專利名稱：食蟹猴Toll樣受體3的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食蟹猴Toll樣受體3(Cyn0TLR;3)及其用途。
背景技術(shù)：
宿主免疫系統(tǒng)對(duì)微生物抗原的識(shí)別是通過(guò)先天免疫受體介導(dǎo)的，先天免疫受體的 活化代表炎癥反應(yīng)的引發(fā)的重要步驟。Toll樣受體(TLR)屬于先天免疫受體家族，其在介 導(dǎo)對(duì)外來(lái)抗原的免疫反應(yīng)方面具有重要的作用。TLR3為病原體相關(guān)分子模式識(shí)別受體， 其可以識(shí)別雙鏈RNA(dsRNA)以及合成的dsRNA類似物聚-核糖肌苷酸-核糖胞苷酸(聚 (I:C))。參見(例如)Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人， 《自然》，第413卷第732頁(yè)，2001年)。此外，已證實(shí)TLR3可識(shí)別內(nèi)源性配體(例如壞死細(xì) 胞釋放的mRNA)，表明炎癥部位處的壞死細(xì)胞死亡可能有助于TLR3的活化。參見(例如) Kariko et al. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人，《生物化學(xué)雜志》，第洸卷第 12542 頁(yè)，2004 年)。dsRNA或聚(I:C)配體對(duì)TLR3的活化可引起促炎細(xì)胞因子和趨化因子的分泌，并 可以調(diào)節(jié)感染相關(guān)炎癥期間的疾病轉(zhuǎn)歸。重要的是，TLR3體內(nèi)活化在病毒感染或與炎癥相 關(guān)的壞死的情況下發(fā)生。參見 Tabeta et al.，101 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3516(2004) (Tabeta等人，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第101卷第3516頁(yè)，2004年)；還可參見Kariko etal. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人，《生物化學(xué)雜志》，第洸卷第 12542 頁(yè)， 2004年)。例如，人TLR3肽鏈在需要控制HSV-I病毒感染的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ中表達(dá)，該 病毒通過(guò)顱神經(jīng)從上皮擴(kuò)散至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在TLR3缺陷患者中引起單純皰疹性腦炎。參 見(例如)Zhang et al.，317 Science 1522(2007) (Zhang 等人，《科學(xué)》，第 317 卷第 1522 頁(yè)，2007年)。此外，人TLR3肽鏈活化可導(dǎo)致與諸如肝臟組織的原發(fā)性膽汁性肝硬化的病 理狀況相關(guān)的炎癥反應(yīng)。參見(例如)Takii et al. ,85 Lab. Invest. 836(2005) (Takii等 人，《實(shí)驗(yàn)室研究》，第85卷第836頁(yè)，2005年)。總的來(lái)說(shuō)，這些資料證明TLR3的活化可引發(fā)磷酸化和轉(zhuǎn)錄活化事件的級(jí)聯(lián)，進(jìn) 而導(dǎo)致有助于先天免疫的多種炎性細(xì)胞因子的生成(參見Takeda and Akira, J. Derm. Sci. 34 :73-82(2004) (Takeda 和 Akira，《皮膚病學(xué)》，第 34 卷第 73-82 頁(yè)，2004 年)的綜 述)。另外，這些資料表明持續(xù)的TLR3活化是感染相關(guān)炎癥疾病的調(diào)控中的關(guān)鍵部分。 公布的資料為這個(gè)假說(shuō)提供了進(jìn)一步支持，研究結(jié)果顯示，促炎細(xì)胞因子的過(guò)量生產(chǎn)與全 身炎癥反應(yīng)綜合征、感染相關(guān)急性細(xì)胞因子風(fēng)暴(參見Van Amersfoort et al. , Clin. Microbiol. Rev. 16 :379-414(2003) (Van Amersfoort 等人，《臨床微生物學(xué)評(píng)論》，第 16 卷 第379-414頁(yè)，2003年)的綜述)和免疫介導(dǎo)的慢性病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)(參見Miossec et al.，Curr. Opin. Rheumatol. 16 :218-222(2004) (Miossec 等人，《風(fēng)濕病學(xué)近期評(píng)述》， 第16卷第218-222頁(yè)，2004年)的綜述)以及炎性腸疾病(參見Ogata and Hibi，Curr. Pharm. Des. 9 1107-1113 (2003) (Ogata 和 Hibi，《當(dāng)今制藥》，第 9 卷第 1107-1113 頁(yè)，2003 年)的綜述)有關(guān)。
目前，已采取以TLR3活化為目標(biāo)的多種不同治療方法來(lái)治療不同的適應(yīng)癥。這些 TLR3治療劑包括基于人肽鏈的TLR3治療劑、TLR3的單克隆抗體拮抗劑和TLR3配體激動(dòng)劑 (如dsRNA、聚(I:C))以及以TLR3活性為目標(biāo)的這些治療劑的功能類似物?；趩慰寺】?體拮抗劑的TLR3治療劑的可能適應(yīng)癥包括炎性病癥、敗血病、炎性腸疾病、炎性肺部疾病 以及自身免疫疾病。作為激動(dòng)劑的TLR3治療劑的可能適應(yīng)癥和用途包括病毒感染后疲勞 綜合征、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌、抗病毒疫苗、膀胱癌、宮頸不典型增生、人乳頭狀瘤病毒感 染、乳腺癌、病毒感染預(yù)防、組織再生以及禽流感疫苗。任何供人類使用的TLR3治療劑在投入市場(chǎng)之前都需要進(jìn)行大量的安全性測(cè)試。 此類安全性測(cè)試將涉及TLR3治療劑的動(dòng)物模型體內(nèi)安全性測(cè)試以及體外測(cè)試。例如，基于 抗體的TLR3治療劑可能需要生成由特定模型動(dòng)物表達(dá)的抗TLR3肽的替代抗體，以及對(duì)這 種替代抗體進(jìn)行有效的體外表征。這種替代品生成和體外表征將需要使用來(lái)自合適的模型 動(dòng)物的TLR3多核苷酸和肽鏈。重要的是，鑒定用于這種安全性測(cè)試的合適動(dòng)物模型需要鑒 定能夠表達(dá)與人TLR3 (序列標(biāo)識(shí)號(hào)1 有高度同一性和同源性的TLR3的動(dòng)物種類。因此，需要鑒定編碼能夠在適于進(jìn)行TLR3治療劑安全性測(cè)試的動(dòng)物模型中表達(dá) TLR3s和TLR3肽鏈的多核苷酸。還需要相關(guān)的方法，例如表達(dá)肽鏈的方法以及在被確定為 適合進(jìn)行TLR3治療劑安全性評(píng)估的動(dòng)物模型中測(cè)試TLR3治療劑的安全性的方法。


圖1示出了編碼全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號(hào)21)編碼序列的特 征圖。圖2示出了全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)2)的特征圖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷 酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含分離多核苷酸的載體，其中分離多核苷酸具有選自序 列標(biāo)識(shí)號(hào)1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)8中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)9中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)10中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟提供編碼包含 序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條多肽 的RNA ；提供無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分；由提供的RNA啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)；以及確認(rèn)包含序列標(biāo) 識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是確定TLR3治療劑是否會(huì)引起不良事件的方法，所述方法 包括提供TLR3治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴；給第一食蟹猴施用TLR3治療劑；以及對(duì) 比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀，如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥狀，則表明 TLR3治療劑是不安全的，如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀，則表明TLR3治療劑是安全 的。
具體實(shí)施例方式本說(shuō)明書中所引用的所有出版物(包括但不限于專利和專利申請(qǐng))均以引用方式 并入本文，如同在本文中完整呈現(xiàn)。說(shuō)明書和權(quán)利要求書中所用的“一”、“該”和“所述”等單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指代，除 非上下文清楚表明并非如此。因此，例如提及“一條肽鏈”是指一條或多條肽鏈并包括本領(lǐng) 域技術(shù)人員已知的其等同物。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同。本文描述了示例性的組合物和方法，不過(guò)類似或等 同于本文所述的組合物和方法的任何組合物和方法都可用于本發(fā)明實(shí)踐或測(cè)試。本發(fā)明提供了分離的食蟹猴(Macacafascicularis)iToll 樣受體 3 (cynoTLR3) 多核苷酸、包含這些多核苷酸的載體、離體的宿主細(xì)胞、可由這些多核苷酸的表達(dá)獲得的肽 鏈、表達(dá)本發(fā)明肽鏈的方法，并公開了它們的用途。TLR3是病原體相關(guān)分子模式(PAMP)識(shí)別受體的Toll樣受體家族的成員。 TLR3通過(guò)雙鏈RNA的結(jié)合而被活化。雙鏈RNA(dsRNA)在病毒感染、由其他生物體引起 和由細(xì)胞損傷或壞死引起的感染期間產(chǎn)生。參見(例如)Kariko et al. ,279 J. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko等人，《生物化學(xué)雜志》，第279卷第12542頁(yè)，2004年)；還可參 見 Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人，《自然》，第 413 卷第 732頁(yè)，2001年)。TLR3響應(yīng)病毒感染相關(guān)的dsRNA或其他來(lái)源產(chǎn)生的dsRNAs的探測(cè)而被 活化，會(huì)引起NF-kB的活化，從而提高具有抗病毒和免疫系統(tǒng)刺激功能的I型干擾素的生 產(chǎn)。參見(例如)Takeda and Akira,5 Cell. Micro. 143,144(2003) (Takeda 和 Akira，《細(xì) 胞微生物學(xué)》，第5卷第143-144頁(yè)，2003年)。在病毒感染情況下TLR3活化的結(jié)果是刺激 先天和體液免疫系統(tǒng)的抗病毒防御。例如，人TLR3肽鏈在需要控制HSV-I病毒感染的中樞 神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ中表達(dá)，該病毒通過(guò)顱神經(jīng)從上皮擴(kuò)散至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在TLR3缺陷患者 中引起單純皰疹性腦炎。參見(例如)Zhang et al. ,317 Science 1522 (2007) (Zhang等 人，《科學(xué)》，第317卷第1522頁(yè)，2007年)。然而，在其他情況下，人TLR3肽鏈活化可導(dǎo)致 與諸如肝臟組織的原發(fā)性膽汁性肝硬化的病理狀況相關(guān)的炎癥反應(yīng)。參見(例如)Takii et al.，85Lab. Invest. 836(2005) (Takii 等人，《實(shí)驗(yàn)室研究》，第 85 卷第 836 頁(yè)，2005 年)。 重要的是，全長(zhǎng)cynoTLR3肽鏈序列(序列標(biāo)識(shí)號(hào)10)與得到很好表征的人TLR3肽鏈(序 列標(biāo)識(shí)號(hào)13)有95. 7%同一性和96. 8%相似性。
