專利名稱：具有hiv拮抗活性的三環(huán)烯類化合物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有HIV拮抗活性的三環(huán)烯類化合物及其制備方法與應用。

背景技術：
艾滋病流行情況 根據(jù)2006年5月聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署(Joint United Nations Programme onHIV/AIDS，UNAIDS)公布數(shù)據(jù)預測，截至2008年底，全世界估計有3320萬艾滋病病毒感染者和艾滋病人。2008年新發(fā)生的感染為270萬，死亡人數(shù)為200萬。自艾滋病發(fā)現(xiàn)以來，全世界累計死于艾滋病的人已達2500萬。艾滋病現(xiàn)已成為世界上僅次于心臟病、腦卒中和急性下呼吸道感染的第四個主要死亡原因，是世界上造成死亡最多的傳染病。根據(jù)衛(wèi)生部公布的《中國艾滋病防治聯(lián)合評估報告(2007年)》，截至2007年10月底，全國累計報告艾滋病病毒感染者和艾滋病患者223501例，其中2007年新發(fā)艾滋病病毒感染者5萬人，因艾滋病死亡2萬人?！吨袊滩》乐温?lián)合評估報告(2007年)》估計目前我國現(xiàn)存艾滋病病毒感染者和病人約70萬。
至今為止，已有25種抗HIV-1藥物以及5種由這些藥物組成的復方制劑被美國食品及藥物管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)批準應用于臨床。根據(jù)作用機制，這些藥物可分為4類，第1類是抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶活性的藥物，如齊多夫定(AZT)、去羥肌苷(DDI)、拉米夫定(DDC)等；第2類是抑制病毒蛋白水解的蛋白酶抑制劑，如沙奎那韋(Saquinavir)、利托那韋(Ritonavir)等；第3類是阻止病毒進入的HIV-1進入抑制劑，該類藥物目前有T-20和Selzentry(Tilton，J.C.，et al.Antiviral Res，2009，doi10.1016/j.antiviral.2009.07.022)；第4類是HIV-1整合酶抑制劑，該類藥物目前有Isentress等。
各類抗HIV藥物的研究進展 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑與HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶(HIV RT)有很高的親和力，通過與RT結(jié)合而抑制其逆轉(zhuǎn)錄作用，從而提前終止病毒DNA的合成，抑制HIV的復制。逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑可分為核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)和非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)。核苷類似物是首先用來尋找抗HIV藥物的一類化合物，首先用于臨床的抗艾滋病藥物是齊多夫定(AZT)(1986年FDA批準)。目前FDA批準的另外6個NRTIs是司他夫定(D4T)、扎西他濱(DDC)、拉米夫定(3TC)、去羥肌苷(DDI)、阿巴卡韋(Abacavir)、恩曲他濱(Emtricitabine)(Prajapati，D.G.，Bioorg.Med.Chem，17(2009)5744-5762)。
近年來，一系列化學結(jié)構(gòu)各異，但能高度專一地抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)的非核苷類化合物得到廣泛的研究(de Béthune，M.-P.，Antiviral Res，2009，doi10.1016/j.antiviral.2009.09.008)。奈韋拉平(Nevirapine)是首先通過臨床試驗上市的一種NNRTIs，主要與核苷類似物聯(lián)用治療AIDS。FDA批準的NNRTIs還有依法韋侖(efavirenz)和地拉夫定(delavirdine)。
蛋白酶抑制劑(PIs) HIV-1蛋白酶在病毒的成熟加工中起關鍵性的作用，抑制HIV-1蛋白酶會產(chǎn)生不成熟、無感染性的病毒顆粒并導致病毒繁殖的終止。美國FDA批準用于治療艾滋病的HIV蛋白酶抑制劑有沙奎那韋(saquinavir)、安普那韋(amprenavir)、奈非那韋(nelfinavir)、茚地那韋(indinavir)、羅品那韋(lopinavir)、利托那韋(ritonavir)、阿扎那韋(atazanavir)、福沙那韋(fosamprenavir)、地瑞那韋(darunavir)(A.Hughes et al，J.Infect，2008，571-10)。這些蛋白酶抑制劑模擬了HIV蛋白酶的天然底物結(jié)構(gòu)，通過抑制蛋白的后轉(zhuǎn)錄裂解從而阻止了新病毒的組裝。
