專利名稱：一種新型哌嗪基噠嗪類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型哌嗪基噠嗪類化合物、其制備方法、包含該類物質(zhì)的組合物， 以及該類化合物作為神經(jīng)炎癥抑制劑治療或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病，如老年癡呆癥、帕金森 氏病、認(rèn)知障礙等的用途，或治療精神病、癲癇、驚厥或中風(fēng)等疾病的用途。
背景技術(shù)：
老年癡呆癥也稱作阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease，AD)，是一種以進(jìn)行性 認(rèn)知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。該癥的臨床表現(xiàn)為近期記憶功 能障礙，隨后為持續(xù)性智能減退、判斷推理能力喪失、失語(yǔ)、運(yùn)動(dòng)障礙等。其病理特征為大量 的老年斑(senile plaques, SPs)和神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrilary tangles, NFTs)。目 前市面上的藥物主要有兩種膽堿脂酶抑制劑(AChEI)和NMDA受體拮抗劑，前者如他克林 (tacrine)、多奈哌齊(don 印 ezil)、利斯的明(rivastigmine)和石杉?jí)A甲(Huperzine A)。 其中，石杉?jí)A甲是我國(guó)中科院藥物研究所自主研發(fā)的創(chuàng)新藥物，是由石杉屬植物千層塔中 分離到的一種新生物堿；NMDA受體拮抗劑如美金剛胺(memantin^Namenda)是一種用于治 療中、重度老年癡呆癥的藥物，于2003年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市。目前發(fā)現(xiàn)用于抗老年癡呆藥物的作用機(jī)理主要包括通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶的活 性，減少乙酰膽堿的降解，提高腦內(nèi)膽堿能水平而建立的乙酰膽堿酯酶抑制劑；通過(guò)抑制 NMDA受體表面或離子通道內(nèi)部的各個(gè)作用位點(diǎn)，降低NMDA受體的興奮效應(yīng)，抑制其活性而 建立起來(lái)的NMDA受體拮抗劑。近年來(lái)出現(xiàn)一種比較流行和公認(rèn)的作用機(jī)制為“ 0淀粉樣蛋 白學(xué)說(shuō)(amyloid-0 hypothesis，A 0 ) ”，該機(jī)制認(rèn)為APP蛋白前體被水解斷裂后形成不溶 性的0淀粉樣蛋白積聚構(gòu)成老年斑(amyloid plaques)，由此引發(fā)了一系列的病理變化， 包括神經(jīng)炎癥，神經(jīng)細(xì)胞缺失和死亡等，最終導(dǎo)致老年癡呆癥。根據(jù)該機(jī)制的流程，通過(guò)阻 斷循環(huán)中各個(gè)步驟以改變疾病的進(jìn)程，就可以達(dá)到減輕或治療的目的。目前根據(jù)這種思路 開(kāi)發(fā)的各種新藥如beta-水解酶抑制劑、gama-水解酶抑制劑、疫苗、tau磷酸化的抑制劑、 抗神經(jīng)炎癥等，這些藥物絕大多數(shù)是基于3淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)。阻斷神經(jīng)炎癥已被證實(shí)可以有效地阻止老年癡呆癥的惡性循環(huán)，這一實(shí)驗(yàn)已在細(xì) 胞和小鼠模型上得到驗(yàn)證，相關(guān)的化合物已進(jìn)入臨床研究中。如WenhuiHu等人的文章中 (參考 Bioorganic&Medicinal Chemistry Lettersl7 (2007) 414-418)公開(kāi)了 minozac 和下 列式II化合物的活性數(shù)據(jù)，二者因?yàn)轱@示出良好的活性，目前已經(jīng)進(jìn)入臨床研究階段。本發(fā) 明提供了與這兩種化合物結(jié)構(gòu)不同，但效果相近或者更好的抗老年癡呆的化合物。
0005]

