專利名稱：一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)及其制備方法，以及以 表沒食子兒茶素沒食子酸酯為主要成分的藥物組合物。本發(fā)明屬于醫(yī)藥保健領(lǐng)域范疇。
背景技術(shù)：
茶多酚是從綠茶中提取的一種多酚類成分，它是由六種以上的單體組成，其中的表沒食 子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是含量最高、活性最強(qiáng)的主要活性成分。因?yàn)榫哂刑厥獾亩嗔u基 化學(xué)結(jié)構(gòu)，表沒食子兒茶素沒食子酸酯具有非常強(qiáng)的抗氧化活性，能夠保護(hù)細(xì)胞和DNA免受 損害，在抗癌和心血管疾病方面擔(dān)當(dāng)了重要的角色。研究表明，EGCG具有顯著的抗氧化，清 除體內(nèi)自由基，抗腫瘤，抗突變，抗衰老，抗炎，抗病毒等一系列生物學(xué)活性，對預(yù)防和治 療惡性腫瘤，高血脂癥，動(dòng)脈硬化，腦血栓，糖尿病，肥胖病等均有良好作用，這些作用使 EGCG具有非常廣闊的應(yīng)用前景和市場價(jià)值。
隨著人們生活水平的提高和保健意識的加強(qiáng)，人們對天然抗氧劑的認(rèn)識和需求也不斷提 高，尤其在歐美等發(fā)達(dá)國家，以茶多酚、原花青素等為代表的天然抗氧劑的市場需求越來越 大，同時(shí)對這類產(chǎn)品的質(zhì)量要求也越來越高。以茶多酚為例，目前市場上已經(jīng)逐步傾向于使 用其中結(jié)構(gòu)明確、高純度、高活性的單體成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，對其含 量要求在98%以上。
在此背景條件下，利用先進(jìn)的分離純化技術(shù)，生產(chǎn)出高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸 酯，將會(huì)具有更加明確的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
目前文獻(xiàn)報(bào)道或?qū)＠_的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)制備技術(shù)雖然很多,但絕 大多數(shù)的工藝技術(shù)都屬于實(shí)驗(yàn)室制備級別，制備量通常都在毫克至數(shù)克之間，最多也只有幾 十克的制備量，這些技術(shù)很難進(jìn)行大批量工業(yè)化生產(chǎn)，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了日益增長的市場需求。
例如在專利號為CN 1193994C的"表沒食子兒茶素沒食子酸酯單體純化方法"的發(fā)明專 利中，公開了一種高含量的表沒食子兒茶素沒食子酸酯純化方法，其工藝過程中采用了葡聚 糖凝膠LH-20進(jìn)行分離純化，雖然也制備得到了少量表沒食子兒茶素沒食子酸酯單體，但眾 所周知，葡聚糖凝膠LH-20是一種價(jià)格昂貴的分離材料，每公斤的價(jià)格為數(shù)萬元人民幣，一 般只適合用于實(shí)驗(yàn)室分離少量的對照品時(shí)才會(huì)使用，這種技術(shù)顯然也不能用于工業(yè)化生產(chǎn)。諸如此類的公開技術(shù)還有很多，如專利號為CN 1164583C的"表沒食子兒茶素沒食子酸酯的 分離制備工藝"的專利中，采用高效液相色譜(HPLC)制備柱分離，選用的分離材料是昂貴 的C,8，同樣屬于實(shí)驗(yàn)室分離范疇，制備量通常也只是毫克至數(shù)克級別，無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。
以上例舉的技術(shù)屬于缺乏實(shí)用性的情況，此外還有很多文獻(xiàn)和專利公開的技術(shù)雖然具備 一定實(shí)用性，但工藝過程復(fù)雜、生產(chǎn)成本高，相比較缺乏先進(jìn)性。例如在專利號為CN 1733753A 的"一種表沒食子兒茶素沒食子酸酯單體的純化方法"的發(fā)明專利中，采用了微孔濾膜過濾 及冷凍干燥等方法進(jìn)行表沒食子兒茶素沒食子酸酯單體的制備，生產(chǎn)成本顯然會(huì)非常高。另 外還有采用鋁鹽、鈣鹽、鎂鹽等無機(jī)鹽進(jìn)行絡(luò)合沉淀的方法進(jìn)行表沒食子兒茶素沒食子酸酯 單體的制備，不但在生產(chǎn)過程中不可避免會(huì)帶來一定程度的污染，而且生產(chǎn)成本也相對較高。 在其他一些文獻(xiàn)或?qū)＠?，還公開了采用大孔吸附樹脂層析技術(shù)進(jìn)行表沒食子兒茶素沒食子 酸酯制備的方法，屬于常規(guī)技術(shù)，得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量大都在90%左右。
本發(fā)明提供了一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，本發(fā)明的技術(shù)核心 是采用了超載吸附和串聯(lián)式層析的方法，將表沒食子兒茶素沒食子酸酯與茶多酚中的其它成 分在一定條件下進(jìn)行超載分離后，通過串聯(lián)層析柱進(jìn)行二次吸附，再通過分離解吸，使表沒 食子兒茶素沒食子酸酯的含量及得率大大提高，從而得到一種純度高、穩(wěn)定性好、成本低的 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。
