專利名稱：Bcl-2蛋白的N-取代嘧啶磺酰基-取代苯甲酰胺類小分子抑制劑及其應用的制作方法
Bc I -2蛋白的N-取代嘧啶磺?；?取代苯甲酰胺類小分子
抑制劑及其應用 本發(fā)明涉及N-取代嘧啶磺?；?取代苯甲酰胺類化合物，涉及其制備方法，涉及 其作為Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員(如BC1-2、BC1-&、MC1-1等)抑制劑的用途，用于 治療與Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員高表達有關的疾病或癥狀中的用途，用于治療腫瘤 中的用途，以及做為增效劑與其它抗腫瘤藥物合用治療腫瘤中的用途。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，細胞調亡與腫瘤發(fā)生及耐藥產(chǎn)生有密切關系。而Bcl-2蛋白 家族在細胞凋亡通路起重要的調節(jié)作用。它可以分為抗凋亡成員(如BC1-2、BC1-a、MC1-1 等)和促凋亡成員兩類。研究表明抗凋亡成員是通過其表面的疏水凹槽與促凋亡成員的 Bcl-2蛋白家族保守區(qū)域(BH)3結合而發(fā)生相互作用，來調節(jié)細胞正常的生理凋亡。Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員被發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤中過度表達，是腫瘤產(chǎn)生及發(fā) 生耐藥的重要原因之一。通過抑制腫瘤細胞中過度表達的抗細胞凋亡成員的抗凋亡作用， 恢復其正常的凋亡通路及增加其對化療放療的敏感性是治療腫瘤的新策略。針對Bcl-2的 反義核苷酸藥物(Genasense)現(xiàn)已進入III期臨床研究，它的臨床數(shù)據(jù)證實了這一治療策略 的良好選擇性及具有提高化療放療藥物敏感性的作用。但由于反義核苷酸藥物具有固有缺 陷，小分子抑制劑將更適于臨床應用。從Bcl-2蛋白家族發(fā)揮作用的分子機制可見，小分子抑制劑通過結合于抗凋亡成 員表面疏水凹槽，可以干擾促凋亡成員BH3區(qū)域與之結合起到促進細胞凋亡的作用。目前， 抗腫瘤的Bcl-2蛋白小分子抑制劑研究成為熱點，陸續(xù)報道了一些不同結構類型的小分子 抑制劑。本發(fā)明中的有關化合物，作為Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員抑制劑，及其在抗腫 瘤方面的應用未見報道。本發(fā)明的目的在于提供能夠選擇性抑制Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員(如 Bcl-2、Bc1-xl, Mcl-I等)，恢復腫瘤細胞正常的凋亡通路及增加其對化療放療的敏感性的 化合物。更具體而言，本發(fā)明第一方面涉及式I的N-取代苯甲?；?嘧啶磺酰胺類化合
物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物或其溶劑化物， 其中R1取代位置可位于2位或3位，為氫原子，羥基，氨基，鹵素，C1 C5直鏈或支鏈烷 基，C1 C5烷酰基，C1 C5烷氧基團，C1 C5烷酰胺基。R2基團是氫原子，C1-C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠 環(huán)芳香烴基(優(yōu)選萘基，吲哚基)，C3 C6環(huán)烷烴基，或XR5 ( II )，或NR5R6 (III)。其中，X是 0，S，羰基，砜基或亞砜基；R5，R6各自獨立的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取 代芳香烴基(優(yōu)選五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基)，C3 C6環(huán)烷烴基，或式IV所示基團
6
(CH2)nYR7(IV)其中，η = 1-7 ;Y是0，S，NH,羰基，砜基或亞砜基；R7是氫原子，C1 C7直鏈或支 鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基(優(yōu)選萘基，吲哚基)。R3基團是氫原子，C1-C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠 環(huán)芳香烴基(優(yōu)選萘基，吲哚基)，雜環(huán)(優(yōu)選哌啶，哌嗪，四氫吡咯，嗎啉)，C3 C6環(huán)烷烴 基，或ZR8( V )，或NR8R9(VI)t5其中，Z是0，S，羰基，砜基或亞砜基；R8，R9各自獨立的為氫 原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基(優(yōu)選萘 基，吲哚基)，C3 C6環(huán)烷烴基，或式ΥΠ所示基團WR10(VD)其中，W是羰基，砜基或亞砜基。R10基團是C1 C7直鏈或支鏈烷基，C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代五 六元芳 香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基(優(yōu)選萘基，吲哚基)，其中取代基可以是單取代，也可以是多取代， 為鹵素，未取代或鹵代C1 C5直鏈或支鏈烷基，C1 C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺
