專利名稱：一種伐普肽的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多肽的純化方法，尤其涉及伐普肽的純化方法。
背景技術(shù)：
伐普肽(vapreotide)是一種用于治療前列腺癌、肢端肥大癥等病癥的多肽藥物，其效果較好且副作用小，具有很好的市場前景。在已發(fā)表的文獻和專利中，未有大規(guī)模生產(chǎn)、并且具有較高收率的純化工藝報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提出了一條適于產(chǎn)業(yè)化純化伐普肽的工藝方法，純度高且收率好，達到產(chǎn)業(yè)化要求。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟 1)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以pH值為3. 0-4. 5的醋酸鹽緩沖溶液為A
相，乙腈為B相，梯度B% :20 % 40%，將粗肽溶液進行梯度洗脫； 所述"粗肽"是指采用液相合成法或固相合成法得到的，尚未經(jīng)過精制處理的伐普肽粗肽或者純度不能滿足藥用的伐普肽。A相醋酸鹽緩沖溶液的pH值優(yōu)選3. 5 ;"粗肽溶液"是指粗肽溶于純凈水所得到的溶液，純凈水符合注射用水標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選超純水。優(yōu)選"乙腈"的純度級別優(yōu)選色譜純，即乙腈為色譜純乙腈。步驟l)也稱第一步純化。
2)采用反相高效液相色譜法將其轉(zhuǎn)成醋酸鹽。 轉(zhuǎn)成醋酸鹽的方法優(yōu)選，"反相高效液相色譜"的固定相為八烷基硅烷鍵合硅膠，醋酸水溶液為A相，其中A相的醋酸水溶液濃度小于0.2X，優(yōu)選濃度為0. 1X;乙腈為B相梯度BX :10% 40%，進行梯度洗脫。優(yōu)選"乙腈"的純度級別優(yōu)選色譜純，即乙腈為色譜純乙腈。步驟1)也稱轉(zhuǎn)鹽。 純化規(guī)模包括以下規(guī)格色譜柱50mmX250mm(柱子直徑X長度)、150mmX 250mm、300mmX250mm。 采用本發(fā)明提供的方法純化伐普肽操作簡單可行、純度可達98%以上、收率好，達到產(chǎn)業(yè)化要求。
具體實施方式
實施例一 1.樣品處理粗肽為超純水溶解，溶液用濾膜過濾，收集濾液備用。
2.第一次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，
柱子直徑和長度為50mmX250mm。流動相A相0. 2%醋酸溶液用氨水調(diào)pH至3. 0 ;B相乙腈，流速70-80ml/min。檢測波長230nm。梯度B% :20% 40% (洗脫時間45min)。進樣量為1.3-1.5g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為1. 3-1. 5g。線性梯度洗脫45min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液于水溫不超過32t:下減壓旋蒸濃縮至約70 80mg/ml后備用。 3、轉(zhuǎn)鹽純化條件色譜柱以八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為50mmX250mm。流動相A相0. 1 %醋酸水溶液；B相色譜純乙腈。流速70-80ml/min。檢測波長230nm。梯度B% : 10 % 40 % (洗脫時間30min)。進樣量為1. 5-2. Og。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為150-200ml樣品溶液。線性梯度洗脫30min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液合并旋蒸濃縮至約5-8mg/ml，然后轉(zhuǎn)至合適大小容器進行冷凍干燥，即可得到純度大于98. 0%的伐普肽。純化收率57%。 實施例二 1.樣品處理粗肽為超純水溶解，溶液用濾膜過濾，收集濾液備用。
2.第一次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，
柱子直徑和長度為150mmX250mm。流動相A相0. 2%醋酸溶液用氨水調(diào)pH至3. 5 ;B相乙腈，流速450-550ml/min。檢測波長230nm。梯度:B%:20% 40% (洗脫時間45min)。進樣量為13-15g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為13-15g。線性梯度洗脫45min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液于水溫不超過32。C下減壓旋蒸濃縮至約70-80mg/ml后備用。
3、轉(zhuǎn)鹽純化條件色譜柱以八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直