本發(fā)明另一特點(diǎn)是具有良好的實(shí)用性，尤其適合工業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)過多批生產(chǎn)驗(yàn)證，每批 產(chǎn)量可達(dá)數(shù)十至數(shù)百公斤。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服傳統(tǒng)工藝的不足，提供了一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
本發(fā)明的目的還在于通過提取、分離、結(jié)晶等手段提供一種高純度的表沒食子兒茶素沒 食子酸酯的制備方法。
本發(fā)明技術(shù)特點(diǎn)是利用表沒食子兒茶素沒食子酸酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)的特殊性及其吸附層析行 為與茶多酚中其他成分具有不同特征的性質(zhì)，將其在層析柱上先經(jīng)過超載吸附后充分去除其 它類成分雜質(zhì)，再通過串聯(lián)層析方法將其吸附，并通過適當(dāng)?shù)娜軇┫疵撌蛊渑c類似結(jié)構(gòu)成分 分離，再通過結(jié)晶的方法，得到高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。
本發(fā)明的另一技術(shù)特點(diǎn)是工藝路線簡潔易行，尤其適合大批量工業(yè)化生產(chǎn)，克服了傳統(tǒng)工藝產(chǎn)量不足的缺點(diǎn)，具有很好的實(shí)用性。
本發(fā)明的優(yōu)勢在于，按照本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)出來的表沒食子兒茶素沒食子酸酯 純度高，含量均在98.0 99.9%之間，平均含量大于99.0%，不含咖啡因。
本發(fā)明的另一優(yōu)勢在于，按照本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)表沒食子兒茶素沒食子酸酯時(shí)， 樣品得率高，損失量很小，不但保證了天然茶多酚資源的充分合理應(yīng)用，同時(shí)生產(chǎn)成本低， 具有很好的市場優(yōu)勢。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
取一定含量的茶多酚粗品，加適量溶劑提取，過濾，棄去不溶性殘?jiān)瑸V液濃縮至一定 體積后，加適量有機(jī)溶劑進(jìn)行多次液-液萃??；棄去下層雜質(zhì)，上層有機(jī)相合并后，回收有機(jī) 溶劑，得到初步純化后的茶多酚稠膏稠膏加入適量溶劑溶解，得到茶多酚樣品溶液。
將上述茶多酚樣品溶液過裝有適當(dāng)材料的串聯(lián)式層析柱(前柱為除雜柱，用于吸附去除 雜質(zhì)，后柱為分離柱，用于分離精制)；樣品溶液通過前柱后，加適量溶劑洗脫，使表沒食子 兒茶素沒食子酸酯(EGCG)得到充分解吸，同時(shí)吸附去除其它類雜質(zhì)，收集合并洗脫液；前柱 的洗脫液再過后柱，使表沒食子兒茶素沒食子酸酯得到充分吸附，同時(shí)洗脫去除極性雜質(zhì)。 后柱吸附充分后，再加適量溶劑進(jìn)行洗脫，使富集的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)從后 柱解吸下來，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液減壓濃縮至稠膏后，加入適量結(jié)晶溶劑溶解，放 冷，加入少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶種，靜置，結(jié)晶，過濾，濾餅加少量純化 水洗滌，干燥，即得高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。
根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實(shí)施方案，制備高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的方 法包括如下步驟-
(1) 取一定含量的茶多酚粗品，加適量純化水作溶劑進(jìn)行溫浸攪拌提取，提取液過濾， 殘?jiān)鼦壢ィ?br> (2) 提取液減壓濃縮至一定體積后，加一定體積乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取，合并乙酸乙 酯層并減壓回收至稠膏狀，加入適量純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
(3) 將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有聚酰胺(前柱)和大孔吸附樹脂(后柱)的串聯(lián) 式層析柱，加純化水充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱加一定濃度的乙醇進(jìn)行解吸附洗脫，得到 表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。(4)將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液減壓濃縮至稠膏狀后，加入適量結(jié)晶溶劑溶 解，放冷，加入少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶種，靜置，在一定溫度下結(jié)晶24小 時(shí)，過濾，濾餅加少量純化水洗滌，干燥，即得高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
