專利名稱：一種制備去氧鬼臼毒素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于原料藥品制備領(lǐng)域，涉及一種制備去氧鬼臼毒素的方法。
背景技術(shù)：
去氧鬼白毒素為強(qiáng)毒性植物成分，可用于生產(chǎn)抗癌藥物或生物農(nóng)藥。目前尚未見 高純度去氧鬼臼毒素銷售，所有文獻(xiàn)報(bào)道的作者所用去氧鬼臼毒素均為研究者均自給自 用，制備方法均自我摸索，實(shí)驗(yàn)室少量制備，其制備方法較為復(fù)雜，且報(bào)道內(nèi)容簡略，不易重 現(xiàn)，此外，生產(chǎn)成本較高，不利于規(guī)模生產(chǎn)。劉發(fā)等(劉發(fā)，尚天民，傅永豐，華鬼白化學(xué)成分 研究，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，14(4) 241-145)用氧化鋁柱(徑高比為1 25)從華鬼臼中分離制 備了去氧鬼白毒素，洗脫劑為苯-乙醇，該方法不僅徑高比大、洗脫周期長，而且使用了毒 性極大的有機(jī)溶劑——苯；將子華等(蔣子華，陳泗英.川八角蓮的化學(xué)成分[J].云南植 物研究，1989，11 (4) 479-481)用多次硅膠柱層析和重結(jié)晶方法從川八角蓮中分離制備了 去氧鬼白毒素，文獻(xiàn)未報(bào)道硅膠用量、徑-高比、柱層析次數(shù)和洗脫劑組成，該方法的主要 不足是需要經(jīng)多次硅膠柱層析，制備周期長、生產(chǎn)成本高；尚明英等(尚明英，李軍，蔡少青 等，藏藥小葉蓮的化學(xué)成分研究，中草藥，2000，31 (8) 569-571)用硅膠柱層析法，以石油 醚-乙酸乙酯梯度洗脫，經(jīng)反復(fù)精制(即多次硅膠柱層析)，從小葉蓮中分離制備了去氧鬼 臼毒素，文獻(xiàn)未報(bào)道硅膠用量、徑-高比、精制次數(shù)和洗脫劑比例，該方法的主要不足也是 需要經(jīng)多次硅膠柱層析，制備周期長、生產(chǎn)成本高。用硅膠柱分離、制備化合物的常規(guī)方法是使用徑-高比大于1 10的硅膠柱，空 白硅膠用量大，達(dá)浸膏量的30倍以上(中國科學(xué)院上海藥物研究所編著.中草藥有效成分 提取與分離(第二版).上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1983 :90-95)，對于桃耳七(亦為桃兒七)藥 材而言，由于藥材的提取浸膏得率為5% 15%，折算成常規(guī)硅膠用量應(yīng)為藥材的150% 450%，而且需要經(jīng)過多次上柱精制，具有生產(chǎn)周期長，溶劑用量大，產(chǎn)品成本高等不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備去氧鬼臼毒素的方法。本發(fā)明提供的制備去氧鬼臼毒素的方法，包括如下步驟1)將桃耳七粉碎成桃耳七粉末，進(jìn)行冷浸、滲漉或回流提取，得到桃耳七提取液；2)濃縮所述步驟1)得到的桃耳七提取液后，得到所述桃耳七提取液的濃縮液，與 硅膠混勻、干燥、研細(xì)后，裝填于色譜柱中；所述色譜柱中已裝有柱層析用空白硅膠；3)用洗脫液對所述色譜柱進(jìn)行洗脫，以與所述色譜柱中空白硅膠柱體積相等的流 出液為1個(gè)流分，收集含有去養(yǎng)鬼白毒素的流分，再除去所述含有去氧鬼白毒素的流分中 的洗脫液，用二氯甲烷或三氯甲烷溶解殘留物，重結(jié)晶，得到所述去氧鬼白毒素。上述方法的步驟1)中，所述桃耳七粉末的目數(shù)為10-60目，優(yōu)選10-20目；提取步 驟中，所用溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷。所述步驟2)中，所述硅膠的目數(shù)為100目 200目或200目 300目；所述步驟2)所述桃耳七提取液的濃縮液中，每毫升所述桃耳七提取液的濃縮液中含有所述桃耳七 原料的干重為2g 10g，優(yōu)選10g，所述硅膠的用量為所述桃耳七原料干重的5% 15%， 優(yōu)選10%，所述色譜柱中，所述柱層析用空白硅膠的用量為所述桃耳七原料干重的10% 40%，優(yōu)選10-20% ；所述色譜柱的徑高比為1 0. 5 1 5，優(yōu)選1 2 1 4; 所述步驟3)中，洗脫液選自下述四種混合液中的任意一種石油醚與酯類化合 物組成的混合液、石油醚與含氯烷烴組成的混合液、己烷與酯類化合物組成的混合液或和 已烷與含氯烷烴組成的混合液；所述石油醚為沸程為30 60°C的石油醚或沸程為60 90°C的石油醚，所述己烷為環(huán)己烷或正己燒，所述酯類化合物為乙酸乙酯、甲酸乙酯或甲酸 丁酯，所述含氯烷烴為二氯甲烷或三氯甲烷。