專利名稱：抗血管新生化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗血管新生活性的新型化合物以及制造和應(yīng)用這些化合物的方法。具體而言，本發(fā)明涉及與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)相結(jié)合的肽和結(jié)合有這些肽的大分子，以及與其相關(guān)的方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血管新生是通過(guò)其形成新生血管的基本過(guò)程，且其對(duì)于諸如繁殖、發(fā)育和創(chuàng)傷修復(fù)等各種正常身體活動(dòng)非常重要。盡管在正常情況下血管新生是高度受控的過(guò)程，但許多疾病(特征在于“血管新生性疾病”)會(huì)因未調(diào)控的血管新生而引發(fā)或惡化。例如，眼部新生血管被認(rèn)為是導(dǎo)致失明的最常見(jiàn)的原因。在某些已有的病況如關(guān)節(jié)炎中，新形成的毛細(xì)血管侵入關(guān)節(jié)并破壞軟骨。在糖尿病中，在視網(wǎng)膜中形成的新毛細(xì)血管侵入玻璃體， 出血并導(dǎo)致失明。實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移也依賴于血管新生(J. Folkman，Cancer Res., 46 :467-473(1986), J. Folkman, J. Natl. Cancer Inst. ,82 :4-6 (1989)) 已顯示，例如，增大超過(guò)2mm的腫瘤通過(guò)誘發(fā)新毛細(xì)血管的生長(zhǎng)而獲得其自己的血液供應(yīng)。一旦這些新血管嵌入腫瘤，其將為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)并轉(zhuǎn)移至諸如肝、肺和骨骼等遠(yuǎn)距離位置提供途徑 (N. ffeidner, et. al.，N. Engl. J. Med.，324 :1-8(1991))。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)已被鑒定為極其強(qiáng)大的血管新生因子，并且是許多人類腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移所需要的。諸多研究已集中于嘗試抑制VEGF途徑從而限制或預(yù)防血管新生或轉(zhuǎn)移。Fairbrother et al iNovel peptides selected to bind vascular endothelial growth factor targetthe receptor-binding site’ (Biochemistry，1998， 37,17754-17764)公開(kāi)了具有不同的與VEGF結(jié)合的能力的肽。已鑒別出各種結(jié)合血管新生相關(guān)因子血管生成素-2( “Ang-2”)的肽(Oliner，J. et al.，Cancer Cell, 204 (6), 507-516(2004))。Ang-2結(jié)合肽已顯示出抗血管新生活性。所希望的是提供與已知化合物相比顯示改進(jìn)的特性如改進(jìn)的與VEGF的結(jié)合的化合物。進(jìn)一步希望的是提供顯示出同時(shí)與VEGF和Ang2相結(jié)合的化合物。本說(shuō)明書(shū)中的任何領(lǐng)域中的參考文獻(xiàn)并非也不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是任何形式的承認(rèn)或暗示所述參考文獻(xiàn)構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)的一部分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的[VEGF-肽]本發(fā)明提供了能與人VEGF(例舉為SEQ ID NO⑶結(jié)合的肽、化合物和藥物組合物。因此，在一些方面，本發(fā)明提供了與以下序列基本同源的序列=V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8 -V9-Mio-Wii-Vi2-Wi3-X14-C15-F16-E17-R18-X19 (SEQ ID NO :122)，其中 Xw 是 E 或 V，且 X19 是天然或非天然的疏水性氨基酸或其D-異構(gòu)體。已驚奇地發(fā)現(xiàn)此類肽及其衍生物(以下將詳細(xì)說(shuō)明)與具有相關(guān)結(jié)構(gòu)的肽相比展示了改進(jìn)的與VEGF的結(jié)合。具體而言，將位置12突變?yōu)橹行允杷畾埢?尤其是纈氨酸)提供了相比在此位置為帶負(fù)電荷的基團(tuán)如谷氨酸的肽而言改進(jìn)的結(jié)合特性。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包括與SEQ ID NO :122基本同源的序列的肽，條件是V12未被E替代。在一些實(shí)施方式中，X19是L。X19可以是D-Leu。X19可以是L的保守性置換，諸如I，或者其它疏水殘基，諸如A或V，或者上述任一者的D-異構(gòu)體。本發(fā)明的更多衍生物提供了在C-端增加至少1-4個(gè)殘基。一些實(shí)施方式提供了在C-端增加2-4個(gè)殘基。一些實(shí)施方式提供了在C-端增加2個(gè)殘基。一些實(shí)施方式提供了在C-端增加3個(gè)殘基。一些實(shí)施方式提供了在C-端增加4個(gè)殘基。因此，本發(fā)明還提供了包括與以下序列基本同源的序列的肽V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7 -H8-V9-Mi0-Wii-Vi2-Wi3-X14-C15-F16-E17-R18-X19-X20 (SEQ ID NO :123)。其中，爐 是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸。可以是任何芳香性氨基酸，諸如Y、F、W或其D-異構(gòu)體。可以是任何中性疏水氨基酸，諸如M、I、L、Nle, A或其D-異構(gòu)體。在一些方面，本發(fā)明提供了包括與以下序列基本同源的序列的肽V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Vi2-Wi3-Xi4-C15-F16-E17-R18-X19-X20-X21 (SEQ ID NO :124)。其中 X21 是任意氨基酸。在一些方面，X21可以是任何中性或帶正電荷的氨基酸，諸如G、A、I、L、K、R或K(ac) 或其D-異構(gòu)體。例如，X21可以是D-Ala。在一些方面，本發(fā)明提供了包括與以下序列基本同源的序列的肽V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Vi2-Wi3-Xi4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22 (SEQ ID NO :125)。其中鏟2 是任何脂肪族、極性或帶負(fù)電荷的氨基酸，諸如V、L、P、E、G、I、S、T、W、F、E或其D-異構(gòu)體。在一些方面，本發(fā)明提供了包括與以下序列基本同源的序列的肽V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Vi2-Wi3-Xi4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :1 )，其中 X23 是任何氨基酸。鏟3可選自6、六、1、1^、03、？、1\1、3和￥及其0-異構(gòu)體。Xm可選自G、A、 I、L、Q、E、F、T、S和Y及其D-異構(gòu)體。在一些方面，Xm不包括具有雙環(huán)的側(cè)鏈。在一些方面，X23不是W。在一些方面，儼可以是Ε、T、S、L或F或其D-異構(gòu)體。在一些實(shí)施方式中，已發(fā)現(xiàn)優(yōu)選的是在羧基端處的5個(gè)殘基中的至少一個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述五個(gè)C-端位殘基中至少兩個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述五個(gè) C-端位殘基中不超過(guò)三個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述五個(gè)C-端位殘基中一至三個(gè)是 D-異構(gòu)體。