專利名稱：：線紋香茶菜中提取原兒茶酸-3-O-(6-鄰羥基苯甲?；?-β-D-葡萄糖苷及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?_13-D-葡萄糖苷及其制備方法。二
背景技術(shù)：
：線紋香茶菜Rabdosialophanthoides(Buch.-Ham.exD.Don)Hara.，又名熊膽草、因陳草、土黃蓮、溪黃草，多年生草本，為唇形科香茶菜屬植物，廣泛分布于西藏、云南、四川、貴州、廣西、廣東、福建、江西、湖南、湖北及浙江等地。全草入藥。線紋香茶菜可治療急性黃疸型肝炎、急性膽囊炎、咽喉炎、婦科病、瘤型麻瘋，尚可解草烏中毒。民間多用作治療急性黃疸型肝炎、咽喉炎、婦科病、急性膽囊炎、腸炎、胃炎和乳腺炎。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，該屬植物具有較強(qiáng)的抗菌、消炎、抗癌作用。據(jù)臨床試驗(yàn)表明，它的毒性很低，是一類具有潛在應(yīng)用前景的天然藥物。近年，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其脂溶性部位進(jìn)行了較多研究，而對(duì)其水溶性成分研究則少見(jiàn)報(bào)道，為了進(jìn)一步探討香茶菜屬植物中具有抗菌、抗癌等生理活性的化學(xué)成分，并對(duì)同屬植物冬凌草的種質(zhì)資源評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)，特對(duì)線紋香茶菜中水溶性成分進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從線紋香茶菜全草中分離并鑒定出一個(gè)新的化合物是完全必要的，是需要?jiǎng)?chuàng)造性解決的技術(shù)問(wèn)題。三
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的就是提供一種從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?_13-D-葡萄糖苷及其制備方法，可有效解決從線紋香茶菜中提取原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?_13-D-葡萄糖苷的問(wèn)題，其解決的技術(shù)方案是，原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13-D-葡萄糖苷，分子式C2。H2。0n，結(jié)構(gòu)式是其熔點(diǎn)(mp)為262-263°C，其制備方法是將新鮮線紋香茶菜全草，室溫15_25°C下在閃式提取器(常用提取設(shè)備)中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次15-20分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，用水溶解，離心，上清液上凝膠ToyopearlHW-40C柱，依次用水、10%甲醇、2Q%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄4層板(薄層板為公知常用試劑板)上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色劑(三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色劑為公知常用顯色劑)噴霧，得顯藍(lán)色的流分(即當(dāng)展開(kāi)后的洗脫液，在顯色劑噴霧后，顯示藍(lán)色時(shí)的液體，以下同)，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到無(wú)色固體化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-|3-D-葡萄糖苷。本發(fā)明產(chǎn)品是一種新的化合物，其制備方法先進(jìn)、科學(xué)，易操作，經(jīng)對(duì)河南、云南、廣西、湖南及浙江的線紋香茶菜樣品按上述方法經(jīng)反復(fù)應(yīng)用制備，均取得了相同或相近似的結(jié)果，表明本發(fā)明穩(wěn)定可靠，可有效用于對(duì)各地從線紋香茶菜中提取原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲酰基)_13-D-葡萄糖苷，開(kāi)拓了線紋香茶菜藥用價(jià)值，提高了藥效，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。四圖1為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲?；?-.e-D-葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)圖；圖2為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲酰基)-.e-D-葡萄糖苷的力-NMR圖譜圖3為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲酰基)-.e-D-葡萄糖苷的13C_NMR圖譜圖4為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲酰基)-.e-D-葡萄糖苷的HSQC圖譜；圖5為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲?；?-.e-D-葡萄糖苷的HMBC圖譜；圖6為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲?；?-.e-D-葡萄糖苷的IR圖譜；圖7為原兒茶酸-3--o-(6-鄰羥基苯甲?；?-.e-D-葡萄糖苷的uv圖譜。五具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明所用的樣品為唇形科香茶菜屬植物線紋香茶菜(Rabdosialophanthoides(Buch.