專利名稱：對(duì)抗sonic hedgehog同系物的抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)抗sonic hedgehog同系物(Shh)的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于Sih的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與Hedgehog蛋白質(zhì)的活性和/或過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病，并且可用作診斷工具。
背景技術(shù)：
在果蠅中，Hedgehog被鑒定為胚胎圖式形成的調(diào)節(jié)劑。在哺乳動(dòng)物中，hedgehog 家族有三個(gè)成員，分別是Sonic hedgehog(Shh), Indian hedgehog(Ihh)以及 Desert hedgeh0g(Dhh)，它們通過影響細(xì)胞生長和分化而指定組織的圖式形成并調(diào)節(jié)器官的動(dòng)態(tài)平衡。Hedgehog蛋白質(zhì)為12次跨膜跨越受體latched(人類中為Ptch，小鼠中為Ptc)的配基，通常，其抑制了 GCPR類跨膜蛋白質(zhì)Smoothened(SMO)的功能。當(dāng)SMO與Shh結(jié)合時(shí)， 減輕了 Patched對(duì)SMO的抑制，從而使SMO通過轉(zhuǎn)錄因子的Gli家族的成員來進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)。轉(zhuǎn)錄的活化使得諸如Glil和Ptch之類的多個(gè)途徑的成分得以合成。Hedgehog/SMO信號(hào)傳導(dǎo)途徑的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。在基礎(chǔ)細(xì)胞癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤以及橫紋肌肉瘤中描述了使Ptch失活或使Smo發(fā)生構(gòu)成性活化的突變。據(jù)推測，這些突變導(dǎo)致所述的途徑發(fā)生了構(gòu)成性的活化，并驅(qū)使腫瘤的發(fā)生。此外，在多種類型的腫瘤 (例如前列腺癌、胰腺癌、小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、食管癌、胃部的癌癥、黑素瘤以及多發(fā)性骨髓瘤)中，描述了 Shh的過表達(dá)。在多數(shù)情況下，隨著Shh的過表達(dá)，觀察到了 Glil和Ptch的正相調(diào)節(jié)，從而支持了這樣的結(jié)論，即，在腫瘤細(xì)胞中構(gòu)成性途徑的活化可能在某種程度上以配基依賴性的方式促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。這種模式得到了以下觀察結(jié)果的支持，即，在體內(nèi)， 在LNCaP前列腺癌細(xì)胞中Sih的異常過表達(dá)增強(qiáng)了腫瘤的生長(Fan 2004. Endocrinology 145 :3961)。已經(jīng)提出了多種模式來解釋Shh的過表達(dá)是怎樣導(dǎo)致癌癥的發(fā)展的。在第一種模式中，腫瘤細(xì)胞異常的過表達(dá)aih，其在腫瘤細(xì)胞的表面上與Ptch結(jié)合時(shí)產(chǎn)生了自分泌的信號(hào)，并誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。在第二種模式中，腫瘤細(xì)胞所分泌的Shh活化了基質(zhì)細(xì)胞中的SMO 信號(hào)傳導(dǎo)，其轉(zhuǎn)而導(dǎo)致會(huì)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞生長的因子的產(chǎn)生。已經(jīng)顯示出腫瘤細(xì)胞表達(dá)Sih 會(huì)誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞中Glil的表達(dá)，這支持了上述模式(Fan et al. 2004. Endocrinology 145 3961 ；Yauch et al. 2008. Nature =455,406-410)。此外，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)的共移植(coimplantation)促進(jìn)了腫瘤的形成以及表達(dá)Shh的非最佳數(shù)量的HT19腫瘤細(xì)胞的生長(Yauch et al. 2008. Nature :455,406-410)。由于靶向刪除MEF中的SMO會(huì)導(dǎo)致基本上更小的腫瘤，所以MEF的增強(qiáng)腫瘤生長的能力需要完整的Sih/SMO信號(hào)傳導(dǎo)。最后，Shh 涉及多種組織中干細(xì)胞的增殖和分化(Taipale and Beachy. 2001. Nature 411:349-354)。 如此，已經(jīng)提出Shh可以促進(jìn)腫瘤發(fā)生，或通過驅(qū)使癌癥干細(xì)胞自我更新而在經(jīng)化療和/或放療之后再度惡化。在使用環(huán)巴胺(由corn Iilly得到的所述途徑的天然存在的拮抗劑，其通過與 SMO定向結(jié)合起作用)的臨床前模式中，已經(jīng)證明了腫瘤細(xì)胞為了生長和存活而對(duì)Sih/Smo信號(hào)傳導(dǎo)的依賴。已經(jīng)報(bào)道，環(huán)巴胺會(huì)在體外和體內(nèi)抑制多種腫瘤細(xì)胞系的生長，包括黑素瘤和前列腺癌、胰腺癌以及小細(xì)胞肺癌。環(huán)巴胺的抑制效果表現(xiàn)為特定性的，這是因?yàn)殡m然它抑制了 22RV-1前列腺癌的異種移植物的生長，但是它不會(huì)抑制穩(wěn)定過表達(dá)下游轉(zhuǎn)錄因子 Glil 的 22RV-1 腫瘤的生長(Karhadkar et al. 2004. Nature 431:707)。最近，非相關(guān)的小分子SMO拮抗劑(HhAntag)顯示出會(huì)抑制同種移植物成神經(jīng)管細(xì)胞腫瘤的生長，其中 SMO途徑通過Ptcl的突變以及過表達(dá)Shh的人源異種移植物腫瘤而被構(gòu)成性的活化(Romer et al.2004. Cancer Cell 6 :229 ；Yauch et al.2008. Nature :455,406-410)。已經(jīng)描述了被激發(fā)對(duì)抗大鼠Sih的N末端信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的抗體(其與人源Shh 會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng))(Ericson et al. 1996. Cell 87 :661-673)。這種抗體被稱為5E1，已經(jīng)用于證明特定性地封阻Shh途徑(其可以通過Glil報(bào)告基因來測定，與抑制得自食管、胃和胰腺的已經(jīng)確立的腫瘤細(xì)胞的增殖有關(guān))。5E1還降低了已經(jīng)確立的小細(xì)胞肺癌(SCLC) 細(xì)胞系和得自一代胰腺異種移植物的腫瘤細(xì)胞在體外的生長和發(fā)育能力(Watkins et al. Nature, 422 :313-317(2003) ；Berman et al. 2003. Nature 426 :846)。最后，5E1 已經(jīng)顯示出會(huì)在體內(nèi)抑制HT55和HT-四結(jié)腸腫瘤異種移植物的生長(Yauch et. 2008. Nature)。Sih/SMO拮抗劑作為單一的試劑除了抑制腫瘤細(xì)胞的生長和發(fā)育能力之外，還可以增強(qiáng)化療和放療的抗腫瘤活性(Chen et al. Cell Cycle, 6 :1826-1830 (2007)) Sims-Mourtada et al. (Clin Cancer Res. ,12 :6565-6572, (2006))報(bào)導(dǎo)了當(dāng) SEG-1 食管腺癌異種移植物在經(jīng)過放療治療之后再次生長時(shí)，Glil陽性細(xì)胞的數(shù)量急劇增加。Glil著色細(xì)胞在Ki67陽性細(xì)胞增多之前出現(xiàn)，表明Shh信號(hào)傳導(dǎo)可以促進(jìn)小種群的難治性細(xì)胞(例如公認(rèn)的癌癥干細(xì)胞)的擴(kuò)增，最終導(dǎo)致腫瘤的再生長。使用紫杉醇和環(huán)巴胺對(duì)SEG-I的異種移植物進(jìn)行結(jié)合治療與使用任一種單獨(dú)的試劑進(jìn)行的治療相比會(huì)得到較高的效力。上文引用的證據(jù)支持了這樣的基本原理，S卩，使用定向?qū)筍ih的中和性抗體來拮抗aih/sMo的信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)于多數(shù)的人類癌癥而言可以是有效的治療方法。因此，需要鑒定Shh信號(hào)傳導(dǎo)的新型抑制劑。發(fā)明概述本發(fā)明涉及特異性地與Shh結(jié)合并抑制Shh的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及特異性地與Shh結(jié)合并抑制Shh與其受體latched (例如Patched-I和/ 或f^tChed2)相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體對(duì)Shh具有特異性。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及特異性地與Shh結(jié)合并抑制a!h與PatChed-I和/或 Patched-2的結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，與缺少靶向結(jié)合劑的條件下所發(fā)生的結(jié)合情況相比，所述的靶向結(jié)合劑抑制了至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25 %、至少30 %、至少35 %、至少40 %、至少45 %、至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少 65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %的Shh與Patched-I 的結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于5納摩爾(nM)的結(jié)合親和性(Kd)與Shh結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于4nM、3nM、2nM或InM的 Kd進(jìn)行結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于950兆摩爾(pM)的Kd 與Shh結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于900pM的Kd與Shh結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于800pM、700pM或600pM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于500pM的Kd與Shh結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于400pM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于300pM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于 200pM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于IOOpM的Kd進(jìn)行結(jié)合。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于50、40、30、20或IOpM 的親和性Kd與人源Shh相結(jié)合。在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于IpM的親和性Kd與人源Shh相結(jié)合。可以采用本文所述的方法或本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員已知的方法來估測 Kd (例如 BIAcore 測試，ELISA，F(xiàn)ACS) (Biacore International AB, Uppsala, Sweden)。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體的結(jié)合性質(zhì)還可以通過參照解離速率或結(jié)合速率 (分別為k。ff* k。n)來測定。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有至少IO4M-1 S—1、至少 5X IO4M"1 s \ 至少 IO5M 1S 人至少2X IO5IT1 s人至少5X IO5IT1 s \至少IO6M 1S \至少5X IO6MW至少IOW1、至少5X IO7MW或者至少ΙΟΙ、—1的k。n速率(抗體(Ab) +抗原 (Ag) k。n —Ab-Ag)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有低于切川 人低于 KT1S入低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχ ο—、—1、低于 IOW低于 δχΙΟΥ1、低于 ΙΟΛΓ1、 低于δχΙΟ、-1、低于ΙΟ、—1、低于δχΙΟΥ1、低于ΙΟ、—1、低于δχΙΟ、—1、低于ΙΟ、—1、低于 δΚ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、或者低于 IO-10S-1 的 k。ff 速率((Ab-Ag) koff—抗體(Ab) +抗原(Ag))。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑特異性地與人源Shh相結(jié)合。在一些實(shí)例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對(duì)得自其他物種的其他Shh蛋白質(zhì)具有交叉反應(yīng)性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對(duì)小鼠Shh具有交叉反應(yīng)性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對(duì)獼猴Shh具有交叉反應(yīng)性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對(duì)獼猴Shh和小鼠Shh 具有交叉反應(yīng)性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對(duì)得自其他物種的Shh蛋白質(zhì)具有幾乎相等的親和性。在一個(gè)特定的實(shí)例中，本發(fā)明的人源Shh靶向結(jié)合劑對(duì)小鼠Shh具有幾乎相等的親和性。對(duì)于相等水平的親和性，我們是指當(dāng)對(duì)于人源Shh的親和性為1時(shí)，所述抗體與獼猴Sih的親和性為0. 2-5或0. 2-2。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的一些靶向結(jié)合劑可以與相關(guān)的Hedgehog成員相結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以與人源化(1化11 hedgehog同系物(IHH) 相結(jié)合。