專利名稱：從披針葉黃華草地上部分中提取金雀花堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從披針葉黃華草地上部分中提取金雀花堿的 方法。
背景技術(shù)：
披針葉黃華(T. Ianceolata R. Br.)又名牧馬豆、野決明，系豆科(Ieguminoseae) 野決明屬(Thermopsis)多年生草本植物。該屬植物主要分步于我國的青海、內(nèi)蒙古、寧夏、 四川、甘肅等省區(qū)，俄羅斯，蒙古也有分布，生于沙漠草地、高山草甸草地、沙丘、林下灌叢以 及田邊、路旁，偶進入農(nóng)田。據(jù)文獻報道，披針葉黃華的種子、花、莖葉、根均有毒，是因為其含有大量的金雀花 堿。金雀花堿類是指分子內(nèi)具有吡啶酮環(huán)的三環(huán)或四環(huán)結(jié)構(gòu)的喹諾里西啶類生物堿化 合物，主要包括三環(huán)結(jié)構(gòu)的金雀花堿(cytisine)、N-甲基金雀花堿(N-methylcytisine)和 四環(huán)結(jié)構(gòu)的臭豆堿(anagyrine)、黃華堿(thermopsine)等。披針葉黃華中的金雀花堿具有 極強的生理活性，在臨床上用金雀花堿0. 15%的水溶液供肌肉或靜脈注射，搶救因手術(shù)和 創(chuàng)傷引起的反射性呼吸暫停、休克和新生兒窒息等，近期研究表明，該類生物堿還具有抗心 律失常、抗微生物感染、抗?jié)?、升高白細胞等多方面的藥理作用，特別是該類化合物具有 較強的抗癌活性。另外，有研究稱含磷的金雀花堿衍生物還具有保肝作用；金雀花堿是美國 輝瑞公司生產(chǎn)的一種新型戒煙藥“Varenicline”的主要原料；含金雀花堿的農(nóng)藥組合物是 一種高效廣譜的農(nóng)藥。披針葉黃華中的金雀花堿提取，目前主要是以從種籽中提取為主，從種籽中提取 的金雀花堿純度較低，生產(chǎn)成本高。因此，現(xiàn)有技術(shù)存在缺陷，需要改進完善。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從披針葉黃華草地 上部分中提取金雀花堿的方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種從披針葉黃華草地上部分中提取金雀花堿的方 法，其中，包括以下步驟:Al，將盛花期采集的披針葉黃華草地上部分粉碎，經(jīng)提取、濃縮得 浸膏，A2，將所述浸膏用酸水酸化，分離除去酸不溶性雜質(zhì)，得到含金雀花堿的酸水液，A3， 將所述酸水液堿化，再用有機溶媒萃取，得到主要含金雀花堿的總生物堿，A4，將所述總生 物堿溶解于水，再用有機溶媒萃取，回收有機溶媒并結(jié)晶，得到純度較高的金雀花堿；A5，將 步驟A4得到的所述純度較高的金雀花堿溶解于有機溶媒，并進行柱層析，得到純度99%以 上的金雀花堿產(chǎn)品。所述的方法，其中，所述步驟Al具體執(zhí)行以下操作將所述披針葉黃華草地上部 分粉碎至10-20目，裝入不銹鋼多功能提取罐中，共加入75% -85%的甲醇12倍量，分3次 熱回流提取，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1. 15-1. 20。
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所述的方法，其中，所述步驟A3和A4中，調(diào)節(jié)溶液PH值至10_13，用有機溶媒萃 取，至薄層層析無明顯的生物堿反應(yīng)為止。所述的方法，其中，所述用有機溶媒萃取的步驟重復兩次以上。
所述的方法，其中，所述柱層析使用氧化鋁柱進行。所述的方法，其中，所述氧化鋁目數(shù)為60-300目。所述的方法，其中，所述有機溶媒為甲苯、二甲苯、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙酸 乙酯中的一種或兩種以上混合物。所述方法，其中，所述酸化步驟采用鹽酸、硫酸、磷酸之一進行。所述方法，其中，所述堿化步驟采用氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、濃氨水之一進 行。所述方法，其中，所述結(jié)晶步驟中，結(jié)晶溶劑采用丙酮、乙醇、乙酸乙酯中的一種或 兩種以上混合。本發(fā)明的工藝路線簡單，制得的產(chǎn)品成本低、純度可達99%以上。


圖1為本發(fā)明工藝流程圖；圖2為金雀花堿對照品高效液相色譜圖，其中峰1保留時間5. 047，峰高148150峰 面積 1151629 面積(% ) 100. 0000 ；圖3為實施例1樣品的高效液相色譜圖，其中峰1保留時間5 面積 1135225 面積(% ) 100. 0000 ；圖4為實施例2樣品的高效液相色譜圖，其中峰1保留時間5 面積 1142127 面積(% ) 100. 0000 ；圖5為實施例3樣品的高效液相色譜圖，其中峰1保留時間5 面積 1151629 面積(% ) 100. 0000。