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面提供一種式I的化合物或其鹽 其中，R1選自低級(jí)烷基或雜芳基；R3、R4分別選自氫或低級(jí)烷基，或R3和R4結(jié)合 起來(lái)形成五元或六元碳環(huán)；R2選自取代或未取代的雜芳基，取代基選自低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧 基；η選自0或1。其中，R1優(yōu)選甲基或嘧啶基；R3、R4優(yōu)選氫或甲基，或者R3和R4結(jié)合在一起五元或六元芳香碳環(huán)；R3、R4進(jìn)一步 優(yōu)選氫或甲基或R3和R4結(jié)合在一起形成苯環(huán)；R2優(yōu)選取代或未取代的苯并稠和的雜芳基或嘧啶，進(jìn)一步優(yōu)選取代或未取代的含 氮或硫雜原子的苯并稠和雜芳基或嘧啶基，進(jìn)一步優(yōu)選為取代或未取代的苯并噻吩、苯并 吡咯、喹啉、嘧啶或2，4_ 二甲基嘧啶；η 優(yōu)選 0。本發(fā)明提供的式I化合物優(yōu)選為=R1選自甲基或嘧啶基，R3、R4分別選自氫或甲 基，或者R3、R4結(jié)合在一起形成苯環(huán)，R2選自苯并噻吩、苯并吡咯、喹啉、嘧啶或2，4- 二甲基 嘧啶，η為0。本發(fā)明所述的“低級(jí)烷基”是指由1-4個(gè)碳原子組成的直鏈或支鏈的飽和烷基，具 體的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基等。本發(fā)明所述的“雜芳基”是指有5-10個(gè)原子的單環(huán)或雙環(huán)芳族基團(tuán)，其中至少含 有1個(gè)選自Ν、0或S的雜原子，其余的原子是C，此外，還有完全共軛的π電子體系。雜芳 基的例子包括但不限于苯并噻吩、苯并吡咯、異喹啉、喹啉、嘧啶、噠嗪、吲哚、喹唑啉、吡咯、 噻吩、噴唑、批唑、吡啶、呋喃、咪唑、吡嗪、噻唑、苯并噻唑、二氮雜萘等。雜芳基可以是取代 的或未取代的。本發(fā)明提供的上述雜環(huán)并嘧啶酮類化合物可以以其鹽、水合物的形式存在，它們 在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物，例如，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，按照本領(lǐng)域熟知的工藝，將本發(fā)明 化合物轉(zhuǎn)化為藥學(xué)上可接受的鹽的形式，并且以鹽形式使用它們。當(dāng)本發(fā)明化合物具備游離堿的形式時(shí)，使化合物的游離堿形式與藥學(xué)上可接受的 無(wú)機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)，可以制備本發(fā)明化合物的酸加成鹽，這些鹽包括但不限于鹽酸鹽、氧 溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、乙磺酸鹽、甲苯磺酸鹽和苯磺酸鹽、乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽和水楊酸鹽、丙二酸鹽、己二 酸鹽、己酸鹽、精氨酸鹽、富馬酸鹽、煙酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、草酸鹽等。當(dāng)本發(fā)明化合物具備游離酸的形式時(shí)，使其游離酸形式與藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或 有機(jī)堿反應(yīng)可以制備本發(fā)明化合物的堿加成鹽，這類鹽包括但不限于鋰、鈉、鉀、鋇、鈣、 鎂、鋁、鐵、亞鐵、銅、鋅鹽，或與嗎啉、二乙胺、三乙胺、異丙胺、三甲胺、賴氨酸或組胺酸組成 的鹽。本發(fā)明提供的化合物或其鹽具體舉例如下，但不限于下列化合物或其鹽 本發(fā)明再一方面提供式I化合物的制備方法，包括如下步驟
其中，R1、! 2、! 3、! 4、!！同上述式I中的定義相同。所使用的原料式e的化合物可以 采用本領(lǐng)域熟知的方法制備得到，比如，可以通過(guò)下列反應(yīng)步驟得到式c的化合物可以從市場(chǎng)上買到，或者采用采用本領(lǐng)域中熟知的方法制備得到， 比如，可以通過(guò)下列反應(yīng)步驟得到
rSt^O NH2NH2 RS| NH POCI3 R3.II 本發(fā)明提供的式I化合物具體地可以采用下列方法來(lái)制備
