專利名稱：：一種從莪術(shù)油中提取分離莪術(shù)二酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從天然藥用植物揮發(fā)油中提取單一有效成分的提取方法，具體涉及一種從莪術(shù)油中提取、純化莪術(shù)二酮的方法，該方法制備的莪術(shù)二酮純度高達99.9%。
背景技術(shù)：
：莪術(shù)油是從多種藥用植物中提取的揮發(fā)油，如姜黃、莪術(shù)、郁金等姜科植物中都含有莪術(shù)油。莪術(shù)油中含有多種活性成分，具有行氣活血、消積止痛、活血化瘀、去腐生肌、增強機體免疫能力之功效?，F(xiàn)代藥理學研究表明，莪術(shù)油直接抑制、破壞癌細胞；抗HPV感染；莪術(shù)油對細菌、霉菌、滴蟲、病毒等病原微生物具有協(xié)同殺滅作用，并修復病變組織、促進創(chuàng)面愈合。莪術(shù)油制劑用于治療白色念珠菌引起的陰道感染、霉菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、宮頸糜爛以及治療病毒性感染；還用于預防、治療宮頸癌。其抗癌、抗菌、抗病毒的主要活性成分為莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、欖香烯、吉馬酮等，目前臨床上有很多以莪術(shù)油為有效成分的制劑，如莪術(shù)油葡萄糖注射液、莪術(shù)油注射液、復方莪術(shù)油栓、復方莪術(shù)油軟膠囊、保婦康栓等，廣泛用于治療和預防病毒感染，細菌、霉菌、白色念珠菌感染的婦科疾病及HPV反復感染的宮頸癌病變。過去，由于莪術(shù)油成分復雜，有效成分含量較低，分析方法有限，限制了制劑有效成分的質(zhì)量控制。當前，隨著分析儀器、分析方法的進步和發(fā)展，能更加準確地檢測出莪術(shù)油有效成分的單體物質(zhì)，為莪術(shù)油制劑準確的成分定性、定量提供了條件。莪術(shù)二酮為莪術(shù)油中主要活性成分，占莪術(shù)油含量的15%左右，本申請發(fā)明人通過反復的試驗，找到了從莪術(shù)油中提取、純化莪術(shù)二酮的有效方法，能夠為莪術(shù)油制劑成分檢測提供高純度的對照品，并為莪術(shù)二酮后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)提供優(yōu)質(zhì)的原料?，F(xiàn)有技術(shù)中提取莪術(shù)二酮方法通常是先采用石油醚洗脫，再用石油醚乙酸乙酯(9:1)洗脫，但是該單一洗脫方式難以有效地去除雜質(zhì)。鑒于莪術(shù)油中成分復雜，本申請以石油醚(6090°c):乙酸乙酯體積比為ioo:o，30:i，25:1，20:i，is:i，12:i，9:i進行梯度洗脫，并以石油醚(60-90°c):乙酸乙酯體積比為i8:i，is:i，12:i的洗脫液進行二次洗脫，通過二次、多個梯度的洗脫將大部分雜質(zhì)除去，以保證莪術(shù)二酮的純度，本申請得到的莪術(shù)二酮純度高達99.9%。本申請所述的方法與其他提取純化方法比較，還具有實驗操作簡便，設(shè)備要求簡單，條件容易達到，且收率大，純度高的特點。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種高純度的莪術(shù)二酮的單體以及從莪術(shù)油中提取、純化莪術(shù)二酮的方法，單體純度高達99.9%，解決了現(xiàn)有技術(shù)中一直缺乏高純度莪術(shù)二酮對照品的問題。本發(fā)明的提取、純化方法如下將一定量的莪術(shù)油與適量柱層析用硅膠拌勻，上預先填充好的硅膠柱，依次以石油醚(6090°C)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為ioo:o，30:1，25:1，20:i，is:1，12:i，9:i，收集每個梯度下的洗脫液，每份30ml，即時對各梯度下的多份洗脫液用薄層法檢測，隨時監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，當洗脫進行到石油醚乙酸乙酯體積比為12:l和9:i時，莪術(shù)二酮被陸續(xù)洗脫出來，其中在9:l的梯度下最為集中，將i2:l和9:i的梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，O2t:冷藏，放置2448小時，有晶體析出，濾過，待用。取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(6090°c):乙酸乙酯(is:i)走柱。取上步得到的晶體用石油醚(eo9(TC)溶解，與適量層析用硅膠拌勻，上硅膠柱，調(diào)整洗脫液的比例，依次以石油醚(60-90°C):乙酸乙酯體積比為18:1，15:1，12:l同法進行梯度洗脫，收集每個梯度下的洗脫液，每份20ml，即時對各梯度下的多份洗脫液用薄層法檢測，將i2:i梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并、濃縮、02t:冷藏、放置2448小時結(jié)晶，結(jié)晶物用合適的有機溶劑進行重結(jié)晶，即得高純度的莪術(shù)二酮。上述方法中，硅膠柱優(yōu)選為干法填充的硅膠柱；重結(jié)晶溶劑選自石油醚、正丁醇或正己烷，優(yōu)選為正己烷。