專利名稱：利用防氧化效果高的溶劑生產(chǎn)還原型輔酶Q₁₀的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成還原型輔酶Qltl的方法和使還原型輔酶Qltl結(jié)晶的方法。與氧化型 輔酶Qltl相比，還原型輔酶91(|顯示高水平的口服可吸收性，是可用作食品、功能性營(yíng)養(yǎng)食品、 特定保健食品、營(yíng)養(yǎng)添加劑、營(yíng)養(yǎng)劑、飲料、飼料、動(dòng)物藥、化妝品、藥品、治療藥、預(yù)防藥等成 分的化合物。
背景技術(shù)：
氧化型輔酶Qltl是一種廣泛分布在生物界中的苯醌衍生物，由于它的維生素樣功 能，也被稱為維生素Q，是在恢復(fù)已被削弱的細(xì)胞活性至其健康條件中，以及在使機(jī)體復(fù)原 中充當(dāng)營(yíng)養(yǎng)劑的一種成分。另一方面，還原型輔酶Qltl是從氧化型輔酶Qltl減少兩個(gè)電子衍 生而來(lái)，是白色晶體，而氧化型輔酶Qltl是橙色晶體。還原型輔酶Qltl和氧化型輔酶Q1O已知 位于線粒體、溶酶體、高爾基體、微粒體、過(guò)氧化物酶體和細(xì)胞膜等部位，作為電子傳遞系統(tǒng) 的組分，參與ATP的產(chǎn)生與活化、體內(nèi)抗氧化活性和膜的穩(wěn)定化；它們因而是維持機(jī)體功能 所不可缺少的物質(zhì)。已知還原型輔酶Qltl可以借助按照常規(guī)方式生產(chǎn)輔酶Qltl加以制備，例如合成， 發(fā)酵，或者從天然產(chǎn)物中提取，濃縮來(lái)自色譜法的含有還原型輔酶Qltl的洗脫部分(J對(duì) A-10-109933)。在這種場(chǎng)合下，正如上面引用的出版物所述，可以在利用常規(guī)還原劑、例如 硼氫化鈉或連二亞硫酸鈉(sodium dithionite)還原包含在還原型輔酶Qltl中的氧化型輔 酶Qltl之后進(jìn)行色譜濃縮，或者可以使上述還原劑與現(xiàn)有的高純級(jí)輔酶Qltl (氧化形式)反 應(yīng)，來(lái)制備還原型輔酶Q1(1。不過(guò)，如此得到的還原型輔酶Qltl不能總是處于高純狀態(tài)，而是 趨于以低純度結(jié)晶性、半固體或油性產(chǎn)物存在，含有氧化型輔酶Qltl等雜質(zhì)。JP-A-57-70834公開了一種合成還原型輔酶Qltl的實(shí)例，將輔酶Qltl溶于己烷，向該 溶液加入連二亞硫酸氫鈉，然后攪拌。不過(guò)，使用硫代硫酸鈉作為還原劑的量高達(dá)輔酶Qiq 重量的兩倍。因而，這類合成方法面臨經(jīng)濟(jì)上的問題，以及隨后純化工藝上的復(fù)雜性問題。還原型輔酶Qltl容易被分子氧氧化為氧化型輔酶Q1(l。在商業(yè)生產(chǎn)規(guī)模上，完全地消 除氧是非常難以實(shí)現(xiàn)的，此外，個(gè)別操作需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間階段，不象實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的生產(chǎn)， 因此殘留的氧發(fā)揮較大的不利影響。有關(guān)氧化作用直接與收率和質(zhì)量問題有關(guān)，因?yàn)樯?了幾乎不可消除的氧化型輔酶Qltl，并隨即摻雜在產(chǎn)物中。為了獲得晶體形式的高純還原型 輔酶Qltl,重要的是充分保護(hù)還原形式免受上述氧化作用。發(fā)明概述鑒于上述，本發(fā)明的目的是提供方便、有效的合成高質(zhì)量還原型輔酶Qltl和使其結(jié) 晶的方法。此外，本發(fā)明的另一目的是提供杰出的獲得晶體形式的高質(zhì)量還原型輔酶Qltl的方法，適合在商業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)。本發(fā)明人進(jìn)行了廣泛研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)置于特定的溶劑中時(shí)，還原型輔酶Qltl被 有利地保護(hù)起來(lái)，免受分子氧的氧化作用，基于這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)，他們完成了本發(fā)明。因而，本發(fā)明提供生產(chǎn)還原型輔酶Qltl的方法，該方法包含使用選自除己烷以外的烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種作為溶劑，通 過(guò)使氧化型輔酶Qltl還原來(lái)合成還原型輔酶Q1q。本發(fā)明還提供生產(chǎn)還原型輔酶Qltl的方法，該方法包含在脫氧氣氛中使用烴作為溶劑，借助氧化型輔酶Qltl的還原來(lái)合成還 原型輔酶Q1(1。本發(fā)明進(jìn)一步提供使還原型輔酶Qltl結(jié)晶的方法，該方法包含使用選自由烴、脂肪酸酯、醚和腈組成的組的至少一種作為溶劑，使還 原型輔酶Qltl結(jié)晶。本發(fā)明進(jìn)一步提供使還原型輔酶Qltl穩(wěn)定的方法，該方法包含處理還原型輔酶Qltl在至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑中的 溶液形式，由此保護(hù)還原型輔酶Qltl免受分子氧的氧化作用。本發(fā)明更進(jìn)一步提供還原型輔酶Qltl晶體，其還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl之重 量比不低于96/4。按照本發(fā)明，在借助氧化型輔酶Qltl的還原合成還原型輔酶Qltl時(shí)，有可能有利地保 護(hù)還原型輔酶Qltl免受分子氧的氧化作用，從而有可能合成高質(zhì)量的還原型輔酶Qltl,其條件 是作為副產(chǎn)物生成的氧化型輔酶Qltl減少至最低程度。此外，本發(fā)明使還原型輔酶Qltl結(jié)晶 的方法有可能有利地保護(hù)還原型輔酶Qltl免受分子氧的氧化作用，因而有可能轉(zhuǎn)化還原型 輔酶Qltl為結(jié)晶狀態(tài)，其條件是作為副產(chǎn)物生成的氧化型輔酶Qici減少至最低程度，由此得到 高質(zhì)量的結(jié)晶性輔酶Q1(1。本發(fā)明還涉及1、生產(chǎn)還原型輔酶Qltl的方法，該方法包含使用選自除己烷以外的烴、脂肪酸酯、 醚和腈的至少一種作為溶劑，借助氧化型輔酶Qltl的還原合成還原型輔酶Q1q。2、根據(jù)項(xiàng)1的方法，其中使用選自脂肪酸酯、醚和腈的至少一種作為溶劑。3、根據(jù)項(xiàng)1或2的方法，其中還原是在脫氧氣氛中進(jìn)行的。4、制備還原型輔酶Qltl的方法，該方法包含在脫氧氣氛中使用烴作為溶劑，借助氧 化型輔酶Qltl的還原合成還原型輔酶Q1q。5、根據(jù)項(xiàng)4的方法，其中使用一種庚烷作為溶劑。6、根據(jù)任意項(xiàng)1至5的方法，其中使用金屬氫化物、鐵或鋅作為還原劑。7、根據(jù)任意項(xiàng)1至5的方法，其中還原是在水的存在下進(jìn)行的，使用連二亞硫酸或 其鹽作為還原劑。8、根據(jù)項(xiàng)7的方法，其中還原是在pH 3至7進(jìn)行的。9、根據(jù)項(xiàng)7或8的方法，其中連二亞硫酸或其鹽的用量等于或小于氧化型輔酶Qltl 的量，按重量計(jì)。10、根據(jù)任意項(xiàng)1至5的方法，其中使用抗壞血酸或其有關(guān)化合物作為還原劑。11、根據(jù)項(xiàng)10的方法，其中使用選自醚和腈的至少一種水混溶性高的種類作為溶劑。12、根據(jù)項(xiàng)10或11的方法，其中抗壞血酸或其有關(guān)化合物的用量不小于1摩爾每 摩爾氧化型輔酶Q1(1。13、根據(jù)任意項(xiàng)10至12的方法，其中還原是在堿性物質(zhì)或亞硫酸氫鹽的存在下進(jìn) 行的。14、根據(jù)任意項(xiàng)1至13的方法，其中在還原反應(yīng)之后，回收含有產(chǎn)物還原型輔酶Qltl 的有機(jī)相，用水洗滌。15、使還原型輔酶Qltl結(jié)晶的方法，該方法包含使用選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至 少一種作為溶劑，使還原型輔酶Qltl結(jié)晶。16、根據(jù)項(xiàng)15的方法，其中使用脂族烴作為溶劑。17、根據(jù)項(xiàng)16的方法，其中該脂族烴是無(wú)環(huán)的脂族烴。18、根據(jù)項(xiàng)16的方法，其中該脂族烴是選自戊烷類、己烷類、庚烷類和辛烷類的至 少一種。19、根據(jù)任意項(xiàng)15至18的方法，其中雜質(zhì)被消除在母液中。20、根據(jù)項(xiàng)19的方法，其中所要消除的雜質(zhì)是選自還原型輔酶Q9、還原型輔酶08和 還原型輔酶Q7的至少一種。21、根據(jù)任意項(xiàng)15至20的方法，其中還原型輔酶Qltl的結(jié)晶是按照冷卻結(jié)晶的方 式或者冷卻結(jié)晶與另一種結(jié)晶方法的組合方式進(jìn)行的。22、根據(jù)項(xiàng)21的方法，其中結(jié)晶步驟中的冷卻溫度不高于20°C。23、根據(jù)任意項(xiàng)15至22的方法，其中結(jié)晶濃度以結(jié)晶完成時(shí)還原型輔酶Qltl的重 量相對(duì)于結(jié)晶溶劑的重量表示，不高于15w/w%。24、根據(jù)任意項(xiàng)15至23的方法，其中結(jié)晶是在由攪拌所需的力所導(dǎo)致的強(qiáng)迫流動(dòng) 下進(jìn)行的，該力每單位體積不弱于0. 01kW/m3。