式I其中，R1、R2、R3、R4、η同上述式I中的定義相同本發(fā)明提供的化合物的具體合成方法如下1)將摩爾比為1 1 1.5的式a化合物與水合胼溶解在極性有機(jī)溶劑中，加熱 至80 120°C，反應(yīng)2 6小時(shí)，然后緩慢冷卻，減壓濃縮，所得到的殘余物加水?dāng)嚢瑁龀?白色固體，過(guò)濾、水洗、干燥，得到式b化合物，該化合物不需要進(jìn)一步純化，直接用于下一 步反應(yīng)。2)將摩爾比為1 1. 5 3的式b化合物與三氯氧磷混和，加熱至100 150°C， 反應(yīng)2 4小時(shí)，反應(yīng)完成后，冷至室溫，緩慢倒入碎冰中并劇烈攪拌0. 5 1小時(shí)，然后萃 取，優(yōu)選用二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相，干燥、濃縮，殘余物經(jīng)柱層析分離，得到式c化合 物。3)將摩爾比為1 1.5 4的式c化合物與冰醋酸混和，加熱回流2 6小時(shí)，反 應(yīng)完成后，減壓濃縮，殘余物處理得到式d-Ι和式d-2的化合物，優(yōu)選加水處理，乙酸乙酯萃 取3次，合并有機(jī)層，干燥、過(guò)濾、濾液濃縮，經(jīng)柱層析分離得單一化合物。4)將摩爾比為1.5 2 1的三氟甲磺酸酐冰浴下滴入到式d-Ι化合物的二氯甲 烷溶液中并保溫反應(yīng)2 6小時(shí)，通氮?dú)獗Ｗo(hù)。反應(yīng)完成后，處理得到式e化合物，優(yōu)選用 水洗3次，有機(jī)相干燥、濃縮，殘余物經(jīng)柱層析分離。5)將摩爾比為1 1. 5 3的式e化合物、式f化合物和適量干燥的N，N- 二甲 基甲酰胺混和，室溫?cái)嚢? 6小時(shí)，反應(yīng)完成后處理得到式g的化合物，優(yōu)選將反應(yīng)物直接加入到水中，濾出析出的固體、干燥。6)將摩爾比為1 1 4 0. 03 0. 08的式g的化合物、式h的雜芳基硼酸、 無(wú)水碳酸鉀和三苯基磷化鈀混和于適量的乙二醇二甲醚中，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，100 150°C反應(yīng) 16 28小時(shí)，反應(yīng)完成后處理得到式I的化合物，優(yōu)選將反應(yīng)物冷至室溫，硅藻土過(guò)濾，濾 液濃縮，殘余物經(jīng)柱層析分離。上述制備方法中，步驟1)中所述的極性有機(jī)溶劑包括醇類溶劑等，所述醇類溶劑 包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙二醇、丁醇、叔丁醇等本領(lǐng)域常用的醇類溶劑；其 中，式a化合物與水合胼的摩爾比優(yōu)選1 1.2;反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選3小時(shí)；反應(yīng)溫度優(yōu)選80°C;步驟2)中式b化合物與三氯氧磷的摩爾比優(yōu)選1 2. 1 ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選4小時(shí)； 反應(yīng)溫度優(yōu)選140°C ；步驟3)中式c化合物與冰醋酸的摩爾比優(yōu)選1:3，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選3小時(shí)；步驟4)中式d-1化合物與三氟甲磺酸酐的摩爾比優(yōu)選1 2 ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選3小 時(shí)；反應(yīng)溫度優(yōu)選0°c ；步驟5)中式e化合物與式f化合物的摩爾比優(yōu)選1 2. 5 ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選5小時(shí)；步驟6)中式g的化合物、式h的雜芳基硼酸、無(wú)水碳酸鉀和三苯基磷化鈀摩爾比 優(yōu)選1 1 3 0.05 ；反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選24小時(shí)；反應(yīng)溫度優(yōu)選120°C。本發(fā)明再一方面提供所述的式I化合物治療和/或預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)疾病的用途，所 述的神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括神經(jīng)退行性疾病、精神病、癲癇、驚厥以及中風(fēng)等疾病，所述的神經(jīng) 退行性疾病包括但不限于老年癡呆癥、帕金森氏病或認(rèn)知障礙等疾病。