專(zhuān)利名稱(chēng)：模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物的分離提純方法，尤其涉及一種模擬移動(dòng)床色譜法分 離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法。
背景技術(shù)：
芍藥內(nèi)酯苷作為具有抗炎、抗?jié)兗懊庖哒{(diào)節(jié)作用的白芍總苷(TGP)中的 特征組分，是從白芍中提取得到的。由于在白芍中，除了芍藥內(nèi)酯苷，還含有 芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷和苯甲酰羥基芍藥苷等多種苷類(lèi)成分和其 他雜質(zhì)等多種組分，所以在芍藥內(nèi)酯苷的生產(chǎn)過(guò)程中，最關(guān)鍵的步驟就是分離 提純。目前在藥物工業(yè)中常采用的精制手段，包括硅膠柱層析，樹(shù)脂柱層析， 凝膠柱層析等方法。以上設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低，但是不足之處在于分離的效率較 低，流動(dòng)相和固定相的利用率較低，成本高，產(chǎn)量低，對(duì)于成分較復(fù)雜的物質(zhì) 不適合分離。此外，產(chǎn)品純度和收率之間的矛盾在柱層析中得不到解決。要保 持純度，只有犧牲收率，這種低收率必將導(dǎo)致高成本。
20世紀(jì)70年代初期，美國(guó)UOP公司開(kāi)發(fā)了模擬移動(dòng)床(SMBC)原理的色譜技 術(shù)模擬移動(dòng)床色譜技術(shù)及其應(yīng)用，色譜，第22巻，P111 115， 2004年3月， 該技術(shù)使吸附劑顆粒裝填后不在移動(dòng)，由原料進(jìn)出口和產(chǎn)品液進(jìn)出口不斷切換 的方法，形成吸附劑顆粒和流動(dòng)相相對(duì)逆流運(yùn)動(dòng)來(lái)模擬固定相的移動(dòng)。該技術(shù) 優(yōu)點(diǎn)在于可以連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，填料更加有效利用，溶劑消耗大量減少，收集到的產(chǎn) 品稀釋度小。SMBC技術(shù)的發(fā)展從石油化工領(lǐng)域幵始，其后是食品中的制糖工業(yè)， 在20世紀(jì)末進(jìn)入藥物領(lǐng)域，并得到了快速的應(yīng)用和發(fā)展。但是，對(duì)于芍藥內(nèi)酯 苷的模擬移動(dòng)床色譜制備工藝仍未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決芍藥內(nèi)酯苷分離提取成本高、產(chǎn)量低的技術(shù)缺陷，本發(fā)明的目的 在于提供應(yīng)用模擬移動(dòng)床色譜分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，該方法連續(xù)生產(chǎn)， 提高了產(chǎn)品的純度和收率，并降低生產(chǎn)成本。
為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案
模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，該方法采用白芍總苷提取 物作為原料，應(yīng)用模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷，模擬移動(dòng)床色譜的 固定相采用C18硅膠，流動(dòng)相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液， 混合溶液中按體積百分計(jì)
甲醇或乙腈 10% 50% 水 50%~90% 甲酸 0 1% 異丙醇 0 ~ 2%
上述的各組分的總和為100%。
本發(fā)明的流動(dòng)相中可以加入甲酸和異丙醇，用以調(diào)整芍藥內(nèi)酯苷的峰型， 減少拖尾，使它和芍藥苷在進(jìn)樣濃度較大的情況下能達(dá)到較好的基線分離，從 而通過(guò)SMBC得到純度較高的芍藥內(nèi)酯苷。作為優(yōu)選，上述混合溶液中按體積 比例計(jì)
甲醇或乙腈 10% 50% 水 50% 90% 甲酸 0.05% 0.5%
異丙醇 1% 2%。 上述的各組分的總和為100%。上述的白芍總苷提取物可以通過(guò)提取純化手段從白芍藥材中提取得到，主
要成分為芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷。作為優(yōu)選，白芍總苷提取物的純度為40% 90%。
