專利名稱：一種鯊魚血管生成抑制因子及其生產(chǎn)純化方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鯊魚血管生成抑制因子及其生成純 化方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
鯊魚是極少患惡性腫瘤的海洋動(dòng)物之一，其發(fā)病率為百萬分之一。美國科學(xué)家 Luer將高劑量的強(qiáng)致癌劑黃曲霉素B1注射到鯊魚體內(nèi)，也不能誘發(fā)鯊魚患癌癥。給鯊魚接 種癌細(xì)胞也不能誘發(fā)癌癥。這提示鯊魚體內(nèi)具有獨(dú)特的抗腫瘤機(jī)制(賀麗虹1，黃建華2， 沈頌東等，海洋科學(xué)/2005年/第29卷/第11期63-66)。多年來，世界各國的研究人員多數(shù)是對(duì)鯊魚軟骨組織進(jìn)行了研究，從中分離提取 了多種具有腫瘤抑制作用，尤其是抑制腫瘤新生血管生長的多種物質(zhì)，如Lee等(Lee A, Langer R. Shark cartilage contains inhibitors of tumorangiogenesis)首次從一條姥 鯊的鰭和脊椎軟骨中分離提取了一種強(qiáng)烈抑制實(shí)體瘤新生血管生成的活性蛋白質(zhì)。這類從鯊魚軟骨中提取的具有血管生成抑制活性的蛋白質(zhì)稱之為鯊魚血管生 成抑制因子(Shark Cartilage Angiogenesis Inhibiting Factor, SCAIF)。Sheu 等 (Sheu JR, FuCC, Tsai ML, et al. Effect of U-995, a patent shark cartilage-derived angiogenesis inhibitor, on anti-angiogenesis and antitumor activities[J]. Anticancer Res, 1998,18 (6A) :4435)。從藍(lán)鯊軟骨中分離純化了由兩條多肽組成的新血管 生成抑制因子U-995，可顯著抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與遷移，并會(huì)引起新血管的中斷 和破裂，阻止破壞由腫瘤壞死因子TNF-a誘導(dǎo)的雞胚絨毛尿囊膜血管生成，防止由膠原酶 誘導(dǎo)的膠原溶解。目前，從各種鯊魚軟骨中分離提取的物質(zhì)純度不等，相對(duì)分子量大小不一，理化性 質(zhì)和生物學(xué)活性不盡相同的蛋白質(zhì)和多糖類物質(zhì)。更有人直接將鯊魚軟骨粉作為口服藥 物，如1997年，加拿大批準(zhǔn)鯊魚軟骨口服液AE2941/Neovastat進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)，它是 至今進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)為數(shù)不多的抗血管生成藥物之一。目前鯊魚血管抑制因子(SAIF)的相關(guān)專利主要集中在提取的鯊魚血管生成抑制 因子和鯊魚軟骨粗制劑的制備和應(yīng)用。由于鯊魚的天然資源日漸枯竭，而鯊魚人工養(yǎng)殖技 術(shù)難題至今未能突破，造成了 SAIF無法大規(guī)模應(yīng)用于臨床的困境，因此通過基因工程的手 段克隆獲得血管生成抑制因子無疑成為大規(guī)模生產(chǎn)SAIF的唯一途徑，這對(duì)于我國海洋藥 物產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展與海洋生物資源保護(hù)也將產(chǎn)生積極的影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有鯊魚血管抑制因子的研究中存在的來源少、無法大規(guī) 模應(yīng)用于臨床的問題，通過基因工程的手段得到一種鯊魚血管生成抑制因子的氨基酸序 列。本發(fā)明另一目的在于提供鯊魚血管生成抑制因子的cDNA序列。
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本發(fā)明另一目的在于提供一種包含鯊魚血管生成抑制因子的cDNA序列的重組表 達(dá)載體。本發(fā)明另一目的在于提供一種表達(dá)鯊魚血管生成抑制因子的重組微生物。本發(fā)明另一目的在于提供上述鯊魚血管生成抑制因子的生產(chǎn)純化方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的在于提供上述鯊魚血管生成抑制因子的應(yīng)用。本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明通過PCR克隆技術(shù)從條紋斑竹鯊軟骨中獲得鯊魚血管生成抑制因子 (SCAIF)的全長cDNA序列，該序列長692bp，序列如SEQ ID NO 2所示，其中包括552bp的 開放閱讀框(從第15個(gè)堿基 第563個(gè)堿基，包括一個(gè)終止密碼子)，編碼183個(gè)氨基酸， 氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。