專利名稱：一種從虎杖中提取高純度大黃素的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然藥材有效成份提取及純化領域，具體涉及從中藥虎杖中提取并 純化獲得高純度大黃素的方法。
背景技術：
在我國有很多種類中草藥的塊根中不同程度地含有一定量的大黃素，其中，國 內(nèi)藏邊大黃(0.8%)和掌葉大黃(1%)中，大黃素的含量較高。近期在中藥治療肝炎病等 病毒性疾病的用藥中，虎杖的使用頻率極高，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，虎杖中富含大黃素，檢測其 含量高于1.5%。大黃素作為從大黃屬、蓼屬、鼠李屬和番瀉葉中分離出來的主要有效單 體，具有抗菌、抗病毒、抗原蟲、抗炎、抗氧化及清除氧自由基、保護肝腎、治療胰腺 炎、心肌保護作用、神經(jīng)保護等多種藥理作用。新近的研究表明大黃素能夠抑制腫瘤細 胞增生、誘導凋亡、防止腫瘤細胞擴散，而且還能有效地抑制腫瘤細胞攝取葡萄糖，引 起細胞膜相關功能的改變，最終導致細胞凋亡。基于大黃素具有廣泛的藥理作用，研究 一種從中草藥中提取高純度大黃素的方法很有意義。根據(jù)我國中草藥材資源極為豐富， 特別是虎杖不僅價格低廉而且已發(fā)現(xiàn)其大黃素含量較高，本發(fā)明將提供一種從植物虎杖 中提取高純度大黃素的方法，為實驗室進行大黃素衍生物的制備提供基礎。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從虎杖中提取純度高于99.0%的大黃素的方法。本發(fā)明的技術方案包括如下步驟(1)將藥材取虎杖粉碎后，加入乙醇水溶液浸泡，加熱回流，除去藥渣，濾液濃 縮，得大黃素濃縮液。(2)濃縮液加水稀釋，調(diào)pH至酸性，加熱進行水解，至不再有明 顯絮狀物出現(xiàn)時，停止水解反應。過濾得水解產(chǎn)物，(3)水解產(chǎn)物加水攪勻、離心除去 上清液，水洗，得大黃素粗品。(4)大黃素粗品經(jīng)層析柱提純，洗脫液濃縮、乙醇重結(jié) 晶，得黃色針狀結(jié)晶。(5)核磁共振分析證明本品為大黃素。核磁共振圖譜表明除溶劑 峰外沒有明顯的雜峰，高效液相色譜圖測試結(jié)果說明按本方法提取得到的大黃素的純度 高于99.0%。所述步驟(1)中的虎杖藥材為藥房出售的虎杖飲片或出產(chǎn)地虎杖莖塊，虎杖飲 片可直接加入乙醇水溶液浸泡，虎杖莖塊則需要干燥、粉碎后入乙醇水溶液浸泡。所述步驟(1)的提取溶劑中乙醇水溶液為45%-95%乙醇，乙醇水溶液量為虎杖 藥材的4-9倍，常溫浸泡時間4-12小時，水浴加熱回流2-4小時，提取次數(shù)2-4次。所述步驟(1)中提取的濾液濃縮至原液的1/5-1/10。所述步驟(2)中濃縮液加水5-10倍的水稀釋，加入無機酸，調(diào)pH至2-3，水解 時間0.5-1.3小時。所述無機酸為鹽酸或硫酸，首選硫酸。所述步驟(3)中水的加入量為水解產(chǎn)物的1-2倍，離心機轉(zhuǎn)速最大到3000轉(zhuǎn)/分。所述步驟(4)中層析柱所用硅膠為100-200目的粗孔硅膠，硅膠用量與大黃素粗 品的比例為30 1。用環(huán)己烷和丙酮的混合試劑進行洗脫，薄層展開劑也用環(huán)己烷和丙 酮的混合試劑。所述環(huán)己烷 和丙酮的混合試劑中，環(huán)己烷丙酮為5 1時取得最佳分離效果。所述步驟(4)重結(jié)晶中所用溶劑為95%乙醇，乙醇用量與大黃素的比例為 20 1，加熱回流至完全溶解，在溫度為1_5°C條件靜置8-10小時。所述步驟(5)中核磁共振分析所用儀器為BRUKER AV-500型核磁共振儀，取結(jié) 晶產(chǎn)物0.7毫克左右溶解于0.5毫升氘代二甲基亞砜中，將溶液置入直徑5mm標準樣品 管中，溫度控制在303K的條件下，測得氫譜、碳譜、DEPT譜、COSY譜、HSQC譜和 HMBC譜，測試及解析結(jié)果列于表1和表2，核磁共振證明本品為大黃素。所述步驟(5)中純度檢驗使用WDL-95高效液相色譜儀，測試條件檢測器 UV430nm,固定相5uC18，流動相甲醇/水(85/15)，色譜柱KromasilC18，柱長 25cm,內(nèi)經(jīng)46mm。從大黃素的高效液相色譜圖中可以看出，大黃素的吸收峰出現(xiàn)在 保留時間為9.33分鐘處，譜峰的積分面積為99.52%。由此說明按本方法提取得到的大黃 素的純度高于99%。表1.大黃素的氫譜測定結(jié)果
歸屬直接相關質(zhì)子NOESY相關質(zhì)子
化學位移(ppm) 質(zhì)子數(shù)