具體實施例方式以下通過具體實施例，對本發(fā)明進行詳細說明。本發(fā)明薄層層析檢測的條件及結(jié)果1、薄層板(1)、市售硅膠G板(青島海洋化工廠)(2)、自制硅膠G板取薄層層析用的硅膠G，用0. 5%的羧甲基纖維素鈉水溶液調(diào) 成糊狀，攪拌至無氣泡，制成薄層板，臨用前在105°C的條件下活化30min。2、對照品金雀花堿(含量99. 5%以上)3、展開劑乙酸乙酯甲醇體積比3 2
4、顯色劑改良的碘化鉍鉀試劑5、薄層層析結(jié)果Rf值0. 23實施例1將盛花期采集的干燥的披針葉黃華草地上部分500kg，粉碎至10-20目，裝入4. 5
034 峰高 145466 峰
026 峰高 145687 峰
030 峰高 148150 峰
4噸不銹鋼多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg 75%的甲醇，加熱回流提 取，加熱溫度62-65°C，提取時間第一次2小時，第二次2小時，第三次1小時，合并三次提取 液，減壓濃縮至相對密度1. 15(熱測)，得浸膏162kg。在浸膏內(nèi)加入稀鹽酸溶液，調(diào)節(jié)PH值2-3使生物堿溶解于酸水內(nèi)，分離除去酸不 溶性雜質(zhì)。酸水層加濃氨水堿化，調(diào)節(jié)PH值10-11，用二甲苯萃取數(shù)次，至薄層層析無明顯 的生物堿反應(yīng)為止，回收二甲苯，得總生物堿浸膏為15. Ikgo將此總生物堿溶解于水中，調(diào) 節(jié)PH值10-11，用二甲苯萃取數(shù)次，至薄層層析無明顯的生物堿反應(yīng)為止，回收二甲苯得金 雀花堿黃色結(jié)晶1. 70kg。將金雀花堿黃色結(jié)晶用乙酸乙酯溶解，過60-100目氧化鋁柱，回 收乙酸乙酯，溶液中有大量的微黃色針狀結(jié)晶析出，分離結(jié)晶，干燥，得到金雀花堿1. 25kg， 收率為2. 5%。，用高效液相色譜法檢測純度為98. 7%，如圖3所示。實施例2 將盛花期采集的干燥的披針葉黃華草地上部分500kg，粉碎至10-20目，裝入4. 5 噸不銹鋼多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg 85%的甲醇，加熱回流提 取，加熱溫度62-65°C，提取時間第一次2小時，第二次2小時，第三次1小時，合并三次提取 液，減壓濃縮至相對密度1. 20 (熱測)，得浸膏149kg。在浸膏內(nèi)加入稀鹽酸溶液，調(diào)節(jié)PH值3-4使生物堿溶解于酸水內(nèi)，分離除去酸不 溶性雜質(zhì)。酸水層加20 %氫氧化鈉溶液堿化，調(diào)節(jié)PH值12-13，用二氯甲烷萃取數(shù)次，至 薄層層析無明顯的生物堿反應(yīng)為止，回收二氯甲烷，得總生物堿浸膏為13.7kg。將此總生 物堿溶解于水中，調(diào)節(jié)PH值12-13，用二氯甲烷萃取數(shù)次，至薄層層析無明顯的生物堿反 應(yīng)為止，回收二氯甲烷得金雀花堿黃色結(jié)晶1.66kg。將金雀花堿黃色結(jié)晶用丙酮溶解，過 100-200目氧化鋁柱，回收丙酮，溶液中有大量的微黃色針狀結(jié)晶析出，分離結(jié)晶，干燥，得 到金雀花堿1. 38kg，收率為2. 76%。，用高效液相色譜法檢測純度為99. 0% (如圖4所示)。實施例3 將盛花期采集的干燥的披針葉黃華草地上部分500kg，粉碎至10-20目，裝入4. 5 噸不銹鋼多功能提取罐中，分三次加入2500kg、2000kg、1500kg80%的甲醇，加熱回流提取， 加熱溫度62-65°C，提取時間第一次2小時，第二次2小時，第三次1小時，合并三次提取液， 減壓濃縮至相對密度1. 19 (熱測)，得浸膏156kg。在浸膏內(nèi)加入稀鹽酸溶液，調(diào)節(jié)PH值2-3使生物堿溶解于酸水內(nèi)，分離除去酸不 溶性雜質(zhì)。酸水層加10%氫氧化鈉溶液堿化，調(diào)節(jié)PH值12-13，用三氯甲烷萃取數(shù)次，至 薄層層析無明顯的生物堿反應(yīng)為止，回收三氯甲烷，得總生物堿浸膏為14.5kg。將此總生 物堿溶解于水中，調(diào)節(jié)PH值12-13，用三氯甲烷萃取數(shù)次，至薄層層析無明顯的生物堿反 應(yīng)為止，回收三氯甲烷得金雀花堿黃色結(jié)晶1.88kg。將金雀花堿黃色結(jié)晶用丙酮溶解，過 200-300目氧化鋁柱，回收丙酮，溶液中有大量的微黃色針狀結(jié)晶析出，分離結(jié)晶，干燥，得 到金雀花堿1. 47kg，收率為2. 94%。，用高效液相色譜法檢測純度為99. 2% (如圖5所示)。上述實施例1至3中采用的高效液相色譜法檢測條件為色譜柱C18柱(4. 6mmX 250mm, 5um)流動相0· 05mol/L磷酸二氫鈉溶液(含磷酸 2ml)甲醇高氯酸鈉(85ml 15ml 1. Og)；檢測波長306nm、流速lml/min
