專利名稱：注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法。
背景技術(shù)：
近年來中藥注射劑的不良反應(yīng)越來越受到公眾的關(guān)注，中藥注射劑的質(zhì)量亟待提高，與西藥注射劑相比，中藥注射劑主要存在化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)不明確的問題，這給質(zhì)量控制帶來了困難。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見對(duì)注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離鑒定報(bào)道，一般只是用黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其中的黃芪甲苷進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種注射用黃芪皂苷中的單體化合物的分離方法。本發(fā)明注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法如下按專利申請(qǐng)?zhí)枮镃N200510020402. 9的專利中的方法制備注射用黃芪皂苷。將藥物原料黃芪用體積濃度為40% -95%的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至40% -95%進(jìn)行沉淀和過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH 6. 0-11. 0 后進(jìn)行沉淀過濾，將濾液調(diào)節(jié)至PH 6. 0-8. 0后，按原料藥/水重量比為0. 5-3/1的量加水混合，在保持不凍結(jié)的低溫條件下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂吸附，用濃度為 50% -90%的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調(diào)節(jié)pH至 9. 0-13.0后，用經(jīng)水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一種進(jìn)行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷；其中所述的黃芪原料回流提取所用的含水乙醇優(yōu)選濃度為60% -80% ；其中所述的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇進(jìn)行沉淀的混合溶液乙醇體積含量?jī)?yōu)選為70% -90% ；其中所述的除去乙醇后的回流提取液重新加入乙醇進(jìn)行沉淀和過濾后，優(yōu)選將濾液調(diào)節(jié)至PH 8. 0-10. 0沉淀過濾；其中所述的經(jīng)乙醇沉淀和過濾后的濾液調(diào)節(jié)至PH 6. 0-8. 0后，優(yōu)選按原料藥/水重量比為1-2/1的量加水混合；其中所述的按原料藥/水重量比為0. 5-3/1的量加水混合后，優(yōu)選在0°C -10°c條件下沉淀后過濾；其中所述的濾液用大孔吸附樹脂吸附，大孔吸附樹脂為制藥生產(chǎn)中常用的大孔吸附樹脂，如平均孔徑為0. 02-0. 03 μ m,比表面積彡400m2/g的常用的D-10U DiaionHP-20、 D-201、AB-8、DM-301 等型號(hào)。取黃芪皂苷100-300重量份，用5-10重量倍的水分散，用分析純的乙酸乙酯萃取 2-5次，每次用量為2-5重量倍，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物15-50重量份；萃取后的水相用分析純的正丁醇萃取2-5次，每次用量為2-5重量倍，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物60-200重量份；將乙酸乙酯萃取物15-50重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為 95-100 0-5 — 50-65 35-50的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為5_10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10-20 0.8-1. 2和2-6 0. 8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前1. 25-2. 5 倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A，依次接下來的0. 75-1. 5倍柱體積、0. 5-1倍柱體積、0. 5-1倍柱體積、0. 75-1. 5倍柱體積、1. 25-2. 5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B、組份C、組份D、組份E和組份F，回收溶劑后，分別得到組份A 0. 1-0. 5重量份、組份Bi. 2-4. 8重量份、組份C 2-9重量份、組份D4-13重量份、組份E1-5重量份、組份 F1-6重量份6個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B ；將正丁醇萃取物60-200重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為 85-90 10-15 — 30-35 65-70氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為5_10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為8-12 0.8-1. 2和2-5 0. 8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前1. 5-3倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份G，依次接下來的1-2倍柱體積、0. 5-1倍柱體積、 0. 5-1倍柱體積、1. 5-3倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份H、組份I、組份J和組份K，回收溶劑后，得到組份G1-5重量份、組份H 3-12重量份、組份I 8_30重量份、組份 J12-40重量份、組份K 2-9重量份5個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VI B ；將組份A 0. 1-0. 5重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用分析純的氯仿洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為8-12 0.8-1.2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前 3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A-1，依次接下來的0. 8-1. 2倍柱體積、 4-6倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份A-2和組份A-3，將其中組分A-2回收溶劑后，得到單體化合物10-50mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為10-甲氧基美迪紫檀素，其化學(xué)式如下
權(quán)利要求