例如，6D7可以與人源Indian hedgehog和小鼠hdian hedgehog相結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的一些靶向結(jié)合劑不能與相關(guān)的Hedgehog成員相結(jié)合。例如，3H8和IGl不能表現(xiàn)為與IHH相結(jié)合。此外，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑均不能與DHH 相結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑表現(xiàn)為使用Shh誘導(dǎo)的細(xì)胞發(fā)生造骨細(xì)胞分化。在一個(gè)實(shí)例中，可以證明所述靶向結(jié)合劑所具有的活性為IC5tl濃度(取得50% 抑制程度的濃度)低于10 μ M。在另一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以具有低于50、40、 30、20、10、9、8、7、6、5、4、3 或 2ηΜ 的 IC5tl 濃度。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑抑制了 Glil和I^tched-ImRNA的誘導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)例中，可以證明所述靶向結(jié)合劑所具有的活性為IC5tl濃度(取得50%抑制程度的濃度)低于10 μ M。在另一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以具有低于50、40、30、20、 10、5、4 或 2ηΜ 的 IC5tl 濃度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以抑制Glil和2、以及I^tched-I和 2。例如，與對(duì)照(非靶向結(jié)合劑)相比，本發(fā)明的抗體可以表現(xiàn)為對(duì)Glil和I^tched-IRNA 的抑制高于 50%，例如 50%、60%、70%、80%、90%或 95%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑與本文所述的任何一種全人源單克隆抗體競爭結(jié)合I^atched-I。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑具有優(yōu)異有效的、藥代動(dòng)力學(xué)和/或藥效性質(zhì)。在一個(gè)實(shí)例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑表現(xiàn)出優(yōu)良的安全性質(zhì)，例如表現(xiàn)為不具有心血管毒性效果。在一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑能夠治療或抑制與異常Shh活性有關(guān)的狀況。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖。所述的靶向結(jié)合劑可以與其他抗癌療法(例如化療方法)結(jié)合使用，或者單獨(dú)使用來抑制腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。本發(fā)明的抗體可以用于治療由以下情況衍生的神經(jīng)病學(xué)狀況(抑制和/或減輕由以下情況衍生的神經(jīng)病學(xué)狀況的嚴(yán)重程度)(i)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的急性、亞急性或慢性損傷 (包括外傷、化學(xué)損傷、血管損傷和缺陷(例如由中風(fēng)導(dǎo)致的缺血))以及感染/發(fā)炎和腫瘤誘導(dǎo)的損傷；(ii)神經(jīng)系統(tǒng)的老化，包括Alzheimer疾??；(iii)神經(jīng)系統(tǒng)的慢性神經(jīng)組織退行性疾病，包括Parkinson疾病、Huntington舞蹈癥、側(cè)索硬化等，以及脊髓小腦的退化； 以及(iv)神經(jīng)系統(tǒng)或影響神經(jīng)系統(tǒng)的慢性免疫學(xué)疾病，包括多發(fā)性硬化癥。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl、IgG2、IgG3 或IgG4同種型的全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為 IgG2同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgG2同種型具有降低的引發(fā)效應(yīng)器功能的潛力，這可以使得毒性降低。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgGl同種型具有升高的引發(fā)ADCC的潛力，這可以使得效力得到改善。與其他同種型(例如IgG4)相比，IgGl同種型具有改善的穩(wěn)定性，這可以使得生物利用率得到改善，或者使制造的方便程度得到改善或者得到更長的半衰期。在一個(gè)實(shí)施方案中，IgGl同種型的全人源單克隆抗體為z、za 或f同種異型。另一個(gè)實(shí)施方案為特異性地與Shh結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表9所示的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的序列。本發(fā)明的實(shí)施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含如表9所示，得自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的 ⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者。另一個(gè)實(shí)施方案為特異性地與Shh結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表9所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的兩個(gè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表 9所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表9所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的一者。 本發(fā)明的實(shí)施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表9所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2或CDR3序列中的任何一者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表9所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR序列中的兩個(gè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表 9所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以具有這樣的序列，該序列包含表9所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的CDR1、CDR2和 ⑶R3序列以及表9所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在一些實(shí)施方案中， 所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在某些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在某些其他的實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包含這樣的抗體，該抗體與Shh發(fā)生免疫特異性結(jié)合并包含(a) SEQ ID NO :50 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 50 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO :50 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 50 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 50 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 50 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO :54 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 54 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 54的VL⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO :54 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 54 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 54的VIXDR2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f) SEQ ID NO 54 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 54 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 54的VIXDR3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包含這樣的抗體，該抗體與Shh發(fā)生免疫特異性結(jié)合并包含(a) SEQ ID NO :14 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 14 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO :14 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 14 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 14 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 14 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO :16 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 16 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 16的VIXDRl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO :16 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 16 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 16的VIXDR2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f) SEQ ID NO 16 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 16 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 16的VL⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包含這樣的抗體，該抗體與Shh發(fā)生免疫特異性結(jié)合并包含(a) SEQ ID NO :22 的 VH CDRl，其具有與 SEQ ID NO 22 的 VH CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQ ID NO :22 的 VH CDR2，其具有與 SEQ ID NO 22 的 VH CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQ ID NO 22 的 VH CDR3，其具有與 SEQ ID NO 22 的 VH CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQ ID NO :24 的 VL CDRl，其具有與 SEQ ID NO 24 的 VL CDRl 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 24的VL⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQ ID NO :24 的 VL CDR2，其具有與 SEQ ID NO 24 的 VL CDR2 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 24的VL⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID NO :24 的 VL CDR3，其具有與 SEQ ID NO 24 的 VL CDR3 相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 24的VIXDR3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab6D7VH0P、MablGlVH、Mab3H8VH和Mab6D7VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變重鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American type culture collection(ATCC))中，編號(hào)分別為 2008 年 9 月 17 日的 PTA-9504、PTA-9506、PTA-9518或PTA-9506。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab6D7VL0P、MablGlVL、Mab3H8VL和Mab6D7VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變輕鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)分別為2008年9月17日的PTA-9503、 PTA-9509、PTA-9515 或 PTA-9504。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9504。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中， 編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9504;其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為 Mab6D7VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9503。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9504。