專利名稱：肽、擬肽及其衍生物、它們的生產(chǎn)方法以及它們用于制備治療和/或預(yù)防活性的藥物組合 ...的制作方法
肽、擬肽及其衍生物、它們的生產(chǎn)方法以及它們用于制備治 療和/或預(yù)防活性的藥物組合物的用途本發(fā)明涉及肽、擬肽(P印tidomimetics)及其肽衍生物，它們的生產(chǎn)方法，以及它 們用于制備治療和/或預(yù)防活性的藥物的用途，并涉及這樣的藥物。EP1586586描述了來自具有抗炎效果的纖維蛋白序列的肽的用途。所述效果可以基于這一事實纖維蛋白和在其分解期間產(chǎn)生的纖維蛋白片段通過 它的B β鏈的新-N-末端與內(nèi)皮細胞結(jié)合，通過A α -鏈的序列與血流中的細胞結(jié)合，從而 引起這些細胞粘附和遷移進入組織。纖維蛋白和纖維蛋白片段對內(nèi)皮細胞的結(jié)合配偶體是 蛋白血管內(nèi)皮(VE)鈣粘蛋白，其在鄰近的內(nèi)皮細胞之間的粘著連接中特異性表達。根據(jù)本 發(fā)明的肽阻斷這種相互作用，從而對抗血細胞的遷移。但是，血液中白細胞針對感染的天然 防御沒有受到不利影響。因而，同樣的組合，例如粒細胞、淋巴細胞和單核細胞，保持不受影 響，從而維持天然的防御過程。纖維蛋白原在肝臟中產(chǎn)生，它在這種形式下是無生物學(xué)活性的，通常在血液中以 約3g/l的濃度提供。酶原凝血酶原的蛋白水解切割引起凝血酶的形成，其從纖維蛋白原上 切割出纖維蛋白肽A和B。以這種方式，纖維蛋白原被轉(zhuǎn)化成它的生物學(xué)活性形式。產(chǎn)生了 纖維蛋白和纖維蛋白切割產(chǎn)物。每當血液凝固被激活時，S卩，發(fā)生炎癥性、外傷性或退行性組織傷害時，形成凝血 酶。由凝血酶介導(dǎo)的纖維蛋白的形成基本上是保護性的過程，目的在于快速地封閉對血管 系統(tǒng)產(chǎn)生的任何損傷。但是，纖維蛋白的形成也是病原性的過程。纖維蛋白血栓的出現(xiàn)作 為心肌梗塞的觸發(fā)因素是人類醫(yī)學(xué)中最突出的難題之一。一方面，纖維蛋白在炎性細胞從血流外滲到組織的過程中起到的作用對于防御組 織中的致病微生物或腫瘤細胞是期望的過程，但是，另一方面，這個過程本身誘導(dǎo)或延長了 對組織的損害，迄今為止還根本沒有被研究或研究的程度不夠深入。纖維蛋白通過序列B β 通過它的Ββ的新-N-末端與內(nèi)皮細胞結(jié)合，通過序列Aa與血流中的細胞結(jié)合，從而引起 細胞粘附和遷移進入組織中。通過以上描述的機制，根據(jù)本發(fā)明的肽或蛋白可以防止來自血流的細胞與血管壁 的內(nèi)皮細胞的粘附，和/或它們隨后從血液向組織中的遷移。與急性炎性疾病有關(guān)的主要異常情況之一是內(nèi)皮屏障功能的喪失。屏障功能的維 持需要內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的完整性，如果它們中的任一種受損，溶質(zhì)和過量血漿會通過單層 細胞滲漏，導(dǎo)致組織水腫和炎性細胞遷移。許多試劑通過觸發(fā)內(nèi)皮細胞形狀變化，諸如收縮 或縮進，導(dǎo)致細胞間隙的形成，從而增加單層細胞通透性(Lum&Malik，Am. J. Physiol. 267 L223-L241 (1994)。這些試劑包括，例如，凝血酶、緩激肽和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。血管壁的高通透性允許過量液體和蛋白滲漏到間質(zhì)間隙。這種急性炎性事件經(jīng) 常與組織缺血和急性器官功能障礙有關(guān)。在激活的內(nèi)皮細胞(EC)部位形成的凝血酶會 啟動該微血管屏障功能障礙，這是由于相鄰EC之間大的細胞旁孔的形成(Cartajal等， AmJPhysiol CellPhysiol 279 :C195_C204，2000)。