專(zhuān)利名稱(chēng)：：具有抗腫瘤活性的新化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有抑制腫瘤細(xì)胞增值活性和抑制血管生成作用活性的環(huán)二烯與醌和對(duì)二苯酚的新化合物及其在制藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：在癌癥治療屮2個(gè)方面抑制原發(fā)瘤的生長(zhǎng)及清除；控制和清除癌細(xì)胞的遷移和產(chǎn)生新的癌癥病灶。針對(duì)這兩個(gè)方面，除了外科手術(shù)切除腫塊和其他物理手段包括放療、激光治療外，藥物治療的2類(lèi)主要方法是1)抑制和/或殺傷、殺死癌細(xì)胞；2)抑制腫瘤血管生成以切斷對(duì)癌細(xì)胞的氧氣和營(yíng)養(yǎng)的供給。目的旨在實(shí)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)或/和清除癌變細(xì)胞的腫瘤化學(xué)藥物治療是癌癥治療的一個(gè)重要手段，其主要作用方式(藥物靶向)包括1)直接靶向腫瘤細(xì)胞的毒殺癌細(xì)胞或抑制癌細(xì)胞增殖；2)耙向腫瘤血管生成作用，阻止機(jī)體對(duì)癌細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)等以及阻止癌細(xì)胞隨著血流轉(zhuǎn)移至新的病灶。這些藥物直接或間接靶向癌細(xì)胞或/和靶向血管生成作用并調(diào)節(jié)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)達(dá)到抑制腫瘤的生長(zhǎng)、擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，并可能最終清除腫瘤。理論上直接毒殺(殺傷或殺死)癌細(xì)胞或抑制癌細(xì)胞的增殖是最有效的治療癌癥的方法，但由于癌細(xì)胞的高度異質(zhì)性(包括可能的癌樣干細(xì)胞的存在)使得一種藥物很難有效調(diào)節(jié)處在不同分化階段的癌細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；另一方面癌細(xì)胞基因的不穩(wěn)定性又可能使得在直接作用于癌細(xì)胞的藥物壓力下癌細(xì)胞發(fā)生基因突變而致對(duì)藥物的敏感性降低；加上癌癥發(fā)現(xiàn)時(shí)一般已經(jīng)處于中期以后此時(shí)癌癥可能己經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)移，而藥物能夠到達(dá)的靶器官的能力的限制6使得藥物不可能清除這些已經(jīng)轉(zhuǎn)移的新癌癥病灶，這一切使得直接針對(duì)腫瘤細(xì)胞的治療手段的有效率大大降低。血管生成作用(angiogenesis)與癌癥的關(guān)系是Folkman上世紀(jì)70年代提出，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)癌癥的發(fā)生(tumorigenesis)、生長(zhǎng)(growth)、浸潤(rùn)(invasion)與轉(zhuǎn)移(metastasis)和血管生成作用密切相關(guān)，因此通過(guò)抑制腫瘤血管生成相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)惡性腫瘤治療。由于抑制腫瘤血管生成作用的靶細(xì)胞是基因相對(duì)比較穩(wěn)定的內(nèi)皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞的生存壓力來(lái)源于血管生成的缺陷而不是直接來(lái)源于藥物，所以腫瘤細(xì)胞本身和機(jī)體均不易產(chǎn)生抗藥性。但這種方法的缺陷是一般它們只能抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)和腫瘤的轉(zhuǎn)移而不能將已有的腫瘤病灶清除。本專(zhuān)利的尋找和發(fā)現(xiàn)有效的抗癌細(xì)胞增殖和抗腫瘤血管生成作用抑制劑，這些抑制劑可能被用于腫瘤及相關(guān)疾病的治療。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和阻斷腫瘤血管生成作用的新化合物(環(huán)二烯與醌和對(duì)二苯酚的加合物)及其應(yīng)用。解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下式(I)中的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體其中，Ri、R4、R5、X2、X3、X4、各自獨(dú)立地為氫、任意取代的烴基、羥基、鹵素、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺；R2、R3除不能為氫、甲基、取代或未取代的苯基外，各自獨(dú)立地為任意取代的烴基、羥基、鹵素、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺R6、R7、R8、R9、R1C)、Ru、R12、R13、Rw、R15、1116各自獨(dú)立地為氫、任意取代的鹵素、羥基、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺；B環(huán)內(nèi)至少一個(gè)雙鍵(包括可能的烯醇互變產(chǎn)生的環(huán)內(nèi)雙鍵)，但B環(huán)不能為取代或未取代苯環(huán)或苯醌；n為0到6的整數(shù)，當(dāng)n為O時(shí)Ru、1116不存在。優(yōu)選地，所述R2、R3與R4、R5組成取代或未取代的苯并環(huán)；所述R2、R3、R4、R5、XbX2、X3、X4中任一組或一組以上相鄰碳上2個(gè)取代基為雙鍵；或所述X汁X2或/和X3+X4為羰基、R2、R3、R4、Rs相鄰碳上2個(gè)取代基可以為雙鍵。