專利名稱：高純度梔子苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從桅子果實(shí)中提取純化制備高純度桅子 苷的方法。桅子為茜草科植物桅子Gardenia jasminoides Ellis.的干燥成熟果實(shí)。9-11 月果實(shí)成熟呈紅黃色時(shí)采收。除去果梗及雜質(zhì)，蒸至上汽或置沸水中略燙，取出，干燥[國 家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(2005年版一部)[S].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2005: 173]。性味苦寒，入心、肝、肺、胃、三焦，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒、消腫止痛之功 效。桅子中含有大量的環(huán)烯醚萜甙類化合物[王鋼力，陳德昌，趙淑杰.桅子屬植物化 學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，1996,21 ) :67-72]，包括京尼平苷、羥異桅子苷、京 尼平龍膽二糖苷、山桅子苷、桅子酮苷、雞屎藤次苷甲酯、車葉草苷、脫乙酰基車葉草苷酸、 脫乙?；嚾~草苷酸甲酯、桅子酸(京尼平苷酸)、香豆酰京尼平龍膽雙糖苷；有機(jī)酸類成 分，包括綠原酸、熊果酸、苦臧紅花酸；黃酮類成分桅子素A、桅子素B、桅子素C、桅子素D、 桅子素E、3，4，5-三甲氧基漢黃芩素、3，4_ 二甲氧基漢黃芩素、4-二羥基漢黃芩素、3，4_ 二 羥基漢黃芩素、3，4，5-三羥基漢黃芩素、5，7，3，4-四羥基-6，8- 二甲氧基黃酮等黃酮類化 合物。桅子苷(geniposide)是主要的環(huán)烯醚萜苷化合物，是桅子中的主要化學(xué)成分，藥理 學(xué)研究顯示桅子苷及其代謝物具有對肝臟、胰腺細(xì)胞的保護(hù)作用，可以促進(jìn)膽汁分泌、調(diào) 節(jié)胃機(jī)能、增加內(nèi)臟血流量，以及降壓、解熱、抗菌、抗炎、抗腫瘤等作用。其結(jié)構(gòu)式如下目前，國內(nèi)外用桅子果實(shí)制備桅子苷時(shí)多用傳統(tǒng)方法分離純化桅子苷，如硅膠柱 層析、氧化鋁柱層析和重結(jié)晶等方法。傳統(tǒng)的分離方法在制備過程中需要使用大量的有 毒有機(jī)試劑，容易造成環(huán)境污染。而王蘭采用現(xiàn)代分離技術(shù)制備型RP-HPLC從桅子藥材中 提取、分離桅子苷單體的完整方法。制備的桅子苷經(jīng)四譜(核磁共振、紅外光譜、紫外光 譜、質(zhì)譜，圖略)共同檢測，并同文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對照，確定純度最高可達(dá)到99.9%，符合標(biāo)準(zhǔn)物 質(zhì)的質(zhì)量要求[王蘭，張鑒.RP-HPLC制備色譜法分離桅子苷單體.中成藥.2003，25 (9) 764-765]。但其前處理時(shí)，需要最大限度除去其它成分，提高樣品溶液中桅子苷的含量，從 而增加了單元制備時(shí)間的制備量。使得制備樣品方法復(fù)雜，得率低，不適合大規(guī)模生產(chǎn)。大孔吸附樹脂是近十年來發(fā)展起來的一類有機(jī)高分子聚合物吸附劑，屬多孔性交
背景技術(shù)：