1. 一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法，其特征在于該方法包括如下步驟 將藥物原料黃芪用體積濃度為40% -95%的含水乙醇回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至40% -95%進(jìn)行沉淀和過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH6. 0-11. 0后進(jìn)行沉淀過濾，將濾液調(diào)節(jié)至pH 6. 0-8. 0后，按原料藥/水重量比為 0. 5-3/1的量加水混合，在保持不凍結(jié)的低溫條件下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂吸附，用濃度為50% -90%的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調(diào)節(jié)PH至9. 0-13.0后，用經(jīng)水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮和乙醚中的至少一種進(jìn)行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷；取黃芪皂苷100-300重量份，用5-10重量倍的水分散，用分析純的乙酸乙酯萃取 2-5次，每次用量為2-5重量倍，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物 15-50重量份；萃取后的水相用分析純的正丁醇萃取2-5次，每次用量為2-5重量倍，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物60-200重量份；將乙酸乙酯_物15" M份經(jīng)正相娃膠ttM析分離，體積比為95-100 0^-50-65 35^0 的氯仿_甲醇梯度湖兌，湖兌刪量為5-10倍柱體積，在湖兌過程中，一邊湖兌一邊以每次0.1個(gè)柱體積的湖盜碰行正相娃膠薄層層析檢查，以體積比為1Ο"20 0.8-1. 2和24 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前1. 25-2. 5倍柱體積的灘液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A，依次接下來的0. 75-1. 5 倍柱體積、0. 5-1倍柱體積、0. 5-1倍柱體積、0. 75-1. 5倍柱{本積、、1. 25-2. 5倍柱體積的M液斑點(diǎn)相近， 分別收集為組份B、組份C、組份D、組份E和組份F，回收輸眤，分別得到組份A 0.1-0. 5麗份、組份 Bi. 2-4 8重量份、組份C 2- 重量份、組份M-13重量份、組份El^重量份、組份F 1-6重量份6個(gè)組份，其中腿的正相娃膠薄層層析檢查參照仲國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將正Tim(物60"200麗傲證綱交腺斤分離，以術(shù)只比為_ 1(M5-30-35 ■ 氯仿_甲_度M，MM量為Fio倍柱m只，在Mil程中，一邊M—邊以每次0.1個(gè)柱m只的湖盜縦行正才_(tái)交薄層層析檢查，以體積比為8-12 0.8-1.2和抖0.8-1.2的氯仿甲醇為展開 結(jié)果顯示，前1. ^-3倍柱術(shù)只的灘液的斑點(diǎn)相近，收集為組份G，依次接下來的1-2倍柱體積、0. 倍柱體積、0. 倍柱 材只、1. ^-3倍柱體積的_兌？—王點(diǎn)相近，分別收集為組份H、組份I、組份J和組份 K，回收湔昵，得到組份G Ii麗份、組份H 3-12麗份、組份I 8-30麗份、組份J12^40麗份、組份 K 2- 麗份5杉且份，其中臓的正才_(tái)交薄層層析檢查參照仲國(guó)藥典》2005年版 1附錄Vffi ；將組份A 0. 1-0. 5重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用分析純的氯仿洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為8-12 0.8-1.2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前 3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A-1，依次接下來的0. 8-1. 2倍柱體積、 4-6倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份A-2和組份A-3，將其中組分A-2回收溶劑后，得到單體化合物10-50mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份B 1.2-4. 8重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95-100 0-5-50-65 35-50 的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1 個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份B-1，依次接下來的1. 6-2. 4 倍柱體積、3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B-2和組份B-3,將其中組分B-2回收溶劑后，再用80-120體積份甲醇重結(jié)晶得到單體化合物90-320mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為胡蘿卜苷； 其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C 2-9重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95-100 0-5 — 50-60 40-50 的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次 0.1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4-8 0.8-1.2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前2. 4-3. 6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1，依次接下來的2. 4-3. 6倍柱體積、3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2和組份C-3， 回收溶劑后，得到組份C-I 0.2-1. 2重量份、組份C-2 0.5-1. 5重量份、組份C-3 1_4重量份 3個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-I 0. 2-1. 2重量份經(jīng)kphadex LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為10-15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3-4. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1-1，依次接下來的1-1. 5倍柱體積、6-9倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-1-2和組份C-1-3，將其中組分 C-1-2回收溶劑后，得到單體化合物50-200mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為乙酰黃芪皂苷I，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-2 0. 5-1. 5重量份經(jīng)kphadex LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為10-15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前5-7. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-2-1，依次接下來的2-3倍柱體積、3-4. 5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2-2和組份C-2-3，將其中組分 C-2-2回收溶劑后，得到單體化合物100-420mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為2_羥基-3，4-二甲氧基異黃烷-7-0- β -D吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版-部附錄VIB;將組份C-3 1-4重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為90-100 0-10 - 50-55 45-50 的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10-15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0.1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3-8 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3-4. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-3-1，依次接下來的 2. 