專利名稱：一種硒化寡糖快速脫鹽、純化的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物化學領域，尤其涉及一種利用活性炭柱對硒化寡糖進行快速脫鹽和分離 的方法，該方法可用于純化化學方法制備的硒化寡糖。 技術背景
冃甜研究表明人類很多疾病的發(fā)生、發(fā)展與體內(nèi)的過氧化狀態(tài)密切相關，例如糖尿病、 腫瘤等，降低體內(nèi)的過氧化狀態(tài)是治療或緩解病癥的重要途徑之一。谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH-Px)是人體內(nèi)重要的抗氧化酶，曬是谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性中心，對其發(fā)揮 抗氧化作用具有重要作用。因此人體補硒可以提高體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性， 預防和緩解疾病的發(fā)生和發(fā)展。
目甜補硒產(chǎn)品中的無機硒(如亞硒酸鈉)具有毒性，安全性差，劑量難以控制；硒蛋O 往往存在抗原性的問題；硒多糖雖然沒有抗原性和毒性，但是由于分子量較大，難以吸收。 硒化寡糖由于沒有毒性和抗原性，分子量較小、易于吸收等特點，成為理想的補硒產(chǎn)品。但 是硒化寡糖在制備的過程中使用了大量的無機硒作為反應底物，反應產(chǎn)物中存在大量的無機 硒，必須將產(chǎn)物中的無機硒除掉，才能保證硒化寡糖的純度和安全性。目前沒有特別有效的 技術能夠在較短的時間內(nèi)針對大量的硒化寡糖進行脫鹽和純化，生產(chǎn)受到限制，本發(fā)明就是 針對化學方法制備硒化寡糖過程中脫鹽和純化的難題，利用廉價的活性炭為原料，建立硒化 寡糖快速脫鹽和純化的方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對化學法制備硒化寡糖過程中，產(chǎn)物中存在大量無機鹽和無機硒， 需要脫鹽處理，另外硒化寡糖在分子量上存在一定差異等問題，建立以活性炭柱為系統(tǒng)的脫 鹽和分離方法。
本發(fā)明的原理是經(jīng)過處理的活性炭對寡糖和多糖具有吸附作用，但是對單糖和無機鹽 類吸附作用很小，因此可以通過蒸餾水洗脫， 一次性將無機鹽和單糖除掉；活性炭對寡糖的 吸附作用與寡糖的分子量密切相關，分子量越大，吸附能力越強；活性炭的吸附性與洗脫液有關，洗脫液中有機成分越多，吸附性越差，所以可以通過改變洗脫液中有機溶劑的含量使 硒化寡糖逐一分開。
本發(fā)明的技術方案是-種硒化寡糖快速脫鹽、純化的方法，具體歩驟如下
(1) 活性炭的處理以20%的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分鐘，冷卻后備
用；
(2) 將上述處理好的活性炭粉末填入層析柱中形成活性炭柱，以70-8(TC熱蒸餾水洗 脫，直至洗脫液為中性；
(3) 將活性炭柱冷卻至室溫；
(4) 建立活性炭柱層析系統(tǒng)，該系統(tǒng)由層析柱l、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽慮瓶 口 4和抽慮瓶5組成，其中活性炭粉末2填入層析柱1中形成活性炭柱，層析柱1穿過密封 瓶塞3與抽慮瓶5相通；
(5) 將硒化寡糖溶解，緩慢的加入到活性炭柱層析系統(tǒng)中活性炭柱的頂端，此時真空 泵不工作，硒化寡糖溶液緩慢滲入活性炭，并與活性炭充分結合；
(6) 以常溫的蒸餾水為洗脫液，打開真空泵，由于粉末狀活性炭在層析柱中堆積較為 密集，液體通過活性炭柱的速度較慢，因此真空泵從抽慮瓶口處抽氣，使活性炭柱下端形成 負壓，將硒化寡糖中的無機硒、無機鹽和單糖洗脫掉，脫鹽和純化的速度通過控制層析柱下 端的負壓程度來調(diào)節(jié)；
(7) 分別以5%、 15%、 30%、 40%的乙醇溶液為洗脫液洗滌活性炭柱層析系統(tǒng)，收集 不同分子量的硒化寡糖，具體洗脫液的濃度根據(jù)硒化寡糖的性質決定，最后的洗脫液中可以 加入5%的醋酸，最后的洗脫液可以加熱至7(TC。