本發(fā)明再一方面提供一種治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物組合物，包括治療有效量的式 I所述的化合物或其鹽，以及合適的藥用輔料。本發(fā)明所述的組合物可以是液體、半液體或固體形式，按照適合于所用的給藥途 徑的方式配制。本發(fā)明所述的組合物可以按照下列給藥方式給藥口服、腸胃外、腹膜內(nèi)、靜 脈內(nèi)、透皮、舌下、肌內(nèi)、直腸、口腔、鼻內(nèi)、脂質(zhì)體等方式?？诜M合物可以是固體、凝膠或液體。固體制劑的實(shí)例包括但不限于片劑、膠囊 劑、顆粒劑和散裝粉劑。這些制劑可以選擇地含有粘合劑、稀釋劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、 甜味劑和矯味劑等。粘合劑的實(shí)例包括但不限于微晶纖維素、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明 膠溶液、蔗糖和淀粉糊；潤(rùn)滑劑的實(shí)例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂 酸；稀釋劑的實(shí)例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、磷酸二鈣；助流劑的實(shí)例包括 但不限于二氧化硅；崩解劑的實(shí)例包括但不限于交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、淀粉羥乙酸鈉、藻 酸、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、甲基纖維素、瓊脂和羧甲基纖維素。以腸胃外給予本發(fā)明組合物，一般以注射為主，包括皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射。注 射劑可以被制成任何常規(guī)形式，如液體溶液或懸液、適合于在注射之前溶解或懸浮在液體 中的固體形式或者乳劑?？捎糜诒景l(fā)明注射劑的藥學(xué)上可接收的載體的實(shí)例包括但不限于 水性載體、非水性載體、抗微生物劑、等滲劑、緩沖劑、抗氧劑、懸浮與分散劑、乳化劑、螯合 劑和其它藥學(xué)上可接受的物質(zhì)。水性載體的實(shí)例包括氯化鈉注射液、林格式注射液、等滲葡 萄糖注射液、無(wú)菌水注射液、葡萄糖與乳酸化林格氏注射液；非水性載體的實(shí)例包括植物來(lái) 源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油；抗微生物劑的實(shí)例包括間甲酚、芐醇、氯丁 醇、苯扎氯銨等；等滲劑的實(shí)例包括氯化鈉和葡萄糖；緩沖劑包括磷酸鹽和檸檬酸鹽。
本發(fā)明組合物還可以制備成無(wú)菌的凍干粉針劑，將化合物溶于磷酸鈉緩沖溶液， 其中含有葡萄糖或其他適合的賦形劑，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)條件下將溶液無(wú) 菌過(guò)濾，繼之以冷凍干燥，得到所需的制劑。本發(fā)明提供的上述哌嗪基噠嗪類化合物制備工藝簡(jiǎn)單，原料易得，適合工業(yè)化大 規(guī)模生產(chǎn)，并且經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明化合物具有高效抑制BV2分泌IL-Ιβ的作用，效果 強(qiáng)于陽(yáng)性藥物，同時(shí)本發(fā)明化合物對(duì)C6分泌IL-I β沒(méi)有抑制作用，表明本化物安全性高。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供的化合物可以通過(guò)多種制備方法來(lái)合成，實(shí)施例中僅提供了合成這些 化合物的代表性方法。這里要說(shuō)明的是，不管以何種方式開(kāi)發(fā)的本發(fā)明化合物的游離酸和 /或堿形式，還是鹽的形式，均屬于本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施例的目的是進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明 內(nèi)容但不意味著對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。