該過程的特征在于 EC 形狀的變化，原 因在于肌球蛋白輕鏈磷酸化(MLCP)，其啟動F-肌動蛋白依賴性的細胞骨架收縮張力的發(fā)生(Garcia 等，JCell Physiol. 1995 ；163 :510_522Lum&Malik，Am J Physiol Heart Circ Physiol. 273(5) :Η2442_Η2451· (1997)。凝血酶誘導(dǎo)的內(nèi)皮高通透性也可以由細胞間粘附的變化來介導(dǎo)(Dejana J.Clin. Invest. 98 1949-1953 (1996)。內(nèi)皮細胞間粘附主要由血管內(nèi)皮(VE)鈣粘蛋白(鈣粘蛋白 5)的功能決定，所述鈣粘蛋白5是一種形成粘著連接的Ca-依賴性的細胞間粘附分子。鈣 粘蛋白5功能受到細胞質(zhì)側(cè)的調(diào)節(jié)，這通過與輔助蛋白b-聯(lián)蛋白、斑珠蛋白(g_聯(lián)蛋白) 和P120的結(jié)合來實現(xiàn)，這些輔助蛋白又連接至a-聯(lián)蛋白(與粘著斑蛋白同源)和F-肌動 蛋白細胞骨架。VE-鈣粘蛋白已經(jīng)作為在微血管通透性中和在與血管發(fā)生有關(guān)的形態(tài)發(fā)生和增 殖事件中起基礎(chǔ)作用的粘附分子出現(xiàn)(Vincent等，Am JPhysiol Cell Physiol, 286 (5) C987-C997(2004)。象其它鈣粘蛋白一樣，VE-鈣粘蛋白介導(dǎo)鈣依賴性的同嗜性粘附，并發(fā) 揮細胞骨架的質(zhì)膜附著位點的作用。但是，VE-鈣粘蛋白參與對于血管內(nèi)皮特別重要的信 號通路和細胞系統(tǒng)。內(nèi)皮細胞生物學(xué)和生理學(xué)最近的進展揭示了 VE-鈣粘蛋白的性質(zhì)，其 可能是鈣粘蛋白家族粘附分子成員中獨特的。由于這些原因，VE-鈣粘蛋白代表了這樣的 鈣粘蛋白既是鈣粘蛋白家族的典型，又在功能和生理相關(guān)性方面是獨特的。許多出色的綜 述已經(jīng)說明了 VE-鈣粘蛋白對血管屏障功能、血管發(fā)生和心血管生理學(xué)的作用。證據(jù)不斷表明VE-鈣粘蛋白介導(dǎo)的細胞間粘附受到包括鈣粘蛋白和聯(lián)蛋白在內(nèi) 的連接蛋白的磷酸化和去磷酸化之間的動態(tài)平衡的控制。b_聯(lián)蛋白的增加的酪氨酸磷酸化 導(dǎo)致聯(lián)蛋白脫離鈣粘蛋白和脫離細胞骨架，形成弱的粘著連接(AJ)。類似地，在松動的AJ 中發(fā)生VE-鈣粘蛋白和b-聯(lián)蛋白的酪氨酸磷酸化，并且在緊密鋪滿的單層細胞中顯著減少 (Tinsley 等，J Biol Chem，274，24930-24934 (1999)。另外，VE-鈣粘蛋白單體在粘著連接中的正確聚簇是VE-鈣粘蛋白的正確信號傳 導(dǎo)活性必不可少的，因為攜帶含有全長VE-鈣粘蛋白胞質(zhì)尾的嵌合突變體(IL2-VE)的細 胞不能引起正確信號傳導(dǎo)，盡管它能結(jié)合β-聯(lián)蛋白和pl20(Lampugnani等，Mol. Biol, of the Cell,13,1175-1189(2002) Iiho GTP酶是對細胞的肌動蛋白細胞骨架具有重要作用的小GTP酶家族。關(guān)于血 管系統(tǒng)的功能，它們參與調(diào)節(jié)細胞形狀、細胞收縮、細胞運動性和細胞粘附。Mio GTP酶的3 個最突出的家族成員是MioA、Rac和cdc42。RhoA的活化誘導(dǎo)f_肌動蛋白應(yīng)力纖維在細胞 中的形成，而Rac和cdc42通過分別誘導(dǎo)膜縐褶和微端絲來影響肌動蛋白細胞骨架(Hall， Science, 279 :509-514. 1998)。盡管Rac和cdc42可以通過蛋白PAK的活化在有限程度上 影響 MLCK 活性(Goeckeler 等 J. Biol. Chem.