專利名稱：整合素配體環(huán)肽類似物及其環(huán)化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)肽類似物及其環(huán)化方法，更具體的說，是涉及整合素配體環(huán)肽類似物及其 環(huán)化方法。
背景技術(shù)：
腫瘤生長的一個明顯特點是通過刺激血管內(nèi)皮細胞分泌各種生長因子，進一步促進腫瘤 血管快速生長，使細胞有足夠的供血而惡性生長。腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移是一個依賴于血管的過 程，通常腫瘤直徑小于2 3mm時可通過腫瘤周圍血管的彌散獲得所需要的營養(yǎng)。腫瘤增大， 則需要新生血管的形成供給其營養(yǎng)。早在1971年，美國科學(xué)家Folkman等提出可通過阻斷 腫瘤血管的生成抑制腫瘤的生長，防止腫瘤的轉(zhuǎn)移。根據(jù)這一假說，研究人員希望通過切斷 血管、斷絕腫瘤的血液供給使腫瘤的生長受阻，達到阻止腫瘤血管瘋長的目的，并最終使癌 細胞"斷奶"饑餓而死亡。
整合素(integrin)是一類由a亞基和0亞基經(jīng)非共價鍵連接而成的異二聚體跨膜糖蛋 白粘附分子，包括較短的細胞質(zhì)內(nèi)羧基末端、跨膜段和較長的細胞外氨基末端。它在多種腫 瘤細胞表面和新生血管內(nèi)皮細胞上有高表達，但在成熟血管內(nèi)皮細胞和絕大多數(shù)正常器官系 統(tǒng)中，整合素不表達或者很少量的表達。目前已知至少有14種a亞基和9種e亞基，組成 的整合素已達20余種亞型。在細胞內(nèi)區(qū)，P鏈介導(dǎo)整合素與細胞骨架蛋白及其他細胞質(zhì)成 分的相互作用。整合素具有兩種主要功能 一種是通過與相應(yīng)配體結(jié)合介導(dǎo)細胞與基底膜、 細胞與細胞的粘附，這是其主要作用；另一種是作為細胞內(nèi)外信息傳遞的橋梁， 一方面細胞 內(nèi)的信號調(diào)節(jié)整合素與其配體的親和力和活性狀態(tài)，另一方面整合素與其配體結(jié)合后向細胞 內(nèi)傳遞信號，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。整合素受體通過與細胞外基質(zhì)蛋白(如玻基結(jié)合素等)的受 體識別序列RGD (精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)特異結(jié)合，介導(dǎo)腫瘤細胞粘附和遷移，在腫瘤 生長、局部浸潤、轉(zhuǎn)移，特別是腫瘤誘導(dǎo)的血管生成過程中發(fā)揮重要作用。
上述研究結(jié)果為設(shè)計含有RGD序列的整合素受體小分子拮抗肽、用作選擇性腫瘤靶向顯 像劑或治療制劑奠定了充分的理論基礎(chǔ)。因此，在過去的十幾年中，許多課題組(Haubiier et al. J. Am. Chem. Soc. 118: 7461 — 7472, ]996; Ha誦es et al. Nature Med. 2:529—533,1996;Wermuth et al. J. Am. Chera. Soc. 199: 1328-1335, 1997; Dechantsreiter et al. Med. Chem. 42: 3033-3040, 1999;)先后設(shè)計出一系列的含RGD序列的多肽，其中比較有代表 性的是Kessler課題組設(shè)計合成的cRGDfK， cRGDfV及其甲基化的類似物cRGDfV(Me) (Figure 1.)。以cRGDfK為例，他們采用的方法是先在Fmoc樹脂上合成出線性的，側(cè)鏈保護的RGDfK， 然后將線性肽從樹脂上切下來環(huán)化，最后去掉側(cè)鏈保護基團。由于環(huán)化時是普通的酰胺鍵縮 合反應(yīng)，環(huán)化產(chǎn)率較之普通的酰胺鍵縮合大為降低。另外，有時還需要某些有毒的惡臭的試 劑，如二苯基磷酰基疊氮化物(diphenylphosphoryl， DPPA)，苯甲硫醚(thioanisole),乙 二硫醇(ethanedithiol),因此，需要尋找一種反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)率較高的環(huán)化方法。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種新型整合素配體環(huán)肽類似物，本發(fā) 明更進一步的目的是提供該整合素配體環(huán)肽類似物的環(huán)化方法。 為了解決以上問題，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)。
本發(fā)明提供了一種整合素配體環(huán)肽類似物，其結(jié)構(gòu)如下
本發(fā)明還提供了前述整合素配體環(huán)肽類似物的環(huán)化方法，包括以下步驟(1)將芴甲
氧^基-炔丙酰-天冬氨酸(Fmoc-Asp-propargyl)掛在2-氯三苯甲基氯樹脂(2-CTC樹脂) 上，合成線性的四肽類似物
稱取lg2-CTC樹脂于固相反應(yīng)器中，加二氯甲烷(DCM) 15ml溶脹，洗滌樹脂；往溶脹 好的樹脂中加Fmoc-Asp-propargyl和N,N'-二異丙基乙胺(DIPEA)，室溫下反應(yīng)2.5小時， 用3X20 ml的乙酸乙酯(EA)和10ml的水洗滌；用20%的哌啶/二甲基酰胺(DMF)溶液脫除芴 甲氧羰基(Fmoc)，反應(yīng)20分鐘；用3X20 ml的EA和10ml的水洗滌，加入芴甲氧羰基-甘氨
Xaa^ly,Ala^Leu,Ile,Cys,Met，Asp，Asn, Glu,Lys,Arg,His,Phe，Tii),Pro,O,Gly國Gly.
