專利名稱：采用衍生的三嗪作為親合配體的用于抗體片段的純化方法
采用衍生的三嗪作為親合配體的用于抗體片段的純化方法本發(fā)明涉及一種純化片段抗體(fAb)的方法。在許多治療領域中片段抗體(fAb)越來越重要。制備fAb的最重要的方法之一是 借助重組技術。這種技術采用宿主細胞表達希望的fAb，然后再從制備介質中分離并純化。 純化通常借助色譜進行，而且純化通常是復雜的多步方法。這種復雜性不可避免地限制了 所能獲得的fAb的產率，并且顯著減緩了制備過程。因此，人們希望找到操作更簡便的純化 方法。許多全抗體都是采用蛋白質A親合色譜純化。但是，人們認為蛋白質A具有許多 缺陷，包括有時在惡劣的方法條件下穩(wěn)定性差、變性、成本高以及由于蛋白質A本身是生物 源材料而引起的法規(guī)限制問題。因此，為了純化具有蛋白質A親合性的抗體，人們研發(fā)出作 為替代物的合成的親合配體。fAb不具有蛋白質A親合性，不能夠與其結合，因此不能采用蛋白質A親合色譜 進行純化。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種從介質中分離fAb的方法，其包括在使fAb結 合至合成的親合配體上的條件下，使包含所述fAb的介質與連接在載體基質上的合成的親 合配體接觸，其中所述合成的親合配體具有下式
權利要求
1. 一種從介質中分離片段抗體的方法，其包括在使所述片段抗體結合至合成的親合配 體上的條件下，使包含所述片段抗體的介質與連接在載體基質上的合成的親合配體接觸， 其中所述合成的親合配體具有下式其中Q代表與固體載體基質的連接，其任選經由間隔基團連接；A和B各自獨立地為被一個或多個能夠氫鍵結合的取代基取代的-Y-苯基或-Y-萘基； 每個Y獨立地代表-
2. 一種制備片段抗體的方法，包括a)通過重組技術制備片段抗體，從而制備包含片段抗體的介質；b)按照包含下述步驟的方法從所述介質中分離所述片段抗體使包含所述片段抗體 的介質與連接在載體基質上的合成的親合配體接觸，其中所述合成的親合配體具有下式
3.根據(jù)權利要求2的方法，其中通過大腸桿菌或畢赤酵母菌宿主細胞的表達制備所述 片段抗體。
4.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中能夠氫鍵結合的取代基獨立地選自-0H、-SH 或-co2H。
5.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中連接在載體基質上的合成的親合配體選自下式的化合物
6.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中Q代表選自下列的間隔基團式-NH-(CH2) nNH-G; -NH- (CH2)nO-G; -0- (CH2)nO-G; -0- (CH2CH2)nO-G; -NH- (CH2)nO-G;和-NH-(CH2) nNH-(CH2)xO-G其中η為至多12的正整數(shù)；χ為1 - 6 ；和G為固體載體基質。
7.根據(jù)權利要求6的方法，其中η為2- 6。
8.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中所述片段抗體在6-8的ρΗ下結合在配體上。
9.根據(jù)權利要求8的方法，其中所述片段抗體在6.5-7. 5的ρΗ下結合在配體上。
10.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中在離子強度小于50mS/cm，優(yōu)選為10-40mS/cm 的溶液中使所述片段抗體結合在所述配體上。
11.根據(jù)權利要求10的方法，其中在離子強度為10-40ms/cm的溶液中使所述片段抗體 結合在所述配體上。
12.根據(jù)前述任何權利要求的方法，其中所述片段抗體為Fab;scFv；單個的結構域或 其片段 ’雙scFV、Fab2、Fab3、微型抗體、雙抗體、三抗體、四抗體或tandab。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中所述片段抗體為來自可變重鏈或其片段的單個的結 構域，或者為來自可變輕鏈或其片段的單個的結構域。
HO全文摘要
提供了一種從介質中分離片段抗體的方法。所述方法包括在使所述片段抗體結合至合成的親合配體上的條件下，使包含所述片段抗體的介質與連接在載體基質上的合成的親合配體接觸。所述合成的親合配體具有下式其中Q代表與固體載體基質的連接，其任選經由間隔基團連接；A和B各自獨立地為被一個或多個能夠氫鍵結合的取代基，優(yōu)選一個或多個–OH、-SH或–CO2H取代的-Y-苯基或-Y-萘基；每個Y獨立地代表–NR-、-O-或–S-；和每個R獨立地代表H或C1-4烷基。
文檔編號C07K1/22GK102056943SQ200980117168
公開日2011年5月11日 申請日期2009年5月7日 優(yōu)先權日2008年5月16日
發(fā)明者M. 利德爾 J. 申請人:Msd生物制劑(英國)有限公司