專利名稱：一種高純度光甘草定的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥和化妝品領(lǐng)域，特別涉及一種從光果甘草中生產(chǎn)高純度光甘草定
的新方法。
背景技術(shù)：
光甘草定(Glabridin)是從甘草的特定品種_光果甘草中提取的具有抗菌消炎、 抗氧化、抗衰老、防紫外線、美白亮膚、祛斑等功效的天然活性成分。光甘草定既能抑制酪氨 酸酶的活性，又能抑制多巴色素互變和DHICA氧化酶的活性，具有與SOD (過氧化物歧化酶) 相似的清除氧自由基的能力和與維生素E相近的抗氧自由基的能力。它能深入皮膚內(nèi)部并 保持高活性，有效抑制黑色素生成過程中多種酶的活性。同時(shí)還具有防止皮膚粗糙和抗炎、 抗菌的功效。是一種快速、高效、綠色的美白祛斑化妝品添加劑。自1989年日本MARUZEN 公司作為美白化妝品添加劑推出以來，因其作用明顯、功能全面、安全性好，光甘草定目前 在化妝品行業(yè)大量使用，如國(guó)際著名化妝品品牌Lancome、Sonia Rykiel、Chanel以及日本、 韓國(guó)的高檔化妝品普遍使用。在化妝品行業(yè)使用時(shí)被命名為甘草美白精華素(PT-40)。
高純度的光甘草定供不應(yīng)求，95% (高效液相色譜HPLC測(cè)定)純度的光甘草定售 價(jià)高達(dá)40萬元/公斤。而目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)工藝得到的產(chǎn)品很難達(dá)到該純度，而且生產(chǎn)中多采 用氯仿、甲醇等有毒有機(jī)溶劑。 因此，建立工藝簡(jiǎn)單、成本低廉又相對(duì)安全的光甘草定生產(chǎn)工藝具有十分重要的 社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、工藝簡(jiǎn) 單的制備高純度(高效液相色譜95% )光甘草定的方法。 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種制備高純度光甘草定的方法，包括以 下操作步驟 (1)將光果甘草干燥粉碎，用堿水煎煮，過濾，合并煎煮液，濃縮，得到堿水煎煮 液； (2)將堿水煎煮液上樹脂層析柱，先用水洗脫，再用體積百分比濃度為45 55% 乙醇洗脫，然后用體積百分比濃度為85 95%乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為45 55%乙醇洗脫液，濃縮至干，得到甘草酸；收集體積百分比濃度為85 95%乙醇洗脫液，濃 縮，得到濃縮液； (3)將步驟(2)所得濃縮液上聚酰胺層析柱，先用體積百分比濃度為45 50%乙 醇洗脫，然后用體積百分比濃度為70 75%乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為70 75% 乙醇洗脫液，濃縮至干，得到光甘草定； (4)將步驟(3)所得光甘草定回流溶解于丙酮中，冷卻結(jié)晶，過濾，干燥，得到的高 純度光甘草定成品。得率為光果甘草的0.06%。
步驟(1)所述粉碎為粉碎至過20目篩，所述堿水的pH值為8 9 ;所述堿水為氨 水、氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。 步驟(1)所述堿水煎煮的次數(shù)為2 3次，每次煎煮的時(shí)間為1 2小時(shí)，每次煎
煮所用堿水的量為4 5升/公斤甘草；所述堿水煎煮的同時(shí)進(jìn)行攪拌。 步驟(2)所述樹脂層析柱是大孔吸附樹脂AB-8或大孔吸附樹脂X-5。 步驟(2)所述水洗脫是用0. 8 1. 5個(gè)柱體積的水進(jìn)行洗脫；所述體積百分比濃
度為45 55%乙醇洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為45 55%乙醇進(jìn)
行洗脫；所述體積百分比濃度為85 95%乙醇洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分
