專利名稱：采用層析及膜技術(shù)從烏龍茶中精取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從烏龍茶中精取表沒食子兒茶素沒食子酸酯(以下簡(jiǎn)稱EGCG)的 方法，具體來說是一種采用層析及膜分離方法從烏龍茶中分離純化表沒食子兒茶素沒食子 酸酯的方法。
背景技術(shù)：
茶多酚是從茶葉中提取的一種天然多酚類活性物質(zhì)，其為主要成份及最有效成份 EGCG，具有清除自由基、抗氧化、防輻射、抗腫瘤、抗病毒、降血脂和膽固醇、抗菌、延緩衰老 等多種保健和藥理作用。目前，EGCG單體已被列為一種可代替紫杉醇的抗癌新藥。由于茶 葉中主要有效成份為茶多酚，時(shí)下，EGCG大都由茶葉提取而制得，對(duì)此，如專利局公開號(hào)為 CN101381359A的專利文獻(xiàn)就公開了“一種從綠茶中提取高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯 的方法”，通過將液相萃取法和閃爍硅膠柱色譜法聯(lián)用，制得表沒食子兒茶素沒食子酸酯單 體，該方法雖可制得高純度EGCG單體，但一方面由于存在操作復(fù)雜、投資大、得率低、損耗 大、有毒有機(jī)溶劑(如氯仿)殘留、金屬殘留等問題，使產(chǎn)品難為保健品和醫(yī)藥等行業(yè)所接 受；另一方面，研究表明，烏龍茶的茶葉中有效成份茶多酚、兒茶素單體物表沒食子兒茶素 沒食子酸酯(EGCG)比綠茶高了近十個(gè)百分點(diǎn)，因此，從綠茶中提取EGCG相比烏龍茶并不具 有更理想的資源優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種新的EGCG單體的提取方法，即采用層析及膜技術(shù)從 烏龍茶中進(jìn)行提取純化EGCG而達(dá)到高得率、高純度且無(wú)殘留并適用于產(chǎn)業(yè)化的目的。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案主要是利用烏龍茶的茶多酚類及其它雜 質(zhì)在溶劑中溶解度的不同，分別用膜過濾、膜濃縮去雜得到多酚類粗制品，再利用層析分離 技術(shù)精制出茶多酚，回收有機(jī)溶劑，最后利用膜分離技術(shù)從茶多酚類中分離出兒茶素EGCG 單體，并通過結(jié)晶和冷凍干燥可得單體兒茶素EGCG產(chǎn)品。實(shí)施該方案的方法包括如下步 驟(1)提取，將烏龍茶葉通過水提得茶液。(2)膜過濾膜濃縮，常溫下，采用有機(jī)高分子卷式膜進(jìn)行除雜去色，再連續(xù)萃取去 除茶多糖，得較純茶多酚樣液。(3)層析分離，選用體積為2500cm3，高為70 IOOcm柱子，填入極性樹脂；平均粒 度在50目左右，再將樣液填入柱子，利用樹脂吸附兒茶素組份，去除咖啡因、色素等雜質(zhì)， 流速為1 2BV/h ；流出液由深紅色變淺；加入1 2BV量的水清洗，流速不變，至流出液為 無(wú)色；用1 2BV、濃度為70 80%的乙醇溶液進(jìn)行解吸，流速不變，收集有顏色的流出液， 該流出液為兒茶素溶液。(4)膜分離，常溫下，將兒茶素溶液泵入膜分離設(shè)備中，采用高分子膜進(jìn)行分離，分離后的收集液為EGCG溶液。(5)結(jié)晶，將EGCG溶液進(jìn)行真空濃縮，溫度為50°C 70°C，使其固含量提高至 25-45%后將EGCG濃縮液置于5 10°C環(huán)境下結(jié)晶，等結(jié)晶完全后，漂洗得EGCG晶體。(6)冷凍干燥，將EGCG晶體冷凍干燥得白色固體EGCG產(chǎn)品。上述步驟(4)所述的高分子膜為陶瓷膜，截流分子量是450 460。上述步驟(5)中所述將EGCG溶液進(jìn)行真空濃縮，優(yōu)選溫度為60°C，優(yōu)選固含量提 高至30%。本發(fā)明采用上述技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)第一，采用膜過濾和低 溫膜濃縮技術(shù)除去提取液中纖維、蛋白質(zhì)、果膠等雜質(zhì)，有效地解決了傳統(tǒng)工藝中纖維、蛋 白質(zhì)、果膠等難以除去問題。