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9503。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9504 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab6D7VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體 CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9503。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的 PTA-9507。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為 2008年9月17日的PTA-9507 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVL 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9509。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9507。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9509。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9507 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為MablGlVL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9509。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的 PTA-9518。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9518 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VL 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9515。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9518。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9515。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9518 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab3H8VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號(hào)為2008年9月17日的PTA-9515。應(yīng)該提示的是，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地完成CDR的測定。例如參見 Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition, NIH Publication 91-3242，Bethesda MD(1991)，vols. 1-3。Kabat 提供了得自多個(gè)物種的同種型抗體的免疫球蛋白鏈的多個(gè)序列比對(duì)。根據(jù)單一的編號(hào)系統(tǒng)(Kabat編號(hào)系統(tǒng))對(duì)比對(duì)的序列進(jìn)行編號(hào)。Kabat序列從1991的出版物開始更新，并且可以用作電子序列數(shù)據(jù)庫(最近的可下載的版本1997)?？梢愿鶕?jù)Kabat通過與Kabat參照序列進(jìn)行比對(duì)來對(duì)任何免疫球蛋白序列進(jìn)行編碼。因此，Kabat編碼系統(tǒng)提供了用于編碼免疫球蛋白鏈的統(tǒng)一的系統(tǒng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有表9所示重鏈序列中的任何一者的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有抗體6D7、3H8、 1G1、6D70P2、6D70P或3H80P的重鏈序列中的任何一者的序列。輕鏈混雜(promiscuity)在本領(lǐng)域中是良好建立的，因此包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體可以進(jìn)一步包含表9中所示的；或者抗體6D7、3H8或1G1，6D70P、6D70P2、3H80P 或1G10P的；或者本文中所公開的另一種抗體的輕鏈序列中的任何一者，其中所述的序列包含抗體6D7、3H8、1G1、6D70P、6D70P2或3H80P的或者本文中所公開的另一種抗體的重鏈序列中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有表9所示的輕鏈序列中的任何一者的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有抗體6D7、3H8 或IGl ；6D70P、6D70P2、3H80P或1G10P輕鏈序列中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為選自以下的單克隆抗體1A12、1G12、 1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑包含全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、 1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P 中的一者或多者。在某些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體6D7。在某些其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體3H8。在某些其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體1G1。在某些其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體6D70P。在某些其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體3H80P。在某些其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體
IGlOPo 在一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表9 中所示序列中的任何一者的重鏈CDRl、CDR2和CDR3。在一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表9中所示序列中的任何一者的輕鏈CDR1、CDR2 和CDR3。在一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7 或 6D70P2 的 CDR 中的任何一者的重鏈CDR1、CDR2和CDR3。在一個(gè)實(shí)施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7 或 6D70P2 的 CDR 中的任何一者的輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D7、3H8、1G1、6D7或6D7中的任何一者的⑶R1、⑶R2 或CDR3中的任何一者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D7、3H8、IGl或6D7中的任何一者的⑶R1、 CDR2或CDR3中的任何一者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D7、3H8、1G1或6D70P的⑶R1、⑶R2 或CDR3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D7、3H8、1G1或6D70P的CDRl、CDR2或CDR3。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D7，3H8，1G1或6D7的⑶Rl、⑶R2或⑶R3 ；以及表9中所示的全人源單克隆抗體6D7，3H8，IGl或6D7的⑶R1、⑶R2或⑶R3。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表9 中所示的全人源單克隆抗體6D7的可變重鏈和/或可變輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體3H8的可變重鏈和/或可變輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體IGl的可變重鏈和/或可變輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表9中所示的全人源單克隆抗體6D70P2或6D70P的可變重鏈和/或可變輕鏈的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列具有跨越表9中所示序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和⑶R (具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至CDR3)的臨近序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有跨越表9中所示的單克隆抗體6D7、3H8、1G1序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和CDR(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)的臨近序列。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :14序列的重鏈多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :16序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體?！獋€(gè)實(shí)施方案提供靶向結(jié)合劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分，其中所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :22序列的重鏈多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. 序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :46序列的重鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :48序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :50序列的重鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :52序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :50序列的重鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :56序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :22序列的重鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :56序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :58序列的重鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :60序列的輕鏈多肽。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，在所公開的CDR、或者重鏈或輕鏈序列中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含多達(dá)20、16、10、9或更少(例如1、2、3、4或5個(gè))的氨基酸添加、取代、刪除和/ 或插入。這種修飾可以潛在地在CDR范圍內(nèi)的任何殘基處形成。在一些實(shí)施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含本文所公開的CDR的變體或衍生物、跨越構(gòu)架區(qū)和⑶R的臨近序列(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)、本文所公開的輕鏈或重鏈序列、或者本文所公開的抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有在表9中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3的任何一者中具有多達(dá)20、16、 10、9或更少(例如1、2、3、4、5或6個(gè))的氨基酸添加、取代、刪除和/或插入的序列；跨越表9中所示的構(gòu)架區(qū)和CDR(具體而言為FRl至FR4、或者CDRl至CDR3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有表9中所示的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者的至少大約60、70、80、85、90、95、98或大約99 %氨基酸序列一致性的序列；跨越表9中所示的構(gòu)架區(qū)和⑶R(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。兩個(gè)氨基酸序列的百分率一致性可以通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法來測定，包括但不限于成對(duì)的蛋白質(zhì)比對(duì)。在一個(gè)實(shí)施方案中， 變體包含在CDR序列中或者在本文所公開的輕鏈或重鏈多肽中的變化，所述的變化是天然存在的，或者采用重組DNA技術(shù)或誘變技術(shù)對(duì)天然序列進(jìn)行體外基因工程處理而誘導(dǎo)得到的。天然存在的變體包括在針對(duì)外源抗原產(chǎn)生抗體的過程中相對(duì)于種系核苷酸序列而在體內(nèi)產(chǎn)生的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的衍生物可以為異種抗體，其為其中兩個(gè)或多個(gè)抗體被連接到一起而形成的抗體。衍生物包括經(jīng)過化學(xué)修飾的抗體。實(shí)例包括一種或多種聚合物形成的共價(jià)連接物，例如水溶性的聚合物，N-連接或0-連接的碳水化合物，糖，磷酸酯和/或其他此類分子。所述的衍生物按照不同于天然存在的或起始抗體的方式進(jìn)行修飾 (按照所附分子的種類或位置)。衍生物還包含刪除天然存在于所述抗體上的一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為雙特異性抗體。雙特異性抗體為對(duì)至少兩個(gè)不同的抗原決定部位具有結(jié)合特異性的抗體。用于制備雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。