的并且取決于它們的組成可以吸收不同量的引流物。在某些實(shí)施方式中，水凝膠相對(duì)于治 療部位是非粘附的，以易于去除。15)浸漬敷料合適的浸漬敷料可以包括，例如，用溶液、乳狀液、油、凝膠或一些 其它藥物活性化合物或載體試劑(包括例如，鹽水、油、鋅鹽、凡士林、三溴酚鉍和猩紅以及 本文描述的化合物)飽和的紗布和非編織海綿、繩子和條帶。16)硅凝膠片合適的硅凝膠片敷料可以包括，例如，軟覆蓋物，該軟覆蓋物由交 聯(lián)聚合物構(gòu)成，其中交聯(lián)聚合物用網(wǎng)狀物或織物增強(qiáng)或結(jié)合于網(wǎng)狀物或織物。17)溶液合適的液體敷料可以包括，例如，多蛋白材料和其它要素(在細(xì)胞外基 質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的)的混合物。在某些實(shí)施方式中?？梢栽谇鍎?chuàng)術(shù)和清潔以后將示例性溶液施加 于治療部位，然后用吸收性敷料或非粘附墊子覆蓋。18)透明薄膜合適的透明薄膜敷料可以包括不同厚度的聚合物膜，該聚合物膜借助于粘合劑涂布在一側(cè)上。在某些實(shí)施方式中，透明薄膜對(duì)于液體、水以及細(xì)菌是不可滲 透的，但對(duì)于水蒸汽和大氣氣體是可滲透的。在某些實(shí)施方式中，透明性便于治療部位的可 視化。19)填 料合適的填料敷料可以包括，例如，珠、乳膏、泡沬、凝膠、軟膏、墊子、糊 齊U、枕墊、粉劑、絲狀體或其它配方。在某些實(shí)施方式中，填料是非粘附的并且可以包括隨時(shí) 間釋放的抗微生物劑。示例性的填料可以用于維持濕環(huán)境、管理滲出物、以及用于治療例 如，局部和全層傷口、感染傷口、引流傷口以及需要填塞的深部傷口。治療患有或懷疑患有本文提及或描述的疾病、障礙、和/或病癥的受治療者的任 何方法可以利用本文描述的任何劑量、劑型、配方、和/或組合物的給予。肽和其它間隙連接調(diào)節(jié)組合物本發(fā)明涉及包含間隙連接調(diào)節(jié)化合物(包括擬肽)的藥物組合物。該組合物可用 于加強(qiáng)或促進(jìn)例如慢性傷口和延遲或難以愈合的傷口(包括如本文描述的其它傷口)的愈 合。同樣地，在其它組織損傷的情況下，本發(fā)明的方法和組合物可有效促進(jìn)傷口愈合過程和 減少發(fā)炎。因此，本發(fā)明的配方和組合物可以明顯有利于治療慢性和緩慢愈合傷口、以及如 本文描述的其它傷口。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包含有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。 在一種實(shí)施方式中，組合物包含間隙連接調(diào)節(jié)劑，該間隙連接調(diào)節(jié)劑靶向僅與一種連接蛋 白有關(guān)的間隙連接。最優(yōu)選地，該間隙連接與連接蛋白43蛋白有關(guān)?？商鎿Q地，組合物可以包含靶向間隙連接的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，其中上 述間隙連接與多于一種連接蛋白有關(guān)。優(yōu)選地，調(diào)節(jié)劑所定向的連接蛋白之一是連接蛋白 43。調(diào)節(jié)劑所定向的其它間隙連接可以包括，例如，與連接蛋白26、30、30·3、31· 1、32、36、 37,40,40. 1,44. 6、45以及46有關(guān)的間隙連接。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包含(a)有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié) 劑以及(b)藥用載體或稀釋劑。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物包含(a) 一種或多種多肽以及(b)藥用載體或稀釋劑。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，多肽是連接蛋白 26、31. 1、32、37、40、43或45擬肽或它們的同系物。在其它實(shí)施方式中，多肽是連接蛋白30、 30. 3、36、40. 1、44. 6、45或46擬肽或它們的同系物。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含(a) —種或多種 結(jié)合蛋白以及(b)藥用載體或稀釋劑。在一種實(shí)施方式中，結(jié)合蛋白是抗體。在一種優(yōu)選 的實(shí)施方式中，結(jié)合蛋白是單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段、單鏈抗體、單鏈Fv、或單鏈 結(jié)合分子。在一種實(shí)施方式中，結(jié)合蛋白，例如抗體，特異性地結(jié)合于連接蛋白多肽，優(yōu)選連 接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31. 1、連接蛋白32、連接蛋白37、連接蛋白40或連接蛋白 45多肽或它們的任何部分。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，結(jié)合蛋白，例如抗體，特異性地結(jié)合 于連接蛋白43多肽或其任何部分。在一種實(shí)施方式中，結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合于連接蛋白 多肽并且具有大于或等于約104M_\大于或等于約106Μ_\大于或等于約107Μ_\或大于或等 于約IO8M4的親和力。甚至大于約IO8M4的親和力也是合適的，如等于或大于約IO9M^約 ΙΟ1、—1、約ΙΟ^Μ—1、以及約ΙΟ1、—1的親和力。在另一種實(shí)施方式中，藥物組合物包含(a) —種或多種結(jié)合蛋白以及(b)藥用載 體或稀釋劑，其中結(jié)合蛋白是肽抑制劑。