本發(fā)明具體實(shí)施例中使用的原料、反應(yīng)試劑等若無(wú)特 殊說(shuō)明均為市售產(chǎn)品。實(shí)施例13- (4-嘧啶基哌嗪)-5-甲基-6-(苯并噻吩_2_基)噠嗪(化合物1)的 合成路線 步驟一化合物1-2的合成將50g 3-甲基呋喃-2，5- 二酮、33g 80%水合胼溶于300ml無(wú)水乙醇中，加熱回 流4小時(shí)，反應(yīng)完畢，冷至室溫，減壓除去溶劑，殘余物加200ml水?dāng)嚢?，抽濾、水洗、干燥得 37g白色固體化合物1-2，收率74%，MS :127(M+H)+。步驟二，化合物1-3的合成將15g上步驟中制得的化合物1-2和56g三氯氧磷混和，加熱回流3小時(shí)，反應(yīng)完 畢，冷至室溫，把反應(yīng)液緩慢倒入碎冰中攪拌0. 5小時(shí)，乙酸乙酯萃取(30ml X 3)，合并有機(jī) 層，用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾、濃縮，油狀物經(jīng)柱層析分離，得到7. Ig淡黃色晶體，為化合物 1-3，收率 44%, MS :163(M+H)+。步驟三，化合物1-4-1的合成將650mg上步驟中制得的化合物1_3與冰醋酸混合，加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)完成 后，減壓濃縮，殘余物加飽和碳酸氫鈉溶液處理，乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，干燥、過(guò) 濾、濾液濃縮，得0. 3g化合物 1-4-1，收率52. 08%，MS :145. 0 (M+H)+，1H NMR(MeOD,400MHz) δ 7. 37 (d, 1Η, J = 1·2Ηζ)，2· 16(d，3H，J = 1. 2Ηζ)；得 0· 2g 化合物 1-4-2，收率 34. 72%， MS 145. 2 (M+H) +，1H NMR (MeOD，400MHz) δ 6. 87 (d, 1H, J= 1. 2Hz)，2. 28 (d, 3H, J = O. 8Hz)。步驟四，化合物1-5的合成將Ig化合物1-4-1溶解在二氯甲烷中，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，冰浴冷卻，緩慢滴入2. 92g三 氟甲磺酸酐，保溫反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)完成后，水洗3次，有機(jī)相干燥、濃縮，殘余物經(jīng)柱層析 分離，得到 1.5g 化合物 1-5，收率 78. 94%, MS 274. 9 (M-H)步驟五，化合物1-6的合成將22. 6g化合物1-5溶于干燥的DMF中，加入33g嘧啶哌嗪，室溫?cái)嚢?小時(shí)。反 應(yīng)完成后，倒入冰水中，攪拌，析出的沉淀，抽濾，干燥得到17g化合物1-6，收率85. 99%, MS 291. 1(Μ+Η)+/Η NMR (CDCl3,400MHz) δ 8. 35 8. 34(d，2H，J = 4. 8Hz)，7. 21 (d, 1H, J =0. 8Hz)，6. 53 (t, 1H, J = 4. 8Hz)，4· 00 3. 97 (m, 4H)，3· 37 3. 35 (m, 4H)，2. 36 (d, 3H, J =0. 4Hz)。步驟六，化合物1的合成將450mg 化合物 1-6，670mg 無(wú)水碳酸鉀，93mg Pd (PPh3) 4，390mg 苯并噻吩-2-硼 酸和40ml乙二醇二甲醚混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加熱至120°C反應(yīng)24h，溶液顏色逐漸變?yōu)楹谏７?應(yīng)完畢，冷至室溫，經(jīng)硅藻土過(guò)慮，濾液濃縮，剩余物經(jīng)柱層析純化，得到240mg白色固體， 為化合物 1，收率45%，MS :389. 1(M+H)+ ^H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 35 (d，2H，J = 4. 8Hz)， 7. 88 7. 86 (m, 1H)，7. 80 7. 77 (m, 1H)，7. 75 (s, 1H)，7. 63 (d, 1H, J = O. 8Hz)，7. 76 7. 34 (m, 2H)，6. 53 (t, 1H, J = 4. 8Hz)，4. 03 4. 00 (m, 4H)，3. 46 3. 43 (m, 4H)，2. 42 (d, 3H, J = O. 4Hz)。實(shí)施例23- (4-嘧啶基哌嗪)-5-甲基_6_ (吲哚_5_)噠嗪(化合物2)的合成 采用實(shí)施例1同樣的合成方法，以5-吲哚硼酸為原料，制備得到目標(biāo)化合物2，為白色固體，收率 42%，MS 372. 1 (M+H)+ ；1H NMR(CDC13,400MHz) 8 9. 13 (s，1H)，8. 35