_11_化學位移(ppm)__化學位移(ppm) —
2.39 3H 3-CHj / 7.12,7.44 6.56 IH H7 7.08 12.04 7.08 IH H5 6.56 / 7.12 IH H2 / 2.39,11.97 7.44 IH H4 / 2.39 11.33 IH 6-OH / / 11.97 IH I-OH / 7.12 12.04IH8-OH_ /_ 6.56表2大黃素的碳譜測定結(jié)果
權利要求
1. 一種從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征是通過以下步驟實現(xiàn)(1)取虎杖藥材，加入乙醇水溶液浸泡、加熱回流，過濾除去藥渣，濾液濃縮、回收 大部分乙醇，即得大黃素濃縮液。(2)濃縮液加水稀釋，再加入少量的無機酸。調(diào)pH至酸性，調(diào)制好的溶液加熱進行 水解反應，待紅色絮狀物出現(xiàn)后，繼續(xù)加熱至不再有明顯絮狀物出現(xiàn)，停止水解反應。 過濾除去濾液得水解產(chǎn)物。(3)水解產(chǎn)物加水攪勻、離心除去上清液，經(jīng)過3次水洗后即得大黃素粗品。(4)大黃素粗品經(jīng)過硅膠層析柱，用洗脫液洗脫，收集洗脫液減壓蒸餾，乙醇重結(jié)晶 即得黃色針狀結(jié)晶。(5)核磁共振分析證明本品為大黃素。核磁共振圖譜表明除溶劑峰外沒有明顯的雜 峰，高效液相色譜圖測試結(jié)果說明按本方法提取得到的大黃素的純度高于99.0%。
2.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征在于步驟(1)中 的虎杖藥材為藥房出售的虎杖飲片或出產(chǎn)地虎杖莖塊，虎杖飲片可直接加入乙醇水溶液 浸泡，虎杖莖塊則需要干燥、粉碎后入乙醇水溶液浸泡。
3.根據(jù)專利要求1和2所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，所述步驟(1)的提 取溶劑中乙醇水溶液為45% -95%乙醇，乙醇水溶液量為虎杖藥材的4-9倍，常溫浸泡時 間4-12小時，水浴加熱回流2-4小時，提取次數(shù)2-4次。
4.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征在于步驟(1)中 提取的濾液濃縮至原液的1/5-1/10。
5.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征在于步驟(2)中 濃縮液加水5-10倍的水稀釋，加入無機酸，調(diào)pH至2-3，水解時間0.5-1.3小時。
6.根據(jù)專利要求5中無機酸為鹽酸或硫酸，首選硫酸。
7.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征在于步驟(3)中 水的加入量為水解產(chǎn)物的1-2倍，離心機轉(zhuǎn)速最大到3000轉(zhuǎn)/分。
8.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征在于步驟(4)中 層析柱所用硅膠為100-200目的粗孔硅膠，硅膠用量與大黃素粗品的比例為30 1。用 環(huán)己烷和丙酮的混合試劑進行洗脫，薄層展開劑也用環(huán)己烷和丙酮的混合試劑。
9.根據(jù)專利要求8中所述環(huán)己烷和丙酮的混合試劑，環(huán)己烷丙酮為5 1時取得最 佳分離效果。
10.根據(jù)專利要求1所述的從虎杖中提取高純度大黃素的方法，其特征是步驟(4)重 結(jié)晶中所用溶劑為95%乙醇，其用量與大黃素比例為20 1，在溫度為1_5°C下靜置 8-10小時析晶。
全文摘要
本發(fā)明提供虎杖中有效成分大黃素的高純度提取方法，將藥材粉碎后，加入45-95％的乙醇浸泡、用量為4-9倍體積藥材質(zhì)量，加熱回流，除去藥渣，濾液濃縮，得大黃素濃縮液。濃縮液加水稀釋，調(diào)pH至酸性，加熱進行水解，至不再有明顯絮狀物出現(xiàn)時，停止水解反應。過濾得水解產(chǎn)物，該產(chǎn)物加水攪勻、離心除去上清液，水洗，得大黃素粗品。該粗品經(jīng)層析柱提純，洗脫液濃縮、乙醇重結(jié)晶，得大黃素的黃色針狀結(jié)晶。本方法提取獲得的大黃素其純度高于99.0％。
文檔編號C07C50/34GK102010316SQ20091003464
公開日2011年4月13日 申請日期2009年9月4日 優(yōu)先權日2009年9月4日
發(fā)明者徐進宜, 王磊, 陳東軍 申請人:中國藥科大學