專利名稱：三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，是以動(dòng)物血為原料，應(yīng)用現(xiàn)代生物過程集成化技術(shù)，在同一生產(chǎn)工藝流程中，可生產(chǎn)出血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶 (SOD) 3種功能成份，并以這3種成份為主要原料，通過合理配方制成一種三聯(lián)復(fù)合免疫增 強(qiáng)劑，可廣泛應(yīng)用于人類和動(dòng)物醫(yī)藥治療、預(yù)防保健業(yè)。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到許多疾病的發(fā) 生、發(fā)展與機(jī)體免疫系統(tǒng)功能缺陷和功能失調(diào)有著密切的聯(lián)系。影響機(jī)體正常免疫系統(tǒng)功 能的原因有①各種先天或后天自身免疫功能缺陷；②各種急慢性細(xì)菌、病毒感染 ’③人為 因素，環(huán)境因素、藥物引發(fā)的不良反應(yīng)等原因?qū)е碌睦^發(fā)性免疫功能下降。針對(duì)以上原因， 調(diào)節(jié)或增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，已成為預(yù)防和治療疾病的重要途徑。血清胸腺因子(英文縮寫FTS)，是一種九肽，即由九個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成一級(jí)結(jié)構(gòu) 的小分子肽，分子量為857。大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究均已證明血清胸腺因子(FTS)是促進(jìn)淋 巴細(xì)胞分化并增強(qiáng)其功能的重要因子，它具有激發(fā)免疫細(xì)胞活性、調(diào)節(jié)免疫功能、增強(qiáng)機(jī)體 非特異性細(xì)胞免疫等作用，且分子量小、無毒、無抗原性、不引起過敏反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。部分實(shí)驗(yàn) 文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)在抗腫瘤方面，用FTS2. 5mg或1. 25mg劑量均可以明顯增強(qiáng)和恢復(fù)實(shí)驗(yàn)小鼠NK 細(xì)胞對(duì)舯瘤細(xì)胞的殺傷作用，而且使用的高劑量也比胸腺肽要小50多倍，大大減小了藥物 的副作用。因而，血清胸腺因子作為一種新型而又安全的免疫制劑廣泛應(yīng)用于人類和動(dòng)物 疾病防治。是一種很有開發(fā)和應(yīng)用前景的生物產(chǎn)品。免疫球蛋白(IG)是直接參與免疫反應(yīng)的抗體蛋白的總稱。動(dòng)物血內(nèi)含有大量免 疫球蛋白，是體液免疫的主要物質(zhì)，它能凝集細(xì)菌、中和細(xì)菌毒素，并能在體內(nèi)其他因素的 參與下徹底殺死細(xì)菌和病毒，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，預(yù)防消化道等疾病，促進(jìn)營養(yǎng)吸收。據(jù)有關(guān)資料報(bào)導(dǎo)，美國一家公司與新西蘭合作，用免疫的方法使乳牛產(chǎn)生富含免 疫球蛋白的牛奶，生產(chǎn)出一種功能性奶粉，經(jīng)體外試驗(yàn)，其中所含的免疫球蛋白可對(duì)抗人體 24種常見致病菌和病毒。免疫球蛋白可作為嬰幼兒食品添加劑，促進(jìn)嬰幼兒營養(yǎng)吸收、增強(qiáng) 免疫力。同時(shí)，免疫球蛋白也可以作為幼畜飼料添加劑，特別是集約化養(yǎng)殖基地，將免疫球 蛋白應(yīng)用于早期斷奶幼畜，可減少幼畜疾病，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。超氧化物歧化酶英文縮寫為S0D，是從動(dòng)物或植物中提取出的一種酶蛋白。它能有 效地清除超氧陰離子自由基，具有保護(hù)機(jī)體免疫功能受損傷的作用。其主要藥理作用是抗 衰老、抗輻射、抗炎癥、抗腫瘤等。研究表明，生物機(jī)體在生命活動(dòng)中由于各種原因會(huì)產(chǎn)生大 量的自由基，尤其是超氧陰離子自由基，其化學(xué)性質(zhì)活潑，有極高的氧化性能，機(jī)體的衰老、 病變和輻射傷害都同自由基的大量存在有關(guān)。