本發(fā)明的組合物和方法可用于多種具體應(yīng)用。本發(fā)明的多核苷酸和載體是可用 的，因?yàn)樗鼈兙幋a食蟹猴(Macaca fascicularis) TLR3 (cynoTLR3)肽鏈，可以用來(lái)表達(dá)這些 肽鏈。繼而這些CynoTLR3肽鏈也是可用的，因?yàn)楫?dāng)它們經(jīng)重組法過(guò)量表達(dá)時(shí)或由其他方法 導(dǎo)入宿主動(dòng)物或組織中時(shí)，它們可用于在暴露于dsRNA或其他TLR3配體后提高或控制抗病
毒反應(yīng)。包含cyn0TLR3胞外域的肽鏈也可以用作配體接收型拮抗劑(ligandsink type antagonist)，其可以結(jié)合TLR3活化所需的可得到的TLR3配體或TLR3相關(guān)蛋白質(zhì)，從而 控制TLR3活性。還可以用cyn0TLR3肽鏈產(chǎn)生治療性抗體，以用于對(duì)CynoTLR3或來(lái)自其 他來(lái)源的TLR3的活性進(jìn)行正調(diào)控或負(fù)調(diào)控。這是所期望的，因?yàn)榧?dòng)型治療性抗體可用 于提高cyn0TLR3或其他TLR3的活化，以幫助控制感染，而拮抗型治療性抗體可用于降低 cynoTLR3或其他TLR3的活化，以幫助控制與TLR3受體活化所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相關(guān)的病理 狀況。cyn0TLR3肽鏈還可以用于體外或體內(nèi)測(cè)定，以鑒定能夠調(diào)控CyntoTLR3或其他TLR3 的活性的其他治療劑(如小分子)。本發(fā)明所公開的表達(dá)方法是可用的，因?yàn)檫@些方法使得 可以表達(dá)cyn0TLR3肽。本發(fā)明所公開的其他方法也是可用的，因?yàn)樗鼈兪沟每梢詫?duì)TLR3 治療劑進(jìn)行安全性評(píng)估。術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”是指包含由糖-磷酸主鏈或其他等同的共價(jià)化學(xué)方式所共價(jià)連 接的核堿基鏈的分子。雙鏈DNA和單鏈DNA以及雙鏈RNA和單鏈RNA是多核苷酸的典型例子。術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)序列”是指反向平行于第一分離多核苷酸序列并包含與第一多核苷酸 序列中的核堿基互補(bǔ)的核堿基的第二分離多核苷酸序列。通常，當(dāng)這種“互補(bǔ)序列”在適當(dāng) 的條件下與第一分離多核苷酸序列結(jié)合時(shí)，能夠形成雙鏈多核苷酸分子，例如雙鏈DNA或 雙鏈RNA。術(shù)語(yǔ)“載體”是指能夠在生物系統(tǒng)內(nèi)復(fù)制或可以在此類系統(tǒng)間移動(dòng)的多核苷酸。載 體多核苷酸通常含有諸如復(fù)制起點(diǎn)或選擇標(biāo)記之類的元件，其功能是促進(jìn)這些多核苷酸在 生物系統(tǒng)中的復(fù)制或保持。此類生物系統(tǒng)的例子可包括細(xì)胞、病毒、動(dòng)物、植物和用能夠復(fù) 制載體的生物組分再造的生物系統(tǒng)。包含載體的多核苷酸可以是DNA或RNA分子或這些分 子的雜合體。術(shù)語(yǔ)“表達(dá)載體”是指可用于在生物系統(tǒng)或再造生物系統(tǒng)中指導(dǎo)由存在于表達(dá)載 體中的多核苷酸序列所編碼的肽鏈的翻譯的載體。術(shù)語(yǔ)“肽鏈”是指包含至少兩個(gè)由肽鍵連接形成鏈的氨基酸殘基的分子。超過(guò)50 個(gè)氨基酸的大肽鏈可以稱為“多肽”或“蛋白質(zhì)”。不到50個(gè)氨基酸的小肽鏈可以稱為“肽”。術(shù)語(yǔ)“抗體”是指包含多克隆抗體、單克隆抗體的免疫球蛋白或抗體分子，包括鼠、 人、人源化和嵌合單克隆抗體以及抗體片段、部分或變體?？贵w是由血漿細(xì)胞組成性表達(dá)和 分泌的分泌蛋白質(zhì)。抗體可以為任何同種型，例如IgG、IgA或IgM，并可以包含抗體片段， 例如Fab片段。抗體也可以是特異性結(jié)合兩個(gè)不同的肽鏈表位的雙特異性抗體?？梢杂糜郎难獫{細(xì)胞產(chǎn)生抗體，血漿細(xì)胞的永生化可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法(例如雜 交瘤生成)或通過(guò)將抗體重鏈和/或輕鏈基因轉(zhuǎn)染到永生化B細(xì)胞(例如骨髓瘤細(xì)胞)或 其他細(xì)胞類型(例如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、植物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞)中來(lái)進(jìn)行。本文所用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”(mAb)是指從基本上同種的抗體的群體所獲得的抗體(或抗體片段)。單克隆抗體具有高度特異性，其通常針對(duì)單一抗原決定簇。修飾語(yǔ) “單克隆”表示抗體的基本上同種的性質(zhì)，并不要求用任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如，鼠單 克隆抗體可以用Kohler的雜交瘤方法制備，參見Kohler et al. ,256 Nature 495(1975) (Kohler等人，《自然》，第256卷第495頁(yè)，1975年)?？梢杂妹绹?guó)專利No. 4，816，567中所 公開的方法制備這樣的嵌合單克隆抗體，其包含衍生自供體抗體(通常為鼠科動(dòng)物)的輕 鏈和重鏈可變區(qū)和與之相結(jié)合的衍生自受體抗體(通常為另一種哺乳類物種，如人類)的 輕鏈和重鏈恒定區(qū)?？赏ㄟ^(guò)Queen等人所公開的技術(shù)獲得這樣的人源化單克隆抗體，其具 有衍生自非人類供體免疫球蛋白(通常為鼠科動(dòng)物)的CDR，且其分子的剩余免疫球蛋白衍 生部分衍生自一種或多種人免疫球蛋白，并任選地具有經(jīng)改變的骨架支撐殘基以保持結(jié)合 親和力，參見 Queen et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 10029 (1989) (Queen 等人，《美 國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第86卷第100 頁(yè)，1989年)和Hodgson et al. ,9Bio/Technology 421 (1991) (Hodgson等人，《生物技術(shù)》，第9卷第421頁(yè)，1991年)中所公開的技術(shù)獲得?？捎糜谌嗽椿氖纠匀丝贵w骨架序列在(例如)以下網(wǎng)址和文獻(xiàn)中公開書 ncbi. nlm. nih. gov/ent rez/query, fcgi ；www. ncbi. nih. gov/igblast ；www. atcc. org/ phage/hdb. html ；www. mrc-cpe. cam. ac. uk/ALIGNMENTS. php ；www.kabatdatabase. com/ top.html ；ftp.ncbi.nih. gov/repository/kabat ；www.sciquest. com ；www.abeam, com ； www.antibodyresource, com/onlinecomp. html ；www. public, iastate. edu/ pedro/ research_tools. html ；www. whfreeman. com/immunology/CH05/kuby05. htm ；www. hhmi. org/grants/lectures/1996/vlab ；www. path. cam. ac. uk/ mrc7/mikeimages. html ； mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology, html ；www. immunologylink. com ；pathbox. wustl. edu/ hcenter/index, html ；www. appliedbiosystems, com ；www. nal. usda. gov/ awic/pubs/antibody ；www.m. ehime-u. ac. jp/ yasuhito/Elisa. html ；www. biodesign. com ；www. cancerresearchuk. org ；www. biotech. uf 1. edu ；www. isac-net. org ；baserv. uci. kun. nl/ jraats/linksl. html ；www. recab. uni-hd. de/immuno. bme. nwu. edu ；www. mrc-cpe. cam. ac. uk ； www. ibt. unam. mx/vir/V—mice, html ；http: //www. bio inf. org. uk/ abs ；antibody, bath. ac. uk ；www. unizh. ch ；www. cryst. bbk. ac. uk/ ubcg07s ；www. nimr. mrc. ac. uk/CC/ccaewg/ccaewg. html ；www. path. cam. ac. uk/ mrc7/humanisation/ TAHHP. html ；www. ibt. unam. mx/vir/structure/stat_aim. html ；www. biosci. missouri. edu/smithgp/index, html ；www. jerini. de ；以及 Kabat et al Sequences of Proteins of Immunological Interest^. S. Dept. Health (1987) (Kabat 等人，《免疫學(xué)相關(guān)蛋白質(zhì)序 列》，美國(guó)衛(wèi)生部，1987年)，以上網(wǎng)址公幵內(nèi)容和文獻(xiàn)全文均以引用方式并入本文中。缺乏任何非人序列的完全人單克隆抗體可以通過(guò)(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù) 從人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠制備Lonberg et al.，368Nature 856 (1994) (Lonberg等人， 《自然》，第 368 卷第 856 頁(yè)，1994 年)；Fishwild et al.，14 Nature Biotech. 845(1996) (Fishwild等人，《自然生物技術(shù)》，第14卷第845頁(yè)，1996年)和Mendez et al.，15 Nature Genetics 146 (1997) (Mendez等人，《自然遺傳學(xué)》，第15卷第146頁(yè)，1997年)。人單克隆抗 體也可以通過(guò)(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù)從噬菌體展示文庫(kù)制備和優(yōu)化Knappik et al.，296 .丁. Mol. Biol. 57 (2000) (Knappik 等人，《分子生物學(xué)雜志》，第 296 卷第 57 頁(yè)，2000 年)和 Krebs et al. ,254 J. Immunol. Meth. 67 (2001) (Krebs 等人，《免疫學(xué)方法雜志》，第254卷第67頁(yè)，2001年)?？贵w分子或制品當(dāng)相對(duì)于結(jié)合第二非相同抗原而言以更高的親和力和以特異性 方式而不是非特異性方式結(jié)合給定抗原時(shí)，則它“特異性結(jié)合”這個(gè)給定抗原。換句話說(shuō)， 抗體分子或制品的“特異性結(jié)合”可用于區(qū)分兩種不同的肽鏈?！捌巍笔蔷哂邪景l(fā)明任何肽鏈的任何氨基酸序列的一部分(而不是全部)的 氨基酸序列的肽鏈。片段可以包括(例如)具有與信號(hào)肽、胞外域、跨膜域或胞質(zhì)域?qū)?yīng) 的一部分氨基酸序列的截短肽鏈，或它們的變體，例如包括異源氨基和/或羧基末端氨基 酸序列的連續(xù)一系列殘基。