(例如參見，Millstein et al, Nature, 305 :537-539(1983) ；Traunecker et al, EMBO J, 10 :3655-3659(1991) ；Suresh et al, Methods in Enzymology,121 :210(1986)； Kostelny et al, J. Immunol,148 (5) :1547-1553(1992) ；Hollinger et al, Proc.Natl Acad. Sci. USA, 90 :6444-6448 (1993) ；Gruber et al, J. Immunol, 152 :5368(1994)；美國專利 No. 4，474，893 ；4，714，681 ；4，925，648 ；5，573，920 ；5，601，81 ；95，731，168 ；4，676，980 ； 和 4,676,980，WO 94/04690 ；WO 91/00360；WO 92/200373 ；WO 93/17715 ；WO 92/08802 ；和 EP 03089.)在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有SEQ ID N0. 14 的序列。在某些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. :14包含表12的各行中所示的種系和非種系殘基的組合中的任何一者。在一些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. :14包含表12中所示的種系殘基的任何一者、任何二者、或三者或者所有三者。在某些實(shí)施方案中，SEQ ID NO. :14包含表12 的各行所示的種系和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任何一者。在其他實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體衍生自種系序列，其中一個(gè)或多個(gè)殘基已經(jīng)突變，從而在所述位置處產(chǎn)生相應(yīng)的種系殘基。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體競爭性地結(jié)合Sih的靶向結(jié)合劑或抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，存在有與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體競爭性地結(jié)合Sih的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體的任何一者競爭性地結(jié)合aih?！案偁帯笔侵杆龅陌邢蚪Y(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P或1G10P中的任何一者競爭性地結(jié)合Sih，即，競爭是非單向性的。本發(fā)明的實(shí)施方案包含與全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、 1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P 中的任何一者交叉競爭以結(jié)合 Shh 的靶向結(jié)合劑或抗體?！敖徊娓偁帯笔侵概c全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、 1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P 中的任何一者競爭性地結(jié)合Sih的靶向結(jié)合劑或抗體，反之，即，競爭是指雙向性的。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為競爭性地結(jié)合Shh的靶向結(jié)合劑或抗體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，存在有與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體交叉競爭性地結(jié)合Sih的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體相同的Shh上的抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的實(shí)施方案還包括與全人源單克隆抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P中的任何一者的Shh上相同的抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的經(jīng)分離的核酸分子、具有編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體的經(jīng)分離的核酸分子的載體、 或者使用這種核酸分子的任何一者的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的實(shí)施方案包括這樣的核酸分子，該核酸分子編碼特異性地與Shh相結(jié)合并抑制Shh與PatChed-I相結(jié)合的全人源經(jīng)分離的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明還涵蓋了在如本文所定義的嚴(yán)格或嚴(yán)格程度較低的雜交條件下與編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的多核苷酸相雜交的多核苷酸。本發(fā)明的實(shí)施方案還包括具有編碼所述結(jié)合劑的核酸分子的載體。其他實(shí)施方案包括具有所述載體(包含所述的核酸分子)的宿主細(xì)胞。如本領(lǐng)域已知的那樣，抗體可以有利地為(例如)多克隆、寡克隆、單克隆、嵌合的、人源的和/或全人源的抗體。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施方案不限于任何特定形式的抗體或者生成或制備方法。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。例如，所述的靶向結(jié)合劑可以為全長的抗體(例如具有完整的人源Fc區(qū)域)或者抗體結(jié)合片段(例如Fab、Fab，或F(ab，)2、FV或者dAb)。此外，所述的抗體可以為單一結(jié)構(gòu)域的抗體，例如與Shh結(jié)合的camel id或人源單一 VH或VL結(jié)構(gòu)域(例如dAb片段)。本文所述的本發(fā)明的實(shí)施方案還提供了用于制備所述這些抗體的細(xì)胞。細(xì)胞的實(shí)例包括雜交瘤細(xì)胞、重組創(chuàng)建的細(xì)胞(例如中國倉鼠卵細(xì)胞(CHO))、CHO細(xì)胞的變體(例如DG44)以及產(chǎn)生對(duì)抗Sih的抗體的NSO細(xì)胞。關(guān)于CHO細(xì)胞的變體的其他信息可以在 Andersen and Reilly (2004) Current Opinion in Biotechnology 15,456-462 中找至Ij,該文獻(xiàn)以引用方式全文并入本文。所述的抗體可以由分泌所述抗體的雜交瘤細(xì)胞、或者由重組的基因工程細(xì)胞(其經(jīng)編碼所述抗體的基因轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染)制得。此外，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為通過在核酸分子被表達(dá)從而制得所述抗體、然后回收所述抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的實(shí)施方案還包括可以編碼本發(fā)明的抗體或抗體片段的任何核酸分子(包括當(dāng)被轉(zhuǎn)染到用于抗體制備的宿主細(xì)胞中時(shí)被優(yōu)化用于提高抗體及其片段的核酸序列的產(chǎn)量)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括通過使用表達(dá)人源Sih的細(xì)胞免疫哺乳動(dòng)物、分離
17含有人源Shh的細(xì)胞膜、純化出人源Shh或其片段和/或一個(gè)或多個(gè)定向進(jìn)化同源序列或其片段來制備與Shh特異性結(jié)合并抑制Sih的生物學(xué)活性的抗體的方法。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了組合物，該組合物包含本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體或者其結(jié)合片段、以及可藥用的載體或稀釋劑。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括通過對(duì)動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有血管原增殖性疾病的動(dòng)物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療腫瘤、癌癥和/或細(xì)胞增殖紊亂的動(dòng)物，以及向這些動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括通過對(duì)動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有贅生性疾病的動(dòng)物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療贅生性疾病的動(dòng)物，以及向這些動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括通過對(duì)動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有惡性腫瘤的動(dòng)物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動(dòng)物，以及向這些動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合 Sih的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括通過對(duì)動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Sih 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有與Shh表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況的動(dòng)物的方法。在某些實(shí)施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療與Shh表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況的動(dòng)物，以及向這些動(dòng)物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合Shh的靶向結(jié)合劑。惡性腫瘤可以選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞 (肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌 (膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤(pediatric malignancy)以及扁平上皮癌?？芍委煹脑鲋承曰蜓茉膊“ㄙ樕约膊。绾谒亓?、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、晚期非小細(xì)胞肺癌、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、膽囊癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、腎細(xì)胞癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、 結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤、扁平上皮癌和白血病(包括慢性粒細(xì)胞白血病(CML)，包括Gleevec抗性CML)、淋巴瘤(包括Hodgkin和非Hodgkin淋巴瘤)、以及骨髓瘤(包括多發(fā)性骨髓瘤)。 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明適用于抑制患有單取決于或部分取決于Sih的腫瘤的患者中的 Shh。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動(dòng)物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療增殖或血管原相關(guān)性疾病的動(dòng)物。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有贅生性疾病的動(dòng)物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療贅生性疾病的動(dòng)物。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有非贅生性疾病的動(dòng)物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療非贅生性疾病的動(dòng)物。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有惡性腫瘤的動(dòng)物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動(dòng)物。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有 Shh表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動(dòng)物的藥劑中的用途。在某些實(shí)施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療Shh表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動(dòng)物。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動(dòng)物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有贅生性疾病的動(dòng)物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有惡性腫瘤的動(dòng)物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動(dòng)物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有Shh表達(dá)相關(guān)性疾病或狀況的動(dòng)物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案包括用作用于治療患有Shh誘導(dǎo)疾病的動(dòng)物的藥劑的、 本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療贅生性疾??；惡性腫瘤；神經(jīng)學(xué)疾??；眼?。宦匝装Y疾?。慌cShh表達(dá)有關(guān)的疾病或狀況；或者包括管理、減輕、抑制任何上述疾病或狀況。在一個(gè)實(shí)施方案中，贅生性疾病的治療包括腫瘤生長的抑制、腫瘤生長的延遲、腫瘤的衰退、腫瘤的收縮、在治療終止時(shí)腫瘤再次生長的時(shí)間的增長、腫瘤復(fù)發(fā)的時(shí)間的增長、疾病進(jìn)程的減慢。