專利名稱：一種從多花蒿中提取阿格拉賓的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物的提取方法，具體涉及一種從多花蒿中提取阿格拉賓的方法。
背景技術：
阿格拉賓(Arglabin，結構式如式I所示)，化學名為1，10β -環(huán)氧-愈創(chuàng)-3 G)-烯-6，12-內(nèi)酯。阿格拉賓首先是由哈薩克斯坦科學家S. Μ.阿德克諾夫從當?shù)乜喟瑢僦参锪辆G蒿的花瓣和葉子提取得到的，并研究發(fā)現(xiàn)該化合物具有抗腫瘤活性。1996年，阿格拉賓二甲胺鹽酸鹽凍干制劑由哈薩克斯坦塔比法爾公司開發(fā)在哈薩克斯坦共和國上市，隨后該藥又陸續(xù)在前蘇聯(lián)的一些國家上市，主要用于治療肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌。由哈薩克斯坦塔比法爾公司申請的W09848789中記載了以亮綠蒿為原料提取阿格拉賓的方法。該專利首先對采用多種溶劑如水、石油醚-乙醚1 1、苯、乙醚、氯仿、乙醇等對亮綠蒿的提取效率進行了考察，結果顯示采用氯仿作為溶劑，提取效率最高；其次為乙醇，乙醚、苯、石油醚-乙醚、乙醚、水。該專利實施例以氯仿作為提取溶劑進行了阿格拉賓的制備，提取過程如下采用氯仿為溶劑對亮綠蒿藥材進行逆流加熱提取，提取物經(jīng)醇沉處理后，得到的提取物再上硅膠柱經(jīng)苯洗脫、將得到的阿格拉賓粗品進行正己烷重結晶， 得阿格拉賓單體，得率為0. 27%。本專利記載的植物材料亮綠蒿分布于我國新疆，資源匱乏，不能滿足藥物開發(fā)需要；而且本專利方法需用到特殊的逆流提取設備，設備成本高；所優(yōu)選提取劑、洗脫劑采用高毒性的氯仿和苯，不利于工人健康和環(huán)保。 香港大學的 Ho-Fao Wong 禾口 Geoffrey D. Brown 在 Dimeric guaianolides and a fulvenoguaianolide from Artemisia myriantha(Journal of Natural Products. 2002,
65(4) :481-486)中報道了采用多花蒿為原料，用二氯甲烷充氮氣條件下室溫提取，得到的提取物上硅膠柱經(jīng)正己烷、乙酸乙酯、甲醇洗脫，所得乙酸乙酯部分流份經(jīng)正相液相分離， 得阿格拉賓單體，得率為0.037%。雖然該方法采用了在我國資源相對豐富的多花蒿為原料，但其收率太低，而且所用溶劑二氯甲烷毒性大。 PCT申請W02008035958中報道了以亮綠蒿為原料，用超臨界二氧化碳提取方法 (壓力為150士2-105帕，溫度為60°C )獲得阿格拉賓的方法。該方法可將阿格拉賓的含量提高到0. 8%。但是該方法需要用到特殊的提取設備，無疑增加了生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容
從現(xiàn)有技術報道來看，阿格拉賓主要存在于亮綠蒿和多花蒿中，并且在亮綠蒿中的含量明顯高于多花蒿，但亮綠蒿在中國分布很少，不能滿足藥物開發(fā)的需要，而依照現(xiàn)有的以多花蒿為原料提取制備阿格拉賓的工藝，遠遠不能滿足規(guī)?；a(chǎn)的需要。為了解決現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明人以在中國植物來源相對豐富的多花蒿為原料，對阿格拉賓的提取工藝進行了研究。經(jīng)過大量的試驗研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在使用普通提取設備的情況下，采用多花蒿為植物來源，可與采用亮綠蒿為植物來源得到收率相當甚至更高的阿格拉賓，且提取方法簡單、環(huán)保，生產(chǎn)成本低。因此，本發(fā)明提供了一種從多花蒿中提取阿格拉賓的方法，所述方法是將多花蒿藥材粉碎后，用乙醇提取，然后進行預分離，過濾，濃縮，最后將濃縮物進行分離、純化，得到阿格拉賓，所述分離采用硅膠柱分離，所用洗脫系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)、正己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)、石油醚-丙酮系統(tǒng)、正己烷-丙酮系統(tǒng)。其中所述乙醇選自30 100%的乙醇水溶液，優(yōu)選為95%的乙醇水溶液。所用乙醇與藥材的料液比(V/W)為任何適宜比例，優(yōu)選為6 12倍。提取溫度為任何適宜溫度，優(yōu)選為20-100°C，更優(yōu)選為70-90°C。所述洗脫系統(tǒng)優(yōu)選為石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)，更優(yōu)選為9 1(V/V)的石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。