專利名稱：一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑及其制備方法和應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說是涉及一種能迅速形成高效生物膠薄膜，具 有高度止血、粘合和封閉創(chuàng)面、預防組織間粘連作用的生物膠藥物組合物，是一種生物止血 材料。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代外科手術(shù)中，創(chuàng)口止血和愈合是一個需要能有效解決的問題，傳統(tǒng)的方法一 般使用結(jié)扎、縫合和電凝進行止血。傳統(tǒng)縫合易導致針眼感染和滲漏，脆性較大的組織撕拉 極易造成組織破壞；電凝會增加組織破壞，造成組織壞死。因此，科學家們致力于尋找一種 既能快速有效止血，又能促進組織愈合的新型止血材料。纖維蛋白封閉劑(FS)應運而生， 它的出現(xiàn)正好滿足了這種外科手術(shù)的需求。纖維蛋白封閉劑是一種從血液中提取的新型生物止血材料。其作用機制是模擬了 人體自身凝血反應最后階段，由纖維蛋白單體聚合形成具有三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的膜，能夠 有效的網(wǎng)絡(luò)住紅細胞和創(chuàng)面滲液，起到止血防滲、促進愈合的作用。并且因為是生物材料制 品，具有良好的組織相容性，安全無毒副作用；在人體自身酶作用下，術(shù)后兩周可自動降解 吸收，大大縮短了住院時間，減輕病患痛苦。目前，國外同類產(chǎn)品多以人血為原料，國內(nèi)已開 發(fā)出了以豬血為原料的產(chǎn)品，避免了人血制品所帶來的艾滋病、肝炎等血液傳染病傳播的 危險。同時豬血資源豐富，豬的基因序列同人的基因序列極為相似，而攜帶人類的傳染性疾 病傳播風險極小，極大的降低了成本，使產(chǎn)品具有很強的市場競爭力；但是，目前的纖維蛋 白封閉劑是一種液體噴涂劑，它一般由主體膠凍干粉、催化劑凍干粉、主體膠溶解液和催化 劑溶解液四個組分構(gòu)成，使用前需要用主體膠溶解液和催化劑溶解液分別將主體膠凍干粉 和催化劑凍干粉兩種粉狀凍干體溶解，溶解完全后再混合使用，溶解耗時長，操作復雜，配 置時間不易控制，易使得手術(shù)等待時間延長；特別是在野外作業(yè)創(chuàng)傷、野戰(zhàn)外科中，這些缺 陷嚴重妨礙了纖維蛋白封閉劑的應用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑，其以豬血為主原料，既降 低了成本，又減少了血源性疾病的傳播機會，同時制得的產(chǎn)品可隨即使用，為臨床病人的搶 救爭取更大的機會，更加高效、安全、穩(wěn)定和使用方便。本發(fā)明的另一個目的是提供上述豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法。本發(fā)明還有一個目的是提供上述豬源纖維蛋白膠粉霧劑的應用。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑，包含以下粉霧狀或顆 粒狀藥劑粒徑在75 μ m 180 μ m之間的豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉， 粒徑在90 μ m 250 μ m的氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷。還包含粒徑為90 μ m 250 μ m的生理可接受的抗靜電劑。進一步的，按重量百分比計算，所述的粉霧狀或顆粒狀藥劑的各組分含量為豬源纖維蛋白原膠類凍干粉31. 3% 95.9%，豬源凝血酶凍干粉2. 3% 9.7%，氯化 鈉0. 6 % 16. 8 %，醋酸鈉0. 0 % 6. 2 %、氯化鈣1. 2 % 26. 8 %，三羥甲基氨基甲烷
0.0% 7. 2%，生理可接受的抗靜電劑0. 0% 2. 0%。上述豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，包括以下步驟(1)準備豬源纖維蛋白 原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉、氯化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷、生理可接 受的抗靜電劑，并按配方稱??；(2)將豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉分別 粉碎至粒徑為75 μ m 180 μ m ； (3)將氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲 烷、生理可接受的抗靜電劑混合，粉碎至粒徑為90 μ m 250 μ m ； (4)將上述粉碎后的各組 分進行充分均勻混合，形成豬源纖維蛋白膠微粉；(5)灌裝于粉霧噴射裝置內(nèi)。進一步的，所述步驟(1)中的豬源纖維蛋白原膠類凍干粉的制備，包括如下步驟①.以豬血液為原料，將豬血液于2°C 10°C低溫靜置，分取上層血漿液，將血漿 液用3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心30分鐘 60分鐘，收集血 漿，用0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；取濾過血漿，每升加入甘氨酸Ig 30g，使其溶解，將 血漿降溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌30分鐘；用3000轉(zhuǎn)/分 鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的冷凍離心機離心，收集沉淀；②.取①步收集沉淀攪碎，加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的pH值 6.0 10.0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測蛋白含量和溶解液體積；加入重量比 為總蛋白量的0. 1 12倍量的6-氨基己酸或組氨酸，攪拌至完全溶解，再用0.22μπι