作為優(yōu)選，上述進(jìn)入模擬移動(dòng)床色譜分離的白芍總苷提取物采用甲醇溶解，
溶解后白芍總苷提取物的濃度為10 200mg/mL。
作為優(yōu)選，上述的模擬移動(dòng)床由4 8根色譜柱組成，色譜柱分四個(gè)區(qū)域， 每區(qū)由1 2支相同的色譜柱串聯(lián)。作為優(yōu)選，進(jìn)樣液流速Up為2 20ml/min; 洗脫液流速UE為5 ~ 40ml/min;萃余液流速UR為2 ~ 20ml/min;萃取液流速 Ux為5 30ml/min;切換時(shí)間Ts為0.5 30min。
作為優(yōu)選，上述的模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)的操作溫度為20 6(TC。再優(yōu)選， 模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)的操作溫度為20 ~ 40°C 。
本發(fā)明由于采用了上述的技術(shù)方案，芍藥內(nèi)酯苷產(chǎn)品的收率高，純度達(dá)到 90%以上。由于模擬移動(dòng)床色譜過(guò)程是連續(xù)過(guò)程，可以提高生產(chǎn)的自動(dòng)化水平和 生產(chǎn)效率，并使生產(chǎn)環(huán)境得到極大的改善，真正實(shí)現(xiàn)了清潔生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明模擬移動(dòng)床色譜的結(jié)構(gòu)示意圖。 圖2為本發(fā)明芍藥內(nèi)酯苷的HPLC圖譜。
具體實(shí)施例方式
下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
做一個(gè)詳細(xì)說(shuō)明。模擬移動(dòng)床色譜分離制備芍
藥內(nèi)酯苷的方法，該方法包括以下的步驟 一、樣品溶液的制備
通過(guò)乙醇回流提取和硅膠柱層析分離，從白芍藥材中制得含芍藥苷80%的白 芍總苷提取物(TGP)。將得到的TGP樣品溶于甲醇溶液中，沉降，經(jīng)0.45Wn濾 膜過(guò)濾得濃度為100mg/mL的溶液，將此作為SMBC的進(jìn)樣液。此 程可以除去部分不可逆吸附的雜質(zhì)，從而防止其對(duì)SMBC系統(tǒng)中色譜柱的污染，延長(zhǎng)色譜柱 的使用壽命。
二、 色譜柱填裝與流動(dòng)相的組成
用勻漿法填裝8根色譜柱OOmmxlOOmm)，填料為反相C18硅膠，粒徑5 10pm，孔徑100 120A。流動(dòng)相中甲醇與水、甲酸、異丙醇的體積比例為30:
70: 0.1: 1.5。
當(dāng)然，上述的流動(dòng)相也可以采用甲醇與水的混合液，甲醇與水的體積比例
為30: 70?；蛘?，流動(dòng)相采用甲醇與水、甲酸的混合液，甲醇與水、甲酸的體
積比例為30: 70: 1。
三、 模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)(SMBC)
SMBC系統(tǒng)包括進(jìn)樣泵、洗脫液泵、萃取泵、萃余泵和循環(huán)泵、旋轉(zhuǎn)閥和 色譜柱。如圖1所示，阿拉伯?dāng)?shù)字為色譜柱編號(hào)，樣品溶液和洗脫液分別從樣 品液入口與洗脫液入口注入色譜系統(tǒng)(如圖1實(shí)線箭頭所指位置)。每隔一定時(shí) 間，樣品液和洗脫液入口、萃取液和萃余液出口同時(shí)沿流動(dòng)相方向切換至下一 根色譜柱出口 (如圖1虛線箭頭所指位置)。經(jīng)過(guò)SMBC的分離，從萃取液出 口可獲得高純度的芍藥內(nèi)酯苷，從萃余液出口則可獲得較高純度的芍藥苷。
四、 模擬移動(dòng)床色譜參數(shù)
本發(fā)明方法中的模擬移動(dòng)床由8支色譜柱組成4個(gè)區(qū)域，經(jīng)電磁閥切換改 變進(jìn)料口、出料口位置。進(jìn)樣液流速Up=4 10ml/min;洗脫液流速UE= 10 20ml/min;萃余液流速UR= 5 ~ 10ml/min;萃取液流速Ux= 10 20ml/min; 切換時(shí)間Ts=l 5min。操作溫度范圍為20 40°C 。
五、 濃縮
將萃取液和萃余液分別用薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至無(wú)醇味，用乙醇洗出后在真空干燥箱烘干至恒重。 7V、 成品檢驗(yàn)
Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)，二極管陣列檢測(cè)器，Hypersil-C18柱 (250mmX4.6mm i.d, 5(mi)，流動(dòng)相為乙腈和水(體積比為30: 70)，流速 l.Oml'mU1，柱溫40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)230腿，檢測(cè)圖譜如圖2所示。通過(guò)外標(biāo)法 測(cè)定成品中芍藥內(nèi)酯苷的純度為90%以上。
權(quán)利要求
1.模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特征在于該方法采用白芍總苷提取物作為原料，應(yīng)用模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷，模擬移動(dòng)床色譜的固定相采用C18硅膠，流動(dòng)相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液，混合溶液中按體積百分計(jì)甲醇或乙腈 10％～50％水 50％～90％甲酸 0～1％異丙醇 0～2％上述的各組分的總和為100％。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特 征在于混合溶液中按體積比例計(jì)甲醇或乙腈 10%~50%水 50%~90%甲酸 0.05% ~ 0.5%異丙醇 1%~2%。上述的各組分的總和為100%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特征在于白芍總苷提取物為通過(guò)提取純化手段從白芍藥材中提取得到，純度為40% ~ 90%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特征在于進(jìn)入模擬移動(dòng)床色譜分離的白芍總苷提取物采用甲醇溶解，溶解后白芍總苷提取物的濃度為10~100mg/mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法， 其特征在于模擬移動(dòng)床由4 8根色譜柱組成，色譜柱分四個(gè)區(qū)域，每區(qū)由1 2支相同的色譜柱串聯(lián)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特 征在于進(jìn)樣液流速Up為2 20ml/min;洗脫液流速UE為5 40ml/min; 萃余液流速UR為2 20ml/min;萃取液流速Ux為5 30ml/min;切換時(shí)間 Ts為0,5 30min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特 征在于模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)的操作溫度為20 ~ 60°C 。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，其特 征在于模擬移動(dòng)床色譜系統(tǒng)的操作溫度為20 40°C 。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然藥物的分離提純方法，尤其涉及一種模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法。模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷的方法，該方法采用白芍總苷提取物作為原料，應(yīng)用模擬移動(dòng)床色譜法分離制備芍藥內(nèi)酯苷，模擬移動(dòng)床色譜的固定相采用C18硅膠，流動(dòng)相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液，混合溶液中按體積百分計(jì)甲醇或乙腈10％～50％、水50％～90％、甲酸0～1％、異丙醇0～2％，上述的各組分的總和為100％。本發(fā)明芍藥內(nèi)酯苷產(chǎn)品的收率高，純度達(dá)到90％以上。由于模擬移動(dòng)床色譜過(guò)程是連續(xù)過(guò)程，可以提高生產(chǎn)的自動(dòng)化水平和生產(chǎn)效率，并使生產(chǎn)環(huán)境得到極大的改善，真正實(shí)現(xiàn)了清潔生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/06GK101607975SQ200910100680
公開(kāi)日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2009年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月16日
發(fā)明者代冬梅, 孫振蛟, 莊培生, 邵敏明 申請(qǐng)人:寧波立華植物提取技術(shù)有限公司