附圖1:氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析自制莪術(shù)二酮的氣-質(zhì)色譜圖附圖2:高效液相色譜法定量分析自制莪術(shù)二酮及市售品的分析報告具體實施例方式實施例1取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)300g干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(6090°C):乙酸乙酯(18:1)走柱，取莪術(shù)油30g，加柱層析用硅膠15g拌勻，干法上柱，用梯度洗脫法，依次以石油醚(6090°C)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為ioo:o，30:1，25:1，20:i，is:i，12:1，9:1，收集每個梯度下的洗脫液，每份30ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:l和9:i的梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，o2t:冷藏，放置48小時，有晶體析出，用垂熔漏斗濾取結(jié)晶，待用。取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)30g，干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(eo9(TC):乙酸乙酯(is:i)走柱。取上步得到的晶體用石油醚(6090°C)溶解，與適量柱層析硅膠拌勻，呈半干狀，上硅膠柱，同法以石油醚(6090°c)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為is:i，15:1，12:1，收集洗脫液，每份20ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，隨時監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:i梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，02t:冷藏，放置48小時，有晶體析出，用垂熔漏斗濾取，將得到的晶體用正己烷重結(jié)晶，即得高純度的莪術(shù)二酮(1.5g)，純度為99.9%。實施例2取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)300g，干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(6090°C):乙酸乙酯(18:1)走柱，取莪術(shù)油30g，加柱層析用硅膠15g拌勻，干法上柱，用梯度洗脫法，依次以石油醚(6Q9(TC)和乙酸乙酯混合溶劑進行3/4頁梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為100:o，30:i，25:1，20:i，is:i，12:1，9:1，收集每個梯度下的洗脫液，每份30ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:l和9:i的梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，o2t:冷藏，放置48小時，有晶體析出，用垂熔漏斗濾取結(jié)晶，待用。取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)30g，干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(eo9(TC):乙酸乙酯(is:i)走柱。取上步得到的晶體用石油醚(6090°C)溶解，與適量柱層析硅膠拌勻，呈半干狀，上硅膠柱，同法以石油醚(6090°c)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為18:i，15:1，12:1，收集洗脫液，每份20ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，隨時監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:i梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，02t:冷藏，放置24小時，有晶體析出，用垂熔漏斗濾取，將得到的晶體用正己烷重結(jié)晶，即得高純度的莪術(shù)二酮(1.2g)，純度為99.7%。實施例3取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)600g，干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(eo9(TC):乙酸乙酯(is:i)乙酸乙酯走柱，取莪術(shù)油eog，加柱層析用硅膠30g拌勻，干法上柱，用梯度洗脫法，依次以石油醚(6090°C)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為ioo:o，30:1，25:1，20:i，15:1，12:1，9:1，收集每個梯度下的洗脫液，每份30ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:l和9:i的梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，o2t:冷藏，放置48小時，有晶體析出，用垂熔漏斗濾取結(jié)晶，待用。取層析柱加入柱層析用硅膠(105t:干燥6小時)60g，干法填柱，填實，真空泵抽6小時，用石油醚(eo9(TC):乙酸乙酯(is:i)走柱。