優(yōu)選地，所述R7+Rs、R9+R1G、Ru+R12、Ru+Ri4、R15+Ri6任--組為2個(gè)氫或羰基或者R6、R7、R8、R9、Ru)、Rn、R12、R13、R14、R5、R16相鄰碳上兩個(gè)取代基可以組成一個(gè)雙鍵。當(dāng)X,+X2、X3+X4為0，R3+R4為雙鍵時(shí)其具有式(II)結(jié)構(gòu)8<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>當(dāng)X!為ORn、X3為OR,8，X2+R4、X4+R3為雙鍵時(shí)其具有式(III)結(jié)構(gòu)其中R17、1118為任意磷酸酯或乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、蘋(píng)果酸酯、乳酸酯、琥珀酸、或2-酮戊二酸酯等羧酸酯:當(dāng)R8+Rn為雙鍵時(shí)其具有式(IV)結(jié)構(gòu):當(dāng)R6+Rg為雙鍵時(shí)其具有式(V)結(jié)構(gòu):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>優(yōu)選地，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)其中，11=0,1,或2;R19，R加各自為為H、乳酸或蘋(píng)果酸。具體地，其優(yōu)選為2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二酚、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯醌、2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二酚、2,5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯醌、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二酚、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯醌、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二酚、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯醌、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二磷酸酯2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二羥基乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二羥基乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乳酸酯、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乳酸酯、或2-(2-環(huán)己烯基)-萘酚。本發(fā)明的另一需要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體在醫(yī)藥中的應(yīng)用。解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體在制備治療由異常血管生成導(dǎo)致的病變藥物中的應(yīng)用，其中由異常血管生成導(dǎo)致的病變包括但不限于腫瘤新生血管生成及轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)炎疾病、視網(wǎng)膜病(包括糖尿病性視網(wǎng)膜病、缺血性視網(wǎng)膜一靜脈堵塞、早熟性視網(wǎng)膜病和老年黃斑變性)、牛皮癬、慢性炎性疾病或動(dòng)脈硬化。本發(fā)明另一需要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種藥物組合物。一種抗腫瘤藥物組合物，其主要由上所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體作為活性成分與至少一種藥學(xué)上可接受的載體組成。本發(fā)明提供了一類(lèi)新的化合物，該類(lèi)化合物具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和阻斷腫瘤血管生成作用，可為臨床上提供一種新的抗腫瘤藥物。圖1化合物3對(duì)HUVEC(人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)遷移抑制活性結(jié)果示意圖；圖2化合物3對(duì)HUVEC(人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)成管抑制活性結(jié)果示意圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明化合物的"藥學(xué)上可接受的鹽"包括本發(fā)明化合物和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)形成的本發(fā)明化合物的常規(guī)無(wú)毒鹽。例如，包括得自無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等的鹽，也包括得自有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、擰檬酸、抗壞血酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對(duì)氨基苯磺11酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙基磺酸、三氟乙酸等的鹽。