本發(fā)明將上述鯊魚血管生成抑制因子的基因序列與表達(dá)載體相連接，構(gòu)建包含鯊 魚血管生產(chǎn)抑制因子cDNA的重組表達(dá)載體，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，最終獲得能夠 表達(dá)鯊魚血管生成抑制因子的重組蛋白。本發(fā)明鯊魚血管生成抑制因子的生產(chǎn)方法具體包括如下步驟(1)從鯊魚軟骨組織中提取總RNA ；(2)根據(jù)現(xiàn)有已知的鯊魚血管生成抑制因子序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，序列如SEQ ID NO :4 9所示；(3)通過PCR擴(kuò)增得到鯊魚血管生成抑制因子的基因全長序列；(4)將所得基因序列克隆至表達(dá)載體中，得到重組表達(dá)載體；(5)將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞，挑取單克隆接種到培養(yǎng)基中并誘 導(dǎo)表達(dá)進(jìn)行篩選。選取高表達(dá)的菌株BL21/pET3C-SAIF在22L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵8h 后離心收取菌體。經(jīng)超聲波破碎后，高速離心，收取沉淀即為含有鯊魚血管生成抑制因子重 組蛋白的包涵體。上述鯊魚血管生成抑制因子以包涵體形式存在，通過體外細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)，該重 組蛋白具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的作用，同時(shí)通過雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)證明該蛋白可以抑制 血管的生長，說明該重組蛋白具有抑制血管生長的作用。本發(fā)明還將鯊魚血管生成抑制因子重組蛋白進(jìn)行了純化，即將包涵體變性、離 心、去除雜質(zhì)，再加入到復(fù)性液中，經(jīng)過攪拌、離心、除雜，Ni FAST FLOW親和層析柱純化，得 到純度> 90%的重組鯊魚血管生成抑制因子。由于上述鯊魚血管生成抑制因子具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長及抑制血管生長的 作用，因此可以用于制備抑制血管生成的藥物，尤其是用于制備抑制腫瘤血管生成或生長 的藥物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果本發(fā)明提供一種新的的鯊魚血管生成抑制因子的全長cDNA序列及其編碼的氨基 酸序列，不但豐富了鯊魚血管生成抑制因子的基因庫而且本發(fā)明通過生物克隆以及蛋白表 達(dá)技術(shù)發(fā)現(xiàn)該cDNA序列的表達(dá)蛋白具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長以及抑制血管生長的作 用，可用于制備抑制血管生成的藥物，尤其是用于制備抑制腫瘤血管生成或生長的藥物。此 外，本發(fā)明通過基因工程的方法克隆獲得新的鯊魚血管生成抑制因子的方法，可用于大規(guī) 模生產(chǎn)鯊魚血管生成抑制因子，對(duì)我國海洋藥物產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展與海洋生物資源保護(hù)具有積極的影響。


圖1為鯊魚血管生成抑制因子全長cDNA全序列的PCR電泳圖；其中，1為PCR擴(kuò) 增產(chǎn)物，M為DNA Marker ；通過PCR獲得了鯊魚血管生成抑制因子SAIFcDNA，為692bp。圖2為重組載體pET3C-SAIF的PCR鑒定電泳圖；其中，M為DNA Marker ；1為PCR 產(chǎn)物(552bp)，該圖顯示經(jīng)過PCR可以得到約為550bp的產(chǎn)物，與目的產(chǎn)物552bp相符。圖3為重組載體pET3C-SAIF的酶切鑒定電泳圖；其中，Ml為\ DNA/Hind III (TaKaRa)Marker, 1 為重組載體pET3C_SAIF，2 為重組載體pET3C_SAIF/BamH 1,3 為重組 載體pET3C-SAIF/Nde 1，4 為重組載體pET3C_SAIF/BamH I+Nde I，M2 為 lOObp DNA Ladder ； 酶切結(jié)果顯示，雙酶切后有一條大小約為550bp的條帶，與目的基因相符，說明目的基因已 插入到重組載體中；圖4為菌體BL21/pET3C-SAIF的誘導(dǎo)表達(dá)SDS-PAGE電泳圖；其中，M為蛋白 Marker，0為未誘導(dǎo)對(duì)照，1 3為陽性克隆誘導(dǎo)表達(dá)；與未誘導(dǎo)相比較，3個(gè)克隆經(jīng)誘導(dǎo)后， 在22kDa處都有一條明顯的蛋白條帶，證明重組蛋白經(jīng)誘導(dǎo)后獲得表達(dá)；圖5SAIF的Ni NTA親和層析純化圖，重組SAIF經(jīng)Ni柱親和層析，收集洗脫峰進(jìn) 行電泳；圖6為重組蛋白SAIF的純化電泳圖；其中，M為蛋白Marker，1為發(fā)酵菌體，2為包 涵體清洗，3為M柱純化后洗脫峰；電泳顯示，經(jīng)過M柱親和層析，在洗脫峰中可以獲得純 度達(dá)到90%以上的重組SAIF。