專(zhuān)利名稱(chēng)：用于免疫治療的隱蔽hla-a24表位的鑒定、優(yōu)化和用途的制作方法
用于免疫治療的隱蔽HLA-A24表位的鑒定、優(yōu)化和用途本發(fā)明涉及肽免疫治療領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明提供用于有效治療具有HLA-Ai402 表型的患者的新方法和材料。肽接種或免疫治療是當(dāng)前癌癥治療背景下作為大量研究主題的治療方法。其原理基于用復(fù)制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)識(shí)別的腫瘤抗原T細(xì)胞表位的肽進(jìn)行免疫，所述CTL 在腫瘤細(xì)胞的清除中起主要作用。應(yīng)該想到的是，CTL不識(shí)別全蛋白抗原，而是識(shí)別其由表達(dá)于細(xì)胞表面的I類(lèi)主要組織相容復(fù)合物(MHC I)分子提呈的、通常包含8-10個(gè)氨基酸的肽片段。所述肽的提呈是抗原加工的結(jié)果，所述抗原加工包括如下三個(gè)步驟-稱(chēng)作蛋白酶體的多酶復(fù)合物對(duì)所述抗原的細(xì)胞質(zhì)降解，-TAP轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)衍生自所述降解的肽在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)中的轉(zhuǎn)位，-所述肽與所述MHCI分子的結(jié)合，及所述肽/MHC I復(fù)合物向細(xì)胞表面的輸出。肽/MHC I復(fù)合物與CTL上的特異T細(xì)胞受體(TCR)相互作用，從而誘導(dǎo)所述CTL 的刺激和擴(kuò)增，所述CTL變得能夠攻擊表達(dá)衍生所述肽的抗原的靶細(xì)胞。在抗原加工中，發(fā)生肽選擇，這產(chǎn)生肽提呈的層級(jí)。由MHC I分子優(yōu)選提呈的肽稱(chēng)作免疫顯性的，而弱提呈的肽稱(chēng)作隱蔽的。免疫顯性肽表現(xiàn)對(duì)MHC I的高親和性且是免疫原性的，而隱蔽肽表現(xiàn)對(duì)MHC I的低親和性且是非免疫原性的。在結(jié)果令人失望的臨床前和臨床研究中，腫瘤疫苗已廣泛靶向免疫顯性肽(Gross et al. ,2004 ；Rosenberg et al. ,2004)。腫瘤抗原常常是由腫瘤過(guò)表達(dá)且由正常細(xì)胞和組織較低水平表達(dá)的自身蛋白。由于自身耐受過(guò)程，免疫系統(tǒng)不能針對(duì)所述自身抗原反應(yīng)。自身耐受主要涉及免疫顯性肽 (Cibotti et al. ,1992 ；Gross et al.，2004)，從而解釋了所述肽在誘導(dǎo)腫瘤免疫性上的無(wú)能。隱蔽肽少得多地在自身耐受過(guò)程中涉及(Cibotti et al. ,1992 ；Gross et al., 2004 ；Moudgil et al. , 1999)并因而能夠誘導(dǎo)有效的腫瘤免疫性，前提是其免疫原性得到增強(qiáng)(Engelhorn et al.，2006 ；Gross et al. ,2004)。增強(qiáng)隱蔽肽免疫原性的常用策略由經(jīng)氨基酸取代而提高其對(duì)MHC I分子的親和性構(gòu)成，所述隱蔽肽由于其低MHC I親和性而是非免疫原性的。對(duì)MHC I分子的肽親和性主要依賴稱(chēng)作“主要錨定殘基”的殘基在良好定義的位置(主要錨定位置)的存在。所述殘基具有MHC I等位基因特異性。主要錨定殘基的存在盡管通常不是必需的，但是足以確保高M(jìn)HC I親和性。已表明，位于主要錨定位置之外的殘基(次級(jí)錨定殘基)可對(duì)肽對(duì)MHC I 的親和性施加有利或不利影響。所述次級(jí)錨定殘基的存在使得能夠解釋在具有主要錨定基序的肽內(nèi)結(jié)合親和性存在大的變化(Ruppert et al.，1993)。