-Ham.exD.Don)Hara.)。柱層析硅膠(160-200目)由青島海洋化工廠生產(chǎn)，DiaionHP-20、MCIGelCHP-20填料系三菱化學(xué)公司生產(chǎn)，ToyopearlHW-40填料系日本T0S0H公司生產(chǎn)，S印hadexLH-20系A(chǔ)mershamBiosciences公司生產(chǎn)，所用分析純?cè)噭楸本┗S和天津第三化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，閃式提取器由北京金鼐科技發(fā)展有限公司提供。實(shí)施例l將河南產(chǎn)新鮮線紋香茶菜全草6.0kg，室溫2rC下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次15分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉19.6g，用水溶解，離心，上清液上凝膠Toyopearl冊(cè)-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13D-葡萄糖苷12mg。實(shí)施例2將云南或廣西產(chǎn)新鮮線紋香茶菜全草8.0kg，室溫23t:下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次18分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉25.8g，用水溶解，離心，上清液上凝膠ToyopearlHW-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠Toyopearl冊(cè)-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13-D-葡萄糖苷15mg。實(shí)施例3將湖南或浙江產(chǎn)的新鮮線紋香茶菜全草10.0kg，室溫25t:下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次20分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉33.0g，用水溶解，離心，上清液上凝膠ToyopearlHW-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13-D-葡萄糖苷19mg。對(duì)上述產(chǎn)品經(jīng)分析研究，本發(fā)明的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲酰基)_13-D-葡萄糖苷的有關(guān)情況解析如下原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-P-D-葡萄糖苷，無(wú)色固體，熔點(diǎn)mp.262-263°C;易溶于甲醇。三氯化鐵_鐵氰化鉀顯藍(lán)色，提示該化合物中含有酚羥基。HR-ESI-MSm/z:459.0909[M+Na]+(計(jì)算值459.0903)，分子式C2。H2。0n。UV(圖7):入隨Me。Hnm(loge):214，235，310nm;IR(KBr)(圖6):u隨cm—1:3446，2920，1678，1615，1488，1212，1069。力-NMR譜(圖2)中，芳香區(qū)出現(xiàn)7個(gè)氫質(zhì)子信號(hào)，提示可能存在兩個(gè)苯環(huán)，其中S7.57(1H，d，J=2.5Hz)，7.14(1H，dd，J=8.9，2.5Hz)，6.65(1H，d，J=8.9Hz)為苯環(huán)上的ABX系統(tǒng)，其余4個(gè)氫為另一個(gè)苯環(huán)上的氫信號(hào)。S4.82(lH，d，J=7.3Hz)為葡萄糖的端基氫信號(hào)，且根據(jù)其偶合常數(shù)判斷取代類型為P型。"C-NMR譜(圖3)中，S103.3，74.9，77.8，71.9，75.2，65.6為一組葡萄糖的信號(hào)峰。此外還有14個(gè)碳信號(hào)，其中S171.1,175.6為羰基的信號(hào)峰，其余12個(gè)碳為兩個(gè)苯環(huán)上的信號(hào)峰。HMBC譜(圖5)中，S4.82(1H，d，J=7.3Hz)的氫與S150.8處的碳相關(guān)，提示葡萄糖連在1'位；S4.71(1H，dd，J=2.O，ll.7Hz)，4.45(1H，dd，J=7.l，ll.7Hz)處的氫和S171.l處的碳相關(guān)，提示羰基連在葡萄糖的6位上，且S7.83(lH，t，J=7.2Hz)處的氫與S171.1的碳相關(guān)，提示羰基連在1〃位。結(jié)合紅外和質(zhì)譜我們判斷出了羧基的存在。綜上，該化合物的結(jié)構(gòu)是原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲酰基)-|3-D-葡萄糖苷(protocatechuicacid_3_0_(6_0_hydroxy_benzoylphenyl)_P_D_glucopyranoside)，經(jīng)文獻(xiàn)檢索未見(jiàn)報(bào)道，確定其為一新的天然化合物。下表為化合物原兒茶酸_3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-P-D-葡萄糖苷的丄H-NMR(400MHz,CD30D)和13C-NMR(100MHz，CD30D)數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注該表給出了該化合物的碳?xì)錃w屬，證明結(jié)構(gòu)解析的正確性。權(quán)利要求一種從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-O-(6-鄰羥基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷，其特征在于分子式是C20H20O11，結(jié)構(gòu)式為F2009100659094C00011.tif2.