酸基，羧基，C1 C5烷酰基，C1 C5烷酰胺基，羥基，氨基。Rltl基團還可以是CHR11R12(VDI),其中，R11, R12各自獨立的為氫，C1 C7直鏈或支 鏈烷基，硫代C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜 環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基(取代基優(yōu)選為乙酰基，甲氧甲?；?，甲酰基，乙氧 乙酰基，甲基，乙基)，或(CH2)nR13(IX)tj其中，η = 1-3，R13是未取代或取代五 六元芳香 單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基。本發(fā)明第二部分涉及藥物組合物，包括至少一種通式I的化合物或其立體異構 體，其藥用鹽，其水合物或其溶劑化物及藥用賦形劑或藥用載體。本發(fā)明第三部分涉及任一通式I的化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物， 其溶劑化物，以及它們的藥物組合物，作為Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員(如Bcl-2、 Bc1-xl, Mcl-I等)抑制劑的用途，用于治療與Bcl_2蛋白家族抗細胞凋亡成員高表達有關 的疾病或癥狀中的用途，用于治療腫瘤中的用途，以及做為增效劑與其它抗腫瘤藥物合用 治療腫瘤中的用途。根據(jù)本發(fā)明，R1, R2, R3特別優(yōu)選如下基團，但這些優(yōu)選基團并不意味著對本發(fā)明的 任何限制。根據(jù)本發(fā)明，含有取代基的基團中，未加以說明的取代基可是鹵素，未取代或鹵代 C1 C5直鏈或支鏈烷基，C1 C5烷氧基團，C1 C5烷硫基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸 基，羧基，C1 C5烷?；珻1 C5烷酰胺基，羥基，氨基等。根據(jù)本發(fā)明，術語“商素”是指氟、氯、溴或碘。根據(jù)本發(fā)明，R1取代位置可位于2位或3位，優(yōu)選為氫原子，羥基，氨基。R2基團優(yōu)選為NR5R6UII)。其中，R5, R6各自獨立的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈 烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，或式IV所示基團(CH2)nYR7(IV)其中，η = 1-7;Υ是S;R7是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基。R3基團是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，Π引哚基，哌唳，哌嗪，四氫吡略，嗎啉，或NR8R9(VI)。其中，R8, &各自獨立的為氫原子， C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，或式νπ所示基團WR10 ( W )其中，W是羰基，砜基。R10基團是C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚 基，其中取代基可以是單取代，也可以是多取代，為鹵素，未取代或鹵代C1 C5直鏈或支鏈 烷基，C1 C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸基，羧基，乙?；?，乙酰胺基，羥基，氨基。Rltl基團還可以是CHR11R12(VDI),其中，R11, R12各自獨立的為氫，C1 C7直鏈或支 鏈烷基，硫代C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜 環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基(取代基是乙?；籽跫柞；?，甲酰基，乙氧乙酰 基，甲基，乙基)，或(CH2)nR13(IX)15其中，η = 1-3，R13是未取代或取代五 六元芳香單環(huán) 或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基。根據(jù)本發(fā)明，特別優(yōu)選表1、2、3中的式I化合物，但這些化合物并不意味著對本 發(fā)明的任何限制。表1式I中特別優(yōu)選的化合物結構 表2式I中特別優(yōu)選的化合物結構(R3為N R8R9，R8為H，R9為WR10)
9 表3式I中特別優(yōu)選的化合物結構(R3為N R8R9，R8為H，R9為WRltl，R10為CHR11R12) 根據(jù)本發(fā)明I中具有酸性基團的化合物可以形成堿金屬藥用鹽，如鈉鹽，鉀鹽，鎂 鹽或鈣鹽。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中術語“立體異構體”意指通式I化合物存在的各種立體異構 體形式，如外消旋異構體、光學異構體。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的藥物組合可按本領域已知方法制備，如將式I中的化合 物、其立體異構體、其藥用鹽或它們的水合物或溶劑化物與藥用載體或賦形劑混合。本發(fā)明涉及提供對式I中的化合物進行與Bcl-2蛋白(以及其同源蛋白Bcl-xL、Mcl-I)進行蛋白結合活性測試的結果，抗腫瘤活性的測試結果，以及增效試驗的測試結果。