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柱溫25°C進樣濃度0.lmg/Ml進樣量10uL ；理論塔板數(shù)按金雀花堿峰計算應(yīng)不低于5000。應(yīng)當理解的是，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換， 而所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
權(quán)利要求
一種從披針葉黃華草地上部分中提取金雀花堿的方法，其特征在于，包括以下步驟A1，將盛花期采集的披針葉黃華草地上部分粉碎，經(jīng)提取、濃縮得到浸膏；A2，將所述浸膏用酸水酸化，分離除去不溶于酸的雜質(zhì)，得到含金雀花堿的酸水液；A3，將所述酸水液堿化，再用有機溶媒萃取，得到主要含金雀花堿的總生物堿；A4，將所述總生物堿溶解于水，再用有機溶媒萃取，回收有機溶媒并結(jié)晶，得到純度較高的金雀花堿；A5，將步驟A4得到的所述純度較高的金雀花堿溶解于有機溶媒，并進行柱層析，得到純度99％以上的金雀花堿產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟Al具體執(zhí)行以下操作將所述 披針葉黃華草地上部分粉碎至10-20目，裝入不銹鋼多功能提取罐中，分3次加入濃度為 75% -85%的甲醇熱回流提取，3次總共加入甲醇的重量為所述披針葉黃華草地上部分的 12倍，合并所述熱回流提取得到的提取液，減壓濃縮至相對密度1. 15-1. 20。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟A3和A4中，調(diào)節(jié)溶液PH值至 10-13，用有機溶媒萃取，至薄層層析無明顯的生物堿反應(yīng)為止。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述用有機溶媒萃取的步驟重復兩次以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱層析使用氧化鋁柱進行。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化鋁目數(shù)為60-300目。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述的方法，其特征在于，所述有機溶媒為甲苯、二甲苯、二 氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯中的一種或兩種以上混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述方法，其特征在于，所述酸化步驟采用鹽酸、硫酸、磷酸 之一進行。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述方法，其特征在于，所述堿化步驟采用氫氧化鈉、碳酸 鈉、碳酸氫鈉、濃氨水之一進行。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述方法，其特征在于，所述結(jié)晶步驟中，結(jié)晶溶劑采用丙 酮、乙醇、乙酸乙酯中的一種或兩種以上混合。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從披針葉黃華草地上部分中提取金雀花堿的方法，包括以下步驟A1，將盛花期采集的披針葉黃華草地上部分粉碎，經(jīng)提取、濃縮得到浸膏；A2，將所述浸膏用酸水酸化，分離除去不溶于酸的雜質(zhì)，得到含金雀花堿的酸水液；A3，將所述酸水液堿化，再用有機溶媒萃取，得到主要含金雀花堿的總生物堿；A4，將所述總生物堿溶解于水，再用有機溶媒萃取，回收有機溶媒并結(jié)晶，得到純度較高的金雀花堿；A5，將步驟A4得到的所述純度較高的金雀花堿溶解于有機溶媒，并進行柱層析，得到純度99％以上的金雀花堿產(chǎn)品。
文檔編號C07D471/18GK101891740SQ201010240158
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月30日
發(fā)明者王小銀 申請人:王小銀