專利名稱：一種油茶皂苷的提取方法
技術領域：
本發(fā)明屬農(nóng)產(chǎn)品精深加工領域，特別涉及油茶皂苷的提取方法。
技術背景
自上世紀90年代以來，國內(nèi)興起了對油茶皂苷的研究，而國外或因無此品種，或 因資源少，而研究甚少。關于油茶皂苷提取的專利報道近年來主要有張衛(wèi)國“直接從茶籽 中提取茶皂素的方法”(申請?zhí)?00910037987. 3)，王永奇，馮寶民，王威，唐玲“油茶皂素的 制備方法”(申請?zhí)?008100011095. 1)，鄧澤元，郭輝力，彭游“微波/光波干法提取茶皂素 的方法”(申請?zhí)?00810106872. 0)，陳海輝，張春良，曾瑩瑩，李啟成“一種用水作溶劑從油 茶餅粕中提取茶皂素的生產(chǎn)方法”(申請?zhí)?00410046824. 9)，孫勇，劉鐵平“微生物發(fā)酵提 取油茶皂甙的方法”(申請?zhí)?00310107891. 2)，羅永明“一種防治心腦血管疾病的油茶總 皂甙及其制劑”(申請?zhí)?0104619. 5)，后曉淮，孫求實，尤少聲，王桂蘭，張健，蘇炳祿，王少 莘“一種油茶籽皂甙及其用途”(申請?zhí)?7100066. 2)，后曉淮，張健，蘇炳祿，尤少聲，孫求 實，王桂蘭，王少莘“一種油茶籽皂素的提取方法”(申請?zhí)?7100513. 3)，趙曉東，楊世光， 王煦，楊明理“一種提取精制茶皂素的方法”(申請?zhí)?5113044. 7)，曹萬新，陳燕，周伯川， 楊帆“超濾膜法提取精制油茶皂甙的生產(chǎn)工藝”(申請?zhí)?5100925. 7)，胡紹海，萬冰清“從 油茶(茶葉籽)餅粕中提取茶油與皂甙的工藝”(申請?zhí)朇N91106741.8)，王廷吉，魏俊鋒 “一步浸取餅粕提取油脂和茶皂素工藝”(申請?zhí)?0101339. 0)，林欣，王立昆“從山茶科餅 粕中提取皂甙的精制方法”(申請?zhí)?9105715. 3)，張辛酉，周可成，沈言諄，曾憲強，陳祥標， 梁志武“一種油茶餅粕綜合利用工藝”(申請?zhí)朇N86106634A)。這些專利報道極大地豐富 了油茶皂苷提取純化手段，但迄今為止，還沒有人在提取油茶皂苷前通過物理化學或生物 手段對油茶枯餅中的細胞進行破碎以釋放出最大量的油茶皂苷從而高效率高得率地提取 出油茶皂苷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種油茶皂苷的高效高得率分離純化提取方法，該提取方 法改進了傳統(tǒng)方法油茶皂苷易流失、得率低及效率不高的不足，提高了油茶皂苷的得率及 效率。本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的。本發(fā)明以溶劑提取油茶籽中茶油或壓榨茶油后的油茶枯餅廢渣為原料。(1)將油茶枯餅廢渣經(jīng)50-60°C干燥、-40°C冷凍等預處理，3_5MPa壓力下氣流式 超微粉碎，40-80目過篩；(2)石油醚萃取，得含殘油< 的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕；(3)溫度40-50°C、固液比1 5-10、酶用量2. 0-10. 0 μ L/g油茶枯餅粉、時間2_4h 條件下，纖維素酶破碎；(4)醇提用濃度范圍在55% -95%的乙醇水溶液浸提油茶皂苷，浸提時間為3-5h，溫度為 70-90°C，液固比為 5-10 1 (V/g)； (5)丙酮沉淀加入2-3倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去雜質(zhì)，得到初步純化的油茶 皂苷，真空干燥，備用；(6)大孔樹脂柱純化將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中配 成20-50mg/mL的樣品溶液，上樣于AB-8大孔樹脂柱(10 X 100cm)吸附l_2h。用2倍樹脂床 體積(2BV)濃度在0. 1% -1%范圍內(nèi)的NaOH溶液(1BV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗 至中性，然后用2BV不同濃度的乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm(皂 苷類物質(zhì)吸收峰)。