比濃度為85 95%進(jìn)行洗脫。 步驟(1)所述濃縮是將堿水煎煮液濃縮到1/8 1/10體積；步驟(2)所述濃縮是 將體積百分比濃度為85 95%乙醇洗脫液濃縮至1/5 1/8體積(即不濃縮干，保持良好 的流動(dòng)性)。 步驟(3)所述聚酰胺層析柱為60 80目；所述體積百分比濃度為45 50%乙醇 洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為45 50%乙醇進(jìn)行洗脫；所述體積百 分比濃度為70 75%乙醇洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為70 75% 乙醇進(jìn)行洗脫。 步驟(4)所述丙酮的體積加入量為光甘草定體積的5 6倍；所述回流溫度為 50 60°C，時(shí)間為1 1. 5小時(shí)；所述冷卻為先置于室溫冷卻0. 5 1小時(shí)，再于0 5°C 冷卻8 10小時(shí)；所述干燥為真空干燥，干燥溫度為50 6(TC，干燥時(shí)間為2 3小時(shí)。 所述室溫為15 25°C。 步驟(2)所述甘草酸的純度為^ 50% ;步驟(3)所述光甘草定的純度為^ 70% ; 步驟(4)所述高純度光甘草定成品的純度> 95%。 為了保證產(chǎn)物的純度滿足使用的需要，用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定光甘草定純 度，當(dāng)光甘草定純度不滿足需求時(shí)，往產(chǎn)品中加入丙酮重復(fù)步驟(4)1 2次，直到產(chǎn)品純度 符合要求。 本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果 (1)在光甘草定的生產(chǎn)中使用堿水提取替代有機(jī)溶劑，提取溶劑為pH8 9的氨水 或氫氧化鈉或氫氧化鉀堿溶液，成本大大降低，產(chǎn)品安全性高，光甘草定溶解性好，得率提 高；一般光果甘草中含有約0. 1%的光甘草定，本方法所得產(chǎn)品得率可大于0. 06%，純度經(jīng) HPLC測(cè)定〉95%。 (2)由于采用大孔樹脂柱層析分離，比現(xiàn)有采用氧化鋁柱或硅膠層析成本更低，因 大孔樹脂可重復(fù)利用，而氧化鋁柱或硅膠柱很難重復(fù)利用。 (3)采用乙醇洗脫，避免目前工藝中氧化鋁柱或硅膠柱層析時(shí)用氯仿、甲醇等對(duì)人 體有害的溶劑，而且氧化鋁柱或硅膠柱層析時(shí)需要用氯仿和甲醇混合溶液或氯仿和丙酮混 合溶液梯度洗脫，溶劑很難回收利用。而采用乙醇溶液洗脫非常利于溶劑回收使用。
(4)本發(fā)明同時(shí)還可得到含量^ 50%的甘草酸，做到資源的綜合利用。
(5)工藝簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化。
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圖1為本發(fā)明方法制備的高純度光甘草定成品的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。
實(shí)施例1 : (1)將光果甘草(采自新疆)干燥粉碎，取過20目篩的粉末lkg，置于IOL不銹鋼 鍋中，用4L pH8的氨水煎煮提取，煮沸攪拌1小時(shí)，共提取2次，離心分離除去殘?jiān)?；合并?取液，濃縮至1L，得到氨水濃縮液； (2)將步驟(1)所得氨水濃縮液上大孔吸附樹脂(AB-8，南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))層 析柱(①60X600mm)，用1500ml水洗脫后，繼續(xù)用2000ml體積百分比濃度為45%的乙醇洗 脫，收集洗脫液，濃縮至干，得到純度為56. 02%甘草酸，存放；繼續(xù)用2000ml體積百分比濃 度為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至250ml，得到濃縮液； (3)將步驟(2)所得濃縮液250ml上聚酰胺(浙江臺(tái)州四甲生化塑料廠生產(chǎn))層 析柱(①35X600mm)，先用800ml體積百分比濃度為45%的乙醇洗脫，然后用800ml體積百 分比濃度為70%乙醇洗脫，收集體積百分比濃度為70%乙醇洗脫液，濃縮干，得到純度為 70. 22%的光甘草定； (4)將步驟(3)所得光甘草定用5ml丙酮回流溶解，50°C回流1小時(shí)，15 25°C 狀態(tài)下冷卻1小時(shí)后放入冰箱，5 °C冷卻8小時(shí)得淡黃色的結(jié)晶；過濾出結(jié)晶，真空干燥箱內(nèi) 5(TC干燥2小時(shí)，得到高純度光甘草定成品0. 63g。 用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定高純度光甘草定成品的純度為95. 61%，圖譜如圖1 所示。所述高效液相色譜的測(cè)定條件為柱子VP-ODS 250X4. 6 ;洗脫液甲醇45% -90% (30min)，進(jìn)樣量:20ul ;吸收波長(zhǎng)275nm。