進入抑制劑 能抑制HIV-1進入靶細胞的這一類抗艾滋病藥物被統(tǒng)稱為HIV-1進入抑制劑(HIV entry inhibitors)。HIV gp120、gp41、CD4、CCR5、CXCR4均可以作為HIV進入抑制劑的藥物作用靶點。根據(jù)這類藥物作用于HIV進入的不同階段，可將它們分為粘附抑制劑，HIV輔助受體拮抗劑和融合抑制劑(Moore，J.P et al.，Proc.Natl.Acad.Sci，2003，100(19)10598-10602)。
Enfuvirtide(T-20，fuzeon)是第一個被FDA批準用來用來治療艾滋病患者的進入抑制劑，它模擬了HIV-1gp41膜融合過程中的關鍵區(qū)域127-162的氨基酸序列，人工合成而得。Selzentry是目前唯一被FDA批準的CCR5抑制劑，它可以通過抑制CCR5受體從而阻斷HIV的感染進程(JoséA Esté，Amalio Telenti，Lancet，2007，37081-88)。
整合酶抑制劑 HIV-1整合酶(IN)是逆轉(zhuǎn)錄過程中重要的酶，它涉及到將HIV DNA整合到宿主細胞染色體DNA的過程。整合酶抑制劑是一新類型的HIV抑制劑，它可通過抑制病毒DNA的鏈轉(zhuǎn)移從而阻止HIV DNA復制整合到宿主細胞DNA中。在過去的十多年中，一系列的整合酶抑制劑被發(fā)現(xiàn)，目前已經(jīng)上市的藥物有Selzentry，它對其它類型藥物有耐受的HIV-1有抑制作用。
由于HIV病毒變異快，目前臨床的抗HIV藥物對不同的病人及在不同治療進程中表現(xiàn)一定的耐藥性。研發(fā)低毒副作用、低耐藥性及新靶點藥物仍是抗HIV藥物的重要發(fā)展方向。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供異吲哚基取代的苯甲酰胺類化合物及其制備方法。
本發(fā)明所提供的異吲哚基取代的苯甲酰胺類化合物的結(jié)構(gòu)式如式I所示
其中，R為烷基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的烷基、取代的苯基或取代的雜芳基； 所述取代的烷基中的取代基選自下述任意一種烷氧基、取代或未取代的苯氧基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的環(huán)烷基、取代的雜芳基和取代的氨基。
所述R進一步可選自下述基團含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元環(huán)烷基，含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的雜芳基，含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的或未取代的雜芳基烷基，被1個或2個相同或不同的下述基團取代的氨基烷基烷基、苯基、取代的苯基和芐基，取代的苯氧基。
所述R最優(yōu)選自下述任意一種基團

式I所示的化合物藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物(如水合物)也屬于本發(fā)明的保護范圍。
式I所示化合物的制備方法，是以N，N-二異丙基乙胺為催化劑，使式VII所示的托烷酸酐(Jordan et al，WO2004/112718)與式XII所示的化合物在加熱回流的條件下進行反應，得到式I所示化合物；
式XII中，R為烷基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的烷基、取代的苯基或取代的雜芳基；所述取代的烷基中的取代基選自下述任意一種烷氧基、取代或未取代的苯氧基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的環(huán)烷基、取代的雜芳基和取代的氨基。
所述反應在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為乙醇。
當式XII所示的化合物具體為式VI所示的化合物時
式VI中，X為N或O原子；R1為烷基、苯基、芐基、含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元環(huán)烷基、含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的雜芳基或雜芳基烷基。
式VI所示化合物可通過下述方法制備得到(反應流程圖見圖1) 對甲基苯甲酸甲酯I與溴代丁二酰亞胺在四氯化碳溶液中攪拌過夜，得到溴代產(chǎn)物III。用DIEA作堿，使化合物III和二級胺在二氯甲烷溶液中反應得到化合物V，化合物V再與水合肼在乙醇溶液中回流得到對位引入取代基的苯甲酰肼VI。
當式XII所示的化合物具體為式XI所示的化合物時
式XI中，R2為含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的雜芳基。
式XI所示的化合物可由下述方法制備得到(反應流程圖見圖2)對氨基苯甲酸甲酯I化合物IX通過一系列反應在氨基上引入多種取代，得到式XI所示化合物。
本發(fā)明的再一個目的是提供式I所示化合物的應用。