5-3. 75倍柱體積、4. 54. 75倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-3-2和組份C-3-3， 將其中組分C-3-2回收溶劑后，得到單體化合物0. 3-1. 5g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為:9，10- 二甲氧基紫檀烷Hii-D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB;將組份E 1-5重量份經(jīng)40-60體積份的甲醇重結(jié)晶得到單體化合物0. 5-2. 5g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為毛蕊異黃酮-7-0-β -D-吡喃葡萄糖苷；將組份F 1-6重量份經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為90-100 0-10 — 50-55 45-50 的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1 個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為2-6 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 6-5. 4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份F-1，依次接下來的1.2-1. 8倍柱體積、3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份F-2和組份F-3，將組分F-2回收溶劑后，得到單體化合物0. 5-3. 5g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪甲苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份H 3-12重量份經(jīng)80-120體積份的甲醇重結(jié)晶得到單體化合物1.5_6g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為芒柄花苷；將組份K 2-9重量份經(jīng)kphadex LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為8-12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為2-5 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前.4.8-7. 2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1，接下來的3. 2-4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2，回收溶劑后，得到組份K-I 1-3重量份、組份K-20. 5-3重量份2個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-I 1-3重量份經(jīng)反相C18硅膠柱層析分離，以體積比為10-15 8540 — 8540 10-15 的甲醇_7jC梯度洗脫，洗脫液用量為10-15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0.1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為2-5 0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前44倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1-1，依次接下來的0. 8-1. 25倍柱體積、.5.2-7. 75倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-1-2和組份K-1-3，將組分K-1-2回收輸Ij 后，得到單體化合物90-340mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為(yclocanthoside E ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-2 0.5-3_份經(jīng)反相(18娃膠^^析分離，以體積比為10"15 85-90 - 85-90 10-15 的甲醇_ 7K梯度洗脫，洗脫液用量為1(M5倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0.1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相娃膠薄層層析檢查，以體積比為好0.8-1. 2的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 54. 2倍柱體積的M液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2-1，依次接下來的1. 2-1.8倍柱體積、 5. 3-8倍柱體積的湖兌液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-2-2和組份K-2-3，將組分K-2-2回收輸U(kuò)后，得至IJ單體化^t/60"25Qie，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃鶴苷VI ；其中臓的正相娃膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB。
2.如權(quán)利要求1所述的一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法，其特征在于該方法包括如下步驟取黃芪藥材20kg，切片，加體積濃度為70%的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至65%進(jìn)行沉淀和過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH9. 0 后沉淀過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH7. 0左右，按原料藥/水為1. 5/1的量加水混合后，在5°C低溫下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂D-101吸附，以30%濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色除雜，再以75%濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調(diào)節(jié)PH至10.0后，用經(jīng)水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1 1) 進(jìn)行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷；取黃芪皂苷IOOg先用水IOOOml分散，用分析純的乙酸乙酯萃取3次，每次500ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物15g ；萃取后的水相用分析純的正丁醇萃取3次，每次500ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物65g ；將乙酸乙酯萃取物15g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為95 5 — 65 35的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為15 1和4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A，依次接下來的1. 2倍柱體積、 0. 8倍柱體積、0. 8倍柱體積、1. 2倍柱體積、2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份 B、組份C、組份D、組份E和組份F，回收溶劑后，分別得到組份A :0. lg、組份B:1.4g、組份C: 2. Sg、組份D 4. 0g、組份E 1. 5g、組份F :1. 