圖7為不同濃度重組蛋白SAIF對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖抑制作用曲線圖；實(shí)驗(yàn)顯示， 重組SAIF對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖具有抑制作用，并呈濃度依賴關(guān)系；圖8鯊魚血管抑制因子SAIF抑制雞胚尿囊膜血管生長；其中，1 3為實(shí)驗(yàn)組，4 6為對(duì)照組，與對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組的血管密度明顯降低，說明重組SAIF對(duì)雞胚尿囊膜血 管生長具有抑制作用。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。實(shí)施例1鯊魚血管生成抑制因子全長cDNA序列及其編碼氨基酸序列的獲得本實(shí)施例通過基因克隆技術(shù)，從條紋斑竹鯊軟骨組織中制備得到鯊魚血管生成抑 制因子(SAIF)的全長cDNA序列及其編碼氨基酸序列，具體步驟如下所示1. RNA提取和cDNA第一鏈的合成從條紋斑竹鯊軟骨組織中提取總RNA提取與純化按照Promega公司的SVTotal RNA Isolation System試劑盒的說明書操作進(jìn)行。cDNA第一鏈的合成使用TaKaRa RNA LA PCR TM Kit(AMV)試劑盒，以上述條紋斑 竹鯊軟骨組織RNA為模板，oligo (dT) 18為反轉(zhuǎn)錄引物，操作按試劑盒推薦方法進(jìn)行。-20°C 保存?zhèn)溆谩?.引物設(shè)計(jì)
根據(jù)現(xiàn)有已知的SAIF序列，通過分析判斷SAIF序列的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)系列引物， 引物序列如SEQ ID NO :4 9所示。3. PCR 擴(kuò)增PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)條件為94°C預(yù)變性 3min，94°C 60s，40°C 60s，72°C 60s，共 30 個(gè) 循環(huán)，最后72°C延伸5min。PCR擴(kuò)增體系為PCR Buffer4dNTP2rTaq0. 2質(zhì)粒2F2R2ddH207. 8_20 U 1PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示，從圖中可以看出，PCR擴(kuò)增得到大約700bp的產(chǎn)物(箭 頭所指位置)。將PCR產(chǎn)物采用常規(guī)的切膠回收、純化、T載體連接、轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞、檢測(cè)陽性克 隆等本領(lǐng)域技術(shù)人員的常用技術(shù)，將所得陽性克隆送交測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示PCR擴(kuò)增得到一條長692bp的序列，通過對(duì)該序列進(jìn)行分析以及 生物學(xué)親緣鑒定，發(fā)現(xiàn)其氨基酸序列與現(xiàn)有的SCAIF序列具有很高的同源性，其中與狗鯊 中克隆到的基因有85. 2%的同源性，與人和斑馬魚的相關(guān)基因的同源性分別為68. 9%和 62. 3%。該基因序列不同于任何一種已知的SAIF序列，由此證明本實(shí)施例得到一條新的鯊 魚血管生成抑制因子的全長序列，長度為692bp，其核苷酸序列如SEQ ID N0:2所示。對(duì)上述SEQ ID N0:1所示核苷酸序列進(jìn)行分析，結(jié)果表明該序列編碼183個(gè)氨基 酸，其氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示。實(shí)施例2重組載體的構(gòu)建、鑒定、表達(dá)與純化1.重組載體的構(gòu)建和鑒定1. 1根據(jù)cDNA中開放閱讀框的基因序列設(shè)計(jì)上下游引物Fw和Rv P1，其核苷酸序列如SEQ ID NO 10所示；P2，其核苷酸序列如SEQ ID NO 11所示。在引物P1上有NdeI酶切位點(diǎn)，在引物P2上有BamHI酶切位點(diǎn)。1.2PCR 擴(kuò)增PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)條件為94°C預(yù)變性 3min，94°C 60s，40°C 60s，72°C 60s，共 30 個(gè) 循環(huán)，最后72°C延伸5min。PCR擴(kuò)增體系為PCR Buffer4dNTP2rTaq 酶0. 2