第二，利用膜分離技術(shù)動(dòng)態(tài)分離茶多酚中的其它組分，較好地 解決了產(chǎn)品在傳統(tǒng)工藝因高溫造成的容易氧化的問題，克服高能耗、高耗時(shí)、產(chǎn)品損耗高的 缺陷，生產(chǎn)成本低、得率高、產(chǎn)品純度達(dá)98%以上，易于產(chǎn)業(yè)化推廣。第三，不使用含氯等有 毒有機(jī)溶劑，具有無(wú)殘留的優(yōu)點(diǎn)；而且也不使用酸堿，更具環(huán)保。第四，工藝設(shè)計(jì)流程科學(xué)合 理，操作簡(jiǎn)易，制備的EGCG單體含量達(dá)到98%以上，產(chǎn)品符合食品安全要求。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 1)提取，將烏龍茶葉用水液進(jìn)行水提并得到茶液。2)膜過濾膜濃縮，常溫下，采用有機(jī)高分子卷式膜進(jìn)行除雜去色，再連續(xù)萃取去除 茶多糖，得較純茶多酚樣液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)層析分離將IOOml茶多酚樣液，其茶多酚組份約為10g，在常溫常壓下，將茶 多酚溶液泵入樹脂吸附柱中，樹脂柱體積250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 選用極性大孔樹脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，顏色由深變淺，吸附 完畢；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液為無(wú)色；用2BV的70%的乙醇溶液解吸，流速在 lBV/h，收集有顏色的流出液(兒茶素溶液)；4)膜分離，將流出液在常溫下，泵入膜分離設(shè)備中，選用高分子陶瓷膜進(jìn)行分離， 收集液為EGCG溶液；5)結(jié)晶，將EGCG溶液在50°C真空濃縮，至固含量在25%左右，并置于5 10°C環(huán) 境下結(jié)晶，結(jié)晶完成后，用水漂洗，得白色EGCG晶體；6)將EGCG晶體冷凍干燥得白色固態(tài)EGCG產(chǎn)品2. 13g，純度為98. 2 %，得率為 42. 6%。實(shí)施例2:1)提取，將烏龍茶葉用水液進(jìn)行水提并得到茶液。2)膜過濾膜濃縮，常溫下，采用有機(jī)高分子卷式膜進(jìn)行除雜去色，再連續(xù)萃取去除 茶多糖，得較純茶多酚樣液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)層析分離將120ml茶多酚樣液，其茶多酚組份約為12g，在常溫常壓下，將茶 多酚溶液泵入樹脂吸附柱中，樹脂柱體積250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 選用極性大孔樹脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，顏色由深變淺，吸附 完畢；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液為無(wú)色；用2BV的75%的乙醇溶液解吸，流速在
4lBV/h，收集有顏色的流出液(兒茶素溶液)；4)膜分離，將流出液在常溫下，泵入膜分離設(shè)備中，選用高分子陶瓷膜進(jìn)行分離， 收集液為EGCG溶液；5)結(jié)晶，將EGCG溶液在60°C真空濃縮，至固含量在30%，并置于5 10°C環(huán)境下 結(jié)晶，結(jié)晶完成后，用水漂洗，得白色E G CG晶體；6)將EGCG晶體冷凍干燥得白色固態(tài)EGCG產(chǎn)品2. 52g，純度為98. 2 %，得率為