如果本發(fā)明化合物為酸性的，則適當(dāng)?shù)?藥學(xué)上可接受的鹽"指通過(guò)藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿包括無(wú)機(jī)堿及有機(jī)堿制備的鹽。得自無(wú)機(jī)堿的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。得自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿的鹽，所述堿包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，取代的胺包括天然存在的取代胺、環(huán)狀胺及堿性離子交換樹(shù)脂。例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、二乙胺、2—二乙基氨基乙醇、2—二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N—乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、異丙基胺、賴(lài)氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。本發(fā)明所述化合物可具有不對(duì)稱(chēng)中心、手性軸及手性面，且存在的外消旋物、外消旋物混合物及單一非對(duì)映體和所有可能的同分異構(gòu)體及其混合物包括旋光異構(gòu)體均包括在本發(fā)明內(nèi)。另外，本發(fā)明公開(kāi)的化合物可以互變異構(gòu)體存在，且兩種互變異構(gòu)形式都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，即使僅描述了其中一種互變異構(gòu)結(jié)構(gòu)。例如，任何要求保護(hù)的下列化合物A都理解為包括互變異構(gòu)結(jié)構(gòu)B，且反之亦然，同樣包括其混合物。當(dāng)任何變量(例如R3、R4、R5、Re、R7等)在任何組分中出現(xiàn)超過(guò)一次，則其每次出現(xiàn)的定義獨(dú)立于其它每次出現(xiàn)的定義。同樣，允許取代基及變量的組合，只要這種組合使化合物穩(wěn)定。本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"烴基"意指包括CVCs烷基、QrCs烯基、CVC8炔基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳垸基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基。如果環(huán)系統(tǒng)為多環(huán)，其意味著這種鍵僅連接到鄰近環(huán)的任何適當(dāng)?shù)奶荚由稀Ｒ斫獗绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員可選擇本發(fā)明化合物的取代基及取代型式而提供化學(xué)上穩(wěn)定的并可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)和下列提出的方法自可容易獲得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超過(guò)一個(gè)基團(tuán)取代，應(yīng)理解這些基團(tuán)可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)"烷基"意指包括具有特定碳原子數(shù)目的支鏈的、直鏈的或環(huán)狀的飽和脂肪烴基。"C廣C8烷基"中"OCV，的定義包括以直鏈或支鏈排列的具有1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如，"d-C8垸基"具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、庚基、辛基、環(huán)丙基、甲基-環(huán)丙基、2,2-二甲基-環(huán)丁基、2-乙基-環(huán)戊基、環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)"烯基"指直鏈、支鏈或環(huán)狀的，含有2-8個(gè)碳原子及至少一個(gè)碳-碳雙鍵的非芳香烴基。因此，"C2-Q烯基"指具有2-8個(gè)碳原子的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可含有雙鍵且如果指明了取代的烯基則此部分可被取代。術(shù)語(yǔ)"炔基"指直鏈、支鏈或環(huán)狀的，含有2-8個(gè)碳原子及至少一個(gè)碳碳三鍵的非芳香烴基。因此，"C2-CV炔基"指具有2-8個(gè)碳原子的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。炔基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可含有三鍵且如果指明了取代的炔基則此部分可被取代。術(shù)語(yǔ)"鹵素"意指包括氟、氯、溴和碘。所用的原料醌、酚、環(huán)二烯等除了市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的外，以下為相應(yīng)的基本制備方法和原則，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明制備到所述的任一種化合物1)醌的制備可以根據(jù)目標(biāo)化合物的需要合成，如從單酚或二酚經(jīng)過(guò)氧化得到醌；酚的制備可以由醌還原或在特定的位置引入酚羥基。2)環(huán)二烯的制備可以有對(duì)應(yīng)的醇、鹵代物等脫水、脫鹵化氫或其它相應(yīng)的反應(yīng)得到。