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的待治療的動(dòng)物為人。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑選自全人源單克隆抗體1A12、 1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 G10P。本發(fā)明的實(shí)施方案包括含有本文所述的靶向結(jié)合劑與治療劑的綴合物。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述的治療劑為毒素。在其他實(shí)施方案中，所述的治療劑為放射性同位素。在其他實(shí)施方案中，所述的治療劑為藥物組合物。在另一個(gè)方面中，提供了選擇性地殺死患者中的癌細(xì)胞的方法。所述的方法包括向患者給藥全人源抗體綴合物。該全人源抗體綴合物包括可以與Shh結(jié)合的抗體、以及試劑。所述的試劑為毒素、放射性同位素或者會(huì)殺死癌細(xì)胞的另一種物質(zhì)。因此，所述的抗體綴合物選擇性地殺死癌細(xì)胞。在一個(gè)方面中，提供了特異性地結(jié)合Sih的綴合全人源抗體。所述的抗體附著在試劑上，并且抗體與細(xì)胞相結(jié)合使得所述的試劑被傳遞給細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，上述綴合全人源抗體與Sih的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的抗體與綴合的毒素被表達(dá)Sih的細(xì)胞內(nèi)化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑為細(xì)胞毒性試劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑為(例如)皂草素、auristatin、假單胞菌外毒素、白樹毒素、蓖麻毒素、刺孢毒素、或者基于美登素的免疫綴合物等。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑為放射性同位素。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體可以單獨(dú)給藥，或者可以與其他的抗體、化療藥品或放療結(jié)合給藥。例如，封阻細(xì)胞增殖的Shh抗體的單克隆、寡克隆或多克隆混合物可以與表現(xiàn)出可抑制腫瘤細(xì)胞增殖的藥品結(jié)合給藥。此外，本發(fā)明的Shh靶向劑可以用于其他化療治療(例如包含抗-VEGF試劑的治療)失效的患者中。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括診斷疾病或狀況的方法，其中本文所述的抗體用于檢測患者或患者樣品中Sih的水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的患者樣品為血液、血清或尿液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，列出了檢測風(fēng)險(xiǎn)因子、診斷疾病以及疾病分段的方法，其中涉及使用抗Shh抗體檢測Sih的表達(dá)和/或過表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述的方法包括向患者給藥與細(xì)胞上的Shh選擇性地結(jié)合的全人源抗體綴合物。所述的抗體綴合物包含特異性地與Shh相結(jié)合的抗體以及標(biāo)記。所述的方法還包括觀察患者中所述標(biāo)記的存在情況。 標(biāo)記的量相對(duì)高表明所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)高，而標(biāo)記的量相對(duì)低表明所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)低。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的標(biāo)記為綠色熒光蛋白質(zhì)。本發(fā)明還提供了測定患者樣品中Shh水平的方法，包括將本文所述的抗體與得自患者的生物學(xué)樣品相接處，以及檢測所述樣品中所述抗體與Shh之間的結(jié)合水平。在更具體的實(shí)施方案中，所述的生物學(xué)樣品為血液、血漿或血清。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括通過將所述的血清或細(xì)胞與本文所述的抗體相接觸、然后檢測Sih的存在情況來診斷與細(xì)胞中Sih的表達(dá)有關(guān)的狀況的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的狀況可以為增殖相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括用于檢測哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞或體液中的Sih 以篩查Shh相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括本文所述的抗體以及用于表明所述抗體與Sih (如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個(gè)實(shí)施方案中，與Shh相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級(jí)抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級(jí)抗體的手段。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的檢測手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在一些實(shí)施方案中，可以對(duì)本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增強(qiáng)它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對(duì)所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增強(qiáng)它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性 (ADCC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對(duì)本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而增
20強(qiáng)它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及增強(qiáng)它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在一些實(shí)施方案中，可以對(duì)本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對(duì)所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性 (ADCC)的能力。在其他實(shí)施方案中，可以對(duì)本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進(jìn)行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及降低它們結(jié)合補(bǔ)體及參與補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期為至少大約4至7天。在某些實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約2至5天、3至6天、4至7天、5 至8天、6至9天、7至10天、8至11天、8至12天、9至13天、10至14天、11至15天、12 至16天、13至17天、14至18天、15至19天、或者16至20天。在其他實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約17 至21天、18至22天、19至23天、20至M天、21至25天、22至沈天、23至27天、M至28 天、25至四天、或者沈至30天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以為至多大約50天。在某些實(shí)施方案中，抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以通過本領(lǐng)域已知的方法延長。這種延長轉(zhuǎn)而可以降低所述抗體組合物的定量給藥的量和/或頻率。具有改善的體內(nèi)半衰期的抗體以及制備這些抗體的方法在美國專利No. 6，277，375、以及國際公開No. WO 98/23289和WO 97/4661中有所公開。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有容器的制造制品。所述的容器包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物，以及表明所述組合物可以用于治療細(xì)胞增殖相關(guān)性疾病(包括但不限于由Shh表達(dá)或過表達(dá)所表征的疾病)的包裝插入物或標(biāo)記。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了試劑盒，該試劑盒包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物、以及向需要治療的受試對(duì)象給藥所述組合物的說明書。本發(fā)明提供了包含變體Fc區(qū)域的蛋白質(zhì)的配制物。即，非天然存在的Fc區(qū)域，例如包含一個(gè)或多個(gè)非天然存在的氨基酸殘基的Fc區(qū)域。此外，本發(fā)明的變體Fc區(qū)域還涵蓋了包含氨基酸刪除、添加和/或修飾的Fc區(qū)域?？梢酝ㄟ^增加Fc區(qū)域?qū)cfoi的結(jié)合親和性來增長包含F(xiàn)c區(qū)域的蛋白質(zhì)的血清半衰期。在一個(gè)實(shí)施方案中，與同類分子相比，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)增長了血清半衰期。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330 和332 (按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU 索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處的至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235 和331 (按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸。 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235F和331S (按照Kabat列出的 EU索引編號(hào))非天然存在的氨基酸殘基。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235Y和331S (按照Kabat列出的EU索引編號(hào))非天然存在的氨基酸?？蛇x地， 所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU 索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸；以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的 EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處的至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330和332(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat 列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自 239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處的至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235和331(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256 (按照 Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處包含添加的非天然存在的氨基酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個(gè)選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的非天然存在的氨基酸； 以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號(hào))中的一個(gè)或多個(gè)位置處的至少一個(gè)非天然存在的氨基酸。用于生成非天然存在的Fc區(qū)域的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，氨基酸的取代和/或刪除可以通過突變方法生成，包括但不限于定點(diǎn)突變(Kunkel，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 :488-492(1985))、PCR 突變(Higuchi, in “ PCR Protocols :A Guide to Methods and Applications " , Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990))、盒式突變(Wells et al，Gene 46:315-323(1985))。優(yōu)選的是，定點(diǎn)突變是通過重疊延伸PCR 方法來進(jìn)行的(Higuchi, in" PCR Technology Principles and Applications for DNAAmplification" ,Stockton Press, New York，pp. 61—70 (1989))。重疊延伸 PCR(Higuchi， ibid.)技術(shù)還可以用于向靶向序列(起始DNA)中引入任何所需的突變。例如，在重疊延伸方法中PCR的第一個(gè)循環(huán)涉及使用外引物(引物1)和內(nèi)突變引物(引物3)、以及分開的第二外引物(引物4)和內(nèi)引物(引物2)來擴(kuò)增靶向序列，從而產(chǎn)生兩條PCR節(jié)段(節(jié)段A 和B)。內(nèi)突變引物(引物幻被設(shè)計(jì)成包含與靶向序列的錯(cuò)配，從而指定了所需的突變。在 PCR的第二個(gè)循環(huán)中，通過使用所述的兩個(gè)外引物(引物1和4)進(jìn)行PCR而擴(kuò)增得到第一個(gè) PCR循環(huán)的產(chǎn)物(節(jié)段A和B)。使用限定性酶對(duì)所得的全長PCR節(jié)段(節(jié)段C)進(jìn)行水解， 并將所得的限制性片段克隆到合適的載體中。作為突變的第一個(gè)步驟，將起始DNA(例如編碼Fc融合蛋白質(zhì)、抗體或者簡單的Fc區(qū)域)可操作地克隆到突變載體中。所述的引物被設(shè)計(jì)成反應(yīng)了所需的氨基酸取代。