8g 6個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將正丁醇萃取物65g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為85 15 — 30 70的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1和3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份G，依次接下來的2倍柱體積、1倍柱體積、1倍柱體積、3倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份H、組份I、組份 J和組份K，回收溶劑后，得到組份G :1. 4g、組份H :3. 2g、組份I 9. 5g、組份J :12. 0g、組份 K :2. 5g 5個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄 VIB ；將組份A 0. Ig經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用分析純的氯仿洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A-1，依次接下來的1. 2倍柱體積、6倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份A-2和組份A-3，將其中組分A-2回收溶劑后，得到單體化合物10mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份B 1.4g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95 5 —65 35的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示， 前4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份B-1，依次接下來的2倍柱體積、4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B-2和組份B-3，將其中組分B-2回收溶劑后，再用 120ml甲醇重結(jié)晶得到單體化合物95mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為胡蘿卜苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C 2. 8g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為100 0 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前 2. 4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1，依次接下來的2. 4倍柱體積、3. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2和組份C-3，回收溶劑后，得到組份C-I 0. 3g、 組份C-2 0. 5g、組份C-3 1. 2g 3個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB;將組份C-10. 3g經(jīng)kphadex LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1-1，依次接下來的1. 5倍柱體積、9倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-1-2和組份C-1-3，將其中組分C-1-2回收溶劑后，得到單體化合物50mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為乙酰黃芪皂苷I ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-2LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前7.5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-2-1，依次接下來的3倍柱體積、4. 5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2-2和組份C-2-3，將其中組分C-2-2回收溶劑后，得到單體化合物105mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為2-羥基-3，4- 二甲氧基異黃烷_7_0- β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-3 1. 2g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為100 0 — 55 45的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-3-1，依次接下來的3倍柱體積、5. 4 倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-3-2和組份C-3-3，將其中組分C-3-2回收溶劑后，得到單體化合物310mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為9，10- 二甲氧基紫檀烷-3-0-β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份E 1.5g經(jīng)甲醇50ml重結(jié)晶得到單體化合物800mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為毛蕊異黃酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；將組份F 1.8g經(jīng)硅膠柱層析分離，以體積比為90 10 —55 45的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 5 倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份F-1，依次接下來的1. 5倍柱體積、4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份F-2和組份F-3，將組分F-2回收溶劑后，得到單體化合物 750mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪甲苷，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005 年版一部附錄VIB;將組份H 3. 2g經(jīng)甲醇IOOml重結(jié)晶得到單體化合物1. 8g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為芒柄花苷； 將組份KLH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1，接下來的4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2， 回收溶劑后，得到組份K-I 1. lg、組份K-2 0. Sg 2個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-I 1. Ig經(jīng)反相C18硅膠柱層析分離，以體積比為15 85 — 85 15的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1-1，依次接下來的1倍柱體積、 6. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-1-2和組份K-1-3，將組分K-1-2回收溶劑后，得到單體化合物95mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-2 0.8g經(jīng)反相C18硅膠柱層析分離，以體積比為15 85 — 90 10的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前5. 2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2-1，依次接下來的1. 8倍柱體積、8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-2-2和組份K-2-3，將組分K-2-2回收溶劑后，得到單體化合物70mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪皂苷VI ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB。