本發(fā)明所示的二烯與醌和酚之間的加合反應(yīng)一般如下1.0mmole的醌或酚溶解于10.0ml甲苯中，加入1.2mmole的1,3-環(huán)二烯(如1,3-環(huán)己二烯或1，3-環(huán)戊二烯)和20mg(~0.11mmole)對(duì)甲苯磺酸或其它相近當(dāng)量的酸，在75-85°C加熱反應(yīng)，薄層層析(TLC)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。反應(yīng)結(jié)束后(一般2個(gè)小時(shí)左右)，減壓脫溶后硅膠柱層析。在考慮得到2個(gè)二烯分子加成物時(shí)使用3.0mmole的二烯。酚羥基?；磻?yīng)一般如下按酚羥基的摩爾量加入3倍當(dāng)量的有機(jī)堿(如三乙胺、吡啶等)和1.5倍當(dāng)量的酸酐或活化的羧酸，室溫反應(yīng)，TLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程至反應(yīng)完全(一般4小吋左右)，脫去溶劑后硅膠柱層析。在本反應(yīng)生成的產(chǎn)物中的醌和酚穩(wěn)定性差別很大，反應(yīng)后體系較復(fù)雜。酚可能被空氣氧化成醌；醌可能氧化體系中的某些不穩(wěn)定的成分使自身被還原形成酚。實(shí)施例1經(jīng)由對(duì)苯醌得到2,5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯二酚(化合物l)收率為7%;經(jīng)由對(duì)二酚得到2,5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯二酚(l)收率為37%。2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二酚(1)的波譜數(shù)據(jù)如下^-NMR(CDC13，卯m)56.58(s，2H),6.00(m,2H),5.76(m,2H)，4,96(s,1H)，4.95(s，1H),3.50(m,2H),2.10(m,4H),2.00(m,2H),1.78(m,2H),1.63(m，4H);13CNMR(CDC13，ppm)5147.4,147.3,130.5，130.5,130.1,130.0,129.6,116.8,116.8,37.3,37.2,29.9，25.0,21.3,21.2。經(jīng)由對(duì)苯醌得到2,5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯醌(化合物2)收率為12%;經(jīng)由對(duì)二酚得到2,5-二(2-環(huán)巳烯基)對(duì)苯醌(2)收率為4%。2,5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯醌(2)的波譜數(shù)據(jù)如下^-NMR(CDC13，ppm)56.54(s，2H)，5.96(m,2H),5.47(m,2H),3.57(m,2H),2.04(m,4H),1.96(m,2H),1.62(m,4H)，1.43(m,2H);13CNMR(CDC13，ppm)5187.7,152.1,133.2,133.2,130.6,130.5,126.5，126.5,33.5,33.5，28.7,24.9,19.9，19.8。實(shí)施例2經(jīng)由2-叔丁基對(duì)苯醌得到2-(2-環(huán)己烯基)-5-叔丁基對(duì)苯二酚(化合物3)收率為51%;經(jīng)由對(duì)二酚得至1」2，5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯二酚(化合物3)收率為65%。2-(2-環(huán)己烯基)-5-叔丁基對(duì)苯二酚(3)的波譜數(shù)據(jù)如下i固MR(CDC13，ppm)S6,74(s，1H),6.46(s,1H),6.01(m，1H),5.76(m,1H)，5.11(s,1H),4.77(s,1H),3.48(m，1H),2.09(m,2H),2.00(m,1H),1.77(m，1H)，1.63(m，2H)，1.38(s，9H);'3CNMR(CDC13,ppm)S147.7，147.1,135.2,130.6,129.6，129.1,117.4,115.1,37.1,34.3,29.9，29.6，25.0，21.3;HR-FABMSm/z246.1613,C16H2202,calcd246.1614。經(jīng)由2-叔丁基對(duì)苯醌得到2-(2-環(huán)己烯基)-5-叔丁基對(duì)苯醌(化合物4)收率為15%;經(jīng)由對(duì)二酚得到2，5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯醌(化合物4)收率為10%。2-(2-環(huán)己烯基)-5-叔廠基對(duì)苯醌(化合物4)的波譜數(shù)據(jù)如下^NMR(CDC13，ppm)56.57(s，1H)，6.44(s，1H)，5.95(m,1H),5.46(m,1H),3.54(m,1H),2.03(m，2H)，1.97(m,1H),1.59(m,4H),1.42(m，1H),1.28(s，9H);13CNMR(CDC13，ppm)S188.2,188.1，155.7,150.6,134.9,131.9，130.6,126.5,35.0,33.2,29.2,28.6,24.9,19.9。2,5-二(2-環(huán)已烯基)對(duì)苯二乙酸酯(化合物5)收率86%。2，5-二(2-環(huán)己烯萄對(duì)苯二乙酸酯(化合物5)的波譜數(shù)據(jù)如下^NMR(CDC13，ppm)S6,91(s，2H),6.90(s,2H),5.88(m,2H),5.60(m,1H)，3.45(m,2H),2.28(s,6H)，2.06(m,4H)，1.94(m,2H),1.71(m,2H),1.59(m，4H);13CNMR(CDC13，ppm)S169.6,146.0,136.7,129.1,129.0,129.0,123.0,35.7,35.6，30.3,24.9,21.0,21.0。