上述步驟(1)中，提取溶劑可改用10 50%的甲醇、乙醇或丙酮，從生產(chǎn)成本角度考慮， 優(yōu)先使用水作溶劑進(jìn)行提取；提取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次；每次溶劑量為5 10倍量(M: V)，優(yōu)選8倍量；溫度為30 70。C，優(yōu)選50。C。
上述步驟(2)中，所用的萃取溶劑可以為乙酸乙酯、正丁醇和異丙醇，優(yōu)選乙酸乙酯； 萃取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次；萃取溶劑用量為初始原料茶多酚粗品的2 10倍量(M:V)， 優(yōu)選6倍量。
上述步驟(3)中，層析柱前柱所用的填料可以為聚酰胺、大孔吸附樹脂，優(yōu)選聚酰胺； 聚酰胺粒度為10 300目，優(yōu)選100 200目；層析柱后柱大孔吸附樹脂的型號可以為HPD-IOO、 300、 400、 500、 600，或DIOI、 D1300，優(yōu)選HPD-100;純化水的洗脫用量為3 15倍前柱柱
體積(V: V)，優(yōu)選7倍柱體積；乙醇的洗脫用量為2 10倍后柱柱體積(V: V)，優(yōu)選4倍
柱體積；乙醇濃度為10 50%，優(yōu)選30%。綜合對上樣量、吸附率、解吸速度、洗脫率、最終 成品收率等各方面因素的考察，層析柱按常規(guī)操作方法裝填，裝柱量不少于柱高的2/3，最 好選用直徑與柱高比在l: 4 1: 6的柱；洗脫速度優(yōu)選為1000 2000毫升/分鐘。
上述步驟(4)中，表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液可在55 75。C下減壓濃縮，優(yōu)選65 °C;加入的溶劑可以為純化水、甲醇、乙醇、丙酮，優(yōu)選為純化水；結(jié)晶溫度為0 30'C, 優(yōu)選0 2(TC，進(jìn)一步優(yōu)選為2 10。C;結(jié)晶液中加入的表沒食子兒茶素沒食子酸酯晶種純度 大于99%;結(jié)晶時(shí)間為6 48小時(shí)，優(yōu)選為24小時(shí)；結(jié)晶干燥溫度為40 80°C，優(yōu)選6(TC。 根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，得到的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料可加適當(dāng)?shù)妮o料 制成一定形式的藥物制劑，包括片劑、膠囊、粉針或大、小針劑。
本發(fā)明通過科學(xué)可行的方法從茶多酚中經(jīng)提取、分離純化、結(jié)晶等一系列步驟，特別是 串聯(lián)式層析這一關(guān)鍵步驟，制得表沒食子兒茶素沒食子酸酯，含量大于98%，符合國家藥品 監(jiān)督管理局《新藥審批辦法》規(guī)定的中藥及化藥一類的原料標(biāo)準(zhǔn)，并可進(jìn)一步將本品制成各 種可用的制劑。
本發(fā)明提供了一種含量高、成分明確、質(zhì)量可控、藥效確切、副作用小的表沒食子兒茶 素沒食子酸酯及其制備方法，該原料在抗氧化、抗病毒、抑菌、心腦血管疾病及抗腫瘤等方面效果明顯。本發(fā)明的制備工藝已經(jīng)通過多批生產(chǎn)驗(yàn)證，證明其重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，原料 的得率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例中，所用的提取用水為純化水，所用乙醇為藥用級，茶多酚粗品為市售綠茶 提取物，其中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為10 60%的粗品均可適用于本發(fā)明提供的工 藝；樣品中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量采用高效液相色譜法(HPLC)測定。
下列實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。 實(shí)施例一
取茶多酚粗品(EGCG含量為40.4%) 10kg，加100L純化水于45。C溫浸攪拌提取2次，
每次0.5小時(shí)，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼦壢ィ?br> 提取液于6(TC減壓濃縮至50L后，加50L乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯
層并于6(TC減壓回收至稠膏狀，加入50L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有100 200目聚酰胺(前柱)和HPD-100大孔吸附樹脂
(后柱)的串聯(lián)式層析柱，加純化水100L充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱(HPD-IOO大孔吸附