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的化合物可以單獨或藥物組合形式給藥，給藥途徑可以是 口服、非腸道或局部給藥。藥物組合物可根據(jù)給藥途徑配成各種適宜的劑型。制備式I化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化物的方法，它包括 (1)式X的化合物 在加入1-乙基-3- (3- 二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和4_ 二甲氨基吡啶 (DMAP)，常溫條件下和式XI的化合物反應 其中R2, R1, R3如上所定義，或(2)如需要，將(1)步驟中所得式I化合物與藥用堿形成式I化合物的藥用鹽，或(3)如需要，將(1)或(2)步驟中所得式I化合物按立體化學分離方法如分餾、重 結晶，色譜等拆分成式I化合物的純光學異構體。根據(jù)本方明，式(I )化合物可以立體異構體形式存在，式(I )化合物部分中存 在不對稱中心，可具有S構型或R構型。本方明包括所有可能的立體異構體如對映體或非對 映體，以及兩種或多種立體異構體的混合物，例如對映體和/或非對映體的任何所需比例 的混合物。因此，本發(fā)明設計對映體，例如以對映體純形式存在的左旋_和右旋_對映體， 和不同比例存在的兩種對映體的混合物或外消旋物。根據(jù)本發(fā)明，式(I )化合物通過結合于抗凋亡成員表面疏水凹槽，可以干擾促凋 亡成員BH3區(qū)域與之結合起到促進細胞凋亡的作用。因此可作為抗腫瘤疾病或癥狀藥用于 動物，優(yōu)選用于哺乳動物，特別是人。本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成份的有效劑量的至少一種式(I )化合物和/ 或其立體異構體以及常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有 0. 1_90重量％的式(I )化合物和/或其生理上可接受的鹽。藥物組合物可根據(jù)本領域的 已知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將式(I )化合物和/或立體異構體與一種 或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，制成可作為人用的適當?shù)氖┯眯问交騽┝?形式。本發(fā)明的式(1)化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑 可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例 如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質劑、透皮劑、口 含片、栓劑、凍干粉針等?？梢允瞧胀ㄖ苿⒕忈屩苿?、控釋制劑及各種顆粒給藥系統(tǒng)。為 了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體，關于載體的例子是，例 如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈣、葡萄糖、尿素、碳酸 鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀
11粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維 素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑、例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸 氫鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油 等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀 粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣 片、薄膜包衣片、長榮包衣片、或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用 本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑。如葡萄糖、乳糖、淀粉、 可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃 蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二 烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域 公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的脂、 明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(1)化合物或其立體異構 體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明明膠囊或軟膠囊中。也可將 有效成分式(1)化合物或其立體異構體制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，如溶 液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，例如，水、乙醇、聚乙 二醇、1，3_丙二醇，乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。 