專利名稱：一種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法。
背景技術(shù)：
畬藥是我國(guó)民族特色藥物之一，在畬族中有著悠久的應(yīng)用歷史。我國(guó)傳統(tǒng)畬藥柳 葉臘梅(Chimomanthus salicifolius)又稱山臘梅、石涼撐，以其為原料的多種中藥制劑， 臨床上多用于抗菌、抗病毒、解熱、鎮(zhèn)痛、增加免疫力等，均取得了很好的療效，深受患者歡 迎，其市場(chǎng)及經(jīng)濟(jì)效益前景非?？春谩?我們首次從柳葉臘梅中分離得到天然化合物為如式(I)所示的6，7_ 二甲氧基香 豆素和如式(II)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素，均具有抗炎作用，特別是6，7-二甲氧基 香豆素，又稱濱蒿內(nèi)酯、二甲氧香豆素、七葉內(nèi)酯二甲醚、蒿屬香豆精和東喘寧，具有顯著的 降壓作用及利膽、抗炎、鎮(zhèn)痛、降血脂、平喘、抗凝等作用。臨床上主要用于治療心絞痛、心律 失常、支氣管哮喘等疾病。本發(fā)明對(duì)柳葉臘梅的開發(fā)和利用具有重要的應(yīng)用價(jià)值，可以有效 的促進(jìn)畬藥資源保護(hù)和可持續(xù)發(fā)展再利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案 —種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，所述的制備方法包括如下步驟 將柳葉臘梅干燥植物碎片浸沒(méi)于離子液體與水的混合溶劑中在40KHz-200KHz頻率的超聲 波條件下，提取累計(jì)O. 33 3小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液為含如式(I)所示的6，7-二甲氧基 香豆素和式(II)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素的香豆素類化合物溶液，所述的離子液體 為1- 丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽，
H3CO
H3CO
H3CO
H3CO
OCH,
I
II
20 : i,
19c
進(jìn)一步，所述的混合溶劑中離子液體與水的體積比為i:3 再進(jìn)一步，所述混合溶劑與柳葉臘梅干燥植物碎片重量的重量之比為io
本發(fā)明推薦以柳葉臘梅枝干干燥粉末為原料進(jìn)行提取。 具體的，從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，推薦按如下步驟進(jìn)行將柳葉
3臘梅枝干的干燥粉末浸沒(méi)于離子液體與水體積比為i : 3 19的混合溶劑中，所述的混合
溶劑的重量為柳葉臘梅枝干的干燥粉末重量的1 3倍，在40KHz 200KHz頻率的超聲波 條件下，提取累計(jì)O. 33 3小時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾，濾液即含如式(I)所示的6，7-二甲氧基 香豆素和式(II)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素的香豆素類化合物的提取液。
本發(fā)明公開了柳葉臘梅中兩種香豆素類化合物即6，7-二甲氧基香豆素和6，7， 8-三甲氧基香豆素的具體提取方法以超聲作為輔助，利用1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸 鹽對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響，用水與離子液體的混合溶劑為提取劑來(lái)獲得以上兩種香豆素類 化合物的最佳提取條件。6， 7- 二甲氧基香豆素和6， 7， 8-三甲氧基香豆素的測(cè)定采用HPLC 檢測(cè)方法，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18 (5umX 4. 6 X 150mm)，流速lml. min—、檢測(cè) 波長(zhǎng)326nm。流動(dòng)相為甲醇水(45 : 55)。 本發(fā)明的有益效果在于它相對(duì)于傳統(tǒng)的提取方法操作簡(jiǎn)單方便，使用時(shí)間短，效 率高，結(jié)果顯著，更重要的是離子液體可以重復(fù)利用，低沸點(diǎn)，無(wú)毒，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，超聲輔 助技術(shù)節(jié)省能源，綠色環(huán)保，并且提取率比傳統(tǒng)的純水提取率高200% 350%。
(四)說(shuō)明書附圖

圖1 :6，7-二甲氧基香豆素的高效液相(HPLC)色譜圖。 圖2 :6，7，8-三甲氧基香豆素的高效液相(HPLC)色譜圖。 圖3 :實(shí)施例2采用傳統(tǒng)方法得到產(chǎn)品的高效液相(HPLC)色譜圖。 圖4 :實(shí)施例2采用離子液體提取方法得到產(chǎn)品的高效液相(HPLC)色譜圖。 圖5 :實(shí)施例3采用傳統(tǒng)方法得到產(chǎn)品的高效液相(HPLC)色譜圖。 圖6 :實(shí)施例3采用離子液體提取方法得到產(chǎn)品的高效液相(HPLC)色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此 實(shí)施例一 6， 7- 二甲氧基香豆素和6， 7， 8-三甲氧基香豆素的檢測(cè)方法 本實(shí)^ffiHPLC進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)^f牛為色譜戰(zhàn)Agilent EclipseXCB"C18(5imX4 6X 15Qmj)，流
速:lml.min1。檢測(cè)波長(zhǎng):326m。流動(dòng)相為甲醇水(45 : 55)。 本發(fā)明6，7-二甲氧基香豆素和6，7，8-三甲氧基香豆素標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的液相譜圖分 別見(jiàn)附圖l和附圖2.