5酸(Fmoc-Gly-OH)、苯并三氮唑-N, N, N' ， N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)和N-甲基嗎啉(N腦) 至反應(yīng)器中，反應(yīng)2小時，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用3X20 ml的EA和10ml的水洗滌；用 2(W的哌卩定/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘；用3X20 ml的EA和10ml的水洗滌；
采用相同的操作步驟，依次縮合芴甲氧羰基-2， 2， 4， 6， 7-五甲基苯并呋喃-5-磺?；?精 氨酸[Fmoc-Arg(Pbf)-0H]、 Fmoc-Xaa-0H和疊氮甘氨酸(Azido-glycine)生成線性的四 肽類似物。
(2)環(huán)化
將線性的全保護的四肽類似物從樹脂上切下來，用裂解液2:8的三氟乙酸/二氯甲烷 (TFA/DCM)及數(shù)滴乙酸(AcOH)，裂解2小時，旋干裂解液；在DCM作溶劑，溴化亞銅/1， 8 一二氮雜環(huán)環(huán)(5， 4， 0) 7 —十一烯(CuBr/DBU)作催化劑的液相條件及室溫下反應(yīng)4 6小時， 反應(yīng)后旋去DCM，加裂解液去除側(cè)鏈保護裂解2小時，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，離心除去 上清液得到固體，即為最終產(chǎn)物整合素配體環(huán)肽。
作為一種改進，為了能用ClickChemistry方法，所述Fmoc-Asp-propargyl通過以下方 式制得
將0. 93 g的芴甲氧羰基-天冬氨酸-S -叔丁酯[Fmoc-Asp(0tBu)-0H]溶于四氫呋喃(THF) 25 ml中，然后依次加入2.49 g N，N' -二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和1.62 g的1-羥基苯并三 氮唑(H0Bt);炔丙胺(0. 165g)以5 ml THF混勻后加入反應(yīng)器中，反應(yīng)2h，用茚三酮指示 劑檢測反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用3X20 ml的EA和10ml的水洗滌；用體積比為2:3的TFA/DCM去除側(cè)鏈 羧基保護基團0tBu,用3X20ml的EA和10ml的水洗滌；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸出溶劑，真空干燥得到白 色固體，艮卩Fmoc-Asp-p:ropa:rgyl。
作為一種改進，為了能用Click Chemistry方法，所述疊氮甘氨酸(Azido-glycine)通 過以下方式制得
(1) 將6g疊氮鈉(NaN3)溶解于150ml的圓底燒瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷卻至 (TC，攪拌20分鐘；反應(yīng)混合物用2X12ml的DCM萃??；合并有機相，用飽和碳酸鈉(NaHC03) 洗滌，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰疊氮，無需進一步純化直接加入下一步反應(yīng)使用；
(2) 將0.675 g甘氨酸、1.783 g的碳酸鉀(K2C03) 、 0.0226 g的硫酸銅(CuS04)加 入到圓底燒瓶中，再加入30ml水、60 inl甲醇和48 ml含有三氟甲磺酰疊氮的DCM，在室溫下 攪拌，反應(yīng)24小時；隨后將反應(yīng)混合物減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，剩下的部分用150 ml 水稀釋，然后用鹽酸調(diào)pH值至6，加磷酸緩沖液稀釋，再用4X60 ml的EA萃取以去除有機相 中的磺胺副產(chǎn)物；水相再用鹽酸調(diào)pH值至2，用3X60 ml EA萃??；合并有機相，用硫酸鎂(MgS0j 干燥，減壓干燥，得到金黃色的油狀液體，即為Azido-glycine.對最終產(chǎn)物整合素配體環(huán)肽的純化可采用以下方式
高效液相制備色譜C18柱，A相HTFA/水溶液，B相乙腈，粗肽線性及環(huán)化均為 5%-35%B， 20min梯度，梯度根據(jù)分析色譜出峰時間確定。
本發(fā)明的合成路線是
首先甘氨酸在三氟甲磺酸酐、疊氮鈉的作用下生成Azido-glycine, Fmoc-Asp(tBu)-OH 在溶液中與炔丙胺縮合生成Fmoc-A印-Propargyl，然后將炔丙酰天冬氨酸的側(cè)鏈羧基掛在 2-CTC樹脂上后依次縮合Fmoc-Gly-0H、 F陽c-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Xaa-OH和Azido-glycine 生成線性的四肽類似物，再將線性的四肽類似物從樹脂上切下來，在液相的條件下(DCM作 溶劑，CuBr/DBU作催化劑)，室溫下反應(yīng)4-6小時合成環(huán)肽類似物環(huán)[-精氨酸-甘氨酸-天冬 氨酸-三唑環(huán)代-甘氨酸-可變氨基酸-]BPCyclo [-Arg -Gly-Asp- V (triazole) -Gly-Xaa-]。
環(huán)肽類似物cycl0[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Xaa-]的合成路線(Scheme 1.)是
Fmoc
>=NH 5
pbf HN
Xaa-Gly，AlaJxu,Ile,Cys,Met,Asp,Asn^ ;f Glu,Lys,Arg,His,Phe,Trp,Pro,O,Gly-Gly. pu'
7 6
Scheme 1. Strategy for synthesis of cyclo [-Arg-Gly-Asp-V(triazole)-Gly-Xaa-]. Reagents and conditions: (i) (1) DCC/HOBt, THF, pH=7, r丄，2h; (2)TFA/DCM= 2:3 (V:V); (ii) TBTU, N廳，20°C 40°C， 2h 4h; (iii) (1) 20% piperidine/DMF， 30 60 min; (2) EDC/H0Bt， DIPEA, r. t. ， 4h 6h; (iv) CuBr/DBU=l: 3, DCM， r. t. ， 6h; (2) TFA/H20/TIPS=95:2. 5:2. 5.
71.疊氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成路線(Scheme 2.)是
H2N-
9\K2C。3， CuS04 義
、、-OH ^~^-^ VOH
MeOH， H20 n3-overnight， rt
Scheme 2. Synthesis of Azido-glycine.
2.炔丙酰天冬氨酸(Fmoc-Asp-Propargyl)的合成路線(Scheme 3.)是
Fmoc rt、 qhn
Fmocq ^ Fmos，2 DCC HOBt —人TFA HN
、| THF, 2h，r丄 |^ H DCM，lh,r.t. I HC。2舊u 川 C02Bu
殳J
COOH3
Scheme 3. Synthesis of Fmoc-Asp-Propargyl3.環(huán)化路線(Scheme 4.)是
NH
Hty人pbf
、NH
HO、
、0
O H。、
Oh 。
NY。
r^N3 CuB"leq.)/DBU(3，.)