另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油、此外、 還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、PH調節(jié)劑等。此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或 其他材料。本發(fā)明式(1)化合物或其立體異構體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防 或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化 合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式分成幾個，例如二、三或四個劑 量形式給藥。
實施例本發(fā)明可通過下面的實施例得以說明，但這些實施例不意味著對本發(fā)明有任何限 制。實施例1 :2-溴乙基苯硫烷的制備將三溴化磷7. 2ml (0. 076mol)滴加到2_苯硫基乙醇30ml (0. 22mol)中，反應結束 后，加入水50ml，乙醚100ml，分離兩相，向有機相加入硫酸鎂干燥，過濾，濃縮得無色透明 油狀物33g，收率98%0實施例2 :2_(苯硫基)乙胺的制備(2-溴乙基)苯硫烷8. 68g (0. 040mol)和4_硝基鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽 9. llg(0. 040mol)加至無水 DMF70ml 中，35°C 反應 Ih0 加入二氯甲烷 100ml，水 250ml，分 離兩相，水相用二氯甲烷(80mlX2)萃取。合并有機相，依次用0.2mol/L氫氧化鈉水溶液 80ml和水80ml洗滌。無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮得黃色固體，加入少量乙醚研磨，放 置，析出固體。過濾，濾餅用乙酸乙酯重結晶，得黃色晶體4-硝基-2-[2-(苯硫基)乙基] 異吲哚啉-1，3-二酮。
將上面得到的黃色晶體(11. 4g，0. 035mol)和85%水合胼(6. 3ml,0. 108mol)加至 甲醇200ml中。加熱至65°C反應lh。過濾，除去濾餅。向濾液中加6%鹽酸(約60ml)調 至PH = 4，冰箱靜置，析出黃色固體。過濾，除去濾餅。濾液濃縮至干，得淡黃色固體，加入水 250ml，乙醚(100ml X2次)洗滌。水層加飽和氫氧化鈉水溶液(約30ml)調至pH> 12，用 乙醚(100mlX3)提取。合并乙醚層，濾液濃縮得2-(苯硫基)乙胺4. 65g，收率73. 45%， mp 65 68°C。實施例3 2-氨基嘧啶-5-磺酸的合成向氯磺酸50mL中，緩慢加入2_氨基嘧啶8. OOg(0. 0840mol)后，150°C下回流反應 8小時。反應結束后蒸去部分氯磺酸，殘留物冷卻后倒入50g冰水中，析出固體。過濾，水重 結晶，得到白色晶體8. 60g,收率58. 2%。實施例4 2-羥基嘧啶-5-磺酸的合成2-氨基嘧啶-5-磺酸8. 60g (0. 049mol)，硫酸50mL和水2mL置于250mL圓底三頸 瓶中，180°C回流反應5小時。反應液冷卻后倒入約200g冰水中，析出固體。過濾，水重結 晶，得到白色晶體4. 66g，收率57.8%。實施例5 2-氯嘧啶-5-磺酰氯的合成2-羥基嘧啶-5-磺酸 2. 64g(0. 0150mol)和五氯化磷 10. 9g(0. 0525mol)，180°C 回 流反應8小時。反應液中加入60mL甲苯，過濾，減壓蒸干溶劑，殘留的黃色固體置于索氏提 取器中用IOOmL石油醚連續(xù)提取16小時。提取液蒸去一半，冷卻析出固體，過濾，得到白色 晶體2. 40g，收率75. 1%0實施例6 2-氯嘧啶-5-磺酰胺的合成2-氯嘧啶-5-磺酰氯32. 9g(0. 150mol)用150mL無水四氫呋喃溶解后，冰浴下 通入干燥的氨氣。反應1.5小時，TCL監(jiān)控至原料反應完畢立即停止反應。反應結束后調 PH < 6，過濾，減壓蒸干溶劑，殘余物中加入150mL 二氯甲烷，過濾，減壓蒸干溶劑，殘余物 經(jīng)硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷乙酸乙酯=50 3，得到白色固體16. lg，收率 54. 0%實施例7 :2-[2_(苯硫基)乙胺]嘧啶-5-磺酰胺的合成2-氯嘧啶-5-磺酰胺 5. 80g (0. 0300mol)與 2_ (苯硫基)乙胺 4. 60g (0. 03mol)， N，N- 二異丙基乙胺(DIEA)，以二甲亞砜作為溶劑進行常溫反應5h，反應結束后加入80ml的 IM鹽酸溶液，有白色固體析出，冷藏。過濾，固體用水洗三次，乙酸乙酯重結晶，得白色晶體 7. 7go 收率 82. 7%，mp :172 176°C。實施例8 苯甲酰胺基苯甲酸乙酯的制備苯甲酸1.22g(0. Olmol)與對氨基苯甲酸乙酯 1. 65g (0. Olmol)，1-乙基 _3_ (3_ 二 甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI) 2. 3g(0.012mol)，4-二甲氨基吡啶(DMAP)少量，以二氯 甲烷為溶劑常溫反應3h，反應結束后，加入0. 