專利名稱：一種治療疾病的試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及自身免疫性疾病的治療。本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及可以以低于此前 所述的頻率在治療中施用于患者并具有長期效果的諸如人源化單克隆抗體等試劑。本 發(fā)明對具有無法在短期內(nèi)消除或者需要無限期治療以解除癥狀的疾病或疾病或病癥 (characteristics)的患者尤其有效。本發(fā)明設(shè)想到包含采用所述試劑的所述組合物和藥物 的應(yīng)用和治療方法。自身免疫是生物體不能將其自身構(gòu)成部分(低至亞分子水平)識別為“自己”， 這導(dǎo)致針對其自身細(xì)胞和組織的免疫反應(yīng)。任何由這種異常免疫應(yīng)答造成的疾病都稱為 自身免疫性疾病。自身免疫性疾病包括多發(fā)性硬化癥(MS)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)、銀屑 病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、潰瘍性腸炎、克羅恩病、重癥肌無力(MG)、II型自身免疫性多腺 體綜合征(APS-II)、橋本甲狀腺炎(HT)、I型糖尿病(TlD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和 自身免疫性淋巴增生綜合征(ALS)。自身免疫性疾病在T細(xì)胞識別“自身”分子(即，由宿主的細(xì)胞產(chǎn)生的分子) 并對“自身”分子產(chǎn)生反應(yīng)的時(shí)候發(fā)生。由抗原呈遞細(xì)胞(APC)加工的自體抗原的呈 遞對“自體反應(yīng)性” T細(xì)胞的激活導(dǎo)致它們克隆擴(kuò)增并遷移到特定組織，在這樣的組織 中它們弓I發(fā)發(fā)炎和組織破壞。一般而言，自體組織對T細(xì)胞具有耐受性，并且T細(xì)胞只對異源結(jié)構(gòu)的呈遞產(chǎn)生 反應(yīng)。中央耐受和外周耐受包括兩種機(jī)制，免疫系統(tǒng)通過所述機(jī)制阻止自體反應(yīng)性T細(xì) 胞誘導(dǎo)它們的有害功能。中央耐受通過負(fù)選擇介導(dǎo)。該過程在胸腺中在個(gè)體生成發(fā)育過 程中負(fù)責(zé)通過自身反應(yīng)性T細(xì)胞的克隆刪除來進(jìn)行消除。外周耐受是如果中央耐受失敗并且自體反應(yīng)性細(xì)胞逃避胸腺時(shí)可以采用的備用 方式。這種耐受機(jī)制在整個(gè)生命過程中持續(xù)發(fā)生，通過免疫忽視(免疫無能)、外周刪除 和/或主動(dòng)抑制對自體反應(yīng)性細(xì)胞進(jìn)行檢查。作為主動(dòng)抑制的一部分的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，此前也稱為“抑制細(xì) 胞”)保持外周耐受并調(diào)節(jié)自身免疫(Suri-Payer等，J Immunol. 157 1799-1805(1996)； Asano 等，J Exp.Med.184 387-396 (1996) ； Bonomo 等，J.Immunol. 154 6602-6611 (1995) ； Willerford 等，Immunity 3 521-530(1995) ； Takahashi 等，Int. ImmunoLlO 1969-1980(1998) ； Salomon 等，Immunity 12 431-440(2000) ； Read 等，
J Exp.Med.192 295-302 (2000))。通常，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制1型T輔助細(xì)胞(THl)和 TH2效應(yīng)細(xì)胞的活化和/或功能。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率或功能的調(diào)節(jié)異常能夠?qū)е伦陨?免疫性疾病減弱(Baecher-Allan 等，Immunol.Review 212 203-216(2006) ； Shevach, Annu.Rev.Immunol.18 423-449(2000) ； Salomon 等，Immunity 12 431-440(2000)； Sakaguchi 等，Immunol.Rev.182 18-32(2001))。已經(jīng)有若干個(gè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞組得到表征。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞家族由2個(gè)主要亞組組 成天然產(chǎn)生的例如CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，和外周誘導(dǎo)的Trl和Tr3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。 而且，NK調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD8+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在人類和嚙齒類動(dòng)物中已有描述(Fehervari等，J.Clin.Investigationll4 1209-1217(2004))。胸腺來源的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(天然產(chǎn)生的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)是參與調(diào)節(jié) 自身免疫或致病性免疫應(yīng)答的主要調(diào)節(jié)性細(xì)胞。i)它們是CD4+T細(xì)胞并占外周CD4+T細(xì)胞的5%至10%ii)它們在胸腺中成熟
