專利名稱：一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒。
背景技術(shù)：
三聚氰胺(Melamine)，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，重要的氮雜環(huán)有機(jī)化 工原料。純白色單斜棱晶體，無味。溶于熱水，微溶于冷水，極微溶于熱乙醇，不溶于醚、苯 和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等。在一般情況下較穩(wěn)定，但在 高溫下可能會分解放出氰化物。由于三聚氰胺的分子式中含氮量為66%左右，而蛋白質(zhì)的平均含氮量為16%左 右，因此，常被一些不法商人用作食品添加劑，以提升食品檢測中的蛋白質(zhì)含量指標(biāo)，因此 三聚氰胺被俗稱為“蛋白精”。雖然，目前廣泛認(rèn)為三聚氰胺毒性比較低微，大鼠口服的半 數(shù)致死量大于3g/kg體重，但長期攝入仍不容忽視，會造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎 部結(jié)石，并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。1994年國際化學(xué)品安全規(guī)劃署和歐洲聯(lián)盟委員會合編的 《國際化學(xué)品安全手冊》第三卷和國際化學(xué)品安全卡片說明長期或反復(fù)大量攝入三聚氰胺 可能對腎與膀胱產(chǎn)生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。因此，需要靈敏、準(zhǔn)確、快速的檢測方法。目前檢測三聚氰胺含量的化學(xué)方法有高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法， 由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種三聚氰胺單克隆抗體。本發(fā)明所提供的三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰 胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL也屬于本發(fā) 明的保護(hù)范圍。所述三聚氰胺單克隆抗體在制備檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用也屬 于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明所提供的檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒，為下述1) ,2)、3)或4)中任一 所述酶聯(lián)免疫試劑盒1)酶聯(lián)免疫試劑盒中三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、所述三聚氰胺單克隆 抗體和酶標(biāo)記抗抗體；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；2)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、所述三聚氰胺單克隆抗體 和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；3)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、所述三聚氰胺單克隆抗 體；其中，所述三聚氰胺單克隆抗體作為包被原；4)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、所述三聚氰胺單
4克隆抗體的酶標(biāo)記物；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；
所述三聚氰胺半抗原的結(jié)構(gòu)式如式I所示
權(quán)利要求
1.一種三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰胺單克隆抗體 雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。
2.保藏編號為CGMCCNo. 3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL。
3.權(quán)利要求1所述三聚氰胺單克隆抗體在制備檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒中的 應(yīng)用。
4.一種檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒，為下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶聯(lián)免疫 試劑盒1)酶聯(lián)免疫試劑盒中三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、權(quán)利要求1中所述三聚氰 胺單克隆抗體和酶標(biāo)記抗抗體；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；2)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、權(quán)利要求1中所述三聚氰胺單 克隆抗體和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；3)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、權(quán)利要求1中所述三聚氰胺單 克隆抗體；其中，所述三聚氰胺單克隆抗體作為包被原；4)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、權(quán)利要求1中所述三 聚氰胺單克隆抗體的酶標(biāo)記物；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；所述三聚氰胺半抗原的結(jié)構(gòu)式如式I所示CH2-CH2-CH2-coohhn人人h2n n、nh2(式i)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述載體蛋白為卵清蛋白、牛 血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、兔血清蛋白或血藍(lán)蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述酶聯(lián)免疫試劑盒中 包括三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、洗滌液和樣品稀釋液；所述三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液為濃度分別為ο μ g/L、5 μ g/L、20 μ g/LUOO μ g/L、500 μ g/L 和2500 μ g/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述底物顯色液由A液和B液組成，所述A液為濃度為1. 5% -2. 5%的過氧化脲的水 溶液，B液為濃度為0. 5% -1. 5%的四甲基聯(lián)苯胺的水溶液；所述洗滌液為濃度為0. 8% 1. 2%的吐溫20和濃度為0. 3% -0. 7%的疊氮化鈉的 0. 005M-0. 015M磷酸鹽緩沖液；所述樣品稀釋液為20X (0. 03mol/L-0. 05mol/L)的磷酸鹽緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述抗抗體為羊抗 鼠抗抗體或羊抗兔抗抗體。
8.—種檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括如下步驟1)將待測樣品進(jìn)行前處理，得到待測樣本溶液；2)用權(quán)利要求4-7中任一所述酶聯(lián)免疫試劑盒對所述待測樣本溶液進(jìn)行檢測；所述前處理的方法為下述幻、13)、(3)、(1)、6)和f)中的任一a)所述待測樣品為奶粉；每取0.8g-l. 2g所述奶粉溶于8ml-12ml權(quán)利要求6中所述 樣品稀釋液中，混合均勻，離心，取上清液，即為待測樣本溶液；b)所述待測樣品為牛奶；將所述牛奶與權(quán)利要求6中所述樣品稀釋液按照1 (9-11) 的體積比混勻，得到的溶液即為待測樣本溶液；c)所述待測樣品為蛋；將每0.8g-l. 2g蛋用8ml-12ml提取劑進(jìn)行提取，得到的提取液 即為待測樣本溶液；d)所述待測樣品為寵物食品；將每1.8g-2. 2g寵物食品用8ml-12ml提取劑進(jìn)行提取， 得到的提取液即為待測樣本溶液；e)所述待測樣品為飼料；將每0.8g-l. 2g飼料用8ml-12ml提取劑進(jìn)行提取，得到的提 取液即為待測樣本溶液；f)所述待測樣品為小麥面筋；將每0.lg-0. 3g小麥面筋用8ml-12ml提取劑進(jìn)行提取， 得到的提取液即為待測樣本溶液；所述提取劑的組成為由Na2HPO4 · 12H20、NaH2PO4 WH2CKNaCl、Tween20和水組成，所述 Na2HPO4 · 12H20在所述提取劑中的濃度為2. 9g/L，所述NaH2PO4 · 2H20在所述提取劑中的濃 度為0. 2g/L，所述NaCl在所述提取劑中的濃度為0. 9g/L，所述Tween20在所述提取劑中的 濃度為0. 05g/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測三聚氰胺的方法及其專用酶聯(lián)免疫試劑盒。該酶聯(lián)免疫試劑盒，包括三聚氰胺單克隆抗體和三聚氰胺半抗原。三聚氰胺單克隆抗體是由保藏編號為CGMCC No.3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。本發(fā)明的酶聯(lián)免疫試劑盒主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測動物或人食用的產(chǎn)品(特別是牛奶、奶粉等乳品及蛋、飼料等)中三聚氰胺的含量。本發(fā)明試劑盒及檢測方法對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批量樣品；采用高特異性的三聚氰胺單克隆抗體，檢驗方法方便易行，具有特異性高、靈敏度高、精確度高、準(zhǔn)確度高等特點。
文檔編號C07K16/44GK102086229SQ200910242089
公開日2011年6月8日 申請日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者史為民, 吳小平, 張興祥, 徐飛, 李姮, 江海洋, 潘凈茹, 王戰(zhàn)輝, 王照鵬 申請人:北京維德維康生物技術(shù)有限公司