專利名稱：一種分離金絲桃苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由普通聚酰胺及硅膠柱層析分離金絲桃苷的方法，本發(fā)明特別涉及的是采用硅膠柱色譜，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水為洗脫劑，從山里紅葉或山楂葉提取物中直接分離得金絲桃苷的方法。
背景技術(shù)：
山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge. var major N. Ε. Br.)、 山楂(C. pinnatifida Bge.)的干燥葉，收載于《中華人民共和國藥典》2010版，30頁。具有活血化瘀，理氣通脈，用于氣滯血瘀，胸悶憋氣，心悸見忘，眩暈耳鳴。研究結(jié)果表明金絲桃苷是已經(jīng)被證實(shí)治療心血管疾病，并有解痙鎮(zhèn)痛，保護(hù)胃黏膜、肝組織及調(diào)節(jié)血脂，增強(qiáng)免疫力，抗抑郁及對(duì)心腦缺血的保護(hù)作用。硅膠色譜適合分離黃酮類成分，因此本發(fā)明將聚酰硅膠柱色譜技術(shù)，成功用于分離金絲桃苷，可作為治療相關(guān)疾病藥物的原料。目前金絲桃苷的制備方法主要采用醇提、溶劑萃取同時(shí)結(jié)合硅膠柱層析的方法。 文獻(xiàn)報(bào)道特點(diǎn)是成本高，周期長，收率低(劉榮華等山里紅葉化學(xué)成分研究中藥材，2006， 29(11) ；丁杏苞等山楂葉化學(xué)成分的研究中國中藥雜志，1990；李標(biāo)等高效液相色譜法測定山楂葉中金絲桃苷的含量中國藥業(yè)，2003，12 (12))。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供了簡便、環(huán)保、快速，純度高，產(chǎn)率高的一種分離金絲桃苷的方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種分離金絲桃苷的方法，是取山楂葉或山里紅葉，用16-M倍量，濃度以質(zhì)量百分比為30-80%的含水乙醇回流提取2-3次，每次1-3小時(shí)，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，再經(jīng)AB-8或DlOl大孔吸附樹脂除雜，以濃度為30-80%乙醇洗脫至不再檢出黃酮為止，該洗脫液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，干燥，所得干燥物經(jīng)聚酰胺柱層析分離， 用30-80 %乙醇梯度洗脫，用量為柱體積的3-4倍，將洗脫液減壓濃縮至干，所得干燥物經(jīng) 200-300目硅膠柱層析分離，最后以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)_甲酸-水洗脫，直接得到金絲桃苷粉末，純度為90-99%。醇提液過濾，減壓濃縮至無醇味，經(jīng)AB-S(DlOl)大孔吸附樹脂用水沖洗除雜，以 30-80%乙醇洗脫，減壓回收乙醇，所得提取物經(jīng)聚酰胺柱層析分離。聚酰胺柱分別用含水乙醇梯度洗脫，70%乙醇部位所有流分(1-2個(gè)柱體積)洗脫物減壓濃縮，干燥物再經(jīng)硅膠柱層析，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水洗脫，得金絲桃苷。酮可選用丁酮或丙酮，采用乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)_甲酸-水的比例按 (6 2 1 0. 2)規(guī)定調(diào)整。本方法所制得的金絲桃苷的提取收率為0.01-0. 05%，其含量為90-99% (采用高效液相色譜，歸一化法測定)。本提取物可以單獨(dú)或聯(lián)合作為原料藥應(yīng)用于各種相關(guān)疾病的治療藥劑中。本發(fā)明與現(xiàn)有文獻(xiàn)不同的是采用聚酰胺及硅膠柱層析分離即可分離山里紅葉或山楂葉中的金絲桃苷，避免了操作困難、采用氯仿及甲醇洗脫成本高的缺點(diǎn)。應(yīng)用本法所分離的金絲桃苷收率高、純度高、毒性小、環(huán)保。本方法簡便、快速、實(shí)用性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一山里紅葉粉碎成粗粉，用M倍量的70%乙醇回流提取3次，每次提取時(shí)間分別為 2小時(shí)、1小時(shí)，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂，以50 倍柱體積水洗脫除雜至糖不再檢出，再用70%乙醇洗脫至不再檢出黃酮止，醇洗脫液減壓濃縮至無醇味，干燥，所得干燥物經(jīng)聚酰胺柱層析用含水乙醇梯度洗脫，70 %乙醇部位所有流分(1-2個(gè)柱體積)洗脫物減壓濃縮，所得干燥物經(jīng)硅膠柱層析(其中硅膠以200-300目) 分離，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)_甲酸-水(6 :2:1: 0.2)等洗脫，得金絲桃苷粉末，純度均大于90% (經(jīng)高效液相色譜，歸一化法測定)。