1.0 μ m的濾芯進行過濾，收集濾液并移入攪拌罐中，再加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲 烷制成的的緩沖溶液，調(diào)節(jié)PH值至5. 0 9. 0，每升加入聚山梨酯80 9. 0 12. 3g與磷酸 三丁酯2. 0 4. 0g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌5 7小時；每升加入甘氨酸Ig 30g，使其 溶解，將血漿降溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌30分鐘；用3000 轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的冷凍離心機離心，收集沉淀，得纖維蛋白原第一次純化物；③.?、诓绞占恋頂囁?，加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的pH值 7. 0 10. 0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測蛋白含量和溶解液體積；加入重量比為 總蛋白量的0. 1 12倍量的6-氨基己酸或組氨酸，攪拌至完全溶解，再每升加入甘氨酸 Ig 30g，使其溶解，將溶液降溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌 30分鐘；用3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心，收集沉淀；用濃度為 0. 三羥甲基氨基甲烷以鹽酸調(diào)pH值3. 0 7. 0的溶液，分次加入沉淀中，進行攪拌洗滌 3 5次，收集沉淀，得纖維蛋白原第二次純化物；④.?、鄄阶詈笫占恋?50g 600g，加注射用水7000ml 9000ml在35°C 40°C水浴下溶解，過濾除去雜質(zhì)，并檢測蛋白含量，得纖維蛋白原原液；另取組氨酸Ig 100g、枸櫞酸鈉IOg 100g、蔗糖IOOg 500g、氯化鈉IOg 100g、聚山梨酯80 0. Ig 50g、精氨酸0. Ig IOOg加入到約1600ml 2000ml注射用水中，攪拌使其完全溶解，再 加入到纖維蛋白原原液中，攪拌均勻，然后再另加入100ml 300ml含2g 25g白蛋白 的溶液，攪拌均勻，加注射用水調(diào)整至8000ml 12000ml，加鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 0 8. 0用 0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，100°C干熱法病毒滅活30分鐘，得纖維蛋白 原膠類凍干粉，2 8°C低溫庫保存。進一步的，所述步驟(1)中豬源凝血酶凍干粉的制備包括如下步驟
①.以豬血液為原料，將豬血液于1°C 10°C低溫中靜置，分層，取上層血漿液，用 3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心30分鐘 60分鐘，用0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；取濾過血漿；取濾過血漿，每升加入聚山梨酯80 8. Og 13. 3g與磷酸 三丁酯1. 5g 4. 5g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌4 8小時，再每升加入硫酸鋇5g 30g，攪 拌吸附1 3小時；用3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心，收集沉淀；②.?、俨绞占恋恚尤? 5倍量的9% 15%的氯化鈉水溶液攪拌，用轉(zhuǎn)速 為2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心20min 40min、離心溫度為2°C 6°C，棄 上清液，得沉淀；重復2 4次；取沉淀加入1 5倍量的10% 20%的枸櫞酸鈉水溶液， 攪拌30分鐘，以2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為2°C 6 °C，收集上清液；重復3 5次，合并上清液；③.?、诓缴锨逡?，用0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；取濾液，分別加入的氯化鈣 溶液和甘氨酸溶液，使最后的溶液中氯化鈣含量為1. 6% 2. 0%、甘氨酸含量為0. 8% 1.2%,攪拌均勻，調(diào)pH值至4. 5 8. 0，以0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；濾液密封室溫放 置6h 10h，后轉(zhuǎn)入2°C 8°C低溫庫中繼續(xù)放置2 3天；超濾、脫鹽、濃縮，將濃縮液離 心，以2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心20 40分鐘、離心溫度為2°C 6°C， 收集上清液，測量體積，攪拌均勻，檢測凝血酶效價；④.?、鄄阶詈蟮纳锨逡?，加入甘氨酸與白蛋白溶液，加入注射用水調(diào)整最后溶 液的體積，使得最后溶液的凝血酶效價為450IU/ml 650IU/ml、甘氨酸含量20mg/ml 80mg/ml、白蛋白含量5mg/ml 30mg/ml，在無菌條件下，用0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾， 灌裝，冷凍干燥，10(TC干熱法病毒滅活30分鐘，得凝血酶凍干粉；2 8°C低溫庫保存。所述步驟(2)中，豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉采用低溫氣流 粉碎方法進行粉碎；氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷、生理可接受的 抗靜電劑采用氣流粉碎方法粉碎；粉碎后各組分通過流化態(tài)混合方式進行混合。上述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑在制備于普通外科、骨科、心胸外科、神經(jīng)外科、婦 產(chǎn)科、野戰(zhàn)外科中組織止血、組織封口和組織粘合的醫(yī)用產(chǎn)品中的應用。上述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑在制備預防組織間粘連的醫(yī)用產(chǎn)品，創(chuàng)面治療、修 復的醫(yī)用產(chǎn)品中的應用。上述豬源纖維蛋白膠粉霧劑的應用，是通過粉霧噴射裝置將其均勻地噴射至創(chuàng)面 或深入至創(chuàng)傷口內(nèi)，噴射的豬源纖維蛋白膠微粉遇創(chuàng)面或創(chuàng)傷口內(nèi)水分即成膠體。本發(fā)明屬國內(nèi)外首創(chuàng)，和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進步是顯而易見的。本發(fā)明具有如 下特點1.本發(fā)明是一種粉霧狀噴涂型生物膠組合物，組方合理，制備工藝簡單，生產(chǎn)易實 現(xiàn)自動化控制；2.本發(fā)明利用豬血作為主原料進行纖維蛋白原、凝血酶、白蛋白與XIII因子的提 純，由于豬的基因序列同人的基因序列極為相似，而攜帶人類的傳染性疾病傳播風險極小， 既降低了成本，又避免了人類血源性疾病的傳播機會；3.本發(fā)明提供了的藥劑穩(wěn)定，攜帶存放方便，無需配置可直接使用，將豬源纖維蛋 白膠制劑呈粉霧狀噴到創(chuàng)面，為手術(shù)、傷口抱扎爭取了時間，為傷病員的搶救爭取了更大的 機會，特別是為野外作業(yè)創(chuàng)傷、野戰(zhàn)創(chuàng)傷止血抱扎提供了極大的方便，為傷病員的搶救爭取了更大的機會；4.本發(fā)明產(chǎn)品具有極佳的封閉、止血效果，產(chǎn)品纖維蛋白原及凝血酶復合物通過 低溫氣流粉碎粉末化工藝，確保制劑微粉化并保持生物活性，使得產(chǎn)品使用方便；5.本發(fā)明生產(chǎn)安全環(huán)保，制備工藝的全過程中徹底摒棄了以往的有機溶劑使用， 操作過程中對人員和周圍環(huán)境不產(chǎn)生危害，符合國家的環(huán)保要求。 6.本發(fā)明通過噴涂方式實現(xiàn)施加藥物的均勻性。