還包括由宿主細(xì)胞產(chǎn)生或在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生的本發(fā)明肽鏈的降 解形式。其他示例性片段可通過(guò)結(jié)構(gòu)或功能特性來(lái)表征，例如包含α-螺旋或α-螺旋形 成區(qū)、折疊或折疊形成區(qū)、轉(zhuǎn)角或轉(zhuǎn)角形成區(qū)、卷曲或卷曲形成區(qū)、親水區(qū)、疏水區(qū)、 α -兩親區(qū)、β -兩親區(qū)、柔性區(qū)、表面形成區(qū)、底物結(jié)合區(qū)、胞外區(qū)和高抗原指數(shù)區(qū)的片段。 重要的是，本發(fā)明的肽鏈可以以片斷的形式使用或提供?！白凅w肽鏈”是其中已經(jīng)相對(duì)于第一肽鏈作出了氨基酸置換、插入、缺失或其組合 的第二肽鏈。天然存在的、修飾的或非典型的氨基酸可用于置換和插入。相對(duì)于具有序列 標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示氨基酸序列的肽鏈，序列標(biāo)識(shí)號(hào)8和序列標(biāo)識(shí)號(hào)9所描述的肽鏈?zhǔn)鞘纠?變體肽鏈。“變體多核苷酸”是其中已相對(duì)于第一多核苷酸序列作出了核酸殘基置換、插入、 缺失或其組合的第二多核苷酸。天然存在的或修飾的核堿基可用于置換和缺失。相對(duì)于具 有序列標(biāo)識(shí)號(hào)4中所示氨基酸序列的多核苷酸，序列標(biāo)識(shí)號(hào)1、序列標(biāo)識(shí)號(hào)2、序列標(biāo)識(shí)號(hào)3 和序列標(biāo)識(shí)號(hào)5所描述的多核苷酸是示例性變體多核苷酸。術(shù)語(yǔ)“TLR3治療劑”是指據(jù)信可提供治療效果和據(jù)信部分地通過(guò)TLR3的活性提供 該治療效果的分子或制品。此類TLR3可以包含本發(fā)明的肽鏈。TLR3治療劑的例子包括已 知的TLR3配體(例如dsRNA或聚(I C))，其可結(jié)合并活化TLR3，以產(chǎn)生提高的抗病毒活性 和免疫系統(tǒng)刺激的治療效果。術(shù)語(yǔ)“有害癥狀”是指動(dòng)物所呈現(xiàn)的任何表明發(fā)生了對(duì)該動(dòng)物的傷害的癥狀。本發(fā)明的一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷 酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號(hào)1中所示的多核苷酸序列編碼包含cynoTLR3胞外域預(yù)測(cè) 成熟形式的肽鏈。本發(fā)明的多核苷酸可以通過(guò)化學(xué)合成產(chǎn)生，例如在自動(dòng)化多核苷酸合成儀上進(jìn)行 的固相多核苷酸合成。作為另外一種選擇，本發(fā)明的多核苷酸可以通過(guò)其他技術(shù)產(chǎn)生，如基 于PCR的復(fù)制、基于載體的復(fù)制或基于限制性內(nèi)切酶的DNA操作技術(shù)。產(chǎn)生或獲得具有給 定的已知序列的多核苷酸的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個(gè)非編碼序列，例如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、 終止信號(hào)、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、mRNA穩(wěn)定序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號(hào)。多核苷酸序列還可 以包含編碼另外氨基酸的另外序列。這些另外的多核苷酸序列可以(例如)編碼標(biāo)記或 標(biāo)簽序列(例如六組氨酸肽)，如 Gentz et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 821 (1989) (Gentz等人，《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》，第86卷第821頁(yè)，1989年)中所述，或編碼HA肽標(biāo) 簽，如 Wilson et al. ,37 Cell 767 (1984) (Wilson 等人，《細(xì)胞》，第 37 卷第 767 頁(yè)，1984 年)中所述，這些標(biāo)簽有利于融合多肽的純化。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號(hào)2中所示的多核苷酸序列編碼包含不帶氨基末端甲硫氨 酸殘基的預(yù)測(cè)CynoTLR3信號(hào)肽以及胞外域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號(hào)3中所示的多核苷酸序列編碼包含cyn0TLR3胞外域預(yù) 測(cè)成熟形式、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號(hào)4中所示的多核苷酸序列編碼包含不帶氨基末端甲硫氨 酸殘基的預(yù)測(cè)CynoTLR3信號(hào)肽、胞外域、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號(hào)5中所示的多核苷酸序列是在開放讀框兩側(cè)具有5’和 3’序列的核酸，其編碼包含全長(zhǎng)CynoTLR3的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含分離多核苷酸的載體，其中分離多核苷酸具有選自序 列標(biāo)識(shí)號(hào)1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。序列標(biāo)識(shí)號(hào)6中所示的多核苷酸序列為 標(biāo)號(hào)為P4078的多核苷酸(DNA)表達(dá)載體，其編碼包含全長(zhǎng)cyn0TLR3的肽鏈。序列標(biāo)識(shí)號(hào) 7中所示的多核苷酸序列為標(biāo)號(hào)為P4037的多核苷酸(DNA)表達(dá)載體，其編碼這樣的肽鏈， 該肽鏈包含帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)CynoTLR3信號(hào)序列以及通過(guò)柔性甘氨酸和絲 氨酸接頭與六個(gè)氨基末端組氨酸氨基酸殘基標(biāo)簽融合的胞外域。序列標(biāo)識(shí)號(hào)1、2、3、4和5 中所示的多核苷酸在上文描述了。本發(fā)明的載體可用于保持多核苷酸、復(fù)制多核苷酸或驅(qū)動(dòng)本發(fā)明載體編碼的肽鏈 在生物系統(tǒng)(包括再造生物系統(tǒng))中的表達(dá)。載體可以為染色體載體、附加型載體和病毒衍生載體，例如衍生自細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌 體、轉(zhuǎn)座子、酵母附加體、插入元件、酵母染色體元件、桿狀病毒、乳多空病毒(例如SV40)、 牛痘病毒、腺病毒、雞痘病毒、偽狂犬病病毒、小核糖核酸病毒和逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的載體，以及 衍生自它們的組合的載體，例如粘粒和噬菌粒?？梢杂米魟⒅|(zhì)、緩沖劑或其他適用于具體應(yīng)用的賦形劑將本發(fā)明的載體配制 在微粒中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，載體是表達(dá)載體。表達(dá)載體通常包含可控制、調(diào)節(jié)、引起或允許由這種載體編碼的肽鏈的表達(dá)的核 酸序列元件。此類元件可包含轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子結(jié)合位點(diǎn)、RNA聚合酶起始位點(diǎn)、核糖體結(jié)合位點(diǎn) 以及有利于被編碼肽鏈在給定表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)的其他位點(diǎn)。此類表達(dá)系統(tǒng)可以是本領(lǐng)域 熟知的基于細(xì)胞的系統(tǒng)或無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)。適用于被編碼肽鏈的表達(dá)的核酸序列元件和親本載 體序列也是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是包含本發(fā)明載體的分離宿主細(xì)胞?？捎糜诒景l(fā)明多肽的表達(dá)的示例性質(zhì)粒衍生表達(dá)載體包含大腸桿菌(E. coli)復(fù) 制起點(diǎn)、aph(3’)-la卡那霉素抗性基因、帶內(nèi)含子A的HCMV立即早期啟動(dòng)子、合成的polyA 序列和牛生長(zhǎng)激素終止子。另一種示例性質(zhì)粒衍生表達(dá)載體包含大腸桿菌(E.coli)復(fù)制 起點(diǎn)、ant(4’)-Ia卡那霉素抗性基因、Rous肉瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù)序列、HCMV立即早期啟動(dòng) 子和SV40晚期polyA序列。
代表性的宿主細(xì)胞例子包括古細(xì)菌細(xì)胞；細(xì)菌細(xì)胞，例如鏈球菌(Streptococci)、 葡萄球菌(Staphylococci)、腸球菌(Enterococci)、大腸桿菌(E. coli)、鏈霉菌
印tomyces)、藍(lán)細(xì)菌(cyancAacteria)、枯草芽孢桿菌(B. subtilis)和金黃色葡萄球 菌(S. aureus)；真菌細(xì)胞，例如克魯弗氏酵母(Kluveromyces)、酵母菌(Saccharomyces)、 擔(dān)子菌(Basidomycete)、白色念珠菌(Candida albicans)或曲霉菌(Aspergillus)；昆蟲 細(xì)胞，例如果蠅(Drosophila) S2和草地貪夜蛾(Spodoptera) Sf9 ；動(dòng)物細(xì)胞，例如CH0、C0S、 HeLa、C127、3T3、BHK、293、CV-l、BOWes黑素瘤和骨髓瘤；以及植物細(xì)胞，例如裸子植物或被 子植物細(xì)胞。本發(fā)明方法中的宿主細(xì)胞可以單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群體的形式提供。細(xì)胞群體可 以包括分離的或培養(yǎng)的細(xì)胞群體或存在于基質(zhì)(例如組織)中的細(xì)胞群體。多核苷酸(例如載體)向宿主細(xì)胞中的導(dǎo)入可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方 法來(lái)實(shí)現(xiàn)，這些方法可從以下實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)中找到，例如Davis et al. , Basic Methods in Molecular Biology, 2- ed. , Appleton &Lange, Norwalk, CT (1994) (Davis 等人，《分子生 物學(xué)基本方法(第二版)》，Appleton & Lange (Norwalk，CT)，1994 年)和 Sambrook et al. ,Molecular CloninR :A Laboratory Manual,3rd ed. ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(2001) (Sambrook等人，《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南(第三版)，Cold Spring HarborLaboratory 出版社(Cold Spring Harbor, NY)，2001 年》)。這些方法包括 磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、顯微注射、陽(yáng)離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、刮 擦荷載(scrape loading)、基因槍法導(dǎo)入(ballistic introduction)和感染。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)8中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。序 列標(biāo)識(shí)號(hào)8為包含cyn0TLR3胞外域預(yù)測(cè)成熟形式的肽鏈。本發(fā)明的肽鏈可以通過(guò)化學(xué)合成法產(chǎn)生，例如在自動(dòng)肽合成儀上進(jìn)行的固相肽合 成。