所述預分離可采用以下任意一種方法進行醇沉處理、水沉處理、水沉和醇沉混合處理、醇沉和有機溶劑萃取混合處理，優(yōu)選采用水沉和醇沉混合處理以及醇沉和有機溶劑萃取混合處理，更優(yōu)選采用醇沉和水沉混合處理。其中，所述水沉和醇沉混合處理可以任選先后順序進行，即可以將乙醇提取物進行水沉處理后再經(jīng)醇沉處理，也可以將乙醇提取物先經(jīng)醇沉處理再進行水沉處理；所述醇沉和有機溶劑萃取混合處理也可以任選先后順序進行，即可以將乙醇提取物進行醇沉處理后再進行有機溶劑萃取，也可以將乙醇提取物先進行有機溶劑萃取再進行醇沉處理。所述醇沉處理所用醇為任何適宜比例的乙醇-水混合液，優(yōu)選為60 80%的乙醇，更優(yōu)選為70%的乙醇；所述萃取的有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷中任意一種，優(yōu)選為乙酸乙酯。所述純化可采用任何適宜的方式進行，優(yōu)選采用重結晶方法進行純化，所用重結晶溶劑選自正己烷、石油醚、乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮、水中的一種或兩種以上的混合溶劑； 當預分離方法為醇沉處理、水沉和醇沉混合處理、醇沉和有機溶劑萃取混合處理時，重結晶溶劑為正己烷或石油醚；當預分離方法為水沉處理時，所用重結晶溶劑為正己烷或石油醚與體積比為11的乙醇-水。為了得到本發(fā)明的阿格拉賓提取方法，發(fā)明人主要進行了如下研究采集5月份生長的多花蒿，曬干后粗碎機粉碎，備用。1、提取溶劑的選擇每份取IOg藥材，分別采用石油醚、正己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇幾種溶劑，每個處理兩個重復，加入15倍于藥材(V/W)的溶劑，冷浸提取48h，將提取液過濾，濃縮后用甲醇定容至250ml，HPLC檢測其含量(g/g生藥)，實驗結果如

圖1所示。 實驗結果顯示乙醇與甲醇提取效率最高，考慮溶劑毒性和回收利用等因素，選擇乙醇作為提取溶劑。2、乙醇濃度的選擇每份取IOg藥材，分別加入IOOml 30%、50%、70%、80%、90%和95%濃度的乙醇進行回流提取，每個濃度兩個重復，加熱回流提取三次，每次lh，溶劑量分別為10、8、8倍于生藥(V/W)，將提取液合并濃縮后定容至250ml，HPLC檢測，結果如圖2所示。實驗結果顯示30 95%乙醇濃度中，95%乙醇提取效率最高。3、液料比的選擇每份稱取IOg藥材，置于圓底燒瓶中，每個實驗兩個重復，分別加入生藥(V/W)量的6倍、8倍、10倍和12倍的95%乙醇，回流提取lh，提取液濃縮后定容至250ml，HPLC檢測阿格拉賓含量，結果如圖3所示。實驗結果表明液料比越高，阿格拉賓的提取效率越高。4、多花蒿乙醇提取物預分離方法的考察①醇沉處理取乙醇提取物77g，采用4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70 %，沉淀24h后過濾，得到濾液，減壓蒸干，得到干物質(zhì)約60. Sg, 95%乙醇定容，HPLC檢測。②水沉處理取乙醇提取物77g，采用2倍于生藥的水對提取物進行溶解后靜置 24h,得到沉淀約36g，用95%乙醇溶解定容，HPLC檢測。③先醇沉處理再水沉處理取乙醇提取物77g，采用4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70%，沉淀24h后過濾，得到濾液，濃縮后采用2倍于生藥的水進行水沉處理，得到沉淀約20g，用95%乙醇溶解定容，HPLC檢測。④先水沉處理再醇沉處理取乙醇提取物77g，采用2倍于生藥的水對提取物進行溶解后靜置Mh，得到沉淀，將沉淀加入4倍于生藥的乙醇進行溶解后，加水稀釋至醇濃度為70%，靜置24h后過濾，得到濾液，減壓濃縮，稱重，約20. 5g，95%乙醇定容，HPLC檢測。⑤醇沉后乙酸乙酯萃取取乙醇提取物77g，采用4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70%，沉淀24h后過濾，得到濾液，濃縮后采用2倍于生藥的水進行溶解，溶液采用等量的乙酸乙酯進行萃取三次，得到萃取液，濃縮后(約20. 3g) 95 %乙醇定容，HPLC檢測。⑥乙酸乙酯萃取后醇沉取乙醇提取物77g，加入適量水溶解后，用等量的乙酸乙酯進行萃取三次，將得到的萃取液濃縮后，加入4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70%，沉淀24h后過濾，得到濾液，減壓干燥，得到19. Sg提取物，95%乙醇定容后，HPLC檢測。⑦醇沉后氯仿萃取取乙醇提取物77g，采用4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70%，沉淀24h后過濾，得到濾液，濃縮后采用2倍于生藥的水進行溶解，溶液采用等量的氯仿進行萃取三次，得到萃取液，濃縮后(約19. 5g)95%乙醇定容， HPLC檢測。