收集含皂苷洗脫液，濃縮；(7)冷凍干燥-80°C預凍2_3h后，_80°C真空冷凍干燥。本發(fā)明HPLC鑒定純度及其色譜的條件HPLC分析時，采用手動進樣，每次進樣量 為20 μ L，洗脫流速為lmL/min。樣品溶液和洗脫液分別用0. 80 μ m和0. 45 μ m的濾膜過濾。該工藝的特色在于采用高壓氣流粉碎和纖維素酶破碎細胞組織釋放油茶皂苷，使 得傳統(tǒng)方法皂苷殘留于組織中的量減少并避免了皂苷與其他物質(zhì)的結(jié)合和混合而色澤深 沉，從而提高了油茶皂苷提取的效率及得率，保護了油茶皂苷原本的色澤，最大量地高效提 取，減少能耗，有效保存油茶皂苷的活性。本發(fā)明的技術效果是該提取方法解決了一般方法油茶皂苷易殘留于組織中、提 取效率和得率都不高的缺點，采用高壓氣流粉碎和纖維素酶破碎細胞組織釋放油茶皂苷， 使得傳統(tǒng)方法皂苷殘留于組織中的量減少并避免了皂苷與其他物質(zhì)的結(jié)合和混合而色澤 深沉，從而提高了油茶皂苷提取的效率及得率，保護了油茶皂苷原本的色澤，最大量地高效 提取，減少能耗，有效保存油茶皂苷的活性。
具體實施例方式本發(fā)明將通過以下實施例作進一步說明。按照上述具體操作步驟，在設定條件下提取油茶皂苷，產(chǎn)物皂苷收率按照下式計 算皂苷收率=(皂苷質(zhì)量/原料質(zhì)量)X 100%。實施例1 將原料(皂苷含量9. 43% )經(jīng)50°C干燥、-40°C冷凍等預處理后，4Mpa壓力下氣 流式超微粉碎對原料進行處理，40目過篩。稱取40目油茶枯餅粉100g，用2倍量的石油醚 萃取半小時，得含殘油< 1 %的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕。采用真空低溫纖維素酶 破碎細胞釋放油茶皂苷，反應溫度為40°C，固液比1 6，酶用量3.0 μ L/g油茶枯餅粉，時 間2h，雙層濾布過濾，真空濃縮溶液到較小體積，再將較小體積的溶液連同濾渣倒入同一容 器內(nèi)，備用。選取濃度為75%的乙醇浸提油茶皂苷，浸提時間為3h，浸提溫度為80°C，液固比 為7 1 (V/g)，雙層濾布過濾，真空濃縮至一定體積，加入2倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去 雜質(zhì)，速度不宜過快且沉淀后的上層溶液要盡快過濾掉，得到的沉淀物真空干燥，備用。將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中，上樣于AB-8大孔 樹脂柱(IOXlOOcm)吸附，上樣液濃度為50mg/mL，吸附時間為2h。用2倍樹脂床體積 (2BV)0. 2% NaOH(lBV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗至中性，然后用2BV20%,40%,60%、70%乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm。收集含皂苷洗脫液， 濃縮，-80°C預凍2h后，-80°C真空冷凍干燥10小時。得到產(chǎn)物皂苷9. 02g，皂苷得率為 9. 02%。實施例2 將原料(皂苷含量9. 43% )經(jīng)60°C干燥、-40°C冷凍等預處理后，3Mpa壓力下氣 流式超微粉碎對原料進行處理，過80目篩。稱取80目油茶枯餅粉50g，用3倍量的石油醚 萃取半小時，得含殘油< 1 %的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕。采用真空低溫纖維素酶 破碎細胞釋放油茶皂苷，反應溫度為50°C，固液比1 8，酶用量5.0 μ L/g油茶枯餅粉，時 間3h，雙層濾布過濾，真空濃縮溶液到較小體積，再將較小體積的溶液連同濾渣倒入同一容 器內(nèi)，備用。選取濃度為80%的乙醇浸提油茶皂苷，浸提時間為4h，浸提溫度為85°C，液固比 為8 l(V/g)，雙層濾布過濾，真空濃縮至一定體積，加入3倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去 雜質(zhì)，速度不宜過快且沉淀后的上層溶液要盡快過濾掉，得到的沉淀物真空干燥，備用。