所述石油醚與酯組成的混合液和所述石油醚 與含氯烷烴組成的混合液中，所述石油醚的體積百分比為15% 50%，優(yōu)選25% -40% ； 所述己烷與酯組成的混合液和已烷與含氯烷烴組成的混合液中，所述己烷的體積百分比為 15% 50%，優(yōu)選25% -40%。所述洗脫液優(yōu)選為下述三種洗脫液中的任意一種由沸程 為60 90°C的石油醚與甲酸丁酯組成的混合液、由正己烷與二氯甲烷組成的混合液和由 環(huán)己烷與乙酸乙酯組成的混合液，更優(yōu)選為下述三種洗脫液中的任意一種由沸程為60 90°C的石油醚與甲酸丁酯以體積比為65 35混合的混合液、由正己烷與二氯甲烷以體積 比為80 20混合的混合液和由環(huán)己烷與乙酸乙酯以體積比為75 25混合的混合液。所 述重結(jié)晶步驟中，溶劑為甲醇或乙醇。在實(shí)際操作中，可參照用其他方法制備所得去養(yǎng)鬼臼 毒素的色譜圖，以確定本方法中洗脫所得流分中是否還有去氧鬼白毒素，若洗脫所得流分 的色譜圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖的特征峰一致，則該流分中含有去氧鬼臼毒 素。由于含有去氧鬼白毒素的流分可能不止一個(gè)，可根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行取舍。此外，上述方法的步驟1)中，冷浸法、滲漉法和回流提取法均為常規(guī)方法，如所述 冷浸法可按照包括如下步驟的方法進(jìn)行將所述桃耳七粉末浸泡于溶劑中，濾過，取濾液， 將濾渣再浸泡于溶劑中，濾過，取濾液，將所述兩次濾過得到的濾液合并，得到所述桃耳七 提取液；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲燒，每次浸泡時(shí)間均為 1小時(shí)-48小時(shí)，浸泡的溫度為16°C -35°C ；如所述滲漉法可按照包括如下步驟的方法進(jìn)行將所述桃耳七粉末浸潤于溶劑 后，裝入底部裝有脫脂棉的滲漉器中，并像所述滲漉器中加入溶劑，使所述滲漉器中的溶劑 液面高出所述桃耳七粉末面5厘米-15厘米，放置12小時(shí)-48小時(shí)后，收集滲漉液，得到所 述桃耳七提取液；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷；如所述回流提取法可按照包括如下步驟的方法進(jìn)行將所述桃耳七粉末于溶劑中 進(jìn)行回流，回流完畢后濾過，將所述濾過步驟得到的濾渣用溶劑再進(jìn)行回流，回流完畢后再 濾過，合并兩次濾過得到的濾液，得到所述桃耳七提取液；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙 酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷。本發(fā)明通過縮小硅膠柱的徑高比，使用徑高比小于等于1 5的硅膠柱，減少洗脫 時(shí)間和洗脫液的用量，以達(dá)到降低生產(chǎn)成本的目的，且該方法所用空白硅膠用量小(為藥 材干重的10% 40% )，經(jīng)過1次上柱后，再進(jìn)行重結(jié)晶，即可得到純度大于70%的去氧鬼 臼毒素。該方法具有生產(chǎn)周期短，溶劑用量小，產(chǎn)品成本低等優(yōu)點(diǎn)，既適用于實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模 制備，也適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。