具體實施例方式本發(fā)明是一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑，包含以下粉霧狀或顆粒狀藥劑粒徑在 75 μ m 180 μ m之間的豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉，粒徑在90 μ m 250 μ m的氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷。還可包含粒徑為90 μ m 250 μ m的生理可接受的抗靜電劑。較好的，按重量百分比計算，所述的粉霧狀或顆粒狀藥劑的各組分含量為豬源纖 維蛋白原膠類凍干粉31. 3 % 95. 9 %，豬源凝血酶凍干粉2. 3 % 9. 7 %，氯化鈉0. 6 % 16. 8%，醋酸鈉0.0% 6. 2%、氯化鈣1. 2% 26. 8%，三羥甲基氨基甲烷0.0% 7. 2%, 生理可接受的抗靜電劑0. 0% 2. 0%。上述豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，包括以下步驟(1)準備豬源纖維蛋白 原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉、氯化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷、生理可接 受的抗靜電劑，并按配方稱??；(2)將豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉分別 采用低溫氣流粉碎方法粉碎，粉碎后的粉體的粒徑在75 μ m 180 μ m ； (3)將氯化鈉和/或 醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷、生理可接受的抗靜電劑混合，然后采用氣流粉碎 方法粉碎，粉碎后的混合物的粒徑在90 μ m 250 μ m ； (4)將上述粉碎后的各組分采用流化 態(tài)混合方式進行混合，形成豬源纖維蛋白膠微粉；(5)灌裝于粉霧噴射裝置內(nèi)。一般常用的微粉化方法有氣流粉碎法、球磨法、噴霧干燥法、高速研磨法、液相晶 析法?？紤]到生產(chǎn)成本、生產(chǎn)方法及國內(nèi)常用的粉霧劑原料藥的粉碎設(shè)備，通過對豬源纖維 蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉理化性質(zhì)的研究，選用低溫氣流粉碎法得到的豬源 纖維蛋白原膠類凍干粉微粉、豬源凝血酶凍干粉微粉的生物活性、粒徑分布較好；通過對氯 化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷理化性質(zhì)的研究，選用氣流粉碎法得到的其微粉 的粒徑分布較好。為了保證在氣流粉碎過程中不引入過大的靜電，可適量加入生理可接受 的抗靜電劑，例如泊洛沙姆等。由于豬源纖維蛋白膠粉霧劑是通過粉霧噴射裝置將其微粉均勻地噴射至創(chuàng)面或 創(chuàng)傷口內(nèi)，顆粒需要有適當?shù)牧鲃有耘c沉積性；進行噴射時，如果粒度太小，則幾乎沒有適 當?shù)牧鲃有耘c沉積性，很難均勻的分散沉積在創(chuàng)面，一般認為150μπι以上的粉體即能達 到適宜的流動性，而粉體的粒徑過大也容易影響藥物的噴射、分散均勻度、成膠性能；試驗 表明當豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉粉體的粒徑在125 μ m 150 μ m 之間，氯化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷與抗靜電劑混合物粉體的粒90μπι 150 μ m之間時，豬源纖維蛋白膠的粉霧劑有適宜的流動性、沉積性、分散均勻度、成膠性能。 更好的，豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉的粉體的粒徑優(yōu)選在125μπι 150 μ m之間，氯化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷與抗靜電劑混合物粉體粒徑優(yōu)選在90μπι 150μπι之間。結(jié)合國內(nèi)現(xiàn)有的生產(chǎn)設(shè)備及粉體原料的性質(zhì)，選用流化態(tài)混合得 到的粉體均勻度高，損失??；故在總混過程中選用流化態(tài)的混合方式最佳。實施例11.豬源纖維蛋白原膠類凍干粉的制備采集豬血液55600ml，加入含0. 147mol/L 枸櫞酸鈉與0. 154mol/L氯化鈉的抗凝劑6000ml，于4°C低溫庫中靜置6小時，讓其分層，分 取上層血漿液；上層血漿液用高速離心機在10°C以3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心40分鐘，收 集血漿，用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾過血漿20000ml，加入甘氨酸73. 5g，使其溶解，將血漿降 溫至4°C，加入醋酸鈉2605. 4g，使其溶解，攪拌30分鐘，高速冷凍離心機10°C用3500轉(zhuǎn)/ 分鐘的轉(zhuǎn)速離心40分鐘，收集沉淀，得沉淀2520. Sg。將收集沉淀攪碎，加入33升由枸櫞 酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的PH值7. 5的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測得蛋白含 量為13. 8mg/ml，得溶解液體積約35升；加入甘氨酸152. 3g，攪拌至完全溶解，再用Ι.Ομπι 與0. 22 μ m的濾芯依次進行過濾，收集濾液并移入攪拌罐中，再加入由枸櫞酸鈉與三羥甲 基氨基甲烷制成的的緩沖溶液，調(diào)節(jié)PH值至7. 3，加入聚山梨酯80 354. 55g與磷酸三丁酯 106. 4g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌6小時；加入甘氨酸249. 5g，使其溶解，將血漿降溫至0 40C，加入醋酸鈉8023. Sg,使其溶解，攪拌30分鐘。以4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速3°C冷凍離心， 收集沉淀，得豬源纖維蛋白原第一次純化物2488. 6g。取豬源纖維蛋白原第一次純化物，加 入33升由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的pH值10. 0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解， 過濾，甘氨酸104. 2g，攪拌至完全溶解，將溶液降溫至3°C，加入醋酸鈉4800g，使其溶解，攪 拌30分鐘。用4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速；TC冷凍離心，收集沉淀。沉淀用濃度為0.1%三羥甲 基氨基甲烷以鹽酸調(diào)PH值7. 0的溶液，分次加入沉淀中，進行攪拌洗滌4次，收集沉淀，得 豬源纖維蛋白原第二次純化物2378. 5g。