在一種實(shí)施方式中，肽抑制劑包含一種氨基酸序列，該氨基酸序列對(duì)應(yīng)于連接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31. 1、連接蛋白32、連接蛋白 37、連接蛋白40或連接蛋白45的跨膜區(qū)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，肽抑制劑包含對(duì)應(yīng)于 連接蛋白43的跨膜區(qū)的氨基酸序列。在另一種實(shí)施方式中，肽抑制劑包含在SEQ. ID. NO 1中列出的約5-20個(gè)鄰接氨基酸。在另一種實(shí)施方式中，肽抑制劑包含在SEQ. ID. NO 2中 列出的約5-20個(gè)鄰接氨基酸。在另一種實(shí)施方式中，肽抑制劑包含一種氨基酸序列，該氨 基酸序列對(duì)應(yīng)于在SEQ. ID. NO 2的位置37-76和178-208處的區(qū)。在另一種實(shí)施方式中， 肽抑制劑包含在 SEQ. ID. NO :3、SEQ. ID. NO :4、SEQ. ID. NO :5、SEQ. ID. NO :6、SEQ. ID. NO :7、 SEQ. ID. NO :8、SEQ. ID. NO :9、SEQ. ID. NO :10、SEQ. ID. NO :11、SEQ. ID. NO :12、SEQ. ID. NO 13、SEQ. ID. NO :14、SEQ. ID. NO :15、SEQ. ID. NO :16、SEQ. ID. NO :17、SEQ. ID. NO :18、SEQ. ID. NO :19、SEQ. ID. NO :20、SEQ. ID. NO :21、SEQ. ID. NO :22、SEQ. ID. NO :23、SEQ. ID. NO :24、 SEQ. ID. N0:25、或SEQ. ID. NO :26中列出的約5_20個(gè)鄰接氨基酸。在另一種實(shí)施方式中，肽 抑制劑包含在SEQ. ID. NO 27-54中列出的約8至約11個(gè)鄰接氨基酸。在另一種實(shí)施方式 中，肽抑制劑包含在SEQ. ID. NO 18、19、或55-68中列出的約8至約15個(gè)鄰接氨基酸。在 又一種實(shí)施方式中，肽抑制劑具有一種或多種保守氨基酸變化。Μ 本發(fā)明包括用于全部或部分治療和/或預(yù)防各種疾病、障礙以及傷口的方法，包 括，例如，治療并不以預(yù)期速率愈合的傷口的方法。這些傷口包括延遲或難以愈合的傷口 (包括延遲或不完全愈合的傷口)、以及慢性傷口。并不以預(yù)期速率愈合的傷口的實(shí)例包括 潰瘍?nèi)缣悄虿⌒詽?、血管炎性潰瘍、?dòng)脈性潰瘍、靜脈性潰瘍(靜脈曲張性潰瘍)、靜脈停 滯性潰瘍、燒傷性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引起的潰瘍、壓迫性潰瘍以及褥瘡性潰瘍。并不以 預(yù)期速率愈合的其它傷口包括裂開性傷口。本發(fā)明還包括用于全部或部分地治療和/或預(yù)防慢性傷口的方法，所述慢性傷口 的特征全部或部分地在于(a)傷 口發(fā)炎的慢性自我持續(xù)狀態(tài)，(b)不足和有缺陷的傷口細(xì) 胞外基質(zhì)，(C)不良反應(yīng)的(衰老的)傷口細(xì)胞(包括成纖維細(xì)胞)，有限的細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn) 生，(d)部分由于缺乏必要的細(xì)胞外基質(zhì)安排和缺乏用于遷移的腳手架而導(dǎo)致上皮再形成 的衰退，(e)長期發(fā)炎和蛋白水解活性，導(dǎo)致潰瘍性病變，包括例如，糖尿病性潰瘍、壓迫性 潰瘍(褥瘡性潰瘍)、靜脈性潰瘍、以及動(dòng)脈性潰瘍，(f)在受影響的區(qū)域中基質(zhì)的逐步沉 積，(g)更長的修復(fù)時(shí)間，(h)更小的傷口收縮，(i)更慢的上皮再形成和/或(j)增加的肉 芽組織厚度，上述方法包括給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明還包括用于全部或部分地治療和/或預(yù)防延遲或難以愈合的傷口的方法， 所述傷口的特征全部或部分地在于(a)長期發(fā)炎期，(b)緩慢形成細(xì)胞外基質(zhì)，和/或(c) 降低速率的上皮形成，上述方法包括給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防動(dòng)脈性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 齊U。在一種實(shí)施方式中，動(dòng)脈性潰瘍或潰瘍形成是由完全或部分動(dòng)脈阻塞引起的。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防靜脈性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 齊U。在一種實(shí)施方式中，靜脈性潰瘍或潰瘍形成是由靜脈瓣的功能不良和相關(guān)的血管疾病引起的。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防靜脈停滯性潰瘍或潰瘍形成的方法， 該方法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀 釋劑。在一種實(shí)施方式中，靜脈停滯性潰瘍或潰瘍形成是由下肢的慢性被動(dòng)性靜脈充血和 /或形成的局部缺氧引起的。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防糖尿病性潰瘍(包括糖尿病足潰瘍或 潰瘍形成)的方法，該方法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié) 劑以及藥用載體或稀釋劑。在一種實(shí)施方式中，糖尿病足潰瘍或潰瘍形成是由糖尿病的神 經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥和/或血管并發(fā)癥引起的。