專利名稱：用于病毒所致的疾病的抗體藥物組合物的制作方法
用于病毒所致的疾病的抗體藥物組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療及預(yù)防病毒所致的疾病，包括病毒感染。更具體而言，本發(fā)明涉及設(shè)計(jì)為調(diào)節(jié)抗病毒宿主反應(yīng)及降低病毒感染及病毒感染的并發(fā)癥的嚴(yán)重性及持續(xù)時(shí)間的新治療劑。
背景技術(shù)：
有幾種對(duì)抗病毒感染(除了治療個(gè)體癥狀之外)的基本方法(1)疫苗接種-誘導(dǎo)免疫以阻止病毒感染，(2)用小分子試劑或治療性抗體靶向病毒復(fù)制循環(huán)，及C3)活化宿主反應(yīng)(主要使用干擾素類或干擾素誘導(dǎo)物)WAGNER，Ε. K.，et al. Basic Virology. 2nd edition. Oxford =Blackwell Publishing,2004. ISBN 1405103469. p. 96-116。各提及的方法均具有某些限制或缺點(diǎn)。疫苗接種僅對(duì)疫苗-可阻止的感染有利；天然的病原體(例如，流感病毒)存活力可最小化疫苗接種功效；最后，疫苗接種偶爾相關(guān)于不期望的反應(yīng)。各靶向病毒復(fù)制循環(huán)的治療劑僅在窄范圍的共有共同的分子靶的疾病病原體所致的疾病中有效；所述試劑的使用可相關(guān)于抗性和/或不期望的反應(yīng)的發(fā)展。也值得注意的是，病毒所致的疾病的嚴(yán)重性及持續(xù)時(shí)間取決于2組因素一方面是關(guān)聯(lián)于病毒清除率的靶器官中的病毒濃度(有相應(yīng)直接的致細(xì)胞病變效果)，而另一方面是宿主先天性和獲得性免疫應(yīng)答的適當(dāng)。因此，甚至相對(duì)低劑量的高度病原性病毒可導(dǎo)致非常嚴(yán)重的疾病，嚴(yán)重性常為一種不合時(shí)宜的宿主防御反應(yīng)所致的'細(xì)胞因子風(fēng)暴'的結(jié)果(SZRETTER，K. J.，et al. Role of host cytokine responses inthe pathogenesis of avian H5N1 influenza viruses in mice. J Virol.2007，vol. 81，no. 6，p. 2736-44.)。能活化宿主反應(yīng)的試劑(生物反應(yīng)修飾物，免疫調(diào)節(jié)劑)關(guān)于它們的'天然的' 作用模式及獨(dú)立于病毒感染的特定原因似乎是有希望的一組抗病毒治療劑。此組治療劑可以干擾素類(例如，聚乙二醇化的干擾素a-2a)，咪喹莫特(發(fā)揮Toll-樣受體7的激動(dòng)劑的作用的干擾素誘導(dǎo)物)，替洛隆(經(jīng)口活躍的干擾素誘導(dǎo)物)為例。但是，全部已知的干擾素制劑具有顯著的不利效果，及合成的干擾素誘導(dǎo)物具有安全性或生物利用度問題。有多種包括全抗體或抗體片段的設(shè)計(jì)用于治療不同疾病的治療劑(Brekke OH, Sandlie I. Therapeutic antibodies for human diseases atthe dawn of the twenty-first century. Nat Rev Drug Discov. 2003Jim ;2(1) :52_62.)。 胃中一些設(shè)計(jì)用于病毒所致的疾病例如，在HIV感染中，抗體片段被提議阻斷病毒蛋白 gpl20 (Danishefsky et al. , USpatent application 20060229432, published October 12,2006)；在呼吸道合胞病毒(RSV)感染中，已知單克隆抗體(帕利珠單抗)靶向RSV， 預(yù)防、治療或改善相關(guān)于RSV感染的癥狀。提及的試劑旨在阻斷/抑制它們的靶分子， 它們以實(shí)質(zhì)性劑量(至少0.001mg/kg)施用。理論上，現(xiàn)有技術(shù)包括口服施用，但由于此途徑對(duì)基于蛋白的醫(yī)學(xué)提供的差的生物利用度，既有的產(chǎn)品不可用于口服劑型。次多的基于抗體或抗體片段的經(jīng)口藥物制劑(US專利申請(qǐng)200600(^927 (10513109)， 20050136103 (10942300)，20030153022 (10287821)，等)靶向消化道內(nèi)的分子或細(xì)菌外源肽，及以實(shí)質(zhì)性劑量施用必要于在消化道內(nèi)達(dá)到一定濃度及阻斷它們的靶。