實(shí)施例3實(shí)施例4162-(2-環(huán)己烯基)-5-叔丁基對(duì)苯二乙酸酯(化合物6)收率87%。2-(2-環(huán)己烯基)-5-叔丁基對(duì)苯二乙酸酯(6)的波譜數(shù)據(jù)如下力NMR(CDCl3，ppm)S6.99(s,1H),6.88(s,1H)，5.88(m,1H),5.59(m，1H),3.44(m,1H)，2.31(s，3H),2.29(s,3H)，2.06(m,2H),1.95(m,1H)，1.71(m，1H),1.50-1.65(m,2H),1.33(s,9H);13CNMR(CDC13，ppm)5169.7,169.4,146.6,145.5,140.0,136.3，129.0，124.6，121.2，35,5,34.3,30,2,30.1，24.8,21.6,21.0。2-(2-環(huán)己烯基)-萘酚(化合物7)收率40%。2-(2-環(huán)己烯基)-萘酚(化合物7)的波譜數(shù)據(jù)如下&NMR(CDC13，ppm)S8.26(d，J=8.4Hz,1H),7.83(d,J=7.2Hz,1H),7.52(m,2H),7.43(d,J=8.4Hz，1H),7.27(d,J=8.4Hz,1H),6.30(s,1H),6.24(m，1H),6.06(m，1H),3.66(m,1H),2.40(m,2H),2.12(m,1H),1.94(m,1H),1.70-1.90(m,2H);'3CNMR(CDC13，卯m)5149.5，133.5,132.3,129.9,128.1,127.5，125.8,125.2(2C),123,6,121.6，120.0,39.8，30.2,25.1,21.8。實(shí)施例5實(shí)施例617研究血管生成的內(nèi)皮細(xì)胞為人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞即HUVEC，癌細(xì)胞為人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549、人肝癌細(xì)胞Bel-7402和人乳腺癌細(xì)胞MCF-7。1)藥物篩選的實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)述如下A549和Be-7402細(xì)胞的培養(yǎng)液是含10%小牛血淸的RPMI-1640，HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)液是EGM-2(含生長(zhǎng)因子)，細(xì)胞在37。C，5%C02條件下維持培養(yǎng)。按A549細(xì)胞、Bel-7402細(xì)胞每孔1500個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，HUVEC細(xì)胞為每孔1000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，待細(xì)胞貼壁后加入藥物(藥物先用DMSO溶解，加藥前用PBS稀釋)，溶劑對(duì)照組和加藥組(包括陽(yáng)性藥物)的細(xì)胞培養(yǎng)液中DMSO終濃度均為0.1%，每個(gè)濃度有3個(gè)復(fù)孔。加藥后再繼續(xù)培養(yǎng)96小時(shí)后，每孔加入20lMTT(5.0mg/ml)，再在37°C，5%C02條件下繼續(xù)孵育4小時(shí)，然后吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，每孔加入IOO1DMSO分析純?cè)噭┤芙釳TT被還原的產(chǎn)物-藍(lán)紫色Formazan結(jié)晶，并于超級(jí)酶標(biāo)儀570nrn下讀數(shù)。超級(jí)酶標(biāo)儀讀數(shù)是Formazan的吸光度值(ODs70)，其反映活細(xì)胞的還原酶活力與細(xì)胞的活力成正比，閔此基于溶劑對(duì)照組和加藥組吸光度值可以計(jì)算出各個(gè)提取物的IC5Q(見(jiàn)表1)。表l化合物抑制癌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2)HUVEC遷移實(shí)驗(yàn)一般細(xì)胞以5><104個(gè)/孔接種24孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)接近融合時(shí)用200uL槍頭在每孔的中間劃傷，PBS沖洗掉脫落的細(xì)胞后再加藥(化合物3)處理612小時(shí)，拍照，比較劃傷O小時(shí)劃傷區(qū)域變化。3)HUVEC成管實(shí)驗(yàn)Matrigd原液(BD公司)與DMEM(無(wú)血清)以1:2的比例混勻后，以每孔150uL加入48孔板中，室溫預(yù)聚合5min后放入37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)聚合2h。將HUVEC細(xì)胞計(jì)數(shù)后用培養(yǎng)基稀釋為1.5xl06/mL,取200uL細(xì)胞懸液，即3><105cells，加入待檢測(cè)藥物(化合物3)，混勻后加至聚合完全的Matrigel表面。培養(yǎng)一定時(shí)間后觀察成管情況，拍照紀(jì)錄。權(quán)利要求1.式(I)中的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體其中，R1、R4、R5、X1、X2、X3、X4、各自獨(dú)立地為氫、任意取代的烴基、羥基、鹵素、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺；R2、R3除不能為氫、甲基、取代或未取代的苯基外，各自獨(dú)立地為任意取代的烴基、羥基、鹵素、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺；R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16各自獨(dú)立地為氫、任意取代的鹵素、羥基、巰基、氨基、羧酸酯、或酰胺；B環(huán)內(nèi)至少一個(gè)雙鍵，但B環(huán)不能為取代或未取代苯環(huán)或苯醌；n為0到6的整數(shù)，當(dāng)n為0時(shí)R15、R16不存在。