iii)它們一般具有如下特征IL-2調(diào)節(jié)子(CD25)的聯(lián)合表達(dá)、CD45分子的低 分子同工型、CD152(CTLA_4)、和轉(zhuǎn)錄因子FoxP3。能夠最好地示例調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的作用的實(shí)驗(yàn)是CD4+細(xì)胞的缺乏CD25+細(xì) 胞的免疫缺陷裸小鼠的重構(gòu)。CD4+CD25_重構(gòu)裸小鼠發(fā)生各種器官特異性自身免疫 性疾病(如胃炎、卵巢炎、睪丸炎和甲狀腺炎)(Suri-Payeret al. ； J.Immunol. 160 1212-1218(1998))。將CD4+CD25+亞組包含在用裸小鼠進(jìn)行的重構(gòu)實(shí)驗(yàn)中防止了這些疾病的發(fā)作 (Sakaguchi等，J Immunol.155 1151-1164 (1995))。在若干種其他由出生后3天進(jìn)行新 生胸腺摘除術(shù)(d3Tx)造成的自身免疫性模型(如自身免疫性胃炎、前列腺炎、卵巢炎、 腎小球腎炎、附睪炎和甲狀腺炎)或通過CD45RBhigh，CD4+CD25—T細(xì)胞的SCID小鼠 重構(gòu)造成的炎性腸病中也證明了抗器官特異性自身免疫的CD4+CD25+細(xì)胞的保護(hù)價(jià)值。 在小鼠中體內(nèi)施用抗CD25抗體還誘導(dǎo)器官局部性自身免疫性疾病。轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子FoxP3在小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能中的重要性的發(fā)現(xiàn) 和患有IPEX綜合征(免疫調(diào)節(jié)異常、多發(fā)內(nèi)分泌病、腸下垂和X連鎖遺傳病)(類似于 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞缺陷小鼠中見到的嚴(yán)重炎性疾病)的患者在FoxP3中具有突變的觀 察結(jié)果提供了在自身免疫動(dòng)物模型(小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)和人類自身免疫性疾病之間的直 接關(guān)系(Sakaguchi 等，J Immunol.155 1151-1164(1995))。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的藥學(xué)機(jī)制尚不完全清楚。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制多克隆 和抗原特異性T細(xì)胞活化。抑制由細(xì)胞接觸依賴性機(jī)制所介導(dǎo)，其要求通過TCR活化 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，但是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在TCR活化或促有絲分裂抗體刺激時(shí)沒有 顯示出增殖性應(yīng)答(無反應(yīng)性)(Shevach，Nature Rev.Immunol 2 389 (2002))。一旦受 到刺激，它們能夠以不依賴抗原的方式抑制CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的應(yīng)答，并抑制B 細(xì)胞活化和它們的克隆擴(kuò)增。有另外的數(shù)據(jù)表明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抑制子活性還部分地依賴于抗炎 性細(xì)胞因子如 TGF-β (Kingsley 等，J Immunol.168 1080 (2002) ； Nakamura 等，JExp.
Med. 194 629-644(2001))。TGF-β分泌的功能重要性得到如下發(fā)現(xiàn)的進(jìn)一步支持 TGF-β缺陷小鼠出現(xiàn)自身免疫性疾病并且在一些模型中施用抗TGF-β的中和抗體體內(nèi) 消除了對CD4+T細(xì)胞的自身免疫性或耐受性誘導(dǎo)活性的預(yù)防作用。在CD4+T細(xì)胞亞組中，可能存在至少兩種類型更加不同的在接觸特異性外源性 抗原后受被誘導(dǎo)的具有抑制功能的細(xì)胞(稱為“稱為適應(yīng)性或誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞”)
1型調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Trl)和Th3細(xì)胞。根據(jù)其細(xì)胞因子生成曲線，這些細(xì)胞類型似乎與 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞不同。然而，這些不同細(xì)胞類型之間的關(guān)系還不清楚并且作用 模式重疊。Trl細(xì)胞在IL-10存在的情況下受到TCR的反復(fù)刺激所誘導(dǎo)，并顯示出通過生成高水平的IL-IO和適量的TGF-β來主要下調(diào)免疫應(yīng)答(Chen等，J.Immunol.171 733-744(2003))。Th3細(xì) 胞(在口服抗原后在EAE模型中鑒定到)生成高水平的TGF-β和不同量 的IL-4和IL-10。IL-4本身被證明是Th3細(xì)胞分化的關(guān)鍵因子(和由IL-10分化的Trl 細(xì)胞相反)(Chen 等，Science 265 1237-1240 (1994))。通過使用免疫抑制性藥物抑制T細(xì)胞的功能是已經(jīng)成功用來治療自身免疫性疾 病的基本治療策略。然而，這些藥物由于它們選擇性差，誘導(dǎo)了普遍的免疫抑制，從而 不僅抑制免疫系統(tǒng)的有害功能，還抑制了免疫系統(tǒng)的有用功能。結(jié)果，可能出現(xiàn)若干種 風(fēng)險(xiǎn)如感染、腫瘤和藥物毒性。對于各種自身免疫性疾病，干擾T細(xì)胞功能的試劑是治療的主要部分。使用旨在活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的用于自身免疫性疾病治療的方法如今已經(jīng)被證 明極具難度。使用競爭性(agonistic)抗CD3抗體OKT-3通過TCR活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 (Abramowicz 等，N EnglJ Med. 1992 Sep 3 ； 327(10) 736)或者使用超競爭性抗 CD28 抗 體TGN 1412通過共刺激分子CD28活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞將導(dǎo)致調(diào)節(jié)性T細(xì)胞群以及其他常 規(guī)T細(xì)胞的完全缺失和過量促炎細(xì)胞因子(包括IFN- Y、TNF- α、IL-I和IL_2)的全身 誘導(dǎo)和釋放，從而在人中導(dǎo)致臨床上明顯的細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS) (Suntharalingam 等，NEngl.JMed.2006 Sep 7 ； 355(10) 1018-28)。在前2至3次注射5mg單克隆抗體OKT3后，大多數(shù)患者出現(xiàn)細(xì)胞因子釋放綜合 征，在1至2小時(shí)內(nèi)在腎移植接受者的循環(huán)中出現(xiàn)高水平的腫瘤壞死因子α、白介素2、 Y -干擾素(Abramowicz 等，Transplantation. 1989 Apr ； 47 (4) 606-8)。這種導(dǎo)致治療 窗狹窄，限制了這種抗體在自身免疫性疾病治療中的用途。用5mg至IOmg總劑量的TGN1412 (O.lmg抗CD28/kg體重)進(jìn)行治療導(dǎo) 致系統(tǒng)性炎性應(yīng)答，在接受單靜脈內(nèi)劑量的TGN 1412后90分鐘內(nèi)出現(xiàn)多器官衰竭 (Suntharalingam 等，N EngU Med.2006 年 9 月 7 日；355(10) 1018-28)。