圖1為去氧鬼臼毒素的紫外吸收圖譜。圖2為去氧鬼臼毒素的紅外圖譜圖3為去氧鬼臼毒素的ESI-MS(+)離子圖。圖4為去氧鬼臼毒素的ESI-MS/MS碎片離子圖。圖5為去氧鬼臼毒素的1H-NMR圖譜。圖6為去氧鬼臼毒素13C-NMR圖譜。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1、1)取桃耳七2kg，粉碎成目數(shù)為20目 60目的粗粉后，以甲醇為溶劑，用滲漉法提取，具體方法為將所述桃耳七粉末置于密封容器中，加入溶劑甲醇，浸潤2小時(shí)，使桃耳 七粉末充分膨脹，分次均勻地裝入底部墊有脫脂棉滲漉器中，每次裝好后用木棒壓緊，裝完 后在桃耳七粉末上面覆蓋紗布并壓上重物，打開滲濾器下口開關(guān)，再慢慢地從滲漉器上部 加入溶劑甲醇，當(dāng)液體剛開始自下口流出時(shí)，關(guān)閉開關(guān)，并保持上層液面高出桃耳七粉末面 5厘米為止，然后加蓋放置24小時(shí)后，打開下口開關(guān)，使?jié)B漉液緩緩流出，收集6L滲漉液，得 到桃耳七提取液；2)將所述步驟1)得到的桃耳七提取液濃縮至200ml，與200目 300目柱層析硅 膠200g混勻，干燥，研細(xì)后，裝填于已填有200g柱層析用空白硅膠的色譜柱中，該硅膠色譜 柱的徑高比為1 0.5 ；3)用由沸程為60 90°C的石油醚與甲酸丁酯以體積比為65 35混合的混合液 為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為200ml/小時(shí)，以200ml為1個(gè)流分，由于最先洗脫出的第1個(gè)流 分的色譜圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖不一致，表明該流分中不含有去氧鬼臼毒 素，而之后洗脫出的流分的色譜圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖一致，表明其中含 有去氧鬼白毒素的特征峰，故棄去最先洗脫出的第1個(gè)流分，收集含有去氧鬼白毒素的第 2 第5個(gè)流分，于60°C -70°C減壓去除洗脫劑后，用三氯甲烷溶解殘留物后，用甲醇重結(jié) 晶，得到白色方晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色方晶為純度為84%的去氧鬼臼毒素，其結(jié)構(gòu)式 如式I所示。<formula>formula see original document page 7</formula>
(式I)上述結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)圖譜如圖1-圖6所示，具體數(shù)據(jù)如下白色方晶，mpl66 168°C (甲醇)。UVAmaxMe0Hnm 293,212 ；IRvJ^cm-1 :1765(y -內(nèi)酯羰基)，1587，1505，1483 (苯環(huán))，1225，1123 (碳氧鍵)， 926 (亞甲二氧基)；EI-MS (m/z) :819 [2M+Na]+，438 [M+K]+，421 [M+Na]+，416 [M+NH3]+，399 [M+1]+，231 ； 399的MS2碎片離子峰(m/z) :231。1H-Nmr(Cdci3jBOOmHz) δ :2. 76 (3Η, m, Η-lb, H_2，H_3)，3· 08 (1H，m, Η-la), 3. 74 (6Η, s, 0Me-3 ‘，5' ), 3. 80 (3H, s, OMe-4 ‘ )，3. 92 (1H，m，H-Il-β )，4. 46 (1H，m， H-Il-α，)，4. 60(lH，brs，H-4)，5. 93(2H，d，J = 12. OHz, OCH2O) ,6. 34(2H, s, H-2'，6')， 6. 52 (1H, s, H-5)，6. 67 (1H, s, H_8)。13C-NMR (CDCl3, 600Hz) δ :33. 1 (C-I)，32. 7 (C_2) ,47. 2 (C_3) ,43. 7 (C-4)， 110. 5 (C-5) , 136. 7 (C_6) , 137. 0 (C_7) , 108. 5 (C_8) , 128. 3 (C_9) , 130. 6 (C-IO)， 72. I(C-Il)，174.9 (C-12)，136.3 (C-l ' )，108.3(C_2 '，6 ' )，152. 5(C_3 '，5 ')， 137.0 (C-4' )，56. 2 (0Me-3‘，5' )，60. 8 (0Me_4' )，101. 2 (OCH2O)。