取豬源纖維蛋白原第二次純化物1200g，加注射用 水16000ml在37°C水浴下溶解，過濾除去雜質(zhì)，得豬源纖維蛋白原原液；另取組氨酸140g、 枸櫞酸鈉180g、蔗糖300g、氯化鈉40g、聚山梨酯80 10. 0g、精氨酸3. 6g加入到約3600注 射用水中，攪拌使其完全溶解，再加入到豬源纖維蛋白原原液中，攪拌均勻，然后再另加入 400ml含IOg白蛋白的溶液，攪拌均勻，加注射用水調(diào)整至20000ml，加鹽酸調(diào)節(jié)pH至7. 2 用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，100°C干熱法病毒滅活30分鐘，得豬源纖維蛋白原膠 類凍干粉。2.豬源凝血酶凍干粉制備采集豬血液50000ml，加入含0. 151mol/L枸櫞酸鈉、 0. 148mol/L氯化鈉與0. 138mol/L草酸鉀的抗凝劑5000ml,于5°C低溫庫中靜置8小時， 讓其分層，分取上層血漿液，用3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速10°C冷凍離心50分鐘，收集血漿， 用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾過血漿24000ml，依次加入聚山梨酯-80 243. lg、磷酸三丁酯 73. Og到血漿中，攪拌罐中25°C攪拌6小時，再加入硫酸鋇480g，攪拌吸附2小時；用5000 轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速10°c冷凍離心40分鐘，收集沉淀，得沉淀590g ；取沉淀，加入1200ml的9% 的氯化鈉水溶液攪拌，用轉(zhuǎn)速為3200轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30min、離心溫度為4°C，棄上 清液，得沉淀。重復2次。取沉淀加入1200ml的10%的枸櫞酸鈉水溶液，攪拌30分鐘，以 3500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液。重復3次，合并上清 液；取上清液，用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾液，分別加入200ml的36%氯化鈣溶液和200ml的 20%甘氨酸溶液，攪拌均勻，調(diào)pH值至7. 0，以0. 22 μ m濾膜過濾，濾液密封室溫放置8小 時，后轉(zhuǎn)入2°C低溫庫中繼續(xù)放置2天。超濾、脫鹽、濃縮，得濃縮液500ml，將濃縮液離心，以4000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液，測量體積為480ml， 攪拌均勻，檢測凝血酶效價為2600IU/ml ；取上清液，加入甘氨酸120g與6%的白蛋白溶液 1000ml，加入注射用水調(diào)整溶液的體積至4000ml，檢測凝血酶效價為650IU/ml，在無菌條 件下，用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，IOCTC干熱法病毒滅活30分鐘，得豬源凝血酶 凍干粉。2 8°C低溫庫保存。3.粉霧劑制備 稱取豬源纖維蛋白原膠類凍干粉642. 83g，豬源凝血酶凍干粉65. 71g分別用低 溫氣流粉碎至粉體的粒徑在75 μ m 180 μ m之間，稱取氯化鈉59. 39g，醋酸鈉50. 35g、 氯化鈣110. 05g,三羥甲基氨基甲烷71. 65g，混合后用氣流粉碎至粉體的粒徑在90 μ m 250 μ m,之間，最后將所有粉碎的微粉一起通過流化態(tài)混合均勻，置于粉霧噴射裝置的填充 機內(nèi)向粉霧噴射裝置內(nèi)灌裝約1000支。得豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A。實施例21.豬源纖維蛋白原膠類凍干粉采集豬血液60000ml，加入含0. 145mol/L枸櫞酸 鈉與0. 151mol/L氯化鈉的抗凝劑6000ml，于5°C低溫庫中靜置6小時，讓其分層，分取上 層血漿液，用高速冷凍離心機在10°C以5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心60分鐘，收集血漿，用 0.22 um濾膜過濾；取濾過血漿22000ml，加入甘氨酸95. 8g，使其溶解，將血漿降溫至3°C， 加入醋酸鈉2931. 8g，使其溶解，攪拌30分鐘，高速冷凍離心機于10°C用6000轉(zhuǎn)/分鐘的 轉(zhuǎn)速離心30分鐘，收集沉淀，得沉淀2685. Sg。將收集沉淀攪碎，加入35升由枸櫞酸鈉與 三羥甲基氨基甲烷制成的PH值7. 8的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測得蛋白含量為 18. lmg/ml，得溶解液體積約36. 5升；加入甘氨酸190. 5g，攪拌至完全溶解，再用Ι.Ομπι 與0. 22 μ m的濾芯依次進行過濾，收集濾液并移入攪拌罐中，再加入由枸櫞酸鈉與三羥甲 基氨基甲烷制成的的緩沖溶液，調(diào)節(jié)PH值至7. 3，加入聚山梨酯80 371. 2g與磷酸三丁酯 110. 9g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌6小時；加入甘氨酸298. 5g，使其溶解，將血漿降溫至3°C， 加入醋酸鈉7865. Sg,使其溶解，攪拌30分鐘。以6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速3°C冷凍離心，收集 沉淀，得豬源纖維蛋白原第一次純化物2688. 6g。取豬源纖維蛋白原第一次純化物，加入35 升由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的PH值8. 5的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，組 氨酸112. 2g，攪拌至完全溶解，再加入甘氨酸280. 4g，使其溶解，將溶液降溫至3°C，加入醋酸鈉5800g，使其溶解，攪拌30分鐘。用6000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速;TC冷凍離心，收集沉淀。沉 淀用濃度為0. 三羥甲基氨基甲烷以鹽酸調(diào)pH值7. 0的溶液，分次加入沉淀中，進行攪 拌洗滌5次，收集沉淀，得豬源纖維蛋白原第二次純化物2540. 4g。取豬源纖維蛋白原第二 次純化物1040g，加注射用水16000ml在37°C水浴下溶解，過濾除去雜質(zhì)，得豬源纖維蛋白 原原液；另取組氨酸60g、枸櫞酸鈉40g、蔗糖560g、氯化鈉180g、聚山梨酯80 6. 0g、精氨酸 15. 6g加入到約3600注射用水中，攪拌使其完全溶解，再加入到豬源纖維蛋白原原液中，攪 拌均勻，然后再另加入400ml含40g白蛋白的溶液，攪拌均勻，加注射用水調(diào)整至20000ml， 加鹽酸調(diào)節(jié)pH至6. 8用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝冷凍干燥瓶中，冷凍干燥，100°C干熱法病 毒滅活30分鐘，得豬源纖維蛋白原膠類凍干粉。2.豬源凝血酶凍干粉制備采集豬血液60000ml，加入含0. 151mol/L枸櫞酸鈉、 0. 148mol/L氯化鈉與0. 