本發(fā)明的有益效果是簡單易行，成本較低，不僅可以脫去硒化寡糖中存在的無機硒鹽 和其它的無機鹽類，還可以通過改變洗脫液的成分，快速的將不同分子量的硒化寡糖分離丌， 寡糖的總得率在80%以上，且脫鹽和純化的速度可以靈活控制，可產(chǎn)業(yè)化，具有廣闊的應用 前景。
圖1為活性炭柱層析系統(tǒng)示意圖。圖中1、層析柱，2、活性炭粉末，3、密封瓶塞，4、抽慮瓶口， 5、抽慮瓶。
具體實施例方式
實施例1
硒化卡拉膠寡糖的脫鹽與純化
以卡拉膠、亞硒酸鈉、硫酸為原料合成硒化卡拉膠寡糖，反應產(chǎn)物中含有大量的亞硒酸 鈉、硫酸鈉等無機鹽，其中硒鹽的含量達到40%，嚴重影響硒化卡拉寡糖的品質和安全性。 按照本發(fā)明方法對合成的硒化卡拉膠寡糖進行脫鹽與純化，步驟如下-
(1) 活性炭的處理以20%的乙酸溶液浸泡，并煮沸20分鐘，冷卻后備用；
(2) 將上述處理好的活性炭粉末填入層析柱中形成活性炭柱，以78t:的熱蒸餾水洗 脫，直至洗脫液為中性；
(3) 將活性炭柱冷卻至室溫；
(4) 建立活性炭柱層析系統(tǒng)，該系統(tǒng)由層析柱l、活性炭粉末2、密封瓶塞3、抽慮瓶 口 4和抽慮瓶5組成，其中活性炭粉末2填入層析柱1中形成活性炭柱，層析柱1瓶口穿過 密封瓶塞3與抽慮瓶5相通； -
(5) 將硒化卡拉膠寡糖溶解，緩慢的加入到活性炭柱層析系統(tǒng)中活性炭柱的頂端，此 時真空泵不丁作，硒化卡拉膠寡糖溶液緩慢滲入活性炭，并與活性炭充分結合；
(6) 以2%的BaCl2作為檢測溶液，以蒸餾水為洗脫液進行洗脫，打丌真空泵，通過控 制層析柱下端的負壓程度來控制脫鹽和純化的速度，直到洗脫液與BaCl2溶液不發(fā)生沉淀反 應為止；
(7) 分別以5%、 15%、 30%、 40%的乙醇溶液洗脫，收集硒化卡拉膠寡糖。硒化卡拉膠 寡糖經(jīng)原子吸收法檢測硒元素的含量達0. 3%，硒化寡糖的的得率在80%。
權利要求
1、一種硒化寡糖快速脫鹽、純化的方法，其特征在于，該方法步驟如下(1)活性炭的處理以20％的乙酸溶液浸泡活性炭粉末，并煮沸20分鐘，冷卻后備用；(2)將上述處理好的活性炭粉末填入層析柱中形成活性炭柱，以70-80℃的熱蒸餾水洗脫，直至洗脫液為中性；(3)將活性炭柱冷卻至室溫；(4)建立活性炭柱層析系統(tǒng)，該系統(tǒng)由層析柱、活性炭粉末、密封瓶塞、抽慮瓶口和抽慮瓶組成，其中活性炭粉末填入層析柱中形成活性炭柱，層析柱穿過密封瓶塞與抽慮瓶相通；(5)將硒化寡糖溶解，緩慢的加入到活性炭柱層析系統(tǒng)中活性炭柱的頂端，此時真空泵不工作，硒化寡糖溶液緩慢滲入活性炭，并與活性炭充分結合；(6)以常溫的蒸餾水為洗脫液，打開真空泵，使活性炭柱下端形成負壓，將硒化寡糖中的無機硒、無機鹽和單糖洗脫掉，脫鹽和純化的速度通過控制層析柱下端的負壓程度來調(diào)節(jié)；(7)根據(jù)硒化寡糖的性質，用不同濃度的乙醇溶液為洗脫液洗滌活性炭柱層析系統(tǒng)，收集不同分子量的硒化寡糖。
2、根據(jù)權利要求1所述的一種硒化寡糖快速脫鹽、純化的方法，其特征在于，所述最后 的乙醇洗脫液中可以加入5°/。的醋酸，最后洗脫液可以加熱至70°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物化學領域，具體涉及一種利用活性炭柱對硒化寡糖進行快速脫鹽和分離的方法，該方法可用于純化化學方法制備的硒化寡糖。本發(fā)明是以活性炭柱作為脫鹽、純化體系，通過真空泵使層析柱的下方處于負壓狀態(tài)，在壓力的作用下洗脫液迅速通過活性炭柱，在不同洗脫劑的作用下，將硒化寡糖中的鹽分去掉并將不同分子量的硒化寡糖分離開。本發(fā)明所用設備簡單，工藝易于操作，成本較低，工作時間較短，脫鹽和分離純化效果較好，回收率達到80％以上，可產(chǎn)業(yè)化，具有廣闊的應用前景。
文檔編號C07H1/06GK101602785SQ20091001238
公開日2009年12月16日 申請日期2009年7月4日 優(yōu)先權日2009年7月4日
發(fā)明者吳海歌, 姚子昂 申請人:大連大學