實(shí)施例2、1)取桃耳七10kg，粉碎成20目 60目的粗粉后，以乙酸乙酯為溶劑，用冷浸法 進(jìn)行提取，具體方法為于25°C下，將上述桃耳七粉末浸泡于溶劑乙酸乙酯中24小時(shí)后，濾 過，取濾液20L，將濾渣再浸泡于溶劑乙酸乙酯中24小時(shí)后，濾過，取濾液20L，將所述兩次 濾過得到的濾液合并，得到桃耳七提取液；2)將所述步驟1)得到的桃耳七提取液濃縮至1L，與200目 300目的柱層析硅 膠IOOOg混勻，干燥，研細(xì)后，裝填于已填有2000g柱層析用空白硅膠的色譜柱中，該硅膠色 譜柱的徑高比為1:1;3)用由體積比為80 20的正己烷與二氯甲烷的混合液為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速 為IOOOml/小時(shí)，以IOOOml為1個(gè)流分，由于最先洗脫出的第1 2個(gè)流分的色譜圖與作為 參照的去氧鬼白毒素的色譜圖不一致，表明這2個(gè)流分中不含有去氧鬼白毒素，而之后洗 脫出的流分的色譜圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖一致，表明其中含有去氧鬼臼毒 素的特征峰，故棄去最先洗脫出的第1 2個(gè)流分，收集第3 第7個(gè)流分，于60°C -70°C減壓去除洗脫劑后，用三氯甲烷溶解殘留物后，用乙醇重結(jié)晶，得到白色方晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測 確認(rèn)，該白色方晶為純度為80%的去氧鬼臼毒素，其結(jié)構(gòu)式如式I所示。上述結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)圖譜如圖1-圖6所示，具體數(shù)據(jù)如下白色方晶，mpl66 168°c (甲醇)。UV λ maxMe0Hnm 293，212 ；IRvJ^cm-1 1765 ( γ -內(nèi)酯羰基)，1587，1505，1483 (苯環(huán))，1225，1123 (碳氧鍵)， 926 (亞甲二氧基)；EI-MS (m/z) :819 [2M+Na]+，438 [M+K]+，421 [M+Na]+，416 [M+NH3]+，399 [M+1]+，231 ； 399的MS2碎片離子峰(m/z) :231。1H-Nmr(Cdci3jBOOmHz) δ :2. 76 (3Η, m, Η-lb, H_2，H_3)，3· 08 (1H，m, Η-la), 3. 74 (6Η, s, 0Me-3 ‘，5' ), 3. 80 (3H, s, OMe-4 ‘ )，3. 92 (1H，m，H-Il-β )，4. 46 (1H，m， H-Il-α，)，4.60(lH，brs，H-4)，5.93(2H，d，J = 12. OHz, OCH2O) ,6. 34(2H, s, H-2' ,6')， 6. 52 (1H, s, H-5)，6. 67 (1H, s, H_8)。13C-NMR (CDCl3, 600Hz) δ :33. 1 (C-I)，32. 7 (C_2) ,47. 2 (C_3) ,43. 7 (C-4)， 110. 5 (C-5) , 136. 7 (C_6) , 137. 0 (C_7) , 108. 5 (C_8) , 128. 3 (C_9) , 130. 6 (C-IO)， 72. I(C-Il)，174.9 (C-12)，136.3 (C-l ' )，108.3(C_2 '，6 ' )，152. 5(C_3 '，5 ')， 137.0 (C-4' )，56. 2 (0Me-3‘，5' )，60. 8 (0Me_4' )，101. 2 (OCH2O)。實(shí)施例3、1)取桃耳七50kg，粉碎成20目 60目的粗粉后，以乙醇為溶劑，用回流提取法進(jìn) 行提取，具體方法為將所述桃耳七粉末于400L溶劑乙醇中回流2小時(shí)，回流完畢后濾過， 再將所述濾過步驟得到的濾渣用溶劑乙醇回流2小時(shí)，回流完畢后再濾過，合并兩次濾過 得到的濾液，得到所述桃耳七提取液；2)將所述步驟1)得到的桃耳七提取液減壓濃縮成稠膏，真空干燥，粉碎成細(xì)粉， 得桃耳七細(xì)粉4. 85kg。取所得干浸膏細(xì)粉，加甲醇保溫提取2次，每次25L。取甲醇提取 液，減壓濃縮至5L，與200目 300目的柱層析硅膠5kg混勻，干燥，研細(xì)后，裝填于已填有 20kg柱層析硅膠用空白硅膠的色譜柱中，該硅膠色譜柱的徑高比為1 5;3)用由體積比為75 25的環(huán)己烷與乙酸乙酯混合而得的混合液為洗脫液進(jìn)行洗 脫，流速為5000ml/小時(shí)，以5000ml為1個(gè)流分，由于最先洗脫出的第1 4個(gè)流分的色譜 圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖不一致，表明這4個(gè)流分中不含有去氧鬼臼毒素， 而之后洗脫出的流分的色譜圖與作為參照的去氧鬼臼毒素的色譜圖一致，表明其中含有去 氧鬼白毒素的特征峰，故棄去最先洗脫的第1 第4個(gè)流分，收集第5 第10個(gè)流分，于 60°C-7(TC減壓去除洗脫劑后，用三氯甲烷溶解殘留物后，用甲醇重結(jié)晶，得到白色方晶，經(jīng) 結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色方晶為純度為85%的去氧鬼臼毒素，其結(jié)構(gòu)式如式I所示。