聯(lián)聚合物。它具有良好的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較高的比表面積，通過物理特性從水溶液中有選擇地 吸附有機(jī)物質(zhì)，從而達(dá)到分離提純的目的。另外它具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、吸附選擇性獨(dú) 特、不受無機(jī)物存在的影響、再生簡便、解吸條件溫和、使用周期長、節(jié)省費(fèi)用等諸多優(yōu)點(diǎn)， 廣泛用于中藥中化合物的分離純化。沈榮光[沈榮光，陳正行.桅子藥材中桅子苷的分離 純化.食品工業(yè)科技，2006，4 07) :123-127]用大孔吸附樹脂X-5柱色譜初步分離、富集桅 子提取液中的桅子苷，再經(jīng)過冷凍干燥得到純度為65.8%、得率91%的桅子苷。姚干通過 研究[姚干，何宗玉，方積年.大孔吸附樹脂純化桅子中總環(huán)烯醚萜苷和桅子苷的研究.中 草藥，2006，37(1) 57-61]認(rèn)為HPD450大孔吸附樹脂能有效富集并純化桅子總環(huán)烯醚萜 苷、桅子苷。呂茂平[呂茂平，喬慶彬，龐春燕，等.大孔樹脂對桅子苷分離效果的研究.中 草藥，2002，33 =794-796]等通過比較D301R、D396、D296和AB-8四種型號大孔樹脂對桅子 苷的吸附效果，發(fā)現(xiàn)D301R樹脂可用來分離桅子苷，但并未對桅子苷的制備工藝和桅子苷 的純度做進(jìn)一步報(bào)道研究。任治軍、何開澤等人比較了 H103、NKA-II、HPD100A、HPD400A及 D141等5種大孔吸附樹脂對桅子提取液中桅子黃色素和桅子苷的吸附性能。確定了用H103 和HPD100A兩種非極性大孔樹脂進(jìn)行桅子苷的分離純化，并確定了工藝參數(shù)，得到的桅子 苷純度達(dá)到81.3%，回收率為88. 5% [任治軍，何開澤，譚健，等.兩種大孔吸附樹脂結(jié)合 分離純化京尼平甙.離子交換與吸附，2006，22 O) :105-111] 0由此可見，目前研究中均是 采用大孔樹脂吸附技術(shù)純化制備桅子苷，但是單獨(dú)采用大孔樹脂吸附技術(shù)制備桅子苷，桅 子苷的純度均較低，需結(jié)合其他精制工藝作進(jìn)一步研究。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種制備工藝簡 單、低成本且對環(huán)境無污染的從桅子果實(shí)中制備高純度桅子苷的方法。本發(fā)明提供的高純度桅子苷的制備方法，包括如下步驟(1)制備桅子提取液取干燥桅子果實(shí)適量，浸泡后用水煎煮2-3次，每次加水 5-15倍量，每次1-1. 5h,濾過，合并濾液；將濾液濃縮至每ml含Ig生藥，加入95 %乙醇至濃 縮液含醇量為70%，離心，收集上清液，減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至每Iml含有0. 5g 生藥，該濃縮液即為桅子提取液；(2)純化將上述桅子提取液經(jīng)大孔吸附樹脂，大孔樹脂柱體積為1BV，先用IBV水 洗脫，棄去洗脫液；再用0% -30%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓干燥，得到純度為60-80% 的桅子苷粗提物；(3)精制上述桅子苷粗提物通過下述正丁醇萃取工藝或氧化鋁柱層析工藝精制 得到高純度桅子苷正丁醇萃取工藝取桅子苷粗提物適量，加入10-20倍量的水使之溶解，分別加入 正丁醇，萃取兩次，每次正丁醇用量為桅子苷粗提物的量的10-20倍，收集正丁醇萃取液， 回收正丁醇，干燥，得到純度高于90%的高純度桅子苷；氧化鋁柱層析工藝取適量粒徑為100-200目層析用中性氧化鋁，裝入玻璃柱中， 徑高比7 1-5 1，桅子苷粗提物的上樣量為氧化鋁用量的1/30，將其溶于少量的蒸餾水 中作為上樣液，將上樣液慢慢加入到氧化鋁層析柱中，上樣后用濃度為95%以上的乙醇沖 洗氧化鋁柱，洗脫液用量為6-15倍柱體積；收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，干燥，得到純度高于90%的高純度桅子苷。優(yōu)選地，本發(fā)明上述高純度桅子苷的制備方法之步驟O)中，大孔樹脂采用D301R 弱堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂，且大孔樹脂柱體積為1BV，桅子上樣液上樣量為1/;3BV， 水沖洗量為1BV，0% -30%的乙醇沖洗量為2-4BV。