本發(fā)明所提供的式I化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物可用于制備HIV-1抑制劑、制備預防和/或治療艾滋病的藥物以及制備治療獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的藥物。
以式I化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物為活性成分制備的抗艾滋病藥物或HIV-1抑制劑，也屬于本發(fā)明的保護范圍。
所述抗艾滋病藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導入機體。
需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
用式I化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物制備的抗艾滋病藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。
本發(fā)明的發(fā)明人以抗痘病毒藥物ST-246為先導化合物(R.B.Thomas，et al.J.Med.Chem，2007，501442-1444)，經(jīng)過對處于苯環(huán)對位的三氟甲基進行改造，設計與合成了式I化合物，經(jīng)體外HIV-1感染的細胞模型測試活性表明，這些化合物是強效的HIV拮抗劑，可作為抑制HIV病毒復制的抑制劑，并可發(fā)展為抗艾滋病藥物。



圖1為制備式I所示化合物的反應流程圖。
圖2為制備式XI所示化合物的反應流程圖。
圖3為化合物1的質(zhì)譜圖。
圖4為化合物2的質(zhì)譜圖。

具體實施例方式 本發(fā)明中的化合物可通過本領域已知的方法或通過下面的實施例中描述的方 法來制備本發(fā)明的化合物。下面的實施例不應被理解為是對本發(fā)明的限制。
下述實施例中所述方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
下述實施例中溶劑和試劑的縮寫如下乙醇(EtOH)；甲醇(MeOH)；乙酸乙酯(EtOAc)；溴代丁二酰亞胺(NBS)；N，N-二異丙基乙胺(DIEA)；石油醚(PetroleumEther)；RT為室溫；D.M.H2O為去離子水。
實施例1 化合物1N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-(2-甲基哌嗪-1-甲基)苯甲酰胺 步驟1對溴甲基苯甲酸甲酯 向?qū)谆郊姿峒柞?3.07g，20mmol)的四氯化碳(30ml)的溶液中，加入N-溴代丁二酰亞胺(4.14g，23mmol)，加熱回流6h。然后將反應液冷卻，過濾，用四氯化碳洗滌三次(每次10ml)，收集濾液，旋干，得到黃色油狀的對溴甲基苯甲酸甲酯(4.22g，產(chǎn)率90％)，不需要純化，可直接進行下一步反應。
步驟24-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯 攪拌下向?qū)︿寮谆郊姿峒柞?4.22g，18mmol)和DIEA(5ml，29mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液中，滴加2.22ml(20mmol)N-甲基哌嗪。滴加完畢后，室溫下反應過夜。之后向反應液中滴加2M鹽酸調(diào)節(jié)PH至5.0，EtOAc(20ml)萃取反應液，棄去有機相。水相中滴加濃氨水調(diào)節(jié)PH值至10.0，用EtOAc(25ml)萃取3次，合并有機相，無水Na2SO4干燥。過濾，旋干溶劑，得到黃色油狀液體，即為小標題化合物(2.29g，產(chǎn)率50％)，不需要純化，可直接進行下一步反應。
步驟34-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰肼 向4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯(2.29g，10mmol)的EtOH(10ml)溶液中，加入85％的水合肼(2ml，30mmol)。加熱回流1h，然后旋干溶劑，得到黃色固體1.44g。粗品用乙酸乙酯和石油醚(1∶1)的混合溶劑結(jié)晶，得到白色針狀產(chǎn)品(1.13g，產(chǎn)率49.3％)，mp132-133℃。
步驟4化合物1的合成 向4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酰肼(0.3719g，1.5mmol)的EtOH(5ml)溶液中，加入中間體VII托烷酸酐(0.2298，1.2mmol)以及2滴DIEA。加熱回流6h，然后旋干，得到白色殘留物。柱層析分離(CH3OH∶CH2Cl2＝1∶5，v/v)，得到白色晶狀固體(0.48g，產(chǎn)率76％)，mp123-124℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.79(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，5.84(t，J＝3.6Hz，2H，CH＝CH)，3.53(s，2H，Ar-CH2)，3.46(s，2H，2×COCH)，3.14(s，2H，2×CH-CH＝CH)，2.50(m，8H，piperazine-H)，2.34(s，3H，CH3)，1.14(d，J＝4Hz，2H，2×CH-CH2)，0.32(m，2H，CH2). MS(FAB，Glycerin)m/z計算值C24H28N4O3(M+1)421.5，測量值421.3。