在一些方面，在羧基端的四個(gè)殘基中至少一個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述四個(gè)C-端位殘基中至少兩個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述四個(gè)C-端位殘基中不超過(guò)三個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些方面，所述五個(gè)C-端位殘基中一至三個(gè)是D-異構(gòu)體。對(duì)于這些中的每一個(gè)，優(yōu)選的是在X19之后有至少兩個(gè)、優(yōu)選至少三個(gè)其它殘基。已發(fā)現(xiàn)在C-端提供優(yōu)化數(shù)量的D-異構(gòu)體能提供更好的耐C-端處酶降解，尤其是殘基E17和R18之間的酶降解與殘基R18和X19之間的酶降解的優(yōu)點(diǎn)。在本發(fā)明的一些方面，X19可以是L，存在且可以是Y，X21存在且可以是任何脂肪族疏水氨基酸(可選自A、L、I、V、G)，X22存在且是疏水氨基酸(可選自L、P、V)。在某些實(shí)施方式中，X19、X21和X22中的兩個(gè)是D-異構(gòu)體。在一些實(shí)施方式中，X23可存在或者不存在。在某些方面，本發(fā)明的具體肽和化合物可包括具有與SEQ IDNO :36-106中的一個(gè)或多個(gè)基本同源的肽序列。在其它方面，本發(fā)明提供了包括與以下序列基本同源的序列的肽V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Ei2-Wi3-Ei4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :127)，其中 X19 是天然或非天然疏水氨基酸或其D-異構(gòu)體，X20是芳香氨基酸、中性氨基酸、疏水性氨基酸或極性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21是疏水性氨基酸或帶正電荷的氨基酸或其D-異構(gòu)體，X22 不存在或者是疏水性氨基酸、芳香性氨基酸、帶負(fù)電荷的氨基酸或其D-異構(gòu)體，X23不存在或者是芳香氨基酸、中性氨基酸、疏水性氨基酸或其D-異構(gòu)體。Xw可以是L。在另一實(shí)施方式中，X19是D-Leu。X19可以是L的保守性置換(如I)或其它疏水性殘基(如A或V)， 或前述任一種的D-異構(gòu)體。X2°可選自A、V、I、L、Y、W、F、M、S禾Π T或其D-異構(gòu)體。可選自Α、Y、F、M和S或其D-異構(gòu)體。X21可選自K、R、H、鳥(niǎo)氨酸、Dap、Dab、G、A、V、I和L或其D-異構(gòu)體。X21可選自K、R和G或其D-異構(gòu)體。在f是疏水性或芳香性時(shí)，X21可以是帶正電荷的氨基酸。在是A、F或Y之一時(shí)，X21可以是K或R之一或其D-異構(gòu)體。在 X21是疏水性時(shí)，可以是極性的。X22在存在時(shí)可選自E、D、G、A、L、I、V、M、W、Y和F或其 D-異構(gòu)體。儼在存在時(shí)可選自E、G和W或其D-異構(gòu)體。多X21是帶有正電荷的殘基時(shí)， 儼在存在時(shí)可以是帶負(fù)電荷的殘基。當(dāng)X21是K時(shí)，f可以是E。鏟3在存在時(shí)可選自W、Y、 F、G、A、I、L、V和M或其D-異構(gòu)體。^3在存在時(shí)可選自W、F、G、A、L和M或其D-異構(gòu)體。在某些方面，本發(fā)明的具體肽和化合物可包括具有與以下序列中的一個(gè)或多個(gè)基本同源的肽序列:SEQ ID NO :108, SEQ ID NO :109、SEQ ID NO :110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO :112,SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114,SEQ ID NO :115、SEQ ID NO 116,SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO :119、SEQ ID NO :120 禾口 SEQ ID NO: 121。本發(fā)明的肽可用于不同用途，包括診斷、篩選和治療。本發(fā)明的肽和化合物還可直接用于治療用途，或者還可用于共價(jià)地或者非共價(jià)地與提供其它治療價(jià)值，諸如延長(zhǎng)半衰期(PK)的更大分子相軛合?？裳娱L(zhǎng)半衰期的分子的例子包括蛋白、多肽、抗體、抗體片段， 尤其是抗體的Fc域。本發(fā)明提供了式R1-REGF-肽]-R2的化合物，其中[VEGF-肽]是具有以下序列的肽=Xi-X2-P3-N4-C5-X6-X7-X8-V9-Xici-Xii-Xi2-Wi3-Xi4-C15-F16-E17-R18-X19-X2ci-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :131)，其中 R1 不存在或者是 CH3、C (O)CH3、C (O)CH3、C (O)CH2CH3、C (O)CH2CH2CH3、C(O) CH (CH3) CH3、C (0) CH2CH2CH2CH3、C (0) CH (CH3) CH2CH3、C (0) C6H5、C (0) CH2CH2 (CH2CH2O) ^5Me、氨基-2-PEG、N-酰基或N-烷基氨基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)；R2不存在或者是0H、 NH2、NH (CH3)、NHOl2CH3、NHCH2CH2CH3^ NHCH (CH3) CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH (CH3) Ol2CH3、NHC6H5、 NHCH2CH2OCH3^ NHOCH3> NHOCH2CH3、羧基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)，且X1是疏水性氨基酸殘基，X2是帶負(fù)電荷的殘基，X6是帶負(fù)電荷的殘基，X7是疏水性氨基酸殘基，X8是含有環(huán)結(jié)構(gòu)的殘基，Xltl可以是M或任何疏水性氨基酸，X11是芳香性氨基酸，X12選自V、E和Kac， Xw是E或V，X19是任何疏水性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X2°不存在或者是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或選自G、V、L、I、P、S、T、W、F、E、Kac或其D-異構(gòu)體，X23不存在或選自G、A、I、L、Q、E、F、T、W、S、Y和Kac及其D-異構(gòu)體。X1可以是V。X2可以是E。X6可以是D。X7可以是I。X8可以是H。X11可以是W。 [VEGF-肽]可以是包括與以下序列基本同源的序列的肽=V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Xltl-W1 LX12-W13-X14-Ci5-嚴(yán)-E17-R18-X19-X2ci-X21-X22-X23 (SEQ ID NO 132)，其中 Xltl 是M 或任何疏水性氨基酸，X12選自V、E和Kac，Xw是E或V，X19可以是疏水性氨基酸殘基或其D-異構(gòu)體，X20不存在或者是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或者可選自G、V、L、I、P、S、 Τ、W、F、Ε、Kac或其D-異構(gòu)體，X23不存在或者選自G、A、I、L、Q、Ε、F、Τ、W、S、Y和Kac及其 D-異構(gòu)體。[VEGF’_肽]包括與以下中的--種或多種基本同源的序列
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--E--W--E--C--F--E--R--L(SEQ ID NO 34)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-G-W (SEQ IDNO35)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--V--C--F--E--R--L--F-R-E-A (SEQ IDNO36