用于生成變體Fc區(qū)域的其他方法是本領(lǐng)域已知的(例如參見美國專利 No. 5，624，821 ；5，885，573 ；5，677，425 ；6，165，745 ；6，277，375 ；5，869，046 ； 6，121，022 ；5，624，821 ；5，648，260 ；6，528，624 ；6，194，551 ；6，737，056 ；6，821，505 ； 6，277，375 ；美國專利公開 No. 2004/0002587 以及 PCT 公開 W 94/29351 ；WO 99/58572 ；WO 00/42072 ；WO 02/060919 ；WO 04/029207 ；WO 04/099249 ；WO 04/063351)。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本文所提供的抗體的糖基化模式被修改，以增強(qiáng) ADCC 和 CDC 效應(yīng)器的功能。參見 Shields RL et al, (2002) JBC. 277 :26733 ；Shinkawa T et al“2003) JBC. 278 :4666 和 Okazaki A et al, (2004) J. Mol. Biol. ,336 12390 在一些實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)包含一個(gè)或多個(gè)基因工程化的糖型，S卩，碳水化合物組合物以共價(jià)方式與包含F(xiàn)c區(qū)域的分子相連?；蚬こ袒奶切涂梢杂糜诙喾N目的，包括但不限于增強(qiáng)或降低效應(yīng)器的功能?；蚬こ袒奶切涂梢酝ㄟ^本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法生成，例如通過采用基因工程化的或變體表達(dá)的菌株，通過與一種或多種酶(例如DI N-乙?；被咸寝D(zhuǎn)移酶IIItenTIll))共表達(dá)，通過在多種有機(jī)體或得自多種有機(jī)體的細(xì)胞系中表達(dá)包含F(xiàn)c區(qū)域的分子，或者通過在包含F(xiàn)c區(qū)域的分子已經(jīng)被表達(dá)之后對(duì)碳水化合物進(jìn)行修飾。用于生成基因工程化的糖型的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括但不限于在Umana et al,1999,Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al,20017 Biotechnol Bioeng 74: 288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277 :26733-26740 ；Shinkawa et al，2003， J Biol Chem 278 :4666-4673)美國專利 No. 6，602，684 ；美國系列號(hào) No. 10/277，370 ；美國系列號(hào) No. 10/113, 929 ；PCT WO 00/61739A1 ；PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ； PCT WO 02/30954A1 ；Potillegent technology (Biowa,Inc. Princeton,N. J.) ；GlycoMAb glycosylation engineering technology(GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland) 例如參見 WO 00061739 ；EA01229125 ；US 20030115614 ；Okazaki et al, 2004，JMB，336 :1239-49中所描述的那些。本領(lǐng)域還已知Fc區(qū)域的糖基化可以被修飾，以增強(qiáng)或降低效應(yīng)器的功能 (例如參見 Umana et al，1999，Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al，2001， Biotechnol Bioeng 74 :288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277:26733-26740; Shinkawa et al，2003，J Biol Chem 278:4666-4673)美國專利 No. 6，602，684 ； 美國序列.No. 10/277，370 ；美國序列.No. 10/113，9 ;PCT WO 00/61739A1 ； PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ；PCT WO 02/30954A1 ；Poti1legent technology(Biowa, Inc. Princeton, N. J. ) ；GlycoMAb glycosylation engineeringtechnology(GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)) 因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體的Fc區(qū)域包含糖基化被改變的氨基酸殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，糖基化被改變的氨基酸使得效應(yīng)器的功能降低。在另一個(gè)實(shí)施方案中，糖基化被改變的氨基酸殘基使得效應(yīng)器的功能增強(qiáng)。在具體的實(shí)施方案中，所述的Fc區(qū)域具有減少的巖藻糖基化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Fc區(qū)域?yàn)閹r藻糖基化的(例如參見美國專利申請公開 No. 2005/0226867)。附圖簡述

圖1描述了顯示在Colo205異種移植物腫瘤中通過特定的抗體對(duì)小鼠Glil和 PtCl的藥效動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)結(jié)果的柱狀圖。圖2是三組的比較，其示出作為線性圖的給予單0.5mg/kg劑量后特定抗體的藥物動(dòng)力學(xué)，其相對(duì)于以柱狀圖形式示出的基質(zhì)hedgehog靶小鼠Glil和Ptcl在Colo205異種移植物腫瘤中的水平。圖3A描述了顯示抗體3H8對(duì)HT-四異種移植物腫瘤生長的抑制情況的線性圖。圖;3B描述了顯示抗體3H8對(duì)在HT-四異種移植物腫瘤(其生長受到抗體治療的抑制)的基質(zhì)中所表達(dá)的hedgehog靶向基因的藥效動(dòng)力學(xué)效果的柱狀圖。圖4A描述了顯示在裸鼠中特定抗體對(duì)早期結(jié)腸癌腫瘤模型HCXF-001的生長抑制情況的線性圖。圖4B描述了顯示特定抗體對(duì)在HXCF-002異種移植物腫瘤(其生長受到特定抗體的抑制)的基質(zhì)中的hedgehog靶向基因的藥效動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)結(jié)果的柱狀圖。圖5描述了顯示抗體6D7對(duì)HT-55異種移植物腫瘤生長的抑制情況的線性圖。發(fā)明詳述本發(fā)明的實(shí)施方案涉及能夠抑制Shh與I^atchedl/2相結(jié)合的一組新型的Shh封阻分子，例如抗體。這種分子可以以單一試劑的形式使用、或者備選地與其他結(jié)合抗體/試劑組合使用。此外，它們還可以與任何標(biāo)準(zhǔn)品或新型抗癌試劑組合使用。本發(fā)明的實(shí)施方案涉及與Shh相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在一些實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑與Shh相結(jié)合，并抑制Shh與其受體Patched-1/2相結(jié)合。在一些實(shí)施方案中， 這種結(jié)合可以中和、封阻、抑制、消除或干擾Shh相關(guān)作用的一個(gè)或多個(gè)方面。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體或其結(jié)合片段。本文中，這種單克隆抗體可以被稱為抗Sih的抗體。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括全人源抗Shh的抗體，以及具有治療用途的抗體制備物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗Shh抗體的制備物具有所需的治療性質(zhì)，包括對(duì)Shh的強(qiáng)的結(jié)合親和性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡或抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的能力、以及通過ADCC和/或CDC 活性誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性的能力。此外，本發(fā)明的實(shí)施方案包括使用所述的這些抗體來治療疾病的方法。本發(fā)明的抗Sih的抗體可以用于預(yù)防Shh介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的增殖?？梢员碚鳛槿魏晤愋偷膼盒阅[瘤(包括轉(zhuǎn)移性癌癥、淋巴腫瘤以及血癌)的任何疾病也都可以通過這種抑制機(jī)制來進(jìn)行治療。人類中示例性的癌癥包括膀胱腫瘤、腎細(xì)胞癌、乳腺腫瘤、前列腺腫瘤、基細(xì)胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦和CNS癌(例如神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤)、宮頸癌、絨毛膜癌、結(jié)腸和直腸癌、 結(jié)締組織癌、消化系統(tǒng)的癌癥；子宮內(nèi)膜癌、食管癌；眼癌；頭部和頸部的癌癥；胃部的癌
24癥；上皮內(nèi)贅生物；腎癌；喉癌；白血??；肝癌；肺癌(例如小細(xì)胞和非小細(xì)胞)；淋巴瘤，包括Hodgkin或非Hodgkin淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤，包括多發(fā)性骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌、腎癌、呼吸系統(tǒng)的癌癥；肉瘤、皮膚癌；胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌；子宮癌、泌尿系統(tǒng)的癌癥以及其他癌癥和肉瘤。通常在狗、貓和其他寵物中診斷的惡性紊亂包括但不限于淋巴肉瘤、骨肉瘤、 乳房腫瘤、肥大細(xì)胞瘤、腦腫瘤、黑素瘤、腺鱗癌、良性的肺部腫瘤、支氣管腺腫瘤、細(xì)支氣管腺癌、纖維瘤、粘液軟骨瘤、肺部肉瘤、神經(jīng)肉瘤、骨瘤、刺瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、Ewing肉瘤、 Wilm腫瘤、Burkitt淋巴瘤、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、破骨細(xì)胞瘤、口腔瘤形成、 纖維肉瘤、骨肉瘤和橫紋肌肉瘤、生殖器鱗狀細(xì)胞癌、傳染性性病腫瘤、睪丸腫瘤、精原細(xì)胞瘤、Sertoli細(xì)胞腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤、組織細(xì)胞瘤、綠色瘤(例如粒細(xì)胞肉瘤)、角膜刺瘤、角膜鱗狀細(xì)胞癌、血管肉瘤、胸膜間皮瘤、基細(xì)胞腫瘤、胸腺瘤、胃部腫瘤、腎上腺癌、口腔多發(fā)性乳頭瘤、血管內(nèi)皮瘤和囊腺瘤、毛囊淋巴瘤、小腸淋巴瘤、纖維肉瘤和肺部鱗狀細(xì)胞癌。在嚙齒動(dòng)物(例如雪貂)中，示例性的癌癥包括胰島瘤、淋巴瘤、肉瘤、神經(jīng)瘤、胰腺島細(xì)胞腫瘤、胃部MALT淋巴瘤和胃腺瘤。影響農(nóng)業(yè)牲畜的瘤形成包括白血病、血管外皮細(xì)胞瘤和牛眼部的瘤形成(在牛中)；包皮纖維肉瘤、潰瘍性鱗狀細(xì)胞癌、包皮癌、結(jié)締組織瘤形成和肥大細(xì)胞瘤(在馬中)；肝細(xì)胞癌(在豬中)；淋巴瘤和肺部腺瘤病(在羊中)；肺部肉瘤、淋巴瘤、Rous肉瘤、成血細(xì)胞綜合癥、纖維肉瘤、腎母細(xì)胞瘤、B細(xì)胞淋巴瘤和淋巴白血性增生(在鳥類物種中)；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、肝臟的瘤形成、淋巴肉瘤(成淋巴細(xì)胞的淋巴瘤)、類漿細(xì)胞白血病和浮囊肉瘤(在魚中)、干酪樣淋巴結(jié)炎(CLA)；由細(xì)菌假結(jié)核棒桿菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)引起的綿羊和山羊的慢性感染性傳染病、以及由南非羊肺炎引起的綿羊的傳染性肺部腫瘤。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括用于特異性檢測生物學(xué)樣品中Sih的數(shù)量的診斷性測試。所述的測試試劑盒可以包括本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體以及用于檢測這些抗體的必要性的標(biāo)記。這些診斷性測試可用于篩查細(xì)胞增殖相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。本發(fā)明的另一個(gè)方面為Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑，其中所述的拮抗劑能夠與 Shh結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的拮抗劑為靶向結(jié)合劑，例如抗體。所述的拮抗劑可以選自本文所述的抗體，例如抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、 6D70P.6D70P2.3H80P 或 IGlOPo在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Shh的生物學(xué)活性的拮抗劑可以與Shh相結(jié)合，并由此抑制或阻止配基與Hedgehog受體O^tched-I)相結(jié)合，由此抑制細(xì)胞增殖。一個(gè)實(shí)施方案為與全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、 1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P或1G10P相同的一個(gè)或多個(gè)抗原決定部位相結(jié)合
的靶向結(jié)合劑。一個(gè)實(shí)施方案為與全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、 1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P或1G10P相同的一個(gè)或多個(gè)抗原決定部位相結(jié)合
