專利名稱：巖白菜素異戊烯基衍生物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體涉及一種巖白菜素異戊烯基衍生物及其制備方法 和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
巖白菜素(bergenin)又稱矮地茶素、矮茶素、虎耳草素、佛手配質(zhì)等。在虎耳草科 和紫金?？圃S多植物中有廣泛的分布，而且含量較高，《中華人民共和國藥典》1990版一部 即收載巖白菜素為鎮(zhèn)咳藥，用于慢性支氣管炎的治療。近年來有報(bào)道巖白菜素有抗炎、護(hù) 肝、抗HIV病毒及提高免疫作用，但現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)也表明巖白菜素也有藥效作用不強(qiáng)，口服 吸收差(口服1小時(shí)后尿中可見原形藥物)，抗感染能力弱等缺點(diǎn)(王剛等，安徽中醫(yī)學(xué)院 學(xué)報(bào)，2002，6，59-62.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)巖白菜素的抗病毒作用不強(qiáng)及口服吸收差的缺點(diǎn)，提供一種巖白菜素 異戊烯基衍生物，它以巖白菜素為先導(dǎo)化合物，利用醚化反應(yīng)，封閉部分母體的羥基，使其 親脂性增強(qiáng)，由于改變了油水分配系數(shù)，有利于腸道吸收，因而提高療效。本發(fā)明還公開了該巖白菜素異戊烯基衍生物的制備方法。本發(fā)明的巖白菜素異戊烯基衍生物具有下述結(jié)構(gòu)式I或II 本發(fā)明的巖白菜素異戊烯基衍生物的制備方法是按下述步驟操作的將1份摩爾 量的先導(dǎo)化合物巖白菜素與2 5份摩爾量的溴代異戊烯和3 4份摩爾量的碳酸鉀溶于 反應(yīng)溶劑無水丙酮中，利用取代反應(yīng)，于40 80°C加熱攪拌，反應(yīng)12 48小時(shí)。待反應(yīng)完 全后回收溶劑，樣品經(jīng)硅膠層析分離，分別以體積比為95 5的氯仿-甲醇洗脫液和體積 比為90 10的氯仿-甲醇洗脫液，收集洗脫液，減壓濃縮得到巖白菜素異戊烯基衍生物化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)和化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)。本發(fā)明的制備方法中減壓濃縮可以采用本領(lǐng)域中常規(guī)的減壓濃縮方法，采用減壓 泵進(jìn)行減壓；反應(yīng)溶劑無水丙酮用量為本領(lǐng)域常規(guī)使用的劑量，其中溶劑丙酮的使用量不 影響本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)施效果，亦可以采用其它有機(jī)溶劑代替丙酮。具體反應(yīng)結(jié)構(gòu)式如下 R1 =異戊烯基，R2 = H，5-異戊烯基巖白菜素Rl = R2 =異戊烯基，5，7_ 二異戊烯基巖白菜素本發(fā)明還公開了巖白菜素異戊烯基衍生物在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā) 明得到的巖白菜素異戊烯基衍生物的抗乙肝病毒用途，與空白組相比，藥理體外實(shí)驗(yàn)表明 具有顯著的抑制2. 2. 15分泌HBsAg、HBeAg的作用。本發(fā)明以巖白菜素為先導(dǎo)化合物，利用醚化反應(yīng)，封閉母體上5位和7位上的羥 基，使其親脂性增強(qiáng)，由于改變了油水分配系數(shù)，有利于腸道吸收，因而提高療效。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1稱取巖白菜素330mg(0. 001摩爾)置于150mL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀 500mg(0. 0036摩爾)、溴代異戊烯600mg(0. 004摩爾)、無水丙酮30mL，加熱至50°C后保溫 回流反應(yīng)18小時(shí)，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5 的氯仿-甲醇洗脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為 90 10的氯仿-甲醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄 層層析檢測(cè)，合并相同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異 戊烯基巖白菜素，約190mg)和II (5-異戊烯基巖白菜素，約lOOmg)。實(shí)施例2稱取巖白菜素1. 6g (0. 005摩爾)置于250mL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀2. 5g (0. 018摩 爾)、溴代異戊烯3. 6g(0. 024摩爾)、無水丙酮150mL，加熱至60°C并保溫回流反應(yīng)24小時(shí) 后，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5的氯仿-甲醇洗 脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為90 10的氯仿-甲 醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄層層析檢測(cè)，合并相 同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素，約 800mg)和II (5-異戊烯基巖白菜素，約450mg)。實(shí)施例3