公認(rèn)的是，CD4T細(xì)胞在引發(fā)和保持自身免疫方面起著重要作用。因此，曾提 出使用抗CD4T細(xì)胞表面分子的單克隆抗體(mAb)尤其是抗CD4單克隆抗體作為免疫抑 制試劑。盡管很多臨床研究證實(shí)了這種方法的潛在益處，但是它們也舉出了若干種有待 解決的問題以使抗CD4單克隆抗體更加適合于用在常規(guī)的臨床實(shí)踐中。已經(jīng)提出的CD4單克隆抗體的數(shù)種不同作用機(jī)制包括(1)CD4-MHCII相互 作用的拮抗導(dǎo)致T細(xì)胞活化的抑制，(2)由CD4的細(xì)胞表面表達(dá)下降決定的CD4受體調(diào) 控，(3)在沒有T細(xì)胞受體交聯(lián)(可以抑制隨后的T細(xì)胞活化并觸發(fā)CD4T細(xì)胞凋亡性死 亡)的情況下通過CD4受體的部分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，(4)Fc介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC) 或抗體依賴性的細(xì)胞性細(xì)胞毒性(ADCC)導(dǎo)致CD4T細(xì)胞消耗，和(5)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的 刺激。Fc介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)或抗體依賴性的細(xì)胞性細(xì)胞毒性 (ADCC)導(dǎo)致CD4T細(xì)胞消耗是所觀察到的主要機(jī)制，尤其是對于IgGl亞類的抗體 已經(jīng)得到證實(shí)。只有少數(shù)CD4抗體已經(jīng)被歸因于其他機(jī)制，如TRX-1、TNX-355、 IDEC-15U OKTcdr4A,只有 TRX-1 是 IgGl (Schulze-Koops 等，J Rheumatol.25 (11) 2065-76(1998) ； Mason 等，JRheumatol.29 (2) 220-9(2002) ； Choy 等，Rheumatology39(10) 1139-46(2000) ； Herzyk 等，Infect Immun.69 (2) 1032-43(2001) ； Kon 等， Eur RespirJ. 18(1) 45-52(2001) ； Mourad 等，Transplantation 65 (5) 632-41 (1998)； Skov 等，Arch Dermatol. 139 (11) 1433-9(2003) ； Jabado 等，J Immunol. 158 (1)
94-103(1997))。對于若干種CD4抗體，觀察到CD4+T細(xì)胞在“高”劑量(多循環(huán)，劑量大于 IOOmg)的劑量依賴性消耗和在“低”劑量(多循環(huán)，劑量大于IOmg)的瞬時(shí)隔離(短 期消耗)(Mason 等，J.Rheumatol.29 (2) 220-229(2002) ； Kon 等，Eur.Respir J.18 (1) 45-52(2001))禾Π HuMax_CD4 (Skov 等，Arch Dermatol. 139 (11) 1433-1439 (2003), Choy等，Rheumatology 41(10) 1142-8(2002))。雖然它們具有消耗性活性，但是抗 CD4的單克隆抗體在所研究的自身免疫性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中不能提供臨床益處和一 致功效(Strand等，Nature Reviews 6 75-92 (2007))。另夕卜，CD4+T細(xì)胞的消耗通常被 認(rèn)為是可能造成嚴(yán)重免疫抑制的方案。在不同的自身免疫性疾病中檢測到B-F5抗體(鼠IgGl抗人CD4)。 對少數(shù)患有嚴(yán)重銀屑病的患者使用鼠B-F5抗體進(jìn)行了治療并且描述了一些積極 效果(Robinet 等，Eur J Dermatol 1996 6 141-6，和 Robinet 等，JAmAcadDermatol 1997 ； 36 582-8)。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中，使用B-F5的日劑量進(jìn)行的安慰劑對照試驗(yàn)中所觀察到 的結(jié)果沒有顯示出重大改善(Wendling 等.JRheumatol ； 25(8) 1457-61，1998)。在多發(fā)性硬化癥(MS)患者中，在復(fù)發(fā)-緩解型患者中治療10天后觀察到一 些陽性效果，所述患者中的其中一些患者在治療后第6個(gè)月仍未復(fù)發(fā)(Racadot等，J Autoimmun, 6(6) 771-86，1993)。Rumbach 觀察到類似的效果(Mutt Scler ； 1(4) 207-12， 1996)。在嚴(yán)重克羅恩病中，連續(xù)7天接受B-F5的患者中沒有觀察到顯著的改善 (Canva-Delcambre 等，Aliment Pharmacol Ther 10 (5) 721-7，1996)。據(jù)報(bào)道，在同種異體移植物排斥的防止中，B-F5的生物利用度不足以使其用 于同種異體移植物排斥的預(yù)防中(Dantal等，Transplantation，27; 62(10) 1502-6， 1996)。從以上內(nèi)容顯示出，有待解決的首要問題是需要使用更長期劑量的單克隆抗體 來獲得臨床改善。通常，長期采用疾病改進(jìn)性治療導(dǎo)致不利事件的增加或臨床失效，由 于免疫原性的緣故，需要增加劑量(“劑量漸增(dose creep)” )以保持應(yīng)答(Stnmd等， Nature Reviews Drag Discovery 6 75-92，(2007))。必須采用的疾病改進(jìn)性治療越輕和 /或頻率越低，那些不利事件就越少，而且對于要求較低和/或較少劑量的治療的患者而 言具有直接的有益效果。在人類中使用單克隆抗體治療的另一個(gè)缺點(diǎn)是這些抗體一般獲自小鼠細(xì)胞，并 在人類接受者中引起抗小鼠應(yīng)答。這不僅導(dǎo)致治療功效低，甚至以后需要小鼠單克隆抗 體進(jìn)行更多的治療，而且還造成過敏反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)增加。從原理上來看，這種缺點(diǎn)可以通過使用人源化抗體來避免，所述人源化抗體通 過將小鼠單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR，其決定抗原結(jié)合的特異性)移植到人類免疫球 蛋白分子的框架區(qū)(FR)上來獲得。人源化的目的是獲得具有與CDR序列所來源的小鼠的單克隆抗體相同的抗原結(jié)合性能并且在人類中很少產(chǎn)生免疫原性的重組抗體。在一些情況中，用小鼠抗體中的CDR替代人類框架中的人CDR足以轉(zhuǎn)移抗原結(jié) 合性(不僅包括特異性，還包括對抗原的親和力)。然而，在很多抗體中，一些FR殘基 對抗原結(jié)合比較重要，這是因?yàn)樗鼈冊诳乖贵w復(fù)合物中直接接觸抗原，或者它們影響 CDR的構(gòu)型，進(jìn)而影響其抗原結(jié)合性。