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其特征是，所述R2、R3與R4、R5組成取代或未取代的苯并環(huán)；所述R2、R3、R4、R5、X2、X3、X4中任一組或一組以上相鄰碳上2個(gè)取代基為雙鍵；或所述Xi+X2或/和X3+X4為羰基、R2、R3、R4、R5相鄰碳上2個(gè)取代基可以為雙鍵。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其特征是，所述R7+Rs、R9+Rio、Ru+R12、Ri3+R14、Ris+Ri6任--組為2個(gè)氫或羰基；或者R6、R7、R8、R9、R1G、Ru、R12、R13、R14、R15、R16相鄰碳上兩個(gè)取代基組成-個(gè)雙鍵。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其特征是，當(dāng)X!+X2、X3+X4為0，R3+R4為雙鍵時(shí)其具有式(II)結(jié)構(gòu)；或當(dāng)X!為ORn、X3為OR18，X2+R4、5X4十R3為雙鍵時(shí)其具有式(III)結(jié)構(gòu)o其中Rn、1118為任意磷酸酯或乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、蘋(píng)果酸酯、乳酸酯、琥珀酸、或2-酮戊二酸酯等羧酸酯。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其特征是，當(dāng)Rs+為雙鍵時(shí)其具有式(IV)結(jié)構(gòu)；或當(dāng)R6+R8為雙鍵時(shí)其具有式(V)結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其特征是,所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)之一<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，n-0,l,或2;R19,R加各自為為H、乳酸或蘋(píng)果酸。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其為2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二酚、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯醌、2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二酚、2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯醌、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二酚、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯醌、2，5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二酚、2，5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯醌、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2，5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二磷酸酯2，5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二磷酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二羥基乙酸酯、2,5-二(2-環(huán)己烯基)對(duì)苯二羥基乙酸酯、2-叔丁基-5-(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乳酸酯、2,5-二(2-環(huán)戊烯基)對(duì)苯二乳酸酯、或2-(2-環(huán)己烯基)-萘酚。9.權(quán)利要求l-8任一項(xiàng)所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。10.—種抗腫瘤藥物組合物，其主要由權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體作為活性成分與至少一種藥學(xué)上可接受的載體組成。全文摘要本發(fā)明提供了具有式(I)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或立體異構(gòu)體及其應(yīng)用，其基團(tuán)定義如說(shuō)明書(shū)所述。本發(fā)明提供的該類(lèi)新化合物，具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和阻斷腫瘤血管生成作用，可為臨床上提供一種新的抗腫瘤藥物。文檔編號(hào)C07C39/17GK101624332SQ20091004181公開(kāi)日2010年1月13日申請(qǐng)日期2009年8月12日優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日發(fā)明者昕劉,周?chē)?guó)春,歐英勇,鑫陸,陳少鵬申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院