徑和長度為150mmX250mm。流動相A相0. 1%醋酸水溶液；B相色譜純乙腈。流速450-550ml/min。檢測波長280nm。梯度B% :10% 40% (洗脫時間30min)。進樣量為15-20g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為1200-1600ml樣品溶液。線性梯度洗脫30min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液合并旋蒸濃縮至約5-8mg/ml，然后轉(zhuǎn)至合適大小容器進行冷凍干燥，即可得到純度大于98. 0%的伐普肽，純化收率65%。
實施例三 1.樣品處理粗肽為超純水溶解，溶液用濾膜過濾，收集濾液備用。
2.第一次純化純化條件色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為300mmX250mm。流動相A相0. 2 %醋酸溶液用氨水調(diào)pH至4. 5 ;B相乙腈。流速1900-2200ml/min。檢測波長230nm。梯度B% :20% 40% (洗脫時間60min)。進樣量為55_75g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后平衡上樣，上樣量為55-75g。線性梯度洗脫60min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液于水溫不超過32t:下減壓旋蒸濃縮至約70-80mg/ml后備用。 3、轉(zhuǎn)鹽純化條件色譜柱以八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，柱子直徑和長度為300mmX250mm。流動相A相0. 1%醋酸水溶液；B相色譜純乙腈。流速1900-2200ml/min。檢測波長230nm。梯度B% :10% 40% (洗脫時間45min)。進樣量為55-75g。 純化過程將色譜柱用50%以上的乙腈沖洗干凈后上樣，上樣量為1200-1600ml 樣品溶液。線性梯度洗脫45min，收集目的峰，將收集的伐普肽溶液合并旋蒸濃縮至約 5-8ml/g，然后轉(zhuǎn)至合適大小容器進行冷凍干燥，即可得到純度大于98. 0%的符合標(biāo)準(zhǔn)的伐 普肽，純化收率62%。
權(quán)利要求
一種伐普肽的純化方法，包括以下步驟1)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以pH值為3.0-4.5的醋酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，梯度B％20％～40％，將粗肽溶液進行梯度洗脫；2)采用反相高效液相色譜法將其轉(zhuǎn)成醋酸鹽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于步驟l)A相的醋酸鹽緩沖溶液通過將醋酸溶液利用氨水調(diào)PH配制而成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述方法，其特征在于步驟l)A相的醋酸鹽緩沖溶液pH應(yīng)為 3. 5 4. 5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于步驟1) A相的醋酸鹽緩沖溶液pH應(yīng)為 3. 5 4. 5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項所述方法，其特征在于步驟2)反相高效液相色譜的固定相為八烷基硅烷鍵合硅膠，醋酸水溶液為A相，乙腈為B相梯度B % : 10 % 40 % ，進行梯度洗脫，其中A相的醋酸水溶液濃度小于0. 2%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于A相的醋酸水溶液濃度為0. 1%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項所述方法，其特征在于乙腈為色譜純乙腈。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于乙腈為色譜純乙腈。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述方法，其特征在于乙腈為色譜純乙腈。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種伐普肽的純化方法，包括以下步驟1)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以pH值為3.0-4.5的醋酸鹽緩沖溶液為A相，乙腈為B相，梯度B％20％～40％，將粗肽溶液進行梯度洗脫；2)采用反相高效液相色譜法將其轉(zhuǎn)成醋酸鹽。本發(fā)明的方法純度高且收率好，達到產(chǎn)業(yè)化要求，為大量純化制備伐普肽原料藥提供了一種有效純化工藝。
文檔編號C07K1/20GK101787071SQ20101011637
公開日2010年7月28日 申請日期2010年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月26日
發(fā)明者袁建成, 覃亮政, 趙忠衛(wèi), 馬亞平 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司