因此，在很多情況中，還需要用小鼠抗體中的一個(gè)或若干個(gè)框架殘基替代人類 相應(yīng)的FR殘基。由于取代殘基的數(shù)目必須盡可能小以防止抗小鼠反應(yīng)，所以問題是確定 哪些氨基酸殘基對保持抗原結(jié)合性是關(guān)鍵的。已經(jīng)提出過用于預(yù)測更適合的取代位點(diǎn)的 各種方法。雖然它們提供了可以在人源化的前些步驟中有一些幫助的一般原則，但是最 終結(jié)果卻因抗體而異。因此，對于給定的抗體，非常難以預(yù)言哪些取代將提供所需的結(jié) 果。此前曾經(jīng)嘗試過小鼠B-F5的人源化，并在生成具有與親本小鼠B-F5類似的 CD4結(jié)合性能的人源化B-F5 (后文稱為hB_F5)中獲得了成功。因此，在WO 2004/083247中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人源化抗體BT061 (人源化B-F5或簡 稱為hB_F5)可用于治療自身免疫性疾病，如銀屑病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。該抗體是能夠激 活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抗體。該專利申請公開了用于腸胃外施用的組合物，該 組合物配制成允許以O(shè).lmg至lOmg，優(yōu)選為Img至5mg的劑量施用。所設(shè)想的劑量方 案是對于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，在10天的周期內(nèi)，日劑量為靜脈內(nèi)lmg，并且隔日劑量 為 5mg。Wijdenes等在EULAR會(huì)議(2005年6月)的摘要和海報(bào)上也描述了所述研究。 公開了患有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的11名患者的治療。所述患者用每隔一天5mg的BT061進(jìn)行 5次靜脈輸注，并結(jié)合150mg的雙氯芬酸。該研究中所述的抗體沒有公開為適合于較高劑量或較長期劑量使用，并且仍然 希望找到可以以較長期劑量進(jìn)行的治療以治療更多的患者。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠通過抑制增殖以及抗原特異性CD4+和CD8+T細(xì) 胞的細(xì)胞因子生成來保持外周耐受性和調(diào)節(jié)自體免疫。此前在小鼠中的研究證實(shí)，鼠CD4+CD25+T細(xì)胞通過由多克隆刺激物或Ag特異 性刺激物誘導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞來抑制增殖和IFN- Y生成。另外，CD4+CD25+T細(xì)胞通過抑 制IL-2生成和IL-2Ra鏈(CD25)表達(dá)的上調(diào)來抑制CD8+應(yīng)答物的活化(Piccirillo等， J.Immunol.167 1137-1140(2001))。與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞不同的是，常規(guī)T細(xì)胞僅在由免疫 原刺激物活化時(shí)表達(dá)CD25。在人類中，通過抗CD3或抗CD28抗體預(yù)激活的CD4+CD25+T細(xì)胞通過導(dǎo)致響應(yīng) 于多克隆同種異體刺激的增殖減少和IFN- Y生成減少來影響CD8+T細(xì)胞。盡管用其同 源抗原和IL-2進(jìn)行長達(dá)3周的多重再刺激，受抑制的CD8+T細(xì)胞仍然保持它們的無反應(yīng) 性表型(Camara 等，Eur.J.Immunol.33 3473-3483 (2003), Dieckman et al.，Immunology. 115(3) 305-14(2005))。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于以上現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是以較少和/或較低的劑量治療患有自身免疫性疾病的患者。尤其是，本發(fā)明的一個(gè)目的是找到可以在長期治療中以較低頻率應(yīng)用 于患者的治療，以使獲得臨床益處所需的注射次數(shù)最小化。令人驚訝的是，本發(fā)明人觀察到BT061特異性地刺激CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì) 胞，所述CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過利用同源異體反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞抑制IL_2和 IFN- Y生成，從而抑制CD8+T細(xì)胞的增殖。另外，BT061預(yù)激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞使受抑制的CD8+T細(xì)胞不能在長達(dá)10天的過程中在重復(fù)刺激時(shí)表達(dá)CD25，使得在 第一次采用該抗體治療患者時(shí)具有長期的療效，這是因?yàn)镃D25表達(dá)是所述CD8+T細(xì)胞活 化的標(biāo)志之一。因此，不能表達(dá)CD25可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不利激活的減少。因此，本發(fā)明提供了一種用于治療自身免疫性疾病的藥物組合物，所述藥物組 合物包含藥用載體和能夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑，其中，所述組合物至多 每3天施用于受試對象。優(yōu)選的是 ，施用之間的周期為至少4周、至少12周、至少24周、至少6個(gè)歷月 或至少1年。在一個(gè)實(shí)施方式中，治療周期超過1年，并且所述組合物在1、2、3、4或 5年的時(shí)期內(nèi)每年施用。尤其是，所述組合物至多每6天施用，優(yōu)選至多每10天施用。通常，所述藥物 可以每3天至31天施用于受試對象，更優(yōu)選每3天至10天或每3天至6天施用于受試對象。治療的長期性沒有特別的限制，只要比所涉及的患者的立即治療/緊急治療所 需的時(shí)間長即可。然而，可以設(shè)想至少6個(gè)月、1年、18個(gè)月、2年和5年的周期以及無 限期(例如，患者的終生，或者直到患者治愈，或者不顯示出癥狀)。當(dāng)用能夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑治療患者時(shí)，即刻效果和長期療 效均可以得以顯示。不受到理論的束縛，據(jù)信這是因?yàn)槿缦率聦?shí)試劑刺激CD4+CD25+ 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，所述CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞不僅直接抑制CD8+T細(xì)胞，而且還使得 CD8+T細(xì)胞不能在再刺激時(shí)表達(dá)CD25。