除了抗病毒劑之外，現(xiàn)有技術(shù)基本上涵蓋針對(duì)在特定疾病狀態(tài)上調(diào)的分子靶的抗體，旨在降低它們的水平至正常。最接近本申請(qǐng)的主題的實(shí)施例是Carton等人的US專利申請(qǐng) US20060115475，“ Toll Iikereceptor 3 antagonists，methods and uses"。其公幵通過拮抗TLR3來抑制細(xì)胞的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生的在治療及預(yù)防炎癥條件(包括相關(guān)于感染的條件)中有效的抗-TLR3 (Toll樣受體3型)抗體。如可從該申請(qǐng)的說明書總結(jié)出，作者提議使用針對(duì)具有703個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度的TLR3的細(xì)胞外配體-結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多種表位之一的單克隆抗體。在亞致死流感感染后，在用肺炎鏈球菌攻擊之前不久(預(yù)防注射)及在用肺炎鏈球菌攻擊之后不久(治療性注射)腹膜內(nèi)注射這些抗體，以阻止在平息的流感感染背景上細(xì)菌病原體所致的膿毒性休克。因此，US20060115475申請(qǐng)更關(guān)注通過拮抗TLR3 的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域預(yù)防及治療細(xì)菌感染的致死炎癥并發(fā)癥，相比展示病毒感染中抗-TLR3抗體的任何預(yù)防性或治療性用途。另一通用的方法是使用抗體或抗體片段來靶向由惡性或別樣地患病的細(xì)胞特異性地表達(dá)的標(biāo)記物?；诳贵w的模仿(受體激動(dòng)劑)為本領(lǐng)域所知，但無一實(shí)際用于實(shí)踐。除了以上-提及的抗病毒方法及多種對(duì)于病毒感染的癥狀性治療劑之外，有幾種用于預(yù)防及治療病毒感染(主要是流感及普通感冒)的注冊(cè)的順勢(shì)療法藥劑。其中多數(shù)由醫(yī)生根據(jù)順勢(shì)療法傳統(tǒng)基于患者特異性癥狀個(gè)別開處方。但是，幾種產(chǎn)品要求待在上呼吸道感染中有效的通用指示劑的權(quán)利。其中最值得注意的是歐斯洛可舒能Oiscillococcinum)(在法國(guó)銷售，幾個(gè)其他EU國(guó)家及北美洲)及Anaferon(在俄羅斯銷售及幾個(gè)相鄰國(guó)家，但不在EU)。歐斯洛可舒能由鴨的心臟及肝臟制得(順勢(shì)療法稀釋K200)，Anaferon由針對(duì)干擾素γ的抗體制得(順勢(shì)療法稀釋液的混合物 (RUW02005000350A (EPSHTEIN 01)06. 01. 2005))。然而順勢(shì)療法治療劑通常被認(rèn)為是安全的，提及的產(chǎn)品的功效仍不確定，至少，從公開研究判斷。對(duì)于歐斯洛可舒能而言，無公開的病毒感染的動(dòng)物模型中的功效的證據(jù)，及其在治療流感及流感-樣綜合征中的臨床益處被認(rèn)為非常中等(VICKERS, A. J.，et al. Homoeopathic Oscillococcinumfor preventing and treating influenza and influenza-like syndromes. Cochrane Database Syst Rev. 2006 Jul，vol. 19，no. 3，p. CD001957.)。對(duì)于 Anaferon 而言，公幵了動(dòng)物功效數(shù)據(jù) (SERGEEV，Α. N.，et al. [Antiviral activity of oral ultralow doses of antibodies togamma-interferon !experimental study of influenza infection in mice]. Antibiot Khimioter. 2004, vol. 49, no. 11，p. 7-11. ；SUSL0PAR0V, Μ. Α. ，et al. [Efficacy of therapeutic and prophylactic actions ofultralow doses of antibodies to gamma-interferon in experimentalmurine model of herpes virus]. Antibiot Khimioter. 