將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中，上樣于AB-8大孔 樹脂柱(IOXlOOcm)吸附，上樣液濃度為30mg/mL，吸附時間為lh。用2倍樹脂床體積 (2BV)0. 5% NaOH(lBV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗至中性，然后用2BV20%,40%, 60%、70%乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm。收集含皂苷洗脫液， 濃縮，-80°C預凍3h后，-80°C真空冷凍干燥10小時。得到產(chǎn)物皂苷4. 48g，皂苷得率為
8.96%。實施例3 將原料(皂苷含量9. 43% )經(jīng)50°C干燥、-40°C冷凍等預處理后，5Mpa壓力下氣 流式超微粉碎對原料進行處理，過40目篩。稱取40目油茶枯餅粉80g，用2倍量的石油醚 萃取半小時，得含殘油< 1 %的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕。采用真空低溫纖維素酶 破碎細胞釋放油茶皂苷，反應溫度為45°C，固液比1 9，酶用量8.0 μ L/g油茶枯餅粉，時 間4h，雙層濾布過濾，真空濃縮溶液到較小體積，再將較小體積的溶液連同濾渣倒入同一容 器內(nèi)，備用。選取濃度為85%的乙醇浸提油茶皂苷，浸提時間為5h，浸提溫度為75°C，液固比 為7 l(V/g)，雙層濾布過濾，真空濃縮至一定體積，加入2. 5倍量的丙酮進行攪拌沉淀除 去雜質(zhì)，速度不宜過快且沉淀后的上層溶液要盡快過濾掉，得到的沉淀物真空干燥，備用。將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中，上樣于AB-8大孔樹 脂柱(IOXlOOcm)吸附，上樣液濃度為40mg/mL，吸附時間為1. 5h。用2倍樹脂床體積 (2BV)0.8% NaOH(lBV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗至中性，然后用2BV 20%,40%, 60%、70%乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm。收集含皂苷洗脫液， 濃縮，-80°C預凍3h后，-80°C真空冷凍干燥10小時。得到產(chǎn)物皂苷7. 28g，皂苷得率為
9.10%。實施例4:將原料(皂苷含量9. 43% )經(jīng)60°C干燥、-40°C冷凍等預處理后，4Mpa壓力下氣 流式超微粉碎對原料進行處理，過80目篩。稱取80目油茶枯餅粉100g，用3倍量的石油醚 萃取半小時，得含殘油< 1 %的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕。采用真空低溫纖維素酶破碎細胞釋放油茶皂苷，反應溫度為50°C，固液比1 10，酶用量10.0 μ L/g油茶枯餅粉， 時間3. 5h，雙層濾布過濾，真空濃縮溶液到較小體積，再將較小體積的溶液連同濾渣倒入同
一容器內(nèi)，備用。選取濃度為75%的乙醇浸提油茶皂苷，浸提時間為4. 5h，浸提溫度為90°C，液固 比為10 l(V/g)，雙層濾布過濾，真空濃縮至一定體積，加入2. 5倍量的丙酮進行攪拌沉 淀除去雜質(zhì)，速度不宜過快且沉淀后的上層溶液要盡快過濾掉，得到的沉淀物真空干燥，備用。將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中，上樣于AB-8大孔樹 脂柱(IOXlOOcm)吸附，上樣液濃度為35mg/mL，吸附時間為1. 5h。用2倍樹脂床體積 (2BV) 1 % NaOH(lBV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗至中性，然后用2BV 20%,40%, 60%、70%乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm。收集含皂苷洗脫液， 濃縮，-80°C預凍3h后，-80°C真空冷凍干燥10小時。得到產(chǎn)物皂苷9. 06g，皂苷得率為 9. 06%。實施例5 將原料(皂苷含量9. 43% )經(jīng)50°C干燥、-40°C冷凍等預處理后，3Mpa壓力下氣 流式超微粉碎對原料進行處理，過40目篩。稱取40目油茶枯餅粉50g，用2倍量的石油醚 萃取半小時，得含殘油< 1 %的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕。采用真空低溫纖維素酶 破碎細胞釋放油茶皂苷，反應溫度為45°C，固液比1 5，酶用量2.0 μ L/g油茶枯餅粉，時 間2. 5h，雙層濾布過濾，真空濃縮溶液到較小體積，再將較小體積的溶液連同濾渣倒入同一 容器內(nèi)，備用。選取濃度為85%的乙醇浸提油茶皂苷，浸提時間為5h，浸提溫度為70°C，液固比 為5 l(V/g)，雙層濾布過濾，真空濃縮至一定體積，加入3倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去 雜質(zhì)，速度不宜過快且沉淀后的上層溶液要盡快過濾掉，得到的沉淀物真空干燥，備用。將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80%的乙醇水溶液中，上樣于AB-8大孔 樹脂柱(IOXlOOcm)吸附，上樣液濃度為20mg/mL，吸附時間為lh。用2倍樹脂床體積 (2BV)0.6% NaOH(lBV/H)洗脫，接著用蒸餾水(1BV/H)洗至中性，然后用2BV20%,40%, 60%、70%乙醇洗脫(1BV/H)，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測A550nm。收集含皂苷洗脫液， 濃縮，-80°C預凍3h后，-80°C真空冷凍干燥10小時。得到產(chǎn)物皂苷4. 47g，皂苷得率為 8. 94%。
權利要求
一種油茶皂苷的提取方法，其特征是(1)將油茶枯餅廢渣經(jīng)50-60℃干燥、-40℃冷凍等預處理，3-5MPa壓力下氣流式超微粉碎，40-80目過篩；(2)石油醚萃取，得含殘油＜1％的濾渣餅，用水浴蒸餾石油醚，得干粕；(3)溫度40-50℃、固液比1∶5-10、酶用量2.0-10.0μL/g油茶枯餅粉、時間2-4h條件下，纖維素酶破碎；(4)醇提用濃度范圍在55％-95％的乙醇水溶液浸提油茶皂苷，浸提時間為3-5h，溫度為70-90℃，液固比V/g為5-10∶1；(5)丙酮沉淀加入2-3倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去雜質(zhì)，得到初步純化的油茶皂苷，真空干燥，備用；(6)大孔樹脂柱純化將提取的初步純化油茶皂苷溶解于80％的乙醇水溶液中配成20-50mg/mL的樣品溶液，上樣于AB-8大孔樹脂柱吸附1-2h；用2倍樹脂床體積濃度在0.1％-1％范圍內(nèi)的NaOH溶液洗脫，接著用蒸餾水洗至中性，然后用2BV不同濃度的乙醇洗脫，結(jié)合香草醛-濃硫酸法檢測皂苷類物質(zhì)吸收峰；收集含皂苷洗脫液，濃縮；(7)冷凍干燥-80℃預凍2-3h后，-80℃真空冷凍干燥。
全文摘要
一種油茶皂苷的提取方法，將油茶枯餅廢渣經(jīng)50-60℃干燥、-40℃冷凍等預處理，3-5MPa壓力下氣流式超微粉碎，40-80目過篩；石油醚萃取，使含殘油＜1％，用水浴蒸餾石油醚；溫度40-50℃、固液比1∶5-10、酶用量2.0-10.0μL/g油茶枯餅粉、時間2-4h條件下，纖維素酶破碎；用濃度55％-95％的乙醇水溶液浸提油茶皂苷，浸提時間為3-5h，溫度為70-90℃，液固比為5-10∶1(V/g)；加入2-3倍量的丙酮進行攪拌沉淀除去雜質(zhì)，真空干燥；大孔樹脂柱純化；-80℃預凍2-3h后，-80℃真空冷凍干燥。本發(fā)明提高了油茶皂苷提取的效率及得率，保護了油茶皂苷原本的色澤，最大量地高效提取，減少能耗，有效保存油茶皂苷的活性。
文檔編號C07J63/00GK101838302SQ201010182368
公開日2010年9月22日 申請日期2010年5月25日 優(yōu)先權日2010年5月25日
發(fā)明者聶少平, 胡婕倫, 謝明勇 申請人:南昌大學