據(jù)認(rèn)為，長期效果進(jìn)一步受到臨床環(huán)境中給出的 抗體有效濃度的低水平和緩慢降低的組合效應(yīng)所介導(dǎo)，從而導(dǎo)致所述試劑的有效水平周 期延長。從以上方案可以理解的是，本發(fā)明人已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)，與其它T細(xì)胞相互作用 抗體(例如抗CD3抗體)相比，人源化抗體BT061(人源化B-F5，或者簡稱為hB_F5)既 沒有充分地調(diào)節(jié)也沒有充分地誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放，而是刺激直接抑制CD8+T細(xì)胞 并使得CD8+T細(xì)胞不能在再刺激時(shí)表達(dá)CD25的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明 人的研究，劑量可以以較長的間期并以較長的時(shí)期施用(相對于在先的W02004/083247 所公開的情況)。所述試劑的濃度沒有特別的限制，只要該試劑以適用于患者的濃度存在即可。 然而，對于高劑量而言優(yōu)選的是，所述試劑的濃度為lOmg/ml至150mg/ml、15mg/ml至 150mg/ml、15mg/ml 至 100mg/ml、15 (或者大于 10)mg/ml 至 75mg/ml、或 20mg/ml 至 60mg/ml。最優(yōu)選的是，所述試劑的濃度(約)為10mg/ml、12.5mg/ml、20mg/ml、 25mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml 或 lOOmg/ml 中的任意一 種濃度。在一個(gè)替代性的用于低劑量的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述試劑的濃度為0.1 μ g/ml至30mg/ml、或 0.1 μ g/ml 至 1000 μ g/ml，更優(yōu)選的是 1 μ g/ml 至 500 μ g/ml 以及 2 μ g/ml 至250 μ g/ml。最優(yōu)選的是，所述試劑的濃度(約)為15 μ g/ml、25 μ g/ml、125 μ g/ ml、250 μ g/ml 或 500 μ g/ml、lmg/ml、12.5mg/ml 或 25mg/ml 中的任意一種濃度。本
發(fā)明還提供了本文所限定的試劑在制備治療自身免疫性疾病用藥物中的應(yīng)用，其中所述 試劑以本文所述的劑量方案施用于受試對象。另外，本發(fā)明還提供了用于治療自身免疫 性疾病的本文所限定的試劑，其中所述試劑以本文所述的劑量方案施用于受試對象。 使用所述組合物施用于受試對象的劑量體積沒有特別限制，只要其在與已知方 案相比更長的時(shí)期內(nèi)輸送即可，因此適用于治療可能受益于長期治療的個(gè)體(例如但不 限于具有長期病史的嚴(yán)重病例和對現(xiàn)有治療沒有充分應(yīng)答的病例)。在所述劑量體積內(nèi)的 所述試劑的濃度可以改變以提供在本申請中所述的需要?jiǎng)┝俊┝矿w積因施用方法而異。優(yōu)選的是腸胃外施用。腸胃外施用的實(shí)例有肌肉內(nèi) 施用、靜脈內(nèi)施用或皮下施用。在所述組合物擬通過靜脈輸注施用的情況下，所述劑量 體積可以是0.1ml或0.5ml至500ml，優(yōu)選為15ml至25ml，通常為約20ml。在所述組合 物擬通過皮下或肌肉注射施用的情況下，所述劑量體積可以是0.1ml至3ml，優(yōu)選為0.5ml 至1.5ml，通常為約1ml。然而，在一些實(shí)施方式中，所述組合物可以以濃縮形式提供，并稀釋到所涉及 的個(gè)體所需要的濃度。優(yōu)選的是，在這些情況中，所述組合物以約lml、2ml、3ml、4ml 或5ml的相對較小體積提供。在替代性的實(shí)施方式中，所述組合物以上述的所需要的濃 度和劑量體積提供(即，即用)。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，用于皮下施用的藥物組合物 以不需要稀釋的即用形式提供，因此它們可以易于由非醫(yī)療人員施用。如上所述，還不知道可以將能夠治療自身免疫性疾病的試劑以本發(fā)明所設(shè)想的 低頻率在長期治療中施用。雖然能夠治療自身免疫性疾病的試劑的已知?jiǎng)┝吭谝恍﹤€(gè)體 或疾病類型中有效，但是實(shí)現(xiàn)可以更長時(shí)期有效和更長時(shí)期的耐受則開創(chuàng)了對一些自身 免疫性疾病和患者類型進(jìn)行更為有效的治療的方法。


參考以下附圖，僅通過舉例方式來說明本發(fā)明，其中圖1示出BT061對來自3個(gè)健康供體的全血培養(yǎng)物的細(xì)胞因子合成的影響。在 獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中用以下4種不同類型的激活因子進(jìn)行刺激CD3 =抗CD3抗體、LPS =脂 多糖、PHA =植物血凝素+抗CD28抗體、SEB =葡萄球菌腸毒素B+抗CD28抗體。測 定不同的細(xì)胞因子以測量對以下各白細(xì)胞亞群的影響調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD3: TGF-β 5, IL-10)、單核細(xì)胞 / 巨噬細(xì)胞(LPS IL-10，TNFa , IL-1 β )、Th2 細(xì)胞(PHA: IL-4， IL-5, IL-13)、Thl 細(xì)胞(SEB IL-2，IFN Y )。圖2示出人類全血培養(yǎng)物(供體患有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)中的BT061對由不同刺激物 觸發(fā)的細(xì)胞因子合成的影響。圖3示出編碼小鼠B_F5Vh區(qū)的核苷酸序列(SEQ ID No 5)。圖4示出編碼小鼠B_F5Vk區(qū)的核苷酸序列(SEQ ID No 6)。圖5示出編碼人源化B-F5的Vh區(qū)的質(zhì)粒片段的核苷酸序列(SEQ IDNo : 3)。編 碼V區(qū)的序列帶有下劃線，在核苷酸序列下方示出相應(yīng)的多肽序列(SEQ ID No: 17)。