6. 51 (9H)，4. 00 3. 79 (t,8H, J = 10. 4，10. 4Hz)，2. 34 (d, 3H, J = 9. 2Hz)。 實(shí)施例33- (4-嘧啶基哌嗪)-5-甲基-6-(喹啉基_4_)噠嗪(化合物3)的合成 采用實(shí)施例1同樣的合成方法，以喹啉4-硼酸為原料，制備得到目標(biāo)化合物3，為 淡黃色固體，收率 28%，MS 384. 1(M+H)+/H NMR(CDC13,400MHz) 8 9. 31 (s, 1H),8. 51 (s, 1H)，8. 34 (d, 2H, J = 8. 8Hz)，8. 04 (q, 1H, J = 8. 8Hz)，7. 60 (m, 2H, J = 3. 2Hz)，7. 55 (d, 1H, J = 1. 6Hz)，6. 91 (s，1H)，6. 54 (t, 1H, J = 4. 8Hz)，4. 28 (t,4H, J = 5. 2Hz)，8. 60 (t,4H, J = 5. 2Hz)，2. 04 (d, 3H, J = 14. 8Hz)。實(shí)施例43-(4_嘧啶基哌嗪)-5_甲基_6_[ (2，4_ 二甲氧基)嘧啶_5_基]噠嗪 (化合物4)的合成
采用實(shí)施例1同樣的合成方法，以2，4- 二甲氧基嘧啶-5-硼酸為原料，制備得到 280mg 目標(biāo)化合物 4，收率 33%，MS 395. 1 (M+H)+/H NMR(CDC13, 400MHz) 8 9. 34(t，2H，J = 3. 6Hz)，6. 80 (s, 1H)，6. 54 (t, 2H, J = 4. 8Hz)，4. 05 (s, 3H)，3. 99 (t,4H, J = 6Hz)，3. 97 (s, 3H)，3. 80 (t,4H, J = 5. 2Hz)，2. 14 (s, 3H)。實(shí)施例53-(N-甲基哌嗪基)-5-甲基_6_[ (2，4_ 二甲氧基)嘧啶_5_基)]噠嗪 (化合物5)的合成 采用實(shí)施例1同樣的合成方法，將其中步驟3的原料嘧啶哌嗪改為N-甲基哌嗪， 并將步驟4中的原料苯并噻吩-2-硼酸改為2，4- 二甲氧基嘧啶-5-硼酸，制備得到270mg 目標(biāo)化合物 5，收率 51%，MS 331. 1(M+H)+/H NMR(CDC13,400MHz) 8 8. 31 (s, 1H), 6. 73 (s, 1H)，4. 02 (s, 3H)，3. 94 (s, 3H)，3. 68 (t,4H, J = 5. 6Hz)，2. 52 (t,4H, J = 4. 8Hz)，2. 30 (s, 3H), 2. 03(s，3H)。實(shí)施例63- (N-甲基哌嗪基)-5-甲基-6-(喹啉_4_基)噠嗪(化合物6)的合成 采用實(shí)施例5同樣的合成方法，使用喹啉-4-硼酸為原料，制備得到280mg目標(biāo)化 合物 6，收率 54%，MS 320. 1 (M+H) +。實(shí)施例71，4- 二(4-嘧啶哌嗪)酚嗪(化合物7)的合成
合成路線 步驟1化合物7-2的合成采用實(shí)施例1中步驟2的合成方法，由原料鄰苯二甲酸酐制備得到化合物7_2，MS 200. 1(M+H)+。步驟2化合物7的合成采用實(shí)施例1中步驟2的類似合成方法，化合物7-2與兩倍當(dāng)量的嘧啶基哌嗪反 應(yīng)，得到 0. 3g 目標(biāo)化合物 7，收率 66%，MS :455. 2(Μ+Η)+/Η NMR(DMS0, 400MHz) δ 8. 39 (t, 6H, J = 4. 8Hz)，8. 18 (m, 2H)，7. 95 (m, 2H)，6. 72 (t, 1H, J = 4. 8Hz)，6. 66 (t, 2H, J = 4. 8Hz)，
4.00 (t,8H, J=L 6Hz)，3. 91 (t，4H，J = 5. 2Hz)，3. 35 (t,8H, J = 5. 2Hz)，3. 12 (t,4H, J =