SOD具有及時(shí)清除體內(nèi)超氧陰離子自由基的 作用，它使機(jī)體保持正常的生理狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體處于疾病狀態(tài)時(shí)，體內(nèi)產(chǎn)生的自由基會(huì)越來越 多，而SOD含量卻越來越少，因此及時(shí)向體內(nèi)補(bǔ)充SOD是保證機(jī)體健康和促進(jìn)疾病痊愈的必 要途徑。SOD的臨床應(yīng)用，目前國內(nèi)外主要集中在抗輻射、抗腫瘤、抗衰老及治療自身免疫性疾病。SOD還可作為罐頭食品、啤酒、果汁、飼料等產(chǎn)品的天然抗氧劑，防止食品變質(zhì)及腐 敗，又可作為食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑。目前生產(chǎn)血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶的方法很多，但將3者科學(xué) 配方制成一種既能提高機(jī)體體液免疫又能提高細(xì)胞免疫的復(fù)合免疫增強(qiáng)劑產(chǎn)品至今未見 報(bào)導(dǎo)。三聯(lián)免疫增強(qiáng)劑中含有的這三種生物活性成份，均為人和動(dòng)物機(jī)體內(nèi)重要的免疫功 能成份，正常情況下，它們?cè)隗w內(nèi)相輔相成地共存，使機(jī)體保持正常的生理狀態(tài)。當(dāng)由于種 種原因遭受到侵害時(shí)，這三種活性成份的含量會(huì)顯著降低，致使機(jī)體處于低免疫功能狀態(tài) 而發(fā)病。因此，及時(shí)向體內(nèi)補(bǔ)充血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶三種具有不同 免疫功能的生物活性成份是預(yù)防和治療疾病的有效途徑?？芍饕糜隗w弱幼兒、老人、病人 和動(dòng)物體液免疫、細(xì)胞免疫的雙向調(diào)節(jié)及保健，并能有效地清除體內(nèi)超氧陰離子自由基，具 有保護(hù)機(jī)體免疫功能受損傷的作用。動(dòng)物血中含有豐富的生物活性物質(zhì)，特別是富含免疫球蛋白、血清胸腺因子和超 氧化物歧化酶。動(dòng)物血資源豐富，以豬為例，我國每年屠宰生豬近5億頭，以此推算，每年至 少有450萬噸豬血資源待充分開發(fā)利用，提高其附加值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而研制的一種三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑及 其制備方法，本發(fā)明以動(dòng)物血為資源，應(yīng)用現(xiàn)代生物集成化技術(shù)，采用聯(lián)產(chǎn)工藝，同時(shí)提取 出血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(IG)和超氧化物歧化酶(SOD)，經(jīng)科學(xué)配方制成復(fù)合免 疫增強(qiáng)劑，可使制作成本大大降低，也可在對(duì)抗甲型Him流感等病毒中會(huì)獲得相應(yīng)的市場(chǎng) 空間，具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明所依據(jù)的技術(shù)原理是動(dòng)物血中富含F(xiàn)TS、IG、S0D等成份，依據(jù)它們具有不 同的結(jié)構(gòu)、分子量、等電點(diǎn)、理化特性、生物活性等，應(yīng)用鹽溶、鹽析、透析、超濾、層析等現(xiàn)代 生化技術(shù)和生物集成技術(shù)，制定出適合工業(yè)化生產(chǎn)的聯(lián)產(chǎn)工藝。本發(fā)明依據(jù)免疫球蛋白的 功能主要是提高機(jī)體體液免疫能力，血清胸腺因子的功能主要是提高機(jī)體細(xì)胞免疫能力的 不同免疫機(jī)理，它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)作用途徑不同但具有相輔相成的協(xié)調(diào)作用，SOD具有及時(shí)清除 體內(nèi)超氧陰離子自由基的作用，它使機(jī)體保持正常的生理狀態(tài)，同時(shí)SOD具有抗氧化和保 鮮作用，將這3種成份科學(xué)配比，制成三聯(lián)免疫增強(qiáng)劑產(chǎn)品，各成分配伍合理，相互協(xié)同，功 能更強(qiáng)，目前未見文獻(xiàn)報(bào)道。