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--V--C--F--E--R--L--F-K-E-A (SEQ IDNO37)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--V--C--F--E--R--L--M-K (SEQ ID NO 38)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-R-E-L (SEQ IDNO39)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-I-F (SEQ IDNO40)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y (SEQ ID NO 41)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-W-G (SEQ IDNO42)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--V--C--F--E--R--L--Y-G-G-G (SEQ IDNO43)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-L-Y (SEQ IDNO44)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--S-G-G-G (SEQ IDNO45)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-R-L-T (SEQ IDNO46)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G (SEQ ID NO 47)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--V-K (SEQ ID NO 48)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-R (SEQ ID NO 49)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-I-L (SEQ ID NO50)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--(Yome)-G-L-T (SEQID]
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-G (SEQ ID NO 52)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--F-K-E-A (SEQ IDNO53)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--(Nle)-K (SEQ IDNO54)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-L-T (SEQ IDNO55)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-G-F (SEQ IDNO56)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--I-K (SEQ ID NO 57)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-K (SEQ ID NO 58)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-G-L-T (SEQ ID NO59)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--(D-Leu) - (Kac)(SEQ IDNO
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-G-G (SEQ ID NO61)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-K (SEQ ID NO 62)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-R-E-L (SEQ IDNO63)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--(SEQ ID NO 64)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--M-K-E-L (SEQ IDNO65)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--Y-G-P-W (SEQ IDNO66)
V--E-P丨-N--C--D-][-H--V--M--W--V--W--E--C--F--E--R--L--L-K (SEQ ID NO 67)
V--Ε- )-N--C--D-]-H--V--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-L-(Kac)(SEQ ID NO :68)
V--Ε- )-N--C--D-]-H--V--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-L-T (SEQ ID NO 69)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--V--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-E-F (SEQ ID NO :70)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--V--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-L-S (SEQ ID NO :71)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--V--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-L (SEQ ID NO :72)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu)-T (SEQ IDNO :73)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-ff-V-ff-E-C-F-E-R-L-Y-G-V-Q (SEQ ID NO :74)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-L-E (SEQ ID NO 75)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-P-L (SEQ ID NO :76)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-P-F (SEQ ID NO :77)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala)-(D-Leu)(SEQID NO 78)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-R-(D-Leu)-(Kac)(SEQ IDNO :79)
V--E-I)-N--c--D-][-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-G-(D-Pro)-L (SEQIDNO 80)
V--E-I)-N--C-D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-G-(D-Pro) - (D-Leu) (SEQID NO 81)