，275，24，18366-18374 (2000)，但是 RhoA 通過 它的穩(wěn)定MLC的磷酸化狀態(tài)的能力對肌動蛋白-肌球蛋白相互作用具有突出的刺激效應(yīng) (Katoh 等，Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 280, C1669-C1679 (2001)。這通過 Rho 激酶的活 化而發(fā)生，反過來又抑制水解磷酸化的MLC的磷酸酶PP1M。另外，Mio激酶抑制絲切蛋白 (cofilin)的肌動蛋白切斷作用，從而穩(wěn)定f_肌動蛋白纖維(Toshima等，Mol. Biol, of the Cell. 12,1131-1145(2001) 0此外，Mio激酶也可以參與將肌動蛋白細胞骨架錨定在 質(zhì)膜中的蛋白上，并從而可以潛在地作用于連接蛋白和肌動蛋白細胞骨架之間的相互作用 (Fukata 等.Cell Biol 145:347-361(1999)。凝血酶可以通過Ga 12/13和所謂的鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEF)來激活RhoA (Seasholtz 等；Mol =Pharmacol. 55,949-956(1999)。GEF 將 RhoA-結(jié)合的 GDP 置換成 GTP, RhoA由此變得有活性。通過該激活作用，RhoA易位至膜，通過它的親脂的香葉基-香 葉基-錨定結(jié)合在膜上。IihoA可以被許多血管活性劑激活，所述血管活性劑包含溶血磷脂酸、凝血酶和內(nèi) 皮縮血管肽。通過鳥嘌呤解離抑制劑(GDI)的作用，或在GTP酶-激活蛋白(GAP)的作用 后，膜結(jié)合的MioA從膜上解離。鳥嘌呤解離抑制劑(GDI)是結(jié)合MioA羧基端的調(diào)節(jié)蛋白。⑶I通過延緩⑶P的解離和使活性IihoA從質(zhì)膜上脫離來抑制MioA的活性。凝血 酶在人內(nèi)皮細胞中直接激活ΜιοΑ，并誘導(dǎo)I^hoA向質(zhì)膜的易位。在相同的條件下，相關(guān)GTP 酶Rac不被激活。來自肉毒梭菌(Clostridium botulinum)的C3轉(zhuǎn)移酶對IihoA的特異性 抑制作用降低了凝血酶誘導(dǎo)的內(nèi)皮MLC磷酸化和通透性的增加，但是不會影響暫時性組胺 依賴性的通透性增加(van Nieuw Amerongen 等 Circ Res. 1998 ;83 :1115-11231 (1998)。 RhoA的作用看起來通過Mio激酶來介導(dǎo)，因為特異性Mio激酶抑制劑Y27632會類似地降低 凝血酶誘導(dǎo)的內(nèi)皮通透性。Racl和I^hoA對內(nèi)皮屏障功能具有拮抗效應(yīng)。急性缺氧在正常成年人肺動脈內(nèi) 皮細胞(PAEC)中抑制Racl并激活I(lǐng)^hoA，這導(dǎo)致屏障功能的破壞(Wojciak-Stothard和 Ridley, Vascul Pharmacol.，39 187-99 (2002)。患有慢性缺氧誘導(dǎo)的肺動脈高血壓的 小豬的PAEC具有穩(wěn)定的異常表型，Racl持續(xù)減少且IihoA活性增加。這些活性與內(nèi)皮細 胞骨架、粘著連接和通透性的變化有關(guān)。Racl的激活以及MioA的抑制會使異常表型和 通透性恢復(fù)正常(Wojciak-Stothard 等，Am. J. Physiol，Lung Cell Mol. Physiol. 290, L1173-L1182(2006)。因此可以預(yù)見到，激活Racl并使IihoA活性降低至在處于正常和穩(wěn)定條件下的內(nèi) 皮細胞中觀察到的水平的物質(zhì)，會降低內(nèi)皮的高通透性，并在許多疾病中具有有益的治療 效果。優(yōu)選地，該效果是通過粘著連接中VE-鈣粘蛋白聚簇的穩(wěn)定化來實現(xiàn)。