權(quán)利要求l所述的從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13-D-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于，將新鮮線紋香茶菜全草，室溫15-25t:下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次15-20分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，用水溶解，離心，上清液上凝膠Toyopearl冊(cè)-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到無(wú)色固體化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-|3-D-葡萄糖苷。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-13-D-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于，將河南產(chǎn)新鮮線紋香茶菜全草6.Okg，室溫2rC下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次15分鐘，合并提取液，于45°C減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉19.6g，用水溶解，離心，上清液上凝膠ToyopearlHW-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠Toyopearl冊(cè)-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-|3-D-葡萄糖苷12mg。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-P-D-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于，將云南或廣西產(chǎn)新鮮線紋香茶菜全草8.Okg，室溫23t:下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次18分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉25.8g，用水溶解，離心，上清液上凝膠ToyopearlHW-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW_40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-!3-D-葡萄糖苷15mg。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲?；?-P-D-葡萄糖苷的制備方法，其特征在于，將湖南或浙江產(chǎn)的新鮮線紋香茶菜全草10.Okg，室溫25t:下在閃式提取器中用50%丙酮組織破碎提取2次，每次20分鐘，合并提取液，于45t:減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上大孔吸附樹(shù)脂DiaionHP-20柱，依次用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用20%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，最后用30%甲醇沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30%甲醇洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥后得到干粉33.0g，用水溶解，離心，上清液上凝膠Toyopearl冊(cè)-40C柱，依次用水、10%甲醇、20%甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵_鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，收集該流分得到組分A，將組分A依次通過(guò)凝膠ToyopearlHW-40c柱、凝膠S印hadexLH-20柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，得到化合物原兒茶酸-3-0-(6-鄰羥基苯甲酰基)-13-D-葡萄糖苷19mg。全文摘要本發(fā)明涉及從線紋香茶菜中提取的原兒茶酸-3-O-(6-鄰羥基苯甲?；?-β-D-葡萄糖苷及其制備方法，有效解決從線紋香茶菜中提取原兒茶酸-3-O-(6-鄰羥基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖苷的問(wèn)題，將線紋香茶菜全草在用丙酮組織破碎提取，制得干粉，干粉用水溶解，離心，上清液上樹(shù)脂柱，用水沖柱至洗脫液流出無(wú)色、用10％、20％、30％甲醇分別沖柱至洗脫液流出無(wú)色，收集30％甲醇洗脫液，制得干粉，用水溶解，離心，上清液上凝膠柱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇沖柱，得洗脫液，將洗脫液點(diǎn)滴在薄層板上展開(kāi)，展開(kāi)后用三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色劑噴霧，得顯藍(lán)色的流分，該流分依次通過(guò)凝膠柱、硅膠柱、MCIGelCHP-20柱，即得，本發(fā)明是新的化合物，易操作，穩(wěn)定可靠，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。文檔編號(hào)C07H15/203GK101709071SQ200910065909公開(kāi)日2010年5月19日申請(qǐng)日期2009年8月24日優(yōu)先權(quán)日2009年8月24日發(fā)明者馮衛(wèi)生,王小蘭,臧新鈺,鄭曉珂申請(qǐng)人:河南中醫(yī)學(xué)院