25、根據(jù)任意項(xiàng)15至24的方法，其中在進(jìn)行結(jié)晶時(shí)加入晶種。26、根據(jù)任意項(xiàng)15至25的方法，其中結(jié)晶是在脫氧氣氛中進(jìn)行的。27、根據(jù)項(xiàng)15的方法，其中所要進(jìn)行結(jié)晶的還原型輔酶Qltl是可借助根據(jù)任意項(xiàng)1 至14的方法而得到的產(chǎn)物。28、根據(jù)項(xiàng)15的方法，其中還原型輔酶Qltl的結(jié)晶是從可借助根據(jù)任意項(xiàng)1至14 的方法而得到的還原反應(yīng)混合物中進(jìn)行的，或者是從可通過(guò)分離含有還原型輔酶Qltl的有 機(jī)相和——如果必要的話——洗滌有機(jī)相而得到的溶液中進(jìn)行的。29、使還原型輔酶Qltl穩(wěn)定的方法，該方法包含處理還原型輔酶Qltl在至少一種選自 烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑中的溶液形式，由此保護(hù)還原型輔酶Qltl免受分子氧的氧化作 用。30、根據(jù)項(xiàng)29的方法，其中用于處理還原型輔酶Qltl的操作是至少一種選自萃取/ 洗滌、濃縮和柱色譜的操作。31、根據(jù)項(xiàng)29或30的穩(wěn)定化方法，其中萃取/洗滌是通過(guò)從外部加入至少一種選 自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑而進(jìn)行的。32、根據(jù)任意項(xiàng)29至31的穩(wěn)定化方法，其中該烴是選自戊烷類、己烷類、庚烷類和 辛烷類的至少一種。
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33、根據(jù)任意項(xiàng)29至31的穩(wěn)定化方法，其中該脂肪酸酯是甲酸酯、乙酸酯或丙酸34、根據(jù)任意項(xiàng)29至31的穩(wěn)定化方法，其中該醚是含有4至8個(gè)碳原子的醚。35、根據(jù)任意項(xiàng)29至31的穩(wěn)定化方法，其中該腈是含有2至8個(gè)碳原子的腈。36、還原型輔酶Qltl晶體，其還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比不低于96/4。發(fā)明詳述下面詳細(xì)描述本發(fā)明。按照本發(fā)明，在保護(hù)還原型輔酶Qltl免受上述氧化作用破壞方面高度有效的溶劑、 也就是選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種用于合成高質(zhì)量的還原型輔酶Qltl和使其結(jié) 晶，進(jìn)一步用于穩(wěn)定地處理還原型輔酶Qltl,同時(shí)抑制還原型輔酶Qltl被分子氧氧化為氧化型 輔酶Qltl,同時(shí)抑制還原型輔酶Qltl被分子氧氧化為氧化型輔酶Q1(l。驚人的是，還原型輔酶 Qltl以溶解或懸浮在上述溶劑中的狀態(tài)而非結(jié)晶狀態(tài)被充分保護(hù)免受分子氧的氧化作用。這 些溶劑的上述防氧化效果是由本發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)的。烴是沒有特別限制的，但是例如可以提到脂族烴、芳族烴、鹵代烴等。優(yōu)選脂族烴 和芳族烴，更優(yōu)選脂族烴。脂族烴是沒有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不 過(guò)，一般而言它們含有3至20個(gè)碳原子，優(yōu)選5至12個(gè)碳原子。關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到丙烷、丁烷、異丁烷、戊烷、2-甲基丁烷、環(huán)戊烷、 2-戊烯、己烷、2-甲基戊烷、2，2- 二甲基丁烷、2，3- 二甲基丁烷、甲基環(huán)戊烷、環(huán)己烷、1-己 烯、環(huán)己烯、庚烷、2-甲基己燒、3-甲基己烷、2，3_ 二甲基戊烷、2，4_ 二甲基戊烷、甲基環(huán)己 烷、1-庚烯、辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、異辛烷、乙基環(huán)己烷、1-辛烯、壬烷、2，2，5-三甲基己 烷、1-壬烯、癸烷、1-癸烯、對(duì)薄荷烷、十一烷、十二烷等。其中，具有5至8個(gè)碳原子的飽和脂族烴是更優(yōu)選的，優(yōu)選使用的是戊烷、2-甲基 丁烷和環(huán)戊烷，它們具有5個(gè)碳原子(稱之為“戊烷類”)；己烷、2-甲基戊烷、2，2_ 二甲基 丁烷、2，3_ 二甲基丁烷、甲基環(huán)戊烷、環(huán)己燒，它們具有6個(gè)碳原子(稱之為“己烷類”)；庚 烷、2-甲基己燒、3-甲基己烷、2，3_ 二甲基戊烷、2，4_ 二甲基戊烷、甲基環(huán)己烷，它們具有7 個(gè)碳原子(稱之為“庚烷類”)；辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、異辛烷、乙基環(huán)己烷，它們具有8 個(gè)碳原子(稱之為“辛烷類”)；和它們的混合物。確切而言，上述庚烷類是特別優(yōu)選的，因 為它們具有顯示非常高的防氧化效果的趨勢(shì)，庚烷是最優(yōu)選的。芳族烴是沒有特別限制的，但是一般而言它們含有6至20個(gè)碳原子，優(yōu)選6至12 個(gè)碳原子，更優(yōu)選7至10個(gè)碳原子。作為特定實(shí)例，例如可以提到苯、甲苯、二甲苯、鄰二甲
苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、乙基苯、枯烯(cumene)、菜(mesitylene)、四氫化萘(tetralin)、 丁基苯、對(duì)饊花烴(p-cymene)、環(huán)己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二基苯、苯乙烯 等。優(yōu)選甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、乙基苯、枯烯、菜、四氫化萘、丁基 苯、對(duì)饊花烴、環(huán)己基苯、二乙基苯和戊基苯。更優(yōu)選甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì) 二甲苯、枯烯和四氫化萘，最優(yōu)選枯烯。鹵代烴是沒有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不 過(guò)，無(wú)環(huán)鹵代烴是優(yōu)選使用的。更優(yōu)選氯代烴和氟代烴，氯代烴是進(jìn)而更優(yōu)選的。另外，使用含有1至6個(gè)碳原子者，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至2個(gè)碳原子。關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1_ 二氯乙烷、1，2_ 二 氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1，1，2-四氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、五氯 乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2-二氯丙烷、1，2， 3-三氯丙烷、氯苯、1，1，1,2-四氟乙烷等。優(yōu)選二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1- 二氯乙烷、 1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2_三氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙 烯、氯苯和1，1，1，2_四氟乙烷。更優(yōu)選二氯甲烷、氯仿、1，2_ 二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯和 1,1,1,2-四氟乙燒。進(jìn)而更優(yōu)選二氯甲烷、氯仿、1，2_ 二氯乙烯和三氯乙烯。脂肪酸酯是沒有特別限制的，但是例如可以提到丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。優(yōu)選 乙酸酯和甲酸酯，更優(yōu)選乙酸酯。其酯官能團(tuán)是沒有特別限制的，但是可以提到具有1至8 個(gè)碳原子的烷基酯、具有1至8個(gè)碳原子的芳烷基酯等。優(yōu)選具有1至6個(gè)碳原子的烷基 酯，更優(yōu)選具有1至4個(gè)碳原子的烷基酯。關(guān)于丙酸酯，例如可以提到丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸異戊酯等。優(yōu)選丙 酸乙酯。關(guān)于乙酸酯，例如可以提到乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁 酯、乙酸異丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸仲己酯、乙酸環(huán)己酯、乙酸芐酯 等。優(yōu)選乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸仲丁酯、 乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸仲己酯和乙酸環(huán)己酯。