2004，vol. 49，no. 10，p. 3-6.)；產(chǎn)物在人臨床試驗(yàn)中的益處僅可從科學(xué)會(huì)議摘要評(píng)估。I^iXififfi 白勺 去ffijfeiJffi “ antibodies to an antigen acting as 已direct cause of a pathological syndrome or involved in regulation ofmechanisms of its formation" (EP1295606A(EPSHTEIN 0. I. )26. 03. 2003)制備順勢(shì)療法產(chǎn)品。但引用的專利申請(qǐng)不提示任何線索以選擇特定疾病中的特定分子靶。當(dāng)考慮數(shù)百種蛋白涉及宿主抗病毒感染防御的調(diào)節(jié)(各蛋白均包括數(shù)十個(gè)表位以產(chǎn)生抗體)時(shí)，必需從數(shù)千種可能的選項(xiàng)選擇最佳藥物候選物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在開發(fā)可發(fā)揮活化及調(diào)節(jié)對(duì)廣普病毒病原體的宿主反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)劑的作用的有效及安全的藥品，因此在廣范圍的病毒所致的疾病中提供預(yù)防及治療性益處。技術(shù)問題病毒感染及病毒所致的疾病一般而言存在普遍未滿足的醫(yī)學(xué)需求可用的有確證的功效的治療劑或者僅在非常窄范圍的感染中有效，或它們具有不利的安全性特征，或它傾向于由于病毒抗性放松功效。技術(shù)方案設(shè)計(jì)在廣普病毒感染中有效及安全的藥物組合物的技術(shù)問題通過將下列物質(zhì)合入所述組合物而解決有效治療量或制劑的特異于選自以下序列的至少一種肽序列的全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段3 型 Toll-樣受體序歹Ij (NH2)FYffNVSVHRVLGFKE (COOH) [FYff h, SEQ ID NO :1]，3 型 Toll-樣受體序歹Ij (NH2)EYAAYIIHAYKD (COOH) [EYAh, SEQ ID NO 2]，干擾素γ 受體 β 鏈序歹Ij (ΝΗ2) LlKYffFHTPPSIPLQIEEYL (COOH) [LIK h，SEQ ID NO 3]，干擾素γ 受體 α 鏈序歹Ij (ΝΗ2) SIILPKSLISVV (COOH) [SiIh, SEQ ID Ν0:4]，或有效治療量的包括下列的混合物(a)至少一或更多種特異于選自以下序列的第一肽序列的全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段3 型 Toll-樣受體序列(NH2)FYWNVSVHRVLGi7KE (COOH) [FYff h, SEQ ID NO :1]，3 型 Toll-樣受體序列(NH2)EYAAYIIHMKD (COOH) [EYAh, SEQ ID NO 2]，干擾素γ 受體 β 鏈序歹Ij (ΝΗ2) LlKYffFHTPPSIPLQIEEYL (COOH) [LIK h，SEQ ID NO 3]，干擾素Y 受體 α 鏈序歹Ij (ΝΗ2) SIILPKSLISVV (COOH) [SiIh, SEQ ID N0:4]，及(b)至少一或更多種特異于選自以下序列的第二肽序列的全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段3 型 Toll-樣受體序列(NH2)FYWNVSVHRVLGi7KE (C00H) [FYff h, SEQ ID NO :1]，3 型 Toll-樣受體序列(NH2)EYAAYIIHMKD (C00H) [EYAh, SEQ ID NO 2]，干擾素γ 受體 β 鏈序歹Ij (ΝΗ2) LlKYffFHTPPSIPLQIEEYL (C00H) [LIK h，SEQ ID NO 3]，干擾素γ 受體 α 鏈序歹Ij (ΝΗ2) SIILPKSLISVV (C00H) [SiIh, SEQ ID NO 4],其中所述第二肽序列不同于所述第一肽序列。本發(fā)明涉及所述用于治療或預(yù)防脊椎動(dòng)物及人中，尤其是人中病毒或不同病毒的混合物所致的疾病的藥物組合物。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，所述藥物組合物用作旨在用于腸內(nèi)，腸胃外，口服， 經(jīng)口，經(jīng)腹膜或局部施用的藥物。