作為另外一種選擇，本發(fā)明的肽鏈可以通過(guò)使用無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)從編碼這些肽鏈的多 核苷酸獲得，無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的例子有基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取 物的表達(dá)系統(tǒng)以及基于大腸桿菌(Escherichia coli)提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的肽鏈 還可以用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)通過(guò)從含有本發(fā)明核酸序列的細(xì)胞的表達(dá)和分離來(lái)獲得，所述 技術(shù)例如易分離的親和標(biāo)記肽鏈的重組表達(dá)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到其他用于獲得本 發(fā)明肽鏈的技術(shù)。本發(fā)明的肽鏈可以包括包含與第二肽鏈融合的本發(fā)明肽鏈的融合肽鏈。此類第二 肽鏈可以是前導(dǎo)序列或分泌信號(hào)序列、前體蛋白序列或蛋白原序列或前蛋白原序列、以及 天然存在的序列、或部分衍生自天然存在的序列的部分合成序列、或全合成序列?？蛇x擇分 泌信號(hào)或前導(dǎo)肽鏈序列來(lái)引導(dǎo)本發(fā)明肽鏈分泌到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)腔中或細(xì)胞外環(huán)境中；此類肽 鏈序列可以是任何來(lái)自食蟹猴的肽鏈的異源序列或內(nèi)源序列，或包含這些序列的雜合體。本發(fā)明的肽鏈還可配制在可藥用載體或稀釋劑中?？梢允褂枚喾N含水載體，如 0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無(wú)菌的，通常不含顆粒物質(zhì)。這些溶液可通過(guò)常規(guī) 的、熟知的除菌技術(shù)(如過(guò)濾)進(jìn)行除菌。組合物可以包含模擬生理?xiàng)l件所需的可藥用輔 助物質(zhì)，例如PH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑。本發(fā)明的肽鏈在這種藥物制劑中的濃度可以差別很大， 即從小于約0. 5重量％ (通常為或至少約1重量％ )至高達(dá)15或20重量％，要根據(jù)所選 的具體給藥方式主要依據(jù)流體體積、粘度和其他因素進(jìn)行選擇。本發(fā)明的肽鏈和核酸還可以以能以單位劑型提供的藥物制劑的形式提供，例如用于引發(fā)免疫反應(yīng)的疫苗。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以很容易地確定適當(dāng)?shù)闹委熡行┝俊Ｈ绻?必要，可將確定的劑量在治療期間以適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔加以重復(fù)，所述時(shí)間間隔是由醫(yī)生或 相關(guān)領(lǐng)域的其他技術(shù)人員(如護(hù)士、獸醫(yī)或獸醫(yī)技師)適當(dāng)選擇的。本發(fā)明的肽鏈可以凍干以便于儲(chǔ)存，使用之前可以在合適的載體中復(fù)原。該技術(shù) 已證實(shí)對(duì)常規(guī)的蛋白質(zhì)制品是有效的。凍干和復(fù)原技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)9中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。序 列標(biāo)識(shí)號(hào)9是包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cyn0TLR3信號(hào)肽以及胞外域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)10中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。 序列標(biāo)識(shí)號(hào)10是包含CynoTLR3胞外域預(yù)測(cè)成熟形式、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。 序列標(biāo)識(shí)號(hào)11是包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cynoTLR3信號(hào)肽、胞外域、跨膜域 和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟提供本發(fā)明 的宿主細(xì)胞；在足以表達(dá)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11 中所示序列的至少一條肽鏈的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞；以及確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo) 識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。宿主細(xì)胞可以在任何適合保持或增殖給定類型的宿主細(xì)胞并足以表達(dá)肽鏈的條 件下培養(yǎng)。足以表達(dá)肽鏈的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基和相關(guān)方法是本領(lǐng)域熟知的。例如，許多哺乳 類細(xì)胞類型可以在37°C下用適當(dāng)緩沖的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行有氧培養(yǎng)，而細(xì)菌、酵母和其他細(xì) 胞類型可以在37°C和適當(dāng)?shù)拇髿鈼l件下在LB培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。在本發(fā)明的方法中，可以用本領(lǐng)域熟知的多種不同技術(shù)確認(rèn)肽鏈的表達(dá)。例如，可 以用對(duì)所表達(dá)的肽鏈有特異性的檢測(cè)試劑(例如抗體或受體配體)確認(rèn)肽鏈的表達(dá)。特 異性結(jié)合本發(fā)明cynoTLR3肽鏈的抗體是此類試劑的一個(gè)例子。此類試劑的另一個(gè)例子是 TLR3受體配體，例如結(jié)合TLR3的dsRNA或聚(I:C)?？梢酝ㄟ^(guò)將放射標(biāo)記物、熒光團(tuán)、發(fā)色 團(tuán)或其他可檢測(cè)分子結(jié)合到檢測(cè)試劑或摻入到檢測(cè)試劑中來(lái)對(duì)檢測(cè)試劑進(jìn)行標(biāo)記以便可 檢測(cè)。作為另外一種選擇，可以通過(guò)分析與TLR3活化有關(guān)的生物活性(例如NF-kB的活 化或I型干擾素產(chǎn)量增加)來(lái)確認(rèn)本發(fā)明cyn0TLR3肽鏈的表達(dá)。此類分析還可以使用可 響應(yīng)TLR3活化的報(bào)告基因構(gòu)建物。還可以通過(guò)在肽鏈制品中鑒定具有本發(fā)明肽鏈的物理特性的肽鏈來(lái)確認(rèn)肽鏈表 達(dá)。例如，采用諸如蛋白質(zhì)分子量或等電點(diǎn)等標(biāo)準(zhǔn)的SDS-PAGE技術(shù)和其他熟知的蛋白質(zhì)表 征技術(shù)可以用于確認(rèn)本發(fā)明肽鏈的表達(dá)。也可以使用蛋白質(zhì)純化技術(shù)(例如硫酸銨或乙醇 沉淀、酸萃取、高效液相色譜、陰離子或陽(yáng)離子交換色譜、磷酸纖維素色譜、疏水作用色譜、 親和色譜、羥基磷灰石色譜和凝集素色譜)確認(rèn)本發(fā)明肽鏈的表達(dá)。重要的是，在本發(fā)明方法中，所表達(dá)的肽鏈不需要分離。因此，可確認(rèn)肽鏈的表達(dá) 已在(例如)細(xì)胞上或細(xì)胞中或肽鏈混合物中發(fā)生。適當(dāng)時(shí)，也可以使用基于流式細(xì)胞術(shù) 的技術(shù)(例如熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS))來(lái)確認(rèn)細(xì)胞的肽鏈表達(dá)。如上文所述，可以用 本領(lǐng)域已知的任何合適技術(shù)來(lái)確認(rèn)肽鏈表達(dá)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟提供能夠被轉(zhuǎn)錄成編碼包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列 的至少一條肽鏈的RNA的本發(fā)明多核苷酸；提供無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分；從所提供的多核 苷酸啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)；以及確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo) 識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。將多核苷酸轉(zhuǎn)錄成RNA的技術(shù)、獲得編碼肽鏈的RNA的技術(shù)或啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)的 技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的，完成這些步驟的試劑盒可從多個(gè)來(lái)源商購(gòu)獲得。在本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施例中，無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的 表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟提供編碼包 含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽 鏈的RNA ；提供無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分；從所提供的RNA啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)；確認(rèn)包含序列標(biāo) 識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。在本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施例中，無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的 表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是由本發(fā)明方法產(chǎn)生的肽鏈。此類肽鏈可以包括翻譯后修 飾，例如包括糖基化或磷酸化。此類肽鏈還可以包括選擇性肽鏈形式(例如剪接變體)、截 短形式或蛋白水解修飾形式。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是特異性結(jié)合本發(fā)明肽鏈的抗體?？梢杂帽景l(fā)明的肽鏈產(chǎn) 生抗cyn0TLR3的多克隆或單克隆抗體。使用蛋白或核酸免疫制備鼠、嵌合、人源化和完全 人單克隆抗體的技術(shù)是常規(guī)技術(shù)并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。從上文可以找到此類技術(shù)的 另外的討論和描述。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是特異性結(jié)合本發(fā)明肽鏈的單克隆抗體。本發(fā)明的另一個(gè)方面是確定TLR3治療劑是否安全的方法，所述方法包括提供LR3 治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴；給第一食蟹猴施用TLR3治療劑；以及對(duì)比第二食蟹猴 確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀，如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥狀，則表明TLR3治療劑是 不安全的，如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀，則表明TLR3治療劑是安全的。在本發(fā)明方法中，所提供的第一和第二食蟹猴在有害癥狀的呈現(xiàn)方面應(yīng)是等同 的。換句話說(shuō)，兩個(gè)動(dòng)物在供試時(shí)應(yīng)該都不呈現(xiàn)有害癥狀或都呈現(xiàn)相同的有害癥狀。在本發(fā)明方法中，可以通過(guò)任何合適的途徑(例如胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)等)施用 TLR3治療劑。適用于本發(fā)明方法的TLR3治療劑的例子包括(例如)已知的TLR3配體(例 如dsRNA或聚(1:0)和肽鏈(例如包含TLR3胞外域的肽鏈)。在本發(fā)明方法中，對(duì)比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀是很容易實(shí) 現(xiàn)的。例如，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員(例如獸醫(yī)、獸醫(yī)助理、動(dòng)物技師或研究科學(xué)家)可以 確定動(dòng)物所呈現(xiàn)的癥狀是否為有害癥狀。有害癥狀的例子包括死亡、昏迷、癲癇、發(fā)燒、器官 衰竭、組織畸形、器官功能受損、組織功能受損、癌癥、腫瘤、潰瘍、出血、感染等。在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施例中，TLR3治療劑是抗體。本發(fā)明現(xiàn)結(jié)合以下具體的、非限制性實(shí)例進(jìn)行描述。實(shí)例1編碼全長(zhǎng)食蟹猴Toll樣受體3(Cyn0TLR3)的多核苷酸的分離、克隆以及測(cè)序