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防創(chuàng)傷性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 齊U。在一種實(shí)施方式中，創(chuàng)傷性潰瘍或潰瘍形成與對(duì)身體的創(chuàng)傷性損傷有關(guān)。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防燒傷性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 齊U。在一種實(shí)施方式中，燒傷性潰瘍或潰瘍形成與對(duì)身體的燒傷有關(guān)。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防褥瘡性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防感染性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防壞疽性膿皮病的方法，該方法包括給 予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防裂開性傷口的方法，該方法包括給予 一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防持續(xù)性上皮缺損的方法，該方法包括 給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋劑。本發(fā)明還包括全部或部分地治療和/或預(yù)防壓迫性潰瘍或潰瘍形成的方法，該方 法包括給予一種組合物，該組合物包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑以及藥用載體或稀釋 齊U。在某些實(shí)施方式中，所述壓迫性潰瘍或潰瘍形成是AHCPR 1期、2期、3期、和/或4期 潰瘍或潰瘍形成。在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了一種在患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法 包括以下步驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速 率愈合的傷口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位關(guān)閉間隙連接或半通道。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在患者中減少發(fā)炎的方法，該方法包括以下步 驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷 口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位關(guān)閉間隙連接或半通道。 在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了一種在患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法 包括以下步驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位阻斷間隙連接或半通道。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在患者中減少發(fā)炎的方法，該方法包括以下步 驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷 口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位阻斷間隙連接或半通道。在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了一種在患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法 包括以下步驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速 率愈合的傷口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地防止或減少間隙連接或半通 道活性。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在患者中減少發(fā)炎的方法，該方法包括以下步 驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷 口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地防止或減少間隙連接或半通道活性。在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了一種在患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法 包括以下步驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速 率愈合的傷口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地防止或減少間隙連接或半通 道的開放。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在患者中減少發(fā)炎的方法，該方法包括以下步 驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷 口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地減小或防止間隙連接或半通道的開放。