—O L i DCM,r.t.,6h、N' v。。廣N八0hXaa h
Scheme 4. Synthesis for a series of cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Xaa-
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是(l)本發(fā)明中的整合素配體環(huán)肽類似物引入了氮雜環(huán)(三唑環(huán))，可能會增加生物活性;
NaN3
-F3C、 ，3
DCM, H20 n々、CTC, 2h Q o1
3
Lr
c
o=s=or。
c、 o
3
F(2)本發(fā)明的整合素配體環(huán)肽類似物的環(huán)化方法更加簡便、高效，條件溫和。
具體實施例方式
下面通過具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
1. 疊氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成(根據(jù)重氮轉(zhuǎn)移的原理)1.1三氟甲磺酰疊氮的制備
將疊氮鈉(6g)溶解于150 ml的圓底燒瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷卻至0'C，攪拌20分鐘。反應(yīng)混合物用DCM萃取(2X12 ml).合并有機相，用飽和碳酸鈉洗滌，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰疊氮，無需進一步純化直接加入下一歩反應(yīng)使用。
1.2疊氮甘氨酸的制備
將甘氨酸(0.675 g) ， K2C03 (1.783 g) ， CuS(X (0.0226 g)加入到圓底燒瓶中，再加入水(30 ml)，甲醇(60 ml)和含有三氟甲磺酰疊氮的DCM(48 ml)，在室溫下攪拌，反應(yīng)過夜。隨后，將其減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，剩下的部分用水(150 ml)稀釋.然后用鹽酸調(diào)pH值至6，加磷酸緩沖液稀釋，再用EA(4X60 ml)萃取以去除有機相中的磺胺副產(chǎn)物。水相再用鹽酸調(diào)pH值至2，用EA萃取(3X60ml).合并有機相，用MgS04干燥，減壓干燥，得到金黃色的油狀液體。
2. 炔丙酰天冬氨酸的制備
將Fmoc-Asp(0衡)-OH (0.93 g)溶于THF (25 ml)加入100 ml的圓底燒瓶中，然后依次加入DCC, (2.49 g)和HOBt(1.62 g).炔丙胺用THF (5 ml)混勻后加入反應(yīng)器中，反應(yīng)2h，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用EA (3X20ml)和水(10ml)洗滌。用TFA/DCM (V: V=2:3)去除側(cè)鏈羧基保護基團OtBu，用EA(3X20ml)和水(10ml)洗滌。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸出溶劑，真空干燥得到白色固體，艮卩F腦-Asp-propargyl。
3. 將Fmoc-Asp-propargyl掛在2-CTC樹脂上，合成線性的四肽類似物稱取lg2-CTC樹脂于固相反應(yīng)器中，加DCM15ml溶脹，洗滌樹脂。往溶脹好的樹脂中
加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA，室溫下反應(yīng)2. 5小時，用EA (3X20 ml)和水(畫)洗滌。用2(f/6的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘。用EA(3X20 ml)和水(10ral)洗滌，加入Fmoc-Gly-0H、 HBTU和N腿至反應(yīng)器中，反應(yīng)2小時，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用EA (3X20ml)和水(10nil)洗滌。用20X的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘。用EA (3X20ml)和水(10ml)洗滌。采用相同的操作步驟，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-OH、 Fmoc-Xaa-0H和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
4. 環(huán)化將線性的全保護的四肽類似物從樹脂上切下來，用裂解液TFA/DCM (2:8),
9可加幾滴AcOH，裂解2小時，旋干裂解液。在液相的條件下(DCM作溶劑，CuBr/DBU作催化劑)，室溫下反應(yīng)4-6小時，反應(yīng)后旋去DCM，加裂解液去除側(cè)鏈保護裂解2h，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，離心除去上清液得到固體，即環(huán)肽類似物Cyclo[-Arg-Gly-Asp-Mf (triazole)- Gly-Xaa-]，送分析純化。5.純化條件
分析高效液相分析色譜(RP-HPLC) ， C18柱，流動相A相l(xiāng);TFA/水溶液。B相乙腈，粗肽線性及環(huán)化均為5義-35y。B，20min梯度。紫外檢測波長為210nm。純化高效液相制備色譜C18柱，A相和B相均與分析條件一樣。
實施例1:
1. Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Gly-] (7a)的合成
1. 疊氮甘氨酸(Azido-glycine)的合成(根據(jù)重氮轉(zhuǎn)移的原理)1.1三氟甲磺酰疊氮的制備
將疊氮鈉(6g)溶解于150 ml的圓底燒瓶中，再加入24ral的DCM，冰浴冷卻至0'C，攪拌20分鐘。反應(yīng)混合物用DCM萃取(2X12ml).合并有機相，用飽和碳酸鈉洗滌，即得到溶解于二氯甲烷的三氟甲磺酰疊氮，無需進一步純化直接加入下一步反應(yīng)使用。1.2疊氮甘氨酸的制備
將甘氨酸(0.675 g) ， K2C03 (1.783 g) ， CuS04 (0. 0226 g)加入到圓底燒瓶中，再加入水(30ml)，甲醇(60 ml)和含有三氟甲磺酰疊氮的二氯甲烷(48 ml)，在室溫下攪拌，反應(yīng)過夜。隨后，將其減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，剩下的部分用水(150 ml)稀釋.然后用鹽酸調(diào)pH值至6，加磷酸緩沖液稀釋，再用EA(4X60 ml)萃取以去除有機相中的磺胺副產(chǎn)物。水相再用鹽酸調(diào)pH值至2，用EA萃取(3X60ml).合并有機相，用MgS04干燥，減壓干燥，得到金黃色的油狀液體。
2. 炔丙酰天冬氨酸的制備
將Fmoc-Asp(OtBu)-OH (0.93 g)溶于THF (25 ml)加入100 ml的圓底燒瓶中，然后依次加入DCC (2.49 g) and H0Bt(1.62 g).炔丙胺用THF (5 ml)混勻后加入反應(yīng)器中，反應(yīng)2 h，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用EA (3X20 ml)和水(10ml)洗滌。用TFA/DCM (V: V二2:3)去除側(cè)鏈羧基保護基團OtBu.，用EA (3X20ml)和水(lOml)洗滌。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸出溶劑，真空干燥得到白色固體，即Fmoc-Asp-propargyl。
3. 將Fmoc-Asp-propargyl掛在2-CTC樹脂上，合成線性的四肽類似物200910096516.X
稱取lg 2-CTC樹脂于固相反應(yīng)器中，加DCM 15ml溶脹，洗滌樹脂。往溶脹好的樹脂中加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA室溫下反應(yīng)2.5小時，用EA (3X20 ml)和水(10ml)洗滌。用2(M的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘。用EA (3X20ml)和水(10ml)洗滌，加入Fmoc-Gly-0H、 HBTU和NMM至反應(yīng)器中，反應(yīng)2小時，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用EA(3X20ml)和水(10ml)洗滌。用2(W的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc,反應(yīng)20分鐘。用EA(3X20ml)和水(10iTil)洗滌。采用相同的操作步驟，依次縮合Fraoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Gly-OH和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
4. 環(huán)化將線性的全保護的四肽類似物從樹脂上切下來，用裂解液TFE/DCM (2:8)，可加幾滴AcOH，裂解2小時，旋干裂解液。在液相的條件下(DCM作溶劑，CuBr/DBU作催化劑)，室溫下反應(yīng)4-6小時，反應(yīng)后旋去DCM，加裂解液去除側(cè)鏈保護裂解2小時，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，離心除去上清液得到固體，即環(huán)肽類似物Cyclo[-Arg-Gly-Asp- w (triazole)-Gly-Gly-]，送分析純化。