旨在增強(qiáng)對(duì)MHC I分子親和性的氨基酸取代應(yīng)當(dāng)保留所述優(yōu)化肽的抗原性。事實(shí)上，由優(yōu)化肽產(chǎn)生的CTL必須與相應(yīng)的天然肽交叉反應(yīng)。許多小組已在通過(guò)提高已具免疫原性的肽對(duì)HLA-A*0201的親和性來(lái)增強(qiáng)其免疫原性方面取得了成功(Bakker et al. , 1997 ；Parkhurst et al. , 1996 ；Valmori et al.，1998)。本發(fā)明人之前已描述增強(qiáng)HLA-A*0201限制性隱蔽肽(Scardino et al. ,2002 ； Tourdot和Gould，2002)和HLA_B*0702 (W02008/010098)的親和性和免疫原性的一般策略。HLA-A*2402為頻繁表達(dá)的分子(群體的27% )并且為日本人和亞洲人中最常見(jiàn)的等位基因之一。對(duì)HLA-A1402限制性腫瘤隱蔽肽的鑒定和優(yōu)化因而為開(kāi)發(fā)用于表達(dá) HLA-A*2402的患者的有效癌癥疫苗所必需。至今已描述數(shù)種由HLA-A1402提呈的腫瘤免疫原性肽(表1)。
權(quán)利要求
1.一種鑒定抗原中HLA-A1402限制性隱蔽表位的方法，所述方法包括如下步驟選擇所述抗原中在位置2具有酪氨酸的8至12個(gè)氨基酸的肽，條件是所述肽不同時(shí)在位置1具有帶正電的氨基酸(賴氨酸或精氨酸)和在C末端位置具有亮氨酸或異亮氨酸或苯丙氨酸。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括如下步驟在合適模型中測(cè)試由權(quán)利要求1所述方法選擇的所述肽的免疫原性，和如果所述肽不具有免疫原性，則選擇所述肽。
3.一種提高(推定的)HLA-Ai402限制性隱蔽表位免疫原性的方法，所述方法包括用精氨酸或賴氨酸取代所述表位的N末端殘基的步驟，和/或用亮氨酸或異亮氨酸或苯丙氨酸、優(yōu)選地用亮氨酸取代所述表位的C末端殘基的步驟。
4.一種獲得能夠觸發(fā)針對(duì)抗原HLA-A1402限制性隱蔽表位的免疫反應(yīng)的HLA_Ai402 限制性表位的方法，所述方法包括如下步驟(i)通過(guò)權(quán)利要求1所述的方法，鑒定所述抗原中一個(gè)或數(shù)個(gè)天然(推定的) HLA-A*2402限制性隱蔽表位；( )在合適模型中測(cè)試步驟(i)所選每一天然表位的免疫原性，并選擇不具有免疫原性的表位；(iii)對(duì)于步驟(ii)所選每一天然表位，通過(guò)權(quán)利要求3所述的方法提高其免疫原性， 而獲得優(yōu)化表位；(iv)在合適模型中測(cè)試步驟(iii)所獲每一優(yōu)化表位的免疫原性，并選擇具有免疫原性的那些表位；(ν)對(duì)于步驟(iv)所選每一表位，測(cè)試針對(duì)所述優(yōu)化表位產(chǎn)生的CTL是否也識(shí)別其同系天然表位，并選擇所述測(cè)試為陽(yáng)性的那些表位。
5.由HLA-A1402限制性隱蔽表位構(gòu)成的分離的肽，其中所述分離的肽選自 PYGVLLKTH(SEQ ID NO 1)、PYMRQFVAH(SEQ ID NO :2)、PYVSRLLGI (SEQ ID NO :3)、 PYGKGffDLM (SEQ ID NO :4)、TYLVQVQAL (SEQ ID NO 5) , PYffELSNHE (SEQ ID NO :6)、 PYDGIPARE (SEQ ID No 7), RYEFLffGPR (SEQ ID No 8)和 PYNYLSTDV (SEQ ID No :9)。
6.一種分離的肽，其由免疫原性HLA-Ai402限制性表位構(gòu)成，所述免疫原性 HLA-A*2402限制性表位通過(guò)權(quán)利要求2所述的方法衍生自權(quán)利要求4所述的HLA-A1402限制性隱蔽表位，其中所述分離的肽選自KYGVLLKTL(SEQ ID No :11)、RYMRQFVAL(SEQ ID No: 12)、RYVSRLLGI (SEQ ID No :13)、RYGKGffDLL (SEQ ID No :14)、RYLVQVQAL (SEQ ID No :15) 和 RYffELSNHL(SEQ ID No :16)。