與VE-鈣粘 蛋白連接的蛋白的細胞內(nèi)復(fù)合物的一種重要組分是fyn，它是一種激酶，是src酪氨酸激酶 成員。本發(fā)明的主題化合物與VE-鈣粘蛋白的結(jié)合引起fyn從VE-鈣粘蛋白解離，這又導(dǎo) 致凝血酶誘導(dǎo)的活性MioA的失活。W09216221描述了與長鏈聚合物例如甲氧基-聚乙二醇(PEG)共價連接的多肽。多 肽與這類聚合物的結(jié)合通常引起這些多肽的生物學(xué)半衰期的延長并延遲它們的腎排泄。這 些性質(zhì)的概述可見于 Davis 等，Polymeric Materials Pharmaceuticals for Biomedical he，441-451頁(1980)。PEG基團的添加以與PEG化肽的分子量成比例的方式發(fā)揮這種效 果，直到一定的分子大??；腎小球過濾速度與所述分子量成反比。W02004/101600還描述了新的聚(乙二醇)修飾的化合物和它們的用途，特別強調(diào) 了能活化促紅細胞生成素受體的修飾的肽。肽和蛋白PEG殘基的共價修飾的進一步實例是白細胞介素(Knauf等，J.Biol Chem. 1988，263，15064 ;Tsutumi 等，J. Controlled Releasel995，33，447)、干擾素(Kita 等，Drug Delivery Res. 1990，6157)、過氧化氫酶(Abuchowski 等，J. Biol. Chem. 1997,252, 3582)?，F(xiàn)有技術(shù)的綜述可見于 Reddy，Ann. of Pharmacotherapy, 2000, 34,915 中找到。延長的生物學(xué)半衰期對于肽的各種治療用途是有益的。這在慢性疾病的情況下是 尤其確實的，這種情況下需要長期施用活性試劑。根據(jù)這種表征，這可以改善患者的順應(yīng)性，因為例如一天一次應(yīng)用活性試劑比連續(xù)的輸注更易于接受。除了通過共價修飾提高分 子量之外，多肽的持續(xù)性的延長可以通過防止它們被蛋白水解酶(例如，外切或內(nèi)切蛋白 酶或肽酶)降解的方式修飾它們來獲得。使用各種實例都表明為每種肽定制合適的修飾是必需的，與未修飾的肽相比，可 用以防止對藥物動力學(xué)效果的顯著影響。在本文中，可以涉及以下降血鈣素(Lee等， Pharm. Res. 1999，16，813)、生長激素釋放激素(Esposito 等，Advanced Drug Delivery Reviews，2003，55，1279)、胰高血糖素樣肽 1 (Lee 等，Bioconjugate Res. 2005，16，377)以 及生長激素受體拮抗劑 Pegvisomant (Ross 等，J. Clin. Endocrin. Metab. 2001,86,1716)。 Caliceti 禾口 Veronese (Adv. Drug Deliv. Rev. 2003，551261)以及 Harris 禾口 Chess (Nature Rev. Drug Discovery 2003，2，214)的綜述討論了在設(shè)計肽-或蛋白-PEG偶聯(lián)物的情況下 必需考慮起始物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、肽和聚合物的分子量、偶聯(lián)的聚合物鏈的數(shù)量以及接頭化學(xué)性 質(zhì)，以獲得有效的肽-PEG偶聯(lián)物。令人驚訝地，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，從Ββ (15-42)纖維蛋白片段的鏈衍生的肽和擬肽以 及在肽序列的C-末端修飾的衍生物也具有強的抗炎和內(nèi)皮穩(wěn)定效應(yīng)，所述肽和擬肽中的 一個或幾個氨基酸已經(jīng)被去除，且其替代地含有促進肽主鏈的彎曲或回轉(zhuǎn)的氨基酸或擬肽 元件。