5. 純化條件
分析高效液相分析色譜(RP-HPLC) , C18柱，流動相A相HTFA/水溶液。B相乙腈，粗肽線性及環(huán)化均為5%-35%B, 20min梯度。紫外檢測波長為210nm。純化高效液相制備色譜C18柱，A相和B相均與分析條件一樣。
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Gly-] (7a). White solids, mp: 162-164 。C;《=+23. 2 (c = 1. 0 in CHC13) ; NMR (500 MHz， DMS0-4) : S 1. 40 (2H， d)' 1. 50-1. 56 (1H,m), 1.71-1.79 (1H， m), 2.71-2.77 (2H， m)， 3.07-3.11 (2H, m) ， 3.48 (1H, /=5.0Hz,d), 3.69 (1H, /= 5.8 Hz, d), 3.79-3.89 (2H, m), 4.26 (2H， /= 14.2, 6.9 Hz, dd)，4.45 (2H， s), 4.54 (2H' /=6.3Hz， d)， 5.05 (1H， s), 5.29 (1H, s), 7.50 (1H, s),7.68 (2H， s)， 7.83 (1H' /=5.9Hz， d)， 8.03 (1H， /= 8. 7 Hz, t) ， 8.28 (1H, /=5.9Hz, d), 8. 42 (1H, 7. 1 Hz, t), 8. 84 (1H, 5. 8 Hz， t) ; 13C醒R (125 MHz, DMSO-oO :S 26.2， 26.6, 29.6， 35.3, 35.9, 36.5， 42.9, 43.3, 44.3， 51.5, 52.8， 124.4， 157.8,167.8， 169.7, 170.0, 171.7， 172.5, 172.8; IR (KBr, cm—1): 3393, 3073, 2932' 1667, 1538,1417， 1331， 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C19H3。Nu07 (M+H)+， 524.2341， Found524. 2369.實施例2:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-W (triazole)-Gly-Ala-] (7b)的合成本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
11第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧羰基-丙氨酸(Fmoc-Ala-0H)和
Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg—Gly—Asp—V (triazole)-Gly—Ala—] (7b). White solids, mp: 164—165 °C: ["E=+56.3 (c = 1.0 in CHC13);力NMR (500 MHz， DMS0-oQ : S 1.23 (1H, / = 6. 3 Hz， d)，1.28 (2H, /=7.0Hz， d)， 1.38-1.45 (2H， m)， 1.87-1.93 (2H， m) ， 2.67-2.75 (2H， m)，2.89 (2H' s)， 4.12-4.19 (3H， m)， 4,21 (1H' / = 5.0 Hz, d), 4.28 (IH， / = 6.3 Hz，d)， 4.39 (1H,14.3， 7.2 Hz, dd), 4.40 (IH， /= 7. 1 Hz, d), 5.07 (IH， / = 6.3Hz, d), 5.27 (1H, /= 16.6 Hz， d)， 6.92 (2H， s)， 7.36 (2H， s)， 7.63 (1H, s)， 7.88(1H, /=7.8Hz， d)， 8.26 (1H, /=8.5Hz， d)， 8.35 (1H， /=6.9Hz， t)' 8.48 (1H,/=7.5Hz， d)' 8.78 (1H， /=5.8Hz, d)， 12.38 (1H, s) ; 13C NMR (125MHz, DMS0-cQ :S 18.6, 24.5， 26.2' 27.1' 29.4, 30.0, 32.9， 36.1' 43.0， 49.1, 51.2， 54.6' 124.5，157.8, 169.9, 170.2, 171.7' 172.8, 173,0， 173.6; IR (KBr， cm—1): 3361， 3063， 2980，2936, 1673, 1538， 1426, 1384， 1326, 1202, 1133， 1058; HRMS: Calcd for C2。H32Nu07 (M+H)+，538.2481, Found, 538.2468.實施例3:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole) -Gly-Leu-] (7c)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-亮氨酸(Fmoc-Leu-OH)和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[_Arg_Gly_Asp_ilf (triazole)-Gly-Leu-] (7c). White solids, mp: 167-169 °C;[《=-61.2 (c = 1.0 in CHC13); 'H醒R (500MHz,函S0-4) : S 0.86 (3H, /= 6.5 Hz, d)，0.91 (3H， /=6.5Hz, d), 1.47-1.55 (5H， m), L69-1.76 (2H' m)， 2.74-2.82 (2H, m)'3.09 (2H, /= 6.8 Hz, t), 3.94 (1H, 6.8 Hz， d) ， 4.05 (2H， s)， 4.21 (1H, s)，4.44 (IH， 14.1, 7.1 Hz， dd), 4.65 (1H, _/= 16.3 Hz, d)， 5.03 (IH， / =6.3 Hz,d), 5.28 (IH， /=6.3Hz， d)， 6.93 (2H， s), 7.37 (2H, s) ， 7.61 (IH， s)， 7.86 (1H,/= 7. 5 Hz， d), 8.09他6.0 Hz, t) ， 8.35 (IH， /= 6.6 Hz， d)， 8.47 (1H, / =7.7 Hz， d)， 8.63 (IH， 6.6 Hz， d) ， 12.22 (1H， s) ; '3C腿(125MHz， DMS0-c/《) S22.1， 23.7, 24.9， 25.7' 30.1' 35.7, 36.3' 42.6, 50.7, 52.6, 52.7' 53.8, 123.7, 147.0,157.4， 167.0, 169.4， 171.2， 172.3， 172.5, 172.8; IR (KBr， cnf1) : 3404， 3084, 2959， 2871， 1667' 1538， 1470， 1417, 1384， 1202， li38, 1057， 1019; HRMS: Calcd for (:2孔81^07 (M+H)+' 580.2939. Found, 580.2975. 實施例4:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Ile-] (7d)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基_異亮氨酸(Fmoc-Ile-OH)和 Az i do-gl yci ne生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[—Arg-Gly—Asp—￥ (triazole)-Gly-Ile-] (7d). Yellow solids, mp: 167-168 °C; [a￡5 =+25.3 (c = 1. 0 in CHC13) ; 醒R (500MHz, DMS0-: S 0.82-0.91 (6H, m)' 1.40-1.47 (4H， m)， 1.62-1.74 (2H， m)， 1.80-1.87 (1H, m)， 2.74-2.81 (2H, m)， 3.09 (2H， 6. 3 Hz， d), 3.95 (IH' /= 6.4 Hz， d)， 4.02 (2H, 7.0 Hz， d)， 4.10 (1H, ./= 5.3 Hz, d)， 4.44 (1H, /= 14.2' 7. 5 Hz, dd), 4.88 (1H, s) ， 5.11 (1H, s)， 5.28 (1H, /= 16.1 Hz, d), 6.95 (2H' s)， 7,37 (2H, s)' 7.63 (1H， s), 8.11 (IH， / = 6.3 Hz， d), 8.27 (1H, /=8.4Hz， t), 8.36 (1H, /=6.9Hz， d), 8.44 (1H, /=7.9Hz, d)， 8.52 (IH， /=6.6Hz, d), 12.35 (IH， s) ; 13C纖(125MHz, DMSO-oQ : 5 12.4， 12.5, 25.9， 29.7, 30. 3' 36. 4' 42. 9， 50. 8' 51. 0， 53. 1' 53. 4， 53. 7， 59. 3, 60. 2， 124. 2, 147. 4, 157. 8, 167.1, 169.8， 171.6, 172.3' 172.9, 173.0; IR (KBr， cm—1): 3404, 3084， 2959, 2871, 1667， 1538, 1470, 1417， 1384' 1202, 1138， 1057' 1019; HRMS: Calcd for C23H38Nu07 (M+H)+， 580.2950. Found, 580.2946. 