⑧氯仿萃取后醇沉取乙醇提取物77g，加入適量水溶解后，用等量的氯仿進行萃取三次，將得到的萃取液濃縮后，加入4倍于生藥(V/W)的乙醇溶解提取物后加水稀釋至醇濃度為70 %，沉淀24h后過濾，得到濾液，減壓干燥，得到19. 3g提取物，95 %乙醇定容后，HPLC檢測。實驗結果如圖4所示，實驗結果表明幾種預分離方法中，只采用水沉處理可以去除大部分的雜質(zhì)，但是該方法不能除去影響阿格拉賓分離的油脂類物質(zhì)，在后續(xù)分離過程中需要再進行除油處理后才能得到阿格拉賓，無疑會增加阿格拉賓的損失率；其它處理方法獲得的提取物含量相當，但只采用醇沉的方法雖然除去了油脂類物質(zhì)，但獲得的提取物中含有大量水溶性物質(zhì)，增加了后續(xù)分離的工作量(如增加硅膠的使用量和分離次數(shù))。因此，本發(fā)明優(yōu)選采用水沉和醇沉混合處理方法以及醇沉和有機溶劑萃取混合處理方法；考慮到萃取方法涉及使用有機溶劑，增加了安全隱患，因此，更優(yōu)選采用水沉和醇沉混合處理方法。5、乙醇提取物醇沉處理中乙醇濃度考察分別采用60^^70^^80%作為最終醇濃度對醇沉實驗中乙醇濃度進行考察。實驗采用4倍于生藥的乙醇(L/kg)進行溶解后，加水稀釋至相應的濃度。室溫靜置1天，過濾，HPLC檢測濾液中阿格拉賓含量，與進行醇沉處理前提取物中的阿格拉賓含量進行對比， 實驗結果如表1所示表1醇沉處理中乙醇濃度對阿格拉賓含量的影響
權利要求
1.一種從多花蒿中提取阿格拉賓的方法，其特征在于將多花蒿藥材粉碎后，用乙醇提取，然后進行預分離，過濾，濃縮，最后將濃縮物進行分離、純化，得到阿格拉賓，所述分離采用硅膠柱分離，所用洗脫系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)、正己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)、石油醚-丙酮系統(tǒng)、正己烷-丙酮系統(tǒng)。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所用洗脫系統(tǒng)為體積比9 1的石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述預分離方法選自醇沉處理、水沉處理、水沉和醇沉混合處理、醇沉和有機溶劑萃取混合處理中的任意一種。
4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述水沉和醇沉混合處理為先水沉處理再醇沉處理。
5.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述水沉和醇沉混合處理為先醇沉處理再水沉處理。
6.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述醇沉和有機溶劑萃取混合處理為先醇沉處理再有機溶劑萃取。
7.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述醇沉和有機溶劑萃取混合處理為先有機溶劑萃取再醇沉處理。
8.根據(jù)權利要求3或6或7所述的任意一種方法，其特征在于所述萃取的有機溶劑為乙酸乙酯。
9.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述純化用重結晶方法進行純化，當預分離方法為醇沉處理、水沉和醇沉混合處理、醇沉和有機溶劑萃取混合處理時，重結晶溶劑為正己烷或石油醚。
10.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于所述純化用重結晶方法進行純化，當預分離方法為水沉處理時，所用重結晶溶劑為正己烷或石油醚與體積比為1 1的乙醇-水。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從多花蒿中提取阿格拉賓的方法，該方法是將多花蒿藥材粉碎后，用乙醇提取，然后進行預分離，過濾，濃縮，最后將濃縮物進行分離、純化，得到阿格拉賓。其中，所述分離采用硅膠柱分離，所用洗脫系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)、正己烷-乙酸乙酯系統(tǒng)、石油醚-丙酮系統(tǒng)、正己烷-丙酮系統(tǒng)；預分離可采用醇沉處理、水沉處理、水沉和醇沉混合處理、醇沉和有機溶劑萃取混合處理等方法進行。本發(fā)明方法所用原料植物來源豐富，方法簡單、環(huán)保、生產(chǎn)成本低，更適合于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C07D493/10GK102372723SQ20101026019
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月19日 優(yōu)先權日2010年8月19日
發(fā)明者劉翠艷, 李曉花, 李清娟, 白曉雪, 郭文敏, 陳衛(wèi)平 申請人:石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司