樹脂柱)加20《的乙醇100L進(jìn)行解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液于55。C減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水5L溶 解，放冷至25'C，加入約100毫克含量為99.6%的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶 種，靜置，在25。C下結(jié)晶24小時(shí)，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于55t:下減壓干燥， 得表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料3. lkg。
經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為99. 2%。
實(shí)施例二
取茶多酚粗品(EGCG含量為45. 1%) 10kg，加50L乙醇(濃度10%)于45。C溫浸攪拌提
取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼦壢ィ?br> 提取液于55。C減壓濃縮至50L后，加50L乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取3次，合并乙酸乙酯
層并于5(TC減壓回收至稠膏狀，加入100L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有30 100目聚酰胺(前柱)和D101大孔吸附樹脂(后柱)的串聯(lián)式層析柱，加純化水80L充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱(D101大孔吸附樹脂柱) 加30y。的乙醇70L進(jìn)行解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液于6(TC減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水6L溶 解，放冷至25°C，加入約50毫克含量為99. 6%的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶種， 靜置，在1(TC下結(jié)晶30小時(shí)，過濾，濾餅加1000mL純化水洗滌，于5(TC下減壓干燥，得表 沒食子兒茶素沒食子酸酯原料3. 4kg。
經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為99.6%。
實(shí)施例三
取茶多酚粗品(EGCG含量為35. 4%) 50kg，加300L純化水于4(TC溫浸攪拌提取2次，
每次1小時(shí)，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼦壢ィ?br> 提取液于65。C減壓濃縮至300L后，加300L乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取2次，合并乙酸乙
酯層并于5(TC減壓回收至稠膏狀，加入600L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有型號為HPD-100大孔吸附樹脂(前柱)和D101大孔吸
附樹脂(后柱)的串聯(lián)式層析柱，加純化水500L充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱(D101大孔
吸附樹脂柱)加25y。的乙醇400L進(jìn)行解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表沒食子兒茶素沒食子
酸酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液于55'C減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水15L溶 解，放冷至25'C，加入約500毫克含量為99.6%的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶 種，靜置，在4'C下結(jié)晶48小時(shí)，過濾，濾餅加2500mL純化水洗滌，于60'C下減壓干燥， 得表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料12. 5kg。
經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為99.5%。
實(shí)施例四
取茶多酚粗品(EGCG含量為50.2%) 100kg，加800L純化水于5(TC溫浸攪拌提取2次，
每次l小時(shí)，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼦壢ィ?br> 提取液于60。C減壓濃縮至500L后，加500L乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取2次，合并乙酸乙
酯層并于6(TC減壓回收至稠膏狀，加入500L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有100 200目聚酰胺(前柱)和HPD-100大孔吸附樹脂(后柱)的串聯(lián)式層析柱，加純化水1000L充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱(HPD-100大孔吸 附樹脂柱)加25免的乙醇100L進(jìn)行解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表沒食子兒茶素沒食子酸 酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液于6(TC減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水25L溶 解，放冷至20'C，加入約1克含量為99.9%的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶種， 靜置，在4'C下結(jié)晶24小時(shí)，過濾，濾餅加2L純化水洗滌，于55"C下減壓干燥，得表沒食 子兒茶素沒食子酸酯原料36. 2kg。