稱取巖白菜素3. 3g (0.01摩爾)置于500mL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀5. Og (0.036摩 爾)、溴代異戊烯7. 5g(0. 05摩爾)、無水丙酮300mL，加熱至70°C并保溫回流反應(yīng)36小時(shí) 后，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5的氯仿-甲醇洗 脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為90 10的氯仿-甲 醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄層層析檢測(cè)，合并相 同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素，約 1450mg)和II (5-異戊烯基巖白菜素，約920mg)。實(shí)施例4稱取巖白菜素6. 6g (0. 02摩爾)置于IOOOmL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀9. Og (0. 065摩 爾)、溴代異戊烯14. Og (0. 09摩爾)、無水丙酮600mL，加熱至80°C并保溫回流反應(yīng)48小時(shí) 后，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5的氯仿-甲醇洗 脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為90 10的氯仿-甲 醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄層層析檢測(cè)，合并相 同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素，約 2. Ig)和II (5-異戊烯基巖白菜素，約1.6g)。實(shí)施例5稱取巖白菜素6. 6g(0. 02摩爾)置于IOOOmL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀8. 28g(0. 06 摩爾)、溴代異戊烯6. 22g(0. 06摩爾)、無水丙酮600mL，加熱至40°C并保溫回流反應(yīng)48小 時(shí)后，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5的氯仿-甲 醇洗脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為90 10的氯 仿-甲醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄層層析檢測(cè)， 合并相同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白 菜素，1.8g)和II (5-異戊烯基巖白菜素，1.4g)。實(shí)施例6稱取巖白菜素6. 6g(0.02摩爾)置于IOOOmL反應(yīng)瓶中，加入碳酸鉀11. 04g(0. 08 摩爾)、溴代異戊烯7. 77g(0. 05摩爾)、無水丙酮600mL，加熱至80°C并保溫回流反應(yīng)12小 時(shí)后，待反應(yīng)結(jié)束后減壓回收溶劑。樣品經(jīng)硅膠層析分離，用體積比為95 5的氯仿-甲 醇洗脫，得到化合物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的洗脫液，用體積比為90 10的氯 仿-甲醇洗脫，得到化合物II (5-異戊烯基巖白菜素)的洗脫液。洗脫液經(jīng)薄層層析檢測(cè)， 合并相同組分后再減壓濃縮得到兩個(gè)巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白 菜素，1.8g)和II (5-異戊烯基巖白菜素，約1.4g)。巖白菜素異戊烯基衍生物I (5、7_ 二異戊烯基巖白菜素)的光譜數(shù)據(jù)FAB二MS 463 (100) [M+-H]，395 (45) [M+-H-C5H8]，327 (21) [M+-H-C5H8-C5H8]。1H-WR(MeODJOOMHz) :7· 44 (1H，s，H—4)，5. 57 (1H，t，J = 15. 4，H—2”)，5. 56 (1H， t, J = 14·6，Η-2”，)，3· 90 (3Η, s, OCH3), 3. 30 (1Η, s，H_l，), 1. 86 (9H, s，3XCH3)，1· 64 (3H， s, CH3)。13C-NMR(MeOD, 125MHz) 13C-NMR(MeOD, 125MHz) :165· 9(s，C_2)，154. 0(s, C_5)， 151. 2 (s，C-7)，150. 6 (s, C_6)，139. 9 (s, C_3” )，139. 3 (s, C_3”，)，127. 9 (s, C_8)，121. 7 (d, C-2”)，120. 3 (d, C-2”，)，120. 2 (s, C_3)，112. 5(d, C_4)，82. 5(d，C_5，) ,81. 7(d, C_2，)，75. 9 (d, C-3，) ,73. 4(d, C-1，) ,71. 9(d, C_4，)，71· 3(t，C_l”，)，66· 9(t，C_l”)，62. 3 (t， C-6，)，61. 6 (s，OCH3)，25. 9 (CH3)，25. 8 (CH3)，18. 3 (CH3)，18. 1 (CH3)。巖白菜素異戊烯基衍生物II (5-異戊烯基巖白菜素)的光譜數(shù)據(jù)FAB二MS 395 (100) [M+-H]，327 (25) [M+-H-C5H8]。1H-WR(MeODJOOMHz) :7· 33 (1H，s，H-4)，5. 46 (1H，t，J = 15. 4，H-2”)，3. 85 (3H， s, OCH3), 3. 31 (1H, s，H-l，), 1. 79 (3H, s，CH3)，1. 78 (3H，s，CH3)。13C-NMR (MeOD，125MHz) 165. 8(s, C_2)，153. 9 (s，C_5)，149. 5 (s，C_7)，143. 8 (s， C-6)，139. 8(s，C-3”)，120. 4(d，C_2”)，119. 