在又一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了一種在患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法 包括以下步驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速 率愈合的傷口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地防止或減少細(xì)胞外半通道通 訊。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在患者中減少發(fā)炎的方法，該方法包括以下步 驟將包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑的組合物以有效的量給予并不以預(yù)期速率愈合的傷 口，以在和/或緊鄰所述傷口的部位全部或部分地減小或防止細(xì)胞外半通道通訊。根據(jù)一個(gè)方面，間隙連接調(diào)節(jié)劑可以通過促進(jìn)上皮再形成通過調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞 分裂和生長而促進(jìn)傷口愈合。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種在受治療者中促進(jìn)或改善傷口愈合的方法，該方法 包括以有效的量給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，以調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞分裂和生長。在一 種實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑是抗連接蛋白肽或擬肽，其可有效調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞分裂 和生長。在一種實(shí)施方式中，間隙連接調(diào)節(jié)劑是連接蛋白26間隙連接調(diào)節(jié)劑、連接蛋白43 間隙連接調(diào)節(jié)劑、或它們的混合物。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種促進(jìn)或改善傷口愈合的方法，該方法包括以有效的 量給予一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，以調(diào)節(jié)外層角蛋白分泌。在一種實(shí)施方式中，間隙連接 調(diào)節(jié)劑是抗連接蛋白肽或擬肽，其可有效調(diào)節(jié)外層角蛋白分泌。在一種實(shí)施方式中，間隙連 接調(diào)節(jié)劑是連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑、31. 1間隙連接調(diào)節(jié)劑、或它們的混合物。試劑盒以及制品在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于治療并不以預(yù)期速率愈合的傷口的試劑盒。試劑盒可以包括本文描述的一種或多種組合物。例如，試劑盒可以包括一種組合物，該組合物包含有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑。在一種實(shí)施方式中，試劑盒包括一 種組合物，該組合物包含有效量的一種或多種多肽。在一種實(shí)施方式中，試劑盒包括一種組 合物，該組合物包含有效量的一種或多種多肽同源物。在一種實(shí)施方式中，試劑盒包括一種 組合物，該組合物包含有效量的一種或多種連接蛋白磷酸化化合物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種制品，該制品包括容器和使用說明，其中上述容器 包含有效量的一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，上述使用包括用于治療具有并不以預(yù)期速率愈 合的傷口的受治療者。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供 了方法、組合物、劑型、配方、試劑盒、以及制品，通過其可 以以瞬時(shí)和部位特異性方式來向下調(diào)節(jié)細(xì)胞間通信和/或半通道通訊、對(duì)接(?？?或開 放。因此配方具有在治療方法以及在其它治療方面的應(yīng)用?，F(xiàn)在將參照以下實(shí)施例來描述本發(fā)明的各個(gè)方面，應(yīng)當(dāng)理解，所述實(shí)施例僅通過 示例的方式提供而不是構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
實(shí)施例實(shí)施例1肽的親和結(jié)合分析沉降分析(Pull-down assay)可以用來證實(shí)蛋白質(zhì)-肽相互作用。在這種分析中， 測(cè)試間隙連接調(diào)節(jié)劑(例如肽)標(biāo)記有蛋白質(zhì)活性或融合標(biāo)簽，即，GST(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn) 移酶)，其通過附著于纖維素、瓊脂糖或鎳珠而用于捕捉和‘沉降’蛋白結(jié)合配偶體。在利 用SDS-PAGE加載緩沖或可替換地競爭性分析物洗脫來洗脫復(fù)合物以后，通過在SDS-PAGE 凝膠上的電泳以及利用蛋白質(zhì)(Western)分析檢測(cè)方法來顯現(xiàn)復(fù)合物。