質(zhì)粒2Fw2Rv2ddH207. 8_20 U 1PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖2所示，從圖中可以看出，PCR擴(kuò)增得到大約550bp的產(chǎn)物(箭 頭所指位置)。將實(shí)施例1得到的鯊魚血管生成抑制因子基因序列克隆至原核表達(dá)載體PET3C 中，構(gòu)建得到重組載體，命名為PET3C-SAIF，將該重組載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞DH5a， 并涂布LB(Amp+)平板，挑取陽性克隆并進(jìn)行酶切鑒定，酶切鑒定電泳結(jié)果如圖3所示。從圖3可以看出，酶切得到一條552bp的條帶，與預(yù)期目的片斷大小相符，由此說 明已經(jīng)成功構(gòu)建含有鯊魚血管生成抑制因子基因序列的重組載體。上述重組載體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞、涂布以及酶切鑒定等試驗(yàn)均采 用本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)操作。2.重組蛋白的表達(dá)將上述經(jīng)過鑒定的重組載體pET3C-SAIF轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞BL21 (DE3)，涂 布LB(Amp+)平板，挑取單克隆接種到LB培養(yǎng)基中，當(dāng)0D = 0. 6時(shí)，加入IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，誘 導(dǎo)3h后收取菌體(將該菌體命名為BL21/pET3C-SCAIF)，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。SDS-PAGE電泳結(jié)果如圖4所示，從圖中可以看出，在22kDa處有一條明顯的條帶 (箭頭所指位置)，該蛋白為183個(gè)氨基酸，蛋白理論分子量為22kDa，，因此該條帶位置與預(yù) 期目的蛋白大小相符，由此說明本實(shí)施例成功獲得鯊魚血管生成抑制因子全長cDNA序列 表達(dá)的重組蛋白SAIF。挑取表達(dá)量高的克隆作為菌種在搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，同樣條件下誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)3h 后離心收取菌體，經(jīng)超聲波破碎，離心后分別制備上清和沉淀的樣品，進(jìn)行SDS-PAGE電泳， 發(fā)現(xiàn)目的蛋白均存在于沉淀中，說明重組SAIF的表達(dá)形式為包涵體形式。上述重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞、涂布、IPTG誘導(dǎo)表達(dá)以及SDS-PAGE電泳 等試驗(yàn)均采用本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)操作。3 菌體 BL21/pET3C_SAIF 的發(fā)酵將上述獲得的菌體BL21/pET3C-SAIF在22L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，所采用的操 作均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法，具體工藝條件如下在22L發(fā)酵罐中加入10L培養(yǎng)基(培養(yǎng)基含有蛋白胨1. 6%，酵母粉1. 6%，糖蜜 0.5%及磷酸緩沖液(Na2HP040. 2%，NaH2P040. 1 %, pH7. 0)，所述百分比均為質(zhì)量百分比。 37°C培養(yǎng)，接種量10% (質(zhì)量百分比)；溶氧控制在發(fā)酵前期低速，中期高速，后期低速；連 續(xù)流加葡萄糖250g，同時(shí)通過流加NaOH或HC1，控制pH變化；IPTG在發(fā)酵進(jìn)行到3小時(shí)時(shí) 加入，誘導(dǎo)4小時(shí)后放罐最終獲得菌體25g/L。4.重組蛋白SAIF的純化離心收集上述發(fā)酵罐發(fā)酵所得菌體細(xì)胞，按照1 8(重量體積)的比例將細(xì)胞 重懸在破碎緩沖液中(50mM Tris+300mM NaCl, PH 7. 5)，超聲波破碎細(xì)胞后離心，棄上清。
7沉淀用緩沖液A[50mM Tris,2% Triton X-100(v/v), PH8. 0]進(jìn)行包涵體清洗，棄上清，收 集包涵體。將包涵體溶于變性液(6M鹽酸胍，ImM EDTA，ImM DTT)進(jìn)行包涵體變性，12000rp 離心30min，去除部分不溶雜質(zhì)，保留上清。再將上清用濾紙過濾，進(jìn)一步去除不溶雜質(zhì)。 將上一步去除雜質(zhì)的變性包涵體按1 10(v/v)比例滴加加入到復(fù)性液(0. 1M Tris,lmM EDTA, 0. 5M L-精氨酸，PH8. 0)中，用磁力攪拌器于4°C攪拌18h，然后12000rpm離心30min, 去除部分不溶雜質(zhì)，保留上清。再將上清用濾紙過濾，進(jìn)一步去除不溶雜質(zhì)。將復(fù)性后的蛋 白溶液用NiFAST FLOW親和層析柱純化，得到復(fù)性的重組蛋白SAIF。包涵體清洗以及柱上復(fù)性洗脫后取樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果如圖5所示，從圖 中可以看出，通過親和層析，一步獲得了純度> 90%的重組蛋白SAIF。實(shí)施例3 重組蛋白SAIF對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用以及對(duì)雞胚尿囊膜血管生 長抑制的檢測(cè)1.