本發(fā)明根據(jù)桅子苷在環(huán)烯醚苷類成分中極性相對較弱的特點(diǎn)，采用大孔樹脂純化 桅子苷提取物時(shí)，先用大量的水洗去一些水溶性雜質(zhì)(色素、糖等)和極性大的環(huán)烯醚苷類 成分，再用0% -30%的乙醇選擇性洗脫桅子苷，可與弱極性的雜質(zhì)和成分分離。采用大孔 樹脂純化桅子苷工藝制備的桅子苷純度在60% -80%之間，要得到高純度的桅子苷，需結(jié) 合其他分離純化方法精制得高純度的桅子苷。本發(fā)明中桅子苷提取過程桅子苷提取率為70% -80% ；大孔樹脂吸附洗脫過程桅 子苷的轉(zhuǎn)移率為80% -85% ；氧化鋁柱層析工藝中桅子苷的轉(zhuǎn)移率為60-70% ；正丁醇萃 取工藝中桅子苷的轉(zhuǎn)移率為_75%。采用大孔樹脂吸附技術(shù)結(jié)合氧化鋁柱層析工藝 制備高純度桅子苷過程中，桅子苷的轉(zhuǎn)移率約為40-50%，采用大孔樹脂吸附技術(shù)結(jié)合正丁 醇萃取工藝制備高純度桅子苷過程中，桅子苷的轉(zhuǎn)移率為35% -45%。采用高效液相色譜 (HPLC)法測定該粉末中桅子苷的含量，純度按干燥品計(jì)高于92%。并進(jìn)行UV、MSJR分析， 與桅子苷標(biāo)準(zhǔn)品圖譜比對，進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，證明為桅子苷。采用本發(fā)明方法制備純度高于90%的桅子苷，制備工藝簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明中桅子苷精制品與桅子苷對照品紫外吸收光譜疊加圖。圖2為本發(fā)明中桅子苷精制品紅外光譜圖。圖3為本發(fā)明中桅子苷對照品紅外光譜圖。圖4為本發(fā)明中桅子苷對照品一級全掃描質(zhì)譜圖。圖5為本發(fā)明中桅子苷精制品一級全掃描質(zhì)譜圖。圖6為本發(fā)明中桅子苷對照品高效液相色譜圖。圖7為本發(fā)明中桅子苷精制品高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說 明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以對本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限 定的范圍。實(shí)施例11.制備桅子提取液取干燥桅子藥材IKg(桅子苷的含量為4. 23% )，用水浸泡 0. ，煎煮3次，每次加水10倍量，每次1. ，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1 1(每ml含 Ig生藥)，加入95%乙醇至濃縮液含醇量為70%，冷藏放置48h，離心，收集上清液，濾液減 壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至每Iml提取液中含有0. 5g生藥的濃縮液，提取液體積為2L， 即桅子提取液。2.大孔樹脂純化桅子苷取預(yù)處理好的大孔樹脂4. 4Kg裝入到墊有少許脫脂棉的玻璃柱中，待樹脂沉淀完全，使得樹脂柱的徑高比為1 7. 5，覆以脫脂棉少許于樹脂柱 上，大孔樹脂柱體積為6. 0L。取上述桅子提取液于玻璃柱頂端加入，以6. OL/h的流速上 樣。上樣完畢后，靜置吸附池，用6L的水沖洗大孔樹脂柱至流出液為無色，再以20%的乙 醇洗脫吸附于大孔樹脂上的桅子苷，洗脫溶劑用量為12L，收集20%乙醇沖洗液，減壓回收 乙醇，干燥，得淺黃色浸膏，即為桅子苷粗提物。桅子苷粗提物質(zhì)量為36. 5g，桅子苷的純度 為71%，桅子苷轉(zhuǎn)移率為61. 3%。3.