本領(lǐng)域已知的 進(jìn)行結(jié)合分析的方法描述在 Einarson，M. B. and Orlinick, J. R. ,"Identification of Protein-Protein Interactions with Glutathione S-Transferase Fusion Proteins，，in Protein-Protein Interactions :A Molecular Cloning Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, pp. 37-57(2002) ；Einarson, Μ. B. , "Detection of Protein-Protein Interactions Using the GST FusionProtein Pulldown Technique,，，in Molecular Cloning :A Laboratory Manual,3rd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, pp. 18. 55-18. 59 (2001)；以及 Vikis，H. G. and Guan, K. L.，"Glutathione-S-Transf erase-Fusion Based Assays for Studying Protein-Protein Interactions,，，in Protein-Protein Interactions, Methodsand Applications, Methods in Molecular Biology, 261, Fu, H. Ed. Humana Press, Totowa, N. J.，pp. 175-186(2004)中，每個(gè)文獻(xiàn)的全 部內(nèi)容均以引用方式結(jié)合于本文。利用表面等離子體共振技術(shù)來評(píng)估蛋白質(zhì)和測(cè)試肽的相互作用和親和力，該表面 等離子體共振技術(shù)能夠?qū)崟r(shí)測(cè)量這些相互作用(可通過BIAcore獲得)。這種方式具有檢 測(cè)低親和力蛋白質(zhì)相互作用的優(yōu)點(diǎn)。表面等離子體共振依賴于一種光學(xué)現(xiàn)象，該光學(xué)現(xiàn)象 用來測(cè)量在生物特異性表面上分子的溶液濃度的變化。在全內(nèi)反射的條件下，在薄金屬膜 中產(chǎn)生此信號(hào)。此信號(hào)取決于與表面接觸的溶液的折射率。如果發(fā)生生物特異性相互作用， 則溶液中的分子呈現(xiàn)折射率的變化，因而產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。通常，通過若干可能的方法之一將蛋白質(zhì)固定到羧甲基化葡聚糖金表面上。將感興趣的相互作用肽注射到表面上并實(shí)時(shí)測(cè)量結(jié)合動(dòng)力學(xué)。本領(lǐng)域已知的進(jìn)行結(jié)合分析的 方法描述在 Schuck, P. , "Reliable determination of binding affinity and kinetics using surface ρlasmon resonance biosensors",Currrent Opinion in Biotechnology, 8(4) 498-502(1997)；以及 Zhang, X. , Oglesbee,M. "Use of surface ρ lasmon resonance for the measurement of low affinity binding interactions between HSP72 and measles virus nucleocapsid protein. "Biological Procedures Online. 5(1) 170-181(2003)中。實(shí)施例2功能分析功能分析可以用來確定測(cè)試間隙連接調(diào)節(jié)擬肽是否能夠阻斷間隙連接或半通 道的開放。用Cx43、Cx45、或另一種感興趣的特定連接蛋白來穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HeLa人宮頸癌 細(xì)胞系。在零鈣溶液(HBSS-HEPES，包含ImM EGTA)中溫育細(xì)胞，其中零鈣溶液已表明 可以激活連接蛋白半通道(參見 Braet，K.，et al.，‘‘Pharmacological sensitivity of ATP release triggered by photoliberation ofinositol-1,4,5-trisphosphate and zero extracellular calcium in brainendotheIial cells, "Journal of Cellular Physiology,197(2) :p. 205-213(2003) ；DeVries, S. H. and E. A. Schwartz, "Hemi-gap-junction channels in solitary horizontal eelIs of the catfish retina, "Journal of Physiology 445 :p. 201-230(1992) ； VX R Li, H. , et al., "Properties and regulation of gap junctional hemichannels in the plasma membranes of cultured cells,"Journal of Cell Biology l34(4) :p. 1019-1030(1996))。 在包含ImM EGTA和2mM碘化丙啶的HBSS-HEPES溶液中溫育細(xì)胞30分鐘。碘化丙啶是一 種熒光染料，該熒光染料是膜不可滲透的，但由于它的小分子量，能夠通過間隙連接/半通 道進(jìn)入。將利用熒光顯微鏡檢術(shù)來確定碘化丙啶攝取。在有擬肽存在的條件下用碘化丙啶 溫育細(xì)胞，以確定是否這些擬肽能夠防止染料攝取。