138mol/L草酸鉀的抗凝劑6000ml，于14°C低溫庫中靜置6小時， 讓其分層，吸取上層血漿液，用5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速10°C冷凍離心40分鐘，收集血漿，用 0. 22 μ m濾膜過濾；取濾過血漿26000ml，依次加入聚山梨酯80 264. 4g、磷酸三丁酯79. Ig 到血漿中，攪拌罐中25°C攪拌6小時，再加入硫酸鋇540g，攪拌吸附2小時；用6000轉(zhuǎn)/分 鐘的轉(zhuǎn)速10°C冷凍離心30分鐘，收集沉淀，得沉淀650g ；取沉淀，加入1200ml的15%的氯 化鈉水溶液攪拌，用轉(zhuǎn)速為5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30min、離心溫度為4°C，棄上清液， 得沉淀。重復4次。取沉淀加入1500ml的20%的枸櫞酸鈉水溶液，攪拌30分鐘，以5000轉(zhuǎn) /分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液。重復5次，合并上清液；取上清 液，用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾液，分別加入400ml的36%氯化鈣溶液和400ml的20%甘氨 酸溶液，攪拌均勻，調(diào)pH值至7. 0，以0. 22 μ m濾膜過濾，濾液密封室溫放置8小時，后轉(zhuǎn)入 4°C低溫庫中繼續(xù)放置3天。超濾、脫鹽、濃縮，得濃縮液2000ml，將濃縮液離心，以5000轉(zhuǎn) /分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液，測量體積為1950ml，攪拌均勻， 檢測凝血酶效價為1800IU/ml ；取上清液，加入甘氨酸250g與6%的白蛋白溶液1500ml， 加入注射用水調(diào)整溶液的體積至6000ml，檢測凝血酶效價為580IU/ml，在無菌條件下，用 0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，IOCTC干熱法病毒滅活30分鐘，得豬源凝血酶凍干粉。 2 8 °C低溫庫保存。3.粉霧劑制備
編號原料名稱用量/g質(zhì)量百分比/%1豬源纖維蛋白原膠類凍干粉623. 1062. 312豬源凝血酶凍千粉68. 506. 853氯化鈉147. 3014. 734氯化鈣152. 5015. 255泊洛沙姆8. 600. 86總量1000. 00100. 00 稱取豬源纖維蛋白原膠類凍干粉623. IOg,豬源凝血酶凍干粉68. 50g分別用低 溫氣流粉碎至粉體的粒徑在75 μ m 180 μ m之間，稱取氯化鈉147. 30g、氯化鈣152. 50g，泊洛沙姆8. 60g，混合后用氣流粉碎至粉體的粒徑在90 μ m 250 μ m，之間，最后將所有粉 碎的微粉一起于流化態(tài)混合均勻，置于粉霧噴射裝置的填充機內(nèi)向粉霧噴射裝置內(nèi)灌裝約 1000支。得豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B。實施例31.豬源纖維蛋白原膠類凍干粉采集豬血液50000ml，加入含0. 151mol/L枸櫞酸 鈉與0. 148mol/L氯化鈉的抗凝劑5700ml，于4°C低溫庫中靜置8小時，讓其分層，分取上 層血漿液，用高速冷凍離心機在10°C以5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，收集血漿，用 0. 22 μ m濾膜過濾；取濾過血漿18000ml，加入甘氨酸86. 5g，使其溶解，將血漿降溫至2°C， 加入醋酸鈉3024. Sg,使其溶解，攪拌30分鐘，高速冷凍離心機10°C用4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速 離心30分鐘，收集沉淀，得沉淀2490. Sg。將收集沉淀攪碎，加入32升由枸櫞酸鈉與三羥甲 基氨基甲烷制成的PH值6. 5的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測得蛋白含量為16mg/ml， 得溶解液體積約33升；加入6-氨基己酸254. 9g，攪拌至完全溶解，再用1. 0 μ m與0. 22 μ m 的濾芯依次進行過濾，收集濾液并移入攪拌罐中，再加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷 制成的的緩沖溶液，調(diào)節(jié)PH值至7. 2，加入聚山梨酯80 334. 3g與磷酸三丁酯100. 2g，攪 拌均勻，25°C保溫攪拌6小時；加入甘氨酸312. 7g，使其溶解，將血漿降溫至2°C，加入醋酸 鈉6817. 2g，使其溶解，攪拌30分鐘。以5000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速2°C冷凍離心，收集沉淀，得 豬源纖維蛋白原第一次純化物2416. 6g。取豬源纖維蛋白原第一次純化物，加入32升由枸 櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的PH值9. 0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，6-氨基 己酸100. 2g，攪拌至完全溶解，再加入甘氨酸320. Ig,使其溶解，將溶液降溫至2V，加入醋 酸鈉5200g，使其溶解，攪拌30分鐘。用8000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速2°C冷凍離心，收集沉淀。沉 淀用濃度為0. 三羥甲基氨基甲烷以鹽酸調(diào)pH值6. 8的溶液，分次加入沉淀中，進行攪 拌洗滌3次，收集沉淀，得豬源纖維蛋白原第二次純化物2392. 5g ；取豬源纖維蛋白原第二 次純化物1160g，加注射用水16000ml在37°C水浴下溶解，過濾除去雜質(zhì)，得豬源纖維蛋白 原原液；另取組氨酸80g、枸櫞酸鈉60g、蔗糖400g、氯化鈉120g、聚山梨酯80 :20g、精氨酸 12g加入到約3600注射用水中，攪拌使其完全溶解，再加入到豬源纖維蛋白原原液中，攪拌 均勻，然后再另加入400ml含20g白蛋白的溶液，攪拌均勻，加注射用水調(diào)整至20000ml，加 鹽酸調(diào)節(jié)pH至7. 0，用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，100°C干熱法病毒滅活30分鐘， 檢驗，包裝，得豬源纖維蛋白原膠類凍干粉。2.豬源凝血酶凍干粉制備采集豬血液55000ml，加入含0. 147mol/L枸櫞酸鈉、 0. 146mol/L氯化鈉與0. 135mol/L草酸鉀的抗凝劑5500ml，于12°C低溫庫中靜置8小時， 讓其分層，吸取上層血漿液，用4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速10°C冷凍離心50分鐘，收集血漿， 用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾過血漿25000ml，依次加入聚山梨酯-80 254. 