實施例5:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- v (triazole) -Gly-Cys-] (7e)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf) -0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-半胱氨酸[Fmoc-Cys (Trt) -OH] 和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Aspi (triazole)-Gly-Cys-] (7e). White solids, mp: 189-190 °C; [ E = -47. 5 (c = 1. 0 in CHC13) ; 'H醒R (500MHz, DMS0-: S 1. 36 (2H，6. 5 Hz,d), 1.44-1.52 (1H, m), 1.62—1.71 (1H, m) ， 2.53-2.64 (2H, m)， 2.89 (2H, /二6.2Hz' d), 3.69 (1H, /= 6. 1 Hz， d〉， 3.72 (1H, / = 6.4 Hz, d), 4.31 (H， / = 6.6 Hz， d), 4.39 (2H, /= 14.3， 7.1 Hz' dd), 4.56 (2H, /= 6.3 Hz, d), 4.61 (2H， / = 6,3 Hz, d), 6.16 (2H, ./= 7.5 Hz, d) ， 6.79 (2H, s), 7.23 (2H' s)' 7.80 (1H， s), 8.12 (1H， /= 6.7 Hz， d)， 8.29 (1H'7.1 Hz， t)， 8.47 (1H， /= 6.6 Hz, d)' 8.54 (1H， / = 6.7Hz, t), 8.75 (1H， /=6.8Hz, t), 12.36 (1H, s) ; I3C醒R (125MHz' DMS0-^) : S 24.2, 26.3' 27.4, 27.7, 29.2， 30.5， 32.3' 36.1, 43.3, 49.3， 51.7， 56.3， 124.8, 156.8， 169.3, 170.5, 171.7， 172.3, 173.2, 173.9; IR (KBr, cnf1) : 3373， 3079， 2926， 2849， 1667, 1538, 1417' 1384, 1331， 1201, 1136, 1057， 1019; HRMS: Calcd for C23H38N 07S (M+H)+, 570.2183. Found, 570.2142. 實施例6:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ur (triazole)-Gly-Met-] (7f)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基-甲硫氨酸(Fmoc-Met-0H )和 Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V(triazole)-Gly-Met-] (7f). Yellow solids， mp: 193_195°C;[《 =-85. 6 (c = 1.0 inCHCl3); , (500MHz, DMS0-: S 1.42-1.49 (2H, m), 1.60-1.67 (m， m)， 1.76-1.84 (1H' m), 1.97 (1H' s)， 2.02 (1H， s), 1.92—2.05 (3H， m), 2.34-2.42 (2H， m), 2.67 (1H, s), 3.09 (3H， 6.0 Hz, d)' 3.72-3.83 (2H， m)， 4.28 (2H， / = 15.3， 6.7Hz， dd)， 4.41 (1H, s)， 4.57 (1H, /=5.4Hz, d), 5.17 (2H' /- 14.8 Hz, d)， 7.49 (1H， s)' 7.79 (1H, /=8.9Hz, d), 8.21-8.27 (1H, m)， 8.33 (1H, s)， 8.42 (1H， s), 8.60 (m, s), 12.38 (1H, s) ; 13C醒R (125 MHz, DMS0—oQ : S 15.8, 26.2 29.4, 30.6, 33.5， 35.7， 37.5, 41.2' 41.6, 43.1， 50.7, 53.3, 53.5, 125.5， 129.6， 145.7, 157.9, 166.6， 169.8, 171.4, 171.9， 172.8, 172.9; IR (KBr， cnf1) : 3383， 3073， 2932， 2849， 1661， 1538， 1434, 1384， 1201， 1137， 1047; HRMS: Calcd for C22HseNu07S (M+H)+， 598.2435. Found, 598.2471.
實施例7:
Cyclo[-Arg-Gly—Asp- v (triazole)-Gly-Asp-] (7g)的合成
14本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧羰基-天冬氨酸-4-叔丁酯[F咖c-Asp (0tBu) -0H]和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-V(triazole)-Gly-Asp-] (7g). White solids, mp: 193-195°C; ["K=+23. 4 (c 二 1. 0 in CHC13) ; W函R (50(MHz, DMSO-d) : S 1. 41-1. 44 (2H, m), 1. 56 (2H,/=9.4Hz， d), 2.57-2.63 (IH， m), 2.76-2.83 (1H, m) ， 3.07-3.11 (2H， m)， 3.90 (2H,/=6. 3 Hz, d), 4.13 (1H， s)， 4.25 (IH， /= 4. 7 Hz, d)， 4.40 (1H， /=14. 7, 7. 7 Hz,dd)， 4.56-4.51 (1H， m), 5.11 (1H, / =16.7 Hz, d), 5.26 (1H， /=16.6Hz， d)， 7.01(2H， s)' 7.26 (1H, s)， 7.51 (1H, s)， 7.65 (1H， s)， 7.89 (1H, /=8.0Hz， d), 7.99(1H' /=5.6Hz， t), 8.35 (IH' 6.7 Hz' d)' 8.47 (1H, /=7.4Hz, d), 8.86 (IH'/=6. 6Hz， d)' 12.38 (2H, s) ; 13C麗R (125MHz' DMSO—: S 26.0, 30.3, 36.1， 36.6，36.9, 40.2, 43.0， 51.3， 52.4, 53.0， 53,1, 124.4， 147.3， 157.8, 167.6， 169.7，171.6,172.5， 172.6， 172.9; IR (KBr， cm—1): 3375' 3216, 3073， 2936' 1667, 1538， 1416，1384， 1331, 1200， 1137， 1058， 1024; H麗S: Calcd for C21H32Nu09 (M+H)+' 582.5467. Found,582. 5423.
實施例8:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- v (triazole)-Gly-Asn-] (7h)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf) -0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-天冬酰胺[Fmoc-Asn(Trt) -OH]和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-￥ (triazole)-Gly-Asn-] (7h). White solids' mp: 187-190。C;[《=+42.8 (c = 1.0 in CHC13);力N腿(500腿z, DMS0-d) : S 1.43 (2H， / = 6. 8 Hz, d)，1.52-1.59 (1H' m)， 1.78-1.84 (1H， m)， 2.76-2.87 (2H， m), 3.01-3.09 (4H， m)， 3.53-3.58(2H, m), 3.89 (1H, s)， 4.13 (IH， s) ， 4.38 (IH， /= 14.. 4， 7.1 Hz, dd), 4.56 (1H,s)， 5,13 (1H,16.6 Hz, d), 5.25 (IH，16.7 Hz, d)， 7.01 (2H， s)， 7.45 (2H，
15s), 7.64 (1H' s)' 7.82 (1H, s)， 7.97 (1H， s), 8.33 (1H, /=5.6Hz, t), 8.46 (m，/=7.4Hz， d)， 8.71 (1H, /=6.8Hz, d), 12.31 (1H, s) ; 13C ,R (125MHz, DMS0-《)S 25.9， 30.2， 36.0, 36.5， 37,4' 41.5, 42.9， 51.3, 52.4, 52.9， 53.1, 124.4， 147.2，157.8， 167.5, 169.7, 171.6' 172.0, 172.2, 172.6，72.9; IR (KBr， cm1): 3350， 3210,3073， 2931， 1669， 1538， 1417， 1386' 1336， 1201, 1136， 1059, 1030; HRMS: Calcd forC21H33N,20s (M+H)+, 581.2568. Found, 581.2562.