實(shí)施例二山楂葉粉碎成粗粉，用M倍量50 %乙醇回流提取2次，一次3小時(shí)，一次2小時(shí)，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經(jīng)DlOl大孔吸附樹脂除雜至糖不再檢出，再用 60%乙醇洗脫，醇洗脫液減壓濃縮，經(jīng)聚酰胺柱層析用含水乙醇梯度洗脫，70%乙醇部位所有流分(1-2個(gè)柱體積)洗脫物減壓濃縮，所得干燥物經(jīng)硅膠柱層析(其中硅膠以200-300 目)分離，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(6 :2:1: 0.2)等洗脫，得金絲桃苷粉末，純度為99% (經(jīng)高效液相色譜，歸一化法測定)。實(shí)施例三山里紅葉粉碎成粗粉，用20倍量60%乙醇回流提取2次，一次3小時(shí)，一次小時(shí)， 過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味。所得浸膏經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂除雜至糖不再檢出， 再用70 %乙醇洗脫，醇洗脫液減壓濃縮，經(jīng)聚酰胺柱層析用含水乙醇梯度洗脫，70 %乙醇部位所有流分(1-2個(gè)柱體積)洗脫物減壓濃縮，所得干燥物經(jīng)硅膠柱層析(其中硅膠以 200-300目)分離，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(6 :2:1: 0.2)等洗脫，得金絲桃苷粉末，純度均大于95% (經(jīng)高效液相色譜，歸一化法測定)。
權(quán)利要求
1.一種分離金絲桃苷的方法，其特征是取山楂葉或山里紅葉，用16-M倍量，濃度以質(zhì)量百分比為30-80%的含水乙醇回流提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，再經(jīng)AB-8或DlOl大孔吸附樹脂除雜，以濃度為30-80%乙醇洗脫至不再檢出黃酮為止，該洗脫液減壓濃縮回收乙醇至無醇味，干燥，所得干燥物經(jīng)聚酰胺柱層析分離，用30-80%乙醇梯度洗脫，用量為柱體積的3-4倍，將洗脫液減壓濃縮至干，所得干燥物經(jīng)200-300目硅膠柱層析分離，最后以乙酸乙酯-丁酮或丙酮-甲酸-水洗脫，直接得到金絲桃苷粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離金絲桃苷的方法，其特征是乙酸乙酯-丁酮或丙酮-甲酸-水的配比為6 2 1 0. 2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離金絲桃苷的方法，其特征是所得金絲桃苷純度為 90-99%。
全文摘要
一種分離金絲桃苷的方法，其特征是取山里紅或山楂葉藥材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，經(jīng)AB-8或D101大孔吸附樹脂除雜，以濃度為30-80％乙醇洗脫，減壓濃縮至無醇味，干燥，所得干燥物經(jīng)聚酰胺柱層析分離，用含水乙醇梯度洗脫，洗脫部分將其減壓濃縮，經(jīng)硅膠層柱層析，再以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水洗脫或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水洗脫，直接得金絲桃苷。應(yīng)用本發(fā)明的方法所分離的金絲桃苷的收率高、純度高，方法簡便實(shí)用，低毒、環(huán)保，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102234299SQ20101015804
公開日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2010年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日
發(fā)明者劉荀, 康廷國, 張文潔, 王思源, 英錫相 申請(qǐng)人:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)