上述結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)圖譜如圖1-圖6所示，具體數(shù)據(jù)如下白色方晶，mpl66 168°c (甲醇)。UV λ maxMe0Hnm 293，212 ；IRvJ^cm-1 1765 ( γ -內(nèi)酯羰基)，1587，1505，1483 (苯環(huán))，1225，1123 (碳氧鍵)， 926 (亞甲二氧基)；EI-MS (m/z) :819 [2M+Na]+，438 [M+K]+，421 [M+Na]+，416 [M+NH3]+，399 [M+1]+，231399的MS2碎片離子峰(μ/Ζ) :23101H-Nmr(Cdci3jBOOmHz) δ :2. 76 (3Η, m, Η-lb, Η_2，Η_3)，3· 08 (1Η，m, Η-la), 3. 74 (6Η, s, 0Me-3 ‘，5' )，3· 80 (3Η，s，0Me_4 ‘ )，3. 92 (1H，m，H-ll-β )，4. 46 (1H，m， H-Il-α，)，4.60(lH，brs，H-4)，5.93(2H，d，J = 12. OHz, OCH2O) ,6. 34(2H, s, H-2' ,6')， 6. 52 (1H, s, H-5)，6. 67 (1H, s, H_8)。13C-NMR (CDCl3, 600Hz) δ :33. 1 (C-I)，32. 7 (C_2) ,47. 2 (C_3) ,43. 7 (C_4)， 110. 5 (C-5) , 136. 7 (C_6) , 137. 0 (C_7) , 108. 5 (C_8) , 128. 3 (C_9) , 130. 6 (C-IO)， 72. 1 (C-Il)，174. 9(C-12)，136. 3(C-1 ' )，108.3(C_2 '，6 ' )，152. 5(C_3 '，5 ')， 137. 0(C-4' )，56. 2 (0Me-3‘，5' )，60. 8 (0Me_4' )，101. 2 (OCH2O)。
權(quán)利要求
一種制備去氧鬼臼毒素的方法，包括如下步驟1)將桃耳七粉碎成桃耳七粉末，進(jìn)行冷浸、滲漉或回流提取，得到桃耳七提取液；2)濃縮所述步驟1)得到的桃耳七提取液后，得到所述桃耳七提取液的濃縮液，與硅膠混勻、干燥、研細(xì)后，裝填于色譜柱中；所述色譜柱中已裝有柱層析用空白硅膠；與所述桃耳七提取液的濃縮液混勻所用硅膠與所述柱層析用空白硅膠為同種硅膠；3)用洗脫液對所述色譜柱進(jìn)行洗脫，以與所述色譜柱中空白硅膠柱體積相等的流出液為1個(gè)流分，收集含有去養(yǎng)鬼臼毒素的流分，再除去所述含有去氧鬼臼毒素的流分中的洗脫液，用二氯甲烷或三氯甲烷溶解殘留物，重結(jié)晶，得到所述去氧鬼臼毒素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中，所述桃耳七粉末的目數(shù) 為10-60目，優(yōu)選10-20目，所述提取步驟中，所用溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯 甲烷或三氯甲烷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，所述硅膠的目數(shù)為 100目 200目或200目 300目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述步驟3)中，洗脫液選自下述 四種混合液中的任意一種石油醚與酯組成的混合液、石油醚與含氯烷烴組成的混合液、己 烷與酯組成的混合液和己烷與含氯烷烴組成的混合液；所述石油醚為沸程為30 60°C的 石油醚或沸程為60 90°C的石油醚，所述己烷為環(huán)己烷或正己烷，所述酯為乙酸乙酯、甲 酸乙酯或甲酸丁酯，所述含氯烷烴為二氯甲烷或三氯甲烷；所述重結(jié)晶步驟中，溶劑為甲醇 或乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述洗脫液為下述三種洗脫液中的任意 一種由沸程為60 90°C的石油醚與甲酸丁酯組成的混合液、由正己烷與二氯甲烷組成的 