實施例9:
CycloC-Arg-Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Glu-] (7i)的合成本實施例中的步驟與實施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-谷氨酸-4-叔丁酯[Fmoc-Glu (0tBu) -OH]
和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole)-Gly-Glu-] (7i). Yellow solids' rap: 197-199 °C;[a]2D5= -108. 4 (c = 1.0 in CHC13) ; LH腿R (500隨z, DMS0-&) : S 1.42 (1H, s)' 1.54 (IH，s), 1.80 (1H, s), 2.01 (1H， s), 2.34-2.39 (IH， m), 2.79 (1H, /= 6. 4 Hz, t), 3.07-3.13(2H， m), 3.45-3.53 (1H, m), 3.95 (IH， /=6.7Hz， d)， 4.02—4.09 (1H, m) ， 4.13 (IH,/=14.3， 6.6 Hz' dd), 4.24 (1H, /=5.0Hz， d)， 4.41 (IH, /= 7. 1 Hz, d), 4.58 (IH,/=6.3 Hz, d), 5,07 (1H, s), 5.33 (IH, 16.5 Hz, d), 7.57 (2H' s)， 7.87 (IH,s), 8.01 (IH' /= 5.5 Hz' d)' 8.34 (IH' / = 5.7 Hz' t) ， 8.46 (1H, /=7.4Hz， d)，8.71 (IH, /=6.2 Hz, d)， 12.36 (2H， s) ; 13C NMR (125MHz， DMSO-oQ : S 26.1， 27.6'30.5, 31.4， 36.1, 36.6， 42.9, 51.2, 52.9， 53.1, 55.3， 124.3, 147.3, 157.9, 159.3，159.5， 167.7， 169.8, 171.6， 172.7, 172.9, 174.8; IR (KBr， cnf1) : 3419， 3073, 2948,2558, 1668， 1652， 1557, 1538, 1413, 1380, 1178， 1052， 1024; HRMS: Calcd for C22H:i4N 09(M+H)+， 596.2546. Found, 596.2544.
實施例10:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- V (triazole)-Gly-Lys-] (7j)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、荷甲氧羰基-N e-叔丁氧羰基-賴氨酸[Fraoc-
16Lys(Boc)-0H]和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Lys-] (7j). White solids, mp: 178-180 °C; ["E=+78.5 (c = 1.0 in CHC13) ; 畫R (500 MHz,麗S0-aQ : S 1.42-1.49 (4H, m), 1.59他/=4.7Hz, d)， 2.50-2.53 (2H， m) ， 2.78-2.85 (4H' m)' 3,13 (2H, / = 6.2 Hz,d)， 4.08 (IH' /=6.2Hz， d), 4.12 (1H, s), 4.26 (1H， s)， 4.47 (2H'14.2， 7.0Hz, dd), 5.12 (2H' /= 16.3 Hz， d)， 5.21 (2H， s)， 6.96 (2H, s), 7.35 (2H, s), 7.79(1H， s)， 8.08 (1H， /=5. 4 Hz, t) ， 8.22 (1H, /= 8. 4 Hz, d), 8.32 (1H, s), 8.44 (111,7.6Hz， t)， 8.78 (1H, /=6.7Hz, t)' 12.37 (1H' s) ; 13C醒R (125MHz, DMS0-oQ :S 22.3， 24.6, 26.4， 27.3, 28.9， 29.4' 30.6, 32.5, 32.9， 36.4， 43.0， 43.8， 49.4，51.3， 54.5, 124.3， 157.3, 169.8, 170.4, 171.5' 172.3， 173.2, 173.5; IR (KBr, cm—'):3393, 3073' 2932' 1667' 1538， 1417, 1338, 1201， 1136, 1058， 1024;醒S: Calcd forC23H39N1207 (M+H) +, 595. 3056, Found' 595. 3085.
實施例11:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- W (triazole)-Gly-Arg-] (7k)的合成
本實施例中的步驟與實施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[_Arg_Gly-Asp-V (triazole)-Gly-Arg-] (7k). White solids' mp: 162-164 °C;[《=+58. 9 (c 二 1. 0 in CHC13) ; 'H醒R (500 MHz， DMSO-4) : 5 1. 41-1. 50 (2H， m), 1. 55-1. 63(4H， m), 1.71-1.80 (2H' m), 2.74-2.83 (1H, m), 3.12 (4H, /=5.8 Hz, d), 3.45-3.52(1H, m)， 3.94—4.00 (2H, m), 4.14 (1H, /= 4. 7 Hz, d)， 4.23 (IH， /=5.5Hz， d)， 4.43(IH， /= 14.4, 7.0 Hz, dd), 5.06 (IH， /= 16. 5 Hz, d)， 5.31 (1H, s), 7.63 (IH， s),7.70 (2H， s)， 7.91 (1H' /=7.5Hz， d)' 8.05 (1H' /=5.6 Hz, t), 8.36 (1H， /=6.0Hz， t)， 8.49 (1H， /= 7. 5 Hz， d), 8.76 (1H, ./= 6.4 Hz, d)' 12.36 (1H' s) ; 13C醒R(125 MHz, DMSO—: S 24. 6， 27. 7， 27. 9， 29. 5， 31. 0， 32. 3， 37. 8, 43. 8, 52. 7, 52. 3,54.8, 124.8, 157.9, 169.9, 170.2, 171.2, 172.5, 173.3， 173.9; IR (KBr, cm—1): 3393，3212, 3073， 2932， 1667， 1538， 1417， 1331， 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C23H39N1407 (M+H)+, 623.3121， Found, 623.3120.
實施例12:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp—V (triazole)-Gly-His-] (71)的合成 本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、芴甲氧羰基-三苯甲基-組氨酸[Fmoc-His(Trt)-OH] 和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-His-] (71). White solids, mp: 176-178 。C; ["E =-104. 6 (c = 1. 0 in CHC13) : 'H NMR (500 MHz, DMSO-: S 1. 41 (2H,5. 9 Hz, d), 1.51-1.58 (1H, m)， 1.79 (1H, s)， 2.76 (1H， /=5.8Hz， d) ， 3.09—3.16 (2H, m)， 3.56 (1H, /=4.9Hz, d), 3.90-3,96 (1H, m)， 4.16 (1H' /二5.3Hz, d), 4.25 (1H, /=5.3 Hz， d)，4.41 (2H， /=7.4Hz， d)， 4.53 (1H, /=14.2, 7. 0 Hz， dd) ， 5.06 (1H, /=16. 6 Hz, d), 5.29 (2H, /= 16.4 Hz， d)， 7.45 (1H, s)， 7.61 (2H, /=6.9Hz， t), 7.94 (IH' 7. 5 Hz, d)， 8.08 (IH， /= 5.8 Hz， t) ， 8.36 (1H, / = 6. 0 Hz， d), 8.47 (1H, / = 7.2 Hz, d)， 8.85 (1H, /=7.2 Hz, d), 8.99 (1H, /=6.3 Hz, d), 12.40 (1H， s) ; 13C 腿R (125 MHz， DMS0-: S 26. 0' 27. 4， 30. 4, 36. 1， 36. 7, 41. 4， 43. 0， 51. 3， 53. 0， 53.2, 54.8， 118.3， 124.3' 135.2, 147.3， 157.8, 167.6， 169.7， 171.0' 171.7' 172.5， 172.8; IR (KBr， cm-1): 3393, 3073， 2932, 1667， 1538， 1417， 1331, 1201, 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C23H34N1307 (M+H)+， 604.2653, Found, 604.2672.