3.如權(quán)利要求1所述的一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法，其特征在于該方法包括如下步驟取黃芪藥材50kg，切片，加體積濃度為80%的含水乙醇8倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至50%進(jìn)行沉淀和過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH9. 0 后沉淀過濾，濾液調(diào)節(jié)至PH 7-8，按原料藥/水為1. 5/1的量加水混合后，在5°C低溫下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂D-201吸附，以30%濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色除雜，再以80%濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調(diào)節(jié)pH至11.0后，用經(jīng)水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚(1 2)進(jìn)行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷，按注射劑標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，所得黃芪皂苷經(jīng)全檢完全符合注射用要求；將黃芪皂苷300g先用水1500ml分散，用分析純的乙酸乙酯萃取3次，每次1000ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物50g ；萃取后的水相用分析純的正丁醇萃取3次，每次1000ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物200g ；將乙酸乙酯萃取物50g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為95 5 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為5倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為15 1和4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前1. 25倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A，依次接下來的0. 75倍柱體積、0. 5倍柱體積、0. 5倍柱體積、0. 75倍柱體積、1. 25倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B、組份C、組份D、組份E和組份F，回收溶劑后，分別得到組份A 0. 5g、組份 B 4. 5g、組份C 9. 0g、組份D 12. 5g、組份E :4. 8g、組份F :5. lg6個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將正丁醇萃取物200g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為90 10 — 35 65的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為5倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1和3 1的氯仿甲醇為展開劑， 結(jié)果顯示，前1. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份G，依次接下來的1倍柱體積、 0. 5倍柱體積、0. 5倍柱體積、1. 5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份H、組份I、組份J和組份K，回收溶劑后，得到組份G 4. 6g、組份H :10. 3g、組份I :29. 4g、組份J :37. 7g、 組份K 8. 2g 5個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份A 0. 5g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用分析純的氯仿洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A-1，依次接下來的0. 8倍柱體積、4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份A-2和組份A-3，將其中組分A-2回收溶劑后，得到單體化合物45mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份B 4. 5g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95 5 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示， 前3. 2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份B-1，依次接下來的1. 6倍柱體積、3. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B-2和組份B-3，將其中組分B-2回收溶劑后，再用IOOml甲醇重結(jié)晶得到單體化合物310mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為胡蘿卜苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C 9. Og經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95 5 —60 40的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示， 前3倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1，依次接下來的3倍柱體積、4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2和組份C-3，回收溶劑后，得到組份C-I 1. lg、組份C-2 1. 4g、組份C-3 3. 7g 3個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》 2005年版一部附錄VIB ；將組份C-I 1.LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1-1，依次接下來的1倍柱體積、6倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-1-2和組份C-1-3，將其中組分C-1-2回收溶劑后，得到單體化合物180mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為乙酰黃芪皂苷I ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-2 1. 4g經(jīng)kphadex LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-2-1，依次接下來的2倍柱體積、3倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2-2和組份C-2-3，將其中組分C-2-2回收溶劑后，得到單體化合物 415mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為2-羥基-3，4-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-3 3. 7g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為90 10 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-3-1，依次接下來的2. 5倍柱體積、4. 5 倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-3-2和組份C-3-3，將其中組分C-3-2回收溶劑后，得到單體化合物1. 5g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β -D-卩比喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份E 4. Sg經(jīng)甲醇50ml重結(jié)晶得到單體化合物2. 