3g、磷酸三丁酯 76. Og到血漿中，攪拌罐中25°C攪拌6小時，再加入硫酸鋇600g，攪拌吸附2小時；用5000 轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速10°C冷凍離心40分鐘，收集沉淀，得沉淀700g ；取沉淀，加入1500ml的 10%的氯化鈉水溶液攪拌，用轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30min、離心溫度為4°C， 棄上清液，得沉淀。重復3次。取沉淀加入1500ml的15%的枸櫞酸鈉水溶液，攪拌30分 鐘，以4000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液。重復4次，合 并上清液；取上清液，用0. 22 μ m濾膜過濾；取濾液，分別加入300ml的36%氯化鈣溶液和 300ml的20%甘氨酸溶液，攪拌均勻，調(diào)pH值至7. 0，以0. 22 μ m濾膜過濾，濾液密封室溫放置8小時，后轉(zhuǎn)入4°C低溫庫中繼續(xù)放置2天。超濾、脫鹽、濃縮，得濃縮液1200ml，將濃縮 液離心，以4500轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為4°C，收集上清液，測量體積為 1280ml，攪拌均勻，檢測凝血酶效價為2200IU/ml ；取上清液，加入甘氨酸180g與6 %的白蛋 白溶液1500ml，加入注射用水調(diào)整溶液的體積至6000ml，檢測凝血酶效價為450IU/ml，在 無菌條件下，用0. 22 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，IOCTC干熱法病毒滅活30分鐘，得豬源 凝血酶凍干粉。3.粉霧劑制備 稱取豬源纖維蛋白原膠類凍干粉1455. 20g,豬源凝血酶凍干粉84. 60g分別用低 溫氣流粉碎至粉體的粒徑在75 μ m 180 μ m之間，稱取氯化鈉234. 60g、氯化鈣205. OOg, 泊洛沙姆20. 60g，混合后用氣流粉碎至粉體的粒徑在90 μ m 250 μ m，之間，最后將所有粉 碎的微粉一起于流化態(tài)混合均勻，置于粉霧噴射裝置的填充機內(nèi)向粉霧噴射裝置內(nèi)灌裝約 1000支。得豬源纖維蛋白膠的粉霧劑C。實施例4豬源纖維蛋白膠的粉霧劑止血效果試驗材料健康成年SD大鼠30只，雌雄各半，體重220 士 20g ；由南方醫(yī)科大學動物實驗中心 提供。戊巴比妥鈉(上海科豐化學試劑有限公司)；云南白藥(云南白藥集團股份有限公 司)。電子天平(Sartorius公司，德國)；出血時間及出血量測定方法根據(jù)使用止血材料不同將30只大鼠隨機分成3組，每組10只。Al組為云南白 藥對照組，Bl組為豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A，B2組為豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B。根據(jù) Matsuok方法制備肝中葉切除出血模型腹腔注射4%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠，剪 去腹部毛，并用碘酒和酒精棉球消毒。自腹中線切開皮膚做2cm切口，沿腹中線剪開腹肌， 打開腹腔。擠壓腹部將肝中葉從切口處擠出，擠壓應適中，避免引起肝、脾血液循環(huán)障礙。然 后吸干肝臟周圍腹腔液后將稱重后的無菌紗布墊于肝中葉下，于肝中葉下緣以上2cm處快 速切除肝中葉。根據(jù)分組立即均勻噴涂止血材料400mg，并開始計時，直至出血停止，以無鮮 紅血液滲出為出血停止標準，觀察各組止血材料凝固過程，記錄出血時間及出血量。出血時 間為切除肝中葉開始至出血停止，出血量為切除前后無菌紗布重量差。結(jié)果體外觀察結(jié)果B1組、B2組豬源纖維蛋白膠的粉霧劑均勻噴涂切口后，快速凝聚血液在創(chuàng)面形成一層膠狀保護膜；Al組云南白藥涂抹后未形成膠狀保護膜。出血時間及出血量測定結(jié)果A1、Bl及B2組出血時間分別為(285 士 28) S、 (161 士20)s、(154士21)s，出血量分別為(1. 59士0. 19)g、(1. 17士0. 15)g、(1. 18士0. 13)g。 Bl組、B2組出血時間及出血量與Al組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P < 0. 05)。綜上所述，豬源纖維蛋白膠的粉霧劑具有良好的止血作用，是一種有效、安全、可 降解的生物止血材料。實施例5豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B預防粘連效果 試驗腸粘連是腹部外科手術(shù)后常見的并發(fā)癥，發(fā)生率高達90%以上，在腸梗阻的病因 中占20% 40%，常需再次手術(shù)乃至多次手術(shù)治療多年來臨床醫(yī)生試圖采用一些方法防 止術(shù)后粘連發(fā)生，主要有隔離法、消化吸收法、物理松解法等，但在臨床中預防效果均不理 想。本發(fā)明豬源纖維蛋白膠的粉霧劑一種有效預防腸粘連發(fā)生而且體內(nèi)無毒副作用并能被 體內(nèi)降解吸收的理想生物隔離材料。選用體重為220士20g的Wistar大白鼠36只，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提 供，雌性，隨機分為3組，每組12只。3個組別分別為空白對照試驗組、豬源纖維蛋白膠的 粉霧劑A試驗組、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B試驗組。全部動物均采用戊巴比妥鈉腹腔注 射麻醉，劑量為35mg/Kg。取下腹部正中切口約2cm，打開腹腔，無菌條件下取出盲腸，輕刮 盲腸漿膜表面，范圍為03cm左右區(qū)域，直至滲血，再滴無水乙醇于創(chuàng)面上，然后以五齒鑷 夾住盲腸系膜動脈約2min，造成暫時局部缺血。各組分別進行以下處理(1)空白對照試驗 組將受擦傷的盲腸直接放回腹腔，并進行切口縫合；(2)豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A試驗 組在受擦傷的盲腸部位均勻地撒上豬源纖維蛋白膠的粉霧劑AO. 2g，并將盲腸放回腹腔， 進行切口縫合(3)豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B試驗組在受擦傷的盲腸部位均勻地撒上豬 源纖維蛋白膠的粉霧劑BO. 2g，并將盲腸放回腹腔，進行切口縫合。術(shù)后動物分籠飼養(yǎng)，每天 肌注慶大霉素4U，連續(xù)3d，預防感染。14d后以同樣的麻醉方法開腹檢驗、取材。將腸粘連程 度采用五級分類法，確定如下分級標準(1)0級完全無粘連，腸漿膜面修復良好(2) I級 盲腸與周圍組織少量粘連或內(nèi)臟間或腹壁間1條粘連帶，疏松易分，無滲血；(3) II級盲 腸與周圍組織輕度到中度粘連內(nèi)臟間或內(nèi)臟與腹壁間2條粘連帶，分離時局部有滲血；(4) III級腸管與周圍組織廣泛粘連，較難分離或多于2條粘連帶，而內(nèi)臟未直接粘連到腹壁， 無腸梗阻；IV級腸管與周圍組織緊密粘連成團或內(nèi)臟直接粘連到腹壁，分離困難，引起腸 梗阻。試驗結(jié)果表明，豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B各組，與 空白對照試驗組相比，大鼠受擦傷的盲腸修復較好，差異顯著(粉霧劑A試驗組P < 0. 