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化 物歧化酶(SOD)配制而成，增強(qiáng)劑中含有三種物質(zhì)的有效成分如下血清胸腺因子(FTS)每毫升FTS含量10ug-100ug免疫球蛋白(Ig)每毫升IG含量2mg-10mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性100U-500U。本發(fā)明的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，包括以下步驟1)分別將血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶 (S0D)精制液放45-57°C的水浴鍋中加熱30-60分鐘除熱原，待降至室溫后放在冰箱冷藏室 1-2周后離心分別取其上清液；
2)分別檢測(cè)FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，按有效成分含量配比將三者混 合；3)用生物膜除菌；4)在混合液中加穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑為甘露醇或木糖醇，加入量為混合液體積的 5-20%。本發(fā)明所述血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化 酶(SOD)精制液是通過以下聯(lián)產(chǎn)工藝制備的1)取新鮮動(dòng)物血(如豬血、牛血或羊血)。加抗凝劑，離心，分別收集血漿和血球；2)將血漿按體積加硫酸銨至飽和度50-70%，待硫酸銨完全溶解后，靜置1_2小 時(shí)，過濾或離心，收集上清液(I)和沉淀，沉淀經(jīng)超濾透析脫鹽即得免疫球蛋白粗品液；3)將上清液(I)先通過截留分子量6000的超濾裝置系統(tǒng)，分別收集截留液(I)和 透析液⑴；4)將透析液(I)通過截留分子量1000的超濾裝置系統(tǒng)，收集透析液(II)，透析液 (II)即為血清胸腺因子粗品液；5)將血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分別通過超濾、層析純化系統(tǒng)，制 成免疫球蛋白精制液和血清胸腺因子精制液；6)將血球加等體積去離子水，攪拌，使紅血球充分溶血，然后按體積加硫酸銨至飽 和度60-70%，攪拌、靜置，離心，收集離心液和沉淀。向離心液中依次加入離心液體積0. 15 倍的乙醇、0. 08倍的氯仿，攪拌，水浴加熱至60-65度，保溫10-15分鐘，離心，收集離心液， 即得SOD粗品溶液，通過層析純化進(jìn)一步制成精品；7)上述3)步驟中的截留液(I)、和6)步驟中的沉淀為雜蛋白，將其混合，經(jīng)加熱 變性、脫鹽處理即得動(dòng)物蛋白飼料。本發(fā)明創(chuàng)新點(diǎn)如下1、本發(fā)明將血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶3種成份科學(xué)配比，制成 一種三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑產(chǎn)品，具有生產(chǎn)成本低、使用方便，應(yīng)用領(lǐng)域廣泛等特點(diǎn)，且各成 分配伍合理，相互協(xié)同，功能更強(qiáng)，目前未見有文獻(xiàn)報(bào)道。該產(chǎn)品為純天然生物制劑，可顯著 提高人和動(dòng)物機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，并能有效地清除體內(nèi)超氧陰離子自由基， 具有保護(hù)機(jī)體免疫功能受損傷的作用，可廣泛應(yīng)用于人和動(dòng)物真菌、細(xì)菌、病毒性疾病的預(yù) 防和治療。特別對(duì)解決當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)存在濫用抗生素預(yù)防疾病的問題是一項(xiàng)有效措施。我們將三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑試制品於2008年-2009年先后經(jīng)鄭州德福恩生物技 術(shù)有限公司、鄭州諾必隆生物科技有限公司、鄭州炎黃動(dòng)物保健品有限公司應(yīng)用于動(dòng)物保 鍵和疾病治療試驗(yàn)均取得顯著效果；如將其口服液應(yīng)用于初生仔豬(每頭5-10毫升)和斷 奶仔豬(每頭10-20毫升)，在仔豬成活率、日增重、防治腹瀉等方面明顯高于目前傳統(tǒng)保 鍵法(每頭仔豬注射三次抗生素預(yù)防疾病)；配合疫苗應(yīng)用于預(yù)防雞新城疫，給3日齡雛雞 每只飲用0. 