5g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為毛蕊異黃酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；將組份F 5. Ig經(jīng)硅膠柱層析分離，以體積比為100 0 —55 45的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 5 倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份F-1，依次接下來的1. 5倍柱體積、4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份F-2和組份F-3，將組分F-2回收溶劑后，得到單體化合物 3. lg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪甲苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005 年版一部附錄VIB;將組份H 10. 3g經(jīng)甲醇IOOml重結(jié)晶得到單體化合物5. 7g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為芒柄花苷； 將組份KLH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前7. 2倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1，接下來的4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，收集為組份 K-2，回收溶劑后，得到組份K-I :3.(^、組份1(-2 2. 6g 2個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-I 3. Og經(jīng)反相C18硅膠柱層析分離，以體積比為15 85 — 90 10的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1-1，依次接下來的0. 8倍柱體積、 5. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-1-2和組份K-1-3，將組分K-1-2回收溶劑后，得到單體化合物320mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-22.6g經(jīng)反相C18硅膠柱層析分離，以體積比為10 90 — 85 15的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 16倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2-1，依次接下來的1.44倍柱體積、6. 4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-2-2和組份K-2-3，將組分K-2-2回收溶劑后，得到單體化合物MOmg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪皂苷VI ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB。
4.如權(quán)利要求1所述的一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法，其特征在于該方法包括如下步驟取黃芪藥材30kg，切片，加體積濃度為50%的含水乙醇10倍回流提取，提取液除去乙醇，重新加入乙醇至混合溶液的乙醇體積含量至85%進(jìn)行沉淀和過濾，濾液調(diào)節(jié)至pH9. O 后沉淀過濾，濾液調(diào)節(jié)至PH 6. 5-7. 5，按原料藥/水為1. 8/1的量加水混合后，在5°C低溫下沉淀后過濾，濾液用大孔吸附樹脂D-IOl吸附，以30%濃度的含水乙醇洗脫至洗脫液幾乎無色除雜，再以75%濃度的含水乙醇解吸附洗脫并收集，將除去乙醇后的解吸附濃縮溶液調(diào)節(jié)PH至12.0后，用經(jīng)水飽和的正丁醇提取，提取液除去正丁醇后用丙酮-乙醚O 1) 進(jìn)行沉淀，分離沉淀物為供注射劑用的黃芪皂苷，按注射劑標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，所得黃芪皂苷經(jīng)全檢完全符合注射用要求；將黃芪皂苷150g先用水IOOOml分散，用分析純的乙酸乙酯萃取3次，每次750ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取物22g ；萃取后的水相用分析純的正丁醇萃取3次，每次750ml，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇得到正丁醇萃取物99g ；將乙酸乙酯萃取物22g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為100 0 — 65 35的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為15 1和4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前2. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A，依次接下來的1. 5 倍柱體積、1倍柱體積、1倍柱體積、1. 5倍柱體積、2. 5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B、組份C、組份D、組份E和組份F，回收溶劑后，分別得到組份A 0. 2g、組份B . 2.0g、組份C 4. 4g、組份D 5. 9g、組份E :2. 4g、組份F :2. 5g 6個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將正丁醇萃取物65g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，體積比為85 15 — 35 65的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1和3 1的氯仿甲醇為展開劑， 結(jié)果顯示，前2. 4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份G，依次接下來的1. 6倍柱體積、0. 8倍柱體積、0. 8倍柱體積、2. 4倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份H、組份 I、組份J和組份K，回收溶劑后，得到組份G 2. 3g、組份H 5. 0g、組份I :15g、組份J :20. 5g、 組份K 3. 9g 5個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份A 0.2g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，用分析純的氯仿洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為10 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份A-1，依次接下來的1倍柱體積、5倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份A-2和組份A-3，將其中組分A-2回收溶劑后，得到單體化合物20mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為 10-甲氧基美迪紫檀素，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份B 2. Og經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為100 0 — 60 40的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示， 前4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份B-1，依次接下來的2. 4倍柱體積、4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份B-2和組份B-3，將其中組分B-2回收溶劑后，再用80ml甲醇重結(jié)晶得到單體化合物150mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為胡蘿卜苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C 4. 