本發(fā)明的藥物組合物可用于任何已知的或新出現(xiàn)的病毒且尤其是選自下列的病毒所致的疾病腺病毒；桿狀病毒(尤其是，諾如病毒)；冠狀病毒；柯薩奇病毒；愛潑斯坦-巴爾病毒；黃病毒(尤其是，西尼羅病毒，登革熱病毒，蜱傳腦炎病毒，黃熱病毒)；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；1、2和8型單純皰疹病毒；巨細(xì)胞病毒；人免疫缺陷病毒(HIV)；流感病毒；麻疹病毒；人變性肺病毒；腮腺炎病毒；人乳頭瘤病毒；副流感病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；狂犬病病毒；呼吸道合胞病毒；鼻病毒；輪狀病毒；風(fēng)疹病毒；水痘-帶狀皰疹病毒。在其中一個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物含有效治療量的使用包括多個(gè)循環(huán)的連續(xù)稀釋及垂直搖動(dòng)的技術(shù)-尤其是通過描述于順勢(shì)療法藥典的制備方法制備的順勢(shì)療法制劑?；蛘?，在設(shè)計(jì)藥物組合物中，可使用具有至少70 %相同或85 %類似于3型 Toll-樣受體或干擾素Y受體的所列氨基酸序列之至少一個(gè)的氨基酸序列的靶肽。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，所用抗體片段是Fab，F(xiàn)(ab) 2片段，或含一條重免疫球蛋白鏈及一條輕免疫球蛋白鏈的抗體單體。本發(fā)明的抗體片段可通過用內(nèi)肽酶處理全抗體得到，所述內(nèi)肽酶例如木瓜蛋白酶，胃蛋白酶，或無花果蛋白酶，及也通過遺傳加工方法制備。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施方式中，藥物組合物中的制劑可通過設(shè)計(jì)用于口服施用的順勢(shì)療法稀釋液(勢(shì)液)或幾種順勢(shì)療法稀釋液(勢(shì)液)的混合物呈現(xiàn)。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，藥物組合物包括針對(duì)提及的肽中的2或3種產(chǎn)生的全抗體或抗體片段的混合物。在設(shè)計(jì)本發(fā)明的藥學(xué)試劑中，在試劑設(shè)計(jì)用于不同于人的脊椎動(dòng)物的情況中，被靶向的肽序列可就物種特異性進(jìn)行修正。在本發(fā)明的其中一個(gè)實(shí)施方式中，公開了藥物組合物的制備方法，其至少包括以下步驟，有利地與一或多個(gè)經(jīng)典病毒降低步驟組合，如酸處理，納米過濾或UV曝光(1)肽合成，(2)與匙孔青貝血藍(lán)蛋白偶聯(lián)(Keyhole Limpet Haemocyanin)，(3)用肽-KLH綴合物免疫動(dòng)物，(4)免疫血清的收集及初步純化，(5)在蛋白A上親和純化，(6)在KLH-BrCN-瓊脂糖上純化或在肽上親和純化，(7)任選通過離子交換層析純化(8)可能重復(fù)的連續(xù)稀釋及根據(jù)描述于順勢(shì)療法藥典的技術(shù)勢(shì)能化，(9)制備液體或固體劑型。方法可包括一或多個(gè)進(jìn)一步步驟，例如加入一或多種賦形劑，?；襟E，壓片步驟等。在連續(xù)稀釋及根據(jù)描述于順勢(shì)療法藥典的技術(shù)勢(shì)能化的情況中，通過常規(guī)篩選選擇最有效的勢(shì)液或的勢(shì)液的組合。本發(fā)明的有益效果由于其作用模式涉及針對(duì)病毒的先天性和獲得性宿主反應(yīng)的調(diào)節(jié)，根據(jù)本發(fā)明設(shè)計(jì)的藥物組合物能使廣范圍的病毒所致的疾病的有效及安全的治療或預(yù)防，基本上無關(guān)于負(fù)責(zé)疾病的確切的病毒類型，這使用其他治療劑目前還不可能。