V--E-I)-N--c--D-[-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-G-(D-Leu) - (Kac)(SEQ IDNO 82)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-(D-Leu)-Y-(Aib)-L-T (SEQ IDNO:83)
V--E-I)-N--C-D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-(D-Leu)-Y-(D-Ala)-V-(D-Gln) (SEQID NO 84)
V--E-I)-N--C-D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-(D-Leu)-Y-(D-Ala)-L-(D-Thr)(SEQID NO 85)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(Cha)-G-(DLeu)-T (SEQ IDNO 86)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-(D-Thr)(SEQ IDNO 87)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Sar) - (D-Leu)-T (SEQ IDNO:88)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Pro)-L(SEQ IDNO :89)
V--E-I)-N--c--D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala)-V-(D-Gln) (SEQIDNO 90)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-T(SEQ IDNO :91)
V--E-I)-N--c--D-][-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-G- (D-Leu)-T (SEQIDNO 92)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-G-L-T (SEQ IDNO :93)
V--E-I)-N--c--D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Tyr)-D-L-(D-Thr) (SEQIDNO 94)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-(D-Leu)-(Aib)(SEQ IDNO :95)
V--E-I)-N--c--D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu) - (D-Thr) (SEQIDNO 96)
V--Ε- )-N--c--D-]-H--v--M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L (SEQ ID NO :97)
V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L-Y-G-P-F (SEQ ID NO :98)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-V-C-F-E-R-L-Y-G-P-(SEQ ID NO :99)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L-Y-G-P-E (SEQ ID NO :100)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L-Y-G-P-Q (SEQ ID NO :101)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-V-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu)-T (SEQ IDNO :102)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L-Y-G-L ((SEQ ID NO :103)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-V-C-F-E-R-L-(D-Leu)-Kac (SEQ IDNO :104)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-V-ff-V-C-F-E-R-L-Y-G-L-T (SEQ ID NO :105)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-V-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala)-(D-Leu)(SEQID NO :106)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-K (SEQ ID NO :108)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-E-ff-E-C-F-E-R-L-Y-F-K-E-ff (SEQ IDNO :109)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-R (SEQ ID NO :110)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-F-K (SEQ ID NO :111)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-K-E-F (SEQ IDNO :112)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-E-ff-E-C-F-E-R-L-Y-S-G-ff-G (SEQ IDNO :113)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-ff-E-ff-E-C-F-E-R-L-Y-S-G-ff-F (SEQ IDNO :114)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-K-E-A (SEQ IDNO :115)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-K-E-M (SEQ IDNO :116)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-A-K-E-L (SEQ IDNO :117)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-F-K-E-L (SEQ IDNO :118)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-F-K-E-A (SEQ IDNO :119)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-Y-G-G-G (SEQ IDNO :120)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-L-Y-M-K (SEQ ID NO :121)V-E-P-N-C-D-I-H-V-(Nle)-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-T (SEQ IDNO :128)V-E-P-N-C-D-I-H-V-L-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-T (SEQ IDNO :129)V-E-P-N-C-D-I-H-V-V-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-T (SEQ IDNO :130)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-(Kac)-W-E-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala)-V-(D-Gln)(SEQ ID NO :136)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-ff-V-ff-E-C-F-E-R-L-(D-Leu) - (Kac)(SEQ IDNO 192)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu)-T (SEQ IDNO :193)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-P-L(SEQ ID NO :194)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-ff-V-ff-E-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala) - (D-Leu)(SEQ IDNO 195)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L(-D-Leu)-K (SEQ IDNO :196)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu)-K (SEQID NO :197)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-K-R-(D-Leu) (SEQ IDNO :198)V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-E-W-E-C-F- (N-谷氨酸甲酯)-R-L (SEQ IDNO 199)V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-V-E-E-C-F-(D-Glu)-R-L (SEQ ID NO :200)V-E-P-N-C-D-I-H-V-KW-E-W-E-C-F-E-R(N-甲基精氨酸)(SEQ IDNO :201)V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-E-W-E-C-F-E-R-(D-Asn) (SEQ ID NO :202)
V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-E-W-E-C-F-E-R-(Aib) (SEQ ID NO :203)V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-E-W-E-C-F-(Aib)-R-L (SEQ ID NO :204)V-E-P-N-C-D-I-H-V-Kff-E-W-E-C-(Napthaline)-E-R-L (SEQ IDNO :205)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-E-C-F-K-R-L-Y-G-L-T (SEQ ID NO :206)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-V-E-C-F-E-R-L-Y-K-L-E (SEQ ID NO :207)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-E-W-E-C-F-E-R-(D-Leu)(SEQ ID NO :208)V-E-P-N-C-D-I-H-V-E-W-E-W-E-C-F-K-R-L(SEQ ID NO :209)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-(高精氨酸)-L-Y- (D-Ala) - (D-Leu) (SEQ ID NO 210)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-K-W-E-C-F-E-R-Y-G-(D-Leu)-E (SEQ IDNO :211)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-G-(D-Leu)-E (SEQ IDNO :212)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(Aib)-L-E (SEQ IDNO :213)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-K-W-E-C-F-E-R-L-Y- (Aib)-L-E (SEQ IDNO :214)V-E-P-N-C-D-I-H-V-M-W-K-W-E-C-F-E-R-(D-Leu)-K(SEQ ID NO :215)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-(Kac)-L-Y-(D-Ala) - (D-Leu)(SEQ ID NO 216)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-(Kac)-(cyclo-Leu)_Y_(D-Ala) - (D-Leu) (SEQ ID NO 217)V-E-P-N-C-D-I-H-V-K-W-V-W-E-C-F-E-(Kac)-(Tie)_Y_ (D-Ala) - (D-Leu) (SEQ ID NO :218)在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的[VEGF-肽]選自SEQ ID NO :60、73、76、78、192、193、 194 或 195。Xltl可以是M。[VEGF-肽]可以是包括與以下序列基本同源的序列的肽=V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Xi2-Wi3-Xi4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :133)，其中X12選自V、E和Kac，X14是E或V，X19可以是任何疏水性氨基酸殘基或其D-異構(gòu)體，X20 不存在或者可以是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者可以是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或選自G、V、L、I、 P、S、T、W、F、E、Kac 或其 D-異構(gòu)體，X23 不存在或選自 G、A、I、L、Q、E、F、T、W、S、Y 和 Kac 及其D-異構(gòu)體。X12可以是E。[VEGF-肽]可以是包括與以下序列基本同源的序列的肽=V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Ei2-Wi3-Xi4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :1；34)，其中X14是E或V，X19可以是任何疏水性氨基酸殘基或其D-異構(gòu)體，X20不存在或者可以是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者可以是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或選自G、V、L、I、P、S、T、W、F、E、Kac 或其D-異構(gòu)體，X23不存在或選自G、A、I、L、Q、E、F、T、W、S、Y和Kac及其D-異構(gòu)體。[VEGF-肽]可包括與以下中的一種或多種基本同源的序列SEQID NO 34,SEQ ID NO :108,SEQ ID NO 109,SEQ ID NO :110、SEQ IDNO =IlUSEQ ID N0:112、SEQ ID NO :113, SEQ ID NO :114,SEQ IDNO :115,SEQ ID NO :116,SEQ ID NO :117, ID NO :118,SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO :120,SEQ ID N0:121。