5M的鹽酸IOOml，有固體析出，濾出，二氯甲烷 相再用碳酸氫鈉洗，飽和氯化鈉洗，無水硫酸鎂干燥，濃縮。濃縮后的產(chǎn)物與上述濾出的固 體合并，得粗品2. 5g，直接用于下一步反應。其它取代的苯甲酰胺基苯甲酸乙酯以不同取代的苯甲酸與對氨基苯甲酸乙酯反 應，重復實施8的步驟制得。其它4-(2取代-3取代)苯甲酸乙酯以不同的N保護的疏水氨基酸與對氨基苯甲酸乙酯反應，重復實施8的步驟制得。實施例9 苯甲酰胺基苯甲酸的制備實施例8所得到的苯甲酰胺基苯甲酸乙酯2. 5g，溶于60ml四氫呋喃甲醇= 1 1的溶液，完全溶解后，加入氫氧化鈉水溶液(Ig氫氧化鈉溶于IOml水)，反應結束后， 將有機溶劑蒸干，加入IM的鹽酸溶液30ml，有白色沉淀析出，沉淀過濾，烘干，濾液用乙酸 乙酯50ml提取，無水硫酸鎂干燥，濃縮。濃縮后的產(chǎn)物與上述濾出的固體合并，四氫呋喃重 結晶。得到白色晶體2g。收率90%，mp:280 284°C。其它取代的苯甲酰胺基苯甲酸以不同取代的苯甲酰胺基苯甲酸乙酯經(jīng)堿水解反 應，重復實施9的步驟制得。其它4_(2取代-3取代)苯甲酸以不同取代的4_(2取代-3取代)苯甲酸乙酯經(jīng) 堿水解反應，重復實施9的步驟制得。其它苯甲酸，對甲基苯甲酸，4-氟苯基苯甲酸為購買得到。實施例10 目標化合物的制備苯甲酰胺基苯甲酸0. 14g(0. 57mmol)與2_[2_(苯硫基)乙胺]嘧啶_5_磺酰胺 0. 17g (0. 57mmol)，1-乙基-3- (3- 二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI) 0. 24g (1. 14mmol)， 4_ 二甲氨基吡啶少量，以二氯甲烷為溶劑常溫反應3h，反應結束后，加0. 5M的鹽酸20ml， 有白色沉淀析出，沉淀過濾，烘干，濾液用乙酸乙酯50ml提取，無水硫酸鎂干燥，濃縮。濃縮 后的產(chǎn)物與上述濾出的固體合并，過凝膠柱。(展開劑為二氯甲烷甲醇=1 4)收率 88%, mp 246 247。其它目標化合物由實施例9得到的化合物與實施例7得到的2-[2_(苯硫基)乙 胺]嘧啶-5-磺酰胺反應，重復實施例10的步驟制得。本發(fā)明已合成的部分優(yōu)選化合物的熔點、產(chǎn)率及光譜數(shù)據(jù)見表4。表4部分優(yōu)選化合物的熔點、產(chǎn)率及光譜數(shù)據(jù)
15 實施例11 本發(fā)明化合物對于Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-I三種蛋白的親和力將Bid BH3區(qū)域肽(序列EDIIRNIARHLAQVGDSMDR)，N-末端用異硫氰酸熒光素 標記。200nM的Bcl-xL，Bcl-2或者Mcl-I蛋白與等量的200nM的異硫氰酸熒光素標記的 BH3肽，以及不同濃度的PBS (pH7. 4)，本發(fā)明的化合物一起在室溫下培養(yǎng)10分鐘后，分別在 激發(fā)波長為485nm和吸收波長520nm下，記錄熒光偏振。所有試驗均重復3次。IC5tl通過 劑量效應曲線得到?；衔?抑制Bcl-2蛋白的IC5tl :41. 4 μ M?；衔?8在100 μ M時對 Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-I三種蛋白的抑制率分別為32%, 50%, 34% 實施例12 本發(fā)明化合物對于人體腫瘤細胞的體外增殖抑制作用將本化合物用DMSO溶解后，加入PBS (-)配成1000ug/mL的溶液或均勻的混懸液， 然后再用含DMSO的PBS(-)稀釋成5個濃度梯度。以棉酚(Gossypol)作為對照。選擇五 種腫瘤細胞NCI-H446 (人非小細胞肺癌細胞)，HCTl 16 (人結腸癌細胞)，PC-3M (人前列腺 癌細胞，MDA-MB-435(人乳腺癌細胞)，Raji (人淋巴瘤細胞)均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理研究室凍存和傳代。在RPMI1640+15% NBS+雙抗(青霉素100單位/mL，鏈霉素IOOug/ mL)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。96孔板每孔加入濃度為4 5X104個/ml的細胞懸液100 μ 1，置 37°C,5% CO2培養(yǎng)箱內。24h后，加入樣品液，10μ 1/孔，設雙復孔，37°C，5% C02作用72h。 每孔加入5mg/ml的MTT溶液20 μ 1，作用4h后加入溶解液，100 μ 1/孔，置培養(yǎng)箱內，溶解 后用ΜΚ-2全自動酶標儀測570nm OD值，通過與空白對照比較來評價其細胞增殖抑制情況， 計算IC5(I。如表5所示為本發(fā)明化合物和陽性對照棉酚乙酸(GA)對于五種人體腫瘤細胞 的體外增殖抑制作用。
實施例13 本發(fā)明化合物對于細胞毒抗腫瘤藥物的細胞水平有增效增效作用配制濃度^J 10yg/ml,lyg/ml,0. 1 μ g/ml,0. 01 μ g/ml,0. 001 μ g/ml,
0.0001 μ g/ml，0. 00001 μ g/ml的紫杉醇溶液，作為對照品溶液，測定此時的IC5tl值，然后在 各個濃度的紫杉醇溶液溶液中，分別加入100 μ g/ml，50 μ g/ml的化合物18，測定IC5tl值。 通過金式公式(Q = ICa+b/((ICa+ICb)-ICa*ICb))計算Q值，當Q>0. 85時為合并，當Q >