定義本文所用的術(shù)語"抗體"指單克隆或多克隆抗體(免疫球蛋白)分子。如本文所用術(shù)語全長(zhǎng)抗體的"抗原-結(jié)合片段"(或簡(jiǎn)單為"抗體部分"或"片段")指保留特異性地結(jié)合目的靶的能力的全長(zhǎng)抗體的一或多種片段。術(shù)語全長(zhǎng)抗體的"抗原-結(jié)合片段" 所涵蓋的結(jié)合片段之例包括(i)Fab片段，由VL，VH，CL及CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單價(jià)片段；(ii) F(ab' ). sub. 2片段，包括于鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的2個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由 VH及CH 1結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL及VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fv片段，(ν) dAb 片段(ffardet al.，(1989)Nature 341 :544-546)，其由 VH 結(jié)構(gòu)域構(gòu)成；及(vi)保持功能性的分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的2個(gè)結(jié)構(gòu)域，VL及VH被分離的基因編碼的，但它們可使用重組方法通過能使它們制成為單個(gè)蛋白鏈的合成的接頭連接，其中 VL及VH區(qū)成對(duì)形成單價(jià)分子，它稱為單鏈Fv(scFv)。見例如，Bird et al. (1988) Science 242 :423-426 ；and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883。任選地，根據(jù)本發(fā)明，抗體是IgG抗體，特別是IgGl。F(ab' ) 2指可在胃蛋白酶切割后獲得的抗體片段，及由經(jīng)鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的輕鏈及部分重鏈構(gòu)建。Fab片段可從完整的抗體或從F(ab' )2，通過鉸鏈區(qū)的木瓜蛋白酶消化獲得，及含一條輕鏈及一部分重鏈?？贵w片段也可通過合成或通過本領(lǐng)域中描述的重組方法得到?！翱贵w特異性"是抗體固有的性質(zhì)，其表征它們以高親和性(結(jié)合)常數(shù)(Ka)結(jié)合相應(yīng)抗原的相應(yīng)表位的能力。可認(rèn)為特異于特定抗原的抗體的Ka位于IO5 IOkT1的范圍內(nèi)(Foote J,Eisen HN. Kineticand affinity limits on antibodies produced during immune responses. Proc Natl Acad Sci USA. 1995Feb 28 ；92 (5) :1254_6·)。 Ka^Tilil 均對(duì)于單克隆抗體及對(duì)于多克隆抗體的平衡透析或Biacore技術(shù)測(cè)量，其中認(rèn)為是混合物的平均 Ka (Murphy KM，Travers P，Walport Μ. Janeway ‘ s Immunobiology. 5th edition. Garland Science Textbooks，2001，Appendix I，paragraph A_9，F(xiàn)igure A· 11)?！半男蛄邢嗨菩?。蛋白序列比較以序列同一性或序列相似性的方式指定。其中根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行靶肽氨基酸序列之間的比較，2個(gè)序列之間的序列同一性或相似性水平可包括2個(gè)序列之間具有至少70 %，優(yōu)選至少80 %，更優(yōu)選至少90 %，甚至更優(yōu)選至少95%，及最優(yōu)選至少99%序列同一性或相似性?！巴?氨基酸序列指當(dāng)比對(duì)2個(gè)序列時(shí)，序列同一性百分率，即具有同一氨基酸的位置數(shù)除以序列的較短者中的氨基酸數(shù)， 高于70 %，優(yōu)選至少90 %，甚至更優(yōu)選至少95 %，最優(yōu)選至少99 %。2個(gè)氨基酸序列的比對(duì)及比較使用Altschul等人(1997)描述的BLAST算法進(jìn)行(Altschul S. F.，Madden Τ. L. Schaffer Α. Α. , Zhang J. , Zhang Ζ. , Miller W. , Lipman D. J. GappedBLAST and PSI-BLAST :a new generation of protein database searchprograms. Nucleic Acids Res. 25 :3389-3402(1997).)。