經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為99.9%。
實(shí)施例五
取茶多酚粗品(EGCG含量為20.2免)10kg，加50L丙酮(濃度50%)于4(TC溫浸攪拌提
取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，過濾，殘?jiān)鼦壢ィ?br> 提取液于5(TC減壓濃縮至20L后，加20L乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取3次，合并乙酸乙酯
層并于5(TC減壓回收至稠膏狀，加入50L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液。
)(爭上述茶多酚樣品溶液過分別裝有100 200目聚酰胺(前柱)和D1300大孔吸附樹脂(后
柱)的串聯(lián)式層析柱，加純化水100L充分洗脫后，解除串聯(lián)，后柱(D1300大孔吸附樹脂柱)
加3(F。的乙醇80L進(jìn)行解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。
將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液于5(TC減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水2L溶 解，放冷至25'C，加入約50毫克含量為99. 9%的高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶種， 靜置，在10'C下結(jié)晶24小時(shí)，過濾，濾餅加500mL純化水洗滌，于55。C下減壓干燥，得表 沒食子兒茶素沒食子酸酯原料1. 4kg。
經(jīng)高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為99. 7%。
實(shí)施例六
表沒食子兒茶素沒食子酸酯注射液的制備
取實(shí)施例四中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料2.0g，加適量注射用7JC溶解后，再加入 活性碳0. 02g，加熱煮沸20分鐘，濾過，加水至900mL，用0. 1%的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至6. 0， 靜置2h，濾過，濾液加注射用水至1000mL，灌封(10mL/支，2 mg/mL)，滅菌，即得表沒食 子兒茶素沒食子酸酯注射液。用法用量為每日l次，每次20 40mg，靜脈注射或加入生理鹽水或5 10%的葡萄糖溶液中靜脈滴注。 實(shí)施例七
表沒食子兒茶素沒食子酸酯膠囊的制備
取實(shí)施例四中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料50. 0g，淀粉50. 0g, e -環(huán)糊精100. 0g， 混勻，制粒，過60目篩，干燥后裝成1000粒膠囊，即得表沒食子兒茶素沒食子酸酯膠囊。 用法用量為口服，每次1 2粒，每日3次。
實(shí)施例八
表沒食子兒茶素沒食子酸酯片的制備
取實(shí)施例四中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯原料50.0g，淀粉50.0g, e-環(huán)糊精98.0g， 微粉硅膠1.0g，硬脂酸鎂1.0g，混勻，制粒，過40目篩，干燥后壓成1000片，即得表沒食 子兒茶素沒食子酸酯片。用法用量為口服，每次1 2片，每日3次。
權(quán)利要求
1.一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其特征在于表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量為98.0～99.9％。
2. —種表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，由以下步驟組成 步驟(1):取一定含量的茶多酚粗品，加入一定溶媒提取，合并提取液。步驟(2):取提取液，濃縮至一定體積，加入一定體積的有機(jī)溶劑進(jìn)行多次液一液萃取， 使表沒食子兒茶素沒食子酸酯充分轉(zhuǎn)移至有機(jī)層中，合并有機(jī)層，濃縮至稠膏狀，加適量溶 劑溶解，得茶多酚樣品溶液。步驟(3):將上述茶多酚樣品溶液過分別裝有適當(dāng)填料的前柱和后柱所組成的串聯(lián)式層 析柱，加適量溶劑充分洗脫；解除串聯(lián)，后柱加一定濃度的乙醇溶液進(jìn)行解吸附洗脫，收集 洗脫液，得表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液。