更優(yōu)選乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、 乙酸異丙酯、乙酸丁酯和乙酸異丁酯。最優(yōu)選乙酸乙酯。關(guān)于甲酸酯，例如可以提到甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸異丙酯、甲酸丁 酯、甲酸異丁酯、甲酸仲丁酯、甲酸戊酯等。優(yōu)選甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、 甲酸異丁酯和甲酸戊酯。最優(yōu)選甲酸乙酯。醚是沒有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。但是飽和 者是優(yōu)選使用的。一般而言，使用含有3至20個(gè)碳原子者，優(yōu)選4至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選 4至8個(gè)碳原子。關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二異丙醚、二丁醚、 二己醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚、茴香醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、 呋喃、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二
醇一甲醚、乙二醇一乙醚、乙二醇一丁醚等。優(yōu)選二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二異丙醚、二丁醚、二己醚、茴香醚、苯乙醚、 丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇 二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二醇一甲醚和乙二醇一乙醚。更優(yōu)選二乙醚、甲基叔丁基醚、茴香 醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇一甲醚和乙二醇一乙醚。進(jìn)而更優(yōu)選二乙醚、甲基叔丁基醚、 茴香醚等。最優(yōu)選甲基叔丁基醚。腈是沒有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不過(guò)，飽 和者是優(yōu)選使用的。一般而言，使用含有2至20個(gè)碳原子者，優(yōu)選2至12個(gè)碳原子，更優(yōu) 選2至8個(gè)碳原子。關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、異丁腈、琥珀腈、戊腈、戊 二腈、己腈、庚基氰、辛基氰、十一碳腈、十二碳腈、十三碳腈、十五碳腈、硬脂腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、溴丙腈、甲氧基乙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、甲苯腈、芐腈、氯芐腈、溴 芐腈、氰基苯甲酸、硝基芐腈、茴香腈、鄰苯二甲腈、溴甲苯腈、氰基苯甲酸甲酯、甲氧基芐 腈、乙酰基芐腈、萘腈、聯(lián)苯甲腈、苯丙腈、苯丁腈、甲基苯乙腈、二苯乙腈、萘乙腈、硝基苯乙 腈、氯芐基氰、環(huán)丙烷甲腈、環(huán)己烷甲腈、環(huán)庚烷甲腈、苯基環(huán)己烷甲腈、甲苯基環(huán)己烷甲腈寸。優(yōu)選乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈、琥珀腈、戊腈、氯丙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙 酯、甲苯腈和芐腈。更優(yōu)選乙腈、丙腈、丁腈和異丁腈。最優(yōu)選乙腈。在從上述溶劑中選擇所用溶劑時(shí)，優(yōu)選地考慮沸點(diǎn)和粘度等性質(zhì)；例如，溶劑應(yīng)當(dāng) 具有下述沸點(diǎn)、熔點(diǎn)以及具有較低粘度(在20°C下不高于約IOcp)，所述沸點(diǎn)允許為增加溶 解度而適當(dāng)加熱，有利于干燥除去濕材中的溶劑和從結(jié)晶濾液中回收溶劑(約30至150°C， latm)，所述熔點(diǎn)允許在室溫下處理時(shí)以及冷卻至室溫或以下后(不高于約20°C，優(yōu)選不高 于約10°C，進(jìn)而更優(yōu)選不高于約0°C )幾乎不發(fā)生固化。從工業(yè)操作觀點(diǎn)來(lái)看，在常溫下幾 乎不揮發(fā)的溶劑是優(yōu)選的；例如，沸點(diǎn)不低于約80°C者是優(yōu)選的，沸點(diǎn)不低于約90°C者是 更優(yōu)選的。還原型輔酶Qltl當(dāng)處于溶解狀態(tài)時(shí)，隨著濃度增加，趨于變得更加耐受氧化作用。 還原型輔酶Qltl高度可溶于上述溶劑，在這方面，上述溶劑也適合于防氧化效果。從防氧化 效果的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選的還原型輔酶Qltl濃度尤其可以因溶劑種類而異，因此不能絕對(duì)地指 定。不過(guò)一般而言，還原型輔酶Qltl在上述溶劑中的濃度一般不低于，優(yōu)選不低于2w/ w%。上限是沒有特別限制的，但是從實(shí)際操作的觀點(diǎn)來(lái)看，濃度為400w/w%或以下，優(yōu)選 200w/w %或以下，更優(yōu)選1 OOw/w %或以下，進(jìn)而更優(yōu)選50w/w %或以下。此外，還原型輔酶Qltl在上述溶劑中的溶解度顯示可取的溫度依賴性。因此，上述 溶劑的使用也適合于有利地減少還原型輔酶Qltl在溶液中的量，并轉(zhuǎn)化為結(jié)晶狀態(tài)(使其結(jié)
曰、 曰曰J O因而，當(dāng)使用上述這樣一種溶劑時(shí)，有可能在氧化型輔酶Qltl的還原反應(yīng)和/或還 原型輔酶Qltl的結(jié)晶步驟中最小化所不需要的牽涉氧的副反應(yīng)。另外，當(dāng)處理還原型輔酶 Q10在任意上述溶劑中的溶液形式時(shí)，還原型輔酶Qltl被保護(hù)免受分子氧的氧化作用，從而被 穩(wěn)定化，以便可以成功地進(jìn)行萃取與洗滌(使用從外部加入的任意上述溶劑萃取，用水洗 滌)、濃縮(包括加入另一種溶劑置換原有溶劑，同時(shí)濃縮)和柱色譜。在本發(fā)明的實(shí)施中， 當(dāng)然優(yōu)選使用上述一或多種溶劑進(jìn)行從氧化型輔酶Qltl的還原反應(yīng)到還原型輔酶Qltl的結(jié)晶 (借助結(jié)晶純化)的系列操作(包括還原型輔酶Qltl的萃取、用水洗滌萃取液等，如果必要 的話)。在本發(fā)明的實(shí)施中，如果必要的話，上述溶劑可以與另一種溶劑聯(lián)合使用，用量應(yīng) 使后者不會(huì)產(chǎn)生某種不利后果。例如，可以向上述溶劑加入適量的另一種溶劑，目的是在還 原反應(yīng)中提高氧化型輔酶Qltl和/或還原型輔酶Qltl的溶解度、還原劑的溶解度、反應(yīng)的速率 等，在還原型輔酶Qltl的結(jié)晶中提高還原型輔酶Qltl的溶解度以及結(jié)晶濃度、結(jié)晶溫度、收率、 漿液性質(zhì)、晶體性質(zhì)等。這類其他溶劑是沒有特別限制的，但是尤其包括水、醇、脂肪酸、酮、除腈以外的含 氮化合物，以及含硫化合物等。醇是沒有特別限制的，但是可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不
8過(guò)，飽和者是優(yōu)選的。一般而言，它們含有1至20個(gè)碳原子，優(yōu)選1至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選 1至6個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選1至5個(gè)碳原子，最優(yōu)選1至3個(gè)碳原子。含有2或3個(gè)碳原 子的一元醇、含有2至5個(gè)碳原子的二元醇和含有3個(gè)碳原子的三元醇尤其是優(yōu)選的。關(guān)于一元醇，例如可以提到甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、 叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、異戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊 醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚 醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、1-十一碳醇、1-十二碳醇、烯丙醇、 炔丙醇、苯甲醇、環(huán)己醇、1-甲基環(huán)己醇、2-甲基環(huán)己醇、3-甲基環(huán)己醇、4-甲基環(huán)己醇等。優(yōu)選甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1- 丁醇、2- 丁醇、異丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊 醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、異戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲 基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1- 丁醇和環(huán)己醇。