本發(fā)明的藥物組合物的施用途徑包括腸內(nèi)(任何形式的涉及從口到肛門的消化道任何部分的施用，例如口服，經(jīng)口，等)，腸胃外(通過注射，輸注，經(jīng)粘膜，經(jīng)皮，或吸入性應(yīng)用)，或局部途徑。本發(fā)明中的"制劑"指"藥物物質(zhì)與不同化學(xué)物質(zhì)組合產(chǎn)生藥品的處理產(chǎn)物"?！绊槃?shì)療法技術(shù)"或"描述于順勢(shì)療法藥典的制備方法"，包括制備順勢(shì)療法藥品實(shí)踐中采用的全部技術(shù)及方法，例如，詳細(xì)描述于德國(guó)順勢(shì)療法藥典(GHP，Homoopathisches Arzneibuch, Translation ofthe 5th Supplement(1991)to the 1978 edition, DeutscherApotheker-Verlag Stuttgart, pp. 27-82) M^ftll EU HiC^^H 的國(guó)家順勢(shì)療法藥典。對(duì)于液體劑型的順勢(shì)療法技術(shù)通常包括將起始物質(zhì)(也稱為'濃儲(chǔ)物'，或'母酊劑')暴露于用醇或水稀釋的重復(fù)的循環(huán)，然后通過至少10次強(qiáng)撞擊彈性體來劇烈搖動(dòng)，此處理也稱為"勢(shì)能化"，“稀釋增效法"，或"振蕩"。通過所述方法產(chǎn)生的溶液稱為'順勢(shì)療法稀釋液'，或'勢(shì)液'。順勢(shì)療法中規(guī)則使用3種勢(shì)液規(guī)格 厘米或"C規(guī)格"，其中物質(zhì)在各階段稀釋100倍；十分或"X規(guī)格"，其中物質(zhì)在各階段稀釋10倍；及"LM規(guī)格"，其中物質(zhì)在各階段稀釋50000倍。稀釋可在對(duì)于各新勢(shì)液的新容器中發(fā)生(傳統(tǒng)方法)，或除去99%的之前稀釋液后在相同玻璃容器中發(fā)生(所謂的 Korsakovian稀釋液，其有時(shí)縮寫為K或"K規(guī)格")。通常將C12以下的順勢(shì)療法勢(shì)液稱為1低度稀釋液'，C12及C30的順勢(shì)療法勢(shì)液稱為'中度稀釋液'，C30以上的順勢(shì)療法勢(shì)液稱為'高度稀釋液'。最佳實(shí)施方式本發(fā)明的最佳實(shí)施方式示于以下實(shí)施例。實(shí)施例1藥物組合物的制備制備方法包括以下基本步驟，偶有的試劑滅活及除去步驟未提及(1)肽合成。(2)與 KLH 偶聯(lián)。(3)用肽-KLH綴合物免疫兔。(4)免疫血清的收集及初步純化(硫酸銨沉淀)。(5)蛋白A純化，以移除非-IgG蛋白。(6)在KLH-BrCN-瓊脂糖上純化，以移除抗-KLH抗體?；蛘撸瞬襟E可進(jìn)行在靶肽上親和純化，以及額外的離子交換層析。(7)片段化(通過使用內(nèi)肽酶，及隨后除去Fc部分以產(chǎn)生Fab，F(xiàn)(ab)2片段，或通過重鏈間二硫鍵的還原及S-烷化反應(yīng)產(chǎn)生抗體半)。步驟7是可選的。(8)可能地，通過記載于既有的順勢(shì)療法藥典(德國(guó)，法國(guó)，歐洲，英國(guó)，美國(guó)，印度)之一的方法之一稀釋及勢(shì)能化。(9)根據(jù)順勢(shì)療法藥典制備液體或固體劑型。如此制備的藥物組合物含有效治療量或量的一或多種針對(duì)一或多種選自下列的肽的全多克隆兔抗體及抗體Fab片段3 型 Toll-樣受體序列(NH2)FYWNVSVHRVLGi7KE (C00H) [FYff h, SEQ ID NO :1]，3 型 Toll-樣受體序列(NH2)EYAAYIIHMKD (C00H) [EYAh, SEQ ID NO 2]，干擾素γ 受體 β 鏈序歹Ij (ΝΗ2) LlKYffFHTPPSIPLQIEEYL (C00H) [LIK h，SEQ ID NO 3]，干擾素γ 受體 α 鏈序歹Ij (ΝΗ2) SIILPKSLISVV (C00H) [SiIh, SEQ ID Ν0:4]，及(5)它們的混合物。實(shí)施例2病毒感染動(dòng)物模型中藥物組合物的功效在鼠流感宿主抗性模型中評(píng)價(jià)基于特異性抗體及抗體片段的本發(fā)明的藥物組合物的功效，及與非本發(fā)明的組合物的功效比較。