步驟(4):將上述表沒食子兒茶素沒食子酸酯溶液減壓濃縮至稠膏后，加入適量結(jié)晶溶 劑溶解，放冷，加入少量高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為晶種，靜置，在一定溫度下 結(jié)晶，過濾，濾餅加少量純化水洗滌，干燥，即得高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(1 ) 中的提取溶媒為水、乙醇、甲醇、丙酮中的一種或其中任意幾種的任意比例的混合溶媒，優(yōu) 選純化水；提取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次；每次溶劑量為3 15倍量(M: V),優(yōu)選8倍量； 提取溫度為30 7(TC，優(yōu)選50。C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟 (2)中樣品溶液濃縮至體積為起始原料茶多酚粗品的1 20倍量(M: V)，優(yōu)選2 10倍量，最優(yōu)選為6倍量。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(2) 中萃取所用的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇、異丙醇、氯仿、石油醚，優(yōu)選為乙酸乙酯； 萃取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次；萃取溶劑用量為起始原料茶多酚粗品的2 10倍量(M: V)， 優(yōu)選6倍量。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(3) 中所用的串聯(lián)式層析柱前柱的填料為聚酰胺、大孔吸附樹脂、氧化鋁。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟 (3)中所用的串聯(lián)式層析柱后柱的填料為大孔吸附樹脂、聚酰胺。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(3) 中串聯(lián)式層析柱所用的洗脫溶劑可以為水、甲醇、乙醇中的一種或其中任意幾種的任意 比例的混合溶媒，優(yōu)選為純化水。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(3) 中串聯(lián)式層析柱解除串聯(lián)后，后柱解吸附洗脫所用的乙醇溶液濃度為10 50%,優(yōu)選為30% 乙醇。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟(4) 中加入的結(jié)晶溶劑為純化水、甲醇、乙醇、丙酮，優(yōu)選為純化水。
11. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟 (4)中結(jié)晶的時(shí)間為6 48小時(shí)，優(yōu)選為18 24小時(shí)。
12. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟 (4)中結(jié)晶溫度為0 3(TC，優(yōu)選為0 2(TC，進(jìn)一步優(yōu)選為2 1(TC。
13. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備方法，其特征在于其步驟 (4)中結(jié)晶樣品的干燥溫度為40 8(TC，優(yōu)選60'C。
14. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的串聯(lián)式層析柱前柱填料為聚酰胺。
15. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的串聯(lián)式層析柱后柱填料為大孔吸附樹脂。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的層析柱前柱填料聚酰胺的粒度為10 300目，優(yōu)選100 200百。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的層析柱后柱填料大孔吸附樹脂型號為HPD-IOO、 300、 400、 500、 600，或DIOI、 D1300，優(yōu)選HPD-100。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其特征在于可以加入 藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑或注射液，用于醫(yī)藥或保健領(lǐng)域。
全文摘要
本發(fā)明提供一種高純度的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)及其制備方法，其中表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)含量為98.0％～99.9％，其制備方法主要由提取、萃取、層析分離、結(jié)晶工序組成。本發(fā)明的制備工藝重現(xiàn)性好，所得到的表沒食子兒茶素沒食子酸酯的含量高，成本低，質(zhì)量穩(wěn)定可控，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D311/62GK101643466SQ20091002683
公開日2010年2月10日 申請日期2009年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月2日
發(fā)明者佳 劉, 浩 季 申請人:江蘇天晟藥業(yè)有限公司