實(shí)施例3擬肽設(shè)計(jì)與測(cè)試可以將擬肽設(shè)計(jì)成具有與連接蛋白43細(xì)胞外環(huán)區(qū)相同的氨基酸序列，其中連 接蛋白43細(xì)胞外環(huán)區(qū)被認(rèn)為與連接子對(duì)接(?？?過程有關(guān)(Foote et al. , J Cell Bioll40(5) :1187-97，(1998))。一些肽包括氨基酸，該氨基酸匹配α螺旋跨膜亞單位的外 部，其可以顯示增強(qiáng)的功能抑制。由于在細(xì)胞外環(huán)區(qū)中連接蛋白序列的保守，所以并不需要 所有這些肽是連接蛋白特異性的?？梢泽w外合成肽或其變體，例如，通過固相肽合成方法，如在Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis,W. H. Freeman Co. ,San Francisco(1969) ；Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 852149 (1963) ；Meienhofer in"Hormonal Proteins and Peptides,，，ed.； C. H. Li, Vol. 2 (Academic Press, 1973), pp. 48-267 ； L^l ^ Bavaay and Merrifield, "The Peptides, "eds. E. Gross and F. Meienhofer，Vol. 2 (Academic Press, 1980) pp. 3—285 中所 描述的?？梢酝ㄟ^以下來進(jìn)一步純化這些肽在免疫親和或離子交換柱上的分餾；乙醇沉 淀；反相HPLC ；在硅膠或在陰離子交換樹脂如DEAE上的層析；色譜聚焦；SDS-PAGE ；硫酸銨 沉淀；使用例如Si^phadex G-75的凝膠過濾；配體親和層析；或從非極性溶劑或非極性/極性溶劑混合物結(jié)晶或沉淀。
可以利用測(cè)試肽進(jìn)行兩種功能測(cè)試。這些功能測(cè)試是⑴在脊髓切片中阻斷細(xì)胞 對(duì)染料(螢光黃(Lucifer Yellow))的攝取，以及(ii)防止脊髓段中的水腫(使用連接蛋 白43特異性反義odn作為陽性對(duì)照)。肽由Sigma-Genosys (澳大利亞)合成。陽._胞碰米斗(棘H) _耳又螢光黃是較小的水溶性、可固定的染料，其能夠經(jīng)由間隙連接通道從細(xì)胞傳遞到 細(xì)胞，但不能穿過細(xì)胞膜。將螢光黃加入胞外介質(zhì)使得可以檢查開放間隙連接/半通道的 存在。染料將出現(xiàn)在正表達(dá)開放通道的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。用二氧化碳麻醉Wistar p7大鼠并立即斷頭。切除脊髓并轉(zhuǎn)移到pH值為7. 4的 冷Hank平衡鹽溶液(HBSS)。除去過量的支神經(jīng)和韌帶并將脊髓轉(zhuǎn)移到人工組織切片機(jī)， 然后切割成一系列500微米厚的切片。由切片引起的損傷會(huì)誘導(dǎo)在整個(gè)切片中的連接蛋白 43向上調(diào)節(jié)(通過間隙連接介導(dǎo)的旁觀者效應(yīng)而得到加劇)，并導(dǎo)致連接蛋白半通道的表 達(dá)。將切片放置在24孔板中的3cm直徑的微孔插入物(Millipore insert)上并在介質(zhì)中 有擬肽存在的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。所有測(cè)試的9種肽的最終濃度是500微摩爾。對(duì)照是沒 有加入肽，或添加有乙醇或DMS0,因?yàn)橐恍╇目梢员恢匦氯芙庠谶@些化合物中(收 到的肽是凍干的)。在37攝氏度下溫育切片4小時(shí)，然后將2. 5mg/ml螢光黃加入每個(gè)孔中30分鐘 (在黑暗中)。然后在PBS中沖洗組織兩次，并進(jìn)一步洗滌三次，每次10分鐘，接著用4%多 聚甲醛來固定切片。然后利用Leica TCS4D激光掃描共聚焦顯微鏡對(duì)它們進(jìn)行觀測(cè)，以評(píng) 估進(jìn)入細(xì)胞中的染料攝取、或沒有。通過進(jìn)入每個(gè)樣品中的染料攝取的量來測(cè)量效力。預(yù)防脊髓中的水腫在屬于 Becker, D.禾口 Green. C.的題目為"Formulations Comprising Antisense Nucleotides to Connexins”的W02000/44409的實(shí)施例1中描述的系統(tǒng)用來檢查測(cè)試肽對(duì) 培養(yǎng)的脊髓節(jié)段的影響，以測(cè)試它們阻斷腫脹的能力。DMSO用作對(duì)照。將5mm長的脊髓節(jié)段放置在HBSS中在24孔板的分開的孔中。禾0 用一小滴超強(qiáng)力膠水(Superglue)將脊髓節(jié)段保持在孔的底部。除去HBSS并將500微摩 爾測(cè)試肽(最終濃度)加入到介質(zhì)(對(duì)于僅介質(zhì)或DMSO對(duì)照，沒有肽)中。溫育孔板24 小時(shí)，除去介質(zhì)，然后用布安(Bouin)固定劑固定組織24小時(shí)。分析涉及從上面為脊髓節(jié) 段拍照，利用圖像Jdmage J)來計(jì)算脊髓節(jié)段的總面積，其與在節(jié)段的切口端處的腫脹面 積相比。腫脹(水腫)計(jì)算為(培養(yǎng)面積-原始面積再除以原始面積)以產(chǎn)生腫脹％。單 因素方差分析用來確定統(tǒng)計(jì)顯著性，其中顯著性的截止水平為P = 0. 05。使用劑量反應(yīng)曲線利用相同規(guī)程來進(jìn)行用于在脊髓節(jié)段中阻斷水腫的測(cè)試肽的 最有效濃度的確定。一個(gè)示例性的劑量反應(yīng)曲線利用以5、10、50、250以及500微摩爾使用 的肽的最終濃度來確定。實(shí)施例4本文披露的方法和組合物用來治療具有慢性傷口(例如，血管炎性潰瘍)的人受 治療者?