42.0%。實(shí)施例3 1)提取，將烏龍茶葉用水液進(jìn)行水提并得到茶液。2)膜過濾膜濃縮，常溫下，采用有機(jī)高分子卷式膜進(jìn)行除雜去色，再連續(xù)萃取去除 茶多糖，得較純茶多酚樣液(TP彡98%, EGCG ^ 50% )03)層析分離將200ml茶多酚樣液，其茶多酚組份約為20g，在常溫常壓下，將茶 多酚溶液泵入樹脂吸附柱中，樹脂柱體積250cm3，即(1BV = 250ml)，吸附流速1 2BV/h， 選用極性大孔樹脂平均粒度在50目左右，其流出液是咖啡因和色素，顏色由深變淺，吸附 完畢；用2BV水清洗，流速lBV/h，至流出液為無(wú)色；用2BV的80%的乙醇溶液解吸，流速在 lBV/h，收集有顏色的流出液(兒茶素溶液)；4)膜分離，將流出液在常溫下，泵入膜分離設(shè)備中，選用高分子陶瓷膜進(jìn)行分離， 收集液為EGCG溶液；5)結(jié)晶，將EGCG溶液在70°C真空濃縮，至固含量在45%，并置于5 10°C環(huán)境下 結(jié)晶，結(jié)晶完成后，用水漂洗，得白色E G CG晶體；6)將EGCG晶體冷凍干燥得白色固態(tài)EGCG產(chǎn)品4. 31g，純度為98. 2 %，得率為
43.1%。
權(quán)利要求
一種采用層析及膜技術(shù)從烏龍茶中精取表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，其特征在于包括以下步驟(1)提取，將烏龍茶葉通過水提得茶液；(2)膜過濾膜濃縮，常溫下，采用有機(jī)高分子卷式膜進(jìn)行除雜去色，再連續(xù)萃取去除茶多糖，得較純茶多酚樣液；(3)層析分離，選用體積為2500cm3，高為70～100cm柱子，填入極性樹脂；平均粒度在50目左右，再將樣液填入柱子，利用樹脂吸附兒茶素組份，去除咖啡因、色素等雜質(zhì)，流速為1～2BV/h；流出液由深紅色變淺；加入1～2BV量的水清洗，流速不變，至流出液為無(wú)色；用1～2BV、濃度為70～80％的乙醇溶液進(jìn)行解吸，流速不變，收集有顏色的流出液，該流出液為兒茶素溶液；(4)膜分離，常溫下，將兒茶素溶液泵入膜分離設(shè)備中，采用高分子膜進(jìn)行分離，分離后的收集液為EGCG溶液；(5)結(jié)晶，將EGCG溶液進(jìn)行真空濃縮，溫度為50℃～70℃，使其固含量提高至25 45％后將EGCG濃縮液置于5～10℃環(huán)境下結(jié)晶，等結(jié)晶完全后，漂洗得EGCG晶體；(6)冷凍干燥，將EGCG晶體冷凍干燥得白色固體EGCG產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用層析及膜技術(shù)從烏龍茶中精取表沒食子兒茶素沒 食子酸酯的方法，其特征在于上述步驟(4)所述的高分子膜為陶瓷膜，截流分子量是450 460。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用層析及膜技術(shù)從烏龍茶中精取表沒食子兒茶素沒 食子酸酯的方法，其特征在于上述步驟(5)中所述將EGCG溶液進(jìn)行真空濃縮，優(yōu)選溫度為 60 0C，優(yōu)選固含量提高至30 %。
全文摘要
一種采用層析及膜分離方法從烏龍茶中分離純化表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，包括如下步驟(1)提取，將烏龍茶葉通過水提得茶液；(2)膜過濾膜濃縮，進(jìn)行除雜去色得較純茶多酚樣液；(3)層析分離，從茶多酚中分離兒茶素溶液；(4)膜分離，常溫下采用高分子膜進(jìn)行分離，得EGCG溶液；(5)結(jié)晶，將EGCG溶液進(jìn)行真空濃縮并結(jié)晶得EGCG晶體；(6)冷凍干燥，將EGCG晶體冷凍干燥得白色固體EGCG產(chǎn)品。具有生產(chǎn)成本低、得率高、產(chǎn)品純度達(dá)98％以上且無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，易于產(chǎn)業(yè)化推廣。
文檔編號(hào)C07D311/62GK101921253SQ20101017825
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2010年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月14日
發(fā)明者丁明浩, 馮文輝, 林立武, 陳偉強(qiáng), 陳森全, 陳燕珊 申請(qǐng)人:陳森全