混合液和由環(huán)己烷與乙酸乙酯組成的混合液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述洗脫液為下述三種洗脫液中的任 意一種由沸程為60 90°C的石油醚與甲酸丁酯以體積比為65 35混合的混合液、由 正己烷與二氯甲烷以體積比為80 20混合的混合液和由環(huán)己烷與乙酸乙酯以體積比為 75 25混合的混合液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，所述桃耳七提取 液的濃縮液中，每毫升所述桃耳七提取液的濃縮液中含有所述桃耳七原料的干重為2g 10g，所述硅膠的用量為所述桃耳七原料干重的5% 15%，所述色譜柱中，已裝填有柱層 析用空白硅膠，所述柱層析用空白硅膠的用量為所述桃耳七原料干重的10% 40% ；所述 色譜柱的徑高比為1 0.5 1 5。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，所述桃耳七提取液的濃 縮液中，每毫升所述桃耳七提取液的濃縮液中含有所述桃耳七原料的干重為10g，所述硅膠 的用量為所述桃耳七原料干重的10%，所述色譜柱中，已裝填有柱層析用空白硅膠，所述柱 層析用空白硅膠的用量為所述桃耳七原料干重的10-20%;所述色譜柱的徑高比為1 2 1 4。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8任一所述的方法，其特征在于所述步驟3)中，所述石油醚與 酯組成的混合液和所述石油醚與含氯烷烴組成的混合液中，所述石油醚的體積百分比為 15% 50%，優(yōu)選25% -40% ；所述己烷與酯組成的混合液和己烷與含氯烷烴組成的混合液中，所述己烷的體積百分比為15% 50%，優(yōu)選25% -40%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的方法，其特征在于所述步驟1)中，所述冷浸法包 括如下步驟將所述桃耳七粉末浸泡于溶劑中，濾過取濾液，將濾渣再浸泡于溶劑中，濾過 取濾液，將所述兩次濾過得到的濾液合并，得到所述桃耳七提取液；所述溶劑為甲醇、乙醇、 丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷，每次浸泡時(shí)間均為1小時(shí)-48小時(shí)，浸泡的溫度為 16 0C -35 0C ；所述滲漉法包括如下步驟將所述桃耳七粉末浸潤于溶劑后，裝入底部裝有脫脂棉的 滲漉器中，并向所述滲漉器中加入溶劑，使所述滲漉器中的溶劑液面高出所述桃耳七粉末 面5厘米-15厘米，放置12小時(shí)-48小時(shí)后，收集滲漉液，得到所述桃耳七提取液；所述溶 劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷；所述回流提取法包括如下步驟將所述桃耳七粉末于溶劑中進(jìn)行回流，回流完畢后濾 過，將所述濾過步驟得到的濾渣用溶劑再進(jìn)行回流，回流完畢后再濾過，合并兩次濾過得到 的濾液，得到所述桃耳七提取液；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯 甲烷。
全文摘要
本發(fā)明公開一種制備去氧鬼臼毒素的方法。該方法，包括如下步驟1)將桃耳七原料粉碎成粗粉，進(jìn)行冷浸、滲漉或回流提取，得到桃耳七提取液；2)濃縮所述步驟1)得到的桃耳七提取液后，得到所述桃耳七提取液的濃縮液，與硅膠混勻、干燥、研細(xì)后，裝填于色譜柱中；所述色譜柱中已裝有柱層析用空白硅膠；3)用洗脫液對所述色譜柱進(jìn)行洗脫，以與所述色譜柱中空白硅膠柱體積相等的流出液為1個(gè)流分，收集含有去養(yǎng)鬼臼毒素的流分，再除去所述含有去氧鬼臼毒素的流分中的洗脫液，用二氯甲烷或三氯甲烷溶解殘留物，重結(jié)晶，得到所述去氧鬼臼毒素。該方法所得產(chǎn)物純度大于70％，既適用于實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模制備，也適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C07D493/04GK101805348SQ201010145909
公開日2010年8月18日 申請日期2010年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月9日
發(fā)明者傅欣彤, 王志斌, 郭洪祝, 陳有根 申請人:北京市藥品檢驗(yàn)所