根據(jù)順勢(shì)療法技術(shù)用水稀釋后測(cè)試以下起始物質(zhì)(將相應(yīng)人靶肽的小鼠對(duì)應(yīng)物用于產(chǎn)生抗體)；水溶液制劑中活性劑的濃度為0. 以下針對(duì)下列肽的全多克隆兔抗體及抗體Fab片段(1)自 Toll 樣受體 3 的 FYWNVSVHRILGFKE (‘ FYff')(發(fā)明)(FYW m, SEQ ID NO 5)；(2)自 iToll 樣受體 3 的 EYTAYIIHAHKD(' EYT')(發(fā)明)(EYTm，SEQ ID NO 6)；(3)自干擾素 Y 受體 2 的 KYWFQAPPMPEQIEEYL(‘ KYff')(發(fā)明)(KYW m, SEQ ID NO 7)；(4)自干擾素 Y 受體 1 的 SIMLPKSLLSVVC SIM')(發(fā)明)(SIM m, SEQ ID NO 8)；(5)自干擾素 γ 受體 ι WmasgydkphmlvdC mas')(非本發(fā)明的)(mas，seq id NO 9)；(6) g Toll 樣受體 3 的 LEERDFEAGVLG(‘ LEE‘)(非本發(fā)明的)(LEE, SEQ ID NO 10)；(7)針對(duì)小鼠干擾素Y (IFNg)的全多克隆兔抗體(非本發(fā)明的)；(8)兔免疫前血清(陰性對(duì)照)。將試劑在飲用水中稀釋1 2，及在病毒攻擊Balb/c雌性小鼠(8周齡，14 20g) 之前5天及之后10天自由供給。陽性對(duì)照組小鼠接受2個(gè)鼻內(nèi)劑量的重組小鼠干擾素 α (正妝)，4\10勺/小鼠，2\(感染之前對(duì)小時(shí)及4小時(shí))。在第0天，動(dòng)物用異氟烷麻醉，及用小鼠-適應(yīng)的流感病毒，作為濃儲(chǔ)物病毒的10_2 稀釋液(大致4\104噬斑形成單位)，以50!11(^(5(^1)的體積經(jīng)鼻內(nèi)感染。病毒攻擊前一天起始，每天對(duì)各小鼠評(píng)價(jià)體重及臨床狀態(tài)。臨床觀察分值是0 (健康)，1 (稍微皺皮)，2(皺皮)，3(皺皮/駝背的姿勢(shì))，4(垂死/死亡)。通過以下端點(diǎn)判斷所測(cè)試劑的功效(1)臨床感染的持續(xù)時(shí)間(有臨床觀察分值 >0的天數(shù))；( 臨床感染的總體嚴(yán)重性(連續(xù)的臨床分值之和)。通過ANOVA評(píng)價(jià)全部所測(cè)組之間的差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，及Turkey測(cè)試用于評(píng)估成對(duì)的組內(nèi)差異。對(duì)于兩個(gè)端點(diǎn)的ANOVA顯示，組間結(jié)果差異統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。詳細(xì)的結(jié)果列于以下表1。表 權(quán)利要求
1.用于治療或預(yù)防人及其他脊椎動(dòng)物中病毒或不同病毒的混合物所致的疾病的藥物組合物，所述組合物含有效治療量或制劑的特異于選自以下序列的至少一種肽序列的全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段(1)3 型 jToll-樣受體序列(ME) FYffNVSVHRVLGFKE (COOH)，(2)3 型 jToll-樣受體序列(NH2) EYAAYIIHAYKD (COOH)，(3)干擾素Y 受體 β 鏈序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL (COOH)，(4)干擾素γ 受體 α 鏈序列(ΝΗ2) siIlpkslisvv(Cooh)0
2.權(quán)利要求1中定義的藥物組合物，所述組合物含有效治療量或制劑的特異于選自以下序列的至少2種肽序列的全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段(1)3 型 jToll-樣受體序列(ME) FYffNVSVHRVLGFKE (COOH)，(2)3型 jToll-樣受體序列(ΝΗ2)EYAAYIIHMKD (COOH)，(3)干擾素Y 受體 β 鏈序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL (COOH)，(4)干擾素γ 受體 α 鏈序列(ΝΗ2) siIlpkslisvv(Cooh)0
3.權(quán)利要求1中定義的藥物組合物，其用作旨在腸內(nèi)，腸胃外或局部施用的藥物，所述腸內(nèi)施用包括口服施用，所述腸胃外施用包括舌下施用。