更優(yōu)選甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙 醇、1- 丁醇、2- 丁醇、異丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、異戊醇、 叔戊醇、3-甲基-2-丁醇和新戊醇。進(jìn)而更優(yōu)選甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁 醇、異丁醇、2-甲基-1-丁醇和異戊醇。進(jìn)一步優(yōu)選甲醇、乙醇、1-丙醇和2-丙醇，特別優(yōu) 選乙醇、1-丙醇和2-丙醇，最優(yōu)選乙醇。關(guān)于二元醇，例如可以提到1，2_乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2-丁二醇、 1，3-丁二醇、1，4-丁二醇、2，3-丁二醇、1，5-戊二醇等。優(yōu)選1，2_乙二醇、1，2-丙二醇和 1，3-丙二醇，最優(yōu)選1，2_乙二醇。關(guān)于三元醇，例如可以優(yōu)選地使用甘油等。關(guān)于脂肪酸，例如可以提到甲酸、乙酸、丙酸等。優(yōu)選甲酸和乙酸，最優(yōu)選乙酸。酮是沒有特別限制的，具有3至6個(gè)碳原子者是優(yōu)選使用的。關(guān)于特定實(shí)例，例如 可以提到丙酮、甲乙酮、甲基丁基酮、甲基異丁基酮等。優(yōu)選丙酮和甲乙酮，最優(yōu)選丙酮。關(guān)于含氮化合物，例如可以提到硝基甲烷、三乙胺、吡啶、甲酰胺、N-甲基甲酰胺、 N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。關(guān)于含硫化合物，例如可以提到二甲基亞砜、環(huán)丁砜等。建議將上述其他溶劑與至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑以適當(dāng)?shù)谋壤?一起使用，所述比例依賴于其溶劑的特征，包括其已知的物理性質(zhì)，例如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、蒸氣壓 特征和相變，和上述溶劑的量，進(jìn)一步依賴于對(duì)氧化型輔酶Qltl、還原型輔酶Qltl和/或還原 劑的溶解度的影響。盡管可以在不會(huì)導(dǎo)致不利后果的用量范圍內(nèi)使用其他溶劑，而沒有任何其他特別 的限制，不過(guò)從防氧化效果和/或結(jié)晶收率(有待后面提到)的觀點(diǎn)來(lái)看，尤其優(yōu)選上述具 有較高防氧化效果的溶劑(選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種)以更大比例存在。更優(yōu) 選使用這樣一種溶劑，它的實(shí)質(zhì)性主要成分是具有較高防氧化效果的溶劑。在系統(tǒng)包含均勻溶劑相的情況下，優(yōu)選地使用至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈 的溶劑作為反應(yīng)溶劑或結(jié)晶溶劑，或者作為在濃縮、萃取、柱色譜和/或其他操作中的處理 用溶劑的主要成分。在系統(tǒng)構(gòu)成不同溶劑相的情況下，優(yōu)選的實(shí)施方式是具有更大的還原 型輔酶Qltl溶解度的溶劑相(例如在由水和水混溶性低的有機(jī)溶劑組成的混合溶劑系統(tǒng)的 情況下，還原型輔酶Qltl幾乎不溶于含水相，但是可溶于水混溶性低的有機(jī)溶劑相)的主要 成分是至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑。
從這種觀點(diǎn)來(lái)看，使用其他溶劑的體積比一般低于約0. 3，優(yōu)選低于約0. 2，更優(yōu) 選低于約0. 1，進(jìn)而更優(yōu)選低于約0. 05，這是指在均勻系統(tǒng)的情況下相對(duì)于全部溶劑量而 言，或者在不均勻系統(tǒng)的情況下相對(duì)于具有更大的還原型輔酶Qltl溶解度的溶劑體積而言。 毋庸贅述，下限是0(零)。在氧化型輔酶Qltl的還原反應(yīng)中，從反應(yīng)速率和收率提高的觀點(diǎn)來(lái)看，在上面具體 給出的其他溶劑中，醇和/或水單用或者聯(lián)用是最優(yōu)選的。在使還原型輔酶Qltl結(jié)晶的步驟 中，從提高漿液特征(例如流動(dòng)性)的觀點(diǎn)來(lái)看，水是優(yōu)選使用的。現(xiàn)在，描述通過(guò)氧化型輔酶Qltl還原來(lái)生產(chǎn)還原型輔酶Qltl的方法。用于實(shí)施本發(fā)明的氧化型輔酶Qltl可以是借助合成、發(fā)酵或從天然產(chǎn)物提取而制 備的，例如上面所提到的，或者可以是現(xiàn)有的高純度級(jí)輔酶Q1(l。它可以由單獨(dú)的氧化型輔 酶Qltl組成，或者可以是氧化型輔酶Qltl與還原型輔酶Qltl的混合物。在本發(fā)明的實(shí)施中，氧化型輔酶Qltl的還原是這樣進(jìn)行的，使用上述具有較高防氧 化效果的溶劑(即選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種)作為溶劑，使用諸如金屬氫化物、 鐵(金屬鐵或鐵鹽形式)、鋅(金屬鋅)、連二亞硫酸或其鹽、或者抗壞血酸或其有關(guān)化合物 作為還原劑。金屬氫化物是沒有特別限制的，但是尤其包括硼氫化鈉和氫化鋁鋰。金屬氫化物 的用量可以因其種類而異，因此不能絕對(duì)地指定。不過(guò)一般而言，使用1至3倍于理論氫當(dāng) 量，有利于還原的進(jìn)行。用鐵或鋅進(jìn)行的還原一般是用一種酸進(jìn)行的。酸是沒有特別限制的，但是尤其包 括脂肪酸如乙酸，磺酸如甲磺酸，和無(wú)機(jī)酸如鹽酸和硫酸。無(wú)機(jī)酸是優(yōu)選的，硫酸是更優(yōu)選 的。鐵的用量是沒有特別限制的，但是例如基于氧化型輔酶Qltl的加載重量而言約1/5 重量或更大適合于進(jìn)行反應(yīng)。上限是沒有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，約為上述 加載重量的兩倍或更低。鐵不僅可以使用金屬鐵形式，而且可以使用鹽形式，例如硫酸亞鐵 (II)等。鋅的用量是沒有特別限制的，但是例如基于氧化型輔酶Qltl的加載重量而言約 1/10重量或更大適合于進(jìn)行反應(yīng)。上限是沒有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，約為 上述加載重量的兩倍或更低。連二亞硫酸或其鹽是沒有特別限制的，但是一般使用連二亞硫酸的鹽形式。連二 亞硫酸的鹽是沒有特別限制的，但是關(guān)于優(yōu)選的種類，包括堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽等。 堿金屬鹽是更優(yōu)選的，例如鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽，鈉鹽是最優(yōu)選的。連二亞硫酸或鹽的用量是 沒有特別限制的，但是基于氧化型輔酶Qltl的加載重量而言一般不小于約1/5重量，優(yōu)選不 小于約2/5重量，更優(yōu)選不小于約3/5重量。可以使用更大的量，而不會(huì)導(dǎo)致任何特別的麻 煩。不過(guò)從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，用量不大于上述加載重量的約兩倍，優(yōu)選不大于加載重量。 因而，用量在上述加載重量的約2/5至約等于加載重量的重量的范圍內(nèi)，能夠更有利于反 應(yīng)的進(jìn)行?？箟难峄蚱溆嘘P(guān)化合物是沒有特別限制的，例如不僅包括抗壞血酸，而且包括 鼠李糖型抗壞血酸、阿拉伯糖型抗壞血酸、葡萄糖型抗壞血酸、巖藻糖型抗壞血酸、葡庚糖 型抗壞血酸、木糖型抗壞血酸、半乳糖型抗壞血酸、古洛糖型抗壞血酸、阿洛糖型抗壞血酸、赤蘚糖型抗壞血酸、6_脫氧抗壞血酸等抗壞血酸衍生物，并且可以是它們的酯或鹽形式。此 外，它們可以是L-型、D-型或外消旋型。更具體而言，例如可以提到L-抗壞血酸、L-抗壞 血酰棕櫚酸酯、L-抗壞血酰硬脂酸酯、D-阿拉伯糖型抗壞血酸等。在生產(chǎn)還原型輔酶Qltl 時(shí)，可以適宜地使用任意上述抗壞血酸和其有關(guān)化合物。不過(guò)，鑒于與所生成的還原型輔酶 Q10的可分離性，在上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物中特別適宜使用水溶性者。鑒于易用性、 價(jià)格等，最優(yōu)選游離形式的L-抗壞血酸、D-阿拉伯糖型抗壞血酸等。上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物的用量是沒有特別限制的，但是可以是在轉(zhuǎn)化氧化 型輔酶Qltl為還原型輔酶Qltl中有效的量。一般就每摩爾氧化型輔酶Qltl而言，用量不小于1 摩爾，優(yōu)選不小于1.2摩爾。上限是沒有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，就每摩爾 氧化型輔酶Qltl而言，用量一般不高于10摩爾，優(yōu)選不高于5摩爾，更優(yōu)選不高于3摩爾。在上述還原劑種類中，從還原能力、收率和/或質(zhì)量的觀點(diǎn)來(lái)看，鋅、連二亞硫酸 及其鹽，以及抗壞血酸和其有關(guān)化合物尤其是優(yōu)選的，特別是連二亞硫酸(具體為連二亞 硫酸鹽)和抗壞血酸或其有關(guān)化合物是優(yōu)選的。