專利名稱：一種用于止血的人凝血因子vii及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種新的多肽類化合物，具體涉及用于止血的人凝血因子VII及其制備方法，可用于創(chuàng)傷出血后的止血。
背景技術(shù)：
出血是戰(zhàn)時(shí)和平時(shí)最常見的緊急情況之一，在戰(zhàn)傷救治中是否能有效止血對(duì)挽救傷員生命起著至關(guān)重要的作用。目前臨床上常用的立芷雪(巴西矛頭蝮蛇血凝酶)由于其療效明確，在臨床廣泛使用，但由于該藥為國(guó)外進(jìn)口，我國(guó)無自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，因此出于國(guó)家戰(zhàn)略安全考慮不可能將其作為軍隊(duì)特需藥品使用。因此研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的止血藥列裝部隊(duì)對(duì)減少戰(zhàn)時(shí)由于失血引起的傷亡具有重要作用。我國(guó)現(xiàn)行裝配的急救包中的止血材料的功能仍屬傳統(tǒng)壓迫包扎止血，這些止血材料雖對(duì)一線傷員的緊急救治起了積極的作用，但科技含量不高，功效低，遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代高技術(shù)局部戰(zhàn)爭(zhēng)條件下戰(zhàn)傷急救，特別是一線救治的需要。目前臨床常用的止血材料如紗布、 纖維、繃帶等止血時(shí)間長(zhǎng)，易與傷口粘連而不易換藥，對(duì)傷口的感染和化膿等無能為力；而一些可降解的止血材料，如明膠海綿、纖維蛋白膠及膠原海綿等，也存在著與組織黏附力較差，對(duì)有凝血功能障礙的止血望洋興嘆，且還有可能導(dǎo)致病毒感染的弱點(diǎn)；雖通過載入一些高效止血?jiǎng)┤缒浮⒁蛛拿傅?Tachocomb》可明顯改善其止血性能，但除增加了生產(chǎn)成本外，還需要苛刻的儲(chǔ)存條件，或者繁瑣的操作過程(即用即配)。因此，高效止血?jiǎng)┑难兄埔恢笔歉鲊?guó)醫(yī)藥工作者關(guān)注的焦點(diǎn)，一些經(jīng)濟(jì)大國(guó)更是每年耗資數(shù)億用于該類產(chǎn)品的研發(fā)。在各類止血?jiǎng)┲校嗫字寡獎(jiǎng)┮云涮赜械睦砘阅芤鹑藗兊年P(guān)注。這類止血?jiǎng)┑闹寡δ芎退鼈兊亩嗫捉Y(jié)構(gòu)有關(guān)，當(dāng)其作用于創(chuàng)口時(shí)，能夠利用液體特有的毛細(xì)現(xiàn)象，迅速吸取傷口血液中的水分，從而使血液中的凝血物質(zhì)迅速聚集，凝結(jié)在傷口表面，堵塞住破裂的血管，達(dá)到止血的目的。這類止血?jiǎng)┲饕袩o機(jī)沸石類和天然可降解生物材料兩大類。 2002年獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)的由美國(guó)Z-Medica公司生產(chǎn)的QuikClot就是一種由多孔沸石復(fù)合材料組成的粉術(shù)狀止血?jiǎng)?，在伊拉克?zhàn)爭(zhēng)中已裝備給美軍士兵。最近公開的美國(guó)專利 US6060461也描述了一種具有微孔結(jié)構(gòu)的顆粒材料，它的止血效果非常顯著。但這類無機(jī)多孔止血?jiǎng)┰谖昭褐械乃趾髸?huì)放出大量的熱，最高溫度能達(dá)到100°C左右，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物創(chuàng)面周圍皮膚，肌肉，神經(jīng)，血管和脂肪組織造成明顯熱損傷。因此未來的趨勢(shì)是研制生物相容性、組織吸附性和吸濕性好的高效止血藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種從人類血液中提出分離得到的多肽類化合物，可用于創(chuàng)傷出血后的止血。其分離純化方法步驟為1、新鮮人血漿用冷凍1周以上2、取冷凍人血漿，加入氯化鋇溶液，混合后，離心。沉淀用緩沖液清洗，將沉淀加入到硫酸銨中進(jìn)行混懸，混合，離心，收集上清液，得凝血因子粗提物3、分離出的粗提物用鹽緩沖液透析以除去硫酸銨。4、分離得到的凝血因子粗提物加到抗凝血因子VII親和層析柱上，用緩沖液洗脫，得到凝血因子VII。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)1.采用抗凝血因子VII親和層析柱從人血漿中提純分離得到了凝血因子VII。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1分離純化方法示例11、新鮮人血漿用枸櫞酸鈉抗凝后于-20°c冷凍1周以上，自然解凍，綢布過濾去除絮狀物，得濾液，備用。2、取冷凍人血漿，加入lmol/L BaC12溶液，混合Ih后，5000轉(zhuǎn)/分離心15min。沉淀用0. 05M磷酸鹽緩沖液(pH7. 00)清洗3次，將沉淀加入到40% (NH4) 2S04中進(jìn)行混懸， 在2 4°C混合1 后，5000轉(zhuǎn)/分離心lOmin，收集上清液，得凝血因子粗提物；分離出的粗提物用0. 9% NaCl和IOmM磷酸鹽緩沖液(pH 7. 00)透析18h以除去(NH4)2S04。3、分離得到的凝血因子粗提物加到抗凝血因子VII親和層析柱上，未被吸附的蛋白用于后續(xù)分離。層析柱用平衡緩沖液充分沖洗，然后用0. 5M NaCl和IOmM磷酸鹽緩沖液 (pH7. 00)洗脫，直至洗脫液在^Onm的吸收度< 0. 1。最后用2M鹽酸胍(pH7. 00)洗脫解吸附得到凝血因子VII。
權(quán)利要求
1.凝血因子VII提取純化所用到的緩沖鹽為磷酸鹽緩沖液，其PH范圍為6-8
2.采用抗凝血因子VII親和層析柱純化得到人凝血因子VII。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多肽類人凝血因VII及其從人血漿中分離提純的方法，O該凝血因子可用于創(chuàng)傷出血后的止血。
文檔編號(hào)C07K1/22GK102250236SQ20101017925
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2010年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者傅若秋, 盧來春, 吳畏, 孟德勝, 溫悅, 胡大強(qiáng) 申請(qǐng)人:盧來春, 孟德勝, 胡大強(qiáng)