的抗體。一個(gè)實(shí)施方案為能夠產(chǎn)生上文所述的靶向結(jié)合劑的雜交瘤細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，為能夠產(chǎn)生上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈的雜交瘤細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體的輕鏈和/或重鏈。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、 1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P或1G10P的輕鏈和/或重鏈。備選地，所述的雜交瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生這樣的抗體，該抗體能夠與全人源單克隆抗體1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、 1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P 相同的一個(gè)或多個(gè)抗原決定部位相結(jié)合。另一個(gè)實(shí)施方案為編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的核酸分子。在一個(gè)實(shí)施方案中， 為編碼上文所述的抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的核酸分子編碼了全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈。另一個(gè)實(shí)施方案為編碼選自抗體1A12、1G12、1H10、 3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2、3H80P 或 1G10P 中的全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為包含一個(gè)或多個(gè)上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的靶向結(jié)合劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，為包含一個(gè)或多個(gè)上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案為包含上文所述的載體的宿主細(xì)胞。備選地，所述的宿主細(xì)胞可以包含多于一個(gè)的載體。此外，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為通過在其中核酸分子被表達(dá)從而產(chǎn)生所述的靶向結(jié)合劑、然后回收所述的靶向結(jié)合劑的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的靶向結(jié)合劑的方法。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中衛(wèi)通過在核酸分子被表達(dá)從而產(chǎn)生所述的抗體、然后回收所述的抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的至少一個(gè)核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個(gè)宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達(dá)所述的核酸分子以及分離所述的靶向結(jié)合劑來制備靶向結(jié)合劑的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的抗體的至少一個(gè)核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個(gè)宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達(dá)所述的核酸分子以及分離所述的抗體來制備抗體的方法。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明包括通過給藥本文所述的拮抗劑來拮抗Sih的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑。本發(fā)明的另一個(gè)方面包括通過給藥上文所述的靶向結(jié)合劑來拮抗Sih的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個(gè)方面包括通過給藥上文所述的抗體來拮抗Sih的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Sih的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動(dòng)物中細(xì)胞增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動(dòng)物中細(xì)胞增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的抗體來治療動(dòng)物中細(xì)胞增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療細(xì)胞增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動(dòng)物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的拮抗劑。所述的拮抗劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動(dòng)物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的抗體來治療動(dòng)物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的抗體來減輕或抑制動(dòng)物腫瘤細(xì)胞的增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要減輕或抑制增殖的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗Sih的生物學(xué)活性的抗體來減緩動(dòng)物腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移的方法。所述的方法可以包括選擇需要減緩腫瘤的生長和 /或轉(zhuǎn)移的動(dòng)物，以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的、拮抗Shh的生物學(xué)活性的抗體。 所述的抗體可以單獨(dú)給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了 Sih的生物學(xué)活性拮抗劑在用于制造治療細(xì)胞增殖的藥劑中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療細(xì)胞增殖的藥劑的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Shh的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療細(xì)胞增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療細(xì)胞增殖的藥劑的、拮抗所述的 Shh的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療疾病相關(guān)性細(xì)胞增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療疾病相關(guān)性細(xì)胞增殖的藥劑的、
27拮抗所述的^ih的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了所述的Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑在用于制造用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的Sih的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑在用于制造用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑的、拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的抗體在用于制造用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用作用于治療哺乳動(dòng)物癌癥的藥劑的、拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造用于減緩或抑制動(dòng)物增殖的藥劑中的用途。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了用作用于減緩或抑制動(dòng)物中增殖和/或血管生成的藥劑的、拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造用于減緩動(dòng)物腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑中的用途。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了用作用于減緩動(dòng)物中腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑的、拮抗所述的Sih的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明特別適用于在患有單獨(dú)依賴于或部分依賴于Shh受體信號(hào)傳導(dǎo)的腫瘤患者中拮抗aih。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了包含Sih的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了包含Shh的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。在一些實(shí)施方案中，在給藥特異性結(jié)合Sih的抗體之后，給藥清除劑，從而移除血液中過量的循環(huán)抗體?？筍ih的抗體可以用于消除患者樣品中的Sih，并因此可以用作用于本文所述的疾病狀態(tài)的診斷工具。此外，基于抗Shh抗體的顯著抑制由Shh介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)活性(如以下實(shí)施例中所表明的那樣)的能力，所述的抗Sih的抗體在治療由Sih的表達(dá)所導(dǎo)致的癥狀和狀況中具有治療作用。在具體的實(shí)施方案中，本文所述的抗體和方法涉及治療由Shh 誘導(dǎo)的增殖和/或細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)所導(dǎo)致的癥狀。另一個(gè)實(shí)施方案涉及采用本文所述的抗體和方法來治療細(xì)胞增殖相關(guān)性疾病，包括贅生性疾病，例如黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、干細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌以及胰腺癌。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用于檢測哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞或體液中的Sih以篩查細(xì)胞增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與Shh相結(jié)合的靶向結(jié)合劑以及用于表明所述的靶向結(jié)合劑與Sih(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個(gè)實(shí)施方案中，與Shh相結(jié)合的靶向結(jié)合劑被標(biāo)記。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為未標(biāo)記的，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述靶向結(jié)合劑的手段。優(yōu)選的是，所述的靶向結(jié)合劑可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括用于檢測哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞或體液中的Sih以篩查增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與Shh相結(jié)合的抗體以及用于表明所述抗體與Sih(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。所述的抗體可以為單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，與Shh相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級(jí)抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級(jí)抗體的手段。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。優(yōu)選的是，所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在以下另外的詳細(xì)材料中提供了本文所公開的、關(guān)于所述抗體的其他實(shí)施方案、 特征等。序列列表本發(fā)明的實(shí)施方案包括以下表1中所列的特異性抗體。該表格分別報(bào)告了各種抗 Shh的抗體的識(shí)別編號(hào)，以及相應(yīng)重鏈和輕鏈的基因和多肽的可變結(jié)構(gòu)域的SEQ ID編號(hào)。 各種抗體已經(jīng)給出了識(shí)別編號(hào)。表權(quán)利要求
1.一種與sonic Hedgehog同系物(Shh)特異性結(jié)合的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體表現(xiàn)出一種或多種以下所述的性質(zhì)，包括通過BIAcore方法，以小于120pM的Kd與人源Shh相結(jié)合；抑制使用Shh誘導(dǎo)的細(xì)胞的造骨細(xì)胞分化；表現(xiàn)為在colo205異種移植物腫瘤中，將小鼠Glil mRNA的水平降低大于80% ；表現(xiàn)為在colo205異種移植物腫瘤中，將小鼠I^atched-I mRNA的水平降低大于70% ；或者表現(xiàn)為不結(jié)合Desert Hedgehog。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體抑制哺乳動(dòng)物中腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。
3.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體以低于 IOOpM的Kd與Shh相結(jié)合。
4.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、6D7、6D70P、6D70P2 或者它們的任何優(yōu)化形式中的任意一者。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體1G12。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體3H8。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體6D7。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體6D70P。
9.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQID NO. :46序列，其中SEQ ID NO. :46包含表10的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