實(shí)施例2 : (1)取過20目篩的光果甘草(采自新疆)粉末10kg，置于IOOL反應(yīng)釜中，用50L pH8. 5的氫氧化鈉堿水溶液煮沸并攪拌提取1小時(shí)，共提取3次，離心分離除去殘?jiān)缓喜?提取液，濃縮至15L，得到氫氧化鈉濃縮液； (2)將氫氧化鈉濃縮液上大孔吸附樹脂(X-5，南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))層析柱 (①100X1500mm)，用12L水洗脫后，繼續(xù)用20L體積百分比濃度為55%的乙醇洗脫，收集洗 脫液，濃縮至干，得到純度為63. 55%甘草酸，存放；繼續(xù)用20L體積百分比濃度為85X的乙 醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至3L，得到濃縮液； (3)將步驟(2)所得3L濃縮液上聚酰胺(浙江臺(tái)州四甲生化塑料廠生產(chǎn))層析 柱(①50X1000mm)，先用2L體積百分比濃度為50%乙醇洗脫，然后用2L體積百分比濃度 為75%乙醇洗脫；將體積百分比濃度為75%乙醇洗脫液濃縮干，得到純度為79. 86%的光 甘草定； (4)將步驟(3)所得光甘草定用50ml丙酮回流溶解，6(TC回流1.5小時(shí)，15 25t:冷卻0. 5小時(shí)后放入冰箱，5t:冷卻10小時(shí)得淡黃色的結(jié)晶；過濾出結(jié)晶，真空干燥箱 內(nèi)55t:干燥2. 5小時(shí)，得到高純度光甘草定成品6. 26g。
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用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定高純度光甘草定成品的純度為96. 77% 。所述高效液 相色譜的測(cè)定條件為柱子VP-ODS 250X4. 6 ;洗脫液甲醇45% -90% (30min)，進(jìn)樣量 20ul ;吸收波長(zhǎng)275nm。
實(shí)施例3 : (1)取過20目篩的光果甘草(采自新疆)粉末50kg，置于500L多功能提取罐中， 用250L pH9的氫氧化鉀堿水溶液煮沸并攪拌提取2小時(shí)，共提取3次，離心分離除去殘?jiān)?合并提取液，濃縮至80L，得到氫氧化鉀濃縮液； (2)將將氫氧化鉀濃縮液上大孔吸附樹脂(AB-8，南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))層析柱 (①300X 1800mm)，用IOOL水洗脫后，繼續(xù)用200L體積百分比濃度為50%的乙醇洗脫，收集 洗脫液，濃縮至干，得到純度為61. 43%甘草酸，存放；繼續(xù)用200L體積百分比濃度為90% 的乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至30L，得到濃縮液； (3)向步驟(1)所得30L濃縮液上聚酰胺(浙江臺(tái)州四甲生化塑料廠生產(chǎn))層析 柱(①120X 1500mm，南開大學(xué)化工廠生產(chǎn))，先用30L體積百分比濃度為45%乙醇洗脫，然 后用30L體積百分比濃度為70%乙醇洗脫。將體積百分比濃度為70%乙醇洗脫液濃縮干， 得到純度為75. 58%的光甘草定； (4)將步驟(3)所得光甘草定用300ml丙酮回流溶解，60°C回流1. 5小時(shí)，15 25t:冷卻1小時(shí)后放入冰箱，(TC冷卻10小時(shí)得淡黃色的結(jié)晶；過濾出結(jié)晶，真空干燥箱內(nèi) 6(TC干燥3小時(shí)，得到高純度光甘草定成品31. 77g。 用高效液相色譜(HPLC)測(cè)定得到高純度光甘草定成品的純度為96. 12% 。所述高 效液相色譜的測(cè)定條件為柱子VP-ODS 250X4. 6 ;洗脫液甲醇45% -90% (30min)，進(jìn) 樣量20ul ;吸收波長(zhǎng)275nm。 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于包括以下操作步驟(1)將光果甘草干燥粉碎，用堿水煎煮，過濾，合并煎煮液，濃縮，得到堿水煎煮液；(2)將堿水煎煮液上樹脂層析柱，先用水洗脫，再用體積百分比濃度為45～55％乙醇洗脫，然后用體積百分比濃度為85～95％乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為45～55％乙醇洗脫液，濃縮至干，得到甘草酸；收集體積百分比濃度為85～95％乙醇洗脫液，濃縮，得到濃縮液；(3)將步驟(2)所得濃縮液上聚酰胺層析柱，先用體積百分比濃度為45～50％乙醇洗脫，然后用體積百分比濃度為70～75％乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為70～75％乙醇洗脫液，濃縮至干，得到光甘草定；(4)將步驟(3)所得光甘草定回流溶解于丙酮中，冷卻結(jié)晶，過濾，干燥，得到的高純度光甘草定成品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(1)所 