同樣應(yīng)用于為防止蛋白酶或肽酶的破壞而修飾的肽、擬肽及其衍生物，以及從含有這 樣的回轉(zhuǎn)誘導(dǎo)元件的B β (15-42)纖維蛋白片段的基礎(chǔ)序列一般地衍生的肽-PEG-偶聯(lián)物 和擬肽-PEG-偶聯(lián)物。因而，本發(fā)明涉及修飾的肽和擬肽，其源自Ββ (15-42)-纖維蛋白片段的鏈，并且 其中所述序列的一個或幾個氨基酸被遺傳編碼的或非遺傳編碼的氨基酸或擬肽置換，所述 氨基酸或擬肽具有誘導(dǎo)肽主鏈的彎曲或回轉(zhuǎn)的性能。它們可以作為游離肽或作為C-末端 衍生物存在，和/或與聚乙二醇(PEG)-聚合物連接，并具有抗炎和/或內(nèi)皮穩(wěn)定效應(yīng)。例 如，可以考慮將酯或酰胺作為C-末端衍生物。本發(fā)明的化合物在一個或幾個位置上與要治療的溫血動物的纖維蛋白的天然序 列相比可以具有氨基酸的保守性置換。保守性置換被定義為相應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈被相似 化學(xué)結(jié)構(gòu)和極性的側(cè)鏈置換，所述側(cè)鏈來源于遺傳編碼的或非遺傳編碼的氨基酸。這種具 有相似側(cè)鏈的氨基酸的家族是本領(lǐng)域已知的。例如，它們包括具有堿性側(cè)鏈(賴氨酸、精 氨酸、組氨酸)、酸性側(cè)鏈(天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電的極性側(cè)鏈(甘氨酸、天冬酰胺、谷 氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側(cè)鏈(丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨 酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支的側(cè)鏈(蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和 芳香族側(cè)鏈(酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。這種側(cè)鏈的保守性置換可以 優(yōu)選地在非關(guān)鍵位置進行。在這個方面，序列中的關(guān)鍵位置是這樣一種位置該位置上相關(guān) 氨基酸的側(cè)鏈會顯著地影響它的生物學(xué)效果。本發(fā)明具體地涉及以下通式I的肽、擬肽及其衍生物以及它們的生理學(xué)可接受的
Trrt.H2N-GHRPX1X2X3- β -X4X5X6X7X8X9X10-X11 (I)，其中X1-X10表示20種遺傳編碼的氨基酸之一，其中)(8、Χ9和Xltl單獨地或共同地也可以 表示單個化學(xué)鍵，
X11 表示OR1，其中隊是氫或(C1-Cltl)烷基，NR2R3，其中&和R3相同或不同，表示氫、(C1-Cltl)烷基，或殘基-W-PE(V6QK，其中PEG殘基通過合適的間隔物W連接至N-原子，或殘基NH-Y-Z-PEG5_6QK，其中Y表示單個化學(xué)鍵或選自S、C、K或R的遺傳編碼的氨基酸，且其中Z表示間隔物，通過它可以連接聚乙二醇(PEG)-殘基，且其中另外地，β表示遺傳編碼的或非遺傳編碼的氨基酸或擬肽元件，其具有誘導(dǎo)肽主鏈的彎曲 或回轉(zhuǎn)的附加性能。這樣的氨基酸包括但不限于L_脯氨酸、D-脯氨酸、L-羥脯氨酸、D-羥脯氨酸、 L- (0-芐基)-羥脯氨酸、D- (0-芐基)-羥脯氨酸、L- (0-叔丁基)-羥脯氨酸、4- (0-2-萘 基)-羥脯氨酸、4- (0-2-萘基-甲基)-羥脯氨酸、4- (0-苯基)-羥脯氨酸、4- (4-苯基-芐 基)_脯氨酸、順式-3-苯基-脯氨酸、順式-4-苯基-脯氨酸、反式-4-苯基-脯氨酸、順 式-5-苯基-脯氨酸、反式-5-苯基-脯氨酸、4-芐基-脯氨酸、4-溴芐基-脯氨酸、4-環(huán) 己基-脯氨酸、4-氟-脯氨酸、L-四氫異喹啉-2-甲酸(L-Tic)、八氫-吲哚-2-甲酸(Oic) 的所有非對映異構(gòu)體和1-氮雜-雙環(huán)[3，3，0]辛烷-2-甲酸的所有非對映異構(gòu)體。