實施例2 化合物2N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((1氫-苯并咪唑-1-基)甲基)苯甲酰胺 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成苯并咪唑即可。產(chǎn)率60％，mp272-274℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，d6-DMSO)δ11.05(s，1H，CONH)，8.42(s，H，imidazol-2-H)，7.85(m，2H，Ar-H)，7.67(m，1H，Ar-H)，7.42(m，3H，Ar-H)，7.20(m，2H，Ar-H)，5.78(s，2H，CH＝CH)，5.60(s，2H，Ar-CH2)，3.32(m，4H，2×COCH，2×CH-CH＝CH)，1.07(s，2H，2×CH-CH2)，0.26(m，2H，CH2). MS(FAB，Glycerin)m/z計算值C26H22N4O3(M+1)439.5，測量值439.2(M+1)。
實施例3 化合物3N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((2-甲基-1氫-苯并咪唑-1-基)甲基)苯甲酰胺 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成2-甲基苯并咪唑即可。產(chǎn)率74％，mp261-262℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ10.62(s，1H，CONH)，7.88(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)，7.68(d，J＝7.6Hz，1H，Ar-H)，7.23(m，3H，Ar-H)，6.94(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，5.68(s，2H，CH＝CH)，5.35(s，2H，Ar-CH2)，3.43(s，2H，2×COCH)，3.12(s，2H，2×CH-CH＝CH)，2.35(s，3H，CH3)，1.11(d，J＝4.4Hz，2H，2×CH-CH2)，0.28(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z calcd for C27H24N4O3計算值453.5，測量值453.1。
實施例4 化合物4N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-(2，5-二甲基-1H-吡咯-1-基)苯甲酰胺 步驟14-(2，5-二甲基吡咯)苯甲酸甲酯 向?qū)Π被郊姿峒柞?0.3g，2mmol)的冰醋酸(10ml)溶液中，加入2，5-己二酮(0.26g，2.2mmol)，加熱回流過夜。停止反應，向反應液中加入30ml水，二氯甲烷(20ml)萃取三次，合并有機相，用硫酸鈉干燥并在減壓下濃縮。濃縮物經(jīng)柱層析分離(乙酸乙酯/石油醚＝1/10(v/v))，得白色純品(0.3g，產(chǎn)率67.3％)。
步驟2同化合物1步驟3，步驟3同化合物步驟4。
目標產(chǎn)品最后一步反應產(chǎn)率86％；mp224-226℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.95(m，2H，Ar-H)，7.31(m，2H，Ar-H)，5.93(s，2H，CH＝CH)，5.86(t，J＝4.0Hz，2H，pyrrole-CH＝CH)，3.48(s，2H，2×COCH)，3.17(s，2H，2×CH-CH＝CH)，2.03(s，6H，2×CH3)，1.16(d，J＝4.0Hz，2H，2×CH-CH2)，0.34(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C24H23N3O3(M+1)402.5，測量值402.1。
實施例5 化合物5N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-(3-異丙基-5-甲基-4H-1，2，4-三唑-4-基)苯甲酰胺 步驟14-甲酸甲酯異丁酰苯胺的合成 向?qū)Π被郊姿峒柞?4.7g，31mmol)的二氯甲烷溶液(25ml)中加入無水碳酸鉀(4.3g，31mmol)，混合物在冰浴攪拌下滴加異丁酰氯(6.55g，62mmol)，之后室溫反應三個小時。然后向反應液中加入25ml水，分液，有機相干燥，旋干，得4-甲酸甲酯異丁酰苯胺粗品(4.16g，收率60.7％)。