1.15時為協(xié)同，說明對于細胞毒抗腫瘤藥物有增效作用。當紫杉醇溶液的濃度為0. 01 μ g/ ml時，100 μ g/ml的化合物18與其合用的Q值為1. 277，50 μ g/ml的化合物18與其合用的 Q值為1. 264，此外，當紫杉醇溶液的濃度為0. 001 μ g/ml時，100 μ g/ml的化合物18與其合 用的Q值為1.275，說明此時對于細胞毒抗腫瘤藥物有增效作用。
權利要求
式I的N 取代嘧啶磺?；?取代苯甲酰胺類化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物或其溶劑化物，其中R1取代位置可位于2位或3位，為氫原子，羥基，氨基，鹵素，C1～C5直鏈或支鏈烷基，C1～C5烷?；?，C1～C5烷氧基團，C1～C5烷酰胺基。R2基團是氫原子，C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，C3～C6環(huán)烷烴基，或XR5(II)，或NR5R6(III)。其中，X是O，S，羰基，砜基或亞砜基；R5，R6各自獨立的為氫原子，C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代芳香烴基，C3～C6環(huán)烷烴基，或式IV所示基團(CH2)nYR7 (IV)其中，n＝1 7；Y是O，S，NH，羰基，砜基或亞砜基；R7是氫原子，C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基。R3基團是氫原子，C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3～C6環(huán)烷烴基，或ZR8(V)，或NR8R9(VI)。其中，Z是O，S，羰基，砜基或亞砜基；R8，R9各自獨立的為氫原子，C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，C3～C6環(huán)烷烴基，或式VII所示基團WR10(VII)其中，W是羰基，砜基或亞砜基。R10基團是C1～C7直鏈或支鏈烷基，C3～C6環(huán)烷烴基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，其中取代基可以是單取代，也可以是多取代，為鹵素，未取代或鹵代C1～C5直鏈或支鏈烷基，C1～C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸基，羧基，C1～C5烷?；珻1～C5烷酰胺基，羥基，氨基。R10基團還可以是CHR11R12(VIII)，其中，R11，R12各自獨立的為氫，C1～C7直鏈或支鏈烷基，硫代C1～C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3～C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基，或(CH2)nR13(IX)。其中，n＝1 3，R13是未取代或取代五～六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3～C6環(huán)烷烴基。dest_path_FSB00000279582200011.tif
2.權利要求1的式I化合物，其中R1取代位置可位于2位或3位，為氫原子，羥基，氨基，鹵素，C1 C5直鏈或支鏈烷基。 R2基團是XR5 (II)，或NR5R6 (III)。其中，X是0，S，羰基，砜基或亞砜基；R5，R6各自獨立 的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代芳香烴基，或式IV所示基團 (CH2)nYR7(IV)其中，η = 1-7 ；Y是0，S，ΝΗ，羰基，砜基或亞砜基；R7是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷 基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基。R3基團是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳 香烴基，雜環(huán)，或ZR8(V),或NR8R9(VI)。其中，Z是0，S，羰基，砜基或亞砜基；R8，R9各自獨 立的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，C3 C6環(huán)烷烴基，或式VII所示基團 WR10(VII)其中，W是羰基，砜基或亞砜基。R10基團是C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基， 其中取代基可以是單取代，也可以是多取代，為鹵素，未取代或鹵代C1 C5直鏈或支鏈烷 基，C1-C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸基，羧基，C1 C5烷酰基，C1-C5烷酰胺 基，輕基，氨基。R10基團還可以是CHR11R12 (VIII)，其中，Rn，R12各自獨立的為氫，C1 C7直鏈或支鏈烷 基，硫代C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)， C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基，或(CH2)nR13(IX)。其中，η = 1-3, R13是未取代或取 代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基。