圖6示出 編碼人源化B-F5的Vk區(qū)的質(zhì)粒片段的核苷酸序列(SEQ IDNo 4)。 編碼V區(qū)的序列帶有下劃線，在核苷酸序列下方示出相應(yīng)的多肽序列(SEQ ID No: 2)。圖7示出了 BT061 (抗CD4單克隆抗體)激活的CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制細(xì)胞 因子合成和CD8+T細(xì)胞的CD25再表達(dá)。上圖CD4激活的CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制 共激活的CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞因子合成。下圖CD4激活的CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制 CD8+T細(xì)胞的CD25再表達(dá)。散點(diǎn)圖只顯示門控CD8+T細(xì)胞。示出的是3個(gè)代表性的 結(jié)果。數(shù)字指示陽性細(xì)胞的百分比。圖8A和8B分別示出在健康志愿者中用BT061 (單靜脈輸注或皮下注射)的臨 床試驗(yàn)中所觀察到的TFNa和IL-6釋放(與抗CD3單克隆抗體所報(bào)道的水平比較)。 圖中包括劑量水平和恢復(fù)的時(shí)間。TRX4的結(jié)果在圖中標(biāo)為“2)”(由Keymeulen 等報(bào)道(2005 N.Engl.J.Med.Type 1 Diabetespatients))。Teplizumab 的結(jié)果在圖中標(biāo)為
“ 3) ”(由 Herold 等報(bào)道(2002 N.Engl.J.Med.Type I Diabetes patients))。標(biāo)準(zhǔn)值在圖中 標(biāo)為 “4)”(由 Straub 等報(bào)道(2007，Athr.&Rheumat))。 “*)” 表示單劑量，“_)” 表示達(dá)到峰濃度所注射的累積劑量。圖9示出在健康志愿者中施用單靜脈內(nèi)或皮下劑量的BT061后的IL_2和IFN_ Y 血漿水平。ULN =標(biāo)準(zhǔn)上限；LLN =標(biāo)準(zhǔn)下限。圖10示出用單靜脈劑量的BT061治療的志愿者中的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)(細(xì)胞/毫升 血漿)的動(dòng)力學(xué)。所示的是每個(gè)劑量組3個(gè)患者的平均值。虛線表示標(biāo)準(zhǔn)上限(ULN) 和標(biāo)準(zhǔn)下限(LLN)。圖11示出用單皮下劑量的BT061治療的志愿者中的CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)(細(xì)胞/毫升 血漿)的動(dòng)力學(xué)。所示的是每個(gè)劑量組3個(gè)患者的平均值。虛線表示標(biāo)準(zhǔn)上限(ULN) 和標(biāo)準(zhǔn)下限(LLN)。圖12的A至H部分提供了示出來自如實(shí)施例8中所述的劑量組I的銀屑病患者 的臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)的圖，其中患者用0.5mg的BT061或安慰劑靜脈注射處理。圖8的A 至H部分分別提供了劑量組I的患者1至8的PASI評分的圖。圖13的A至H部分提供了示出來自如實(shí)施例8中所述的劑量組II的銀屑病患者 的臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)的圖，其中患者用2.5mg的BT061或安慰劑靜脈注射處理。圖9的A 至H部分分別提供了劑量組II的患者1至8的PASI評分的圖。圖14的A和B部分提供了示出來自如實(shí)施例8中所述的銀屑病患者的臨床試驗(yàn) 的照片。所述照片是作為劑量組II成員之一的同一名患者的照片。A部分中顯示的照片 在處理前拍攝。B部分中顯示的照片在處理后28天拍攝。圖15提供了如實(shí)施例9中所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床試驗(yàn)結(jié)果。該圖示出 至少獲得ACR20應(yīng)答的來自接受1.25mg、6.25mg、12.5mg和25mg的皮下BT061的劑量 組的患者的百分比的柱狀圖。各組中有6名患者接受所述抗體劑量同時(shí)有2名患者接受 安慰劑。圖16A和16B提供了如實(shí)施例9中所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床試驗(yàn)結(jié)果。 圖16A示出來自接受25mg皮下BT061的劑量組的患者的觸痛關(guān)節(jié)數(shù)的柱狀圖。圖16B 示出來自同一劑量組的患者的腫脹關(guān)節(jié)數(shù)的柱狀圖。各組中有6名患者接受所述抗體劑 量同時(shí)有2名患者接受安慰劑。
圖17A和17B提供了如實(shí)施例9中所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床試驗(yàn)結(jié)果。 所述圖示出了來自25mg皮下劑量組的一名應(yīng)答者(圖17A)和一名非應(yīng)答者(圖17B)的 個(gè)體參數(shù)(％)的變化。在所述圖中，“Pat' s GA"和“Phy' s GA"分別指患者綜 合評價(jià)和醫(yī)師綜合評價(jià)。術(shù)語“疼痛的PA”是指疼痛的患者評價(jià)。圖18A和18B進(jìn)一步提供了如實(shí)施例9中所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床試驗(yàn) 結(jié)果。所述圖示出了來自1.25mg皮下劑量組(圖18A)和來自6.25mg皮下劑量組(圖 18B)的患者的觸痛關(guān)節(jié)數(shù)。圖19A和19B進(jìn)一步提供了如實(shí)施例9中所述的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床試驗(yàn) 結(jié)果。所述圖示出了來自50mg皮下劑量組(圖19A)和來自6.25mg靜脈內(nèi)劑量組(圖 19B)的患者的觸痛關(guān)節(jié)數(shù)。圖20示出了 B-F5人源化形式(即BT061)設(shè)計(jì)中的鼠B_F5VK(SEQIDNo 8)、 FK-001 (SEQ ID No 9、10、11 禾口 12)、 L4L (SEQ ID No 18)禾口 L4M (SEQ ID No 2)
的多肽序列的比對。圖21示出了 B-F5人源化形式設(shè)計(jì)中的鼠B-F5 Vh (SEQ ID No 7)、M26 (SEQ ID No 13、14、15 和 16)、H37L (SEQ ID No 1)和 H37V(SEQID No 17)的多肽序列
的比對。