使用TRIZOL 試劑(nvitrogen，Carload，CA)根據(jù)制造說(shuō)明書從食蟹猴外周血單 核細(xì)胞(PBMC)純化 RNA。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是用 SUPERSCRIPT 11 REVERSE TRANSCRIPTASE 試劑 盒進(jìn)行，用oligo-dT引物起動(dòng)。用于初始PCR克隆的引物根據(jù)編碼人TLR3肽鏈的多核苷 酸的序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。然后利用2535引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)14)和沈64引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)15) 進(jìn)行PCR以克隆編碼全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)11)的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號(hào)5)。 每條引物取用lOOng，cDNA模板取用lOOng，按以下條件進(jìn)行PCR -MV 30秒，60°C 1分鐘， 680C 1分鐘，循環(huán)30次，然后68°C 5分鐘，循環(huán)1次。PCR反應(yīng)產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行分 析，顯示獲得了與PCR克隆的多核苷酸相應(yīng)的大約2700bp的多核苷酸條帶。克隆的PCR 產(chǎn)物用 QIAQUICK PCR 純化儀(Qiagen，Valencia，CA))進(jìn)行純化。將 PCR產(chǎn)物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 載體中，以獲得該大約2700bp PCR產(chǎn)物的2535引物(序列 標(biāo)識(shí)號(hào)14)和2664引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)15)之間的序列。該大約2700bp PCR產(chǎn)物的被2535引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)14)和沈64引物(序列標(biāo) 識(shí)號(hào)15)覆蓋的序列通過(guò)5’和3’ RACE (cDNA末端的快速擴(kuò)增)方法進(jìn)行克隆。這是如下 完成的首先用如上所述獲得的cynoTLR3序列設(shè)計(jì)cyn0TL3 cDNA特異性2589引物(序列 標(biāo)識(shí)號(hào)17) ,2590引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)18)以及沈25引物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)19)。3’引物(定位 于起始位點(diǎn)下游約150至250bp處)是設(shè)計(jì)用來(lái)與5，GENERACER 引物形成引物對(duì)，從而用 于編碼cyn0TLR3的全長(zhǎng)多核苷酸cDNA的5’端的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序。5’引物(定位于終止 位點(diǎn)上游約150至250bp處)是設(shè)計(jì)用來(lái)與3，GENERACER 引物形成引物對(duì)，從而用于編 碼cyn0TLR3的全長(zhǎng)多核苷酸cDNA的3’端的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序。然后將從這些擴(kuò)增中獲得 的PCR產(chǎn)物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 載體中，從這些多核苷酸獲得5’非翻譯序列、氨基末端 編碼序列、羧基末端編碼序列以及3’非翻譯序列。用于獲得附加序列的引物具有序列標(biāo)識(shí) 號(hào)17、序列標(biāo)識(shí)號(hào)18和序列標(biāo)識(shí)號(hào)19中所示的序列。然后對(duì)所獲得的序列進(jìn)行多序列對(duì) 比，得到包含5’非翻譯序列、編碼全長(zhǎng)cynoTLR肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)20)的編碼序列以及3’ 非翻譯序列的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號(hào)5)。隨后使用 Vector NTI v9. 0. 0 軟件 Qnvitrogen Corp.，Carlsbad, CA)進(jìn)行序列 分析。在全長(zhǎng)CynoTLR3肽鏈中鑒定的結(jié)構(gòu)域由圖1和圖2中所示的克隆的多核苷酸(序 列標(biāo)識(shí)號(hào)幻編碼。氨基末端甲硫氨酸由序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第1-3位核苷酸殘基編碼，并對(duì) 應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號(hào)20的第1位氨基酸殘基。信號(hào)肽由序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第1-69位核苷酸殘 基編碼，并對(duì)應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號(hào)20的第1-23位氨基酸殘基。胞外域由序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第 70-2112位核苷酸殘基編碼，并對(duì)應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號(hào)20的第M-704位氨基酸殘基?？缒び蛴?序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第2113-2175位核苷酸殘基編碼，并對(duì)應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號(hào)20的第705-725 位氨基酸殘基。胞質(zhì)域由序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第2176-2712位核苷酸殘基編碼，并對(duì)應(yīng)于序列 標(biāo)識(shí)號(hào)20的第7沈-904位氨基酸殘基。終止密碼子由序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第2713-2715位核 苷酸殘基編碼。使用Vector NTI v9. 0. 0軟件的AlignX模塊所采用的CLUSTALW算法的默認(rèn)設(shè)置 進(jìn)行多序列比對(duì)分析。發(fā)現(xiàn)編碼cynoTLR3的全長(zhǎng)多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第 1-2712位核苷酸殘基)與編碼得到很好表征的全長(zhǎng)人TLR3肽鏈的全長(zhǎng)多核苷酸編碼序列 (序列標(biāo)識(shí)號(hào)12的第1-2715位核苷酸殘基)有96. 8%同一性。發(fā)現(xiàn)全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈 (序列標(biāo)識(shí)號(hào)20)與得到很好表征的全長(zhǎng)人TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)13)有95. 7%同一性。發(fā)現(xiàn)cyn0TLR3胞外域肽鏈的成熟形式(序列標(biāo)識(shí)號(hào)1)與人TLR3肽鏈的胞外域(序列標(biāo) 識(shí)號(hào)13的第M至704位氨基酸殘基)有95. 4%同一性。發(fā)現(xiàn)編碼cyn0TLR3的全長(zhǎng)多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號(hào)21的第1-2712位核苷 酸殘基)與編碼恒河猴TLR3肽鏈的全長(zhǎng)多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號(hào)22的第1-2712位 核苷酸殘基)有99. 3%同一性。發(fā)現(xiàn)全長(zhǎng)CynoTLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)20)與恒河猴TLR3 肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號(hào)23)有98. 5%同一性。發(fā)現(xiàn)cyn0TLR3胞外域肽鏈的成熟形式(序列標(biāo) 識(shí)號(hào)1)與人TLR3肽鏈的胞外域(序列標(biāo)識(shí)號(hào)23的第M至704位氨基酸殘基)有98. 2% 同一性。Sanghavi和Reinhart報(bào)道過(guò)編碼恒河猴TLR3的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號(hào)22)的 克隆° 參見 Sanghavi and Reinhart, 175 J. Immunol. 5314 (2005) (SanRhavi 禾口 Reinhart, 《免疫學(xué)雜志》，第175卷第5314頁(yè)，2005年)。實(shí)例2包含Cyn0TLR3胞外域的肽鏈的表汰和純化構(gòu)建編碼N末端甲硫氨酸、cyn0TLR3信號(hào)肽鏈以及通過(guò)柔性甘氨酸和絲氨酸接頭 與六氨基末端組氨酸氨基殘基標(biāo)簽融合的CynoTLR3胞外域的多核苷酸，并將其克隆到哺 乳動(dòng)物表達(dá)載體中，以產(chǎn)生P4037表達(dá)載體構(gòu)建物(序列標(biāo)識(shí)號(hào)7)。引物2523(序列標(biāo)識(shí) 號(hào)16)用來(lái)幫助p4037的產(chǎn)生。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將p4037瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。該HEK293 細(xì)胞系來(lái)源于人胚腎細(xì)胞。隨后將這些HEK293細(xì)胞培養(yǎng)六天，并收集細(xì)胞培養(yǎng)基。然后按 照制造商(Clontech Laboratories Inc. ,Mountain View,CA)的說(shuō)明，進(jìn)行TALON 樹脂純 化，將由P4037編碼的組氨酸標(biāo)記cyn0TLR3胞外域融合肽鏈從收集的培養(yǎng)基中分離出來(lái)。 