5.2Hz)。生物活性測(cè)定法的實(shí)施例本發(fā)明化合物的活性測(cè)試采用本領(lǐng)域已知的方法測(cè)定，所使用的陽(yáng)性對(duì)照為下列 式II化合物，其制備方法采用W02008109437中公開(kāi)的方法，所使用的化合物1、化合物4、化 合物6采用上述實(shí)施例中公開(kāi)的方法制備。 實(shí)施例8體外活性測(cè)定法的實(shí)施例小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中執(zhí)行免疫功能的一群細(xì)胞，在AD發(fā)病過(guò)程中，它們 不僅作為致病原(包括細(xì)菌成分、異常內(nèi)源性蛋白產(chǎn)物、某些抗體成分等)的感受器敏感地 傳遞中樞損傷信號(hào)，而且可以通過(guò)改變活化狀態(tài)起免疫決定的作用。小膠質(zhì)細(xì)胞分泌很多種致炎因子(如IL-I β，TNF α，IFN γ等)和抗炎因子(如IL-4，IL-10，IL-13，TGF0等)， 兩者之間的平衡決定著小膠質(zhì)細(xì)胞的“選擇狀態(tài)”，只有完全被活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可以執(zhí)行 清除病變神經(jīng)元的功能。小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化是導(dǎo)致AD患者腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元大量丟 失的重要原因之一。中樞神經(jīng)系統(tǒng)IL-I β的水平對(duì)于小膠質(zhì)細(xì)胞由選擇狀態(tài)向完全活化 狀態(tài)的轉(zhuǎn)變起著重要作用。因此我們根據(jù)候選化合物專一抑制小膠質(zhì)細(xì)胞分泌IL-I β的 效率來(lái)評(píng)估其潛在的應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)方法1.鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2和膠質(zhì)瘤細(xì)胞系C6分別培養(yǎng)在含有10% FBS的DMEM培 養(yǎng)基中，培養(yǎng)第6代至第15代的細(xì)胞用于候選化合物活性篩選。培養(yǎng)細(xì)胞按50000個(gè)細(xì)胞 /孔接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，在培養(yǎng)1天后更換為低血清培養(yǎng)基(添加2% FBS)繼續(xù)培養(yǎng) 16小時(shí)。在培養(yǎng)基中加入300ng/ml (用于誘導(dǎo)BV2細(xì)胞)或lmg/ml (用于誘導(dǎo)C6細(xì)胞) LPS (Salmonella typhimutium)誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞分泌IL-1 β。并同時(shí)按終濃度ΙΟΟηΜ，3 μ M 和100 μ M加入待測(cè)樣品(DMSO ^ 0. 1% )；向空白加入0. 1% DMSO作為溶劑對(duì)照組。2. LPS誘導(dǎo)/藥物處理24小時(shí)后，收集培養(yǎng)液定量檢測(cè)其中IL-I β水平。培養(yǎng) 液樣品于4°C離心(8000G) 10分鐘，除去培養(yǎng)液中的懸浮顆粒雜質(zhì)。將上清液稀釋1倍，取 150 μ 1 樣品用于 ELISA(Biosoyrce)檢測(cè)。3.培養(yǎng)細(xì)胞處理和ELISA檢測(cè)采用雙盲法進(jìn)行。4.候選化合物抑制效率根據(jù)公式①計(jì)算，并計(jì)算每種候選化合物的IC5(I。公式①抑制率(％) = ([1卜13]哪誘導(dǎo)-[1卜13]藥物處理)/[1卜13]哪誘