；加刑悄虿　⒒驖撛谕庵苎芑騽?dòng)脈疾病的人受治療者首先呈現(xiàn)來自非閉合腿部 傷口的并發(fā)癥。用抗連接蛋白肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO 7)的合適的單劑量或多個(gè)劑量，例如，100-500 微克來治療傷口?；诩s7cmX5cm的傷口大小(約35cm2)以及約3_4mm 的深度，給予在pluronic凝膠中的SEQ ID NO 7的2mL的20 μ M制劑(例如，總劑量 200-400 μ g)(根據(jù)傷口大小，熟練的醫(yī)師可以容易地確定要給予的其它適當(dāng)?shù)膭┝?。包扎傷口部位并覆蓋7天的時(shí)間。在第7天露出傷口并評(píng)估傷口愈合結(jié)果。必要或需要時(shí)，重復(fù)上面概述的治療(以適當(dāng)?shù)膭┝?。在這種治療以后，評(píng)估傷 口和傷口外觀。在第二周、第一個(gè)月、和/或第二月，再次評(píng)估患者，并再次評(píng)估傷口(減小， 如果有的話)。實(shí)施例5本文披露的方法和組合物用來治療患有慢性靜脈性下肢潰瘍的人受治療者。按照潰瘍大小以及最小和最大潰瘍面積(例如，2cm2和50cm2)對(duì)人試驗(yàn)受治療者 進(jìn)行分組。確定患者的休息踝肱多普勒動(dòng)脈壓指數(shù)作為基線(例如等于或大于0.80)。所有患者接受加壓包扎。通過描記法確定潰瘍的面積，并給予在pluronic凝膠制 劑中測(cè)試抗連接蛋白肽SRPTEKTIFII(SEQ ID NO 7)的合適的劑量，例如，100-500微克。要求患者斜躺在檢查床上，同時(shí)將測(cè)試制劑施加至傷口表面，并在進(jìn)行加壓包扎 以前保持在那里15分鐘。在第7天露出傷口并評(píng)估傷口愈合結(jié)果。利用生物測(cè)定，分析傷口液和血液樣品 的有關(guān)傷口愈合生物標(biāo)志物。重復(fù)上面概述的治療(以適當(dāng)?shù)膭┝?。在這種治療以后，評(píng)估傷口和傷口外觀。 每周或每兩周、或鑒于愈合狀態(tài)的合適的時(shí)間，重復(fù)這種過程，直到傷口閉合。實(shí)施例6以下用來確定順序給予示例性制劑在加快糖尿病性和其它慢性潰瘍的愈合速率 方面的治療效力。主要效力終點(diǎn)是在12-20周內(nèi)患者達(dá)到充分傷口閉合的百分比。次要終點(diǎn)包括達(dá) 到100 %閉合的時(shí)間、達(dá)到80 %閉合的時(shí)間、達(dá)到50 %閉合的時(shí)間，以及在第3、5、10、15、以 及20周傷口閉合的量，其作為離基線傷口大小的百分比變化。卡-邁生存分析技術(shù)用來檢 查時(shí)間至事件終點(diǎn)(時(shí)間變數(shù)評(píng)估指標(biāo))。所有患者接受標(biāo)準(zhǔn)糖尿病性(或其它)潰瘍護(hù)理的方案，該方案包括初步尖銳清 倉|J、傷口清洗、傷口敷料、以及傷口壓力卸載。通過初步尖銳清創(chuàng)和傷口清洗來治療潰瘍。 順序地給予在pluronic凝膠制劑中的100-500微克的抗連接蛋白肽SRPTEKTIFII (SEQ ID NO :7)。用不粘繃帶和壓迫繃帶包扎傷口。每周兩次評(píng)估傷口，長達(dá)12-20周或直到傷口閉合(以較早者為準(zhǔn))。如果患者發(fā) 展了臨床感染或如果傷口狀況顯著惡化，則從研究中除去該患者。在每次傷口評(píng)估(每周 兩次)時(shí)，繪出傷口周邊以確定傷口面積，并用數(shù)碼相機(jī)對(duì)傷口拍照。在患者登記時(shí)，以及 在第5、10、15、以及20周，進(jìn)行血液化學(xué)和血液學(xué)測(cè)試。可以每5周進(jìn)行放射線評(píng)估以研究 對(duì)下面的骨組成的影響。實(shí)施例7 將抗連接蛋白藥劑方便地配制成適合于根據(jù)本發(fā)明的方法給予的形式。
合適的配方包括以下配制藥劑的混合物。個(gè)別抗連接蛋白藥劑或多種藥劑以及配 制藥劑的量將取決于所期望的特定用途。
權(quán)利要求
1.一種治療具有慢性傷口的受治療者的方法，包括將包含有效量的連接蛋白43間隙 連接調(diào)節(jié)劑的一種組合物給予所述傷口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是壓迫性潰瘍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是褥瘡性潰瘍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是動(dòng)脈性潰瘍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是靜脈性潰瘍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是靜脈停滯性潰瘍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是糖尿病足潰瘍。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是創(chuàng)傷性潰瘍。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是燒傷性潰瘍。
10.一種治療具有并不以預(yù)期速率愈合的傷口的受治療者的方法，所述方法包括將有 效量的連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑給予所述傷口。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述傷口是延遲愈合傷口或不完全愈合傷口。
12.—種治療具有裂開性傷口的受治療者的方法，包括將包含有效量的連接蛋白43間 隙連接調(diào)節(jié)劑的一種組合物給予所述傷口。