4g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為95 5 — 50 50的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前.3.6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1，依次接下來的3. 6倍柱體積、4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2和組份C-3，回收溶劑后，得到組份C-I 0. 5g、組份C-2 0. 9g、組份C-3 2. 3g 3個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB;將組份C-ILH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為6 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-1-1，依次接下來的1. 2倍柱體積、7. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-1-2和組份C-1-3，將其中組分C-1-2回收溶劑后，得到單體化合物8%ig，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為乙酰黃芪皂苷I ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-2LH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-2-1，依次接下來的2. 4倍柱體積、3. 6倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-2-2和組份C-2-3，將其中組分C-2-2回收溶劑后，得到單體化合物186mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為2-羥基-3，4-二甲氧基異黃烷-7-0-i3-D-卩比喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份C-3 2. 3g經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以體積比為90 10 — 55 45的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為5 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份C-3-1，依次接下來的3. 75倍柱體積、 6. 75倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份C-3-2和組份C-3-3，將其中組分C-3-2 回收溶劑后，得到單體化合物740mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為9，10- 二甲氧基紫檀烷-3_0_β -D-吡喃葡萄糖苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ； 將組份E 2. 4g經(jīng)甲醇50ml重結(jié)晶得到單體化合物1. 3g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為毛蕊異黃酮-7-0-β-D-吡喃葡萄糖苷；將組份F 2. 5g經(jīng)硅膠柱層析分離，以體積比為90 10 —50 50的氯仿-甲醇梯度洗脫，洗脫液用量為12倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為4 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前 5. 4倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份F-1，依次接下來的1. 8倍柱體積、4. 8倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份F-2和組份F-3，將組分F-2回收溶劑后，得到單體化合物1. 4g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪甲苷；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份H 5. Og經(jīng)甲醇IOOml重結(jié)晶得到單體化合物2. 8g，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為芒柄花苷； 將組份KLH-20凝膠柱層析分離，用分析純的甲醇洗脫，洗脫液用量為8倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前4. 8倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1，接下來的3. 2倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，收集為組份 K-2，回收溶劑后，得到組份K-I :1.7g、組份K-2:1.5g 2個(gè)組份，其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-I 1.7g經(jīng)反相Cw硅膠柱層析分離，以體積比為10 90 — 85 15的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為15倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前6倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-1-1，依次接下來的1.25倍柱體積、 7. 75倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-1-2和組份K-1-3，將組分K-1-2回收溶劑后，得到單體化合物148mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為CyCl0Canth0Side E ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB ；將組份K-2 1.5g經(jīng)反相Cw硅膠柱層析分離，以體積比為15 85 — 85 15的甲醇-水梯度洗脫，洗脫液用量為10倍柱體積，在洗脫過程中，一邊洗脫一邊以每次0. 1個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行正相硅膠薄層層析檢查，以體積比為3 1的氯仿甲醇為展開劑，結(jié)果顯示，前3. 5倍柱體積的洗脫液的斑點(diǎn)相近，收集為組份K-2-1，依次接下來的1. 2倍柱體積、5. 3倍柱體積的洗脫液斑點(diǎn)相近，分別收集為組份K-2-2和組份K-2-3，將組分K-2-2回收溶劑后，得到單體化合物115mg，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為黃芪皂苷VI ；其中所述的正相硅膠薄層層析檢查參照《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VIB。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用黃芪皂苷中單體化合物的分離方法，本發(fā)明分離得到的單體化合物通過標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)、質(zhì)譜、核磁共振氫譜和核磁共振碳譜等常規(guī)手段進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，本發(fā)明所述的黃芪皂苷單體化合物可以用于注射用黃芪皂苷的質(zhì)量控制，使該注射劑的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)更清楚，提高用藥安全。
文檔編號(hào)C07D493/04GK102241685SQ20101016941
公開日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2010年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月11日
發(fā)明者丁立生, 傅予, 彭樹林, 梁隆, 胡思玉, 譚興根 申請(qǐng)人:四川科倫藥業(yè)股份有限公司