具有 回轉(zhuǎn)誘導(dǎo)性能的其它氨基酸是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，且含有它們的式I化合物也是本發(fā) 明的主題。屬于本發(fā)明的擬肽元件是這樣的殘基它們能置換肽鏈的一個或幾個氨基酸，且 也具有誘導(dǎo)肽主鏈的彎曲或回轉(zhuǎn)的附加性能。幾個這樣的殘基已經(jīng)描述在例如專利申請 W02005/056577中，在其中它們用于制備肽的HIV抑制劑。為了本發(fā)明的目的，有用擬肽元件的選擇是，但不限于，下述 .OH
權(quán)利要求
1.以下通式I的肽、擬肽及其衍生物以及它們的生理學(xué)可接受的鹽 h2n-ghrpx1x2x3- β -x4x5x6x7x8x9x10-x11 (i)， 其中X1-Xio表示20種遺傳編碼的氨基酸之一，其中)(8、Χ9和)(1(|單獨地或共同地也可以表示 單個化學(xué)鍵， X11表不or1，其中r1是氫或(c1-c10)烷基，nr2r3，其中&和r3相同或不同，表示氫、(c1-cltl)烷基，或殘基-w-peg5_6(ik，其中peg殘基通過合適的間隔物w連接至n-原子，或殘基 nh-y-z-peg5_6QK，其中y表示單個化學(xué)鍵或選自s、c、k或r的遺傳編碼的氨基酸，且其中 z表示間隔物，通過它可以連接聚乙二醇(peg)-殘基， 且其中另外地，β表示遺傳編碼的或非遺傳編碼的氨基酸或擬肽元件，其具有誘導(dǎo)肽主鏈的彎曲或回 轉(zhuǎn)的附加性能，所述氨基酸包括但不限于L-脯氨酸、D-脯氨酸、L-羥脯氨酸、D-羥脯氨酸、L- (0-芐 基)-羥脯氨酸、D- (0-芐基)-羥脯氨酸、L- (0-叔丁基)-羥脯氨酸、4- (0-2-萘基)-羥脯 氨酸、4- (0-2-萘基-甲基)-羥脯氨酸、4- (0-苯基)-羥脯氨酸、4- (4-苯基-芐基)-脯 氨酸、順式-3-苯基-脯氨酸、順式-4-苯基-脯氨酸、反式-4-苯基-脯氨酸、順式-5-苯 基-脯氨酸、反式-5-苯基-脯氨酸、4-芐基-脯氨酸、4-溴芐基-脯氨酸、4-環(huán)己基-脯 氨酸、4-氟-脯氨酸、L-四氫異喹啉-2-甲酸(L-Tic)、八氫-吲哚-2-甲酸(Oic)的所有 非對映異構(gòu)體和1-氮雜-雙環(huán)[3，3，0]辛烷-2-甲酸的所有非對映異構(gòu)體，或選自下述的 殘基
2.式I的肽、擬肽和它們的衍生物以及它們的生理學(xué)可接受的鹽，其中 X1^X4 表示 L、I、S、M 或 A，X2表示E或D,X3表示R或K，X5J6、X7 表示 A、G、S 或 L，X8表示G、A或L或單個化學(xué)鍵，X9表示Y、F、H或單個化學(xué)鍵，X10表示R、K或單個化學(xué)鍵，且其中β和X11具有上述含義。
3.通式II的肽、擬肽和它們的衍生物以及它們的生理上可接受的鹽 H2N-GHRPLDK-β -ISGGX8X9X10-X11 (II)，其中\(zhòng)、\、X10和X11具有上述式I給出的含義。
4.通式II的肽、擬肽和它們的衍生物以及它們的生理學(xué)可接受的鹽 H2N-GHRPLDK-β -ISGGX8X9X10-X11 (II)，其中殘基)(19、X20和、中的2個是甘氨酸殘基，另一個是殘基C-(S-琥珀酰亞氨 基)-(PEG5_4CIK)，其中琥珀酰亞氨基殘基通過第3個碳原子連接到半胱氨酸殘基的硫原子 上，且其中X17表示NR2R3，其中&和R3相同或不同，表示氫或(C1-Cltl)烷基。