實施例13:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- w (triazole)-Gly-Phe-] (7m)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -OH、芴甲氧幾基-苯丙氨酸[Fmoc-Phe-OH]和 Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v(triazole)-Gly-Phe-] (7m). Yellow solids' mp:187-89 °C:+54. 8 (c = 1. 0 in CHC13) ; !H隨R (500顧z, DMSO-《)5 1, 52-1. 61 (2H' m), 1. 88-1. 97(2H, m), 2.63-2.75 (2H， m), 2.89 (1H, s)， 3.11 (3H, /= 5. 9 Hz， d), 3.82 (1H, /=14. 3，6.3Hz， dd), 4.19 (1H, /=14.2, 6.5 Hz， dd) ， 4.23 (1H, /=5.8Hz, d), 4,30 (1H,/=7.1 Hz, d)， 4.58 (1H, s), 5.01 (1H, s), 5.04 (1H, s), 5.16 (1H， s), 7.18—7.27(5H, m), 7.61 (1H, /=7.0Hz, d), 8.15 (LH' s), 8.34 (IH， ./= 6. 0 Hz' t), 8.46 (1H,/=7.6Hz, d), 8.96 (1H, s), 12.35 (1H， s) ; 13C醒R (125 MHz, DMSO-4) : S 26.1,28. 5, 29. 4, 30. 4, 36. 1， 36. 7， 37. 8， 50. 5， 50. 6' 51. 1, 52, 6' 53. 0， 53. 2， 55. 2， 124. 2,127.6, 129.4， 129,7, 130.3, 130.4, 138.7, 167.4, 169.8, 171.6, 172.7， 173.5; IR (KBr，cm-'): 3352， 3068, 2931, 2849， 1667， 1538, 1457, 1434, 1384， 1331， 1201， 1136, 1084,1033; HRMS: Calcd for dN,A (M+H)+， 614.2794， Found, 614.2758.
實施例14:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ￥ (triazole) -Gly-Trp-] (7n)的合成
本實施例中的步驟與實施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-叔丁氧羰基-色氨酸[Fmoc-Trp (Boc) -OH]和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp—iir (triazole)—Gly—Trp-] (7n). Yellow solids' mp: 173-175 °C; ["E=+69.7 (c = 1.0 in CHC13) ; 'H麗R (500 MHz， DMS0-: S 1.38 (1H， s) ， 1.51-1.58(2H, m), 1.77 (1H， s) ， 3.04-3.10 (2H, m), 3.16 (1H, s)， 3. 44(1H, s), 3,50—3.57 (1H,m), 3.65 (1H,5.2 Hz' d) ， 4.23 (1H, /= 5.7 Hz, d) ， 4.35 (1H， s), 4.43 (2H, /=14.2, 6.6 Hz, dd), 4.72 (IH， s) ， 5.05 (1H， s)' 5.17 (1H, s), 6.99-7.10 (2H, m)，7.33—7.37 (2H， m), 7.50—7.56 (2H， m), 7.60 (1H, s)， 7.93 (1H, s), 8.10 (1H, s)， 8.33(IH， /-9.4 Hz, d), 8.48 (1H, ,/= 7.5 Hz， t)， 8.67 (1H, s), 10.91 (1H, / = 12.6Hz' d)' 12.37 (1H， s) ; 13C NMR (125 MHz, DMS0-4): S 26.0, 28.2， 30,0, 36.7, 42.9,51.1, 53.0' 53.2, 56.7' 110.8， 112.6, 119.2, 119.6， 122.2， 124.2， 124.8， 28.2， 137.3,147.3, 157.8, 167.5， 169.8, 171.7, 172.1' 172.6， 172.7; IR (KBr， cm—1): 3393, 3073,2932， 1667, 1538， 1417， 1331， 1201， 1136, 1058, 1024; HRMS: Calcd for C28H37IV1207 (M+H)+,653.2846， Found, 653.2812.
實施例15:
Cyclo[-Arg—Gly—Asp—V (triazole)-Gly-Pro-] (7o)的合成 本實施例中的步驟與實施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg (Pbf) -0H、芴甲氧羰基-脯氨酸[Fmoc-Pro-OH]和Azido-glycine 生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[老g-Gly-Asp-w (triazole)-Gly-Pro-] (7o). White solids, mp: 162-164 °C; ["E =+86.7 (c = 1.0 in CHC13) ; 'H NMR (500 MHz, DMS0-: S 1.34-1.41 (4H, m) > 1.65-1.74 (6H， m), 2.53-2.64他m), 2.89 (2H， s)， 3.68 (1H,7.2 Hz, d)' 4.10 (IH' /=6.6Hz， d)， 4.27 (1H， s) ， 4.77 (2H， /= 14.2, 6.7 Hz, dd), 5.31 (2H， 17.3 Hz, d), 5.58 (2H, /= 17.3 Hz， d) ， 7.30 (1H， s)， 7.35 (IH， /= 7.7 Hz, t)， 7.74 (1H， s)' 8.15 (1H, /=8.7 Hz, d)' 8.38 (IH， /=4.7Hz， t)， 8.69 (1H, /=7.2Hz， d), 12.39 (1H, s); 13C醒R (125 MHz, DMSO-4): S 24.2， 25.7, 27.3， 27.9， 29.4, 30.6, 31.4' 32.7， 37.9, 43.9, 47.4, 49.3' 52.6' 64.8， 124.4, 157.3, 169.7， 170.5， 171.8, 172.9， 173.5， 173.8; IR (KBr， cm—1): 3385, 2946, 2746, 1629， 1585， 1451, 1376' 1317, 1267， 1170, 1037; HRMS: Calcd for C22H34N 07 (M+H)+, 564.2637, Found, 564.2622.
實施例16:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp- ￥ (triazole)-Gly-] (7p)的合成
本實施例中的步驟與實施例l相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。 所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-] (7p). White solids, rap:153-155 。C; = +35.8 (c = 1.0 in CHC13);力麗R (500 MHz, DMS0-: S 1.51-1.63 (2H, ra), 1.73-1.85 (2H， m), 2.69-2.79 (2H' m)' 3.11 (2H， /=4.5Hz, d), 3.72 (2H, s) ， 3.87 (1H, s), 4.35 (2H, /=14.2， 6, 9 Hz， dd), 4.50 (1H, s)' 4.60 (1H' s), 5.15 (1H， s), 7.21 (1H, s), 7.54 (2H， /= 5. 1 Hz,s), 7.81 (1H， s), 8.24 (IH， / = 7.8 Hz, d)， 8.37 (IH'
20s), 8.65 (1H' /=4,9Hz， d), 12.39 (1H， s) : 13C NMR (125 MHz, DMSO-4) : S 24.8,27.6, 28.6, 29.6, 31.1， 32.4， 37.9, 49.8， 52.4， 54.7， 124.2， 157.6, 169.1, 171.3，172.4, 173.5, 173.8; IR (KBr, cm-1): 3393， 3073' 2932' 1667， 1538， 1417， 1331， 1201，1136, 1058， 1024; HRMS: Calcd for C17H27N1(A (M十H)+, 567.2039， Found, 567.2056.