然后對(duì)得自TAL0N 樹脂的洗脫液進(jìn)行SDS-PAGE分析，該分析是在非還原樣品和經(jīng)歷還原 條件的樣品上進(jìn)行。SDS-PAGE之后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。蛋白質(zhì)印跡用組氨酸標(biāo)簽特異性 探針進(jìn)行探測(cè)。對(duì)還原和非還原樣品的蛋白質(zhì)印跡分析均顯示有分子量約為98kDal的明 顯單體蛋白得到表達(dá)并分離。由p4037編碼的cyn0TLR3組氨酸標(biāo)記cyn0TLR3胞外域融合 肽鏈的分子量計(jì)算值為約80kDal，比蛋白質(zhì)印跡中檢測(cè)到的98kDal組氨酸標(biāo)記肽鏈要小。 然而，由P4037編碼的肽鏈包含15個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn)，并且據(jù)信翻譯后的糖基化很大程 度上是造成所表達(dá)的組氨酸標(biāo)記蛋白的分子量增加的原因。本發(fā)明現(xiàn)已完整描述，但對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將顯而易見的是，在不 脫離本發(fā)明所附權(quán)利要求的精神和范圍的前提下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行多種修改和變型。序列表表解序列標(biāo)識(shí)號(hào)1來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，編碼包含CynoTLR3胞外域的預(yù)測(cè)成熟形式的肽鏈。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatc
tccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactc序列標(biāo)識(shí)號(hào)2來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，編碼包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cyn0TLR3信號(hào) 肽以及胞外域的肽鏈。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcc
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序列標(biāo)識(shí)號(hào)4來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，編碼包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cyn0TLR3信號(hào) 肽、胞外域、跨膜域以及胞質(zhì)域的多肽。agacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaataga
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aatcccttcagttggttggtacaacttgccaactgggccctgttccacatgtgacacggggggggaccaaacacaaaggggttctctgactgtagttgacatccttataaatggatgtgcacatttgccaacactgagtggctttcatcctggagcagactttgcagtctgtggactgcaacacaacattgcctttatgtgtaactcttggctgaagctcttacaccaatgctgggggacatgtacctcccaggggcccaggaagactacgggaggctacaccaacgtcaatcagaggggcctgtgtagctaccgataagcggaccctcaagagggcattagcaatagtgtttataaggcccccttgttaaccctaaacgggtagcatatgcttcccgggtagtagtatatactatccagactaaccctaattcaatagcatatgttacccaacgggaagcatatgctatcgaattagggttagtaaaagggtcctaaggaacagcgatatctcccaccccatgagetgtcacggttttatttacatggggtcaggattccacgagggtagtgaaccattttagtcacaagggcagtggctgaagatcaaggagcgggcagtgaactctcctgaatcttcgcctgcttcttcattctccttcgtttagctaatagaataactgctgagttgtgaacagtaaggtgtatgtgaggtgctcgaaaacaaggtttcaggtgacgcccccagaataaaatttggacggggggttcagtggtggcattgtgctatgacaccaatataaccctcacaaaccccttgggcaataaatactagtgtaggaatgaaacattctgaatatctttaacaatagaaatccatggggtggggacaagccgtaaagactggatgtccatctcacacgaatttatggctatgggcaacacataatcctagtgcaatatgatactggggttattaagatgtgtcccaggcagggaccaagacaggtgaaccatgttgttacactctatttgtaacaaggggaaagagagtggacgccgacagcagcggactccactggttgtctctaacacccccgaaaattaaacggggctccacgccaatggggcccataaacaaagacaagtggccactcttttttttgaaattgtggagtgggggcacgcgtcagcccccacacgccgccctgcggttttggactgtaaaataagggtgtaataacttggctgattgtaaccccgctaaccactgcggtcaaaccacttgcccacaaaaccactaatggcaccccggggaatacctgcataagtaggtgggcgggccaagataggggcgcgattgctgcgatctggaggacaaattacacacacttgcgcctgagcgccaagcacagggttgttggtcctcatattcacgaggtcgctgagagcacggtgggctaatgttgccatgggtagcatatactacccaaatatctggatagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatctgtatccgggtagcatatgctatcctaatagagattagggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcatatactacccaaatatctggatagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatctgtatccgggtagcatatgctatcctcatgcatatacagtcagcatatgatacccagtagtagagtgggagtgctatcctttgcatatgccgccacctcccaagggggcgtgaattttcgctgcttgtccttttcctgctggttgctcccattcttaggtgaatttaaggaggccaggctaaagccgtcgcatgtctgattgctcaccaggtaaatgtcgctaatgttttccaacgcgagaaggtgttgagcgcggagctgagtgacgtgacaacatgggtatgcccaattgccccatgttgggaggacgaaaatggtgacaagacagatggccagaaatacaccaacagcacgcatgatgtctactggggatttattctttagtgcgggggaatacacggcttttaatacgattgagggcgtctcctaacaagttacatcactcctgcccttcctcaccctcatctccatcacctcctteatctccgtcatctccgtcatcaccctccgcggcagccccttccaccatagg tggaaaccagggaggcaaatctactccatcgtcaaagctgcacacagtcaccctgatattgcag gtaggagcgggctttgtcataacaaggtccttaatcgcatccttcaaaacctcagcaaatatat gagtttgtaaaaagaccatgaaataacagacaatggactcccttagcgggccaggttgtgggcc gggtccaggggccattccaaaggggagacgactcaatggtgtaagacgacattgtggaatagca agggcagttcctcgccttaggttgtaaagggaggtcttactacctccatatacgaacacaccgg cgacccaagttccttcgtcggtagtcctttctacgtgactcctagccaggagagctcttaaacc ttctgcaatgttctcaaatttcgggttggaacctccttgaccacgatgcttttccaaaccaccc tccttttttgcgccctgcctccatcaccctgaccccggggtccagtgcttgggccttctcctgg gtcatctgcggggccctgctctatcgctcccgggggcacgtcaggctcaccatctgggccacct tcttggtggtattcaaaataatcggcttcccctacagggtggaaaaatggccttctacctggag ggggcctgcgcggtggagacccggatgatgatgactgactactgggactcctgggcctcttttc tccacgtccacgacctctccccctggctctttcacgacttccccccctggctctttcacgtcct ctaccccggcggcctccactacctcctcgaccccggcctccactacctcctcgaccccggcctc cactgcctcctcgaccccggcctccacctcctgctcctgcccctcctgctcctgcccctcctcc
gctcctgcccctcccgctcctgctcctgctcctgttccaccgtgggtccctttgcagccaatgc aacttggacgtttttggggtctccggacaccatctctatgtcttggccctgatcctgagccgcc cggggctcctggtcttccgcctcctcgtcctcgtcctcttccccgtcctcgtccatggttatca ccccctcttctttgaggtccactgccgccggagccttctggtccagatgtgtctcccttctctc ctaggccatttccaggtcctgtacctggcccctcgtcagacatgattcacactaaaagagatca atagacatctttattagacgacgctcagtgaatacagggagtgcagactcctgccccctccaac agcccccccaccctcatccccttcatggtcgctgtcagacagatccaggtctgaaaattcccca tcctccgaaccatcctcgtcctcatcaccaattactcgcagcccggaaaactcccgctgaacat cctcaagatttgcgtcctgagcctcaagccaggcctcaaattcctcgtccccctttttgctgga cggtagggatggggattctcgggacccctcctcttcctcttcaaggtcaccagacagagatgct actggggcaacggaagaaaagctgggtgcggcctgtgaggatcagcttatcgatgataagctgt caaacatgagaattcttgaagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtc atgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaaccccta tttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaat
gcttcaataatattgaaaaaggaagagtatgagtattcaacatttccgtgtcgcccttattcccttttttgcggcattttgccttcctgtttttgctcacccagaaacgctggtgaaagtaaaagatgctgaagatcagttgggtgcacgagtgggttacatcgaactggatctcaacagcggtaagatccttgagagttttcgccccgaagaacgttttccaatgatgagcacttttaaagttctgctatgtggcgcggtattatcccgtgttgacgccgggcaagagcaactcggtcgccgcatacactattctcagaatgacttggttgagtactcaccagtcacagaaaagcatcttacggatggcatgacagtaagagaattatgcagtgctgccataaccatgagtgataacactgcggccaacttacttctgacaacgatcggaggaccgaaggagctaaccgcttttttgcacaacatgggggatcatgtaactcgccttgatcgttgggaaccggagctgaatgaagccataccaaacgacgagcgtgacaccacgatgcctgcagcaatggcaacaacgttgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatatcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccgtagaaaagatcaaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgtccttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcggcctttttacggttcctggccttttgctggccttgaagctgtccctgatggtcgtcatctacctgcctggacagcatggcctgcaacgcgggcatcccgatgccgccggaagcgagaagaatcataatggggaaggccatccagcctcgcgtcgcgaacgccagcaagacgtagcccagcgcgtcggccccgagatgcgccgcgtgcggctgctggagatggcggacgcgatggatatgttctgccaagggttggtttgcgcattcacagttctccgcaagaattgattggctccaattcttggagtggtgaatccgttagcgaggtgccgccctgetteatccccgtggcccgttgetcgcgtttgctggcggtgtccccggaagaaatatatttgcatgtctttagttctatgatgacacaaaccccgcccagcgtcttgtcattggcgaattcgaacacgcagatgcagtcggggcggcgcggtccgaggtccacttcgcatattaaggtgacgcgtgtggcctcgaacaccgagcgaccctgcagcgacccgcttaacagcgtcaacagcgtgccgcagatcccggggggcaatgagatatgaaaaagcctgaactcaccgcgacgtctgtcgagaagtttctgatcgaaaagttcgacagcgtctccgacctgatgcagctctcggagggcgaagaatctcgtgctttcagcttcgatgtaggagggcgtggatatgtcctgcgggtaaatagctgcgccgatggtttctacaaagatcgttatgtttatcggcactttgcatcggccgcgctcccgattccggaagt
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序列標(biāo)識(shí)號(hào)9來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈，包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cyn0TLR3信號(hào)肽以及胞 外域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFEL序列標(biāo)識(shí)號(hào)10來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈，包含cyn0TLR3胞外域預(yù)測(cè)成熟形式、跨膜域以及胞質(zhì)域。STNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVffEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEI
PDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號(hào)11來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈，包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cyn0TLR3信號(hào)肽、胞外 域、跨膜域以及胞質(zhì)域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGI
LANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLS
LSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號(hào)12來(lái)源智人序列描述多核苷酸，編碼全長(zhǎng)人TLR3肽鏈。atgagacagactttgccttgtatctacttttgggggggccttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaccaagtgcactgttagccatgaagttgctgactgcagccacctgaagttgactcaggtacccgatgatctacccacaaacataacagtgttgaaccttacccataatcaactcagaagattaccagccgccaacttcacaaggtatagccagctaactagcttggatgtaggatttaacaccatctcaaaactggagccagaattgtgccagaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacctttgccttctgcacgaatttgactgaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaattcaagcgctaaaaagtgaagaactggatatctttgccaattcatctttaaaaaaattagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattatttggcctctttctgaacaatgtccagctgggtcccagccttacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcattcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaatctcactatgctcgatctttcctacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctagagtataataatatacagcatttgttttctcactctttgcacgggcttttcaatgtgaggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcctcactccccaagattgatgatttttcttttcagtggctaaaatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatattccaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcgaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtgatgctttctcttggttgggccacctagaagtacttgacctgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagaggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcagctgactaggaactcctttgccttggtcccaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggatagctctccttcaccattccagcctcttcgtaacttgaccattctggat
ctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggagggtcttgagaaactagaaattctcgatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcccatttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtccaacggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatttgaactaaagatcatcgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcatctgtctttaataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatccgttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgactgagttagatatgcgctttaatccctttgattgcacgtgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacgagacccataccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccacctcactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcttgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttattgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttattggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcatgcctataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcgggtgtttttgaactagaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttgttataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgcagttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattggttttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcgtcataaattgcaagtagcacttggatccaaaaactctgtacat序列標(biāo)識(shí)號(hào)13來(lái)源智人序列描述肽鏈，包含全長(zhǎng)人TLR3肽鏈。MRQTLPCIYFWGGLLPFGMLCASSTTKCTVSHEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTSLDVGFNTISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELDIFANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLFGLFLNNVQLGPSLTEKLCLELANTSIRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSYNNLNVVGNDSFAWLPQLEYFFLEYNNIQHLFSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFQWLKCLEHLNMEDNDIPGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLRTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESDAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWRGLENIFEIYLSYNKYLQLTRNSFALVPSLQRLMLRRVALKNVDSSPSPFQPLRNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPIYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLFELKIIDLGLNNLNTLPASVFNNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLTELDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINETHTNIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFIVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKD
WVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號(hào)14來(lái)源人工合成
序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cccaagcttgccaccatgagacagactttgccttgtatctac序列標(biāo)識(shí)號(hào)15來(lái)源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cccctcgagttaatgtacagagtttttggatccaagtgct序列標(biāo)識(shí)號(hào)16來(lái)源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。catggatccttcaaagggggcactgtctttgc序列標(biāo)識(shí)號(hào)17來(lái)源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cactgttatgtttgtggggagatcatcgg序列標(biāo)識(shí)號(hào)18來(lái)源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。atcctacatccaagatagttagttggctat序列標(biāo)識(shí)號(hào)19來(lái)源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物，用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。caaggtacatcatgccgttcaac序列標(biāo)識(shí)號(hào)20來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈，包含全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈。該肽鏈包含帶氨基末端甲硫氨酸殘基 的預(yù)測(cè)CynoTLR3信號(hào)肽、胞外域、跨膜域以及胞質(zhì)域。MRQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELT
GQEffSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號(hào)21來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸，編碼包含全長(zhǎng)cyn0TLR3肽鏈的肽鏈。該肽鏈包含帶氨基末 端甲硫氨酸殘基的預(yù)測(cè)cynoTLR3信號(hào)肽、胞外域、跨膜域、胞質(zhì)域。該多核苷酸序列中還包 含終止密碼子。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgt
ttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcacgcccataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcaggtgtttttgaactggaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttattataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgccgttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattgattttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcatcataaactgcaagtagca
cttggatccaaaaactcagtacattaa序列標(biāo)識(shí)號(hào)22來(lái)源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸，編碼全長(zhǎng)恒河猴TLR3肽鏈。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaaccggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttccgataaaacttttgccttctgcatgaatttgacggaactccattccctgtcccactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctataaaattaggaactcaggttcagatggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagatcattgggcctcttcctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtctaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgcttgatctttcccacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctc
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權(quán)利要求
1.一種分離多核苷酸，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
2.一種分離多核苷酸，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
3.一種分離多核苷酸，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
4.一種分離多核苷酸，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
5.一種分離多核苷酸，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
6.一種包含分離多核苷酸的載體，所述分離多核苷酸具有選自序列標(biāo)識(shí)號(hào)1、2、3、4、 5、6和7中所示的序列的序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載體，其為表達(dá)載體。
8.一種分離宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求6所述的載體。
9.一種分離宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求7所述的載體。
10.一種分離肽鏈，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)8中所示序列的肽鏈。
11.一種分離肽鏈，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)9中所示序列的肽鏈。
12.—種分離肽鏈，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)10中所示序列的肽鏈。
13.一種分離肽鏈，其包含具有序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的肽鏈。
14.一種表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟a)提供權(quán)利要求9所述的宿主細(xì)胞；b)在足以表達(dá)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所 示序列的至少一條肽鏈的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞；以及c)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
15.一種表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟a)提供權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的，能夠被轉(zhuǎn)錄為編碼包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列 標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列的至少一條肽鏈的RNA的多核苷酸；b)提供無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分；c)從所提供的所述多核苷酸啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)；和d)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解 物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。
17.—種表達(dá)肽鏈的方法，所述方法包括以下步驟a)提供編碼包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示 序列的至少一條肽鏈的RNA ；b)提供無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分；c)從所提供的所述RNA啟動(dòng)無(wú)細(xì)胞表達(dá)；和d)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號(hào)8、序列標(biāo)識(shí)號(hào)9、序列標(biāo)識(shí)號(hào)10或序列標(biāo)識(shí)號(hào)11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述無(wú)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解 物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。
19.一種肽鏈，其用權(quán)利要求14所述的方法產(chǎn)生。
20.一種肽鏈，其用權(quán)利要求15所述的方法產(chǎn)生。
21.一種肽鏈，其用權(quán)利要求17所述的方法產(chǎn)生。
22.—種分離抗體，其特異性結(jié)合權(quán)利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽鏈。
23.一種單克隆抗體，其特異性結(jié)合權(quán)利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽鏈。
24.一種評(píng)估TLR3治療劑安全性的方法，所述方法包括a)提供TLR3治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴；b)給所述第一食蟹猴施用所述TLR3治療劑；和c)對(duì)比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀，如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥 狀，則表明TLR3治療劑是不安全的，如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀，則表明TLR3治療 劑是安全的。
25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其中所述TLR3治療劑是抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及食蟹猴Toll樣受體3(cynoTLR3)及其用途。本發(fā)明公開了編碼食蟹猴Toll樣受體3(cynoTLR3)的分離多核苷酸、可從這些多核苷酸的表達(dá)獲得的多肽、重組細(xì)胞、以及它們的方法和用途。
文檔編號(hào)C07K14/705GK102083984SQ200880126883
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2008年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日
發(fā)明者H·貝克, J·卡頓 申請(qǐng)人:森托科爾奧索生物科技公司