X12可以是V。[VEGF-肽]可以是包括與以下序列基本同源的序列的肽=V1-E2-P3-N4-C5-D6-I7-H8-V9-Mi0-Wii-Vi2-Wi3-Xi4-Ci5-F16-E17-R18-X19-X20-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :1；35)，其中X14是E或V，X19可以是任何疏水性氨基酸殘基或其D-異構(gòu)體，X20不存在或者可以是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者可以是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或選自G、V、L、I、P、S、T、W、F、E、Kac 或其D-異構(gòu)體，X23不存在或選自G、A、I、L、Q、E、F、T、W、S、Y和Kac及其D-異構(gòu)體。[VEGF-肽]可包括與以下中的一種或多種基本同源的序列SEQID NO 35,SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ IDNO :39、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、ID NO :46、SEQ ID NO :47、SEQ IDNO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、 SEQ ID NO 54,SEQ ID NO 55、SEQ ID NO56、IDNO 57、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 59、SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :61、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :63、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :65、 SEQID NO 66,SEQ ID N0:67、SEQ ID NO 68,SEQ ID NO 69,SEQ IDN0:70、ID NO :71、SEQ ID NO :72)、SEQ ID NO 73, SEQ ID NO 74, SEQ ID NO 75, SEQ ID NO 76, SEQ ID NO :77、 SEQ ID NO 78,SEQID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO :81、SEQ ID N0:82、ID NO :83、SEQ ID NO :84,SEQ ID NO :85,SEQ ID NO :86,SEQ ID NO :87、IDNO :88、SEQ ID NO :89,SEQ ID NO :90, SEQ ID NO :91、SEQ ID NO :92、SEQ ID NO :93、SEQ ID NO :94、SEQ ID NO :95、SEQ ID NO :96, IDNO :97、SEQ ID NO :98、SEQ ID NO :99、SEQ ID NO :100, SEQ IDNO :101, SEQ ID NO :102,SEQ ID NO :103,SEQ ID NO :104,SEQ IDNO :105,SEQ ID NO :106,SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO :129, SEQ IDNO :130。關(guān)于本文所描述的[VEGF-肽]的各種實(shí)施方式，在本發(fā)明的一些方面，R1可以是 C(0)CH3。在本發(fā)明的一些方面，R2是NH2。R1和/或R2可不存在。X19可選自L、I、A、V、G 或其D-異構(gòu)體。X19可以是L。X19可以是D-Leu。X2°可以是Y。X2°可以是D-Tyr。X21可選自 D-Ala、G、Aib 和 Kac。X21 可以是 D_Ala。X21 可以是 G。X” 可選自 L、V、P、D-Leu、D_Pro。 爐2可以是D-Leu。爐2可以是D-Pro。爐2可以是L。儼可不存在。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，[VEGF-肽]是(SEQ ID NO :78)。在一些實(shí)施方式中，R1- [VEGF-肽]-R2 是{C (0) CH3I-V-E-P-N-C-D-1-H-V-K-ff-V-ff-E-C-F-E-R-L-Y- (D-Ala) -(D-Leu)-INH2I (SEQ ID NO 188)，且 K11 是連接殘基。連接所述連接殘基的存在(分別為VEGF-連接殘基和Ang2_連接殘基)為本發(fā)明化合物提供了與骨架、大分子及其它部分相連接的極大靈活性。具體而言，本發(fā)明化合物可以可靠、牢固和有效地與骨架諸如抗體、抗體片段、PEG分子、白蛋白等共價(jià)連接。令人驚奇的是，已發(fā)現(xiàn)將所述連接殘基放置在相應(yīng)肽的某些關(guān)鍵位置可使所述肽的穩(wěn)定性和/或結(jié)合提高。所述連接殘基可選擇為提供側(cè)鏈，所述側(cè)鏈的化學(xué)特性使其能在該位置形成特異性的、可靠的、定向的且有效的化學(xué)共價(jià)鍵。在本發(fā)明的一些方面，所述連接殘基直接或通過(guò)中間連接子與抗體的結(jié)合位點(diǎn)共價(jià)連接。所述鍵接是不可逆的。本發(fā)明化合物可通過(guò)連接殘基與連接子部分L (或L’，如下文所描述)共價(jià)連接。 大量連接子是可行的；許多合適的連接子在US2006205670中公開(kāi)，該文獻(xiàn)的內(nèi)容引入本文作為參考。具體而言，正如在本文中具體或概要地進(jìn)行描述，US2006205670中涉及連接子、具體連接子結(jié)構(gòu)、連接子合成以及不同組成部件X、Y和Z基團(tuán)的各個(gè)方面均包含在本文中。 所述連接子是直鏈或支鏈的，并任選地包括一個(gè)或多個(gè)碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)。連接子長(zhǎng)度可根據(jù)直鏈原子的數(shù)目來(lái)計(jì)算，且諸如芳環(huán)等環(huán)形部分則截取沿環(huán)的最短路徑進(jìn)行計(jì)算。在一些實(shí)施方式中，所述連接子具有5-15個(gè)原子的直鏈長(zhǎng)度，在其它實(shí)施方式中為15-30個(gè)原子，在更多其它實(shí)施方式中為30-50個(gè)原子，在更多其它實(shí)施方式中為50-100個(gè)原子，在更多其它實(shí)施方式中為100-200個(gè)原子。關(guān)于連接子的其它考慮包括對(duì)所得化合物的物理或藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的影響，如溶解性、親脂性、親水性、疏水性、穩(wěn)定性(更穩(wěn)定或更不穩(wěn)定以及所設(shè)計(jì)的降解)、剛性、撓性、免疫原性、抗體結(jié)合的調(diào)節(jié)、導(dǎo)入膠束或脂質(zhì)體的能力等等。在本發(fā)明的一些方面，所述化合物包括與所述連接殘基共價(jià)連接的連接子(L)或 (L，)。所述連接子可包括式-[接頭 I-X-Y-Z ；-[接頭]-Χ-Υ-Ζ’ ；-X-Y-Z-；或-X-Y-Z'-， 其中[接頭]在所述連接子為支鏈時(shí)存在，并且在存在時(shí)與所述連接殘基和一個(gè)或多個(gè)其它活性分子共價(jià)相連，X是包含選自C、H、N、0、P、S、F、Cl、Br和I的任何原子的生物相容性連接鏈，并包括聚合物或嵌段共聚物，且在所述連接子是直鏈時(shí)與所述連接子共價(jià)相連， Y是任選存在的包括至少一個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)的識(shí)別基團(tuán)；且Z是能與抗體的結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)的氨基酸側(cè)鏈形成共價(jià)鍵的反應(yīng)性基團(tuán)，Ζ’是包括與抗體的結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接的附著部分。當(dāng)存在時(shí)，Y可具有任選取代的結(jié)構(gòu)
a ^ c、c