在進(jìn)行還原反應(yīng)時(shí)，醇和/或水適宜單獨(dú)或聯(lián)合使用，如上所述。水是優(yōu)選的，特 別是當(dāng)使用鐵、鋅或者連二亞硫酸或其鹽作為還原劑時(shí)。當(dāng)使用金屬氫化物或者抗壞血酸 或其有關(guān)化合物作為還原劑時(shí)，可以聯(lián)合使用醇。水與醇的聯(lián)合使用表現(xiàn)出水和醇的特征， 尤其有助于提高反應(yīng)速率和收率。下面，詳細(xì)描述優(yōu)選的還原方法。用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原優(yōu)選聯(lián)合使用水來(lái)進(jìn)行，也就是在由至少一種選 自上述烴、脂肪酸酯、醚和腈的有機(jī)溶劑和水組成的混合溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行。在這種場(chǎng)合下， 從收率等觀點(diǎn)來(lái)看，反應(yīng)時(shí)PH—般不高于7，優(yōu)選pH 3至7，更優(yōu)選pH 3至6。可以使用酸 (例如無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸或硫酸)或堿(例如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉)調(diào)節(jié)pH。在用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原中，水量是沒有特別限制的，但是水量可以是 使適量還原劑、即連二亞硫酸或其鹽能夠溶解在其中的量。因而例如，建議一般將連二亞 硫酸或鹽的量調(diào)節(jié)為不多于，優(yōu)選不多于20w/w%，相對(duì)水的重量而言。尤其從生 產(chǎn)率觀點(diǎn)來(lái)看，建議一般將用量調(diào)節(jié)為不少于，優(yōu)選不少于5w/w%，更優(yōu)選不少于 10w/w%。上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物還原優(yōu)選地是這樣進(jìn)行的，使用水混溶性尤其高的 溶劑，選自上述烴、脂肪酸酯、醚和腈，特別是選自醚和腈的至少一種，它們的水混溶性高， 更具體為四氫呋喃、二噁烷、乙腈等。還可以使用醇作為另一種溶劑。此外，從在還原型輔 酶Qltl的生產(chǎn)中促進(jìn)反應(yīng)(例如降低反應(yīng)溫度或縮短反應(yīng)時(shí)間)的觀點(diǎn)來(lái)看，還有可能在具 有反應(yīng)促進(jìn)效果的添加劑的存在下進(jìn)行還原，所述添加劑例如堿性物質(zhì)或亞硫酸氫鹽。堿性化合物是沒有特別限制的，但是可以是無(wú)機(jī)化合物或有機(jī)化合物。無(wú)機(jī)化合 物是沒有特別限制的，但是尤其包括金屬(優(yōu)選堿金屬、堿土金屬等)的氫氧化物、碳酸鹽 和碳酸氫鹽，以及氨。關(guān)于其典型實(shí)例，可以提到堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉，堿金屬碳酸 鹽如碳酸鈉，堿金屬碳酸氫鹽如碳酸氫鈉，和堿土金屬碳酸鹽如碳酸鎂。有機(jī)化合物是沒有 特別限制的，但是尤其包括胺，例如三乙胺。在上面具體提到的堿性物質(zhì)中，優(yōu)選地使用弱 堿性物質(zhì)(弱堿(base)或弱堿(alkalis))，例如金屬(優(yōu)選堿金屬、堿土金屬等)的碳酸 鹽與碳酸氫鹽、氨等無(wú)機(jī)化合物；胺，例如三乙胺等有機(jī)化合物。更優(yōu)選上述弱堿性無(wú)機(jī)化合物。關(guān)于亞硫酸氫鹽，優(yōu)選的例如是堿金屬亞硫酸氫鹽，例如亞硫酸氫鈉。上述添加劑的量是沒有特別限制的，但是可以是這樣的，使添加劑的反應(yīng)促進(jìn)效 果能夠產(chǎn)生至所需程度(有效量)。不過(guò)從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，用量一般不多于20摩爾， 優(yōu)選不多于10摩爾，更優(yōu)選不多于5摩爾，進(jìn)而更優(yōu)選不多于2摩爾，這是就每摩爾抗壞血 酸或其有關(guān)化合物而言。下限是沒有特別限制的，但是一般不少于0. 01摩爾，優(yōu)選不少于 0. 05摩爾，更優(yōu)選不少于0. 1摩爾，進(jìn)而更優(yōu)選不少于0. 2摩爾，是就每摩爾抗壞血酸或其 有關(guān)化合物而言。在本發(fā)明的實(shí)施中，還原反應(yīng)優(yōu)選地是在強(qiáng)迫流動(dòng)下進(jìn)行的。攪拌導(dǎo)致這類流動(dòng) 所需的力每單位體積一般不小于約0. 01kff/m3,優(yōu)選不小于約0. lkW/m3，更優(yōu)選不小于約 0.3kW/m3。上述強(qiáng)迫流動(dòng)一般是由攪拌葉片的旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的。攪拌葉片的使用不總是必要 的，如果以其他方式也能獲得上述流動(dòng)的話。例如，可以利用基于液體循環(huán)的方法。還原溫度可以因還原劑種類和/或用量而異，因此不能絕對(duì)地指定。例如在用 次亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原中，還原一般是在100°c或以下的溫度中進(jìn)行的，優(yōu)選80°C或 以下，更優(yōu)選60°C或以下。下限是該系統(tǒng)的固化溫度。因而，在約0至100°C、優(yōu)選約0至 80°C、更優(yōu)選約0至60°C的溫度中，一般有利于還原的進(jìn)行。在用抗壞血酸或其有關(guān)化合物 進(jìn)行的還原中，還原一般是在30°C或更高的溫度中進(jìn)行的，優(yōu)選40°C或更高，更優(yōu)選50°C 或更高。上限是該系統(tǒng)的沸點(diǎn)。因而，在約30至150°C、優(yōu)選約40至120°C、更優(yōu)選約50 至100°C的溫度中，一般有利于還原的進(jìn)行。反應(yīng)濃度是沒有特別限制的，但是氧化型輔酶Qltl重量相對(duì)于溶劑重量而言一般 不小于約，優(yōu)選不小于，更優(yōu)選不小于，進(jìn)而更優(yōu)選不小于。 上限是沒有特別限制的，但是一般不高于約，優(yōu)選不高于50w/w%，更優(yōu)選不高于 40w/w%，進(jìn)而更優(yōu)選不高于30w/w%。因而，在約1至60w/w%、優(yōu)選約3至50w/w%、更優(yōu) 選約10至40 / %的反應(yīng)濃度下，有利于反應(yīng)的進(jìn)行。還原反應(yīng)時(shí)間可以因還原劑種類和/或其量而異，因此不能絕對(duì)地指定。不過(guò)一 般而言，反應(yīng)可以在48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行完全，優(yōu)選在24小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選在10小時(shí)內(nèi)，進(jìn)而更優(yōu) 選在5小時(shí)內(nèi)。極為優(yōu)選在脫氧氣氛中進(jìn)行還原反應(yīng)。驚人地發(fā)現(xiàn)，特別是在用連二亞硫酸或其 鹽進(jìn)行的還原反應(yīng)中，這類氣氛大大有助于提高還原反應(yīng)收率和減少還原劑的用量。脫氧 氣氛可以這樣達(dá)到，用惰性氣體置換，減壓，沸騰，或它們的組合。優(yōu)選至少用惰性氣體置 換，也就是使用惰性氣體氣氛。關(guān)于惰性氣體，例如可以提到氮?dú)?、氦氣、氬氣、氫氣和二?化碳?xì)?。不過(guò)，氮?dú)馐莾?yōu)選的。從所得還原反應(yīng)混合物中回收含有產(chǎn)物還原型輔酶Qltl的有機(jī)相，如果必要的話 (優(yōu)選地)，將有機(jī)相進(jìn)一步用水、氯化鈉水溶液等反復(fù)洗滌，以完全消除污染物，然后可以 進(jìn)行結(jié)晶。特別是當(dāng)使用上述連二亞硫酸或其鹽(例如連二亞硫酸鈉)作為還原劑時(shí)，最 好用水反復(fù)洗滌，以便可以完全除去從連二亞硫酸或其鹽衍生的污染物和/或可以使含水 相的PH穩(wěn)定。當(dāng)使用上述水混溶性高的溶劑，特別是選自水混溶性高的醚和腈的至少一種(例 如四氫呋喃、二噁烷、乙腈等)，將氧化型輔酶Qltl用抗壞血酸或其有關(guān)化合物還原時(shí)，非常