3.權利要求1的式I化合物，其中R1取代位置可位于2位或3位，為氫原子，羥基，氨基，鹵素，甲基，乙基。 R2基團是XR5 (II)，或NR5R6 (III)。其中，X是0，S，羰基，砜基或亞砜基；R5，R6各自獨立 的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，或式 IV所示基團(CH2)nYR7(IV)其中，η = 1-7 ；Y是0，S，ΝΗ，羰基，砜基或亞砜基；R7是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷 基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基。R3基團是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲 哚基，哌啶，哌嗪，四氫吡咯，嗎啉，或ZR8(V),或NR8R9 (VI)。其中，Z是0，S，羰基，砜基或亞 砜基；R8，R9各自獨立的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單 環(huán)，萘基，吲哚基，或式VII所示基團 WR10(VII)其中，W是羰基，砜基或亞砜基。R10基團是C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，其 中取代基可以是單取代，也可以是多取代，為鹵素，未取代或鹵代C1 C5直鏈或支鏈烷基， C1 C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸基，羧基，乙?；?，乙酰胺基，羥基，氨基。R10基團還可以是CHR11R12 (VIII)，其中，Rn，R12各自獨立的為氫，C1 C7直鏈或支鏈烷 基，硫代C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)， C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基，或(CH2)nR13(IX)15其中，η = 1-3, R13是未取代或取 代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基。
4.權利要求1的式I化合物，其中R1取代位置可位于2位或3位，為氫原子，羥基，氨基。R2基團是XR5 (II)，或NR5R6 (III)。其中，X是0，S，羰基，砜基或亞砜基；R5，R6各自獨立 的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，或式 IV所示基團(CH2)nYR7(IV)其中，η = 1-7 ；Y是0，S，ΝΗ，羰基，砜基或亞砜基；R7是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基。R3基團是氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲 哚基，哌啶，哌嗪，四氫吡咯，嗎啉，或ZR8(V),或NR8R9 (VI)。其中，Z是0，S，羰基，砜基或亞 砜基；R8，R9各自獨立的為氫原子，C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單 環(huán)，萘基，吲哚基，或式VII所示基團 WR10(VII)其中，W是羰基，砜基或亞砜基。R10基團是C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)，萘基，吲哚基，其 中取代基可以是單取代，也可以是多取代，為鹵素，未取代或鹵代C1 C5直鏈或支鏈烷基， C1 C5烷氧基團，硝基，三氟甲基，氰基，磺酸基，羧基，乙?；?，乙酰胺基，羥基，氨基。R10基團還可以是CHR11R12 (VIII)，其中，Rn，R12各自獨立的為氫，C1 C7直鏈或支鏈烷 基，硫代C1 C7直鏈或支鏈烷基，未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠環(huán)芳香烴基，雜環(huán)， C3 C6環(huán)烷烴基，未取代或取代氨基(取代基是乙酰基，甲氧甲?；柞；已跻阴；?甲基，乙基)，或(CH2)nR13(IX)15其中，η = 1-3，R13是未取代或取代五 六元芳香單環(huán)或稠 環(huán)芳香烴基，雜環(huán)，C3 C6環(huán)烷烴基。
5.權利要求1的化合物，其中所述式I化合物選自如下化合物(1)N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺酰基)苯酰胺(2)4-甲基-N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(3)4-對氟苯基-N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(4)4-(苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(5)4--(2-氟苯基甲酰氨基)_-N-(2--(2--(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(6)4-(3-氟苯基甲酰氨基)_-N-(2--(2--(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(7)4--(4-氟苯基甲酰氨基)_-N-(2--(2--(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺⑶4--(2-氯苯基甲酰氨基)_-N-(2--(2--(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(9)4-(3-氯苯基甲酰氨基)_-N-(2--(2--(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(10)4-(4-氯苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(11)4-(2-甲基苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺酰基)苯酰胺(12)4-(3-甲基苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(13)4-(4-甲基苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；?苯酰胺(14)4-(4-三氟甲基苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺酰基) 苯酰胺(15)4-(2，3，4_三甲氧基苯基甲酰氨基)-Ν-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶_5_磺酰 基)苯酰胺(16)4-(3，4，5_三甲氧基苯基甲酰氨基)-Ν-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶_5_磺酰 基)苯酰胺(17)4-(4-硝基苯基甲酰氨基)-N-(2-(2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺酰基)苯酰(18)4- (2-乙酰氨基-3-苯基丙氨基)-N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺?；? 苯酰胺(19)4- (2-乙酰氨基-4-甲基戊氨基)-N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺酰基) 苯酰胺(20)4- (2-乙酰氨基-4-(甲巰基)丁氨基)-N- (2- (2-(苯巰基)乙氨基)嘧啶-5-磺 ?；?苯酰胺
6.藥物組合物，它包括至少一種權利要求1 5任一的式I化合物或其立體異構體，其 藥用鹽，其水合物或其溶劑化物及藥用賦形劑或藥用載體。
7.權利要求1 5任一的式I化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化 物，以及它們的藥物組合物作為Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員(如BC1-2、Bc1-Xl、MC1-1 等)抑制劑的用途。
8.權利要求1 5任一的式I化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化 物，以及它們的藥物組合物，用于治療與Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員高表達有關的疾 病或癥狀中的用途，或用于治療腫瘤中的用途。
9.權利要求1 5任一的式I化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化 物，以及它們的藥物組合物，做為增效劑與其它抗腫瘤藥物合用治療腫瘤中的用途。
10.制備式I化合物，其立體異構體，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化物的方法，它包括 ⑴式X的化合物 在加入1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)和4-二甲氨基吡啶 (DMAP)，常溫條件下和式XI的化合物反應 其中R2, R1, R3如上所定義，或(2)如需要，將(1)步驟中所得式I化合物與藥用堿形成式I化合物的藥用鹽，或(3)如需要，將(1)或(2)步驟中所得式I化合物按立體化學分離方法如分餾、重結晶， 色譜等拆分成式I化合物的純光學異構體。
全文摘要
Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員的N-取代嘧啶磺?；?取代苯甲酰胺類小分子抑制劑及其應用，本發(fā)明涉及起抑制Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員(如Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1等)作用的式I的N-取代苯甲?；?嘧啶磺酰胺類化合物其中各基團的定義詳見說明書。這些化合物(和若存在時其立體異構體)，其藥用鹽，其水合物，其溶劑化物，以及它們的藥物組合物可用于治療與Bcl-2蛋白家族抗細胞凋亡成員高表達有關的疾病或癥狀中的用途，或用于治療腫瘤中的用途，或做為增效劑與其它抗腫瘤藥物合用治療腫瘤中的用途。還涉及式I的化合物和其藥用鹽的制備方法。
文檔編號C07D239/47GK101899008SQ20101018016
公開日2010年12月1日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權日2010年5月20日
發(fā)明者付丙月, 劉嘉, 呂加國, 周峰, 周有駿, 唐輝, 朱駒, 束暢, 楊輝, 鄭燦輝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學