實(shí)施例二 傳統(tǒng)的純水提取方法如下在lg臘梅枝陰干粉碎物中加入10ml純水溶劑，將所 述溶液進(jìn)行超聲輔助處理；超聲的頻率為40KHz，超聲時(shí)間為1小時(shí)，對(duì)超聲后的混合溶 液過(guò)濾后棄濾渣，獲得含有香豆素類化合物的溶液，定容至100ml，采用高效液相色譜法進(jìn) 行含量測(cè)定(方法同實(shí)施例一 )，見(jiàn)附圖3，傳統(tǒng)的純水提取6， 7- 二甲氧基香豆素得率為 0. 052mg/g ;6，7，8-三甲氧基香豆素提取率為0. 146mg/g。 離子液體提取方法如下在lg臘梅枝陰干粉碎物中加入10ml混合溶劑，其中 1-丁基-3_甲基咪唑四氟硼酸鹽離子液體水體積比為1 : 3 ;將所述混合溶液進(jìn)行超聲 輔助處理；超聲的頻率為40KHz，超聲時(shí)間為1小時(shí)，對(duì)超聲后的混合溶液過(guò)濾后棄濾渣，獲 得含有香豆素類化合物的溶液，定容至100ml，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定(方法同實(shí)施例一 )，見(jiàn)圖附4，所得6， 7- 二甲氧基香豆素提取得率為0. 103mg/g，比傳統(tǒng)的純水提取 率提高198% ;6，7，8-三甲氧基香豆素提取率0.41mg/g，比傳統(tǒng)的純水提取率提高281X。
實(shí)施例三 傳統(tǒng)的純水提取方法如下在lg臘梅枝陰干粉碎物中加入20ml純水溶劑，將所 述溶液進(jìn)行超聲輔助處理；超聲的頻率為200KHz，超聲時(shí)間為2小時(shí)，對(duì)超聲后的混合溶 液過(guò)濾后棄濾渣，獲得含有香豆素類化合物的溶液，定容至100ml ，采用高效液相色譜法進(jìn) 行含量測(cè)定(方法同實(shí)施例一 )，見(jiàn)附圖5，傳統(tǒng)的純水提取6，7- 二甲氧基香豆素得率為 0. 052mg/g ;6， 7，8-三甲氧基香豆素提取率為0. 146mg/g。 離子液體提取方法如下在lg臘梅枝陰干粉碎物中加入20ml混合溶劑，其中 l-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽離子溶液水體積比為l : 19 ;將所述混合溶液進(jìn)行超聲 輔助處理；超聲的頻率為200KHz，超聲時(shí)間為2小時(shí)，對(duì)超聲后的混合溶液過(guò)濾后棄濾渣， 獲得含有香豆素類化合物的溶液，定容至100ml，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定(方法 同實(shí)施例一)，見(jiàn)附圖6，所得6，7-二甲氧基香豆素提取率0. 179mg/g，比傳統(tǒng)的純水提取率 提高344% ;6，7，8-三甲氧基香豆素提取率0. 5mg/g，比傳統(tǒng)的純水提取率提高342%。
實(shí)施例四 在100g臘梅枝陰干粉碎物中加入1000ml混合溶劑，其中1_ 丁基_3_甲基咪唑四
氟硼酸鹽離子液體水體積比為l : 3 ;將所述混合溶液進(jìn)行超聲輔助處理；超聲的頻率為
40KHz，超聲時(shí)間為1小時(shí)，對(duì)超聲后的混合溶液過(guò)濾后棄濾渣，減壓濃縮，獲得含有香豆素 類化合物的溶液，以石油醚與丙酮按體積比0 20 : l為洗脫劑，經(jīng)經(jīng)硅膠60柱色譜梯度 洗脫，-得到化合物6，7-二甲氧基香豆素10. 3mg，6，7，8-三甲氧基香豆素4. lmg。
結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果如下
6， 7- 二甲氧基香豆素 熔點(diǎn)，146-147°C ;TOF-MS(正離子模式)m/z :207[M+H]+ ;1H_NMR(CDC13， 500MHz) S :7. 63 (1H， d， J = 9. 5Hz， H-4) ， 6. 86 (1H， s， H_5) ， 6. 83 (1H， s， H_8) ， 6. 28 (1H， d， J = 9. 5Hz， H-3) ，3. 95，3. 93(各3H， s， CH30_) ;13C NMR(CDC13， 125MHz) S : 161. 4 (C_2) ， 152. 8 (C_7)， 150. 0 (C_6) ， 146. 3 (C_9) ， 143. 3 (C_4) ， 113. 5 (C_10) ， 111. 4 (C_3) ， 108. 0 (C_5)， 100. 0 (C-8) ， 56. 4 (CH30-) ， 56. 4 (CH30_).