12方便和有效的工藝是使還原型輔酶Qltl直接從還原反應(yīng)混合物中結(jié)晶(直接分離法(一罐 法))。還原反應(yīng)之后的上述處理優(yōu)選地是在脫氧氣氛中進(jìn)行的，由此防氧化效果得以進(jìn) 一步加強(qiáng)?，F(xiàn)在描述還原型輔酶Qltl的結(jié)晶。所要進(jìn)行結(jié)晶的還原型輔酶Qltl可以按照常規(guī)方式得到，例如合成，發(fā)酵，或者從 天然來(lái)源提取。優(yōu)選借助包含在還原型輔酶Qltl中的氧化型輔酶Qltl的還原或者氧化型輔酶 Q10的還原而得到的產(chǎn)物。更優(yōu)選按照本發(fā)明進(jìn)行還原反應(yīng)所得到的產(chǎn)物，如上所述。盡管根據(jù)本發(fā)明的結(jié)晶方法也適用于含有相當(dāng)大量氧化型輔酶Qltl的產(chǎn)物，不過(guò) 該方法在使上述還原方法制備的高純度還原型輔酶Qltl結(jié)晶中是特別有效的。在本發(fā)明的 實(shí)施中，非常有效的是純化還原型輔酶Qltl和使其結(jié)晶，同時(shí)除去包含在按照常規(guī)方式所得 或者借助上述還原方法等所得反應(yīng)混合物或提取物中的雜質(zhì)。更具體而言，可以使還原型 輔酶Qltl從上述還原方法所得還原反應(yīng)混合物中結(jié)晶，或者從通過(guò)從上述反應(yīng)混合物中收 集含有還原型輔酶Qltl的有機(jī)相、如果必要的話再洗滌有機(jī)相所得到的溶液中結(jié)晶。在這種 場(chǎng)合下，雜質(zhì)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選地被消除在母液中。這使除去共存的雜質(zhì)成為可能，特別是具有相似 結(jié)構(gòu)且一般總是不容易除去的類似化合物(具體而言，還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、還原 型輔酶Q7等)。毋庸贅述，有可能利用該方法作為使預(yù)先借助純化和結(jié)晶所得的還原型輔 酶Qltl晶體重結(jié)晶的方法。還原型輔酶Qltl的結(jié)晶是使用選自上述烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種作為溶劑 進(jìn)行的。其中，烴是優(yōu)選的，脂族烴和芳族烴是更優(yōu)選的，脂族烴是進(jìn)而更優(yōu)選的，上述戊烷 類、己烷類、庚烷類和辛烷類是最優(yōu)選的。尤其從結(jié)晶收率和/或在結(jié)晶中過(guò)度冷卻的不必 要性的觀點(diǎn)來(lái)看，在脂族烴中無(wú)環(huán)的脂族烴是特別優(yōu)選的。結(jié)晶的方法是沒有特別限制的，但是結(jié)晶可以利用常規(guī)的結(jié)晶方法進(jìn)行，也就是 冷卻結(jié)晶、濃縮結(jié)晶、溶劑置換結(jié)晶和其他方法中的至少一種。特別是冷卻結(jié)晶法或者冷卻 結(jié)晶法與某種其他結(jié)晶方法的組合是優(yōu)選的。結(jié)晶步驟中的冷卻溫度是重要的因素，尤其從收率觀點(diǎn)來(lái)看，溫度一般不高于 20°C，優(yōu)選不高于10°C，更優(yōu)選不高于5°C。下限該是系統(tǒng)的固化溫度。因而，在約_30°C至 +10°C、優(yōu)選約-20°C至+10°C、更優(yōu)選約-10°C至+5°C的冷卻溫度下，一般能夠有利于結(jié)晶 的進(jìn)行。在結(jié)晶的過(guò)程中，可以控制每單位時(shí)間結(jié)晶出來(lái)的晶體量，以最小化各種雜質(zhì)混 入所得的還原型輔酶Qltl中，或者得到具有良好特征的漿液。優(yōu)選的每單位時(shí)間結(jié)晶的速率 例如不高于每單位時(shí)間導(dǎo)致所要得到的晶體總量的約50%結(jié)晶的結(jié)晶速率(也就是至多 50% /小時(shí))，優(yōu)選地不高于每單位時(shí)間導(dǎo)致所要得到的晶體總量的約25%結(jié)晶的結(jié)晶速 率(也就是至多25% /小時(shí))。冷卻結(jié)晶中的冷卻速率一般不高于約40°C /小時(shí)，優(yōu)選不 高于約20°C /小時(shí)。結(jié)晶濃度也是重要的因素，在以結(jié)晶完成時(shí)還原型輔酶Qltl的重量相對(duì)于結(jié)晶溶 劑的重量表示時(shí)，不高于約15w/w%，優(yōu)選不高于約，更優(yōu)選不高于約10w/w%。優(yōu) 選的結(jié)晶濃度可以因所采用的溶劑種類而異，為了使用脂族烴或者主要成分是脂族烴的溶 劑達(dá)到令人滿意的結(jié)晶結(jié)果，結(jié)晶濃度不高于約13w/w%，優(yōu)選不高于約10w/w%，更優(yōu)選不高于約8w/w%,在無(wú)環(huán)脂族烴——這是最優(yōu)選的——或者主要成分是無(wú)環(huán)脂族烴的溶劑 的情況下，結(jié)晶濃度不高于約，優(yōu)選不高于約，更優(yōu)選不高于約。通 過(guò)保持上述這樣一種濃度，有可能便于按照適合于在工業(yè)規(guī)模上操作的方式進(jìn)行結(jié)晶。結(jié) 晶濃度的下限是沒有特別限制的，但是從生產(chǎn)率的觀點(diǎn)來(lái)看，一般不低于約lw/w%，優(yōu)選不 低于約2w/w%。結(jié)晶優(yōu)選地是在強(qiáng)迫流動(dòng)下進(jìn)行的。為了防止過(guò)飽和狀態(tài)的出現(xiàn)，并由此允許成 核作用和晶體生長(zhǎng)順利進(jìn)行，以及從得到高質(zhì)量產(chǎn)物的觀點(diǎn)來(lái)看，流動(dòng)一般需要每單位體 積的攪拌力不弱于約0. 01kW/m3，優(yōu)選不弱于約0. lkW/m3，更優(yōu)選不弱于約0. 3kW/m3。強(qiáng)迫 流動(dòng)一般是由攪拌葉片的旋轉(zhuǎn)所提供的。不過(guò)，攪拌葉片的使用不總是必要的，如果以其他 方式也能獲得上述流動(dòng)的話。例如，可以利用基于液體循環(huán)的方法。在進(jìn)行結(jié)晶時(shí)，優(yōu)選地加入晶種，以便可以防止過(guò)飽和狀態(tài)的出現(xiàn)，并且可以允許 成核作用和晶體生長(zhǎng)順利進(jìn)行。在進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的結(jié)晶時(shí)，根據(jù)需要可以與上述防氧化效果高的溶劑聯(lián)合使用 上述另一種輔助溶劑，如果該其他溶劑不會(huì)產(chǎn)生任何不利效果的話。盡管可以向上述溶劑 加入適量的這類其他輔助溶劑以提高還原型輔酶Qltl的溶解度以及結(jié)晶濃度、結(jié)晶溫度、收 率、漿液特征和晶體特征，不過(guò)這樣一種混合溶劑的使用尤其可以導(dǎo)致溶解度的戲劇性增 加，而結(jié)晶收率在有些情形中反而趨于降低。因此，尤其從防氧化效果和/或結(jié)晶收率的 觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選地使用實(shí)質(zhì)性主要成分是上述溶劑的溶劑。因而，當(dāng)該溶劑與另一種溶劑 混合使用時(shí)，所述另一種溶劑所占比例(體積比)是沒有特別限制的，但是一般不高于約 0. 3，優(yōu)選不高于約0. 2，更優(yōu)選不高于約0. 1，進(jìn)而更優(yōu)選不高于約0. 05。毋庸贅述，下限是 0(零)。如上所述，在均勻系統(tǒng)的情況下，該體積比是所述另一種溶劑的體積與全部溶劑體 積的比例，在不均勻系統(tǒng)的情況下，該體積比是所述另一種溶劑的體積與充分溶解還原型 輔酶Qltl的溶劑相體積的比例。不過(guò)當(dāng)聯(lián)合使用水作為另一種輔助溶劑時(shí)，水能夠顯示它的特征，并且例如能夠 有助于提高漿液特征。還原型輔酶Qltl結(jié)晶中的水量影響還原型輔酶Qici結(jié)晶出來(lái)的漿液濃 度和/或漿液特征。隨著水量增加，漿液濃度降低，流動(dòng)性一般也增加。另一方面，漿液濃 度的降低總體上引起生產(chǎn)率下降。水量是沒有特別限制的，但是考慮上述因素，可以有所不 同，以便可以被調(diào)節(jié)和保持在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)?？梢栽诮Y(jié)晶過(guò)程之前或期間或者所沉淀的晶體量穩(wěn)定之后加入上述另一種輔助 溶劑。如此得到的還原型輔酶Qltl晶體可以回收到濕產(chǎn)物，例如借助一種固-液分離技 術(shù)，例如離心、壓力過(guò)濾或真空過(guò)濾，如果必要的話再洗滌濾餅。也能通過(guò)進(jìn)一步將濕產(chǎn)物 裝入內(nèi)部用惰性氣體凈化的減壓干燥器(真空干燥器)，在減壓下干燥，而回收到干燥產(chǎn) 物。干燥形式的回收是優(yōu)選的。當(dāng)在脫氧氣氛中進(jìn)行結(jié)晶時(shí)，能夠進(jìn)一步增加防氧化效果。脫氧氣氛可以這樣達(dá) 到，用惰性氣體置換，減壓，沸騰，或它們的組合。優(yōu)選至少用惰性氣體置換，也就是使用惰 性氣體氣氛。關(guān)于惰性氣體，例如可以提到氮?dú)?、氦氣、氬氣、氫氣和二氧化碳?xì)?。不過(guò)，氮 氣是優(yōu)選的。按照本發(fā)明，能夠以方便有效的方式合成高質(zhì)量還原型輔酶Qltl和使其結(jié)晶。根據(jù)本發(fā)明所得到的還原型輔酶Qltl晶體是非常高質(zhì)量的，預(yù)期還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl 重量比不低于96/4，優(yōu)選不低于98/2，更優(yōu)選不低于99/1。實(shí)施發(fā)明的最佳方式下列實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明。不過(guò)，這些實(shí)施例決不限制本發(fā)明的范圍。實(shí) 施例中，還原型輔酶Qltl的純度和還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比是借助下述HPLC分 析法測(cè)定的。不過(guò)，所測(cè)定的還原型輔酶Qltl純度值決不表明按照本發(fā)明所能達(dá)到的純度值 極限。同樣，所得還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比值決不表明該比例的上限。