實施例17:
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v (triazole)-Gly-Gly-Gly-] (7q)的合成
本實施例中的步驟與實施例1相同，其中
第3步中，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Gly-OH 、 Fmoc-Gly-OH和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。
所得最終產(chǎn)物的理化分析數(shù)據(jù)如下
Cyclo[-Arg-Gly-Asp-v(triazole)-Gly-Gly-Gly-] (7q). White solids, mp:201-203°C;
= +35. 3 (c = 1. 0 in CHC13) ; W NMR (500 MHz, DMSO-oQ : S 1. 10 (2H， 9. 5 Hz，d), 1.31-1.42 (1H, ra)， 1.60-1.7丄(1H, m)， 2.56-2.62 (2H' m)' 2.76 (2H， /-4.8 Hz,d)， 3.69 (IH， 5. 1 Hz' d), 3.75 (1H, s), 3.86 (2H, 6.8 Hz， d), 4.35 (3H， /=14.2, 6. 7 Hz, dd), 4.46 (2H, /=4.9Hz, d), 5.22 (3H， /= 10. 9 Hz, d)， 6.72 (2H,s)， 7.34 (2H， /=8.4Hz, d)， 7.84 (IH， s), 8.07 (11 s—)一8,3—5 -(IH， /=7. 6 Hz, t),8.41 (IH， /=5.7Hz， t), 8,55 (1H, /=6.0Hz， t)' 9.09 (1H, /= 5.3 Hz， t)， 12.41(1H' s); UC NMR (125 MHz, DMSO-: S 25.9， 29.1， 36.1， 36.7, 41.5, 43.6, 44.2，44.9, 51.3, 52.4, 52.7， 125.1, 146.3， 157.7' 168.7， 170.2, 170.5, 171.6, 173.2; TR(KBr, cm—1): 3393, 3073' 2932， 1667， 1538， 1417, 1331, 1201， 1136' 1058， 1024; HRMS:Calcd for C21HMN1208 (M十H)+, 581.2597, Found, 581.2569.
2權(quán)利要求
1、一種整合素配體環(huán)肽類似物，其結(jié)構(gòu)如下
2、 一種權(quán)利要求l所述的整合素配體環(huán)肽類似物的環(huán)化方法，包括以下步驟(1) 將Fmoc-Asp-propargyl掛在2-CTC樹脂上，合成線性的四肽類似物稱取lg 2-CTC樹脂于固相反應(yīng)器中，力nDCM15ml溶脹，洗滌樹脂；往溶脹好的樹脂中加Fmoc-Asp-propargyl和DIPEA，室溫下反應(yīng)2. 5h，用3 X 20 ml的EA和10ml的水洗滌；用20%的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘；用3X20 ni]的EA和10ml的水洗滌，加入Fmoc-Gly-0H、苯并三氮唑-N，N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N-甲基嗎啉至反應(yīng)器中，反應(yīng)2h，用茚三酮指示劑檢測反應(yīng)，用3X20ml的EA和10ml的水洗滌；用20。/。的哌啶/DMF溶液脫除Fmoc，反應(yīng)20分鐘；用3X20 ml的EA和10ml的水洗滌；采用相同的操作步驟，依次縮合Fmoc-Arg(Pbf)-0H、 Fmoc-Xaa-OH和Azido-glycine生成線性的四肽類似物。(2) 環(huán)化將線性的全保護的四肽類似物從樹脂上切下來，用裂解液2:8的TFE/DCM及數(shù)滴AcOH，裂解2h，旋干裂解液；在DCM作溶劑，CuBr/DBU作催化劑的液相條件及室溫下反應(yīng)4 6小時，反應(yīng)后旋去DCM，加裂解液去除側(cè)鏈保護裂解2h，旋去裂解液，加冰乙醚沉淀，離心除去上清液得到固體，即為最終產(chǎn)物整合素配體環(huán)肽。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的整合素配體環(huán)肽類似物的環(huán)化方法，其特征在于，所述Fraoc-Asp (OtBu) -OH通過以下方式制得(1) 將6g疊氮鈉溶解于150ml的圓底燒瓶中，再加入24ml的DCM，冰浴冷卻至(TC，攪拌20分鐘；反應(yīng)混合物用2X12mlDCM萃??；合并有機相，用飽和碳酸鈉洗滌，即得到溶解于DCM的三氟甲磺酰疊氮，無需進一步純化直接加入下一步反應(yīng)使用；(2) 將0.675 g甘氨酸、1.783 g的K2C03 、 0.0226 g的CuS04加入到圓底燒瓶中，再加入30ml水、60 ml甲醇和48 ml含有三氟甲磺酰疊氮的DCM，在室溫下攪拌，反應(yīng)24小時；隨后將反應(yīng)混合物減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，剩下的部分用150ml水稀釋，然后用鹽酸調(diào)pH值至6，加磷酸緩沖液稀釋，再用4X60 ml的EA萃取以去除有機相中的磺胺副產(chǎn)物；水相再用鹽酸調(diào)pH值至2，用3X60mlEA萃取；合并有機相，用MgS04干燥，減壓干燥，得到金黃色的油狀液體，即為Fmoc-Asp(OtBu)-OH。
全文摘要
本發(fā)明涉及環(huán)肽類似物及其環(huán)化方法，旨在提供一種整合素配體環(huán)肽類似物及其環(huán)化方法。環(huán)化方法包括首先甘氨酸在三氟甲磺酸酐、疊氮鈉的作用下生成Azido-glycine，然后在溶液中與炔丙胺縮合生成Fmoc-Asp-Propargyl，然后將炔丙酰天冬氨酸的側(cè)鏈羧基掛在2-CTC樹脂上后依次縮合生成線性的四肽類似物，再將線性的四肽類似物從樹脂上切下來，在液相的條件下(DCM作溶劑，CuBr/DBU作催化劑)，室溫下反應(yīng)4-6小時合成環(huán)肽類似物。本發(fā)明的有益效果是(1)本發(fā)明中的整合素配體環(huán)肽類似物引入了氮雜環(huán)(三唑環(huán))，可能會增加生物活性；(2)本發(fā)明的環(huán)化方法更加簡便、高效，條件溫和。
文檔編號C07K5/00GK101492494SQ20091009651
公開日2009年7月29日 申請日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日
發(fā)明者劉雅琴, 徐宇虹 申請人:浙江大學(xué)