01， 粉霧劑B試驗組P < 0. 01)，因此豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑B 預防粘連效果優(yōu)于空白對照試驗組。實驗結(jié)果見下表1。表1豬源纖維蛋白膠的粉霧劑預防粘連效果 本發(fā)明的豬源纖維蛋白膠的粉霧劑可以應用于臨床腹腔手術(shù)、胸腔手術(shù)、骨科手 術(shù)、婦科手術(shù)，于術(shù)后均勻地噴涂在手術(shù)部位，具有預防術(shù)后組織粘連的作用。實施例6豬源纖維蛋白膠的粉霧劑A、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑C對大鼠燒燙傷 皮膚組織的修復和促進愈合作用選取Wistar大鼠36只，由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供，雌雄兼半，體重 250士25g，按體重隨機分成3組，每組12只，即蒸餾水對照試驗組、豬源纖維蛋白膠的粉 霧劑A試驗組、豬源纖維蛋白膠的粉霧劑C試驗組。全部動物均采用戊巴比妥鈉腹腔注 射麻醉，劑量為30mg/Kg。各組在給藥前將大鼠背部靠臀部脊柱一側(cè)脫毛，脫毛面積約為 3 X 4cm2。實驗采用長10cm、直徑3. 6cm無上下底蓋的塑料筒，壓在脫毛區(qū)皮膚上，將煮沸開 水(IO(TC)約30ml倒入塑料筒內(nèi)，保持3秒鐘，移去塑料筒的水，并移去塑料筒，形成燒燙 傷潰瘍開放創(chuàng)面。各組在燒燙傷創(chuàng)面進行以下處理(1)蒸餾水對照試驗組在大鼠的燒燙 傷創(chuàng)面均勻涂抹0. 2ml蒸餾水(2)粉霧劑A試驗組在大鼠的燒燙傷創(chuàng)面均勻噴涂0. 2g豬 源纖維蛋白膠的粉霧劑A (3)粉霧劑C試驗組在大鼠的燒燙傷創(chuàng)面均勻噴涂0. 2g豬源纖 維蛋白膠的粉霧劑C。隔天噴涂給藥一次，實驗連續(xù)12天。每日詳細觀察并記錄動物受試 區(qū)創(chuàng)面的炎癥反應、滲出物、組織新生、創(chuàng)面愈合等情況。實驗結(jié)果表明，粉霧劑A試驗組、 粉霧劑C試驗組用藥后情況明顯優(yōu)于水對照試驗組，創(chuàng)面炎癥反應輕、滲出物少，同時各實 驗組創(chuàng)面愈合時間比蒸餾水對照試驗組均提前3 4天，具有促進創(chuàng)面愈合的作用。本實施例實驗結(jié)果表明，粉霧劑A、粉霧劑C對皮膚燒傷、燙傷、皮膚潰瘍、皮膚機 械創(chuàng)傷的治療和修復具有顯著療效。因此本發(fā)明的醫(yī)用粉霧劑可用于皮膚燒傷、燙傷、皮 膚潰瘍、皮膚機械創(chuàng)傷等創(chuàng)面，將粉霧劑均勻地撒涂在創(chuàng)面上，具有促進創(chuàng)面修復愈合的作 用。實施例7實施例1-3制得產(chǎn)品的物理效果測試(1)凝固時間測定取實施例1、實施例2與實施例3制備的豬源纖維蛋白膠粉霧 劑一粉霧劑A、粉霧劑B、粉霧劑C，通過粉霧噴射裝置將粉霧劑A、粉霧劑B分別均勻地噴 涂于盛有的直徑5. 0cm、高0. 5cm(表面積為19. 6cm2)的生理鹽水無菌器皿內(nèi)，粉霧劑C均 勻地噴涂于盛有的直徑7. 5cm、高0. 5cm (表面積為44. 2cm2)的生理鹽水無菌器皿內(nèi)，用秒 表計時。粉霧劑A凝固成膠時間為4秒、粉霧劑A凝固成膠時間為6秒、粉霧劑A凝固成膠 時間為4秒。(2)強度測定將上述粉霧劑A、粉霧劑B、粉霧劑C噴涂后凝固所形成之膠， 36. 5°C條件下，放置10分鐘，將膠膜從皿中完整取出，形狀為膠膜狀，有彈性。繞屈180°無 發(fā)生斷裂現(xiàn)象。以上實施例表明，本發(fā)明的豬源纖維蛋白膠的粉霧劑，具有良好好的封閉止血、防 止術(shù)后組織間粘連和創(chuàng)面修復愈合效果，作為一種醫(yī)用產(chǎn)品進行開發(fā)市場前景廣闊。
權(quán)利要求
一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑，包含以下粉霧狀或顆粒狀藥劑粒徑在75μm～180μm之間的豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉，粒徑在90μm～250μm的氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑，其特征在于還包含粒徑為 90 μ m 250 μ m的生理可接受的抗靜電劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑，其特征在于按重量百分比計算，所 述的粉霧狀或顆粒狀藥劑的各組分含量為豬源纖維蛋白原膠類凍干粉31. 3% 95. 9%, 豬源凝血酶凍干粉2. 3 % 9. 7 %，氯化鈉0. 6 % 16. 8 %，醋酸鈉0. 0 % 6. 2 %、氯化鈣1.2% 26. 8%，三羥甲基氨基甲烷0.0% 7. 2%，生理可接受的抗靜電劑0.0% 2.0%。
4.一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，包括以下步驟(1)準備豬源纖維蛋白原 膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉、氯化鈉、醋酸鈉、氯化鈣、三羥甲基氨基甲烷、生理可接受 的抗靜電劑，并按配方稱取；(2)將豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉分別粉 碎至粒徑為75 μ m 180 μ m ； (3)將氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲 烷、生理可接受的抗靜電劑混合，然后粉碎至粒徑為90 μ m 250 μ m ； (4)將上述粉碎后的 各組分充分均勻混合，形成豬源纖維蛋白膠微粉；(5)灌裝于粉霧噴射裝置內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，其特征在于所述步驟 (1)中的豬源纖維蛋白原膠類凍干粉的制備，包括如下步驟①.以豬血液為原料，將豬血液于2°C 10°C低溫靜置，分取上層血漿液，將血漿液用 3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心30分鐘 60分鐘，收集血漿，用 0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；取濾過血漿，每升加入甘氨酸Ig 30g，使其溶解，將血漿降 溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌30分鐘；用3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的冷凍離心機離心，收集沉淀；②.?、俨绞占恋頂囁椋尤胗设蹤此徕c與三羥甲基氨基甲烷制成的PH值6.0 10.0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測蛋白含量和溶解液體積；加入重量比為總蛋白 量的0. 1 12倍量的6-氨基己酸或組氨酸，攪拌至完全溶解，再用0.22μπι 1.0μπι& 濾芯進行過濾，收集濾液并移入攪拌罐中，再加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的 的緩沖溶液，調(diào)節(jié)PH值至5. 