取上步得到的晶體用石油醚(609(TC)溶解，與適量柱層析硅膠拌勻，呈半干狀，上硅膠柱，同法以石油醚(6090°C)和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚乙酸乙酯體積比依次為18:1，15:1，12:l，收集洗脫液，每份20ml，即時對各梯度下的多份洗脫液進行薄層檢查，隨時監(jiān)測莪術(shù)二酮的洗脫情況，將i2:i梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，o2t:冷藏，放置24小時，有晶體析出，將該晶體用垂熔漏斗濾取，將得到的晶體用正己烷重結(jié)晶，即得高純度的莪術(shù)二酮(3.2g)，純度為99.8X。實施例4對實施例1獲得的莪術(shù)二酮用氣相色譜_質(zhì)譜聯(lián)用儀進行定性鑒定分析，實驗條件氣相色譜條件石英毛細管柱HP-FFAP(30mX0.25mm，0.25um)，程序升溫從160。C開始，保持20min，再以20°C/min升溫到250°C，載氣為He，柱流量3.Oml/min，進樣口溫度250。C，分流比50:1。質(zhì)譜條件EI源；電離電壓70eV，離子源溫度230。C，掃描范圍40500a咖，進樣量1.OuL。結(jié)果如附圖l，表明自制莪術(shù)二酮質(zhì)譜裂片圖與計算機質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫莪術(shù)二酮圖譜完全一致，用本發(fā)明方法得到的物質(zhì)確為莪術(shù)二酮。實施例5對實施例1獲得的莪術(shù)二酮和市售莪術(shù)二酮用高效液相色譜儀進行定量比較分5析，實驗條件液相色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.1%乙酸水溶液(40:60)為流動相；檢測波長為230nm;流速為lml/min。結(jié)果如附圖2，該結(jié)果表明市售莪術(shù)二酮的含量僅為98.1%，用本發(fā)明方法提取純化的莪術(shù)二酮含量為99.9%。市售莪術(shù)二酮的分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本申請實施例1的莪術(shù)-二酮分析結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明通過優(yōu)化色譜條件和結(jié)晶條件，從莪術(shù)油中獲得了高純度的莪術(shù)二酮單體，為含有莪術(shù)油的產(chǎn)品的定量檢測提供了高純度的對照品，也為其他含有莪術(shù)二酮的產(chǎn)品的開發(fā)提供了優(yōu)質(zhì)的原料。以上實施例僅僅是例舉，并非對本發(fā)明的限制，其他在本發(fā)明基礎(chǔ)上進行簡單變換的實施方式或等同替代方式也將落入本發(fā)明的保護范圍。權(quán)利要求一種從莪術(shù)油中提取、純化莪術(shù)二酮的方法，包括如下步驟將莪術(shù)油與適量柱層析用硅膠拌勻，上預填好的硅膠柱，以60～90℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，其中石油醚∶乙酸乙酯體積比依次為100∶0，30∶1，25∶1，20∶1，15∶1，12∶1，9∶1，收集每個梯度下的洗脫液，每份30ml，即時對各梯度下的多份洗脫液用薄層法檢測，將12∶1和9∶1梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮，0～2℃冷藏，放置24～48小時，有晶體析出，濾過，晶體用石油醚(60～90℃)溶解，溶液與適量柱層析用硅膠拌勻，上預填好的硅膠柱，再次以60～90℃的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑進行梯度洗脫，調(diào)整洗脫液的比例，其中石油醚∶乙酸乙酯體積比依次為18∶1，15∶1，12∶1，收集每個梯度下的洗脫液，每份20ml，即時對各梯度下的多份洗脫液用薄層法檢測，將12∶1梯度下檢測結(jié)果顯示含有單一莪術(shù)二酮斑點的多份洗脫液合并，濃縮、0～2℃冷藏、放置24～48小時結(jié)晶，結(jié)晶物用合適的有機溶劑進行重結(jié)晶，即得莪術(shù)二酮產(chǎn)品。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的硅膠柱為干法填充的硅膠柱。3.如權(quán)利要求l或2所述的方法，其中所述的重結(jié)晶溶劑選自石油醚、正丁醇或正己烷。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中的重結(jié)晶溶劑優(yōu)選為正己烷。5.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中莪術(shù)二酮的純度為99.8%-99.9%。全文摘要本發(fā)明涉及一種從天然藥用植物揮發(fā)油莪術(shù)油中提取純化莪術(shù)二酮的方法，本方法得到的莪術(shù)二酮純度達到99.9％，符合中藥領(lǐng)域?qū)φ掌返募兌纫?，并為后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)提供優(yōu)良的原料。該方法系將莪術(shù)油與層析用硅膠混勻，上硅膠柱，用不同比例的石油醚∶乙酸乙酯作為洗脫劑梯度洗脫，收集、合并含有莪術(shù)二酮成分的洗脫液，濃縮，冷藏放置，析出結(jié)晶，結(jié)晶物同法再次分離、純化，得到的晶體重結(jié)晶，即得莪術(shù)二酮，此方法操作簡單，重復性好。文檔編號C07C45/79GK101709028SQ20091017702公開日2010年5月19日申請日期2009年9月17日優(yōu)先權(quán)日2009年9月17日發(fā)明者馮仲異,史朝暉,陳容申請人:海南碧凱藥業(yè)有限公司