Vi或U其中a、b、c、d和e獨(dú)立地是碳或氮；f是碳、氮、氧或硫；Y獨(dú)立地在任何兩個(gè)具有足夠價(jià)的環(huán)位置上與X和Z相連；且a、b、c、d、e或f中不超過(guò)四個(gè)同時(shí)為氮，且優(yōu)選為所述環(huán)結(jié)構(gòu)中a、b、c、d和e各自是碳。在一些方面，Y可以是苯基。盡管不希望受限于任何理論，但可認(rèn)為所述Y基團(tuán)能有助于將所述反應(yīng)性基團(tuán)放置于抗體結(jié)合位點(diǎn)從而使得所述 Z基團(tuán)能與反應(yīng)性氨基酸側(cè)鏈反應(yīng)。所述連接子可經(jīng)設(shè)計(jì)使其含有能與大分子如抗體、蛋白或其片段共價(jià)或非共價(jià)地形成鍵的反應(yīng)性基團(tuán)。所述反應(yīng)性基團(tuán)選擇為用于特定結(jié)合位點(diǎn)的反應(yīng)性殘基。例如，用于被縮醛酶抗體修飾的化學(xué)部分可以是酮、二酮、β-內(nèi)酰胺、活性酯鹵代酮、內(nèi)酯、酸酐、馬來(lái)酰亞胺、α -鹵代乙酰胺、環(huán)己基二酮、環(huán)氧化物、醛、脒、胍、亞胺、烯胺、磷酸酯、膦酸酯、 環(huán)氧化物、氮雜環(huán)丙烷、硫代環(huán)氧化物、受掩蔽或受保護(hù)的二酮(例如縮酮)、內(nèi)酰胺、鹵代酮、醛等等。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，用連接子L或L’連接本發(fā)明的肽，部分Z (或在與大分子相連時(shí)為V )是反應(yīng)性基團(tuán)。在一些實(shí)施方式中，Z包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)安排的C = 0基團(tuán)以形成氮雜環(huán)丁酮 (azitidinone)、二酮、酰基內(nèi)酰胺、活性酯、鹵代酮、環(huán)己基二酮基團(tuán)、醛、馬來(lái)酰亞胺、活化烯烴、活化炔烴，或者一般而言，包含易于受到親核或親電取代的離去基團(tuán)的分子。其它基團(tuán)可包括內(nèi)酯、酸酐、α -鹵代乙酰胺、亞胺、酰胼或環(huán)氧化物。能與抗體結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)的反應(yīng)性親核基團(tuán)(例如，賴氨酸或半胱氨酸側(cè)鏈)共價(jià)鍵接的示例性連接子親電反應(yīng)性基團(tuán)包括酰基β -內(nèi)酰胺、簡(jiǎn)單二酮、琥珀酰亞胺活性酯、馬來(lái)酰亞胺、帶有連接子的鹵代乙酰胺、鹵代酮、環(huán)己基二酮、醛、脒、胍、亞胺、烯胺、磷酸酯、膦酸酯、環(huán)氧化物、氮雜環(huán)丙烷、硫代環(huán)氧化物、受掩蔽或受保護(hù)的二酮(例如縮酮)、內(nèi)酰胺、鹵代酮、醛等等，受掩蔽的C = 0基團(tuán)，諸如亞胺、縮酮、乙縮醛以及任何其它已知的親電基團(tuán)。在某些實(shí)施方式中，所述反應(yīng)性基團(tuán)包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)安排的C = 0基團(tuán)以形成酰基β-內(nèi)酰胺、簡(jiǎn)單二酮、琥珀酰亞胺活性酯、馬來(lái)酰亞胺、帶有連接子的鹵代乙酰胺、鹵代酮、環(huán)己基二酮或醛。Z或Ζ’在存在時(shí)可以是取代烷基、取代環(huán)烷基、取代芳基、取代芳基烷基、取代雜環(huán)基或取代雜環(huán)基烷基，其中至少一個(gè)取代基是1，3-二酮部分、?；?內(nèi)酰胺、活性酯、α-鹵代酮、醛、馬來(lái)酰亞胺、 內(nèi)酯、酸酐、α-鹵代乙酰胺、胺、酰胼或環(huán)氧化物。在一些方面，所述Z基團(tuán)在存在時(shí)與抗體的結(jié)合位點(diǎn)共價(jià)相連。在其它方面，Z基團(tuán)與能向本發(fā)明的肽提供延長(zhǎng)的半衰期的大分子骨架共價(jià)相連。在一些方面，Z在存在時(shí)具有結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.式R1-REGF-肽]-R2的化合物或其可藥用鹽，其中[VEGF-肽]是具有以下序列的肽=Xi-X2-P3-N4-C5-X6-X7-X8-V9-Xici-Xii-Xi2-Wi3-Xi4-C15-F16-E17-R18-X19-X2ci-X21-X22-X23 (SEQ ID NO :131)，其中 R1 不存在或者是 CH3、C (O)CH3、C (O)CH3、C (O)CH2CH3、C (O)CH2CH2CH3、C(O) CH (CH3) CH3、C (0) CH2CH2CH2CH3、C (0) CH (CH3) CH2CH3、C (0) C6H5、C (0) CH2CH2 (CH2CH2O) ^5Me、氨基-2-PEG或者N-酰基或N-烷基氨基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)；R2不存在或者是 OH、NH2, NH (CH3)、NHCH2CH3^ NHCH2CH2CH3^ NHCH (CH3) CH3> NHCH2CH2CH2CH3、NHCH (CH3) CH2CH3、 NHC6H5, NHCH2CH20CH3> NHOCH3> NHOCH2CH3、羧基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)，且X1是疏水性氨基酸殘基，X2是帶負(fù)電荷的殘基，X6是帶負(fù)電荷的殘基，X7是疏水性氨基酸殘基，X8 是含有環(huán)結(jié)構(gòu)的殘基，X10是疏水性氨基酸，X11是芳香性氨基酸，X12選自V、E和Kac，X14是 E或V，X19是任何疏水性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X20不存在或者是任何中性、疏水性或芳香性氨基酸或其D-異構(gòu)體，X21不存在或者是任何帶正電荷的殘基或任何脂肪族非極性殘基或其D-異構(gòu)體，X22不存在或選自G、V、L、I、P、S、Τ、W、F、Ε、Kac或其D-異構(gòu)體，X23不存在或選自 G、A、I、L、Q、Ε、F、Τ、W、S、Y 和 Kac 及其 D-異構(gòu)體，并且其中 Χ1、X2、P3、N4、V9、X10、 X12、X14、E17和碳端殘基之一能被包含親核側(cè)鏈的連接殘基或者被直接或通過(guò)中間連接子與抗體的結(jié)合位點(diǎn)共價(jià)相連的N-端氨基或C-端羧基所替代，所述連接殘基選自K、R、Y、C、T、 S、賴氨酸同系物、高半胱氨酸、高絲氨酸、Dap、Dab、N-端殘基和C-端殘基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述[VEGF-肽]包括與選自SEQID NO :34-136 和SEQ ID NO :192-195的一個(gè)或多個(gè)序列基本同源的序列。
3.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述[VEGF-肽]包括與V-E-P-N-C-D -I-H-V-M-W-V-W-E-C-F-E-R-L-Y-(D-Ala)-(D-Leu) (SEQ ID NO 78)基本同源的序列。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其中Mltl被連接殘基K替代，所述化合物包括下式
5.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述連接殘基存在，且所述化合物還包括與所述連接殘基的側(cè)鏈共價(jià)相連的直鏈或支鏈連接子。
6.如權(quán)利要求5所述的化合物，其中所述連接子包括式L或L’，L為式-[接頭]-Χ-Υ_Ζ或-Χ-Υ-Ζ-，且L’為式-[接頭]-χ-γ-ζ’或-Χ-Υ-Ζ’-，其中[接頭]在所述連接子為支鏈時(shí)存在，并且在存在時(shí)與所述連接殘基和一個(gè)或多個(gè)其它活性分子共價(jià)相連，X 是包含選自C、H、N、0、P、S、F、Cl、Br和I的任何原子的生物相容性連接鏈，并包括聚合物或嵌段共聚物，且在所述連接子是直鏈時(shí)與所述連接子共價(jià)相連，Y存在且具有任選取代的結(jié)構(gòu)其中a、b、c、d和e獨(dú)立地是碳或氮；f是碳、氮、氧或硫；Y獨(dú)立地在任何兩個(gè)具有足夠價(jià)的環(huán)位置上與X和Z相連；且a、b、c、d、e或f中的不超過(guò)四個(gè)同時(shí)為氮，且優(yōu)選所述環(huán)結(jié)構(gòu)中a、b、c、d和e各自是碳，并且Z在存在時(shí)具有以下結(jié)構(gòu)
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，其中 X是