步驟24-(3-異丙基-5-甲基-1，2，4-三唑)苯甲酸甲酯的合成 取步驟1所得粗品(4.16g)，用吡啶(10ml，120mmol)和CHCl3(15ml)溶解，冰浴下滴加POCl3(6ml)，然后恢復室溫，攪拌反應6h。旋去溶劑，得黑色的粘稠殘留物。
用CHCl3(40ml)溶解黑色殘留物，再向溶液中加入乙酰肼(2.2g，30mmol)，加熱回流5h。然后向反應液中加入Na2CO3(200ml)飽和的溶液，分液，水相用CH2Cl2(50ml)萃取兩次，合并有機相，無水MgSO4干燥。過濾，旋干得黃色粘稠殘留物。
用甲苯(150ml)溶解得到的黃色殘留物，然后向溶液中加入TsOH(80mg，0.45mmol)，加然回流3h，減壓濃縮，濃縮物經(jīng)柱層析分離(CH3OH/CH2Cl2＝1/20(v/v))，得到產(chǎn)品(2.34g，三步產(chǎn)率48％)，mp170-174℃。
步驟3、4同化合物1。目標產(chǎn)物最后一步反應產(chǎn)率77％，mp276-277℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.69(s，1H，CONH)，8.13(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)，5.86(t，J＝4.0Hz，2H，CH＝CH)，3.48(s，2H，2×COCH)，3.17(s，2H，2×CH-CH＝CH)，2.78(m，1H，CH(CH3)2)，2.24(s，3H，CH3)，1.24(d，J＝6.8Hz，6H，2×CH3)，1.17(s，2H，2×CH-CH2)，0.33(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C24H25N5O3(M+1)432.5，測量值432.2。
實施例6 化合物6N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((3-氯苯胺基)甲基)苯甲酰胺 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成3-氯苯胺即可。產(chǎn)率91％，mp175-177℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.11(s，1H，NH)，7.76(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.38(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.06(t，J＝8.4Hz，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.60(s，1H，Ar-H)，6.47(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，5.83(s，2H，CH＝CH)，4.36(s，2H，Ar-CH2)，3.45(s，2H，2×COCH)，3.13(s，2H，2×CH-CH＝CH)，1.13(s，2H，2×CH-CH2)，0.32(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值 for C25H22ClN3O3(M+1)448.9，測量值448.2。
實施例7 化合物7N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((異丁基(苯基)氨基)甲基)苯甲酰胺、 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成N-異丁基苯氨即可。產(chǎn)率87％；mp158-159℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ7.93(s，1H，Ar-H)，7.74(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.25(m，2H，Ar-H)，7.17(m，2H，Ar-H)，6.63(m，3H，Ar-H)，5.83(s，2H，CH＝CH)，4.62(s，2H，Ar-CH2)，3.45(s，2H，2×COCH)，3.23(d，J＝7.2Hz，2H，N-CH2)，3.13(s，2H，2×CH-CH＝CH)，2.15(m，1H，CH(CH3)2)，1.13(d，J＝3.6Hz，2H，2×CH-CH2)，0.96(d，J＝6.8Hz，6H，2×CH3)，0.31(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C29H31N3O3(M+1)470.7，測量值469.8。