具體實(shí)施例方式下文將對本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的描述。適用于本發(fā)明的試劑是能夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的那些試劑。所述試 劑可以是多肽、蛋白或抗體。在所述試劑是抗體的情況下，其可以是單克隆抗體。優(yōu)選 的是，所述抗體是單克隆抗CD4抗體。所述抗體還可以優(yōu)選為IgGl抗體，并且可以是 未修飾的IgGl抗體。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，與抗CD3抗體相比，所述試劑在施用后不引起受試 對象血漿中促炎性細(xì)胞因子水平的大量上升。尤其是，在施用所述試劑后，IFN-Y、 TNF-α、IL-6和/或IL-2的水平與健康受試對象中測得的血漿水平相比沒有大量上升 (見表Al)。特別是，如果表Al中給定的具體細(xì)胞因子的ULN當(dāng)作X，那么在施用本發(fā) 明的所述試劑后96小時(shí)內(nèi)，X可以增加小于20倍。優(yōu)選的是，X可以增加小于10倍。 更優(yōu)選的是，這些水平出現(xiàn)在開始施用后10分鐘至施用結(jié)束后96小時(shí)的時(shí)期內(nèi)。在自身免疫性疾病患者中可能是，施用所述試劑前的細(xì)胞因子水平由于免疫細(xì) 胞的修飾活化情況(與健康受試對象中的細(xì)胞的活化情況相對而言)的原因而已經(jīng)高過在 健康受試對象中所觀察到的那些水平(在表Al中給出的ULN)。在那些情況下，將在剛 要施用所述試劑前的具體細(xì)胞因子的濃度當(dāng)作X，并且在施用本發(fā)明的所述試劑后96小 時(shí)內(nèi)，X可以增加小于20倍。優(yōu)選的是，X可以增 加小于10倍。更優(yōu)選的是，這些水 平出現(xiàn)在開始施用后10分鐘至施用結(jié)束后96小時(shí)的時(shí)期內(nèi)。
細(xì)胞因子ULN(pg/mL)
IL-2 9Α
權(quán)利要求
1.一種用于治療自身免疫性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含藥用載體和能 夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑，其中，所述組合物至多每3天施用于受試對象。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，施用之間的周期為至少4周。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，施用之間的周期為至少12周。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，施用之間的周期為至少24周。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，施用之間的周期為至少6個(gè)歷月。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，施用之間的周期為至少1年。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中，所述組合物在1至5年的時(shí)間每年施用于 受試對象。
8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述組合物以每劑中所述試 劑為0.2mg至200mg的劑量施用于受試對象。
9.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述組合物以所述試劑為 O.lmg/m2受試對象體表面積至60mg/m2受試對象體表面積的劑量施用于受試對象。
10.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述組合物以所述試劑為 1 μ g/kg至2mg/kg的劑量施用于受試對象。
11.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑以10μ g/ml至 150mg/ml的濃度存在。
12.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述自身免疫性疾病選自銀 屑病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、I型糖尿病、炎性腸病、克羅恩病、橋本甲狀腺 炎、自身免疫性甲狀腺炎、自身免疫性重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和移植有關(guān)疾病如 移植物抗宿主或一般器官耐受問題。
13.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述自身免疫性疾病是銀屑病。
14.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述疾病是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
15.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述組合物用于腸胃外施用。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中，所述組合物用于肌肉內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施 用或皮下施用。
17.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中，所述疾病是銀屑病并且所述組合物用于 靜脈內(nèi)或皮下施用。
18.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中，所述組合物用于靜脈內(nèi)施用并且所述組 合物以0.3mg至25mg的劑量施用。
19.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其中，所述疾病是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎并且所述組合 物用于靜脈內(nèi)或皮下施用。
20.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，在施用開始后10分鐘至施用 結(jié)束后96小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，所述受試對象的血漿中的細(xì)胞因子水平比即將施用前的水平增 加小于20倍，并且其中所述細(xì)胞因子選自IFN- Y、TNF- α、IL-6和IL_2。
21.如權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，在施用開始后10分鐘至施用結(jié)束后96小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，所述受試對象的血漿中的細(xì)胞因子水平比標(biāo)準(zhǔn)上限(ULN) 值增加小于20倍，其中所述細(xì)胞因子選自IFN-Y、TNF-α、IL_6和IL_2，并且其中所 述 ULN 值分別為 3.8pg/ml、2.8pg/ml、4.4pg/ml 和 19.4pg/ml。
22.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，在施用后72小時(shí)至96小時(shí) 的時(shí)間內(nèi)，所述受試對象的血漿中的CD4+淋巴細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)為至少200個(gè)細(xì)胞/ μ 1。
23.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其中，所述受試對象的血漿中的CD4+淋巴細(xì) 胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)為至少250個(gè)細(xì)胞/ μ 1。