13.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地防止或減少分子通過間隙連接的流動(dòng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地防止或減少分子通過半通道的流動(dòng)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地關(guān)閉間隙連接。
16.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地關(guān)閉半通道。
17.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地阻斷間隙連接。
18.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地阻斷半通道。
19.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)間 隙連接的全部或部分閉合。
20.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)半 通道的全部或部分閉合。
21.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地減少或防止間隙連接的開放。
22.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑全部或 部分地減少或防止半通道的開放。
23.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑防止或 減少間隙連接的活性或功能。
24.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑防止或 減少半通道的活性或功能。
25.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑是肽化 合物。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述肽化合物是擬肽。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑是抗體或其抗原結(jié)合片段。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述抗體是單克隆抗體。
29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述抗原結(jié)合片段是F(V)、Fab、Fab’或 F(ab，)2抗連接蛋白43抗體片段。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述抗體是嵌合或人源化抗體。
31.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述抗體片段是嵌合或人源化抗體片段。
32.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述間隙連接調(diào)節(jié)劑是間隙 連接磷酸化誘導(dǎo)劑。
33.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將所述間隙連接調(diào)節(jié)劑配制成用于局部給予。
34.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，將所述間隙連接調(diào)節(jié)劑配制 為凝膠。
35.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述受治療者是人。
36.根據(jù)權(quán)利要求1、10或12中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述受治療者是非人動(dòng)物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述非人動(dòng)物是運(yùn)動(dòng)動(dòng)物。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中，所述運(yùn)動(dòng)動(dòng)物是馬。
39.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中，所述運(yùn)動(dòng)動(dòng)物是狗。
40.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中，所述非人動(dòng)物是寵物。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，所述寵物是狗。
42.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中，所述寵物是貓。
43.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述慢性傷口是持續(xù)性上皮缺損。
全文摘要
本發(fā)明提供了方法、化合物、組合物、試劑盒以及制品，其包含一種或多種間隙連接調(diào)節(jié)劑，用于在需要其的受治療者中治療并不以預(yù)期速率愈合的傷口，該傷口包括慢性傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及裂開性傷口。
文檔編號(hào)C07K16/18GK102105492SQ200880126533
公開日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2008年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月11日
發(fā)明者布拉德福德·J·杜夫特, 戴維·L·貝克爾, 科林·R·格林 申請(qǐng)人:科達(dá)治療公司