2-0. 5毫升，連用3-7天，保護(hù)率高達(dá)97. 3%，經(jīng)檢測(cè)可顯著提高雛雞外周血液 T淋巴細(xì)胞百分率，免疫器官脾和法氏囊的相對(duì)濕重明顯增加。在人的保鍵方面，我們選了 約50多個(gè)自愿者用口服液(大部分是60歲以上老人、兒童和癌癥化療患者)，一般每人每 次10毫升(兒童2-5毫升)，一日1-2次，連用一周(化療患者1-3個(gè)月)，在防治感冒、腹 瀉、無名高燒、減輕化療副反應(yīng)等方面反應(yīng)良好，無一人出現(xiàn)不良反應(yīng)。
2、該工藝采用傳統(tǒng)工藝與現(xiàn)代工藝相結(jié)合，簡(jiǎn)易設(shè)備與現(xiàn)代設(shè)備相結(jié)合，可操作 性強(qiáng)，規(guī)?？纱罂尚?，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟(jì)效益顯著。3、本發(fā)明工藝對(duì)提取血清胸腺因子、免疫球蛋白、超氧化物歧化酶后的廢液和廢 渣，采取加熱變性、脫鹽、干燥處理制成優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物蛋白飼料，有效解決了廢料的排放問題。 做到了綠色環(huán)保。


附圖為本發(fā)明三種原料的聯(lián)產(chǎn)工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明以下結(jié)合附圖將具體實(shí)施方式
描述如下1、取新鮮豬血(也可為牛血或羊血)加抗凝劑，離心，分別收集血漿和血球。2、將血漿按體積加硫酸銨至飽和度60 %，待硫酸銨完全溶解后，靜置2小時(shí)，過濾 或離心，收集濾液(I)和沉淀，沉淀經(jīng)透析脫鹽即得免疫球蛋白粗品溶液；3、將濾液(I)先通過截留分子量6000的超濾裝置系統(tǒng)，分別收集截留液(I)和透 析液(I)，4、將透析液(I)通過截留分子量1000的超濾裝置系統(tǒng)，分別收集截留液和透析液 (II)，透析液(II)即為血清胸腺因子粗品液。5、將血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分別通過層析純化系統(tǒng)，制成免疫 球蛋白精制液和血清胸腺因子精制液；6、將血球加等體積去離子水，攪拌，使紅血球充分溶血，然后按體積加硫酸銨至飽 和度65%，攪拌、靜置，離心，收集離心液和沉淀。向離心液中依次加入離心液體積0. 15倍 的乙醇、0. 08倍的氯仿，攪拌，水浴加熱至65度，保溫10分鐘，離心，收集離心液，即得SOD 粗品溶液，通過層析純化進(jìn)一步制成精品。7、上述3步驟中的截留液(I)和6步驟中的沉淀為雜蛋白，將其混合，經(jīng)加熱變 性、脫鹽處理即得動(dòng)物蛋白飼料，8、三聯(lián)免疫增強(qiáng)劑生產(chǎn)步驟(1)除熱源分別將FTS、IG和SOD精制液放45°C的水浴鍋中加熱40分鐘除熱原，待降至室溫 后放在冰箱冷藏室一周后離心分別取其上清液。(2)配比分別檢測(cè)FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，復(fù)合增強(qiáng)劑中各成分按 以下含量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配比血清胸腺因子(FTS) 每毫升FTS含量50ug免疫球蛋白(Ig)每毫升IG含量5mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性200U(3)生物膜除菌選擇生物濾膜，將FTS、IG、S0D復(fù)合配比液先用0. 65 y m的濾膜粗濾，再用0. 22 y m
的濾膜除菌。(4)加穩(wěn)定劑-木糖醇，加入量為藥液體積的10%。
(5)制作成品根據(jù)市場(chǎng)需求選擇合適規(guī)格的瓶消毒滅菌灌裝成口服液，也可經(jīng) 冷凍干燥制成粉劑或膠囊。
權(quán)利要求
一種三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，其特征在于該免疫增強(qiáng)劑由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶(SOD)配制而成，增強(qiáng)劑中含有這三種物質(zhì)的有效成份配比如下血清胸腺因子(FTS)每毫升FTS含量10ug-100ug免疫球蛋白(Ig) 每毫升IG含量2mg-10mg超氧化物歧化酶(SOD) 每毫升酶活性100U-500U。