0 9. 0，每升加入聚山梨酯80 9. 0 12. 3g與磷酸三丁酯2.0 4. 0g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌5 7小時；每升加入甘氨酸Ig 30g，使其溶解，將 血漿降溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌30分鐘；用3000轉(zhuǎn)/分 鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的冷凍離心機離心，收集沉淀，得纖維蛋白原第一次純化物；③.取②步收集沉淀攪碎，加入由枸櫞酸鈉與三羥甲基氨基甲烷制成的pH值7.0 10.0的緩沖溶液，攪拌至完全溶解，過濾，測蛋白含量和溶解液體積；加入重量比為總蛋白 量的0. 1 12倍量的6-氨基己酸或組氨酸，攪拌至完全溶解，再每升加入甘氨酸Ig 30g， 使其溶解，將溶液降溫至0 4°C，每升加入醋酸鈉50g 250g，使其溶解，攪拌30分鐘；用 3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心，收集沉淀；用濃度為0. 三羥甲 基氨基甲烷以鹽酸調(diào)pH值3. 0 7. 0的溶液，分次加入沉淀中，進行攪拌洗滌3 5次，收 集沉淀，得纖維蛋白原第二次純化物；④.?、鄄阶詈笫占恋?50g 600g，加注射用水7000ml 9000ml在35°C 40°C 水浴下溶解，過濾除去雜質(zhì)，并檢測蛋白含量，得纖維蛋白原原液；另取組氨酸Ig 100g、枸櫞酸鈉IOg 100g、蔗糖IOOg 500g、氯化鈉IOg 100g、聚山梨酯80 0. Ig 50g、 精氨酸0. Ig IOOg加入到約1600ml 2000ml注射用水中，攪拌使其完全溶解，再加入到 纖維蛋白原原液中，攪拌均勻，然后再另加入IOOml 300ml含2g 25g白蛋白的溶液，攪 拌均勻，加注射用水調(diào)整至8000ml 12000ml，加鹽酸調(diào)節(jié)pH至5. 0 8. 0用0. 22 μ m `0.48 μ m濾膜過濾，灌裝，冷凍干燥，100°C干熱法病毒滅活30分鐘，得纖維蛋白原膠類凍干 粉，2 8°C低溫庫保存。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中豬源凝血酶凍干粉的制備包括如下步驟①.以豬血液為原料，將豬血液于l°c 10°C低溫中靜置，分層，取上層血漿液，用3000 轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心30分鐘 60分鐘，用0. 22 μ m 0. 48 μ m 濾膜過濾；取濾過血漿；取濾過血漿，每升加入聚山梨酯80 8. Og 13. 3g與磷酸三丁酯`1.5g 4. 5g，攪拌均勻，25°C保溫攪拌4 8小時，再每升加入硫酸鋇5g 30g，攪拌吸附 1 3小時；用3000轉(zhuǎn)/分鐘 10000轉(zhuǎn)/分鐘的高速冷凍離心機離心，收集沉淀；②.取①步收集沉淀，加入1 5倍量的9% 15%的氯化鈉水溶液攪拌，用轉(zhuǎn)速為 2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心20min 40min、離心溫度為2°C 6°C，棄 上清液，得沉淀；重復2 4次；取沉淀加入1 5倍量的10% 20%的枸櫞酸鈉水溶液， 攪拌30分鐘，以2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心30分鐘、離心溫度為2°C 6 °C，收集上清液；重復3 5次，合并上清液；③.?、诓缴锨逡?，用0.22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；取濾液，分別加入的氯化鈣溶 液和甘氨酸溶液，使最后的溶液中氯化鈣含量為1.6% 2.0%、甘氨酸含量為0.8% 1.2%,攪拌均勻，調(diào)pH值至4. 5 8. 0，以0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾；濾液密封室溫放 置6h 10h，后轉(zhuǎn)入2°C 8°C低溫庫中繼續(xù)放置2 3天；超濾、脫鹽、濃縮，將濃縮液離 心，以2000轉(zhuǎn)/分鐘 5000轉(zhuǎn)/分鐘的離心機離心20 40分鐘、離心溫度為2°C 6°C， 收集上清液，測量體積，攪拌均勻，檢測凝血酶效價；④.?、鄄阶詈蟮纳锨逡?，加入甘氨酸與白蛋白溶液，加入注射用水調(diào)整最后溶液的 體積，使得最后溶液的凝血酶效價為450IU/ml 650IU/ml、甘氨酸含量20mg/ml SOmg/ ml、白蛋白含量5mg/ml 30mg/ml，在無菌條件下，用0. 22 μ m 0. 48 μ m濾膜過濾，灌裝， 冷凍干燥，100°C干熱法病毒滅活30分鐘，得凝血酶凍干粉；2 8°C低溫庫保存。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中，豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉采用低溫氣流粉碎方法進行粉碎； 氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷、生理可接受的抗靜電劑采用氣流粉 碎方法粉碎；粉碎后各組分通過流化態(tài)混合方式進行混合。
8.權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑在制備于普通外科、骨 科、心胸外科、神經(jīng)外科、婦產(chǎn)科、野戰(zhàn)外科中組織止血、組織封口和組織粘合的醫(yī)用產(chǎn)品中 的應用。
9.權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑在制備預防組織間粘 連的醫(yī)用產(chǎn)品、制備創(chuàng)面治療、修復的醫(yī)用產(chǎn)品中的應用。
10.權(quán)利要求7-9中任一權(quán)利要求所述的豬源纖維蛋白膠粉霧劑的應用，是通過粉霧 噴射裝置將其均勻地噴射至創(chuàng)面或深入至創(chuàng)傷口內(nèi)，噴射的豬源纖維蛋白膠微粉遇創(chuàng)面或創(chuàng)傷口內(nèi)水分即成膠體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種豬源纖維蛋白膠粉霧劑及其制備方法和應用，它含有豬源纖維蛋白原膠類凍干粉、豬源凝血酶凍干粉、氯化鈉和/或醋酸鈉、氯化鈣和/或三羥甲基氨基甲烷、生理可接受的抗靜電劑；將以上組分粉碎成適合粒徑，然后均勻混合后灌裝。本發(fā)明產(chǎn)品穩(wěn)定，攜帶存放方便，無需配置可直接使用，將豬源纖維蛋白膠制劑呈粉霧狀噴到創(chuàng)面，為手術(shù)、傷口包扎爭取了時間，提供了極大的方便，而且生產(chǎn)工藝簡單，安全環(huán)保。
文檔編號C07K14/745GK101890181SQ20101020086
公開日2010年11月24日 申請日期2010年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月12日
發(fā)明者李兆勇, 李吉來, 江彩霞, 潘小寧, 黃星 申請人:廣州倍繡生物技術(shù)有限公司