重組蛋白SCAIF抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的檢測(cè)將人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC以lX104Cells/Well的密度培養(yǎng)于96孔板，培 養(yǎng)液為Hams F-12。將重組蛋白SAIF 按照 5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、40ug/mL、80ug/mL 的濃度分別加 入培養(yǎng)液共培養(yǎng)三天，然后進(jìn)行MTT染色，觀察不同濃度重組蛋白SCAIF的染色結(jié)果。從圖6中可以看出，重組蛋白SCAIF對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖具有抑制作用，并呈濃度 依賴性。2.對(duì)雞胚絨毛尿囊膜(CAM)血管生成的抑制買回孵化第6天的雞胚，放在實(shí)驗(yàn)室的恒溫箱內(nèi)適應(yīng)ld，第二天，打開雞胚尿囊膜 一端，將濾膜剪成直徑1mm的正方形，并將實(shí)施例2制備所得鯊魚血管生成抑制因子小分 子肽0. 3ug/ul加在濾膜上，空白對(duì)照為生理鹽水，加樣量為20ul，等濾膜吸收了樣品后， 將其放在尿囊膜上，并用透明膠布封嚴(yán)，7d以后，打開透明膠布，用固定液(甲醇丙酮= 1 1，體積比)固定3min后，用剪刀剪下濾膜周圍的尿囊膜，平鋪于培養(yǎng)皿上，用相機(jī)拍 攝。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖8所示，從圖中可以看出，實(shí)驗(yàn)組加入了鯊魚血管抑制因子小分子 肽的樣本中血管密度明顯低于對(duì)照組，說明鯊魚血管生成抑制因子小分子肽可以抑制雞胚 絨毛尿囊膜血管生成。
權(quán)利要求
一種鯊魚血管生成抑制因子，其氨基酸序列如SEQ ID NO1所示。
2.編碼權(quán)利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子氨基酸序列的cDNA，其核苷酸序列如 SEQ ID NO 2 所示。
3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于所述重組表達(dá)載體包含權(quán)利要求2所述的cDNA序列。
4.一種重組微生物，其特征在于所述重組微生物是由權(quán)利要求3所述重組表達(dá)載體轉(zhuǎn) 化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備而得。
5.權(quán)利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子的生產(chǎn)純化方法，其特征在于包括如下步驟(1)從鯊魚軟骨組織中提取總RNA；(2)根據(jù)現(xiàn)有已知的鯊魚血管生成抑制因子序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，序列如SEQID NO :4 9所示；(3)通過PCR擴(kuò)增得到鯊魚血管生成抑制因子的基因全長序列；(4)將所得基因序列克隆至表達(dá)載體中，得到重組表達(dá)載體；(5)將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞BL21，挑取單克隆接種到培養(yǎng)基中，擴(kuò) 增培養(yǎng)并誘導(dǎo)表達(dá)，離心收取菌體，經(jīng)破碎、離心后所得沉淀即為包涵體形式的鯊魚血管生 成抑制因子；(6)將包涵體變性、離心、去除雜質(zhì)，再加入到復(fù)性液中，經(jīng)過攪拌、離心、過濾除雜、Ni FAST FLOW親和層析柱純化，得到復(fù)性的重組鯊魚血管生成抑制因子。
6.權(quán)利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子在制備抑制血管生成或生長的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述鯊魚血管生成抑制因子的應(yīng)用，其特征在于所述抑制血管生成 是抑制腫瘤血管生成或生長。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鯊魚軟骨血管生成抑制因子及其生產(chǎn)純化方法和應(yīng)用。本發(fā)明鯊魚軟骨血管生成抑制因子的氨基酸序列如SEQ ID NO1所示，編碼鯊魚軟骨血管生成抑制因子氨基酸序列的cDNA序列如SEQ ID NO2所示。本發(fā)明鯊魚軟骨血管生成抑制因子具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長及抑制血管生長的作用，可用于制備抑制血管生成或生長，特別是腫瘤血管生成或生長的藥物。
文檔編號(hào)C07K14/475GK101891811SQ20101019151
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者梁旭方, 洪岸, 謝秋玲, 陳小佳 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)