HPLC 條件柱SYMMETRYC18 (Waters)，250mm 長(zhǎng)，4. 6mm 內(nèi)徑；流動(dòng)相=C2H5OH CH3OH = 4 3 (ν/ν)；檢測(cè)波長(zhǎng)2IOnm;流速lml/min;還原型輔酶Qltl的滯留時(shí)間9. Imin ；氧化型輔酶Qltl的滯留時(shí)間13. 3min。實(shí)施例1在251下，將氧化型輔酶01(1(10(^;含有0.40%氧化型輔酶09，純度99.4% )溶 于IOOOg庚烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，逐漸加入將IOOg連二亞硫酸鈉 (純度至少75% )——作為還原劑——溶于IOOOml水所制備的水溶液，在25°C和pH 4-6 下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將庚烷相用IOOOg脫氣飽和 氯化鈉水溶液洗滌6次，得到含有IOOg還原型輔酶Qltl (含有0. 40%還原型輔酶Q9)的庚 烷相。將該庚烷相冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)，得到白色漿液。所有 上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷庚烷、冷乙 醇、冷水、冷乙醇和冷庚烷洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2°C)。進(jìn)一步在減壓下干燥濕 晶體(20-40°C，l-30mmHg)，得到93g白色干燥晶體(含有0. 29%還原型輔酶Q9,消除百分 比28% )(所分離產(chǎn)物的收率93摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶 Q10重量比為99. 6/0. 4，還原型輔酶Q10的純度為99. 2%0實(shí)施例2和對(duì)比例1在25°C下，將Ig實(shí)施例1所得還原型輔酶Qltl溶于20g表1所示每種不同溶劑。 在25°C空氣中攪拌24小時(shí)后，測(cè)定每種溶液中的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比。 所得結(jié)果如表1所示，并且與將所得晶體貯存在上述相同條件下(將Ig還原型輔酶Qltl在 25°C空氣中貯存24小時(shí))所得的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。表 1 R 還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比實(shí)施例3和對(duì)比例2在35°C下，將Ig實(shí)施例1所得還原型輔酶Qltl溶于IOOg表2所示每種不同溶劑。 在35°C空氣中攪拌24小時(shí)后，測(cè)定每種溶液中的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比。 所得結(jié)果如表2所示。表2 R 還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比實(shí)施例4在25°C下，將IOg氧化型輔酶Qltl溶于IOOg表3所示每種不同溶劑。在攪拌的同 時(shí)(攪拌所需的力0. 3kff/m3)，逐漸加入將IOg商品級(jí)硫代硫酸鈉(純度至少75% )—— 作為還原劑——溶于IOOml水所制備的水溶液，在25°C和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2 小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將有機(jī)相用IOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌6次。所 有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。然后測(cè)定有機(jī)相中的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl 重量比。所得結(jié)果如表3所示。表3
R 還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比實(shí)施例5在25°C下，將IOg氧化型輔酶Qltl溶于IOOg庚烷，加入1.5g鋅粉和IlOg 2.9N硫 酸，在25°C下攪拌6小時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)后，加入IOOg濃鹽酸。測(cè)定庚烷相中 的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比，為99. 6/0. 4。所有操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。實(shí)施例6按照與實(shí)施例1相同的方式進(jìn)行還原反應(yīng)和結(jié)晶，不同僅在于使用己烷作為溶劑 溶解氧化型輔酶Q1(l。結(jié)果，得到93g干燥的白色晶體(所分離產(chǎn)物的收率93摩爾百分 比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 4/0. 6，還原型輔酶Qltl的純 度為99.0%。實(shí)施例7在251下，將氧化型輔酶01(1(10(^;純度99.4%)溶于100(^己烷。在攪拌的同 時(shí)(攪拌所需的力0· 3kW/m3)，逐漸加入將IOOg連二亞硫酸鈉(純度至少75% )——作 為還原劑——溶于IOOOml水所制備的水溶液，在25°C和pH 4_6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2 小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將己烷相用IOOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌6次。 向己烷相加入甲醇(50g)，將混合物冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0. 3kW/m3)，得到 白色漿液。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順 序用冷己烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇和冷己烷洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2°C)。進(jìn)一步 在減壓下干燥濕晶體(20-40°C，l-30mmHg)，得到92g干燥白色晶體(所分離產(chǎn)物的收率 92摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 4/0. 6，還原型 輔酶Q1。的純度為99.0%。實(shí)施例8在25°C下，將氧化型輔酶Q1(1(100g;純度99. 4%)溶于IOOOg乙酸乙酯。在攪拌的 同時(shí)(攪拌所需的力0· 3kW/m3)，逐漸加入將IOOg連二亞硫酸鈉(純度至少75% )—— 作為還原劑——溶于IOOOml水所制備的水溶液，在25°C和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò) 2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將乙酸乙酯相用IOOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌 6次。向乙酸乙酯相加入乙醇(300g)和50g水，將混合物冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需 的力0. 3kW/m3)，得到白色漿液，與實(shí)施例1相比提高了流動(dòng)性。所有上述操作都是在氮?dú)?氛中進(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2°C)。在減壓下干燥濕晶體(20-40°C，l-30mmHg)，得到89g干燥白 色晶體(所分離產(chǎn)物的收率89摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl 重量比為99. 5/0. 5，還原型輔酶Q10的純度為99. 2%0實(shí)施例9在25°C下，將還原型輔酶Qltl (IOOg ；還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比95/5 ； 純度99. 4%)溶于IOOOg庚烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0· 3kW/m3)，逐漸加入將IOg 連二亞硫酸鈉(純度至少75% )——作為還原劑——溶于IOOOml水所制備的水溶液，在 25°C和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將庚烷相用 IOOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌6次。將該庚烷相冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力 0. 3kW/m3)，得到白色漿液。