帛 X100%。5.候選化合物療效評(píng)價(jià)以化合物對(duì)BV2分泌IL-I β的抑制率陽(yáng)性為判斷化合物 有效的標(biāo)準(zhǔn)；并以對(duì)C6分泌IL-I β的抑制率為陰性作為判斷化合物安全的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1本發(fā)明化合物對(duì)BV2的IL-I β分泌的IC5tl 表2本發(fā)明化合物濃度為20ηΜ時(shí)對(duì)BV2分泌IL-I β的抑制率 表1、2的結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物能夠有效抑制BV2分泌IL-I β，且抑制作用強(qiáng)于 所選用的陽(yáng)性藥物。同時(shí)另一體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)本發(fā)明化合物對(duì)C6分泌IL-Ιβ沒(méi)有抑制作用， 表明本化合物具有很好的安全性。因此綜合本試驗(yàn)結(jié)果，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠了解本發(fā)明 提供的化合物具有開(kāi)發(fā)成治療老年癡呆藥物的前景。
權(quán)利要求
一種式I所示的化合物或其鹽式Ⅰ其中，R1選自低級(jí)烷基或雜芳基；R3、R4分別選自氫或低級(jí)烷基，或R3和R4結(jié)合起來(lái)形成五元或六元碳環(huán)；R2選自取代或未取代的雜芳基；取代基選自低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基；n選自0或1。F2009100311067C0000011.tif
2.權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中 R1選自甲基或嘧啶基；R3、R4分別選自氫或甲基，或者R3和R4結(jié)合在一起形成苯環(huán)； R2選自苯并噻吩、苯并吡咯、喹啉、嘧啶或2，4_ 二甲氧基嘧啶； n為 或1。
3.權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽，其中n為0。
4.權(quán)利要求1或2所述的化合物或其鹽，選自下列化合物或其鹽
5.一種權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的化合物的制備方法，其包括如下反應(yīng)步驟 其中，R1、R2、R3、R4、η與權(quán)利要求1中定義相同。
6.權(quán)利要求1、2、3或4所述的化合物在制備治療和/或預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的用途。
7.權(quán)利要求6所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括神經(jīng)退行性疾病或精神病、癲癇、驚厥或中風(fēng)等疾病。
8.權(quán)利要求7所述的神經(jīng)退行性疾病包括老年癡呆癥、帕金森氏病或認(rèn)知障礙。
9.權(quán)利要求8所述的神經(jīng)退行性疾病包括老年癡呆癥。
10.一種治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1、2、3或4所述 的化合物或其鹽，以及合適的藥用輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種式Ⅰ的新型哌嗪基噠嗪類化合物或其鹽，其制備方法以及該類化合物作為神經(jīng)炎癥抑制劑治療或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病，如老年癡呆癥、帕金森氏病、認(rèn)知障礙等疾病的用途，或治療精神病、癲癇、驚厥以及中風(fēng)等疾病的用途。本發(fā)明化合物的制備工藝簡(jiǎn)單，原料易得，適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，并且經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明化合物具有高效抑制BV2分泌IL-1β的作用，效果強(qiáng)于陽(yáng)性藥物，同時(shí)本發(fā)明化合物對(duì)C6分泌IL-1β沒(méi)有抑制作用，表明本化合物安全性高。
文檔編號(hào)C07D401/04GK101870692SQ20091003110
公開(kāi)日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月27日
發(fā)明者廖升榮, 徐宏江, 楊玲, 胡文輝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院;江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司