10.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :48序列，并且其中SEQ ID NO. :48包含表11的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
11.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :14序列，其中SEQ ID NO. 14包含表12的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
12.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :16序列，其中SEQ ID NO. 16包含表13的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨(dú)特組合中的任意一者。
13.一種全人源單克隆抗體，其與抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、 1C8、1A5、6D7、6D70P或者它們的任何優(yōu)化形式中任意一者競爭結(jié)合Sih。
14.一種全人源單克隆抗體，其與以下抗體中的任意一者結(jié)合Shh上的相同的抗原決定部位，其中所述的抗體為抗體 1A12、1G12、1H10、3H8、4B6、1G1、1F4、1H8、1H12、1C8、1A5、 6D7、6D70P或者它們的任何優(yōu)化形式。
15.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體，其中所述的氨基酸序列包含a)如表9中所示的CDR3序列；b)如表9中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者；c)如表9中所示的可變輕鏈序列的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列；或者d)如表9中所示的可變重鏈序列的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列。
16.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合Shh并包含(a)SEQ ID NO :50的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0:50的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQID NO :50的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:50的VH CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:50的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:50的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 50的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQID NO :54的VL CDR1，其具有與SEQ ID NO 的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 54的VIXDRl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQID NO=M的VL CDR2，其具有與SEQ ID NO 的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 54的VL⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID NO 的VL CDR3，其具有與SEQ ID NO 的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 54的VIXDR3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO :50 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 54 的 VL CDR1、CDR2和 CDR3。
18.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合Shh并包含(a)SEQ ID NO :14的VH CDRl，其具有與SEQ ID NO: 14的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQID NO :14的VH CDR2，其具有與SEQ ID NO: 14的VH CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:14的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:14的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 14的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQID NO :16的VL CDRl，其具有與SEQ ID NO: 16的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 16的VIXDRl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQID NO :16的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0:16的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 16的VL⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0:16的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0:16的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 16的VL⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的試劑包含(a)SEQ ID NO 14 的 VH CDRl、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 16 的 VL CDR1、CDR2 和 CDR3。
20.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合Shh并包含(a)SEQ ID NO :22的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0:22的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶Rl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(b)SEQID NO :22的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:22的VH CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶R2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:22的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:22的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 22的VH⑶R3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(d)SEQID N0』4的VL CDR1，其具有與SEQ ID N0J4的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 24的VIXDRl相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；(e)SEQID N0』4的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0J4的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 24的VIXDR2相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0J4的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0J4的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 24的VIXDR3相比具有1、2或3個(gè)氨基酸殘基的取代。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO :22 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 24 的 VLCDRl、CDR2和 CDR3。
22.—種抗體，其免疫特異性地結(jié)合Sih，并且包含與SEQ ID NO :22的氨基酸具有至少 90%的一致性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，以及包含與SEQ ID NO :24的氨基酸序列具有至少90% 的一致性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
23.一種抗體，其免疫特異性地結(jié)合aih，并且包含與SEQ ID NO :50的氨基酸具有至少 90%的一致性的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，以及包含與SEQ ID NO :54的氨基酸序列具有至少90% 的一致性的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
24.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為單克隆抗體的結(jié)合片段。
25.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為全人源單克隆抗體。
26.根據(jù)之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體選自Fab、 Fab，、F(ab，)2, Fv 和 dAb 片段。
27.具有氨基酸序列的抗體包含以下序列中的任何一者，其中所述的序列為 包含由命名為Mab6D7VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為 PTA-9505 ；包含由命名為Mab6D7VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為PTA-9506 ；或者包含由命名為Mab6D7VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為PTA-9506 ；以及包含由命名為Mab6D7VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為PTA-9505。
28.具有氨基酸序列的抗體包含以下序列中的任何一者，其中所述的序列為 包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為 PTA-9504 ；包含由命名為Mab6D7VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為PTA-9503 ；或者包含由命名為Mab6D7VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為PTA-9504;以及包含由命名為Mab6D7VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為PTA-9503。
29.具有氨基酸序列的抗體包含包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為 PTA-9507 ；包含由命名為MablGlVL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為PTA-9509 ；或者包含由命名為MablGlVH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號(hào)為PTA-9507 ；以及包含由命名為MablGlVL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號(hào)為PTA-9509。
30.一種包含之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的靶向試劑或抗體的組合物。
31.一種包含之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體或抗體的藥物組合物。
32.—種編碼之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體或抗體的核酸分子。
33.一種治療動(dòng)物中惡性腫瘤的方法，包括選擇需要治療惡性腫瘤的動(dòng)物；以及向所述的動(dòng)物給藥治療有效劑量的之前權(quán)利要求中的任意一項(xiàng)所述的抗體。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述的動(dòng)物為人。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述的抗體選自全人源單克隆抗體1A12、1G12、 IHlO、3H8、4B6、IGl、1F4、1H8、IHl2、1C8、1A5、6D7、6D70P 或者它們的任何優(yōu)化形式。
36.根據(jù)權(quán)利要求33-35所述的方法，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、 非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、 卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
37.用于治療惡性腫瘤的根據(jù)權(quán)利要求30所述的組合物的用途。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的組合物的用途，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、 乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、 頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)抗抗人源sonic hedgehog同系物(Shh)的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于Shh的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與Shh的活性和/或過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病，并且可以用作診斷工具。
文檔編號(hào)C07K16/18GK102203135SQ200980142430
公開日2011年9月28日 申請日期2009年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者D·詹金斯, J·S·康, N·米肖, N·萊恩 申請人:米迪繆尼有限公司