4.權(quán)利要求1中定義的藥物組合物，其用于已知的或新出現(xiàn)的病毒，尤其是選自下列的病毒所致的疾病腺病毒；桿狀病毒(尤其是，諾如病毒)；冠狀病毒；柯薩奇病毒；愛潑斯坦-巴爾病毒；黃病毒(尤其是，西尼羅病毒，登革熱病毒，蜱傳腦炎病毒，黃熱病毒)； 甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；1、2和8型單純皰疹病毒；巨細(xì)胞病毒；人免疫缺陷病毒(HIV)；流感病毒；麻疹病毒；人變性肺病毒；腮腺炎病毒；人乳頭瘤病毒；副流感病毒；脊髓灰質(zhì)炎病毒；狂犬病病毒；呼吸道合胞病毒；鼻病毒；輪狀病毒；風(fēng)疹病毒；水痘-帶狀皰疹病毒。
5.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述制劑使用包括多個(gè)循環(huán)的連續(xù)稀釋及垂直搖動(dòng)的技術(shù)-尤其是通過描述于順勢(shì)療法藥典的制備方法制備。
6.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述被抗體或抗體片段所特異的肽序列與3型 Toll-樣受體或干擾素Y受體的給定序列之至少一種具有至少70%同一性或85%相似性。
7.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述抗體片段是Fab，F(xiàn)(ab) 2片段，或含一條重免疫球蛋白鏈及一條輕免疫球蛋白鏈的抗體單體。
8.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述抗體片段通過用內(nèi)肽酶處理全抗體得到，所述內(nèi)肽酶例如木瓜蛋白酶，胃蛋白酶，或無花果蛋白酶。
9.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述抗體或抗體片段通過遺傳加工方法得到。
10.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述‘制劑’指設(shè)計(jì)用于口服施用的順勢(shì)療法稀釋液(勢(shì)液)或幾種順勢(shì)療法稀釋液(勢(shì)液)的混合物。
11.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中同時(shí)使用特異于提及的肽中的2或3種的全抗體或所述抗體的片段。
12.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述被靶向的肽序列在試劑設(shè)計(jì)用于不同于人的脊椎動(dòng)物的情況中就物種特異性被修正。
13.特異于選自以下序列的至少一種肽序列的一或多種全抗體或所述抗體的抗原-結(jié)合片段用于制備治療或預(yù)防人及其他脊椎動(dòng)物中病毒或不同病毒的混合物所致的疾病的藥物組合物的用途 3 型 Toll-樣受體序列(NH2)FYWNVSVHRVLGi7KE (COOH)， 3 型 Toll-樣受體序列(NH2)EYAAYIIHMKD (COOH)， 干擾素 Y 受體 β 鏈序列(NH2)LIKYWFHTPPSIPLQIEEYUC00H)， 干擾素 Y 受體 α 鏈序列(ΝΗ2) SIILPKSLISVV (COOH)。
14.制備權(quán)利要求1的藥物組合物的方法，至少包括以下步驟(1)肽合成，(2)與KLH偶聯(lián)，(3)用肽-KLH綴合物免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，(4)免疫血清的收集及初步純化，(5)在蛋白A或G或免疫球蛋白結(jié)合配體上親和純化，(6)在KLH-BrCN-瓊脂糖上純化，或在所述肽上親和純化，及任選的離子交換純化，(7)重復(fù)的連續(xù)稀釋，及有利地根據(jù)描述于順勢(shì)療法藥典的技術(shù)勢(shì)能化， (9)制備液體或固體劑型。
全文摘要
用于預(yù)防或治療病毒感染的藥物組合物，其包括特異于以下肽序列之至少一種的全抗體或所述抗體的片段的制劑3型Toll-樣受體的肽序列FYWNVSVHRVLGFKE，EYAAYIIHAYKD，或干擾素γ受體β鏈的肽序列LIKYWFHTPPSIPLQIEEYL，或干擾素γ受體α鏈的肽序列SIILPKSLISVV。
文檔編號(hào)C07K16/28GK102216330SQ200980127882
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2009年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月27日
發(fā)明者A·馬特秋切夫-波特拉德, M·蒂里 申請(qǐng)人:塞拉諾私人有限公司