桅子苷精制工藝正丁醇萃取取上述桅子苷粗提物適量，加730ml的水使之溶解，分別加入正丁醇 萃取兩次，每次正丁醇用量為730ml，收集正丁醇萃取液，干燥，得白色或淺黃色粉末狀桅子 苷。桅子苷成品為18. Sg。桅子苷精制品得率18.8%。采用高效液相色譜法測定桅子苷成品中桅子苷的含量，按照峰面積歸一化法計(jì)桅 子苷純度為98.0% ；按干燥品計(jì)，高效液相色譜法測定桅子苷的含量為92.0%。桅子苷得 率為 40.9%。HPLC 分析條件為Kromasil 100_5C18 ODS 色譜柱(5 μ m，4. 6mn^250mm)；乙 腈-0. 05%磷酸水溶液(15 85)為流動(dòng)相；流速:lml/min ；柱溫30°C;進(jìn)樣量:10μ 1 ；檢 測波長為238nm ；理論板數(shù)按桅子苷峰計(jì)暫定為不得低于1500。桅子苷對照品和桅子苷精 制品高效液相色譜圖如圖1、2所示。對桅子苷精制品進(jìn)行UV、MSUR分析(如圖2、5、7所 示)，與桅子苷標(biāo)準(zhǔn)品圖譜(如圖3、4、6所示)比對，進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，確定為桅子苷。實(shí)施例21.制備桅子提取液取干燥桅子藥材IKg(桅子苷的含量為4. 23% )，用水浸泡 0. ，煎煮3次，每次加水10倍量，每次1. ，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1 1(每ml含 Ig生藥)，加入95%乙醇至濃縮液含醇量為70%，冷藏放置48h，離心，收集上清液，濾液減 壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至每Iml提取液中含有0. 5g生藥的濃縮液，提取液體積為2L， 即桅子提取液。2.大孔樹脂純化桅子苷取預(yù)處理好的大孔樹脂4. 4Kg裝入到墊有少許脫脂棉的 玻璃柱中，待樹脂沉淀完全，使得樹脂柱的徑高比為1 7. 5，覆以脫脂棉少許于樹脂柱上， 大孔樹脂柱體積為6. OL0取上述桅子提取液于玻璃柱頂端加入，以6. OL/h的流速上樣。上 樣完畢后，靜置吸附2h，用6L的水沖洗大孔樹脂柱至流出液為無色，再以水洗脫吸附于大 孔樹脂上的桅子苷，洗脫溶劑用量為18L，收集20%乙醇沖洗液，減壓回收乙醇，干燥，得淺 黃色浸膏，即為桅子苷粗提物。桅子苷粗提物質(zhì)量為34. 3g，桅子苷的純度為73. 1%，桅子 苷轉(zhuǎn)移率為57.6%。3.桅子苷精制工藝氧化鋁柱層析取層析用中性氧化鋁(100-200目)347g，裝入玻璃柱中，徑高比 5 1，取上述桅子苷粗提物，將其溶于少量的蒸餾水中作為上樣液，將上樣液慢慢加入到 氧化鋁層析柱中，上樣后用95%乙醇沖洗氧化鋁柱，洗脫液用量為2. 2L。收集乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，干燥，得淺黃色或黃色桅子苷粉末。桅子苷成品為17. lg。采用高效液相色譜法測定桅子苷成品中桅子苷的含量，按照峰面積歸一化法計(jì)桅 子苷純度為98. 0% ；按干燥品計(jì)，高效液相色譜法測定桅子苷的純度為92. 3%。桅子苷轉(zhuǎn) 移率為 37.3%。HPLC 分析條件為Kromasil 100_5C180DS 色譜柱(5 μ m，4. 6mm*250mm)；乙 腈-0. 05%磷酸水溶液(15 85)為流動(dòng)相；流速:lml/min ；柱溫30°C;進(jìn)樣量:10μ 1 ；檢測波長為238nm ；理論板數(shù)按桅子苷峰計(jì)暫定為不得低于1500。對桅子苷精制品進(jìn)行UV、 MS、頂分析(如圖2、5、7所示)，與桅子苷標(biāo)準(zhǔn)品圖譜(如圖3、4、6所示)比對，進(jìn)行結(jié)構(gòu) 分析，確定為桅子苷。
權(quán)利要求