6，7，8-三甲氧基香豆素 熔點(diǎn)，105-106 °C ;TOF-MS(正離子模式)m/z :237[M+H]+ ;1H_NMR(CDC13， 500MHz) S :7. 68(lH，d， J = 9. 5Hz，H-4) ，6. 75 (1H， s， H_5) ， 6. 33(lH，d， J = 9. 5Hz，H-3) ，3. 92， 4. 00， 4.03(各3H， s， CH30_) ;13CNMR(CDC13， 125MHz) S : 160. 2 (C_2) ， 150. 0 (C_9) ， 145. 6 (C_8)， 143. 4 (C_4) ， 142. 6 (C_7) ， 140. 7 (C_6) ， 114. 7 (C_3) ，114. 1 (C_10) ， 103. 6 (C_5)， 61.5 (CH30_) ，61.2 (CH30_) ， 56. 0 (CH30_)。
權(quán)利要求
一種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，其特征在于所述的制備方法包括如下步驟將柳葉臘梅干燥植物碎片浸沒(méi)于離子液體與水的混合溶劑中在40KHz-200KHz頻率的超聲波條件下，提取累計(jì)0.33～3小時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾，濾液即含如式(I)所示的6，7-二甲氧基香豆素和式(II)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素的香豆素類化合物的提取液，所述的離子液體為1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽，F(xiàn)2009101557702C00011.tif
2. 如權(quán)利要求1所述的從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，其特征在于所述的 混合溶劑中離子液體與水的體積比為1 : 3 19。
3. 如權(quán)利要求1所述的從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，其特征在于所述混合溶劑與柳葉臘梅干燥植物碎片重量的重量之比為io 20 : i。
4. 如權(quán)利要求1所述的從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，其特征在于所述的柳葉臘梅干燥植物碎片是柳葉臘梅枝干的干燥粉末。
5. 如權(quán)利要求l所述的從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，其特征在于所 述的制備方法包括如下步驟將柳葉臘梅枝干的干燥粉末浸沒(méi)于離子液體與水體積比為i : 5 10的混合溶劑中，所述的混合溶劑的重量為柳葉臘梅枝干的干燥粉末重量的i 3倍，在40KHz 200KHz頻率的超聲波條件下，提取累計(jì)0. 33 3小時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)物過(guò)濾，濾 液即含如式(I)所示的6，7-二甲氧基香豆素和式(I I)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素的 香豆素類化合物的提取液，所述的離子液體為1-丁基_3-甲基咪唑四氟硼酸鹽。
全文摘要
一種從柳葉臘梅中提取香豆素類化合物的方法，所述的制備方法包括如下步驟將柳葉臘梅干燥植物碎片浸沒(méi)于離子液體與水的混合溶劑中在40KHz-200KHz頻率的超聲波條件下，提取累計(jì)0.33～3小時(shí)，提取液過(guò)濾，濾液為含如式(1)所示的6，7-二甲氧基香豆素和式(II)所示的6，7，8-三甲氧基香豆素的香豆素類化合物溶液。本發(fā)明的有益效果在于提取方法操作簡(jiǎn)單方便，使用時(shí)間短，效率高，結(jié)果顯著，離子液體可以重復(fù)利用，低沸點(diǎn)，無(wú)毒，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，超聲輔助技術(shù)節(jié)省能源，綠色環(huán)保，并且提取率比傳統(tǒng)的純水提取率高200％～350％。
文檔編號(hào)C07D311/64GK101735187SQ200910155770
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2009年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月25日
發(fā)明者史曉林, 應(yīng)國(guó)清, 楊春, 王鴻, 程文亮 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)