7.一種嵌合多肽，所述嵌合多肽包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)權(quán)利要求4所述的 HLA-A*2402限制性隱蔽表位。
8.一種嵌合多肽，所述嵌合多肽包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)權(quán)利要求5所述的免疫原性HLA-Al402限制性表位。
9.一種分離的核酸分子，所述核酸分子被設(shè)計(jì)成表達(dá)權(quán)利要求5所述的HLA-A1402限制性隱蔽表位、權(quán)利要求6所述的免疫原性表位或者權(quán)利要求7或8所述的嵌合多肽。
10.一種藥物組合物，其至少包含作為活性成分的權(quán)利要求5所述的HLA-Ai402限制性隱蔽表位、權(quán)利要求6所述的免疫原性表位多肽、權(quán)利要求7或8所述的嵌合多肽或者權(quán)利要求9所述的核酸。
11.如權(quán)利要求10所述的藥物組合物，所述藥物組合物為疫苗。
12.—種部件試劑盒，所述試劑盒以分離容器包含(i)第一肽，所述第一肽包含HLA-A1402限制性隱蔽表位的序列，和( )第二肽，所述第二肽包含由HLA-Ai402限制性免疫原性表位構(gòu)成的序列，所述HLA-A1402限制性免疫原性表位通過(guò)權(quán)利要求3所述的方法衍生自(i)中所述的 HLA-A*2402限制性隱蔽表位。
13.如權(quán)利要求12所述的試劑盒，其中所述第一肽是權(quán)利要求5所述的分離的隱蔽表位，所述第二肽是權(quán)利要求6所述的其同系免疫原性表位。
14.如權(quán)利要求12所述的試劑盒，其中所述第一肽是包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè) HLA-A*2402限制性隱蔽表位的嵌合多肽，和/或所述第二肽是包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)或更多個(gè)HLA-A1402限制性免疫原性表位的嵌合多肽，其中所述第二肽包含的至少一種免疫原性表位與所述第一肽包含的至少一種HLA-A1402限制性隱蔽表位同系。
15.如權(quán)利要求14所述的試劑盒，其中所述第一肽是權(quán)利要求7所述的嵌合多肽，所述第二肽是權(quán)利要求8所述的嵌合多肽。
16.如權(quán)利要求12至15中任一項(xiàng)所述的試劑盒，所述試劑盒是接種試劑盒，其中所述第一肽和第二肽或嵌合多肽為單獨(dú)的接種劑量。
17.用作預(yù)防性或治療性免疫治療藥物的權(quán)利要求5或權(quán)利要求6所述的分離的肽、權(quán)利要求7或權(quán)利要求8所述的嵌合多肽或者權(quán)利要求9所述的核酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種方法，所述方法用于鑒定抗原中HLA-A*2402限制性隱蔽表位并提高其免疫原性，以獲得能夠觸發(fā)針對(duì)HLA-A*2402限制性隱蔽表位的免疫反應(yīng)的HLA-A*2402限制性表位。本發(fā)明還提供由隱蔽或優(yōu)化的HLA-A*2402限制性表位構(gòu)成的分離的肽。
文檔編號(hào)C07K14/16GK102387813SQ200980158591
公開(kāi)日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2009年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日
發(fā)明者科斯坦提努斯(科斯塔斯)·科斯馬托普洛斯, 讓娜·梅內(nèi)-雅梅 申請(qǐng)人:瓦克松生物技術(shù)公司