1.一種高純度桅子苷的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟(1)制備桅子提取液取干燥桅子果實(shí)適量，按常規(guī)浸泡后水煎提取，水煎液濾過，合 并濾液；將濾液濃縮，濃縮液中加入乙醇醇沉，靜置，收集上清液，減壓回收乙醇至無醇味， 濃縮，該濃縮液即為桅子提取液；(2)純化將上述桅子提取液過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，棄去水洗脫液；再用低 濃度的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓干燥，得到純度為60-80%的桅子苷粗提物；(3)精制上述桅子苷粗提物通過下述正丁醇萃取工藝或氧化鋁柱層析工藝精制得到 高純度桅子苷正丁醇萃取工藝取桅子苷粗提物適量，加-水使之溶解，分別加入正丁醇，萃取兩 次，-收集正丁醇萃取液，回收正丁醇，干燥，得到純度高于90%的高純度桅子苷；氧化鋁柱層析工藝取適量層析用中性氧化鋁，裝入玻璃柱中，桅子苷粗提物溶于少量 的蒸餾水中作為上樣液，將上樣液慢慢加入到氧化鋁層析柱中，上樣后用濃度為95%以上 的乙醇沖洗氧化鋁柱，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，干燥，得到純度高于90 %的高純度 桅子苷。
2.按權(quán)利要求1所述的高純度桅子苷的制備方法，其特征在于，提取時(shí)，步驟(1)中，水 煎提取時(shí)水用量為5-15倍量，煎煮時(shí)間為1-1.證，煎煮次數(shù)為2-3次。醇沉過程中水提液 濃縮至每ml含1-1. 5g生藥的濃縮液，乙醇醇沉濃度為60-70%乙醇，靜置M-48小時(shí)，收集 上清液，減壓回收乙醇至無醇味，最后濃縮至每Iml含有0. 5-lg生藥的濃縮液。
3.按權(quán)利要求1所述的高純度桅子苷的制備方法，其特征在于，大孔樹脂純化時(shí)，步驟 (2)中，大孔樹脂采用D301R弱堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂。大孔樹脂純化過程中，設(shè)大 孔樹脂柱體積為1BV，桅子上樣液上樣量范圍為1/3-1/2BV，水沖洗量為0. 8-1BV，低濃度乙 醇的沖洗量為2-4BV，濃度為0^-30 ^
4.按權(quán)利要求1所述的高純度桅子苷的制備方法，其特征在于，精制時(shí)，步驟(3)之正 丁醇萃取工藝中，正丁醇用量為桅子苷粗提物的量的10-20倍。
5.按權(quán)利要求1所述的高純度桅子苷的制備方法，其特征在于，精制時(shí)，步驟(3)之 氧化鋁柱層析工藝中，氧化鋁采用100-200目層析用中性氧化鋁，氧化鋁柱徑高比范圍為 7:1-5: 1，桅子苷粗提物的上樣量范圍為氧化鋁用量的1/10-1/15，上樣后沖洗液乙醇濃 度為90-95%，洗脫液用量范圍為6-15倍柱體積。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從梔子果實(shí)中提取純化制備高純度梔子苷的方法，該方法采用水提醇沉法制備梔子提取物，采用大孔樹脂吸附洗脫技術(shù)純化制備梔子苷粗提物，再采用氧化鋁柱層析技術(shù)或正丁醇萃取技術(shù)精制梔子苷得高純度梔子苷。本發(fā)明制備方法操作簡單，成本低廉，產(chǎn)品純度高、得率高，不污染環(huán)境，適合工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C07H1/08GK102146109SQ201010105540
公開日2011年8月10日 申請日期2010年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月4日
發(fā)明者丁越, 尹勝利, 張彤, 李婷, 黃孝春 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)