實施例8 化合物8N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((乙基(苯基)氨基)甲基)苯甲酰胺 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成N-乙基-苯氨即可。合成方法同化合物1，產(chǎn)率90％；mp155-156℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ11.03(s，CONH)，7.83(m，2H，Ar-H)，7.35(m，2H，Ar-H)，7.10(m，2H，Ar-H)，6.61(m，3H，Ar-H)，5.78(s，2H，CH＝CH)，4.59(s，2H，Ar-CH2)，3.50(m，2H，CH2CH3)，3.29(m，4H，2×COCH，2×CH-CH＝CH)，1.13(m，5H，2×CH-CH2，CH3)，0.27(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C27H27N3O3(M+1)442.5，測量值442.3。
實施例9 化合物9N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((芐基(苯基)氨基)甲基)苯甲酰胺 合成方法基本同化合物1，只需將實施例步驟2)中的N-甲基哌嗪替換成N-芐基-苯氨即可。產(chǎn)率64％，mp162-163℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.13(s，1H，Ar-H)，7.76(m，2H，Ar-H)，7.31(m，6H，Ar-H)，7.17(m，2H，Ar-H)，6.71(m，3H，Ar-H)，5.83(s，2H，CH＝CH)，4.64(d，J＝5.6Hz，4H，2×Ar-CH2)，3.45(s，2H，2×COCH)，3.13(s，2H，2×CH-CH＝CH)，1.12(s，2H，2×CH-CH2)，0.31(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C32H29N3O3(M+1)504.6，測量值504.4。
實施例10 化合物10N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((4-氟苯氧基)甲基)苯甲酰胺 合成方法同化合物1，產(chǎn)率85％，mp189-191℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，CDCl3)δ8.03(s，1H，CONH)，7.83(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.48(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)，6.98(m，2H，Ar-H)，6.89(m，2H，Ar-H)，5.84(s，2H，CH＝CH)，5.07(s，2H，Ar-CH2)，3.46(s，2H，2×COCH)，3.14(s，2H，2×CH-CH＝CH)，1.13(s，2H，2×CH-CH2)，0.31(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C25H21N2O4(M+1)433.5，測量值433.4。
實施例11 化合物11N-(3，3a，4，4a，5，5a，6，6a十氫-1，3-二氧-4，6-亞乙烯基環(huán)丙f異吲哚-2(1H)-基)-4-((2-酮-3-(吡啶-4-基)咪唑-1-基)甲基)苯甲酰胺 合成方法同化合物1，產(chǎn)率32％，mp＞250℃。
結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)如下 1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ11.08(bs，1H，CONH)，8.40(d，J＝5.2Hz，2H，pyridine-H)，7.90(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.58(d，J＝6.4Hz，2H，Ar-H)，7.46(d，J＝8Hz，2H，pyridine-H)，5.80(s，2H，CH＝CH)，4.50(s，2H，Ar-CH2)，3.85(dd，J1＝2.4Hz，J2＝6.0Hz，2H，imidazolidin-CH2)，3.44(dd，J1＝8.4Hz，J2＝8.0Hz，2H，imidazolidin-CH2)，3.29(m，4H，2×COCH，2×CH-CH＝CH)，1.12(s，2H，2×CH-CH2)，0.26(m，2H，CH2). MS(Turbo Spray)m/z計算值C27H25N5O4(M+1)484.5，測量值484.3。
實施例12、式I化合物的體外抗HIV活性試驗 (1)實驗試劑 HIV-1菌株Bal(R5)由美國國立衛(wèi)生研究院艾滋病研究所提供；淋巴樣細胞系CEMX1745.25M7表達受體CD4和輔助受體CXCR4和CCR5用來檢測化合物的抗病毒活性。CEMx1745.25M7細胞在含有10％纖維蛋白原(FBS)、1μg/ml嘌羅霉素和200μg/ml G418的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