2(s，C_8)，119. 1 (s, C-3)，108. 6 (d, C_4)， 82. 9 (d, C-5，) ,81. 7(d, C_2，) ,75. 5(d, C_3，) ,74. 0(d, C-Γ ) ,71. 8(d, C_4，) ,66. 9(t, C-1”)，62. 6 (t，C-6，) ,61. 1 (s, OCH3)，25. 9 (CH3)，18. 3 (CH3)巖白菜素異戊烯基衍生物在抗乙肝病毒方面的作用是通過體外藥理實(shí)驗(yàn)得到證 實(shí)的。實(shí)驗(yàn)巖白菜素異戊烯基衍生物體外抗乙肝病毒活性研究?jī)x器培養(yǎng)板(美國Coming公司)、二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Shel-lab公司)、超凈 工作臺(tái)(上海精密儀器儀表有限公司)。試藥按照本發(fā)明的制備方法制得5-異戊烯基巖白菜素和5、7_ 二異戊烯基巖 白菜素，實(shí)驗(yàn)時(shí)藥物用細(xì)胞培養(yǎng)液配成所需濃度；HBsAg、HBeAg檢測(cè)試劑盒由廈門英科新 創(chuàng)科技有限公司提供(批號(hào)20080632)；陽性對(duì)照藥拉夫米定購自葛蘭素威康制藥公司； 2. 2. 15細(xì)胞株購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所。方法將2. 2. 15細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整為1 X IO5個(gè)mL—1細(xì)胞，接種于24孔板，每孔lmL， 于37°C，5% CO2培養(yǎng)。培養(yǎng)24小時(shí)后加5-異戊烯基巖白菜素和5、7_ 二異戊烯基巖白菜 素及陽性對(duì)照藥拉夫米定于24孔板，每濃度3孔，第四天換相同濃度的藥物，繼續(xù)培養(yǎng)4 天。加藥后第8天分別收集細(xì)胞上清液及2. 2. 15細(xì)胞，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞上清液中 HBsAg、HBeAg的吸光度(0D值)。抗原抑制率按下式計(jì)數(shù)藥物對(duì)抗原的抑制率=[(細(xì)胞 組OD-給藥組0D) /細(xì)胞組0D] X 100 %。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表達(dá)。采用組間比較的t檢驗(yàn)方法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)軟 件采用Excel分析處理。結(jié)果5_異戊烯基巖白菜素和5、7_ 二異戊烯基巖白菜素都顯著性地抑制2. 2. 15 細(xì)胞HBsAg、HBeAg的分泌量(P < 0. 05或P < 0. 01，與空白組對(duì)比)，略低于陽性對(duì)照藥 拉夫米定，而母體化合物巖白菜素只有微弱的類似作用。2. 2. 15細(xì)胞株系國內(nèi)最為常用的 體外抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，是一個(gè)產(chǎn)生高水平HBsAg、HBeAg的細(xì)胞克隆。HBsAg是乙肝病 毒的外殼部分，是乙肝病毒早期診斷的指標(biāo)之一，人感染乙肝病毒后，人外周血中就會(huì)出現(xiàn) HBsAg。HBeAg是乙肝病毒核心成分之一，是乙肝病毒復(fù)制的重要指標(biāo)，它的大小可以判斷傳 染性大小。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，5-異戊烯基巖白菜素和5、7_ 二異戊烯基巖白菜素具有成為治 療乙型肝炎藥物的潛力。具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見下表(與空白組比較*P < 0. 05，< 0. 01)
權(quán)利要求
一種巖白菜素異戊烯基衍生物，其特征在于化合物具有下述結(jié)構(gòu)式Ⅰ或ⅡF2009100647260C0000011.tif
2.權(quán)利要求ι所述的巖白菜素異戊烯基衍生物的制備方法，其特征在于該方法包括 以下步驟以干燥后的無水丙酮為反應(yīng)溶劑，加入一定量的巖白菜素、碳酸鉀、溴代異戊烯， 加熱回流反應(yīng)，待反應(yīng)完全后回收溶劑，樣品經(jīng)硅膠層析分離，氯仿-甲醇梯度洗脫得到兩 個(gè)新的巖白菜素異戊烯基衍生物I和II。
3.根據(jù)利要求2所述的巖白菜素異戊烯基衍生物的制備方法，其特征在于該方法是 按下述步驟操作的以無水丙酮為反應(yīng)溶劑，加入1份摩爾量的巖白菜素、2 5份摩爾量 的溴代異戊烯、3 4份摩爾量的碳酸鉀，加熱至40°C 80°C并保溫回流12 48小時(shí)；待 反應(yīng)完全后回收溶劑，樣品經(jīng)硅膠層析分離，分別以體積比為95 5的氯仿-甲醇洗脫液 和體積比為90 10的氯仿-甲醇洗脫液，收集洗脫液，減壓濃縮得到巖白菜素異戊烯基衍 生物化合物I和化合物II。
4.權(quán)利要求1所述的巖白菜素異戊烯基衍生物在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種巖白菜素異戊烯基衍生物及其制備方法和應(yīng)用?；衔锞哂邢率鼋Y(jié)構(gòu)式Ⅰ或Ⅱ其合成方法為為先導(dǎo)化合物巖白菜素在無水丙酮中與溴代異戊烯發(fā)生醚化反應(yīng)，然后經(jīng)硅膠層析分離得到產(chǎn)品化合物。本發(fā)明的巖白菜素異戊烯基衍生物Ⅰ和Ⅱ具有抗乙型肝炎病毒的作用。
文檔編號(hào)C07D493/04GK101870701SQ20091006472
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月27日
發(fā)明者余海尤, 申進(jìn)文, 阮元, 麻兵繼 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)