24.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑是人源化單克隆抗 體或者其片段或衍生物。
25.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中，所述試劑是抗CD4抗體或者其片段或 衍生物。
26.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑是具有由以下多肽 序列限定的V域的人源化抗CD4抗體或者其片段或衍生物-H鏈V域EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKS ENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO 1)-L鏈V域DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASI LESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ IDNO 2)，或者包含與SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2具有至少80%的序列同一性的多肽序列的V域。
27.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑是衍生自小鼠單克 隆抗CD4抗體B-F5的人源化抗CD4抗體。
28.—種自身免疫性疾病的治療方法，所述方法包括對受試對象施用藥物，其中，所 述藥物包含能夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑，并且其中所述藥物以多劑量施用 于所述受試對象。
29.如權(quán)利要求28所述的治療方法，其中，所述藥物根據(jù)權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)所 述施用于所述受試對象。
30.如權(quán)利要求28或權(quán)利要求29所述的治療方法，其中，所述藥物根據(jù)權(quán)利要求8 至10中任一項(xiàng)所規(guī)定的劑量施用于所述受試對象。
31.如權(quán)利要求28至30中任一項(xiàng)所述的治療方法，其中，所述自身免疫性疾病如權(quán) 利要求12至14中任一項(xiàng)所限定。
32.如權(quán)利要求28至31中任一項(xiàng)所述的治療方法，其中，所述試劑是衍生自小鼠單 克隆抗CD4抗體B-F5的人源化抗CD4抗體或者其片段或衍生物。
33.如權(quán)利要求28至31中任一項(xiàng)所述的治療方法，其中，所述試劑是具有由以下多 肽序列限定的V域的人源化抗CD4抗體或者其片段或衍生物-H鏈V域EEQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFSFSDCRMYWLRQAPGKGLEWIGVISVKS ENYGANYAESVRGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCSASYYRYDVGAWFAY WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO 1)-L鏈V域 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSGYSYIYWYQQKPGQPPKLLIYLASI LESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSRELPWTFGQGTKVEIK (SEQ IDNO 2)，或者包含與SEQ ID NO 1和SEQ IDNO 2具有至少80%的序列同一性的多肽序列的V域。
34.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，在施用后3小時(shí)至6小時(shí)的 時(shí)間內(nèi)，所述受試對象的血漿中的CD4+淋巴細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)低于250個(gè)細(xì)胞/ μ 1。
35.如權(quán)利要求中1至34中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，在施用后72小時(shí)至96 小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，所述受試對象的血漿中的CD4+淋巴細(xì)胞的細(xì)胞計(jì)數(shù)等于或大于即將施用 前所述受試對象的所述細(xì)胞計(jì)數(shù)的50%。
36.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中，所述組合物能夠通過使患者的銀屑病面 積與嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)評分改善至少40%來治療銀屑病。
37.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中，所述組合物能夠通過使患者的銀屑病面 積與嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI)評分改善至少50%來治療銀屑病。
38.如權(quán)利要求36或37所述的藥物組合物，其中，所述改善在施用單劑量所述組合 物后的56天可見。
39.如權(quán)利要求36或37所述的藥物組合物，其中，所述改善在施用單劑量所述組合 物后的75天可見。
40.如權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑的劑量為 0.5mg。
41.如權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，所述試劑的劑量為 2.5mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于治療自身免疫性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含藥用載體和能夠激活CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的試劑，其中，所述組合物擬至多每3天施用于受試對象。
文檔編號C07K16/28GK102027018SQ200980117318
公開日2011年4月20日 申請日期2009年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月13日
發(fā)明者于爾根·林德內(nèi)爾, 克里斯托夫·尤爾克, 克里斯托夫·布魯切爾, 埃爾瑪·克勞澤, 安德里亞·瓦滕貝格-德曼特, 弗蘭克·奧斯特羅斯, 本杰明·德爾肯, 西爾克·艾格納, 西比勒·凱瑟, 達(dá)尼埃萊·沃爾夫, 馬蒂亞斯·杰默 申請人:生物測試股份公司