2. —種權(quán)利要求1所述的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)分別將血清胸腺因子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶 (SOD)精制液放45-57°C的水浴鍋中加熱30-60分鐘除熱原，待降至室溫后放在冰箱冷藏室 1-2周后離心分別取其上清液；2)分別檢測(cè)FTS、IG、SOD精制液中有效成分含量，按有效成分含量配比將三者混合；3)用生物膜除菌；4)在混合液中加穩(wěn)定劑，加入量為藥液體積的5-20%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于血清胸腺因 子(FTS)精制液、免疫球蛋白(Ig)精制液、超氧化物歧化酶(SOD)精制液是通過以下聯(lián)產(chǎn) 工藝制備的1)取新鮮動(dòng)物血加抗凝劑，離心，分別收集血漿和血球；2)將血漿按體積加硫酸銨至飽和度50-70%，待硫酸銨完全溶解后，靜置1-2小時(shí)，過 濾或離心，收集上清液(I)和沉淀，沉淀經(jīng)超濾透析脫鹽即得免疫球蛋白粗品液；3)將上清液(I)先通過截留分子量6000的超濾裝置系統(tǒng)，分別收集截留液(I)和透析 液⑴；4)將透析液(I)通過截留分子量1000的超濾脫鹽濃縮系統(tǒng)，收集透析液(II)，透析液 (II)即為血清胸腺因子粗品液；5)將血清胸腺因子粗品液和免疫球蛋白粗品液分別通過層析純化系統(tǒng)，制成免疫球蛋 白精制液和血清胸腺因子精制液；6)將血球加等體積去離子水，攪拌，使紅血球充分溶血，然后按體積加硫酸銨至飽和度 60-70%，攪拌、靜置，離心，收集離心液和沉淀，向離心液中依次加入離心液體積0. 15倍的 乙醇、0. 08倍的氯仿，攪拌，水浴加熱至60-65度，保溫10-15分鐘，離心，收集離心液，即得 SOD粗品溶液，通過超濾、層析進(jìn)一步純化成精品；7)上述3)步驟中的截留液(I)和6)步驟中的沉淀為雜蛋白，將其混合，經(jīng)加熱變性、 脫鹽處理即得動(dòng)物蛋白飼料。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于所述穩(wěn)定劑 為甘露醇或木糖醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于所述動(dòng)物血 為豬血、牛血或羊血。血清胸腺因子(FTS) 免疫球蛋白(Ig) 超氧化物歧化酶(S0D)每毫升FTS含量10ug-100ug 每毫升IG含量2mg-10mg 每毫升酶活性100U-500U。
全文摘要
一種三聯(lián)復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，由血清胸腺因子(FTS)、免疫球蛋白(Ig)、超氧化物歧化酶(SOD)配制而成。本發(fā)明以動(dòng)物血為資源，應(yīng)用現(xiàn)代生物集成化技術(shù)，采用聯(lián)產(chǎn)工藝，同時(shí)提取出FTS、IG和SOD，經(jīng)科學(xué)配方制成復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，可應(yīng)用于人和動(dòng)物保健和疾病防治，具有生產(chǎn)成本低、使用方便，應(yīng)用領(lǐng)域廣泛等特點(diǎn)，且各成分配伍合理，相互協(xié)同，功能更強(qiáng)。該工藝采用傳統(tǒng)工藝與現(xiàn)代工藝相結(jié)合，簡(jiǎn)易設(shè)備與現(xiàn)代設(shè)備相結(jié)合，可操作性強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，且有效解決了廢料的排放問題，做到了綠色環(huán)保，具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)C07K1/36GK101797384SQ20101011957
公開日2010年8月11日 申請(qǐng)日期2010年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月9日
發(fā)明者吳學(xué)軍, 張俊英, 李海波, 王德亮, 王斌 申請(qǐng)人:張俊英