述粉碎為粉碎至過20目篩，所述堿水的pH值為8 9 ;所述堿水為氨水、氫氧化鈉溶液或 氫氧化鉀溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(1)所 述堿水煎煮的次數(shù)為2 3次，每次煎煮的時(shí)間為1 2小時(shí)，每次煎煮所用堿水的量為 4 5升/公斤甘草；所述堿水煎煮的同時(shí)進(jìn)行攪拌。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(2)所 述樹脂層析柱是大孔吸附樹脂AB-8或大孔吸附樹脂X-5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(2)所述 水洗脫是用0. 8 1. 5個(gè)柱體積的水進(jìn)行洗脫；所述體積百分比濃度為45 55%乙醇洗脫 是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為45 55%乙醇進(jìn)行洗脫；所述體積百分比濃 度為85 95%乙醇洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為85 95%進(jìn)行洗脫。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(1)所 述濃縮是將堿水煎煮液濃縮到1/8 1/10體積；步驟(2)所述濃縮是將體積百分比濃度為 85 95%乙醇洗脫液濃縮至1/5 1/8體積。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(3)所 述聚酰胺層析柱為60 80目；所述體積百分比濃度為45 50%乙醇洗脫是用1. 5 2. 5 個(gè)柱體積的體積百分比濃度為45 50%乙醇進(jìn)行洗脫；所述體積百分比濃度為70 75% 乙醇洗脫是用1. 5 2. 5個(gè)柱體積的體積百分比濃度為70 75%乙醇進(jìn)行洗脫。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(4)所 述丙酮的體積加入量為光甘草定體積的5 6倍；所述回流溫度為50 60°C，時(shí)間為1 1. 5小時(shí)；所述冷卻為先置于室溫冷卻0. 5 1小時(shí)，再于0 5t:冷卻8 10小時(shí)；所述 干燥為真空干燥，干燥溫度為50 6(TC，干燥時(shí)間為2 3小時(shí)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于所述室溫為 15 25°C。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備高純度光甘草定的方法，其特征在于步驟(2)所 述甘草酸的純度為^ 50% ;步驟(3)所述光甘草定的純度為^ 70% ;步驟(4)所述高純度 光甘草定成品的純度> 95%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度光甘草定的生產(chǎn)方法。該方法包括將光果甘草干燥粉碎，堿水煎煮，過濾，濃縮，得到堿水煎煮液；上樹脂層析柱，依次用水和乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為45～55％乙醇洗脫液，濃縮得到甘草酸；收集體積百分比濃度為85～95％乙醇洗脫液，濃縮，將濃縮液上聚酰胺層析柱，依次用不同體積百分比濃度的乙醇洗脫；收集體積百分比濃度為70～75％乙醇洗脫液，濃縮至干，得到光甘草定；將光甘草定回流溶解于丙酮中，冷卻結(jié)晶，過濾，干燥，得到成品。本發(fā)明用堿水替代有機(jī)溶劑提取，用大孔樹脂柱替代硅膠層析柱分離，用乙醇溶液替代氯仿等混合洗脫液，成本更低，產(chǎn)品安全性更好，成品純度和產(chǎn)品得率高。
文檔編號(hào)C07D493/00GK101735233SQ200910213748
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2009年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月11日
發(fā)明者胡長(zhǎng)鷹 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)