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液， 將濕晶體按順序用冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇和冷庚烷洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為 2°C)。在減壓下干燥濕晶體(20-401，1-30111111取)，得到938干燥白色晶體(所分離產(chǎn)物的 收率93摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 6/0. 4，還 原型輔酶Qltl的純度為99.2%。實(shí)施例10在與實(shí)施例1完全相同的條件下進(jìn)行還原反應(yīng)和結(jié)晶，不同僅在于所用氧化型輔 酶Qltl的純度為98. 4% (含有1. 0%氧化型輔酶Q9、0. 30%氧化型輔酶08和0. 04%氧化型輔 _Q7)。結(jié)果，得到93g干燥白色晶體(含有0. 72%還原型輔酶Q9，消除百分比28%;0. 11% 還原型輔酶Q8,消除百分比63% ；還原型輔酶Q7 未檢測(cè)到)(所分離產(chǎn)物的收率93摩爾 百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 6/0. 4，還原型輔酶Qltl 的純度為99.0%。實(shí)施例11在45°C下，將IOg按照與實(shí)施例1相同的方式所得還原型輔酶Qltl晶體(含有 0. 29%還原型輔酶Q9 ；純度99. 1 % ；還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比99. 4/0. 6)溶于 140g乙腈，將溶液冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0. 3kW/m3)，得到白色漿液。所有上 述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷乙腈、冷水和 冷乙腈洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2V )。在減壓下干燥濕晶體(20-40°C，l-30mmHg)， 得到9. 5g干燥白色晶體(含有0. 25%還原型輔酶Q9,消除百分比14% )(所分離產(chǎn)物的 收率95摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 4/0. 6，還 原型輔酶Qltl的純度為99. 1%。實(shí)施例12在25°C下，將IOg按照與實(shí)施例1相同的方式所得還原型輔酶Qltl晶體(含有 0. 29%還原型輔酶Q9 ；純度98. 8% ；還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比99. 1/0. 9)溶 于IOOg庚烷，將溶液冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)，得到白色漿液。所 有上述操作都是在空氣中進(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷庚烷、冷 乙醇、冷水、冷乙醇和冷庚烷洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2°C)。在減壓下干燥濕晶體 (20-40°C，l-30mmHg)，得到9. 3g干燥白色晶體(含有0. 20%還原型輔酶Q9,消除百分比 31% )(所分離產(chǎn)物的收率93摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl 重量比為99. 0/1. 0，還原型輔酶Q10的純度為98. 8%。
對(duì)比例3在25°C下，將IOg實(shí)施例1所得還原型輔酶Qltl晶體溶于70g N-甲基吡咯烷酮。 此外，加入IOg水，將溶液冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0. 3kW/m3)，得到淡黃色漿 液。所有上述操作都是在空氣中進(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷乙 醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2°C)。在減壓下干燥濕晶體(20-40°C， l-30mmHg)，得到9.6g淡黃色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率96摩爾百分比)。所得晶體 為淡黃色，還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為88. 6/11. 4，還原型輔酶Qltl的純度為 88. 3%。實(shí)施例13在25°C下，將氧化型輔酶Qltl (IOOg)溶于IOOOg己烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的 力0. 3kW/m3)，逐漸加入將40g連二亞硫酸鈉(純度至少75% )——作為還原劑——溶于 IOOOml水所制備的水溶液，在25°C和pH4_6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合 物中除去含水相，將己烷相用IOOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌6次。所有上述操作都是 在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。該己烷溶液中的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 2/0. 8。實(shí)施例14將氧化型輔酶Q1(1(100g;純度99.4% )、60g L-抗壞血酸和30g碳酸氫鈉溶于 IOOOg乙腈，在55°C下進(jìn)行還原反應(yīng)，同時(shí)攪拌。經(jīng)過(guò)40小時(shí)后，向反應(yīng)混合物加入IOOOg 庚烷和IOOOg脫氣水，將所得混合物冷卻至25°C。從反應(yīng)混合物中除去含水相，將庚烷相用 IOOOg脫氣飽和氯化鈉水溶液洗滌6次。將該庚烷相冷卻至2°C，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力 0. 3kW/m3)，得到白色漿液。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液， 將濕晶體按順序用冷庚烷、冷乙醇、冷水、冷乙醇和冷庚烷洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為 2°C)。在減壓下干燥濕晶體(20-401，1-30111111取)，得到958干燥白色晶體(所分離產(chǎn)物的 收率95摩爾百分比)。所得晶體的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為99. 5/0. 5，還 原型輔酶Qltl的純度為99.0%。對(duì)比例4按照與實(shí)施例13相同的方式進(jìn)行還原反應(yīng)，不同僅在于所有操作都是在空氣中 進(jìn)行的。己烷溶液中的還原型輔酶Qltl/氧化型輔酶Qltl重量比為45. 3/54. 7。工業(yè)實(shí)用性具有上述構(gòu)造的本發(fā)明是適合于商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的方法，能夠以方便有效的方式得 到高質(zhì)量還原型輔酶Q1(1。
權(quán)利要求
生產(chǎn)還原型輔酶Q10的方法，該方法包含使用選自芳族烴、鹵代烴和腈中的至少一種作為溶劑，借助氧化型輔酶Q10的還原合成還原型輔酶Q10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中腈作為溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述還原是在脫氧氣氛中進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用防氧化效果高的溶劑生產(chǎn)還原型輔酶Q10的方法，更具體地，本發(fā)明涉及方便有效地生產(chǎn)還原型輔酶Q10的方法，所述輔酶質(zhì)量?jī)?yōu)異，可用在食品、功能性營(yíng)養(yǎng)食品、特定保健食品、營(yíng)養(yǎng)添加劑、滋補(bǔ)劑、飲料、飼料、動(dòng)物藥、化妝品、藥品、治療藥、預(yù)防藥等中。本方法適合于工業(yè)生產(chǎn)。在通過(guò)使氧化型輔酶Q10還原，然后再結(jié)晶而合成還原型輔酶Q10的方法中，使用至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑。因而，能夠保護(hù)還原型輔酶Q10免受氧化作用，進(jìn)而能夠最小化副產(chǎn)物氧化型輔酶Q10的生成，從而得到質(zhì)量?jī)?yōu)異的還原型輔酶Q10。
文檔編號(hào)C07C41/26GK101906026SQ20101018074
公開日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2002年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月13日
發(fā)明者上田恭義, 北村志郎, 植田尚宏 申請(qǐng)人:鐘淵化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社