(2)抑制活性的測定方法 為了測定化合物對HIV-1Bal感染CEMx1745.25M7細胞的抑制活性，不同濃度梯度的50μl待測化合物在相同的HIV-1病毒量中，于37℃培養(yǎng)30分鐘。然后，加入100μl CEMx174 5.25M7細胞(5x105/ml)。在37℃培養(yǎng)整晚后，用不含化合物新鮮培養(yǎng)基替代現(xiàn)在的培養(yǎng)基。在細胞感染三天后，采集并溶解細胞，通過測定螢光活性來計算螢光酶活性抑制比例和IC50值。
(3)體外細胞毒性的測定方法 通過XTT試驗確定化合物對CEMx174 5.25M7細胞的體外細胞毒性。不同濃度梯度的100μL的待測化合物加入到相同體積的細胞中(5×105/mL)(96孔板)。在37℃培養(yǎng)4天后，向培養(yǎng)液中加入含有0.02μMPMS的1mg/mL XTT溶液50μL。培養(yǎng)4小時后，通過酶標儀測定450nm的吸光度，并通過CalcuSyn程序計算CC50值。
表1拮抗劑的抑制活性及毒性測定結(jié)果

a.IC50半數(shù)有效抑制濃度；b.CC50致半數(shù)細胞死亡所需濃度；c.ND不能測量。
c.選擇性指數(shù)；d.NR不能評價；e.陽性對照。
表1所列的11個化合物中，有9個化合物對HIV-1 Bal感染CEMx174 5.25M7細胞有抑制活性，其中化合物2半數(shù)有效抑制濃度達到0.41μM，其選擇性指數(shù)也高達291.68，因此，本發(fā)明化合物為新型HIV拮抗劑，可作為抑制HIV病毒復制的抑制劑。
權利要求
1.式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物；
其中，R為烷基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的烷基、取代的苯基或取代的雜芳基；
所述取代的烷基中的取代基選自下述任意一種烷氧基、環(huán)烷基、雜芳基、取代或未取代的苯氧基、取代的環(huán)烷基、取代的雜芳基和取代的氨基。
2.根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于所述R選自下述基團含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元環(huán)烷基，含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的雜芳基，含有至少一個成環(huán)氮原子的5-、6-、9-或10-元取代的或未取代的雜芳基烷基，被1個或2個相同或不同的下述基團取代的氨基烷基烷基、苯基、取代的苯基和芐基，和取代的苯氧基。
3.根據(jù)權利要求2所述的化合物，其特征在于所述R選自下述任意一種基團
4.制備式I所示化合物的方法，是以N，N-二異丙基乙胺為催化劑，使式VII所示的托烷酸酐與式VI所示的化合物在加熱回流的條件下進行反應，得到式I所示化合物；
式XII中，R為烷基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的烷基、取代的苯基或取代的雜芳基；所述取代的烷基中的取代基選自下述任意一種烷氧基、環(huán)烷基、雜芳基、取代或未取代的苯氧基、取代的環(huán)烷基、取代的雜芳基和取代的氨基。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于所述反應在有機溶劑中進行，所述有機溶劑為乙醇。
6.式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物在制備HIV-1抑制劑中的應用。
7.式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物在制備治療和/或預防艾滋病藥物中的應用。
8.一種治療和/或預防艾滋病藥物，其活性成分為式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物。
9.一種HIV-1抑制劑，其活性成分為式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有HIV拮抗活性的三環(huán)烯類化合物及其制備方法與應用。該化合物的結(jié)構(gòu)式如式I所示，其中，R為烷基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的烷基、取代的苯基或取代的雜芳基；所述取代的烷基中的取代基選自下述任意一種烷氧基、取代或未取代的苯氧基、環(huán)烷基、雜芳基、取代的環(huán)烷基、取代的雜芳基和取代的氨基。體外HIV-1感染的細胞模型測試活性表明，這些化合物是強效的HIV拮抗劑，可作為抑制HIV病毒復制的抑制劑，并可發(fā)展為抗艾滋病藥物。
文檔編號C07D209/70GK101775007SQ20101010169
公開日2010年7月14日 申請日期2010年1月26日 優(yōu)先權日2010年1月26日
發(fā)明者戴秋云, 董銘心, 彭旭清 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所