8.如權(quán)利要求6-7中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述連接子是直鏈的，且所述[接頭] 為以下情況不存在，當(dāng)Z在存在時(shí)選自化合物1001-1080，且當(dāng)Z’在存在時(shí)選自化合物 2001-2080。
9.如權(quán)利要求10所述的化合物，其中Z’存在，所述化合物包括化合物2018的結(jié)構(gòu)式。
10.包括下式的化合物
11.如權(quán)利要求10所述的化合物，其中[接頭]包括式-[ΑΜ1-間隔子]-[支鏈]-[AM2-間隔子]-；且其中[AM-1-間隔子]和[AM-2-間隔子]各自獨(dú)立地是生物相容性聚合物、嵌段共聚物、C、H、N、0、P、S、鹵素(F、Cl、Br、I)或其鹽、烷基、烯基、炔基、氧烷基、 氧烯基、氧炔基、氨基烷基、氨基烯基、氨基炔基、磺烷基、磺烯基、磺炔基、磷酰烷基、磷酰烯基或磷酰炔基；且[支鏈]是具有至少三個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)的分子；且[AM-1-間隔子]與[支鏈]和所述[活性分子-1]共價(jià)連接，[AM-2-間隔子]與[支鏈]和所述[活性分子-2] 共價(jià)連接。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中所述[AM-1-間隔子]和[AM-2-間隔子]各自獨(dú)立地是能與其各自的活性分子和[支鏈]形成共價(jià)鍵的中性、水溶性分子，并且選自氨基聚乙二醇酸、聚乙二醇二酸、氨基烷酸、氨基烷酸、聚甘氨酸、2-PEG、4-PEG和6-PEG，并能各自是4-PEG。
13.如權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述[支鏈]是包括三個(gè)正交反應(yīng)性基團(tuán)的化學(xué)部分，并選自半胱氨酸支鏈、基于二氨基丙酸的支鏈、基于二氨基丁酸的支鏈、基于鳥(niǎo)氨酸的支鏈、基于賴氨酸的支鏈、高半胱氨酸支鏈、雙馬來(lái)亞酰胺支鏈和馬來(lái)亞酰胺-酸支鏈以及其衍生物和類似物，以及以下結(jié)構(gòu)
14.如權(quán)利要求13所述的化合物，其中[支鏈]-L選自
15.如權(quán)利要求10-14中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述[活性分子2]是式 R3- [Ang2-肽]-R4 的 Ang-2 結(jié)合肽，其中 R3 不存在或者是 CH3、C (0) CH3、C (0) CH3、C (0) CH2CH3 > C(O) CH2CH2CH3^ C(O) CH (CH3) CH3 > C (0) CH2CH2CH2CH3、C (0) CH(CH3) CH2CH3、C(O) C6H5, C(O)CH2CH2 (CH2CH2O)P5Mh氨基-2-PEG、N-?；蚇-烷基氨基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)；且 R4 不存在或者是 OH、NH2、NH (CH3)、NHCH2CH3^ NHCH2CH2CH3^ NHCH (CH3) CH3> NHCH2CH2CH2CH3、NHCH (CH3) CH2CH3^NHC6H5, NHCH2CH20CH3> NHOCH3 > NH0Q12CH3、羧基保護(hù)基、脂質(zhì)脂肪酸基團(tuán)或烴基團(tuán)，并且其中所述[Ang2-肽]包括與014 5!^ 1 1 1 1 1 1 ^ F17M18X19Q20Q21G22 (SEQ ID NO 107)基本同源的序列，其中 X2 選自 K、N、R、H、Kac、Nick 和 CbcK， X5 選自 P、hP、dhP 禾口 BnHP，X9 選自 L、I、ThA 禾口 Kac，X11 選自 Q、N、C、K、Kac, Dab 禾口 Dap，X12 選自 L、HL、Nva, I、HchA, HF 禾口 ThA，X13 選自 L、HL、Nva, I、HchA, HF 禾口 ThA，X14 選自芳香性殘基，X16選自Q和N，X19選自L和I，且[Ang-2-肽]通過(guò)親核性側(cè)鏈或者Ang2_連接殘基的N-端氨基或C端羧基與[接頭]共價(jià)相連，所述Ang2-連接殘基選自K、R、Y、C、T、S、賴氨酸類似物、高半胱氨酸、高絲氨酸、Dap、Dab、N-端殘基和C-端殘基，且其中Q^E^X^X11、X12、D15、X16、M18、X19或G22之一被所述Ang2-連接殘基替代。
16.如權(quán)利要求15所述的化合物，其中所述[Ang2-肽]包括與選自SEQID NO 137-191的一個(gè)或多個(gè)化合物基本同源的序列。
17.如權(quán)利要求16所述的化合物，其中R1是C(0) CH3, R2是NH2,且R1-[Ang-肽]-R2是 (SEQ ID NO 153) {C (0) CH3I-Q- (Kac)-Y-Q-P-L-D-E- (Kac)-D-K-T-L-Y-D-Q-F-M-L-Q-Q-G -{NH2}，且位置11處的K是與[接頭]共價(jià)相連的Ang2-連接殘基。
18.如權(quán)利要求10-17中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述[VEGF-肽]通過(guò)親核性殘基或VEGF-連接殘基的N-端氨基或C-端羧基與[接頭]共價(jià)相連，所述VEGF-連接殘基選自K、R、Y、C、T、S、賴氨酸類似物、高半胱氨酸、高絲氨酸、Dap、Dab、N-端殘基和C-端殘基。
19.如權(quán)利要求10-18中任一項(xiàng)所述的化合物，選自化合物5001-化合物50 和化合物5031-化合物5074，并且能選自化合物5053、5060、5061和5062。
20.如權(quán)利要求10-19中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述Z基團(tuán)在存在時(shí)與所述抗體的結(jié)合位點(diǎn)共價(jià)相連。
21.如權(quán)利要求10-20中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述抗體存在，且所述化合物選自:6001-6026,6028,6029 和 6031-6074，并且能選自化合物 6053,6060,6061 和 6062。
22.如權(quán)利要求21所述的化合物，包括化合物6053的結(jié)構(gòu)式。
23.如權(quán)利要求6-22中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述抗體存在且是催化性抗體，并能選自醛縮酶抗體、β -內(nèi)酰胺酶、酯酶抗體和酰胺酶抗體。
24.如權(quán)利要求6-23中任一項(xiàng)所述的化合物，其中所述抗體存在且是全長(zhǎng)全長(zhǎng)抗體、 Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、dsFv、scFv、VH、V^雙功能抗體、包含始于h38c2的Vh和Vl域的迷你抗體或包含始于h38c2的Vh和Vl域的全長(zhǎng)抗體，以及選自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4的恒定域，并能是h38C2 IgGl。
25.一種藥物組合物，其包括治療有效量的前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的化合物，并任選地包括治療有效量的一種或多種化學(xué)治療劑，所述化學(xué)治療劑優(yōu)選為選自下組的化合物5-氟尿嘧啶、伊立替康、泰素帝、舒尼替尼、阿西替尼、奧沙利鉬、貝伐單抗和西妥昔單抗。
全文摘要
本發(fā)明提供了VEGF結(jié)合蛋白。此外，本發(fā)明提供了單獨(dú)與抗體軛合以及與其它抗血管新生分子一起與抗體軛合的VEGF肽。本發(fā)明提供了所述肽和化合物的不同應(yīng)用，包括用于治療與異常血管新生相關(guān)的病癥的方法。
文檔編號(hào)C07K14/71GK102164616SQ200980126158
公開(kāi)日2011年8月24日 申請(qǐng)日期2009年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月5日
發(fā)明者喬爾·德沙奈斯, 傅彥文, 劉定國(guó), 劉斌, 布賴恩·D·奧茨, 文卡塔·R·多帕爾拉普迪, 柯特·W·布拉德肖, 賴敬宇, 阿比吉特·S·巴特, 陳剛 申請(qǐng)人:CovX科技愛(ài)爾蘭有限公司