5.通式II的肽、擬肽和它們的衍生物以及它們的生理學(xué)可接受的鹽 H2N-GHRPLDK-β -ISGGX8X9X10-X11 (II)其中X11表示NR2R3，其中&和民相同或不同，表示氫或(C1-Cltl)烷基或殘基C(NR2R3)-(S-琥 珀酰亞氨基)-(PEG5_4CIK)，其中琥珀酰亞胺殘基通過琥珀酰亞胺環(huán)的第3個碳原子連接到半 胱氨酸殘基的硫原子上。
6.生產(chǎn)權(quán)利要求1的通式(I)的肽和肽衍生物的方法，其特征在于，(E)各自序列的C-末端的第一個氨基酸通過合適的可切割間隔物與聚合樹脂連接，根 據(jù)本領(lǐng)域已知的方法逐步地連接隨后的氨基酸或擬肽元件，其任選地含有官能團的適當保護基，根據(jù)本領(lǐng)域已知的合適方法將完成的肽從所述聚合樹脂上切割下來，如果存在保護 基，通過合適的方法將所述保護基切割下來，并根據(jù)合適的方法純化所述肽或肽衍生物，或 者(F)將具有期望的分子量的PEG基團通過合適的間隔物連接到聚合樹脂，使用合適的 方法連接在肽的N-末端的第一個氨基酸，其余的步驟與(A)所述相同，或者(G)使用合適的方法將氨基上含有適當保護基的賴氨酸殘基通過合適的間隔物連 接到合適的聚合樹脂，如(A)所述合成肽鏈，在從所述聚合樹脂上切割和純化之后，根據(jù)需 要，使用合適的方法將ε氨基上的所述保護基切割下來，使用合適的活化試劑將具有期望 的分子量的PEG基團連接到ε -氨基上，任選地將其余的保護基切割下來，并使用合適的方 法純化終產(chǎn)物，或者(H)將含有半胱氨酸殘基的肽與PEG-馬來酰亞胺反應(yīng)，形成權(quán)利要求3、4和5之一的 式(II)化合物。
7.藥物組合物，其含有所述通式(I)的化合物。
8.所述通式(I)化合物的醫(yī)藥用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及以下通式I的肽、擬肽及其衍生物以及它們的生理上可接受的鹽H2N-GHRPX1X2X3-β-X4X5X6X7X8X9X10-X11(I)，其中X1-X10表示20種遺傳編碼的氨基酸之一，其中X8、X9和X10單獨地或共同地也可以表示單個化學(xué)鍵，X11表示OR1，其中R1是氫或(C1-C10)烷基，NR2R3，其中R2和R3相同或不同，表示氫、(C1-C10)烷基，或殘基W-PEG5-60K，其中PEG殘基通過合適的間隔物W連接至N-原子，或殘基NH-Y-Z-PEG5-60K，其中Y表示單個化學(xué)鍵或選自S、C、K或R的遺傳編碼的氨基酸，且其中Z表示間隔物，通過它可以連接聚乙二醇(PEG)-殘基，且其中另外地，β表示遺傳編碼的或非遺傳編碼的氨基酸，或擬肽元件，其具有誘導(dǎo)肽主鏈的彎曲或回轉(zhuǎn)的附加性能。這樣的氨基酸包括但不限于L-脯氨酸、D-脯氨酸、L-羥脯氨酸、D-羥脯氨酸、L-(O-芐基)-羥脯氨酸、D-(O-芐基)-羥脯氨酸、L-(O-叔丁基)-羥脯氨酸、4-(O-2-萘基)-羥脯氨酸、4-(O-2-萘基-甲基)-羥脯氨酸、4-(O-苯基)-羥脯氨酸、4-(4-苯基-芐基)-脯氨酸、順式-3-苯基-脯氨酸、順式-4-苯基-脯氨酸、反式-4-苯基-脯氨酸、順式-5-苯基-脯氨酸、反式-5-苯基-脯氨酸、4-芐基-脯氨酸、4-溴芐基-脯氨酸、4-環(huán)己基-脯氨酸、4-氟-脯氨酸、L-四氫異喹啉-2-甲酸(L-Tic)、八氫-吲哚-2-甲酸(Oic)的所有非對映異構(gòu)體和1-氮雜-雙環(huán)[3，3，0]辛烷-2-甲酸的所有非對映異構(gòu)體或選自擬肽殘基的殘基。
文檔編號C07K14/75GK102066416SQ200980117411
公開日2011年5月18日 申請日期2009年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月15日
發(fā)明者P·佩策爾鮑爾, R·亨寧, S·雷因格魯貝爾, W·帕斯特納 申請人:菲布雷克斯醫(yī)療研究及開發(fā)有限責任公司